VI SINH môi TRƯỜNG báo cáo nhóm 6

BÁO CÁO VI SINH MÔI TRƯỜNG PHÂN BIÊT VA GIAI THICH CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TICH ĐỊNH TINH & ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT TRONG MÔT MÂU MÔI TRƯỜNG NHÓM -Dương Công Thàng Nguyễn Trung Bảo B C D Vi sinh môi trường – Nhóm CHỦ ĐỀ: Phân biệt và giải thích phương pháp Phân tích ĐỊNH TÍNH và ĐỊNH LƯỢNG vi sinh vật một mẫu môi trường (đất, nước) A/ Phương pháp phân tích ĐỊNH TÍNH vi sinh vật B/ Phương pháp phân tích ĐỊNH LƯỢNG vi sinh vật 1- Phương pháp đếm trực tiếp Là phương pháp định lượng dựa quan sát và đếm trực tiếp số lượng tế bào vi sinh vật kính hiển vi và buồng đếm Đối tượng: mật độ vsv đơn bào có kích thước lớn nấm men, men, tảo… xác định trực tiếp buồng đếm kính hiển vi - Ưu điểm: cho phép xác định nhanh chóng số lượng vi sinh vật có mẫu - Nhược điểm: • • • • • Không phân biệt tế bào sống và chết mẫu Không phân biệt tế bào vi sinh vật và vật thể Hạn chế đối với huyền phù có mật độ thấp lượng dung dịch đem đếm nhỏ Độ chính xác không cao, dễ nhầm lẫn Không thích hợp mẫu có mật độ vi sinh thấp Để hạn chế nhược điểm phương pháp đếm trực tiếp, có phương pháp đếm trực tiếp: • • • Đếm trực tiếp kính hiển vi hùynh quang Đếm trực tiếp buồng đếm breed Đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu Cách tiến hành: 2- Phương pháp đếm khuẩn lạc Vi sinh môi trường – Nhóm Khác với phương pháp đếm trực tiếp, phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép xác định số lượng tế bào vi sinh vật sống hiện diện mẫu Tế bào sống là tế bào có khả phân chia tạo thành khuẩn lạc môi trường chọn lọc Do phương pháp này có tên gọi là phương pháp đếm khuẩn lạc Mặc dù có một số nhược điểm phương pháp đếm khuẩn lạc vẫn là phương pháp tốt nhất để xác định mật độ tế bào sống - Ưu điểm: là độ nhạy cao, cho phép định lượng vi sinh vật mật độ thấp mẫu phương pháp này sử dụng rộng rãi kiểm nghiệm vi sinh vật nước.có thể định lượng vi sinh vật kích thước nhỏ, di động - Nhược điềm: + Mật độ tế bào lớn làm khuẩn lạc chồng chéo lên tạo thành màng sinh khối + Số lượng khuẩn lạc một đĩa nhỏ sẻ giá trị thống kê + Nhiều tế bào chưa kịp hình thành khuẩn lạc thời gian ủ không đủ dài + Phương pháp đếm khuẩn lạc dể cho sai số lớn nên cần thực hiện lặp lại ít nhất đĩa 3- Phương pháp đếm khuẩn lạc màng lọc Phương pháp này thường dùng để định lượng vi sinh vật thị mẫu nước tiến hành thí nghiệm môi trường nơi có mật độ vi sinh vật tương đối thấp phương pháp này gồm bước lọc để tập trung vi sinh vật mẫu nước màng lọc và xác định số tế bào vi sinh vật dựa vào số khoảng lạc đếm sau đặt màng lọc lên môi trường thạch có thành phần dinh dưỡng thích hợp cho loại vi sinh vật cần kiểm Dựa khối lượng màu nước ban đầu và quy ước là khuẩn lạc hình thành từ tế bào vi sinh vật, người ta quy số lượng vi sinh vật có một đơn vị thể tích nước Như phương pháp này là kết hợp phương pháp lọc vô trùng và phương pháp đếm khuẩn lạc đĩa petri Màng lọc có kích thước lỗ là 0,45pm 0,2 pm chế tạo từ nguyên liệu là sợi thủy tinh siêu mánh, sợi polypropylene, thường cung cấp trạng thái vô trung Ngoài màng lọc bình thường hiện người ta sử dụng màng lọc lưới kị nước có in ô vuông vật liệu kỵ nước vạch chia ô vật liệu này ngăn cán mọc lan khuẩn lạc khác với trường hợp màng lọc bình thường , từ số ô vuông có khoảng lạc mọc, mật độ vi sinh vật mẫu nước tính và tình bày dưới dạng số có xác suất lớn nhất(mpn) lượng vi sinh vật có một đơn vị thể tích mẫu theo công thức :mpn = n.ln(n/n-x) Vi sinh môi trường – Nhóm - Ưu điểm: xác định mật độ vsv cụ thể một thể tích mẫu lớn: 10ml; 100ml;… - Nhược điểm: không thích hợp cho việc phân tích mẫu thực phẩm rắn 4- Phương pháp đo độ đục Ngoài phương pháp nêu trên, mật độ vi sinh vật c.ó thể đươc xác định một cách gián tiếp thông qua đo độ đục một pha lỏng có chứa nhiều phần tử không tan sẻ hình thành một hệ huyền phù và có độ đục phần tử hiện diện môi trường lỏng cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới Tế bào vi sinh vật là một thực thể nên hiện diện môi trường củng làm môi trường trở nên đục Độ đục huyền phù tỷ lệ với mật độ tế bào Trong một giới hạn nhất định độ đục và mật độ tế bào, xác lập quan hệ tỷ lệ tuyến tính mật độ tế bào và độ đục Do định lượng mật độ tế bào một gián tiếp thông qua đo độ đục máy so màu bước sóng từ 550-610nm Trong trường hợp này, trước tiên cần phải thiết lập đường quan hệ tuyến tính độ đục và mật độ tế bào cách sử dụng một số huyền phù tế bào có độ đục xác định và mật độ tế bào huyền phù xác định một phương pháp trực tiếp khác, ví dụ phương pháp đếm khuẩn lạc, phương pháp đếm trực tiếp… Phương pháp định mật độ tế bào theo độ đục dùng để so sánh mức độ tàng trướng hai hay nhiều chung vi sinh vật môi trường lỏng Trong trường hợp không cần biết giá trị tuyệt đối mật độ tế bào không cần phải xây dựng đường tương quan tuyến tính độ đục và mật độ - Ưu điểm: Phương pháp này cho kết quả nhanh thường ứng dụng theo dõi nghiên cứu đặc trung tăng trưởng chủng vi sinh vật phòng thí nghiệm sản xuất - Nhược điểm: không thích hợp cho ứng dụng kiểm nghiệm vi sinh vật 5- Phương pháp MBN Phương pháp dựa nguyên tắc xác suất thống kê phân bố vsv độ pha loãng khác mẫu Hay nói là phương pháp đánh giá số lượng vi sinh vật có xác xuất lớn nhất hiện diện một đơn vị thể tích Phương pháp này dùng để định lượng nhóm vi sinh vật nuôi cấy môi trường lỏng chọn lọc và cho kết quả biểu kiến thích hợp Là phương pháp định lượng dựa kết quả định tính một loạt thí nghiệm lặp lại một số độ pha loãng khác (thông thường độ pha loãng nuổi cấy lập lại nhiều lần (3-10 lần)) Số lượng ống nghiệm lặp lại càng nhiều lần độ chính xác càng cao Vi sinh môi trường – Nhóm Quy trình thực hiện phương pháp này sau: + Cho vào ống nghiệm có chứa môi trường thích hợp cho tăng trưởng đối tượng vi sinh vật cần định lượng một thể tích xác định dung dịch mẫu nhiều nồng độ pha loãng liên tiếp + Ủ nhiệt độ và thời gian thích hợp + Dựa vào kết quả biểu kiến chứng minh tăng trưởng vi sinh vật cần kiểm định ống nghiệm (ghi nhận số lượng số lượng độ pha loãng) + Sử dụng số liệu dựa vào bảng Mac Crady, suy mật độ vi sinh vật trình bày dưới dạng số MPN/100ml hay số MPN/1g mẫu Bảng Mac Crady (hình ảnh) Các độ pha loãng dk chọn lựa cho lần lặp lại có một số lần dương tính và có một số lần âm tính Số lần dương tính ghi nhận và so sánh với bảng thống kê -> giá trị ước đoán số lượng vsv mẫu - Ưu điểm : cho phép định lượng mật độ vi sinh vật thấp thể tích mẫu lớn Link bổ sung nội dung: https://www.slideshare.net/kimqui91/173083723baigiangltphantichvisinhdhcd ... vi sinh vật mẫu nước tính và tình bày dưới dạng số có xác suất lớn nhất(mpn) lượng vi sinh vật có một đơn vị thể tích mẫu theo công thức :mpn = n.ln(n/n-x) Vi sinh môi trường – Nhóm. .. Cách tiến hành: 2- Phương pháp đếm khuẩn lạc Vi sinh môi trường – Nhóm Khác với phương pháp đếm trực tiếp, phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép xác định số lượng tế bào vi sinh vật sống hiện...Vi sinh môi trường – Nhóm CHỦ ĐỀ: Phân biệt và giải thích phương pháp Phân tích ĐỊNH TÍNH và ĐỊNH LƯỢNG vi sinh vật một mẫu môi trường (đất, nước) A/ Phương