Nghiên cứu tối ưu chiết xuất cho hàm lượng polyphenol cao từ lá trà hoa vàng

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN XUÂN NHẬT MÃ SINH VIÊN: 1201433 NGHIÊN CỨU TỐI ƢU CHIẾT XUẤT CHO HÀM LƢỢNG POLYPHENOL CAO TỪ LÁ TRÀ HOA VÀNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI TRẦN XUÂN NHẬT MÃ SINH VIÊN: 1201433 NGHIÊN CỨU TỐI ƢU CHIẾT XUẤT CHO HÀM LƢỢNG POLYPHENOL CAO TỪ LÁ TRÀ HOA VÀNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Ngƣời hƣớng dẫn: TS Hoàng Quỳnh Hoa DS Phạm Thị Linh Giang Nơi thực hiện: LỜI CẢM ƠN Bộ môn Thực Vật LỜI CẢM ƠN HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn kính trọng, xin gửi lời cảm ơn đến TS Hoàng Quỳnh Hoa DS Phạm Thị Linh Giang - Bộ môn Thực Vật, Trường Đại học Dược Hà Nội – người trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt từ ngày đầu nghiên cứu, giúp hoàn thành khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn tới: PGS.TS Trần Văn Ơn, ThS Nghiêm Đức Trọng DS Lê Thiên Kim – Bộ môn Thực Vật, người thầy sẵn sàng giúp đỡ, giải đáp thắc mắc, khó khăn mà gặp phải Ban Giám Hiệu, phòng ban, thầy cô giáo, cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội, người dạy bảo nhiều kiến thức suốt năm học Các môn Dược Liệu, môn Hóa Phân Tích, môn Vật Lý- Hóa Lý tạo điều kiện cho sử dụng cân phân tích độ ẩm máy đo quang phổ UV- VIS trình làm thực nghiệm Các chị kỹ thuật viên môn Thực Vật nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình nghiên cứu thực nghiệm Các bạn làm khóa luận khóa 67 em nhóm nghiên cứu môn Thực Vật, tất động viên, hỗ trợ nhiều Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè khích lệ, giúp đỡ cổ vũ suốt thời gian qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 02 tháng năm 2017 Sinh viên Trần Xuân Nhật MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU DANH MỤC BẢNG BIỂU VÀ HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loài Camellia chrysantha (Hu) Tuyama 1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng sinh học 1.1.3.1 Tác dụng chống ung thư 1.1.3.2 Tác dụng chống oxy hóa 1.1.3.3 Một số tác dụng khác 1.2 Nhóm chất polyphenol 1.2.1 Định nghĩa, phân loại 1.2.2 Các phương pháp định lượng polyphenol 1.3 Các phƣơng pháp chiết xuất polyphenol 1.3.1 Khái niệm yếu tố ảnh hưởng tới trình chiết xuất dược liệu 1.3.2 Phân loại phương pháp chiết xuất 1.3.3 Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Thiết bị, hóa chất nghiên cứu 14 2.1.2.1 Thiết bị máy móc, dụng cụ thí nghiệm 14 2.1.2.2 Hóa chất 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến quy trình chiết xuất cao Trà hoa vàng ( Camellia chrysantha (Hu) Tuyama ) cho hàm lượng polyphenol cao phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm 15 2.3.1.1 Lựa chọn biến số (nồng độ EtOH, nhiệt độ, thời gian) xây dựng mô hình thí nghiệm 15 2.3.1.2 Định lượng hàm lượng polyphenol tổng phương pháp đo màu, sử dụng thuốc thử Folin- Ciocalteu 18 2.3.2 Nghiên cứu xử lý số liệu thống kê phương pháp đáp ứng bề mặt 20 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU, BÀN LUẬN 23 3.1 Thực nghiệm kết nghiên cứu 23 3.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến quy trình chiết xuất Trà hoa vàng (Camellia chrysantha (Hu) Tuyama ) cho hàm lượng Polyphenol cao phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm 23 3.1.1.1 Xây dựng đường chuẩn acid gallic 23 3.1.1.2 Kết định lượng polyphenol mẫu nghiên cứu 24 3.1.1.3 Đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến trình chiết xuất polyphenol 26 3.1.2 Kết điều kiện chiết xuất tối ưu cho hàm lượng polyphenol cao 29 3.2 Bàn luận 30 3.2.1 Xu hướng ảnh hưởng yếu tố dung môi, nhiệt độ thời gian chiết xuất đến hàm lượng polyphenol toàn phần (hình 3.6) 30 3.2.2 Sự tối ưu hóa qua thông số 31 3.2.3 Phương pháp xử lý số liệu phương trình hồi quy đa biến 32 KẾT LUẬN 34 ĐỀ XUẤT 35 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU GAE/g DW Gallic Acid Equivalent/g Dry Weight - mg đương lượng acid gallic/g chất khô ANOVA Analysis of Variance – Phân tích phương sai DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl EGCG Epigalo catechin gallat EtOH Dung môi ethanol GC Gas Chromatography - Sắc ký khí HPLC High Performance Liquid Chromatography - Sắc ký lỏng hiệu cao HPTLC High Performance Thin Layer Chromatography - Sắc ký lớp mỏng hiệu cao OD Optical Density - Mật độ quang RD Standard deviation – Độ lệch chuẩn RSD Relative Standard Deviation - Độ lệch chuẩn tương đối RSM Response Surface Methodology - Phương pháp đáp ứng bề mặt UAE Ultrasound assisted extraction – Chiết xuất có hỗ trợ siêu âm DANH MỤC BẢNG BIỂU VÀ HÌNH VẼ Bảng Nội dung thể Trang 1.1 So sánh phương pháp chiết có hỗ trợ siêu âm (UAE) so với phương pháp chiết xuất thông thường 11 1.2 Một số nghiên cứu giới sử dụng phương pháp chiết có hỗ trợ siêu âm để chiết hợp chất nhóm polyphenol 12 2.1 Danh sách mã hóa mẫu thực nghiệm theo điều kiện chiết xuất 18 2.2 Xây dựng dãy dung dịch chuẩn acid gallic 19 2.3 Đổi biến thực thành biến mã hóa theo mô hình trung tâm RSM 22 3.1 Độ hấp thụ dãy dung dịch chuẩn 23 3.2 Mật độ quang trung bình mg đương lượng acid gallic/g chất khô 27 mẫu nghiên cứu 25 Hình Nội dung thể Trang 1.1 Đặc điểm hình thái mẫu C.chrysantha (Hu) Tuyama 1.2 Khung cacbon Flavonoids 1.3 Các nhóm phụ nhóm chất chung Flavonoids 2.1 Sơ đồ bước tiến hành định lượng polyphenol toàn phần 20 2.2 Giao diện phần mềm R 21 3.1 Đường biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào 23 3.2 Câu lệnh kết hệ số phương trình hồi quy đa biến 27 3.3 So sánh hàm lượng polyphenol toàn phần từ thực nghiệm (Conc) từ mô hình (Conc1) xây dựng 28 3.4 Xu hướng ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng polyphenol 30 ĐẶT VẤN ĐỀ Trà hoa vàng (Camellia spp.) hay gọi Kim hoa trà – loại trà có hoa màu vàng thuộc chi Camellia L Những năm trở lại đây, Trà hoa vàng biết đến với nhiều tác dụng sinh học quý, mang lại lợi ích tốt cho sức khỏe Nghiên cứu Lixia Song cộng loại Trà hoa vàng C chrysantha, C impressinervis, C euphlebia, C microcarpa, C nitidissima C tunghinensis cho thấy tác dụng chống oxi hóa mạnh từ nhóm chất polyphenol trà [44] Cùng với đó, số nghiên cứu khác chứng minh Trà hoa vàng có tác dụng hạ huyết áp, hạ cholesterol máu, giảm đường huyết, chống u bướu, tăng cường hệ miễn dịch kéo dài tuổi thọ [17], [27] Ở Việt Nam, ghi nhận xuất 27 loài Trà hoa vàng [12] Trong đó, đa dạng tập trung chủ yếu khu vực Tam Đảo (Vĩnh Phúc), Ba Chẽ (Quảng Ninh) Nghiên cứu Ngô Thị Thảo mẫu Trà Ba Chẽ khẳng định có mặt polyphenol, bước đầu định lượng hàm lượng polyphenol tổng, đồng thời tác dụng chống oxy hóa ức chế dòng tế bào ung thư in-vitro từ dịch chiết Trà hoa vàng [8] Rõ ràng với tác dụng sinh học quý tiềm phát triển, việc nghiên cứu phát triển sản phẩm thuốc hay thực phẩm chức từ Trà hoa vàng nhu cầu tất yếu quan trọng Trong đó, bán thành phẩm dạng cao xem bán thành phẩm từ dược liệu thô đến sản phẩm hoàn thiện khác trà túi lọc, bột cốm, viên nang, viên nén Từ thực tế nhu cầu trên, đề tài “Nghiên cứu tối ƣu chiết xuất cho hàm lƣợng polyphenol cao từ Trà hoa vàng” thực với mục tiêu sau: - Khảo sát ảnh hưởng yếu tố (dung môi, nhiệt độ, thời gian) trình chiết siêu âm - Chọn điều kiện chiết xuất tối ưu cho hàm lượng polyphenol cao từ Trà hoa vàng CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loài Camellia chrysantha (Hu) Tuyama 1.1.1 Đặc điểm thực vật, phân bố Theo hệ thống phân loại Takhtajan công bố năm 2009, chi Trà (Camellia L) có vị trí phân loại sau [15]: Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp: Sổ (Dilleniidae) Bộ: Chè (Theales) Họ: Chè (Theaceae) Chi: Trà (Camellia L) Trên giới, chi Camellia L có khoảng 280 loài, phân bố chủ yếu nước nhiệt đới nhiệt đới Ấn Độ, Trung Quốc, Việt Nam, Thổ Nhĩ Kì, Kenya, Uganda, Brazil, Australia…[12] Tại Việt Nam, chi Camellia L có tới gần 60 loài, có 27 loài có hoa màu vàng, thường gọi chung Trà hoa vàng, tập trung nhiều khu vực phía Bắc (Thái Nguyên, Vĩnh Phúc, Quảng Ninh…) rải rác phía Nam số tỉnh Lâm Đồng, Đồng Nai…[21] Camellia chrysantha (Hu) Tuyama loại Trà hoa vàng, trồng phổ biến huyện Ba Chẽ (Quảng Ninh) Đây loài có thân gỗ nhỏ, chồi cành non có lông mịn thưa; cành già màu nâu, nhẵn Lá bao chồi 5-9, thường 6, hình elip, lớn dần từ lên; mặt màu hồng nhạt; mặt màu hồng nhạt hơn, nhẵn, mép nguyên Lá đơn, mọc so le, kèm Cuống tương đối ngắn, dài khoảng 0,60,7cm, lõm mặt Phiến (bánh tẻ) hình elip, cứng, dày dai, dài 11 cm, rộng 5cm; mặt màu xanh thẫm, nhẵn bóng, mặt màu xanh nhạt, nhẵn, thường có nhiều điểm tuyến màu đen; gốc hình nêm; mép có khía cưa, khía nông, nhỏ, phía gốc gần khía, mật độ khía cưa tăng dần phía lá, chỗ rộng khía cưa cách 8mm; nhọn có mũi dài 0,4-0,5cm gân lộ rõ, lõm sâu mặt trên, rõ mặt dưới, có 10-12 cặp gân bên Hoa đều, lưỡng tính, mọc đơn độc đầu cành nách lá, màu vàng, đường kính nở khoảng 3cm Cuống hoa ngắn, gần không thấy Lá bắc 6-10, có dạng hình móng, xếp thành hai dãy, phủ lên nhau, lớn dần từ lên trên, kích thước từ 0,3-1,4 cm, mặt mặt có lông trắng, mịn Cánh hoa 10-20, cánh phía dính với dính vào vòng nhị ngoài.Bộ nhị nhiều, dính với gốc nhị Các nhị vòng nhị dài khoảng 2,4 cm, lông; nhị màu vàng, mang bao phấn ô Bộ nhụy gồm noãn dính tạo thành bầu ô, có dạng hình cầu, màu xanh nhạt, nhẵn; vòi nhụy 3, rời, màu vàng [6], [8], [11] Hình 1.1: Đặc điểm hình thái mẫu C.chrysantha (Hu) Tuyama Toàn cây; 2,3 Cành mang lá; Lá; Hoa; Lá bắc; Tràng; Bộ nhị; Bộ nhụy; 10 Bầu cắt ngang Về mặt thiết kế thí nghiệm, biến thường thiết kế với giá trị thực nghiệm cách nhau, sau code đổi biến chuyển biến mã hóa có giá trị (-1; 0; 1) Đây hạn chế nhóm nghiên cứu từ đầu chọn biến thực nghiệm không cách đều, dẫn đến biến mã hóa nhiệt độ (-0,75; 0; 1) nồng độ EtOH (0,8; 0; 1) chưa theo thiết kế chuẩn Tuy nhiên biến thỏa mãn mô hình trung tâm xoay quanh điểm khoảng -1 đến [30], [33] Đề xuất cho nghiên cứu sử dụng phương pháp RSM để xây dựng mô hình thực nghiệm xử lý số liệu, cần ý đến điều kiện Với hệ số xác định bội R2= 0,9482 (Hình 3.2) hệ số tương quan r= 0,9727 (Hình 3.3) cao, phương trình hồi quy đa biến theo mô hình xây dựng tiên đoán giá trị thực nghiệm ngược lại Việc đưa toán tối ưu hóa với nhiểu biến số ảnh hưởng phương trình có độ tin cậy cao mục tiêu mà phân tích thống kê hướng đến 33 KẾT LUẬN Sau thời gian tiến hành, đề tài đạt số kết sau: Đánh giá ảnh hưởng yếu tố nồng độ dung môi ethanol (T1), nhiệt độ (T2) thời gian chiết xuất (T3) đến hàm lượng polyphenol toàn phần (Y) chiết xuất Trà hoa vàng Camellia chrysantha (Hu) Tuyama phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm qua phương trình có dạng: Y= 15,0210 + 0,3616*T1 + 0,1835*T2 + 0,1857*T3 + 0,0033*T1*T2- 0,0041*T12 Đề tài lựa chọn thông số phù hợp cho trình chiết xuất Trà hoa vàng: chiết xuất với nồng độ ethanol 76,29% nhiệt độ 800C, thời gian 45 phút thu cao khô Trà hoa vàng có hàm lượng polyphenol toàn phần 61,92 mg GAE/g DW 34 ĐỀ XUẤT Thiết kế lại cách lựa chọn giá trị biến, đồng thời việc đánh giá kết đầu hàm lượng polyphenol toàn phần cao chiết, cần bổ sung thêm kết tác dụng sinh học kháng oxy hóa hay giảm cholesterol máu… để có lựa chọn điều kiện tối ưu xác Xây dựng dự thảo tiêu chuẩn cao dược liệu Trà hoa vàng Bổ sung nghiên cứu độ ổn định cao Trà hoa vàng phương pháp bảo quản cao điều kiện thường điều kiện lão hóa cấp tốc 35 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ khoa học công nghệ (2003), TCVN 9745-1:2013 (ISO 14502-1:2005), Phần 1: Hàm lượng polyphenol tổng số chè-phương pháp đo màu dùng thuốc thử Folin- Ciocalteur, Tiêu chuẩn quốc gia Bộ Y tế (2006) Kĩ thuật điều chế và sinh dược học dạng thuốc ,tập 1, NXB Y học, Hà Nội, tr 229-234 Bộ Y tế (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, tập 1, tr 50- 60, NXB Y học, Hà Nội Bộ Y Tế (2009), phụ lục 9.6, Dược điển Việt Nam Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 1, tr 69-71, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Thị Hà Ly (2016), “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học Trà hoa vàng Thái Nguyên”, Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Thị Thanh Bình (2010), “Nghiên cứu sử dụng hợp chất Polyphenol số giống chè Việt Nam”, tr 3-5, Hà Nội Ngô Thị Thảo (2016),"Nghiên cứu đặc điểm thực vật, xác định hàm lượng polyphenol EGCG, thử độc tế bào chống oxy hóa Trà hoa vàng Ba Chẽ - Quảng Ninh" , Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Nguyễn Thượng Dong (2008), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, tr.11-29, NXB Khoa học kỹ thuật 10 Nguyễn Thị Sương Mai (2011), “Nghiên cứu chiết tách polyphenol từ điều để làm chất kháng oxy hóa”, Luận văn thạc sĩ, Trường Đại học Đà Nẵng 11 Phạm Hoàng Hộ (2001), Cây cỏ làm thuốc, tập 2, tr.463, Nhà xuất Trẻ 12 Trần Ninh & Hakoda Naotoshi (2010), Các loài trà Vườn quốc gia Tam Đảo 13 Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, tập 2, tr 525, Nxb Y học Tài liệu tiếng Anh 14 Andersen M., Kenneth R.M., (2006), “Flavonoids Chemistry, Biochemistry and Applications”, pp 54-59, CRC Press, Taylor & Francis Group Harbonne 15 Armen Takhtajan (2009), Flowering plant, pp 210-212, Spinger Netherlands 16 Brighente I M C, Dias M, Verdi L G, Pizzolatti M G (2007), "Antioxidant Activity and total phenolic content of some Brazilian species", Pharmaceutical Boilogy, Vol 45, No 2, pp 156-161 17 Chen, J H.; Wu, S R.; He, Y Z.; Lin, W Y.; Luo, J H.; Fu, J Y The wholesome function and trace elements of leaves in artificial asexual propagation of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama (golden camellia) Weiliang Yuansu Yu Jiankang Yanjiu 1993, 10, 51-52 18 Dattajirao K., Iliya P (1990), “Dietary Tannins”, pp – 7, CRC Press 19 Devi Datt Joshi (2012), Herbal Drugs and Fingerprints, pp 13-15, Spinger 20 Garcia-Salas, Patricia, et al "Phenolic-compound-extraction systems for fruit and vegetable samples." Molecules 15.12 (2010): 8813-8826 21 George Orel and Peter G Wilson (2010), "Camellia luteocerata sp nov and a new section of (Dalatia) from Vietnam", Nordic Journal of Botany, 28: 280-284 22 Ghafoor, Kashif, et al "Optimization of ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds, antioxidants, and anthocyanins from grape (Vitis vinifera) seeds." Journal of Agricultural and Food Chemistry 57.11 (2009): 4988-4994 23 Hromádková, Z., Košt’álová, Z., & Ebringerová, A (2008) Comparison of conventional and ultrasound-assisted extraction of phenolics-rich heteroxylans from wheat bran Ultrasonics sonochemistry, 15(6), 1062-1068 24 Huang, W., Xue, A., Niu, H., Jia, Z., & Wang, J (2009) Optimised ultrasonicassisted extraction of flavonoids from Folium eucommiae and evaluation of antioxidant activity in multi-test systems in vitro Food chemistry, 114(3), 11471154 25 Jeffrey B (1994), The flavonoids advance in research since 1986, Chapman & Hall, pp – 676 26 J Sherma, B Fried (2003), Handbook of Thin - Layer Chromatography, editio, New York: Marcel Dekker Inc 27 Jin-Bin Wei Xiong Li, Hui Song …(2014), "Characterization and determination of antioxidant components in the leaves of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama based on compositioneactivity relationship approach", Journal of Food and Drug Analysis pp 28 Jin-Bin Wei, Xiong Li, Hui Song, Yong-Hong Liang, Yu-Zheng Pan, Jun-Xiang Ruan, Xia Qin, Yong-Xin Chen, Cai-Li Nong,Zhi-Heng Su (2015), "Characterization and determination of antioxidant components in the leaves of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama based on compositioneactivity relationship approach", Journal of Food and Drug analysis, (23), pp 40-48 29 Kamran G, Yosef G, Mohammad A, Ebrahimzadeh (2009), "Antioxidants Activity, flavonoids phenol and contents pells and 13 citrus species tissues", Pak J Pharm Sci., Vol 22, No 3, pp 277-281 30 Khan, Muhammad Kamran, et al "Ultrasound-assisted extraction of polyphenols (flavanone glycosides) from orange (Citrus sinensis L.) peel." Food Chemistry 119.2 (2010): 851-858 31 L B S Kardono, C K Angerhofer, S Tsauri, K Padmawinata, J M Pezzuto, A D Kinghorn (1991), "Cytotoxic and antimalarial constituents of the roots of Eurycoma longifolia", J Nat Prod., No 5, Vol 5, pp 1360-1367 32 Lee, Lan-Sook, et al "Optimization of ultrasonic extraction of phenolic antioxidants from green tea using response surface methodology." Molecules 18.11 (2013): 13530-13545 33 Lenth, R V (2009) Response-Surface Methods in R, using rsm Journal of Statistical Software, 32(7), 1-17 34 Lin InEt Al(2013), "Chemical constituents and anticancer activity of yellow Camellias against MDA-MB-231 Human Breast Cancer Cells", Agric Food Chern, pp 61,9638-9644 35 Liu L, Shen BJ, Xie DH, Cai BC, Qin KM, Cai H Optimization of ultrasoundassisted extraction of phenolic compounds from Cimicifugae rhizoma with response surface methodology Phcog Mag 2015;11:682-9 36 Luu Hong Truong, V D (2015), "Camellia sonthaiensis(Theaceae): A new species from Viet Nam", Ann Bot Fennici, vol 52, p 289-295 37 Ma CH, Liu TT, Yang L, Zu YG, Chen X, Zhang L, et al Ionic liquid-based microwave-assisted extraction of essential oil and biphenyl cyclooctene lignans from Schisandra chinensis Baill fruits J Chromatogr A 2011;1218:8573-80 38 Ma, Y Q., Chen, J C., Liu, D H., & Ye, X Q (2009) Simultaneous extraction of phenolic compounds of citrus peel extracts: effect of ultrasound Ultrasonics Sonochemistry, 16(1), 57-62 39 Ma, Y Q., Ye, X Q., Fang, Z X., Chen, J C., Xu, G H., & Liu, D H (2008) Phenolic compounds and antioxidant activity of extracts from ultrasonic treatment of Satsuma mandarin (Citrus unshiu Marc.) peels Journal of Agricultural and Food Chemistry, 56(14), 5682-5690 40 Ma, Y., Ye, X., Hao, Y., Xu, G., Xu, G., & Liu, D (2008) Ultrasound-assisted extraction of hesperidin from Penggan (Citrus reticulata) peel Ultrasonics Sonochemistry, 15(3), 227-232 41 Majd, Mojtaba Heydari, et al "Optimization of ultrasonic-assisted extraction of phenolic compounds from bovine pennyroyal (Phlomidoschema parviflorum) leaves using response surface methodology." Industrial Crops and Products 57 (2014): 195-202 42 Naoshiko Hakoda and Tran Ninh (2001), "Camellia flava", Curtis Bot Magazine, vol 18, pp.190-193 43 Sharmila, G., et al "Ultrasound assisted extraction of total phenolics from Cassia auriculata leaves and evaluation of its antioxidant activities." Industrial Crops and Products 84 (2016): 13-21 44 Vilkhu, K.; Mawson, R.; Simons, L.; Bates, D Applications and opportunities for ultrasound assisted extraction in the food industry Innov Food Sci Emerg 2008, 9, 161-169 45 Wang, Jing, et al "Optimisation of ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds from wheat bran." Food Chemistry 106.2 (2008): 804-810 46 Yang, Y., & Zhang, F (2008) Ultrasound-assisted extraction of rutin and quercetin from Euonymus sonochemistry, 15(4), 308-313 alatus (Thunb.) Sieb Ultrasonics 47 Yen, H T., Thuy Linh, T T., Thanh, M C., Thu Huyen, N T., Ngoc Ha, L T., & Ngoc, B V (2016) Optimization of extraction of phenolic compounds that have high antioxidant activity from Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk.(Sim) in Chi Linh, Hai Duong TAP CHI SINH HOC, 37(4), 509-519 48 Yolmeh, Mahmoud, Mohammad B Habibi Najafi, and Reza Farhoosh "Optimisation of ultrasound-assisted extraction of natural pigment from annatto seeds by response surface methodology (RSM)." Food chemistry 155 (2014): 319-324 PHỤ LỤC Phụ lục Phụ lục Nội dung Tiêu mẫu nghiên cứu Trà hoa vàng Camellia chrysantha (Hu) Tuyama Phụ lục Một số hình ảnh phép tính nhập chạy phần mềm R Phụ lục Sắc kí đồ mẫu Trà hoa vàng (Camellia chrysantha (Hu) Tuyama) PHỤ LỤC Tiêu mẫu nghiên cứu Trà hoa vàng Camellia chrysantha (Hu) Tuyama Hình 1: Phiếu giám định tên khoa học Hình 2: Phiếu giám định mã số tiêu PHỤ LỤC Một số hình ảnh phép tính nhập chạy phần mềm R Hình 3: Phân tích summary Hình 4: So sánh giá trị thực nghiệm giá trị tính toán theo mô hình Bảng 1: Một số phép tính sử dụng chạy phần mềm R Ý nghĩa Ví dụ, hàm Thv