Nghiên cứu một số chỉ số sinh học của học sinh lứa tuổi 12 đến 16 ở thái nguyên năm 2010 2013

PHỤ LỤC PHIẾU THEO DÕI SỨC KHỎE HỌC SINH - NĂM 2010 Hành - Lớp: - Họ tên học sinh: - Dân tộc: - Ngày tháng năm sinh:……………………Giới: Nam Nữ - Trường tiểu học trước học: - Nơi tại: Các câu hỏi liên quan đến phát triển thể lực trí tuệ: 2.1 Cân nặng lúc sinh: 2.2 Trình độ học vấn mẹ: Mù chữ Tiểu học THCS PTTH Sơ cấp Trung cấp Đại học 2.3 Nghề nghiệp mẹ: 2.4 Trình độ học vấn bố: Mù chữ Tiểu học THCS PTTH Sơ cấp Trung cấp Đại học 2.5 Nghề nghiệp bố: 2.6 Số lượng người sống gia đình: 2.7 Thu nhập bình quân đầu người/ tháng: 2.8 Hàng ngày cháu có ăn chế độ ăn riêng không? (Ví dụ: uống sữa, tên loại thức ăn trẻ ăn thêm) 2.9 Ở nhà gia đình có nhắc nhở cháu học tập không? Không Thỉnh thoảng Thường xuyên 2.10 Ở nhà gia đình có người hướng dẫn cháu học không? Không Thỉnh thoảng 2.11 Có học thêm không?, Thường xuyên Có Không 2.12 Trường học có học môn tin học không? Có Số buổi/tuần?,,,,,,,,,,,,,,,,,, Không 2.13 Chơi thể thao không? Có Không Tên môn, số buổi/tuần? 2.14 Học lực kỳ I đạt loại: Môn tiếng Anh đạt loại: Môn toán: Môn ngữ văn: Sinh lý dậy Tuổi bắt đầu có kinh (hoặc tuổi bắt đầu xuất tinh ) : Số ngày hành CKKN Đều /Vòng kinh (ngày): Không kinh: 4, Các số thể lực: Chiều cao đứng(cm): Cân nặng (kg):,,,,, Chiều cao ngồi (cm): Vòng đầu (cm): Vòng cánh tay duỗi(cm): Vòng ngực trung bình (cm): Vòng cánh tay co (cm): Vòng ngực hít vào (cm): Vòng đùi (cm): 5, Chỉ số sinh lý tuần hoàn: 6, Chỉ số sinh lý máu: - Huyết áp (mmHg): - Nhóm máu hệ Rh: - Tần số mạch: - Nhóm máu hệ ABO: 7, Chỉ số lực trí tuệ: Tốc độ PX ĐG Tốc độ PX PT - Kết đo PX TG - VĐ Tốc độ xử lý TT Luồng TT xử lý Bệnh nội khoa: …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… Thái nguyên, ngày…… tháng……….năm 20…… PHIẾU THEO DÕI SỨC KHỎE HỌC SINH NĂM 2011 Các số thể lực: Chỉ số Năm 2011 Chiều cao đứng(cm): Chiều cao ngồi (cm): Cân nặng (kg): Vòng cánh tay duỗi (cm): Vòng cánh tay co (cm): Vòng đùi (cm): Cân nặng (kg): Vòng đầu (cm): Vòng ngực trung bình (cm): Vòng ngực hít vào (cm): QVC: Bệnh nội khoa: Tần số mạch (lần/phút): Huyết áp (mmHg): ……… …………………………………………………………………………………………………… … ………………………………………………………………………………………… Thái nguyên, ngày tháng .năm 2011 PHIẾU THEO DÕI SỨC KHỎE HỌC SINH NĂM 2012 Các số thể lực: Chỉ số Năm 2012 Chiều cao đứng(cm): Chiều cao ngồi (cm): Cân nặng (kg): Vòng cánh tay duỗi (cm): Vòng cánh tay co (cm): Vòng đùi (cm): Cân nặng (kg): Vòng đầu (cm): Vòng ngực trung bình (cm): Vòng ngực hít vào (cm): QVC: Bệnh nội khoa: Tần số mạch (lần/phút): Huyết áp (mmHg): ……… …………………………………………………………………………………………………… … ………………………………………………………………………………………… Thái nguyên, ngày tháng năm 2012 PHỤ LỤC Phiếu 1: BẢNG SẮP XẾP CHỮ SỐ LỘN XỘN Họ tên: Lớp: Trường: Học sinh quan sát xếp chữ số sau theo thứ tự từ nhỏ đến lớn vào bảng có 25 ô trống bên theo chiều từ trái sang phải THỜI GIAN PHÚT THỜI GIAN PHÚT 74 47 95 32 89 68 49 51 25 71 19 62 80 86 42 34 60 79 58 30 84 93 26 10 PHỤ LỤC Phiếu 2: BẢNG NHÌN NHỚ 12 CHỮ SỐ Họ tên: Lớp: Trường: Học sinh quan sát nhớ bảng 12 chữ số 30 giây, sau HS ghi lại chữ số nhớ được, không cần theo thứ tự BẢNG NHÌN NHỚ 12 CHỮ SỐ 48 96 54 77 24 71 65 34 87 16 56 42 PHỤ LỤC - Phương pháp định lượng gen kiss + Phương pháp tách chiết RNA tổng số Rã đông ống máu đá, sau hút 100 µl máu toàn phần chuyển sang ống Eppendorf 1,5 ml Bổ sung 1ml Trizol để phút nhiệt độ phòng Bổ sung 0,2 ml Chloroform vào ống, lắc mạnh 15 giây, để phút nhiệt độ phòng Ly tâm 8000 vòng 15 phút 4oC Chuyển pha sang ống Bổ sung 0,5 ml isopropanol, ủ -20 oC 30 phút Ly tâm 13000 vòng/ phút 10 phút 4oC Rửa tủa với cồn 70% DEPC Ly tâm 13000 vòng/ phút phút Làm khô hòa tan tủa 30 µl nước deion khử DEPC Mẫu RNA xử lý với DNaseI để loại bỏ DNA tạp Hỗn hợp phản ứng ủ 37°C thời gian 30 phút Thêm 11 ul dung dịch EDTA 25mM, trộn ủ 65°C 10 phút để dừng phản ứng bất hoạt enzym DNase I Cuối cùng, mẫu tinh qua cột lần để loại bỏ enzym DNaseI dung dịch đệm phản ứng Sử dụng 1µl để định lượng RNA tổng số máy đo quang phổ Nano drop Sau sử dụng 250 ng RNA tổng số để tổng hợp cDNA + Phương pháp chạy Real time PCR sử dụng kit LightCycler RNA Master SYBR Green Phản ứng Real-time PCR máy LightCycler Roche sử dụng chất nhuộm huỳnh quang SYBR Green I Chất có đặc điểm dung dịch có DNA mạch kép gắn vào sợi kép phát quang bị chiếu nguồn sáng kích thích (bước sóng 530 nm) Máy LightCycler lập trình để thu nhận tín hiệu huỳnh quang phát từ mẫu thời gian phản ứng Lượng sản phẩm PCR lớn, tín hiệu thu mạnh Từ tín hiệu này, máy số hóa lưu lại dạng liệu thô Chuẩn bị phản ứng Real time PCR cách dùng pipet trộn nhẹ thành phần phản ứng, tránh ánh sáng trực tiếp Sau chuyển thành phần phản ứng vào ống LightCycler Capillary Đặt ống vào adapter máy ly tâm, ly tâm để lắng thành phần phản ứng xuống đáy ông LightCycler Capillary tốc độ 3000 vòng/phút, phút Đặt chương trình chạy máy theo hướng dẫn nhà sản xuất Hóa chất mẫu phẩm STT Thành phần RNA khuôn MN(OAc)2 Primer F Primer R LightCycler RNA Master SYBR Green H2O PCR grade Tổng thể tích Thể tích (µl) 250 ng 1,3 0,5 0,5 7,5 Dẫn đến 20 µl 20 µl Chương trình chạy máy Real time Light cycler 2,0 Kiểu phân tích Số chu kỳ Bước Nhiệt độ Thời gian Kiểu thu tín hiệu huỳnh quang Giai đoạn phiên mã ngược (Reverse Transcription) 61oC 20 phút - Biến tính bước đầu (Initial Denaturation) 95oC 30 giây - Giai đoạn khuếch đại (Amplification) Biến tính QuaMNification 45 95oC giây - Bắt cặp o 58 C 10 giây - Kéo dài o 15 giây Đơn (Single) 72 C Giai đoạn phân tích đỉnh nóng chảy (Melting curves) Melting curves Biến tính 95oC giây - Bắt cặp 65oC 15 giây - Nóng chảy o 95 C (Gia tốc nhiệt giây 0,1oC/giây) Liên tục (Comninous) Giai đoạn làm lạnh (Cooling) 4oC 30 giây - - Phương pháp xử lý số liệu Xác định số Ct (Crossing PoiMN) mẫu Trong phản ứng Realtime PCR, chu trình mà tín hiệu huỳnh quang mẫu vượt lên mức huỳnh quang gọi Ct (Crossing PoiMN) mẫu Trong đồ thị, Ct thể đường cong lên đột ngột, điểm mà sản phẩm PCR bắt đầu diện số liệu Ct mẫu phụ thuộc vào nồng độ DNA ban đầu mẫu Một mẫu có nồng độ DNA ban đầu thấp cần nhiều chu trình có số Ct cao, mẫu có nồng độ cao cần chu trình có Ct thấp Định lượng tương đối đơn sắc/đơn kênh (Relative QuaMNification-Mono Color): Phân tích định lượng tương đối dựa sở nồng độ DNA Crossing PoiMN với tất mẫu chứa loại DNA đích Mỗi mẫu đòi hỏi số chu trình khác để đạt tới Crossing Poi miền núi, tùy thuộc vào nồng độ DNA ban đầu mẫu Đến cuối thí nghiệm, nồng độ DNA mẫu khác nhau, phụ thuộc vào số chu trình hoàn thành sau mẫu đạt tới Crossing PoiMN Phương pháp định lượng tương đối sử dụng Ct, mức độ hiệu phản ứng, số chu trình, số giá trị khác để xác định nồng độ DNA mẫu tăng kết thúc PCR Các tính toán sau sử dụng để so sánh mẫu tính tỉ lệ cuối gen đích gen tham chiếu Đường cong nóng chảy (Melting Curves) đỉnh nóng chảy (Melting Peak): Nhiệt độ nóng chảy DNA thay đổi khoảng rộng, phụ thuộc vào trình tự, độ dài, thành phần GC chuỗi Chỉ cần sai khác base hai DNA dẫn tới thay đổi nhiệt độ nóng chảy Chính vậy, số nhiệt độ nóng chảy sử dụng để nhận diện sản phẩm DNA Để phân tích nhiệt độ nóng chảy, phát huỳnh quang mẫu cần theo dõi nhiệt độ máy LightCycler tăng lên chậm Khi nhiệt độ tăng, mức độ phát huỳnh quang giảm Trong trường hợp chất nhuộm SYBR Green I, giảm xảy tách mạch đơn DNA mạch kép, dẫn tới giải phóng phân tử SYBR Green I Bảng 10 Mức gia tăng vòng ngực hít vào (cm) học sinh theo dõi dọc (từ 2010 đến 2012) Tuổi Dân tộc Nam Kinh thành phố (1) Mức tăng Nữ Mức tăng Nam Kinh miền núi (2) Mức tăng Nữ Mức tăng Nam Nùng miền núi (3) Mức tăng Nữ Mức tăng p 12 tuổi X (SD) 13 tuổi X (SD) Năm 2010 Năm 2011 Năm 2012 Năm 2010 Năm 2011 Năm 2012 70,15 73,22 77,84 72,14 75,39 79,62 (6,80) (7,13) (7,15) (7,03) (6,80) (6,71) 3,06 4,62 3,24 4,23 (1,41) (1,05) (1,31) (1,05) 68,47 71,78 75,41 68,92 72,68 76,72 (7,18) (6,79) (6,75) (5,82) (5,51) (5,58) 3,30 3,63 3,76 4,04 (1,75) (1,55) (1,84) (1,62) 64,93 67,35 69,74 68,03 71,01 72,71 (3,77) (3,82) (3,95) (4,67) (4,46) (4,18) 2,42 2,39 2,97 1,70 (1,04) (1,10) (1,20) (1,11) 64,54 67,30 70,49 66,88 69,44 74,26 (4,86) (4,65) (4,63) (4,44) (4,41) (5,05) 2,76 3,19 2,56 4,82 (1,54) (1,40) (1,79) (1,72) 64,53 66,94 69,92 65,62 68,27 70,75 (5,53) (5,80) (5,96) (4,16) (4,11) (3,98) 2,42 2,97 2,64 2,48 (1,25) (1,22) (0,85) (0,92) 64,70 66,94 70,45 65,45 68,25 72,45 (3,77) (3,74) (4,39) (3,34) (3,30) (3,74) 2,24 3,51 2,79 4,21 (1,29) (1,46) (1,52) (1,48) Nam 1-2,1-3** 2-3 > 0,05 1-2,1-3,2-3** 1-2>0,05 1-3,2-3* Nữ 1-3*** 1-2,2-3* 1-2* 1-3,2-3 >0,05 1-2,2-3*** 1-3>0,05 1-2,1-3,23*** 1-2*** 1-3 > 0,05 2-3* “*”: so sánh p tuổi, giới nhóm (* 0,05 1-2,1-3*** 2-3* 1-2,1-3,23** 1-2,1-3, 2-3** “*”: so sánh p tuổi, giới nhóm (* 0,05 1-2,2-3* 1-3 > 0,05 1-2,1-3*** 2-3 > 0,05 1-2,1-3** 2-3 > 0,05 1-2,1-3,2-3 > 0,05 “*”: so sánh p tuổi, giới nhóm (*0,05 1-2,1-3** 2-3>0,05 1-2;2-3>0,05 1-3* 1-2,1-3* 2-3>0,05 1-2,1-3* 2-3*** 1-2,1-3*** 2-3>0,05 “*”: so sánh p tuổi, giới nhóm (*0,05 1-3,2-3** 1-2,1-3>0,05 2-3* 1-2*,1-3*** 2-3>0,05 1-2***,1-3* 2-3>0,05 1-2,1-3, 2-3>0,05 1-2** 1-3,2-3>0,05 “*”: so sánh p tuổi, giới nhóm (*