Bài thu hoạch: THỰC HÀNH: THÍ NGHIỆM NHẬNBIẾT MỘT SỐ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA TẾ BÀO I/ Thí nghiệm xác định hợp chất hữu có mô thực vật động vật: Chất hữu cần nhậnbiết Cách tiến hành thí nghiệm Tinh bột Thí nghiệm 1: Giã 50gam khoai lang cối sứ, hòa với 20ml nước cất lọc lấy 5ml dịch cho vào ống nghiệm Lấy 5ml nước hồ tinh bột cho vào ống nghiệm Nhỏ vài giọt thuốc thử iot vào ống nghiệm Đồng thời nhỏ vài giọt thuốc thử iot lên phần cặn giấy lọc Quan sát giải thích tượng Nhỏ thuốc thử phêlinh vào ống nghiệm Ghi màu sắc kết luận Hình 1a Các phân tử iot len vào nằm phía lòng xoắn mạch phân tử amilozo Kết giải thích Kết nhận xét: -Khi nhỏ thuốc thử iot vào ống nghiệm, phần cặn giấy lọc => dung dịch ống nghiệm, phần cặn giấy lọc chuyển sang màu xanh tím -Nhỏ thuốc thử phêlinh vào ống nghiệm => dung dịch ống nghiệm không đổi màu Giải thích: -Khi nhỏ thuốc thử iot vào, dung dịch ống nghiệm, phần cặn giấy lọc chuyển sang màu xanh tím có chứa thành phần tinh bột Ở nhiệt độ phòng, mạch phân tử amilozơ tinh bột khơng phân nhánh có dạng xoắn ốc (hình lò xo) Các phân tử iot len vào, nằm phía lòng xoắn hình 1a tạo thành hợp chất bọc có màu xanh tím (tất màu bị hấp thụ có ánh sáng xanh tím khơng bị hấp thụ nên ta thấy có màu xanh tím) Khi nhỏ thuốc thử phêlinh ống nghiệm 2, dung dịch ống nghiệm không đổi màu phêlinh không thuốc thử tinh bột Kết luận: -Thuốc thử đặc trưng tinh bột dung dịch iot kali iotđua - Giữa iot hồ tinh bột tương tác vật lý, hoàn tồn khơng có phản ứng hóahọc xảy Thí nghiệm 2: Cho 10ml dung dich hồ tinh bột với 10 giọt HCl vào ống nghiệm đun 15 phút Để nguội, trung hòa dung dịch NaOH Chia dung dịch thành phần vào ống nghiệm Một ống nhỏ thuốc thử iot, ống lại nhỏ thuốc thử phêlinh Quan sát, nhận xét giải thích tượng Kết nhận xét Dung dịch ống nghiệm nhỏ thuốc thử iot không đổi màu Dung dịch ống nghiệm nhỏ thuốc thử phêlinh chuyển sang màu đỏ gạch có kết tủa đáy ống nghiệm hình 1b Giải thích: - Dung dich ống nghiệm nhỏ thuốc thử iot khơng đổi màu tinh bột bị thủy phân thành đường glucozo (có tính khử) axit nên khơng có tượng xuất - Dung dịch ống nghiệm nhỏ thuốc thử phêlinh chuyển sang màu đỏ gạch có kết tủa tinh bột bị thủy phân thành đường glucozo (có tính khử) axit Đường glucozo khử Cu2+ thành Cu+ thuốc thử phêlinh Glucozo + Cu2+ O + Cu+ Hình 1b Ống nghiệm nhỏ thuốc thử phêlinh biến màu Thí nghiệm: Nhỏ vài giọt dầu ăn nước lên tờ giấy trắng hai vị trí khác nhau, lát sau quan sát, nhận xét giải thích tượng Lipit Hình 2a Trước để khơ Kết nhận xét: Dầu đọng lại, không loang giấy, để khơ giấy thấm dầu có vết trắng gần suốt khơng thấm nước hình 2a, 2b Nước loang giấy, để khô vết hình 2b Giải thích: Dầu đọng lại, không loang giấy, để khô chỗ nhỏ dầu có vết trắng gần suốt khơng thấm nước dầu chất lipit không tan nước, khơng bay nhiệt độ phòng Nước loang giấy, khơ khơng có vết nước có tính phân cực, bay nhiệt độ phòng Hình 2b Sau khơ Protein Thí nghiệm: Phản ứng Biure: Lấy 3ml sữa + 0,5l nước + 3ml NaOH cho vào ống nghiệm Nhỏ vài giọt dung dịch CuSO4 lắc ống nghiệm Quan sát, nhận xét giải thích tượng Kết nhận xét Khi nhỏ vài giọt dung dịch CuSO4 vào ống nghiệm ta thấy kết tủa xanh Cu(OH)2 , lắc nhẹ thấy kết tủa xanh tạo thành phức chất có màu tím đặc trưng hình Giải thích: -Do Cu(OH)2 tạo từ CuSO4 + NaOH theo PTHH sau: CuSO4 + 2NaOH Na2 SO4 + Cu(OH)2 -Phản ứng Cu(OH)2 với nhóm peptid -CO-NH- tạo phức chất có màu tím đặc trưng Kết luận: -Phản ứng Biure phản ứng màu đặc trưng để phát hiễn liên kết peptid (protein) -Độ tím phản ứng khác tùy theo độ dài liên kết peptid lượng muối CuSO4 Hình Phức chất màu tím đặc trưng II/ Tách chiết ADN Các bước tiến hành thí nghiệm Để tiến hành thí nghiệm tách chiết ADN từ tế bào gan ta cần thực bước sau Bước 1: Nghiền vật mẫu *Nghiền gan: Trước hết ta cần loại bỏ lớp màng bao bọc lấy gan thái nhỏ gan cho vào cối nghiền để tách rời phá vỡ tế bào gan Nghiền xong đổ thêm lượng nước gấp đôi lương gan khuấy Sau tiến hành lọc dịch nghiền qua lưới lọc, loại bỏ phần xơ để lấy dịch lỏng *Nghiền khóm (dứa) tách chiết nước cốt Khóm tươi gọt sạch, thái nhỏ nghiền nát chày cối sứ, sau lọc lấy nước chiết lưới lọc cho vào ống nghiệm Bước 2: Tách ADN khỏi tế bàonhân tế bào Dùng kiềm (chất tẩy rửa) để phá vỡ màng tế bào màng nhân nhằm giải phóng ADN khỏi tế bào -Lấy lượng dịch lọc cho vào ống nghiệm cho thêm vào dịch nghiền tế bào lượng chất tẩy rửa (nước rửa chén bát) với khối lương 1/6 khối lương dịch nghiền tế bào Sau khuấy nhẹ để n vòng 15 phút giá ống nghiệm Chú ý, tránh khuấy mạnh làm xuất bọt -Chia hỗn hợp dịch nghiền tế bào xử lí chất tẩy rửa vào ống nghiệm ống chứa khoảng 1/3 lượng hỗn hợp dịch nghiền -Cho tiếp vào ống nghiệm lương nước cốt dứa khoảng 1/6 hỗn hợp dịch nghiền tế bào chứa ống nghiệm khuấy thật nhẹ nhằm loại bỏ hết protein khỏi ADN -Để ống nghiệm giá thời gian từ – 10 phút Bước 3: Kết tủa ADN dịch nghiền tế bào cồn -Nghiên ống nghiệm rót cồn êtanol dọc theo thành ống nghiệm cách cẩn thận cho cồn tạo thành lớp bề mặt hỗn hợp với lượng lượng dịch nghiền có ống nghiệm -Để ống nghiệm giá khoảng 10 phút quan sát lớp cồn ống nghiệm Chúng ta thấy phân tử ADN kết tủa lơ lửng lớp cồn dạng sợi trắng đục Bước 4: Tách ADN khỏi lớp cồn Dùng que tre đưa vào lớp cồn, khuấy nhẹ cho phân tử ADN bám vào que tre vớt quan sát Chú ý sợi ADN kết tủa dễ gẫy nên phải nhẹ nhành vớt ADN khỏi ống nghiệm Giải thích lý thực theo bước thí nghiệm ADN liên kết với prôtêin histon để tạo thành NST nằm nhân tế bào Do muốn tách chiết ADN phải phá vỡ màng sinh chất, màng nhân tách ADN khỏi prôtêin histon NST Sau chiết ADN khỏi hỗn hợp Thí nghiệm giải thích sau: -Dùng kiềm (nước rửa chén) để thuỷ phân lipit, phá vỡ lớp photpholipid kép màng sinh chất màng nhân để giải phóng NST nước rửa chén phân tử lưỡng cực kết hợp với protein màng phân tử photpholipid làm phá vỡ cấu trúc màng -Tiếp tục cho nước cốt khóm vào ống nghiệm để enzim bromelain khóm thủy phân, loại bỏ prơtêin histon NST tách lấy ADN -Sau rót cồn êtanol dọc theo thành ống nghiệm tạo lớp bề mặt hỗn hợp để ADN chiết nhằm thu phân tử ADN kết tủa Do DNA dễ hồ tan dung mơi ưa nước tương tác với phân tử dung mơi Nhưng êtanol có lực với nước mạnh ADN, phá vỡ mối tương tác nước nucleic, sau kết hợp với phân tử nước, kết ADN bị kết tủa ... màng sinh chất, màng nhân tách ADN khỏi prơtêin histon NST Sau chiết ADN khỏi hỗn hợp Thí nghiệm giải thích sau: -Dùng kiềm (nước rửa chén) để thuỷ phân lipit, phá vỡ lớp photpholipid kép màng sinh. .. chứa ống nghiệm khuấy thật nhẹ nhằm loại bỏ hết protein khỏi ADN -Để ống nghiệm giá thời gian từ – 10 phút Bước 3: Kết tủa ADN dịch nghiền tế bào cồn -Nghiên ống nghiệm rót cồn êtanol dọc theo thành... tạo thành lớp bề mặt hỗn hợp với lượng lượng dịch nghiền có ống nghiệm -Để ống nghiệm giá khoảng 10 phút quan sát lớp cồn ống nghiệm Chúng ta thấy phân tử ADN kết tủa lơ lửng lớp cồn dạng sợi trắng