Tài liệu Vi sinh học phần 6 docx

Bài 10 Nấm men A. PHÂN LOẠI NẤM MEN B - CÁC PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM DÙNG ĐỂ ĐỊNH TÊN NẤM MEN 1. Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thƣớc 2. Nhuộm màu tế bào nấm men: - Thuốc nhuộm soudan III: - Thuốc nhuộm đen Soudan B (theo Burdon): - Thuốc nhuộm safranin: - Dung dịch nhuộm nhân tế bào: - Dung dịch lục malachit: 3. Quan sát quá trình nảy chồi của tế bào nấm men - Môi trƣờng mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton: 4. Quan sát khuẩn ty giả: - Môi trƣờng khoai tây - glucoza: - Môi trƣờng ngô: 5. Quan sát bào tử bắn (Ballistoconidium, Ballistospore): - Môi trƣờng bột ngô: 6. Quan sát bào tử túi (ascospore): a. Môi trƣờng miếng thạch cao: b. Môi trƣờng miếng thạch cao cải tiến: c. Môi trƣờng Gorodkowa (1908) d. Xử lý với tia tử ngoại: e. Môi trƣờng thạch nƣớc f. Môi trƣờng Amano (1950) g. Môi trƣờng dịch tinh bột khoai tây 0,5% (Almeida và Lacaza) h. Môi trƣờng Kleyn: 6. Quan sát đặc tính nuôi cấy 7. Thí nghiệm xác định khả năng lên men các loại đƣờng 8. Thí nghiệm xác định khả năng đồng hoá các hợp chất cacbon khác nhau: 8.1. Phƣơng pháp đánh giá khả năng sinh trƣởng trên môi trƣờng dịch thể: 8.2. Sinh trƣởng trên môi trƣờng thạch 8.3. Phƣơng pháp dùng con dấu 9. Thí nghiệm xác định khả năng đồng hoá các nguồn nitơ 10. Thí nghiệm xác định khả năng hình thành hợp chất loại tinh bột: 11. Thí nghiệm xác định nhu cầu vitamin cho sinh trƣởng của nấm men: 12. Đánh giá sự sinh trƣởng trên môi trƣờng có nồng độ đƣờng cao 13. Đánh giá sự phát triển khi có mặt Cycloheximit 14. Xác định hoạt tính phân giải Urea (hay hoạt tính Ureaza) 15. Thí nghiệm làm đổi màu Diazonium blue B (DBB test) 1. Môi trƣờng Acetat (g/l) (M.C. Clary et al., 1959) 2. Môi trƣờng thạch Gorodkowa (Dodder và Kreger - van Rij, 1952) (g/l) 3. Môi trƣờng cao ngô (Lodder và Kreger - van Rij, 1952) 4. Môi trƣờng thạch V-8 (Wicketam và cộng sự, 1946) 5. Môi trƣờng pepton - cao men - glucoza (Vander Walt và Codder, 1970) 6. Thành phần môi trƣờng tổng hợp (tinh khiết về thành phần hoá học) 7. Môi trƣờng quan sát hình thái tế bào nấm men: 8. Môi trƣờng nitơ cơ sở: 9. Môi trƣờng carbon cơ sở: 10. Môi trƣờng không có vitamin A. PHÂN LOẠI NẤM MEN Thuật ngữ Nấm men (yeast, levure) chỉ là tên chung để chỉ nhóm vi nấm thƣờng có cấu tạo đơn bào và thƣờng sinh sôi nảy nở bằng phƣơng pháp nẩy chồi (budding). Nấm men không thuộc về một taxon phân loại nào nhất định, chúng có thể thuộc ngành Nấm túi (Ascomycota) hoặc ngành Nấm đảm (Basidiomycota). Nảy chồi là cách sinh sản vô tính điển hình của nấm men. Khi đó thành tế bào mở ra để tạo ra một chồi (bud). Chồi phát triển thành tế bào con và có thể tách khỏi tế bào mẹ ngay từ khi còn nhỏ hoặc cũng có thể vẫn không tách ra ngay cả khi lớn bằng tế bào mẹ. Nhiều khi nhiều thế hệ vẫn dính vào một tế bào đầu tiên nẩy chồi và tạo thành một cành nhiều nhánh tế bào trong giống nhƣ cây xƣơng rồng. Chồi có thể mọc ra theo bất kỳ hƣớng nào (nẩy chồi đa cực- multilateral budding) hoặc chỉ nẩy chồi ở hai cực (nẩy chồi theo hai cực- Bipolar budding) hoặc chỉ nảy chồi ở một cực nhất định (nẩy chồi theo một cực – monopolar budding). Nấm men còn có hình thức sinh sản phân cắt nhƣ vi khuẩn. Có thể hình thành một hay vài vách ngăn để phân cắt tế bào mẹ thành những tế bào phân cắt (fission cells). Điển hình cho kiểu phân cắt này là các nấm men thuộc chi Schizosaccharomyces. Ở một số nấm men thuộc ngành Nấm đảm, có thể sinh ra dạng bào tử có cuống nhỏ (sterigmatoconidia) hoặc bào tử bắn (ballistoconidia hay ballistospore). Bào tử có cuống nhỏ thƣờng gặp ở các chi nấm men Fellomyces, Kockovaella và Sterigmatomyces, khi đó chồi sinh ra trên một nhánh nhỏ và tách ra khi nhánh bị gẫy. Bào tử bắn đƣợc sinh ra trên một gai nhọn của tế bào nấm men và bị bắn ra phí đối diện khi thành thục. Nếu cấy các nấm men sinh bào tử bắn thành hình zich zắc trên thạch nghiêng hoặc trên đĩa Petri thì sau một thời gian nuôi cấy sẽ thấy xuất hiện trên thành ống nghiệm hoặc nắp đĩa Petri có một hình zích zắc khác đƣợc hình thành bởi các bào tử bắn lên. Bào tử bắn là đặc điểm của nấm men thuộc các chi Bensingtonia, Bullera, Deoszegia, Kockovaella, Sporobolomyces Một số nấm men còn có một hình thức sinh sản vô tính nữa, đó là việc hình thành các bào tử đốt (arthroconidia hay arthrospore). Khi đó sẽ hình thành các vách ngăn ở đầu các nấm men dạng sợi, sau đó tách ra thành các bào tử đốt. Loại này gặp ở các nấm men thuộc cả hai ngành: Nấm túi và Nấm đảm. Thƣờng gặp nhất là ở các chi nấm men Galactomyces, Dipodascus (dạng vô tính là Geotrichum) và Trichosporon. Nấm men còn có thể tạo thành dạng tản (thallus) dƣới dạng khuẩn ty (sợi nấm- hyphae) hay khuẩn ty giả (giả sợi nấm – pseudohyphae). Dạng sinh sản hữu tính ở nấm men là dạng các bào tử túi (ascospore) đƣợc sinh ra từ các túi (asci). Có thể xảy ra sự tiếp hợp (conjugation) giữa hai tế bào nấm men tách rời hoặc giữa tế bào mẹ và chồi. Còn có cả sự biến nạp trực tiếp trong 1 tế bào sinh dƣỡng (vegetative cell), tế bào này biến thành túi không qua tiếp hợp (unconjugated ascus). Thƣờng trong mỗi túi có 4 hay đôi khi có 8 bào tử túi. Trong một số trƣờng hợp lại chỉ có 1-2 bào tử túi. Bào tử túi ở chi Saccharomyces có dạng hình cầu, hình bầu dục; ở chi Hanseniaspora và loài Hansenula anomala có dạng hình mũ ; ở loài Hansenula saturnus bào tử túi có dạng quả xoài giữa có vành đai nhƣ dạng Sao Thổ. Một số bào tử túi có dạng kéo dài hay hình xoắn…Bề mặt bào tử túi có thể nhẵn nhụi, có thể xù xì hoặc có gai… Bào tử màng dày (hay bào tử áo- chlamydospore) là dạng bào tử giúp nấm men vƣợt qua đƣợc điều kiện khó khăn của ngoại cảnh, chứ không phải là hình thức sinh sản. Một số nấm men còn có thể sinh vỏ nhày. Bên cạnh rất nhiều nấm men có ích nhƣ là các loại nấm men dùng để sản xuất rƣợu trắng, rƣợu vang, bia, làm nở bột mỳ, tạo sinh khối giàu protein và vitamin, sản xuất enzym, sản xuất acid citric từ khí thiên nhiên, sản xuất riboflavin (vitamin B2)… còn có những loại nấm men có thể gây bệnh. N= nhân; M= ty thể; Va= không bào; ER= mạng lƣới nội chất; Ves= bào nang Bào tử bắn Phân cắt tế bào Nảy chồi Bào tử túi Bào tử màng dày Bào tử đốt Vỏ nhày ở nấm men Một vài loài nấm men gây bệnh ở người: Candida albicans Cryptococcus neoformans Để phân loại nấm men ngƣời ta phải tiến hành nghiên cứu các đặc điểm sau đây: *Đặc điểm hình thái: tế bào, khuẩn lạc, kiểu nẩy chồi, các dạng bào tử vô tính và hữu tính, khuẩn ty và khuẩn ty giả *Đặc điểm sinh lý và sinh hoá: - Lên men 13 loại đƣờng - Đồng hóa 46 nguồn carbon. Có thể dùng bộ kít chẩn đoán nhanh ID 32C (Bio Mérieux SA, Marchy-l‟Étoile…) - Tính chống chịu với 0,01% hoặc 0,1% cycloheximide (có thể bao gồm trong bộ kit ID 32C). - Đồng hoá 6 nguồn nitơ: nitrate, nitrite, ethylnamine hydrochloride, L-lyzine, cadaverine dihydrochloride, creatine - Sinh trƣởng khi thiếu hụt một số vitamin (myo-Inositol, calcium pantothenate, biotin, thiamine hydrochloride, pyridoxin hydrochloride, niacin, folic acid, p-aminobenzoic acid. - Sinh trƣởng tại các nhiệt độ khác nhau: 25, 30, 35, 37, 42 0 C. - Tạo thành tinh bột. - Sản sinh acid từ glucoz - Thủy phân Urê - Phân giải Arbutin - Phân giải lipid - Năng lực sản sinh sắc tố - Sinh trƣởng trên môi trƣờng chứa 50% và 60% glucoza - Hóa lỏng gelatine -Phản ứng với Diazonium Blue B - Phát triển trên môi trƣờng chứa acid acetic 1% Để xác định loài mới còn cần phân tích thành phần acid béo của tế bào, thành phần đƣờng trong tế bào, phân tích hệ coenzyme Q, tỷ lệ G+C, đặc tính huyết thanh miễn dịch, giải trình tự ADN và lai ADN B - CÁC PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM DÙNG ĐỂ ĐỊNH TÊN NẤM MEN 1. Quan sát hình thái tế bào nấm men và đo kích thƣớc Khi xác định hình thái và kích thƣớc tế bào nấm men ngƣời ta thƣờng nuôi cấy nấm men trong môi trƣờng thạch - mạch nha và môi trƣờng mạch nha dịch thể. Nếu sử dụng các môi trƣờng khác thì hình thái và kích thƣớc tế bào nấm men có thể thay đổi, không phù hợp với hình thái và kích thƣớc tiêu chuẩn đã đƣợc ghi trong bảng phân loại. - Môi trường mạch nha: Lấy lúa đại mạch đã ủ cho nảy mầm (loại nhập khẩu dùng để làm bia), đem phơi khô rồi xay nhỏ thành bột. Cân 1kg bột này, thêm 3 lít nƣớc, giữ ở 60 0 C để đƣờng hoá cho đến khi hết tinh bột (thử với dịch Lugol không thấy có màu xanh lam). Lọc lấy dịch trong có thể thêm 3 lòng trắng trứng rồi trộn đều, đun sôi rồi lọc lấy dịch trong. Điều chỉnh bằng nƣớc để có nồng độ đƣờng đạt 6 o Baume. Phân vào các dụng cụ thuỷ tinh đã khử trùng. Nếu làm môi trƣờng đặc thì thêm 2% thạch. Tốt nhất là dùng mầm đại mạch, nếu không thì có thể dùng mầm lúa. Nồng độ thích hợp để nuôi cấy nấm men dùng khi phân loại là 5,7 o Baume. Có tài liệu lại sử dụng nồng độ 5-8 0 Baume. Nấm men đƣợc nuôi cấy trong các ống nghiệm thạch nghiêng hoặc các ống nghiệm đựng 3 ml môi trƣờng dịch thể. Nuôi cấy ở 25-30 0 C trong 3 ngày, sau đó lấy ra làm tiêu bản và quan sát. Muốn đo kích thƣớc tế bào nấm men ngƣời ta thƣờng sử dụng trắc vi thị kính). Số tế bào nấm men đƣợc đo không ít hơn 20. Chú ý là phải đo các tế bào trƣởng thành chứ không đo các chồi mới nảy sinh. Tế bào nấm men có hình thái và kích thƣớc khác nhau tuỳ loài, tuỳ chi. Chúng có thể có hình cầu, hình bầu dục, hình trứng, hình quả chanh châu Âu, hình ống v.v Khi quan sát tế bào nấm men dƣới kính hiển vi có thể phân biệt đƣợc thành tế bào, tế bào chất, không bào (vacuole) và các hạt dị nhiễm (metachromatic granules). Thành tế bào nấm men thẫm hơn so với nguyên sinh chất, còn không bào thƣờng có hình tròn, màu nhạt hơn. Các hạt dị nhiễm thƣờng bắt ánh sáng mạnh hơn, chúng lắc lƣ trong nguyên sinh chất theo chuyển động Brown. Kích thƣớc của tế bào nấm men khác nhau rất nhiều tuỳ loài thuỳ chi, tuỳ điều kiện sinh trƣởng và có thể thay đổi trong khoảng 1-5 x 5-30àm hay có khi dài hơn nữa. Kích thƣớc tế bào của các loại nấm men thông thƣờng vào khoảng 4-5àm. 2. Nhuộm màu tế bào nấm men: Muốn quan sát tế bào nấm men một cách tỷ mỷ hơn ngƣời ta thƣờng sử dụng các loại thuốc nhuộm để nhuộm cả tế bào hoặc một số phần tế bào nấm men. Có thể dùng một trong những loại dung dịch thuốc nhuộm sau đây: - Dung dịch Lugol: Iot 2g Iodua Kali 4g Nƣớc cất 100ml (Nghiền nhỏ I và KI trong cối sứ rồi sau đó dùng nƣớc hoà tan dần). - Dung dịch xanh methylen (methylene blue) Xanh methylen 1g Nƣớc cất 1000ml (Có thể pha thành dung dịch 1% sau đó lọc rồi dùng nƣớc cất pha loãng thêm 10 lần nữa). - Dung dịch fuchsin cacbolic: Fuchsin kiềm (basic fuchsin) 0,1g Cồn 90 0 10ml Dung dịch phenol 3% 90ml (Hoà tan fuchsin trong cồn, sau đó trộn đều vào dung dịch phenol). Có thể dùng que cấy, phết dịch nuôi cấy nấm men thành một lớp mỏng trên phiến kính sau đó làm khô, cố định và nhuộm đơn bằng xanh methylen hay fuchsin cacbolic nhƣ khi nhuộm tiêu bản vi khuẩn. Thƣờng ngƣời ta dùng lamelle (lá kính mỏng) để quan sát tế bào nấm men. Lấy một phiến kính sạch nhỏ lên đó một giọt thuốc nhuộm (xanh methylen chẳng hạn). Giọt thuốc nhuộm không nên to quá (về sau sẽ tràn khỏi lamelle), cũng không nên nhỏ quá (tạo thành nhiều bọt khí khi đậy lamelle). Lấy một ít nấm men đã nuôi cấy 2-3 ngày hoà vào giọt thuốc nhuộm. Đặt một cạnh của lamelle sát vào phía ngoài giọt mẫu rồi hạ từ từ lamelle xuống cho giọt mẫu tràn đều khắp lamelle. Nếu tràn ra ngoài thì dùng giấy lọc thấm bớt. Soi ở vật kính nhỏ trƣớc, sau đó chuyển sang vật kính lớn. Có thể căn cứ vào mức độ bắt màu đậm nhạt để phân biệt đƣợc tế bào sống và tế bào chết. Muốn quan sát các hạt glycogen trong tế bào nấm men thì nhuộm bằng dung dịch Lugol. Tế bào sẽ có màu vàng nhạt còn các hạt glicogen có màu đỏ nâu. Muốn quan sát các giọt mỡ trong tế bào nấm men có thể làm tiêu bản nhƣ sau: Rỏ một giọt formalin lên phiến kính, dùng que cấy lấy một ít nấm men đã nuôi cấy 48- 72 giờ hoà vào giọt formalin. Để yên 5 phút sau đó thêm một giọt dung dịch thuốc nhuộm xanh methylen, lại thêm một giọt thuốc nhuộm soudan III. Đặt lamelle dƣới kính hiển vi rồi quan sát ta sẽ thấy nguyên sinh chất của tế bào nấm men bắt màu lam nhạt, không bào không bắt màu còn các giọt mỡ có màu đỏ hồng. - Thuốc nhuộm soudan III: Soudan III 0,05g Cồn 90% 100ml Cũng có thể nhuộm các giọt mỡ bằng phƣơng pháp sau đây: Lấy thuốc nhuộm đen Soudan B (Soudan black B) cho vào ống nghiệm. Dùng que cấy lấy một ít nấm men hoà vào dịch thuốc nhuộm này. Giữ 20 phút. Lấy khoảng 2 vòng que cấy dịch thuốc nhuộm có nấm men phết lên phiến kính. Làm khô tự nhiên. Nhuộm tiêu bản trong 30 giây bằng dịch thuốc nhuộm safranin. Rửa nƣớc, đợi khô rồi soi kính. Nguyên sinh chất của tế bào nấm men sẽ có màu đỏ nhạt còn các giọt mỡ có màu đen lam. - Thuốc nhuộm đen Soudan B (theo Burdon): Soudan black B 0,3g Cồn 70% 100ml (Trộn đều, để 24 giờ rồi mới sử dụng. Dùng trong vòng một tháng). - Thuốc nhuộm safranin: Dịch safranin 2,5% (trong cồn 95%) 10ml Nƣớc cất 100ml Muốn nhuộm nhân của tế bào nấm men có thể sử dụng phƣơng pháp sau đây: Lấy một giọt nƣớc đặt lên 1 phiến kính. Dùng que cấy lấy một ít nấm men hoà vào giọt nƣớc đó rồi dàn thành vết mỏng. Làm khô tự nhiên. Thêm vài giọt dung dịch picroformol, giữ vài phút sau đó rửa bằng cồn 70%. Ngâm tiêu bản vào trong dung dịch FeNH 4 (SO 4 ).12H 2 O 3% trong 4-7 giờ. Lấy tiêu bản ra dùng nƣớc rửa sạch sau đó lại ngâm vào dịch thuốc nhuộm hematoxilin 10% trong 24 giờ. Lấy ra rửa nƣớc rồi lại ngâm vào dịch FeNH 4 (SO 4 ).12H 2 O cho đến khi vừa mất màu thì lấy ra rửa sạch bằng nƣớc, làm khô rồi soi kính. Nguyên sinh chất của tế bào nấm men có màu tro còn nhân tế bào có màu đen. - Dung dịch nhuộm nhân tế bào: + Dung dịch picroformol: Dung dịch acid picric bão hoà 75 phần Axetit acetic glacial 5 phần Dung dịch fomol loãng 20 phần + Dung dịch ngâm FeNH 4 (SO 4 ) 2 .12H 2 O FeNH 4 (SO 4 ) 2 .12H 2 O 3g Nƣớc 100ml + Dung dịch thuốc nhuộm hematoxilin Hematoxilin 1g Cồn 10ml Nƣớc 90ml Hoà tan hematoxilin trong cồn, sau đó thêm nƣớc, đậy nút bông rồi để 1 tháng sau mới sử dụng. Để quan sát tế bào nấm men có thể dùng dung dịch nigrozin 5%. Khi đó tế bào sẽ không bắt màu, có thể phân biệt rõ trên một nền màu lam đen. Để quan sát bào tử túi (tránh lầm với các không bào) có thể sử dụng một số các phƣơng pháp nhuộm bào tử đã đƣợc giới thiệu trong chƣơng IV (phƣơng pháp nghiên cứu vi sinh vật học tập 1 NXB KHKT 1971). Cũng có thể nhuộm bào tử túi bằng phƣơng pháp sau đây: Rỏ 1 giọt nƣớc lên phiến kính. Dùng que cấy lấy một ít nấm men trộn vào giọt nƣớc, dàn thành vết mỏng, để khô tự nhiên. Cố định trên ngọn lửa bằng đèn cồn, nhuộm bằng dung dịch lục malachit. Nhuộm 2 phút, thƣờng xuyên hơ trên ngọn lửa cho bốc hơi (không đƣợc đun sôi). Rửa nƣớc nhẹ, nhuộm thêm 30 giây bằng dung dịch safranin 0,5% trong nƣớc. Nang bào tử sẽ bắt màu xanh lục còn tế bào dinh dƣỡng có màu hồng. - Dung dịch lục malachit: Lục malachit (malachite green) 1g Nƣớc 100ml (không đun nóng) 3. Quan sát quá trình nảy chồi của tế bào nấm men (sử dụng cho tế bào nấm men dinh dƣỡng không có dạng sợi - non filamelletous vegetative cells). Cấy một vòng que cấy tế bào nấm men một ngày tuổi vào bình nón loại 100ml chứa 30ml môi trƣờng dịch thể (môi trƣờng nƣớc chiết mạch nha, môi trƣờng cao nấm men-pepton- glucoza hay môi trƣờng mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton). - Môi trường mạch nha - cao nấm men - glucoza - pepton: Cao mạch nha (malt extract) 3g Cao nấm men (yeast extract) 3g Glucoza 10g Pepton 5g Nƣớc 1000ml Nuôi cấy trong bình nón ở 25-28 0 C sau hai đến ba ngày tiến hành lấy mẫu quan sát. Khi quan sát dƣới kính hiển vi cần phân biệt đƣợc là nấm men sinh sản theo cách nảy chồi hay phân cắt hoặc cả hai. - Nếu nảy chồi thì chồi xuất hiện ở đâu? ở cả hai đầu (hai cực) hay ở vị trí bất kỳ nào trên tế bào? Số lƣợng chồi trên tế bào mẹ? - Chồi con sau khi phát triển có rời khỏi tế bào mẹ hay không? - Dạng và kích thƣớc của tế bào? Chú ý: phƣơng pháp này phải dùng với các môi trƣờng xác định và ở pha sinh trƣởng logarit của tế bào. 4. Quan sát khuẩn ty giả: Có một số nấm men khi phát triển trong những môi trƣờng nuôi cấy lâu hay trong những điều kiện thiếu oxy có thể tạo thành những tế bào dài, xếp nối tiếp nhau, đƣợc gọi là khuẩn ty (mycelium). Ngƣời ta phân biệt hai loại khuẩn ty: khuẩn ty giả và khuẩn ty thật. Khuẩn ty thật là các tế bào dạng sợi có vách ngăn, khuẩn ty giả là các tế bào dạng sợi không có vách ngăn. Việc tạo thành khuẩn ty là một đặc điểm quan trọng trong phân loại nấm men. Cũng có một ít loại nấm men khi phát triển bình thƣờng cũng tạo thành khuẩn ty giả (pseudomycelium). Muốn kiểm tra việc tạo thành khuẩn ty ngƣời ta thƣờng nuôi cấy nấm men trên môi trƣờng pepton - glucoza, môi trƣờng khoai tây - glucoza hay môi trƣờng ngô. - Môi trường thạch - pepton - glucoza: Pepton 10g Glucoza 20g Thạch 20g Nƣớc 1000ml - Môi trường khoai tây - glucoza: Nƣớc chiết khoai tây 10% 1000ml Glucoza 20g Thạch 20g Cách làm nƣớc chiết khoai tây: cân 100g khoai tây đã gọt vỏ, rửa sạch và thái nhỏ, thêm 300ml nƣớc, hấp ở áp lực 1at trong 1 giờ sau đó bổ sung nƣớc cho đủ 1000ml. - Môi trường ngô: cân 12,5g ngô, thêm 300ml nƣớc đun cách thuỷ 60 0 C trong 1 giờ, lọc lấy nƣớc trong. Thêm nƣớc cho đủ 300ml. Sau đó thêm 3,8g thạch. Hấp ở áp lực 1at trong 15 phút. Lọc nóng qua bông thấm nƣớc rồi phân vào các ống nghiệm và khử trùng ở áp lực 1at trong 15 phút. Đổ môi trƣờng vào hộp Petri. Dùng que cấy, cấy nấm men thành 3 cặp đƣờng song song ngắn, ở 3 chỗ. Dùng panh lấy lá kính mỏng (thƣờng xuyên ngâm trong còn 70%) đốt nhẹ hết cồn, để nguội một chút rồi cẩn thận đặt nhẹ nhàng lên vết cấy. Phải cấy thế nào để hai đƣờng cấy song song ở mỗi chỗ có chiều ngang nằm gọn giữa lá kính mỏng, hai đầu dài hơn lá kính mỏng một chút (để sau này dễ quan sát). Cần chú ý là bề mặt thạch phải thật khô, khi đậy lá kính mỏng, phải tránh bọt khí, đậy xong phải tránh di chuyển làm xô lệch lá kính mỏng. Cũng có thể tiến hành theo phƣơng pháp sau đây: đổ môi trƣờng vào một hộp Petri, đợi nguội 60 0 C, dùng panh lấy các phiến kính (lamelle) đặt nhẹ vào để sao cho có một lớp môi [...]... năng sinh tinh bột 11 Thí nghiệm xác định nhu cầu vitamin cho sinh trƣởng của nấm men: Các nấm men khác nhau có nhu cầu khác nhau về vitamin để sinh trƣởng Các thí nghiệm ở đây nhằm kiểm tra sự sinh trƣởng của chủng nấm men vắng mặt tất cả hay từng loại vitamin khác nhau Cách tiến hành nhƣ sau: Thí nghiệm đƣợc tiến hành trên môi trƣờng dịch thể Môi trƣờng có đầy đủ các thành phần dinh dƣỡng trừ vitamin... ứng DBB 3 :- :- Ascoidea (4 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Thường có tế bào nảy chồi và khuẩn ty giả, khuẩn ty thật, bào tử chồi có thể được sinh ra trên các gai hoặc không Sinh sản hữu tính: Các túi (asci) sinh chậm hoặc tận cùng của khuẩn ty thật Túi có hình elip hay hình kim Túi mới được hình thành bên trong túi cũ Mỗi túi có 16- 160 bào tử túi hình mũ hay elip Đặc điểm sinh lý: Lên men :- Đồng hoá nitrat... gelatin 6 :- Citeromyces (1 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Tế bào nảy chồi đa cực, không có khuẩn ty thật và khuẩn ty giả Sinh sản hữu tính: Túi có một bào tử (hiếm khi 2), bào tử túi hình cầu, xù xì Đặc điểm sinh lý: Lên men Đồng hoá nitrat :+ :+ Màng trên môi trường dịch thể : Cơ chất giống tinh bột Đồng hóa inositol :- Hoạt hoá Ureaza :- Hoá lỏng gelatin :- Phản ứng DBB 7 :- :- Clavispora (2 loài) Sinh. .. Phialoascus Redhead & Malloch Là chi nấm ký sinh Sợi trong suốt , phân nhánh Túi dạng đơn, bào tử túi trong suốt, 1 tế bào 15.4 Trichomonacus H.S Jackson Là chi nấm ký sinh Túi nằm trong mô của vật chủ, được sinh ra từ cuối của sợi chưa phân hoá  16 Eremothecium (5 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Nảy chồi đa cực Có khuẩn ty thật Có hoặc không xuất hiện khuẩn ty giả Sinh sản hữu tính: Các túi không tiếp hợp... loài) Hoạt hoá Ureaza :- Hóa lỏng gelatin : -/+ Phản ứng DBB :- 27 Protomyces (6 loài) Sinh sản sinh dưỡng: vật mà nó ký sinh Tế bào nảy đa phần ở cực, Khuẩn ty thật được tạo thành trong các mô thực Sinh sản hữu tính: Túi bào tử cũng tạo bên trong mô thực vật chủ, chứa hàng trăm các bào tử túi có khả năng bắn ra mạnh mẽ Đặc điểm sinh lý: Lên men Đồng hoá nitrat :: +/- Màng trên môi trường dịch thể : +/Cơ... 1-4 bào tử túi dạng mũ hoặc Đặc điểm sinh lý: Lên men Đồng hoá nitrat :+ : +/- Màng trên môi trường dịch thể : +/Cơ chất giống tinh bột :- Đồng hóa inositol :- Hoạt hoá Ureaza :- Phản ứng DBB :- Sinh axit axetic hiếu khí từ D-glucoza Sinh trưởng chậm , vòng đời ngắn 12 Dipodascopsis (2 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Có thể có tế bào này chồi, chỉ có khuẩn ty thật Sinh sản hữu tính: hình kim hay trụ Mỗi... loài) Sinh sản sinh dưỡng: Các tế bào nảy chồi đa cực, có khuẩn ty giả, không có khuẩn ty thật Sinh sản hữu tính: Mỗi túi chứa 1-4 bào tử túi hình tròn, bề mặt có thể xù xì Đặc điểm sinh lý: Lên men :+ Đồng hoá nitrat :- Màng trên môi trường dịch thể : + Cơ chất giống tinh bột :- Đồng hóa inositol :- Hoạt hoá Ureaza :- Hóa lỏng gelatin : -/+ Phản ứng DBB :- 20 Kluyveromyces (15 loài) Sinh sản sinh dưỡng:... lỏng gelatin :- 14 Endomyces (1 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Không có khuẩn ty, có thể có các bào tử trần nảy chồi (blastoconidia) Sinh sản hữu tính: Túi có thể hình thành trên sợi lưỡng bội (có tiếp hợp) Túi hình gần cầu hay hình chuỳ Mỗi túi chứa 4 -6 bào tử túi hình mũ Đặc điểm sinh lý: Lên men Đồng hoá nitrat : +/:- Hoạt hoá Ureaza : Phản ứng DBB :- 15 Các chi nấm ký sinh giống Endomyces 15.1 Helicogonium... Pantotenat (Ca): Pyridoxin HCl: Riboflavin: Tiamin HCl: 2 mg 400 mg 200mg 400 mg Vi lƣợng H3BO3: 500 mg CuSO4.5H2O: 40 mg KI: 100 mg FeCl3.6H2O: 200 mg MnSO4.4H2O: 400 mg Na2MoO4.H2O: 200 mg ZnSO4.7H2O: 400 mg Muối khoáng KH2PO4: 850 mg K2HPO4: 150 mg MgSO4.7H2O: 500 mg NaCl: 100 mg CaCl2.6H2O: 100mg 7 Môi trường quan sát hình thái tế bào nấm men: Cũng có thể dùng môi trƣờng 6 nhƣng thêm 2% thạch (W/W) 8 Môi... Clavispora (2 loài) Sinh sản sinh dưỡng: thật Sinh sản hữu tính: Đặc điểm sinh lý: Tế bào này chồi đa cực, đôi khi có khuẩn ty giả Không có khuẩn ty Túi chứa 1-4 bào tử túi hình chuỳ Lên men Đồng hoá nitrat :+ :- Màng trên môi trường dịch thể : Cơ chất giống tinh bột :- Đồng hóa inositol :- Hoạt hoá Ureaza :- Hoá lỏng gelatin :- Phản ứng DBB 8 :- Coccidiascus (1 loài) Sinh sản sinh dưỡng: Tế bào hình cầu . sự, 19 46) 5. Môi trƣờng pepton - cao men - glucoza (Vander Walt và Codder, 1970) 6. Thành phần môi trƣờng tổng hợp (tinh khiết về thành phần hoá học) . năng sinh tinh bột. 11. Thí nghiệm xác định nhu cầu vitamin cho sinh trƣởng của nấm men: Các nấm men khác nhau có nhu cầu khác nhau về vitamin để sinh