buoc dau nghien cuu su tao dich treo te bao cay rau meo orthosiphon stamineus be

Nguy T ê Tú Trâm, Bùi Trang Vi _ IÊN C ÀO CÂY RÂU MÈO ORTHOSIPHON STAMINEUS BENTH NGUY Ê TÚ TRÂM *, BÙI TRANG VI ** TÓM T Mô s MS có 2,4-D s tu -D v AA Mô s có tr -D 1mg/L NAA mg/L Các mô s ì Orthosiphon stamineus Benth t ày ABSTRACT The study of cell suspension formation in Orthosiphon stamineus Benth Callus was obtained from the in vitro leaf cultured on MS medium of 2.4-D and combination 2.4-D with NAA The callus with friability and the highest fresh weight was obtained after weeks on the culture medium of 2.4-D mg/L and NAA mg/L and found on the leaf samples on MS medium supplemented with 2.4-D mg/L and NAA mg/L The callus was moved to the weaker MS medium of 2.4-D mg/L to maintenance the optimum growth condition for the formation of cell suspension of Orthosiphon stamineus Benth M Cây râu mèo (Orthosiphon stamineus Benth.) thu Châu Á m râu àm trà u có công d êm th às -Salleh Latiff, 2002) Flavonoid hi râu mèo, m tr kháng khu Zwaving, 1993) Cùng v h in vitro ên, k m h Trong báo này, trình bày k treo t thu nh òng t ùng làm v flavonoid ** thu nh Nguyên li 2.1 Nguyên li Lá c râu mèo in vitro tu (Murashige Skoog, 1962) * ên c CN, PGS TS, T Khoa h ng ên ên 123 S T _ 2.2 2.2.1 T Lá non a râu mè c o nh ng v vào môi tr ng MS có b -D riêng l às h -D (0,5; 1; 1,5 mg/L) v , v i 30 g/ ng, 7,5 g/l agar, pH 5,8 o Các m 500 ± 500 lux, Theo th i gian nuôi c y mô o, ánh o mô o a râu mèo, s tu n môi tr ng thích h p cho s o mô o Gi ày nuôi c nhu g Thí nghi 2.2.2 T Chuy t erlen 50 ml có ch D mg/L NAA mg/L hay MS có b ên máy l 000 ± 200 lux v Quan sát s ình thái c D treo t 2.2.3 àd 2,4-D mg/L v i 30 g/ Sau - tu 124 o òng/phút, C, d l o Warburg, C 2.2.4 X ý th ê K Program Scientific System) dùng cho Window phiên b ngh th ùng m K th 3.1 T Các m râu mèo in vitro ch òa t ình to ra, t mô s t hi s ng pH 5,8 ình SPSS (Statistical ên lo -D (0,5; ho ày nuôi c Nguy T ê Tú Trâm, Bùi Trang Vi _ s hóa nâu ch xu ên mô s k tu -D 0,5 mg/L có -D (0,5; ho àu vàng, tr mô s –6 ch B ình thành mô s hr tu k dùng làm nguyên li t g, 2,4-D ho cho s ình thành mô s ào, mô s làm ngu Gonzales, 1994; Hsia ài râu thân s k -D v Wai-Leng & Chan Lai-Keng, 2004) Nói chung, vi òi h s ày c phát tri g h Eurycoma longifolia BA (Singaram & Teo, 1994) M ên c nh râu mèo th ên -D 1,5 mg/L hay MS b -D mg/L NAA mg/L, mô s có tr l B S ài th Mô s MS + 2,4-D 0,5 mg/L 22,00 MS + 2,4-D mg/L 50,00 MS + 2,4-D 1,5 mg/L 76,66 MS + 2,4-D 0,5 mg/L 28,88 + mg/L NAA MS + 2,4-D mg/L + mg/L NAA 84,44 MS + 2,4-D 1,5 mg/L + mg/L NAA 58,88 (Các giá tr ình theo sau không m khác bi ê ) 1,73a 3,33c 3,33e 3,85b 1,92f 1,92d Mô s (%) 78,00 1,73f 50,00 3,33d 23,34 3,33b 71,12 3,85e 15,56 41,12 ùng m 1,92a 1,92c 125 S T _ B Tr Tr MS + 2,4-D 0,5 mg/L MS + 2,4-D mg/L MS + 2,4-D 1,5 mg/L MS + 2,4-D 0,5 mg/L + mg/L NAA MS + 2,4-D mg/L + NAA mg/L MS + 2,4-D 1,5 mg/L + NAA mg/L (Các giá tr khác bi ình theo sau không m ê ) cm Mô s 0,04a 015a 0,13c 0,05a 0,06c 0,03b m cm mèo in Mô s vitro 2,4-D 0,5 mg/L NAA mg/L 2,4-D mg/L Ngu Quan sát lát c ùng gân t òa t th s nhu mô g phân chia theo t nhu mô Hi x -D (0,5; ho chia t b nhu mô t nhu mô v n xa vùng t m ùng v nhu mô libe Chính v dày lên sau tu -D riêng l ác v ti ày, s b 126 2,16 2,31 2,71 2,25 2,76 2,53 ùng èo in ên s i môi ùng Trong nhu mô g ùng Nguy T ê Tú Trâm, Bùi Trang Vi _ t nhu mô libe phân chia m m nhu mô v ùng nhu mô libe Quan sát b ùng v 50 µm 50 µm Lát c ùng gân 2,4-D mg/L NAA mg/L 3.2 T Vi s nuôi c x Lát c ùng gân sau ngày nuôi c MS v -D mg/L NAA mg/L -D mg/L ên máy l ãt ên m ày mô s t môi ên, c ch ày, s c ày có th õ sau tu th t b àr õ nhân t ch Sau tu phân chia m có s kh ành c huy l ên c ành ph ình thái cho th giai ày v nh vách m õ nhân t ch Trên c x ày th àb ày th c ày th ày th ch d ng ã c (Mai Tr Ti V ùng m d 2,4ào d MS có b -D mg/L k 127 S T _ Ti l - ày, nh t ày 9; - ày 15; - ày 21 120µm µm 25 µm cô l t nhóm t sau tu B mg/L v S -D -D mg/L theo th Th (ngày) Th l 2,4-D mg/l NAA mg/L -D mg/L a 0,90 ± 0,05 0,93 ± 0,03a 1,30 ± 0,10b 1,33 ± 0,11b 2,41 ± 0,76c 2,50 ± 0,10c 3,53 ± 0,15d 4,13 ± 0,15d 12 7,80 ± 0,10e 8,16 ± 0,15e 15 9,23 ± 0,15h 10,15 ± 0,05g 18 9,00 ± 0,10g 10,00 ± 0,10g 21 8,80 ± 0,10f 9,36 ± 0,15f (Các giá tr khác bi 128 d -D mg/L ình theo sau không m ê ) ùng m Nguy T ê Tú Trâm, Bùi Trang Vi _ Hình b -D mg/L v theo th -D mg/L 3.3 S g lo m gi b hô h (hình 2) B b S -D mg/L v Th MS b (ngày) -D mg/L theo th 2/gTLT/gi -D mg/L NAA mg/L mg/L 9,19 ± 0,15a 10,00 ± 0,03a 9,46 ± 0,15a 10,15 ± 0,05a 18,10 ± 0,10b 18,55 ± 0,05b 20,26 ± 0,15c 22,43 ± 0,05c 12 20,70 ± 0,26d 28,56 ± 0,11e 15 30,26 ± 0,05f 35,10 ± 0,10f 18 25,20 ± 0,26e 26,63 ± 0,05d (Các giá tr khác bi t có ý ngh ình theo sau không m ng kê ) -D ùng m 129 S T _ Hình S MS v -D mg/L k -D mg/L theo th K râu mèo (Orthosiphon stamineus Benth.) nuôi -D mg/L NAA mg/L v Mô s d ad MS v ào, t àm ngu ìs TÀI LI Mai Tr i , Th HCM, tr 45-61, tr 183-193 Dixon R A & Gonzales R A (1994), Plant Cell Culture: A Practical Approach 2nd edn., 10, Oxford University Press, New York George E F & Sherrington P D (1984), Plant Propagation by Tissue Culture: Handbook and Directory of Commercial Laboratories, (289), Exegetics Ltd., UK Hsia C & Korban S S (1996), Organogenesis and somatic embryogenesis in callus cultures of Rosa hybrida and Rosa chinesis minima, Plant Cell Tiss Org Cult., (44), pp 1-6 Lee Wai-Leng & Chan Lai Keng (2004), Establishment of Orthosiphon stamineus cell suspension culture for cell growth, Plant Cell, Tissue and Organ culture (78), pp 101-106 Mat-Salleh K & Latiff A (2002), Tumbuban Ubatan Malaysia, (524), University Kebangsaan Malaysia, Bangi, Malaysia 130 , Nxb T Nguy ê Tú Trâm, Bùi Trang Vi _ Morita M., Xing X H and Unno H (1999), Synchronized shoot regeneration of rice (Oriza sativa L.) calli on solid medium by adjustment of intracellular 2,4-dichloro phenoxyacetic acid concentration, Plant Cell Rep (18), pp 633639 Murashige & Skoog (1962), A revised medium for a rapid growth and bioassay with tobacco tissue culture, Physiol Plant (15), pp 473-479 Schut G A., & Zwaving J H (1993), Pharmacollogical investagation of some lipophilic flavonoids from Orthsiphon aristatus, Fitoterapia, (64), pp 99-102 10 Singaram N & Teo C K H (1994), Factors affecting the biomass production of Tongkat Ali (Eurycoma longifolia), Malays Appl Biol 22(2), pp 197-203 131