Nghiên cứu vi nấm trong nuôi cá tra (pangasianodon hypophthalmus) và cá lóc (channa striata) thâm canh (tt)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chun ngành: Ni trồng thủy sản Mã ngành: 62 62 03 01 ĐẶNG THỤY MAI THY NGHIÊN CỨU VI NẤM TRONG NUÔI CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) VÀ CÁ LÓC (Channa striata) THÂM CANH Cần Thơ, 2017 CƠNG TRÌNH ĐƢỢC HỒN THÀNH TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: PGS.TS Phạm Minh Đức Người hướng dẫn phụ: PGS.TS Trần Thị Tuyết Hoa Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại:…………………………………………… Vào lúc … … ngày … tháng … năm … Phản biện 1: Phản biện 2: Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Đặng Thụy Mai Thy, Phạm Minh Đức Trần Thị Tuyết Hoa, 2016 Thành phần vi nấm kí sinh cá tra giống (Pangasianodon hypophthalmus) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 44:48-57 Đặng Thụy Mai Thy, Trần Thị Tuyết Hoa Phạm Minh Đức, 2016 Khả gây bệnh vi nấm cá lóc (Channa striata) ni thâm canh Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, 22:105-113 Pham Minh Duc, Dang Thuy Mai Thy, Y Muraosa and Kishio Hatai, 2015 Infection of striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) in Vietnam caused by the fungus Fusarium incarnatum-equiseti.Bullentin-European Association of Fish Pathologists, 35:208-2016 Sách tham khảo Phạm Minh Đức, Trần Thị Tuyết Hoa Đặng Thụy Mai Thy, 2015 Vi nấm phương pháp nghiên cứu vi nấm gây bệnh động vật thủy sản Nhà xuất Nông nghiệp 144 trang CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Vi nấm tác nhân gây bệnh động vật thủy sản bệnh vi nấm gây thiệt hại cho nghề nuôi thủy sản nhiều quốc gia giới Vi nấm bậc thấp Achlya Saprolegnia giống vi nấm thường gây bệnh loài cá nước với sợi nấm phát triển nhanh tạo thành búi màu trắng bơng gòn (Bruno and Woo, 1994; Yanong, 2003) Ngồi ra, vi nấm bậc cao F oxysporum tìm thấy vết thương da cá rô phi (Oreochromis niloticus) nuôi Tây Ban Nha (Cutuli et al., 2015) Đặc biệt số nghiên cứu gần phát vi nấm phức nhiễm động vật thủy sản F incarnatum-equiseti complex (FIESC) F solani species complex (FSSC) nhiễm trứng cá (Odontesthes bonariensis) hay F oxysporum species complex (FOSC) nhiễm cá vằn (Danio rerio) nuôi Hàn Quốc (Marino et al., 2016; Kulatunga et al., 2017) Cá tra cá lóc hai đối tượng nuôi thâm canh phổ biến đồng sông Cửu Long Phân tích cá tra bệnh ghi nhận loài Fusarium oxysporum, F subglutinans Fusarium sp nhiễm bóng (Phạm Minh Trúc ctv., 2012; Phạm Minh Đức ctv., 2012) Nhưng nghiên cứu dừng lại dạng định tính, chưa xác định tác nhân gây bệnh trương bóng đặc điểm bệnh học vi nấm Fusarium Nghiên cứu bệnh cá lóc nói chung bệnh nấm gây nói riêng hạn chế Kết khảo sát mầm bệnh cá lóc ni thâm canh ao phân lập giống vi nấm Achlya sp., Fusarium sp., Acremonium sp., Geotrichum sp., đặc biệt vi nấm Achlya sp xuất tháng nuôi thứ thứ ba (Phạm Minh Đức ctv., 2012) Như vậy, nghiên cứu cách hệ thống mầm bệnh vi nấm môi trường ao nuôi cá tra cá lóc cần thiết nhằm có hệ thống sở liệu khoa học để kiểm soát mầm bệnh 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu thực nhằm xác định thành phần vi nấm môi trường ao nuôi cá tra cá lóc thâm canh, đặc điểm bệnh học vi nấm gây bệnh cá tra cá lóc, hóa chất thảo dược sử dụng phòng trị bệnh vi nấm Từ cung cấp thơng tin vi nấm bệnh vi nấm cá, đóng góp liệu khoa học làm sở đề xuất giải pháp phòng trị bệnh vi nấm gây góp phần quản lý dịch bệnh tổng hợp phát triển nghề nuôi cá bền vững 1.3 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu tập trung tìm hiểu mầm bệnh vi nấm nhiễm cá tra, cá lóc vi nấm xuất môi trường nước ao nuôi nhằm cung cấp dẫn liệu khoa học mầm bệnh vi nấm phục vụ công tác đào tạo ứng dụng cho thực tiễn sản xuất 1.4 Nội dung nghiên cứu 1) Nghiên cứu thành phần giống vi nấm môi trường ni cá tra bệnh cá lóc bệnh 2) Nghiên cứu đặc điểm bệnh học vi nấm gây bệnh cá tra cá lóc 3) Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi nấm gây bệnh 4) Nghiên cứu ảnh hưởng hóa chất thảo dược đến vi nấm gây bệnh thử nghiệm phòng bệnh nấm điều kiện phòng thí nghiệm 1.5 Ý nghĩa nghiên cứu Kết nghiên cứu cung cấp bổ sung thông tin vi nấm nhiễm cá tra cá lóc Đặc biệt vi nấm Achlya bisexualis tác nhân gây bệnh cá lóc Fusarium incarnatum-equiseti complex tác nhân gây bệnh trương bóng cá tra ni thâm canh đặc điểm bệnh học hai loài vi nấm Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng hóa chất thảo dược đến vi nấm gây bệnh, sở khoa học cần thiết để đề xuất giải pháp hiệu phòng trị bệnh vi nấm nhiễm cá tra cá lóc Luận án giúp nâng cao kiến thức, lực nghiên cứu cho người tham gia nguồn tài liệu tham khảo bổ sung cho nghiên cứu giảng dạy 1.6 Điểm luận án Đã định danh lưu giữ giống loài vi nấm môi trường ao nuôi thâm canh vi nấm nhiễm cá tra cá lóc Nghiên cứu xác định vi nấm Fusarium incarnatumequiseti complex (FIESC) tác nhân gây bệnh trương bóng cá tra Ứng dụng phương pháp truyền thống sinh học phân tử xác định đặc điểm hình thái, di truyền sinh học chủng FIESC gây bệnh Mơ tả đặc điểm mơ bệnh học bóng bị bệnh FIESC Nghiên cứu xác định vi nấm Achlya bisexualis có khả gây bệnh cá lóc Phương pháp truyền thống sinh học phân tử ứng dụng để xác định đặc điểm hình thái, di truyền sinh học chủng A bisexualis gây bệnh Đồng thời mô tả biến đổi cấu trúc mơ da cá lóc bị nhiễm vi nấm A bisexualis Đánh giá tác động hóa chất thảo dược đến Fusarium incarnatum-equiseti complex Achlya bisexualis thử nghiệm sử dụng cỏ mực phòng bệnh hai loài vi nấm gây CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Vi nấm bậc thấp vi nấm bậc cao nhiễm cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) cá lóc (Channa striata) ni ao thâm canh vi nấm môi trường nước ao nuôi 3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian: 1/2013 – 6/2016 Thu mẫu bệnh phẩm (cá tra cá lóc) mơi trường nước ao ni An Giang, Cần Thơ, Vĩnh Long, Đồng Tháp Trà Vinh Phân tích mẫu phòng thí nghiệm vi nấm thuộc Bộ môn Bệnh học thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu Thu mẫu môi trường nước ao nuôi cá Thu mẫu cá tra cá lóc bệnh Phân lập vi nấm (nước cá) Định danh vi nấm (hình thái) Chọn vi nấm phân lập cá bệnh Xác định đặc điểm bệnh học vi nấm gây bệnh cá Cá tra Cá lóc Thí nghiệm cảm nhiễm xác định khả gây bệnh vi nấm cá Định danh vi nấm gây bệnh (đặc điểm hình thái, giải trình tự gen) Xác định đặc điểm sinh học vi nấm gây bệnh cá tra cá lóc Xác định ảnh hưởng hóa chất thảo dược đến vi nấm gây bệnh Thử nghiệm sử dụng thảo dược cá bệnh vi nấm điều kiện phòng thí nghiệm Hình 3.1: Sơ đồ nghiên cứu cá bệnh vi nấm Mô học 3.4.1 Xác định thành phần giống lồi vi nấm mơi trƣờng ao ni cá tra cá lóc thâm canh Mẫu nước ao cá tra ao cá lóc ni thâm canh tỉnh An Giang Cần Thơ thu với nhịp thu mẫu hàng tháng đợt chu kỳ nuôi Phương pháp phân lập vi nấm môi trường nước ao nuôi thực theo Johnson et al (2002) Vi nấm định danh theo khóa phân loại Johnson et al (2002) de Hoog et al (2000) 3.4.2 Xác định thành phần giống loài vi nấm nhiễm cá tra cá lóc 3.4.2.1 Phƣơng pháp thu mẫu  Mẫu cá tra: Mẫu thu định kỳ: tổng số 153 mẫu cá tra ao nuôi thâm canh thu An Giang Cần Thơ Thu mẫu cá bệnh: tổng số 116 mẫu cá tra giống 207 mẫu cá tra thịt thu 28 ao nuôi tỉnh An Giang, Cần Thơ, Vĩnh Long Đồng Tháp  Mẫu cá lóc: Mẫu thu định kỳ: tổng số 197 mẫu cá lóc ao ni thâm canh thu An Giang Cần Thơ Thu mẫu cá bệnh: tổng số 242 mẫu cá lóc thu 24 ao nuôi thâm canh sáu tỉnh: An Giang, Cần Thơ, Đồng Tháp, Hậu Giang, Vĩnh Long Trà Vinh 3.4.2.2 Phƣơng pháp phân lập vi nấm Mẫu bệnh phẩm cá tra (cơ, mang, gan bóng hơi) cá lóc (cơ, mang gan) cấy mơi trường GYA có bổ sung kháng sinh ampiciline streptomycine với liều lượng 500 µg/l loại Ủ đĩa cấy nhiệt độ 28C ngày (Hatai and Egusa, 1979) 3.4.3 Nghiên cứu đặc điểm bệnh học vi nấm gây bệnh cá tra cá lóc 3.4.3.1 Thí nghiệm cảm nhiễm cá tra: khảo sát khả gây bệnh giống vi nấm đƣợc phân lập từ cá tra bệnh Các thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên phương pháp ngâm theo Hanjavanit et al (2010) Ghi nhận dấu hiệu bệnh lý tỉ lệ cá chết suốt 21 ngày sau cảm nhiễm Những cá có dấu hiệu lờ đờ, linh hoạt phân lập vi nấm môi trường GYA Bảng 3.1: Nghiệm thức thí nghiệm cảm nhiễm giống vi nấm cá tra TT Nghiệm thức (NT) Chủng vi nấm NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NTĐC Achlya PCT0102 Saprolegnia PVL0203 Mucor PCT0208 Aspergillus PCT0126 Fusarium F1401 Không cảm nhiễm vi nấm Mật độ bào tử (bào tử/ml) 1,22 x 106 1,24 x 106 1,15 x 106 1,23 x 106 1,15 x 106 3.4.3.2 Thí nghiệm cảm nhiễm cá tra: khảo sát khả gây bệnh chủng vi nấm Fusarium sp đƣợc phân lập từ cá tra bệnh trƣơng bóng Bảng 3.2: Nghiệm thức thí nghiệm cảm nhiễm Fusarium sp cá tra TT Nghiệm thức (NT) Chủng vi nấm NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NTĐC FVN1301 F1401 F1402 F1503 F1509 Không cảm nhiễm vi nấm Mật độ bào tử (bào tử/ml) 1,41 x 106 1,25 x 106 1,32 x 106 1,27 x 106 1,26 x 106 3.4.3.3 Thí nghiệm cảm nhiễm cá tra: khảo sát mức độ gây bệnh Fusarium sp đƣợc phân lập từ cá tra bệnh trƣơng bóng Bảng 3.3: Nghiệm thức thí nghiệm cảm nhiễm Fusarium sp mật độ bào tử khác cá tra TT Nghiệm thức (NT) Chủng vi nấm NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT6 NTĐC F1401 F1509 F1401 F1509 F1401 F1509 Không cảm nhiễm vi nấm Mật độ bào tử (bào tử/ml) 1,25 x 106 1,28 x 106 1,25 x 104 1,28 x 104 1,25 x 102 1,28 x 102 TT 10 11 12 Nghiệm thức (NT) NT7 NT8 NT9 NT10 NT11 NT12 Cỏ mực g/kg thức ăn 10 10 Lồi cá Cá lóc Cá lóc Cá lóc Cá lóc Cá lóc Cá lóc Chủng vi nấm Không ngâm vi nấm Ngâm vi nấm A.bisexualis ĐT0232 3.4.9 Phƣơng pháp xử lý số liệu Các số liệu phân tích phương pháp thống kê mơ tả vẽ đồ thị chương trình Microsoft Excel phương pháp phân tích thống kê t-test ANOVA nhân tố (P