Khả năng bắt gốc tự do DPPH và năng lực của nam sâm bò

Nam sâm bò (Boerhavia diffusa L.) thuộc họ Bông phấn (Nyctaginaceae), là thảo dược phổ biến của vùng nhiệt đới. Trong y học cổ truyền Ấn Độ, Nam sâm bò được sử dụng để trị các bệnh như tiểu đường, kháng viêm, ung thư. Tuy nhiên, ở Việt Nam, các bằng chứng khoa học về loài cây này còn chưa sáng tỏ. Theo phương pháp bắt gốc tự do DPPH, hoạt tính kháng oxy hóa ở lá là mạnh nhất (IC50 = 538,391 ± 10,218 µgml) so với thân (615,797 ± 12,798µgml) và rễ (883,899 ± 7,488µgml). Tại nồng độ 1.000 µgml, năng lực khử của cao thân (OD =0,522± 0,017) mạnh hơn so với lá (OD = 0,403 ± 0,013) và rễ (OD = 0,278 ± 0,010).

TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Số 12(90) năm 2016 KHẢ NĂNG BẮT GỐC TỰ DO DPPH VÀ NĂNG LỰC KHỬ CỦA NAM SÂM BÒ Ở CẦN GIỜ, TP HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ HẰNG*, NGUYỄN THỊ THANH TÂM*, MAI HỮU PHƯƠNG** TÓM TẮT Nam sâm bò (Boerhavia diffusa L.) thuộc họ Bông phấn (Nyctaginaceae), thảo dược phổ biến vùng nhiệt đới Trong y học cổ truyền Ấn Độ, Nam sâm bò sử dụng để trị bệnh tiểu đường, kháng viêm, ung thư Tuy nhiên, Việt Nam, chứng khoa học loài chưa sáng tỏ Theo phương pháp bắt gốc tự DPPH, hoạt tính kháng oxy hóa mạnh (IC50 = 538,391 ± 10,218 µg/ml) so với thân (615,797 ± 12,798µg/ml) rễ (883,899 ± 7,488µg/ml) Tại nồng độ 1.000 µg/ml, lực khử cao thân (OD =0,522± 0,017) mạnh so với (OD = 0,403 ± 0,013) rễ (OD = 0,278 ± 0,010) Từ khóa: Boerhavia diffusa Linn., bắt gốc tự DPPH, lực khử, kháng oxy hóa ABSTRACT DPPH free radical scavenging and reducing power properties of Boerhavia diffusa in Can Gio, Ho Chi Minh City Spreading Hogweed (Boerhavia diffusa Linn.), which belongs to the Nyctaginaceae family, is a common herbal plant in the tropics Spreading Hogweed is used in the Indian traditional medicine system to treat diabetes, inflammatory, and cancer However, there is still no scientific research on this plant involving treating disease in Viet Nam In this paper, the antioxidant activity of leave extract, which the IC50 value of DPPH free radical scavenging capacity was 538,391 ± 10,218 µg/ml, was higher than the stem (IC50 = 615,797 ± 12,798) and root extracts (IC50 = 883,899 ± 7,488) The reducing power of stem extract (the Optical Density - OD = 0,522± 0,017) was stronger than the leave (OD = 0,403 ± 0,013) and root extracts.(OD = 0,278 ± 0,010) at concentration of 1,000 µg/ml Keywords: Boerhavia diffusa Linn., DPPH free radical scavenging, reducing power, antioxidant Mở đầu Chi Boerhavia có 40 loài loài Nam sâm bò (Boerhavia diffusa L.) phổ biến, mọc hoang nhiều nơi, có chủng loài Loài thuộc dạng thân thảo, phân bố vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới nơi có khí hậu ấm áp như: Ấn Độ, Trung Quốc, Lào, Campuchia Ở Việt Nam, Nam sâm bò phân bố số vùng đất cát như: Quảng Ninh, Bình Thuận, Thành phố Hồ Chí Minh [2] * ** ThS, Trường Đại học Sư phạm TPHCM; Email: ngthhang@yahoo.com Cử nhân, Trường Đại học Sư phạm TPHCM 112 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Nguyễn Thị Hằng tgk _ Ở Ấn Độ, Brazil, Nam sâm bò thường sử dụng Y học cổ truyền để trị nhiều loại bệnh có tiểu đường ung thư [9] Một số công trình chứng minh Nam sâm bò thu nhận Ấn Độ chứa lượng lớn hợp chất flavonoid, alkaloid, steroid, triterpenoid, lipid, lignin, carbohydrate, protein glycoprotein, punarnavine, boeravinone, hypoxanthine 9-L-arabinofuranoside, acid ursolic, punarnavoside, lirodendrin, acid arachidic, β-Sitosterol, α-2-sitosterol, acid palmitic, βsitosterol, acid stearic, hentriacontane, triacontanol đó, số chất thể nhiều hoạt tính sinh học như: kháng oxy hóa, có khả tạo phức với ion kim loại nên có tác dụng chất xúc tác ngăn cản phản ứng oxy hóa Do đó, chúng có tác dụng bảo vệ thể, ngăn ngừa xơ vữa động mạch, tai biến mạch máu, lão hóa, thoái hóa gan, tổn thương xạ [7, 10] Ở Việt Nam, Đông y thường dùng để chữa hen suyễn, đau dày, phù thũng, thiếu máu, vàng da, gan cổ trướng, tiểu ít, táo bón thường xuyên, bệnh lách, viêm nhiễm Rễ Nam sâm bò có tác dụng lợi tiểu, nhuận tràng, long đờm, trị viêm loét giác mạc, quáng gà…[1] Một số hợp chất flavonoid phân lập từ Nam sâm bò (ở Ấn Độ) boeravinone A, B, C, D, E, F, G thể hoạt tính kháng oxy hóa Đặc biệt, boeravinone G chứng minh có hoạt tính kháng oxy hóa mạnh, có tiềm việc điều chế loại thuốc chữa trị bệnh liên quan tới gốc tự Ngoài ra, hợp chất boeravinone C, K, M chứng minh có khả gây chết theo chương trình dòng tế bào MCF-7 HeLa [7] Các hợp chất alkaloid (punarnavine, hypoxanthine 9-L-arabinofuranoside…) Nam sâm bò có nhiều hoạt tính sinh học quan trọng Một hợp chất alkaloid chiết xuất từ Nam sâm bò punarnavine (C17H22N2O) chứng minh có khả chống lại di tế bào ung thư, điều hòa miễn dịch, kháng viêm, giảm đau Rễ Nam sâm bò có chứa 0,04% hợp chất [7] Mặc dù Việt Nam, Nam sâm bò mọc hoang nhiều nơi, chứng khoa học loài dược liệu chưa sáng tỏ Nghiên cứu Đỗ Thị Mỹ Liên (2014), tiến hành khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài thuộc chi Boerhavia, họ Bông phấn Kết phân lập 55 hợp chất, có 16 hợp chất Kết sàng lọc hoạt tính ức chế tế bào ung thư cho thấy hợp chất boeravinone thể hoạt tính kháng ung thư dòng tế bào MCF-7 HeLa [3] Hiện nay, chứng khoa học cho thấy gia tăng nồng độ gốc tự tế bào nguyên nhân chủ yếu gây nên vấn đề bệnh tật như: xơ vữa động mạch, tiểu đường, ung thư [8] Vì vậy, nhà nghiên cứu giới không ngừng tìm tòi sàng lọc hợp chất có nguồn gốc tự nhiên để giải vấn đề Do đó, nghiên cứu khả kháng oxy hóa chống oxy hóa vấn đề thiết thực Dựa dẫn liệu trên, định khảo sát khả kháng oxy hóa loài với mong muốn góp phần cung cấp dẫn liệu khoa học dược lí để ứng dụng y học làm tiền đề cho nghiên cứu sau 113 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Số 12(90) năm 2016 Mẫu vật, hóa chất phương pháp nghiên cứu 2.1 Mẫu vật hóa chất Nam sâm bò (thân, lá, rễ) thu thị trấn Cần Thạnh, huyện Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí Minh vào ngày 03/9/2014 tọa độ: 10°23'14.2"B 106°55'21.7"Đ Tại vị trí thu mẫu, đất có độ kiềm yếu, độ ẩm thấp, khả giữ nước (Bảng 1) Các tiêu khác: Độ ẩm không khí: 81,63%; nhiệt độ: 30,160C; cường độ ánh sáng: 31.070 lux Bảng Một số tiêu đất Chỉ tiêu/Tầng đất Tầng – 30 cm Tầng 30 – 60 cm pH 7,467 ± 0,295 7,727 ± 0,243 Độ ẩm (%) 1,273 ± 0,034 1,088 ± 0,057 Như vậy, ghi nhận thời điểm thu mẫu, cường độ ánh sáng, nhiệt độ độ ẩm không khí cao Nam sâm bò định danh theo “Cây cỏ Việt Nam” [2] Mẫu rửa sạch, sấy khô 500C đến trọng lượng không đổi, bảo quản nơi khô ráo, thóang mát Phòng Thí nghiệm Di truyền - Thực vật DPPH (80 μM, Sigma): Pha 3,3 mg DPPH methanol tuyệt đối tạo thành 100ml dung dịch có nồng độ 80 μM Dung dịch bảo quản 40C điều kiện ánh sáng Dung dịch DPPH pha loãng trước tiến hành thí nghiệm Acid ascorbic (15 μg/ml, Sigma): Nồng độ 15 μg/ml giá trị IC50 acid ascorbic khảo sát điều kiện phòng thí nghiệm Giá trị IC50 nồng độ mà acid ascorbic bắt 50% gốc DPPH Hóa chất sử dụng phương pháp xác định lực khử: Acid ascorbic (0 – 250 μg/ml); đệm phosphate 0,2 M (pH = 6,6); Kali ferricyanid (K3[Fe(CN)6]) 1%; Tricloacetic acid 10% (bảo quản điều kiện ánh sáng); Sắt (III) clorua (FeCl3) 0,1% (bảo quản điều kiện ánh sáng) 2.2 Phương pháp 2.2.1 Phương pháp thu nhận cao chiết Mẫu xay nhuyễn thành bột, sau ngâm với dung môi ethanol tuyệt đối vòng 48 theo tỉ lệ 1:10 (g/ml) Sau 48 giờ, dịch chiết lọc qua giấy lọc loại cặn Sau đó, dịch chiết cô quay đuổi dung môi thu cao chiết nhiệt độ 50 oC, áp suất 175 mbar Cao chiết để khô tự nhiên Bảo quản 40 oC để sử dụng cho thí nghiệm sau [4] Lưu ý: Bột ngâm nhiều lần dịch chiết gần suốt 2.2.2 Phương pháp thử hoạt tính bắt gốc tự DPPH Về nguyên tắc, chất kháng oxy hóa trung hòa gốc DPPH cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thu bước sóng cực đại màu dung dịch phản ứng 114 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Nguyễn Thị Hằng tgk _ nhạt dần, chuyển từ màu tím sang màu vàng nhạt Giá trị mật độ quang OD thấp chứng tỏ khả bắt gốc tự DPPH cao [6] Quy trình thí nghiệm thực sau: Bổ sung ml DPPH (0,8 mM, pha methanol) vào ống nghiệm chứa ml cao chiết nồng độ khác (0 – 1000 µg/ml) Ủ 30 phút điều kiện ánh sáng, sau đó, tiến hành đo mật độ quang OD bước sóng 517 nm Giá trị mật độ quang OD phản ánh khả kháng oxy hóa mẫu Chứng dương thí nghiệm acid ascorbic (15 g/ml), chứng âm nước cất hai lần Tỉ lệ phần trăm hoạt tính kháng oxy hóa xác định theo công thức sau: Tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH = 100 Trong đó, ODm: giá trị mật độ quang OD mẫu thử; ODc: giá trị mật độ quang OD chứng âm Từ tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH, xây dựng phương trình tương quan tuyến tính, từ xác định giá trị IC50 (là nồng độ mà bắt 50% gốc tự DPPH) để làm sở so sánh khả kháng oxy hóa mẫu Mẫu có giá trị IC50 thấp hoạt tính kháng oxy hóa cao 2.2.3 Phương pháp lực khử Nguyên tắc: Mẫu thử khử ion Fe3+ phân tử kali ferricyanid (K3[Fe(CN)6]) thành ion Fe2+ phân tử kali ferrocyanid (K4[Fe(CN)6]) Khi bổ sung FeCl3, Fe3+ phản ứng với ion ferrocyanid tạo thành phức hợp ferris ferrocyanid (K4[Fe(CN)6]3) màu xanh dương Quy trình khảo sát lực khử tiến hành sau: ml mẫu thử nồng độ khảo sát bổ sung thêm 2,5 ml dung dịch đệm phosphate 0,2M (pH = 6,6), ủ nhiệt độ 500C, 20 phút Sau đó, ống nghiệm bổ sung thêm 2,5 ml dung dịch tricloacetic acid 10% Lấy 2,5 ml dung dịch trên, thêm 2,5 ml nước cất hai lần, bổ sung 0,5 ml dung dịch FeCl3 0,1% Đo độ hấp thụ bước sóng 700 nm, giá trị mật độ quang OD phản ánh khả khử mẫu Giá trị mật độ quang cao chứng tỏ lực khử mẫu cao 2.2.4 Phương pháp xử lí số liệu Giá trị % bắt gốc tự DPPH, độ lệch chuẩn giá trị IC50 nghiệm thức xử lí phần mềm Microsoft Excel 2010 So sánh khác biệt mặt thống kê xác định phương trình hồi quy nồng độ cao chiết tỉ lệ % bắt gốc tự DPPH xây dựng phần mềm thống kê SPSS 16.0 Theo đó, số phương trình phổ biến như: - Phương trình linear: Y = b0 + b1*X - Phương trình quadratic: Y = b0 + b1*X + b2*X2 - Phương trình cubic: Y = b0 + b1*X + b2*X2 + b3*X3 - Phương trình power: Y = b0*Xb1 115 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Số 12(90) năm 2016 - Phương trình logarithmic: Y = b0 + b1*ln(X) Trong đó, Y: tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH; X: nồng độ cao chiết; b0 : số; b1, b2, b3: hệ số hồi quy Phương trình hồi quy chọn phương trình có hệ số tương quan tương quan hiệu chỉnh cao (phản ánh biến thiên tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH giải thích nồng độ cao chiết); với độ tin cậy 95% P- value - giá trị Sig phương trình tham số thường ≤ 0,05 có ý nghĩa Kết thảo luận 3.1 Mô tả hình thái Nam sâm bò Cây Nam sâm bò có đặc điểm sau: - Thân: thân thảo, sống lâu năm, thân mọc tỏa sát mặt đất (Hình 1) Đặc điểm giúp không bị ngã đổ thường xuyên chịu tác động gió biển Thân hình trụ, có màu xanh tím - Lá: đơn, mọc đối, hình bầu dục Mặt màu trắng lục, có nhiều lông ngắn Mặt màu lục thẫm Lá có gân dạng lông chim, mép lượn sóng (Hình 2) - Rễ: Nam sâm bò thuộc loại rễ củ, nhiều tinh bột, có mùi thơm Rễ có màu nâu, có nhiều rễ phụ mọc từ rễ (Hình 3) - Hoa: cụm hoa hình xim mang từ – hoa lưỡng tính, màu hồng đậm, cuống ngắn, mọc nách Hoa mẫu 5, cánh hoa dính lại hình thành bao hoa dạng ống Hợp bầu dưới, đính noãn đáy Nhánh hoa có nhiều lông tròn, dính (Hình 4) - Quả: hình trụ dài khoảng mm, đầu tròn, phần gần cuống nhọn Quả có cạnh, bề mặt có lông dính đa bào giúp phát tán xa (Hình 5) Kết mô tả số đặc điểm hình thái Nam sâm bò khu vực thu mẫu tương tự mô tả Phạm Hoàng Hộ (Cây cỏ Việt Nam, 1999) [2] Hình Nam sâm bò tự nhiên 116 Nguyễn Thị Hằng tgk TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM _ A Mặt B Mặt Hình Lá Nam sâm bò Hình Rễ Nam sâm bò A Cụm hoa B Hoa (cắt dọc) Hình Hoa Nam sâm bò A Quả B Quả (cắt ngang) C Quả (cắt dọc) Hình Quả Nam sâm bò 117 Số 12(90) năm 2016 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM 3.2 Hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết ethanol Nam sâm bò Để xác định khả bắt gốc tự DPPH, cao chiết ethanol thu nhận từ thân, lá, rễ Nam sâm bò pha loãng thành dãy nồng độ từ 100 - 1000 µg/ml Chứng dương sử dụng acid ascorbic nồng độ 15 µg/ml Chứng âm nước cất hai lần Các nghiệm thức đề tài lặp lại lần Kết ghi nhận tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết minh họa theo Bảng Bảng Tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết ethanol Nồng đô (µg/ml) 100 Lá a 8,577 ± 1,588 b Thân a 7,470 ± 1,407 b Rễ a 3,997 ± 0,534 200 21,578 ± 3,661 17,266 ± 1,788 10,830b ± 1,152 400 41,205c ± 5,297 35,118 c ± 1,039 21,506c ± 0,836 600 54,961 d ± 1,767 51,046d ± 1,030 31,364d ± 1,093 800 74,331e ± 0,930 67,028 e ± 2,082 43,733e ± 1,003 1000 88,915f ± 2,059 75,877 f ± 1,221 58,867f ± 1,508 Acid ascorbic (15µ/ml) 45,959 ± 3,276 49,506 ± 1,475 48,241 ± 1,958 Ghi chú: a, b, c, d, e, f: khác biệt có ý nghĩa thống kê theo hàng dọc Như vậy, theo tăng dần nồng độ từ 100 µg/ml – 1000 µg/ml, tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết tăng dần Điều chứng tỏ, khả kháng oxy hóa cao chiết tăng tỉ lệ thuận theo chiều tăng nồng độ Với nồng độ 1000 µg/ml, tỉ lệ % khả bắt gốc tự cao 88,915%, cao so với cao thân (75,877%) cao rễ (58,867%) Giữa nồng độ loại cao chiết, tỉ lệ % khả bắt gốc tự DPPH có khác biệt mặt thống kê với P-value ≤ 0,05 Như trình bày, phương trình hồi quy đơn giản thể mối tương quan tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH nồng độ cao chiết Nam sâm bò xây dựng dựa vào phần mềm thống kê SPSS 16.0 Trên sở đó, phương trình chọn phương trình có hệ số tương quan tương quan hiệu chỉnh cao với P-value phương trình tham số ≤ 0,05 (với độ tin cậy 95%) Các phương trình hồi quy xác định: + Cao lá: phương trình mũ Y = 0,100X0,990 với hệ số tương quan R = 0,995; tương quan sau hiệu chỉnh R = 0,987; P-value phương trình 0,000 tham số ≤ 0,000 (hệ số hồi quy = 0,000; số = 0,030) + Cao thân: phương trình mũ Y = 0,076X1,013 với hệ số tương quan R = 0,997, tương quan hiệu chỉnh = 0,993; P-value phương trình = 0,000 hệ số hồi quy = 0,000; số = 0,013 + Cao rễ: Y = 0,025X1,125 với hệ số tương quan 0,997 tương quan hiệu chỉnh =0,993; P-value phương trình = 0,000 hệ số hồi quy: 0,000; số =0,018 118 Nguyễn Thị Hằng tgk TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM _ Với phương trình hồi quy trên, giá trị IC50 hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết xác định (Bảng 3) Kết thu cho thấy, cao ethanol có giá trị IC50 thấp Điều chứng tỏ hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết cao Ngược lại, rễ có giá trị IC50 cao nên thể khả kháng oxy hóa thấp Hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết có khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê với P-value = 0,000 Bảng Giá trị IC50 cao chiết ethanol Nồng độ/Mẫu Lá Thân Rễ IC50 (µg/ml) 528,196a ± 24,172 603,151b ± 13,018 867,007 c ± 14,672 Ghi chú: a, b, c: khác biệt có ý nghĩa thống kê theo hàng ngang Như vậy, điều kiện thử nghiệm, hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp xếp theo thứ tự tăng dần: rễ < thân < 3.3 Hoạt tính kháng oxy hóa Nam sâm bò theo phương pháp lực khử Để khảo sát lực khử, cao chiết Nam sâm bò pha loãng từ nồng độ 2000µg/ml Thí nghiệm lặp lại lần Chứng âm sử dụng nước cất hai lần Chứng dương acid ascorbic Bảng Năng lực khử cao chiết ethanol Nồng độ (µg/ml)/Mẫu Cao rễ Cao Cao thân 100 0,052b.1 ± 0,005 0,075b.2 ± 0,005 0,076 b.2 ± 0,004 200 0,088c.1 ± 0,007 0,111c.2 ± 0,003 0,139 c.3 ± 0,009 400 0,152d.1 ± 0,008 0,180d.2 ± 0,008 0,231 d.3 ± 0,019 600 0,206e.1 ± 0,009 0,241e.2 ± 0,014 0,319 e.3 ± 0,006 800 0,236f.1 ± 0,008 0,320f.2 ± 0,026 0,408f.3 ± 0,017 1000 0,278g.1 ± 0,010 0,403g.2 ± 0,013 0,522 g.3 ± 0,017 1200 0,322h.1 ± 0,011 0,464h.2 ± 0,009 0,682 h.3 ± 0,008 1400 0,396i.1 ± 0,015 0,556i.2 ± 0,013 0,790i.3 ± 0,007 1600 0,458j.1 ± 0,026 0,619j.2 ± 0,015 0,877j.3 ± 0,013 1800 0,524k.1 ± 0,009 0,708k.2 ± 0,020 0,954 k.3 ± 0,009 2000 0,583l.1 ± 0,013 0,804l.2 ± 0,008 1,068l.3 ± 0,027 Ghi chú: - a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l: khác biệt có ý nghĩa thống kê nồng độ cao chiết (P =0,000) 119 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Số 12(90) năm 2016 - 1, 2, 3: khác biệt có ý nghĩa thống kê cao chiết nồng độ (P ≤ 0,05) Theo chiều tăng nồng độ, giá trị mật độ quang OD mẫu cao chiết tăng dần (sự khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê) Cụ thể, tăng nồng độ từ 100 µg/ml lên 2.000 µg/ml, giá trị mật độ quang OD bước sóng 700 nm tăng từ 0,076 lên 1,068 (thân); từ 0,052 lên 0,583 (rễ); từ 0,075 lên 0,804 (lá) Nồng độ cao, tổng lực khử hoạt tính kháng oxy hóa mạnh (Bảng 4) Khi so sánh cao chiết với nhau, nồng độ, cao thân thể khả khử Fe3+ thành Fe2+ mạnh Cao rễ thể lực khử yếu Thứ tự lực khử cao chiết tăng sau: cao rễ < cao < cao thân 3.4 Thảo luận Như vậy, với công trình nước, đặc biệt nghiên cứu Guha, G (2009), Tolulope, O M (2010), Bhardwaj, R., (2014), kết nghiên cứu xác định cao chiết từ phận Nam sâm bò thu huyện Cần Giờ, TPHCM thể hoạt tính kháng oxy hóa thông qua khả bắt gốc tự DPPH lực khử Trong đó, theo phương pháp bắt gốc tự DPPH, cao chiết ethanol thể khả kháng oxy hóa mạnh nhất, sau thân rễ Điều giải thích theo công trình nghiên cứu tác giả Bhardwaj, R., Sharma, P cộng (2014) Các nghiên cứu cho thấy thành phần thân, lá, rễ có chứa hợp chất phenolic, flavonoid acid ascorbic khác Theo đó, hàm lượng phenolic, flavonoid, acid ascorbic cao thấp rễ Nam sâm bò thu nhận Ấn Độ Các hợp chất chứng minh thể khả kháng oxy hóa mạnh Đồng thời, theo Pallavi, cao chiết methanol có hoạt tính bắt gốc tự ABTS, lực khử, hoạt tính enzyme peroxidase khả oxi hóa lipid cao so với thân rễ Methanol ethanol hai dung môi có tính phân cực trung bình gần tương tự nhau, chúng có khả chiết xuất hợp chất tương tự [8] Đồng thời, với công trình Tolulope, O M cộng (2010), cao chiết ethanol Nam sâm bò thu Nigeria có thành phần vitamine E, vitamine C, phenol, flavonoid thể khả bắt gốc tự DPPH, lực khử Fe3+ Vì vậy, điều lí giải cao ethanol, Nam sâm bò nghiên cứu thể hoạt tính kháng oxy hóa mạnh [10] Tuy nhiên, theo nghiên cứu Bhardwaj, R cộng (2014), cao methanol thân Nam sâm bò khả bắt gốc tự DPPH cao so với rễ Dựa phân tích mối tương quan hàm lượng hợp chất phenol, flavonoid acid ascorbic với giá trị IC50 hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết, tác giả cho hoạt tính kháng oxy hóa thân mạnh có mặt hợp chất phenol [5] Điều sở để lí giải cho kết nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa Nam sâm bò thu nhận huyện Cần Giờ phương pháp 120 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Nguyễn Thị Hằng tgk _ lực khử Theo đó, kết không tương đồng với kết khảo sát bắt gốc tự DPPH Thông qua giá trị mật độ quang OD bước sóng 700 nm, lực khử cao thân mạnh so với cao rễ Để khảo sát khả kháng oxy hóa hợp chất, nhiều phương pháp sử dụng: phương pháp bắt gốc tự DPPH, lực khử, thử hoạt tính ức chế gốc tự NO, xác định hàm lượng Malonyl dialdehyde, đánh giá khả kết hợp với ion sắt II, thử hoạt tính ức chế enzyme xanthine oxidase Mỗi phương pháp hướng tới gốc tự khác tế bào Vì vậy, để khảo sát đầy đủ khả kháng oxy hóa hợp chất, người ta thường sử dụng nhiều phương pháp khác Do đó, nghiên cứu cần phải phân tích sâu thành phần hợp chất phận theo hướng kháng oxy hóa để ứng dụng thực tiễn Ngoài ra, Guha, G cộng (2011) tiến hành khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa chiết xuất khác từ Nam sâm bò phương pháp bắt gốc tự DPPH Kết cho thấy giá trị IC50 mẫu cao chiết là: cao nước (200,82 ± 0,55 µg/ml), cao methanol (327,40 ± 0,68 µg/ml), cao chloroform (409,81 ± 0,62 µg/ml), cao hexane (2.351,60 ± 0,18 µg/ml) Kết cho thấy cao nước cao methanol thể hoạt tính kháng oxy hóa cao cao lại Điều cho thấy hợp chất có hoạt tính kháng oxy hóa Nam sâm bò hợp chất có tính phân cực Nghiên cứu sử dụng ethanol dung môi có tính phân cực gần giống methanol Chính vậy, cao chiết ethanol báo cáo thể hoạt tính kháng oxy hóa Có thể, để chiết xuất hợp chất có hoạt tính kháng oxy hóa mạnh, nghiên cứu cần phải sử dụng dung môi có tính phân cực mạnh Như vậy, với kết ghi nhận được, Nam sâm bò nhu nhận huyện Cần Giờ (TPHCM) thể khả kháng oxy hóa Điều góp phần cung cấp dẫn liệu khoa học cho ứng dụng y học sau Bởi vì, gia tăng hàm lượng gốc tự tế bào dẫn đến trình lão hóa, bệnh tật: xơ vữa động mạch, suy yếu hệ thống miễn dịch, giảm trí tuệ, tiểu đường, ung thư [8] Vì vậy, việc nghiên cứu tìm tòi hợp chất có nguồn gốc tự nhiên có khả kháng oxy hóa trị bệnh có ý nghĩa thiết thực Bên cạnh đó, kết hoạt tính kháng oxy hóa Nam sâm bò báo cáo góp phần làm sáng tỏ ứng dụng điều trị bệnh Đông y như: viêm nhiễm, tiểu đường, ung thư TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 2, tr 700 – 702 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, Quyển - Tập 2, Nxb Trẻ, tr 717 Đỗ Thị Mỹ Liên (2014), Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học ba loài thuộc chi Boerhavia, họ Bông phấn, Luận án Tiến sĩ, Đại học Khoa học Tự nhiên TP Hồ Chí Minh 121 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐHSP TPHCM Số 12(90) năm 2016 10 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Bhardwaj, R., Yadav, A & Sharma, R (2014), “Phytochemicals and antioxidant activity in Boerhavia diffusa”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, Vol 6(1), pp 344 – 348 Brand – Williams, W., Cuvelier, M E & Berset, C (1995), “Use of free radical method to evaluate antioxidant activity”, LWT, Vol 28, pp 25 – 30 Goyal, B.M., Bansal, P., Gupta, V., Kumar, S., Singh, R & Maithani, M (2010), “Pharmacological Potential of Boerhaavia diffusa: An Overview”, International Journal of Pharmaceutical Sciences and Drug Research, Vol 2(1),pp 17 – 22 Lazo-de-la-Vega-Monroy, M-L & Fernández-Mejía, C (2013), “Oxidative Stress in Diabetes Mellitus and the Role Of Vitamins with Antioxidant Actions”, Oxidative Stress and Chronic Degenerative Diseases - A Role for Antioxidants, pp 209 – 232 Sharma, P., Bhardwaj, R., Yadav, A & Sharma, R A (2014), “Antioxidant properties of methanolic extracts of Boerhavia diffusa”, Research Journal of Phytochemistry, Vol 8(3), 119 – 126 Tolulope, O M., Akinmoladun, A C., Ogunboye, A A., & Akindahunsi, A A (2010), “Antioxidant activity and hepatoprotective property of leaf extracts of Boerhavia diffusa Linn againts acetaminophen – induced liver damage in rats”, Food and Chemical Toxicology, Vol 48, pp 2200 – 2205 (Ngày Tòa soạn nhận bài: 05-10-2016; ngày phản biện đánh giá: 24-10-2016; ngày chấp nhận đăng: 16-12-2016) 122 ... 3.2 Hoạt tính bắt gốc tự DPPH cao chiết ethanol Nam sâm bò Để xác định khả bắt gốc tự DPPH, cao chiết ethanol thu nhận từ thân, lá, rễ Nam sâm bò pha loãng thành dãy nồng độ... chiết từ phận Nam sâm bò thu huyện Cần Giờ, TPHCM thể hoạt tính kháng oxy hóa thông qua khả bắt gốc tự DPPH lực khử Trong đó, theo phương pháp bắt gốc tự DPPH, cao chiết ethanol thể khả kháng oxy... % khả bắt gốc tự DPPH có khác biệt mặt thống kê với P-value ≤ 0,05 Như trình bày, phương trình hồi quy đơn giản thể mối tương quan tỉ lệ % hoạt tính bắt gốc tự DPPH nồng độ cao chiết Nam sâm bò