VI SINH MT NHÓM 6

Khái quát chung : Phương pháp định tính là phương pháp xác định có vi sinh vật trong mẫu hay không..  Phương pháp định lượng là phương pháp xác định số lượng vi sinh vật trong mẫu đó..

Chào mừng thầy và các bạn đã đến với

bài thuyết trình của nhóm 6

1. Nguyễn Ngọc Như Ý

2. Bùi Thị Phương Thảo

3. Dương Công Thành

4. Nguyễn Trung Bảo

5. Phan Huỳnh Phúc

6. Nguyễn Võ Triệu Mẫn

THÀNH VIÊN

Phân biệt và giải thích phương pháp định tính và định lượng vi sinh vật

NỘI DUNG CHÍNH

I Khái quát chung:

II Phân tích từng phương pháp:

A Phương pháp định tính

B Phương pháp định lượng

III Nhận xét

IV Kết luận

I Khái quát chung :

 Phương pháp định tính là phương pháp xác định có vi sinh vật trong mẫu hay không

 Phương pháp định lượng là phương pháp xác định số lượng vi sinh vật trong mẫu đó

II Phân tích:

A PHÂN TÍCH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH

-Mẫu

-BGBL

-EMB

-Nghiệm pháp IMViC phù hợp

Vi khuẩn E.coli

-Tăng sinh: +Môi trường sử dụng: canh BGBL

+Ủ ở nhiệt độ 44oC trong 24h.

+Chọn những ống sinh hơi  cấy phân lập.

-Phân lập: + Môi trường sử dụng: EMB agar.

+Cấy chuyển từ BGBL  EMB, ủ ở nhiệt độ 37oC trong 24h.

+Chọn những khuẩn lạc đặc trưng và cấy chuyển sang môi trường TSA.

-Thử nghiệm IMViC

-Kết luận: Có vi khuẩn E.coli hay không.

 Các bước tiến hành:

Chuẩn bị mẫu  Tăng sinh Phân lập  Khẳng định

1.Phương pháp đếm trực tiếp

 Là phương pháp định lượng dựa trên sự quan sát và đếm trực tiếp

số lượng tế bào vi sinh vật bằng kính hiển vi và buồng đếm.

 Đối tượng: mật độ vsv đơn bào có kích thước lớn như nấm men,

men, tảo… có thể được xác định trực tiếp bằng buồng đếm trên

kính hiển vi.

Có 3 phương pháp đếm trực tiếp:

 Đếm trực tiếp bằng kính hiển vi hùynh quang

 Đếm trực tiếp bằng buồng đếm breed

 Đếm trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu

B PHÂN TÍCH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

 Ưu điểm: cho phép xác định nhanh chóng số lượng vi sinh vật có trong mẫu.

 Nhược điểm:

• Không phân biệt được tế bào sống và chết trong mẫu

• Không phân biệt được các tế bào vi sinh vật và vật thể

• Hạn chế đối với huyền phù có mật độ thấp do lượng dung dịch đem đếm nhỏ

• Độ chính xác không cao, dễ nhầm lẫn

• Không thích hợp mẫu có mật độ vi sinh thấp

 Cho phép xác định số lượng tế bào vi sinh vật còn sống hiện diện trong mẫu.

 Tế bào sống là tế bào có khả năng phân chia tạo thành khuẩn lạc trên môi trường chọn lọc

 Do vậy phương pháp này có tên gọi là phương pháp đếm khuẩn lạc

2.Phương pháp đếm KHUẨN LẠC

Cách tiến hành

3.Phương pháp đếm KHUẨN LẠC trên màng lọc

 Phương pháp này là sự kết hợp của các phương pháp lọc vô trùng và

phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa petri Màng lọc có kích thước

lỗ là 0,45pm hoặc 0,2pm được chế tạo từ các nguyên liệu là sợi thủy

tinh siêu mánh, sợi polypropylene, thường được cung cấp trong

trạng thái vô trùng.

 Ưu điểm: xác định được mật độ vsv cụ thể trong một thể tích mẫu

lớn: 10ml; 100ml;…

 Nhược điểm: không thích hợp cho việc phân tích các mẫu thực

phẩm rắn.

Cách tiến hành

4 Phương pháp đo độ đục

Ngoài các phương pháp nêu trên, mật độ vi sinh vật có thể đươc xác định một cách gián tiếp thông qua đo độ đục khi một pha lỏng có chứa nhiều phần tử không tan thì sẽ hình thành một hệ huyền phù và có độ đục bởi các phần tử hiện diện trong môi trường lỏng cản ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới…

ƯU NHƯỢC ĐIỂM:

- Ưu điểm: Phương pháp này cho kết quả nhanh thường được ứng dụng trong theo dõi hoặc nghiên cứu đặc trung tăng trưởng của các chủng vi sinh vật trong phòng thí nghiệm hoặc trong sản xuất.

- Nhược điểm: không thích hợp cho ứng dụng trong kiểm nghiệm vi sinh vật.

5.Phương pháp MPN

 Phương pháp dựa trên nguyên tắc xác suất thống kê sự phân bố vsv trong các độ pha loãng khác nhau của mẫu Hay có thể nói

là phương pháp đánh giá số lượng vi sinh vật có xác xuất lớn nhất hiện diện trên một đơn vị thể tích.

 Phương pháp này có thể dùng để định lượng mọi nhóm vi sinh vật có thể được nuôi cấy trong môi trường lỏng chọn lọc và cho kết quả biểu kiến thích hợp.

 Quy trình thực hiện phương pháp này như sau:

-Cho vào các ống nghiệm có chứa các môi trường thích hợp cho sự tăng trưởng của đối tượng vi sinh vật cần định lượng một thể tích xác định dung dịch mẫu ở nhiều nồng độ pha loãng liên tiếp.

-Ủ ở nhiệt độ và thời gian thích hợp.

-Dựa vào kết quả biểu kiến chứng minh sự tăng trưởng của vi sinh vật

cần kiểm định trong từng ống nghiệm (ghi nhận số lượng số lượng ở

từng độ pha loãng).

-Sử dụng số liệu dựa vào bảng Mac Crady, suy ra mật độ vi sinh vật

được trình bày dưới dạng số MPN/100ml hay số MPN/1g mẫu.

III Nhận xét:

 Phương pháp định tính là 1 phương pháp cực kì quan trọng, nhất là trong lĩnh vực y học như: xét nghiệm, điều chế kháng sinh

 Phương pháp định lượng thì khá phổ biến trong thí nghiệm, kiểm nghiệm chất lượng trong thực phẩm hoặc môi trường…

IV Kết luận

 Ta có thể áp dụng phương pháp định tính và định lượng để ứng dụng triệt để vào các nghiên cứu, giúp dễ dàng nhận biết được các nguyên nhân gây bệnh, các biến đổi của môi trường, hoặc là sự tích tụ độc tố trong thực phẩm, phát triển thêm các loại vắc xin phòng bệnh…

 Cả 2 phương pháp định lượng và định tính đều thiết thực và quan trọng đối với đời sống con người hiện nay

Cảm ơn thầy và các bạn đã

chú ý lắng nghe!!