Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano fenofibrat

Trong dược phẩm, công nghệ nano được đón nhận như một công cụ cơ bản để nghiên cứu và phát triển các hệ đưa thuốc mới, nhằm cải thiện sinh khả dụng, đưa thuốc tới đ ch tác dụng, làm tăng

1 Viện Công nghệ Dƣợc phẩm Quốc Gia

2 Bộ môn Công nghiệp Dƣợc

HÀ NỘI – 2017

LỜI CẢM ƠN

Với sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành

đến ThS Trần Ngọc Bảo - người thầy đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo tận tình,

truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cũng như động viên em trong suốt thời gian thực hiện khóa luận tốt nghiệp

Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến – người thầy đã

định hướng và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành khóa luận

Em xin trân trọng cảm ơn toàn thể các thầy cô giáo, các anh chị nghiên cứu viên, kĩ thuật viên, các bạn sinh viên đang nghiên cứu khoa học và thực hiện khóa luận tốt nghiệp tại Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia, Bộ môn Công Nghiệp Dược, Bộ môn Bào Chế, Bộ môn Vật Lý – Hóa Lý đã giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Nhân dịp này, em cũng xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu Nhà trường và phòng Đào tạo cùng toàn thể các thầy cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội đã dạy

dỗ, giúp đỡ tạo điều kiện cho em trong suốt thời gian học tập tại trường

Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình và bạn bè thân thiết đã luôn động viên, khích lệ và nhắc nhở, là nguồn động lực lớn giúp em vượt qua mọi khó khăn

Do thời gian làm thực nghiệm cũng như kiến thức của bản thân có hạn, khóa luận này còn nhiều thiếu sót Em rất mong nhận được sự góp ý của các thầy cô, bạn

bè để khóa luận được hoàn thiện hơn

Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, tháng 5 năm 2017

Sinh viên

Nguyễn Thị Hải Phượng

MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG TỔNG U N 2

1.1 Tổn qu n về no r t 2

1.1.1 Công thức cấu tạo 2

1.1.2 T nh chất lý hóa 2

1.1.3 Độ n định 2

1.1.4 Đ c điểm dược động học 3

1.1.5 Chỉ định, chống chỉ định 3

1.1.6 Liều lượng và cách dùng 3

1.2 Vài nét về công nghệ n no tron Dược phẩm 4

1.2.1 Khái niệm 4

1.2.2 Phân loại nano polyme mang thuốc 4

1.2.3 Một số phương pháp bào chế tiểu phân nano polyme 5

1.2.4 Tính chất và một số chỉ tiêu đánh giá hệ tiểu phân nano 6

1.2.5 Nhược điểm về độ n định của tiểu phân nano polyme dạng hỗn dịch 8

1.3 Một số phươn pháp rắn hóa hệ tiểu phân nano 8

1.3.1 Đông khô 8

1.3.2 Phun sấy 9

1.3.3 Tạo hạt tầng sôi 9

1.3.4 Phun hỗn dịch nano lên hạt 10

1.3.5 Tạo pellet sử dụng thiết bị đùn – tạo cầu 11

1.3.6 Nạp nano thuốc vào nhựa trao đ i ion 12

1.4 Một số n h n ứu về t n ộ hòa tan của fenofibrat 12

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 Đố tượn 15

2.1.1 Nguyên vật liệu 15

2.1.2 Thiết bị 15

2.2 Nộ un n h n ứu 16

2.3 Phươn pháp n h n ứu 16

2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat 16

2.3.2 Phương pháp rắn hóa nano fenofibrat 17

2.3.3 Các phương pháp đánh giá 20

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24

3.1 Kết quả khảo sát phươn pháp ịnh lượng fenofibrat 24

3.1.1 Phương pháp đo quang ph hấp thụ tử ngoại 24

3.1.2 Phương pháp HPLC 24

3.2 Xây dựng công thức bào chế và khảo sát một số ảnh hưởng tớ ặc tính của tiểu phân nano fenofibrat 25

3.2.1 Lựa chọn phương pháp bào chế 25

3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng một số yếu tố công thức 26

3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố quy trình 30

3.3 Kết quả nghiên cứu bào chế rắn hóa từ hỗn dịch nano fenofibrat 32

3.3.1 Kết quả nghiên cứu phương pháp tạo hạt tầng sôi 32

3.3.2 Kết quả nghiên cứu tạo hạt ướt – tạo hạt tầng sôi 36

3.3.3 Sơ bộ đánh giá KTTP của hệ nano sau khi phân tán lại hạt tầng sôi 38

3.3.4 Đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của hạt tầng sôi 38

3.4 Kết quả tạo hạt m n ược chất bằng nhự tr o ổi ion 39

3.4.1 Bước đầu chọn nhựa phù hợp 39

3.4.2 Ảnh hưởng của thời gian khuấy đến khả năng nạp thuốc 39

3.4.3 Đánh giá khả năng giải phóng của nhựa mang thuốc 39

3.5 Quang phổ hồng ngoại 40

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

EE Hiệu quả tạo nang (Encapsulation efficiency)

GLP – PLGA/CS Hệ tiểu phân nano glipizid – poly

(lactic-co-glycolic) acid/chitosan HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký

lỏng hiệu năng cao)

LC Khả năng nạp thuốc của hệ (Loading capacity)

TCCS Tiêu chuẩn cơ sở

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Phân loại nano polyme mang thuốc 4

Bảng 2.1 Nguyên liệu được sử dụng trong quá trình thực nghiệm 15

Bảng 2.2 Công thức bào chế tiểu phân nano FB 16

Bảng 2.3 Thành phần bột kép 18

Bảng 3.1 Kết quả đo KTTP, PDI, thế zeta của 2 phương pháp (n = 3) 26

Bảng 3.2 Kết quả đo KTTP, PDI, thế zeta của CT N1-N5 27

Bảng 3.3 Kết quả đánh giá một số đ c tính tiểu phân nano của CT M1-M9 28

Bảng 3.4 Kết quả đo KTTP và PDI của các công thức N6-N12 (n = 3) 31

Bảng 3.5 Kết quả thử độ hòa tan khảo sát ảnh hưởng của dịch phun (n = 3) 34

Bảng 3.6 Kết quả thử độ hòa tan khảo sát ảnh hưởng của NaLS 35

Bảng 3.7 Kết quả thử độ hòa tan của C6, C7, C8, C9 36

Bảng 3.8 Kết quả đánh giá t nh chất hạt của ống ly tâm công thức C8 38

Bảng 3.9 Mối quan hệ giữa thời gian phản ứng với khả năng nạp thuốc 39

Bảng 3.10 Kết quả thử hòa tan của nhựa Anhui và nguyên liệu 40

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Cấu trúc hóa học của fenofibrat 2

Hình 1.2 Hình ảnh siêu vi cầu và siêu vi nang 4

Hình 1.3 Hệ màng bao của một số nano polyme mang thuốc 4

Hình 1.4 Hệ liên kết nano polyme hình thành qua cầu liên kết hóa học 4

Hình 1.5 Thiết bị tầng sôi thường dùng 10

Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế tiểu phân nano 17

Hình 2.2 Sơ đồ quy trình tạo hạt kép 18

Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa độ hấp thụ và nồng độ FB 24

Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa diện tích pic và nồng độ FB 25

Hình 3.3 Mối quan hệ giữa tỷ lệ dược chất : polyme với KTTP, PDI và thế zeta 27

Hình 3.4 Ảnh hưởng của thể tích pha pha loãng ở 3 tỷ lệ FB : EPO 29

Hình 3.5 Ảnh hưởng của thời gian khuếch tán và bốc hơi dung môi 30

Hình 3.6 Phần trăm giải phóng FB từ hạt có công thức C1, C3, C4, C5 35

Hình 3.7 Phần trăm FB giải phóng từ hạt có công thức C6, C7, C8, C9 37

Hình 3.8 Ph hồng ngoại của nguyên liệu FB, EPO, tiểu phân nano đông khô, hỗn hợp vật lý, hạt công thức C8 40

ĐẶT VẤN ĐỀ

Những năm gần đây, công nghệ nano đã thu hút được sự quan tâm của cộng đồng khoa học và công nghệ trên phạm vi toàn cầu Với k ch thước siêu nhỏ, nano tạo ra nhiều tính chất mới so với nguyên liệu ban đầu và được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực của đời sống Trong dược phẩm, công nghệ nano được đón nhận như một công cụ cơ bản để nghiên cứu và phát triển các hệ đưa thuốc mới, nhằm cải thiện sinh khả dụng, đưa thuốc tới đ ch tác dụng, làm tăng hiệu quả điều trị của thuốc [13]

Fenofibrat là một trong những thuốc hạ lipid máu được sử dụng ph biến tại nhiều quốc gia So với các dẫn chất cùng nhóm, hoạt chất này có nhiều ưu điểm như tác dụng dược lý cao, ít tác dụng phụ và có khả năng phối hợp với các thuốc hạ lipid máu khác [18] Tuy nhiên, sinh khả dụng của FB thường thấp và không n định do

độ hòa tan kém Nắm bắt được hạn chế đó, nghiên cứu bào chế tiểu phân nano polyme FB với mục đ ch ch nh cải thiện độ hòa tan làm tăng sinh khả dụng được đề tài ứng dụng

Hệ nano sau khi bào chế thường g p nhiều nhược điểm về độ n định do khả năng hút ẩm lớn, độ trơn chảy kém, dễ kết tụ hay nhiễm vi sinh vật, đ c biệt ở dạng lỏng Chính vì thế, việc rắn hóa hệ tiểu phân nano là bước quan trọng để cải thiện

độ n định, cũng như kết hợp được những ưu điểm của tiểu phân nano (tăng khả năng hòa tan và sinh khả dụng [13]) với dạng bào chế rắn (tính n định cao, tăng khả năng tuân thủ điều trị của bệnh nhân [7]) Do đó, chúng tôi tiến hành đề tài

“Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano fenofibrat” với những mục tiêu sau:

1 Xây dựng được công thức, quy trình bào chế tiểu phân nano fenofibrat và đánh giá một số đặc tính của tiểu phân nano

2 Bước đầu nghiên cứu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano fenofibrat

CHƯƠNG TỔNG U N 1.1 Tổn qu n về no r t

1.1.1 ng thức c u t o

Hình 1.1 Cấu trúc hóa học của fenofibrat

- Công thức phân tử: C20H21ClO4

- Khối lượng phân tử: 360,8

- Tên khoa học:

1-methylethyl 2-[4-(4-clorobenzoyl) phenoxy]-2-methylpropanoat [4], [60]

1.1.2 nh ch t h a

- Cảm quan: Bột kết tinh trắng ho c gần như trắng [4]

- T nh chất lý học: thực tế không tan trong nước (< 0,5mg/l), tan tốt trong methylen clorid, khó tan trong ethanol 96% [4] Fenofibrat thân dầu, trung

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao [4]

Phương pháp đo mật độ quang hấp thụ [60]

1.1.3 ộ n đ nh

Bền vững ở nhiệt độ thường [37], [60]

1.1.4 ặc điểm dược động h c

FB được hấp thu ngay ở đường tiêu hóa cùng với thức ăn Hấp thu thuốc bị giảm nhiều nếu uống sau khi nhịn ăn qua đêm Thuốc nhanh chóng thủy phân thành acid fenofibric có hoạt tính; chất này gắn nhiều vào albumin huyết tương và có thể đẩy các thuốc kháng vitamin K ra khỏi vị trí gắn Nồng độ đỉnh trong huyết tương xuất hiện khoảng 5 giờ sau khi uống thuốc Ở người có chức năng thận bình thường, nửa đời trong huyết tương vào khoảng 20 giờ nhưng thời gian này tăng lên rất nhiều ở người mắc bệnh thận và FA t ch lũy đáng kể ở người bệnh suy thận uống fenofibrat hằng ngày FA đào thải chủ yếu theo nước tiểu (70% trong vòng 24 giờ, 88% trong vòng 6 ngày), chủ yếu dưới dạng liên hợp glucuronic, ngoài ra còn có FA dưới dạng khử và chất liên hợp glucuronic của nó [2]

1.1.5 h đ nh, chống ch đ nh

 Chỉ định:

FB được sử dụng trong điều trị rối loạn lipoprotein huyết các typ IIa, IIb, III,

IV và V, phối hợp với chế độ ăn [2]

- Người lớn: 300 mg/ngày (1 viên 300 mg, uống vào một bữa ăn ch nh ho c uống

3 lần, mỗi lần 1 viên 100 mg cùng với các bữa ăn)

- Trẻ > 10 tu i: cần nghiên cứu kỹ để xác định căn nguyên ch nh xác của tăng lipid máu ở trẻ Có thể điều trị thử kết hợp với một chế độ ăn được kiểm soát

ch t chẽ trong vòng 3 tháng Liều tối đa khuyên dùng là 5 mg/kg/ngày Trong một số trường hợp đ c biệt (tăng lipid máu rất cao kèm theo dấu hiệu lâm sàng của vữa xơ động mạch, có đám đọng xanthom…) thì có thể dùng liều cao hơn nhưng phải do thầy thuốc chuyên khoa chỉ định [2]

1.2 Vài nét về công nghệ n no tron Dƣợc phẩm

bị nano dùng chẩn đoán và điều trị bệnh [25], [31]

1.2.2 Phân o i nano po yme mang thuốc

Theo cơ chế mang dược chất có thể chia làm ba nhóm [13]

Bảng 1.1 Phân loại nano polyme mang thuốc

Hệ cốt, tiểu phân nano

dược chất phân tán trong

giá mang polyme: Siêu vi

cầu (nanospheres), siêu vi

nang (nanocapsules), tiểu

phân lipid rắn

Hệ màng bao, polyme bao bên ngoài tiểu phân nano dược chất: Liposome, micelles, denderime, ống carbon

Hệ liên kết, polyme gắn trực tiếp với phân tử dược chất qua các cầu liên kết hóa học

1.2.3 Một số phương pháp bào chế tiểu phân nano po yme

Dựa theo quy trình bào chế, có thể chia các phương pháp bào chế nano polyme làm 2 loại: 1 giai đoạn và 2 giai đoạn

- Phương pháp 1 giai đoạn: dựa trên sự kết tủa của polyme từ một dung dịch,

ho c sự kết tập tự phát của các đại phân tử để hình thành các nanogel ho c các phức hợp của các chất đa điện phân (polyelectrolyte)

- Phương pháp 2 giai đoạn: giai đoạn đầu chung cho các phương pháp là bào chế một nhũ tương và giai đoạn 2 là giai đoạn hình thành nên tiểu phân nano Giai đoạn 2 có thể được thực hiện dựa trên phản ứng polyme hoá các monome ho c các quá trình kết tủa, gel hoá của các polyme [61]

Các polyme được sử dụng có thể là polyme tự nhiên, các polyme t ng hợp, có sẵn ho c tạo thành từ các monome Tuy nhiên, do các polyme tạo thành từ phản ứng polyme hoá thường ít phân huỷ sinh học, các monome tồn dư và chất diện hoạt được dùng với lượng lớn có thể gây độc và đòi hỏi quá trình tinh chế phức tạp [61]

Do đó, hiện nay các nghiên cứu sử dụng chủ yếu phương pháp đi từ các polyme có sẵn (các eudragit, các polyme phân huỷ sinh học như PLGA, PLA, PCL….) [39] Một số phương pháp thường được sử dụng trong bào chế tiểu phân nano polyme

từ các polyme t ng hợp có sẵn như [40], [41], [61]:

- Nhũ hoá bốc hơi dung môi

- Tự nhũ hoá do khuếch tán dung môi

- Thay thế dung môi

- Nhũ hoá khuếch tán dung môi

1.2.3.1 h g h hũ hóa bốc h i du g môi

Nguyên tắc: Dung dịch polyme và dược chất trong dung môi không tan trong nước (hay dùng methylen clorid, dichloromethan…) được nhũ hoá vào pha ngoại chứa chất n định dưới tác động của lực cơ học Dung môi hữu cơ được bốc hơi khỏi hệ nhờ nhiệt ho c khuấy trộn liên tục, tiểu phân nano hình thành do sự thay đ i dung môi [61]

Trong phương pháp nhũ hoá bốc hơi dung môi, mỗi tiểu phân được hình thành

từ một giọt pha dầu và k ch thước tiểu phân phụ thuộc vào k ch thước giọt pha dầu [46]

Ưu điểm: Áp dụng được với cả dược chất thân nước và thân dầu [61]

Nhược điểm: Khó nâng quy mô do cần nhiều năng lượng trong quá trình đồng nhất Giọt pha dầu dễ bị kết tụ lại trong quá trình bốc hơi dung môi làm tăng KTTP [47], [61]

1.2.3.2 h g h hũ hóa khuếch tán dung môi

Dung dịch dược chất trong dung môi hữu cơ tan một phần trong nước (hay dùng ethyl acetat, alcol benzylic…) được nhũ hoá vào 1 dung dịch chứa chất n định đã được bão hoà trước đó bằng dung môi hữu cơ Nhũ tương được phối hợp với 1 thể

t ch nước lớn hơn và được khuấy trộn nhẹ nhàng, dung môi khuếch tán từ giọt pha dầu vào môi trường, hình thành các tiểu phân nano polyme [39], [40], [41], [47] Các nghiên cứu cho thấy quá trình hình thành tiểu phân nano từ giọt pha dầu không thể giải th ch được bằng 1 cơ chế đơn thuần mà là sự kết hợp của nhiều cơ chế khác nhau liên quan đến rất nhiều yếu tố trong quá trình bào chế Một giọt pha dầu có thể tạo ra một ho c vài tiểu phân nano [39], [40]

Ưu điểm: Dễ kiểm soát về m t k ch thước, dễ nâng quy mô, độ l p lại giữa các

lô mẻ cao [61]

Nhược điểm: Dược chất bị thất thoát ra ngoài môi trường Lượng nước lớn, gây khó khăn trong quá trình thu hồi sản phẩm [61]

1.2.4 nh ch t và một số ch tiêu đánh giá hệ tiểu phân nano

Hệ tiểu phân nano là hệ siêu vi tiểu phân, mắt thường không nhìn thấy được Trong khi đó, các tính chất và đ c điểm của tiểu phân lại gắn ch t chẽ với sự phân

bố và tác dụng trong cơ thể Vì vậy, kiểm soát và đánh giá được tính chất của hệ tiểu phân trong quá trình bào chế, sử dụng hệ tiểu phân nano là hết sức quan trọng [13]

1.2.4.1 Hình thái bên ngoài

Đây là thông số quan trọng ảnh hưởng đến đ c tính và tác dụng của hệ như hình dáng, hình thái bề m t, phân bố không gian Hình thái bên ngoài của tiểu phân nano được quan sát bằng các kính hiển vi điện tử và quang ph hiện đại như:

Kính hiển vi điện tử quét (SEM: Scanning electron microscopy) là một phương pháp để quan sát trực tiếp các tiểu phân nano, chụp được ảnh tiểu phân có kích thước 10 nm, phóng đại từ 10 – 300.000 lần, cung cấp thông tin về sắp xếp cấu trúc, phân bố không gian, hình ảnh bề m t tiểu phân [13], [31]

Hiển vi điện tử truyền qua (TEM: Transmission electron microscopy) cho hình ảnh rõ hơn so với SEM về hình thái, cấu trúc tinh thể, số lượng và hướng của tiểu phân, có thể xác định được vị trí tiểu phân trong tế bào [13]

Ph cộng hưởng từ hạt nhân có thể ghi hình ảnh ba chiều của tiểu phân, có thể chụp tiểu phân 1 nm [13]

1.2.4.2 Phân bố kích th ớc tiểu phân

Yêu cầu hệ có phân bố kích thước tiểu phân càng hẹp càng tốt Trên thực tế, đây

là tiêu chí rất khó đạt được, nhất là sự đồng nhất về phân bố k ch thước giữa các lô

mẻ

K ch thước tiểu phân có thể đo trực tiếp bằng một số thiết bị chụp hình ảnh nêu trên Xác định KTTP trung bình và chỉ số đa phân tán PDI (polydiversity index): PDI từ 0,1 đến 0,25 được coi là phân bố hẹp, trên 0,5 là phân bố rộng [13]

các màng tế bào có điện tích âm nên thế zeta có thể ảnh hưởng tới xu hướng thấm của tiểu phân nano qua màng Với thế zeta dương thì khả năng biểu thị độc tính nhiều hơn do có thể gây vỡ thành tế bào [22]

1.2.4.4 X c định tính chất hệ tiểu phân nano

Quang ph hồng ngoại cung cấp thông tin về cấu trúc nguyên tử ở trạng thái rắn khi nghiên cứu sự chuyển động của các phân tử Bằng cách so sánh ph hồng ngoại của dược chất tinh khiết, tá dược và hệ tiểu phân nano dạng đông khô, có thể xác định được sự tương tác giữa dược chất và tá dược trong hệ tiểu phân nano [5]

1.2.5 Nhược điểm về độ n đ nh của tiểu phân nano po yme d ng hỗn d ch

Việc bảo quản tiểu phân nano dưới dạng hỗn dịch g p nhiều nhược điểm về độ

- Các tiểu phân nano có thể bị kết tụ, sa lắng

- Khó khăn trong quá trình phân liều

Những nhược điểm trên giúp khẳng định được vai trò quan trọng của việc rắn hóa hệ tiểu phân nano: kết hợp được những ưu điểm của hỗn dịch nano (hệ nano dạng lỏng – tăng khả năng hòa tan và sinh khả dụng [13]) với dạng bào chế rắn (thuận tiện trong kiểm soát quá trình, tính n định cao và tăng khả năng tuân thủ điều trị của bệnh nhân [7])

1.3 Một số phươn pháp rắn hóa hệ tiểu phân nano

1.3.1 ng kh

Đông khô là quá trình làm khô chế phẩm trong các điều kiện đ c biệt, trong đó chế phẩm được đông lạnh sau đó loại dung môi bằng cách thăng hoa trực tiếp (giai đoạn làm khô sơ cấp) và giải hấp phụ (giai đoạn làm khô thứ cấp) để ngăn ch n các phản ứng hoá học và sự phát triển của vi sinh vật từ đó tăng độ n định của chế phẩm

Đông khô là phương pháp thường được sử dụng để loại nước và tăng độ n định cho hệ nano Ngoài ra, bột đông khô còn được sử dụng để xác định hiệu suất quá trình và chuẩn bị mẫu dùng trong các phương pháp phân t ch như DSC, FT–IR, nhiễu xạ tia X hay quan sát hình thái (chụp SEM) Tuy vậy, bản thân quá trình đông khô cũng sinh ra các điều kiện khắc nghiệt có thể gây mất n định và thay đ i các

đ c tính hệ nano Do vậy, thành công của quá trình đông khô phụ thuộc rất nhiều vào thành phần công thức và các thông số kỹ thuật trong quá trình đông khô [16] Tại đại học Dược Hà Nội, phương pháp đông khô đã được sử dụng trong nhiều nghiên cứu về hệ tiểu phân nano, có thể kể đến như hệ nano GLP – PLGA/CS [11] hay hệ nano piroxicam [9] Hỗn dịch sau khi phân tán lại vẫn có KTTP nhỏ và đồng nhất [11]

1.3.2 Phun s y

Nhiều nghiên cứu đã thành công trong việc sử dụng phương pháp phun sấy để tăng độ n định của tiểu phân nano So với đông khô, phun sấy có một số ưu điểm như thao tác nhanh, chi ph tương đối thấp, phù hợp với quy mô công nghiệp, bột phun sấy có thể dùng dưới dạng hỗn dịch ho c đưa vào viên nén, viên nang Bên cạnh đó, hiện nay một số phương pháp phun sấy cải tiến đã xuất hiện, góp phần cải thiện những hạn chế của phun sấy như cần gia nhiệt, có thể tác động lên tính toàn vẹn của tiểu phân nano và dược chất [61]

Nghiên cứu của Dengning Xia và cộng sự (2016) nhận định phun sấy là một phương pháp khả thi để củng cố độ n định của hệ nano lipid FB cho dạng bột Các tiểu phân nano lipid có thể giữ được dược chất và thời gian giải phóng thuốc kéo dài sau khi phun sấy [64] Theo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học của Nguyễn Cảnh Hưng: bột phun sấy nano azithromycin được phân tán trở lại vào nước bằng máy lắc xoáy tạo hỗn dịch đục nhẹ và đo KTTP bằng công cụ ph tương quan photon cho kết quả: KTTP trung bình của hệ tăng lên (từ hơn 200nm đến hơn 400nm) chứng tỏ

đã có sự kết tụ của các tiểu phân nano [12]

1.3.3 o h t tầng s i

Các thiết bị tạo hạt kiểu tầng sôi được phát triển và ứng dụng trong công nghiệp dược từ những năm 1960 Phương pháp này có nhiều ưu điểm như hạn chế bụi, tạo hạt nhanh, hao phí và chi phí lao động thấp, thuận lợi để tự động hóa quá trình [3] Trong quá trình tạo hạt tầng sôi, sự kết tập tiểu phân chất rắn và quá trình sấy khô hạt được tiến hành đồng thời trên cùng một thiết bị Khối bột tạo hạt được đảo trộn bởi khí nóng Dịch tạo hạt được phun vào khối bột, làm ẩm và tạo cầu nối lỏng giữa các tiểu phân chất rắn Dưới tác dụng của kh nóng, dung môi bay hơi, tá dược dính tạo thành cầu nối rắn liên kết các tiểu phân chất rắn lại với nhau, tạo thành hạt [52]

1.3.4 Phun hỗn d ch nano ên h t

 C chế bao tầng sôi:

Trong quá trình bao tầng sôi, kh nóng được th i từ dưới lên qua một tấm phân phối kh đ t ở đáy, các nhân bao được luồng kh này đảo trộn và th i từ dưới lên đi qua vùng phun dịch, dung dịch ho c hỗn dịch bao được phân tán thành các giọt chất lỏng rất nhỏ bằng súng phun và bám vào nhân bao Các giọt phun sẽ thấm ướt và

lan rộng ra trên bề m t nhân bao, hợp nhất thành lớp màng lỏng Nhân bao tiếp tục bị đẩy lên phía trên và rơi xuống trong buồng khí nóng, dung môi bay hơi nhanh, các tiểu phân chất bao hợp nhất lại thành lớp màng liên tục phủ trên bề

m t nhân bao [3]

Hình 1.5 Thiết bị tầ g sôi th ờng dùng [8]

 Một số nghiên cứu dù g h g h bao tầng sôi:

Tác giả Zhiqiang Tian và cộng sự (2013) đã nghiên cứu phun hệ nano lipid FB lên pellet nhân sử dụng máy bao tầng sôi Kết quả cho thấy phương pháp này phù

hợp để rắn hóa hệ nano lipid: hạt thu được có đ c tính vật lý tốt, không tồn tại FB dạng tinh thể trong pellet (theo kết quả phân tích nhiệt vi sai và nhiễu xạ tia X) Pellet tạo thành có KTTP nano lipid trung bình là 227,5 nm, lớn hơn 94,1 nm so với tiểu phân nano lipid ban đầu Tuy nhiên, kết quả thử giải phóng nano lipid ban đầu

và pellet cho kết quả tương đương [55]

Tác giả Yang Lei và cộng sự (2011) đã tiến hành nghiên cứu phun hệ tự nhũ hóa lỏng lên pellet nhân và kết luận phương pháp này tiềm năng để rắn hóa hệ tự nhũ hóa [36]

1.3.5 o pe et sử dụng thiết b đùn – t o cầu

Hỗn dịch nano lỏng được phối hợp với tá dược rắn (có thể thêm tá dược dính thích hợp) thu được khối ẩm Khối ẩm được đem đùn tạo sợi và vo tạo cầu thu được pellet [58], [63]

Dạng bào chế pellet có nhiều ưu điểm như: phân tán rộng trong đường tiêu hóa, giảm kích ứng, thời gian lưu ở dạ dày hằng định Đ c điểm này giúp tối đa hóa sự hấp thu thuốc, đồng thời giảm sự biến đ i bất thường của nồng độ đỉnh của thuốc trong huyết tương Kết quả làm giảm tác dụng phụ tiềm ẩn mà không giảm sinh khả dụng của thuốc Thêm vào đó, phương pháp đùn tạo cầu dễ dàng sản xuất với quy

mô lớn mang lại hiệu quả cao [15]

Tác giả Shashank Tummala và cộng sự (2015) đã nghiên cứu thành công pellet bằng phương pháp đùn – tạo cầu từ nano 5-FU bao chitosan (bào chế bằng phương pháp nhũ hóa bốc hơi dung môi) Pellet tạo thành bền và giải phóng kéo dài 24 giờ Điều này dẫn đến giảm độc tính cho các tế bào khỏe vì phần lớn thuốc được định vị trong vùng đại tràng, nên có thể giảm liều dùng cho bệnh nhân [58] Tại Đại học Dược Hà Nội, tác giả Ngô Thị Hằng cũng nghiên cứu bào chế thành công pellet chứa hệ tự nhũ hóa artesunat bằng phương pháp đùn tạo cầu và đánh giá được một

số đ c tính của pellet bào chế được: hình thức cầu, đều, bề m t nhẵn; hiệu suất tạo pellet cao trên 85%; hàm lượng dược chất và k ch thước tiểu phân gần như không thay đ i nhiều và độ hòa tan sau 20 phút đạt gần 95% [10]

1.3.6 N p nano thuốc vào nhựa trao đ i ion

Nhựa trao đ i ion là các polyme liên kết chéo, không tan trong nước, mang nhiều nhóm chức tạo muối tại các vị trí liên tiếp trên chuỗi polyme [50], [51] Nhựa trao đ i ion được chia thành 2 loại cơ bản: nhựa trao đ i cation và anion [49], [50], [51]

Ở mức độ phân tử, trong cấu trúc nhựa trao đ i ion có các nhóm liên kết phân bố dọc theo các chuỗi polyme tại các vị tr xác định Do đó, cơ chế hấp phụ cũng giữ một vai trò nhất định trong việc hình thành phức hợp nhựa trao đ i ion – dược chất

Có 2 kỹ thuật cơ bản để để nạp thuốc vào nhựa:

- Kỹ thuật mẻ: nhựa sau khi xử lý được khuấy trộn với hỗn dịch nano trong những điều kiện cụ thể đến khi quá trình trao đ i đạt trạng thái cân bằng [49], [51]

- Kỹ thuật cột: không thường được ứng dụng trong bào chế, thường được sử dụng trong tinh chế, phân tích kiểm nghiệm

Tác giả Fatima S.D., Komal S1 và cộng sự đã thực hiện nghiên cứu bào chế viên nhai che vị đắng của Clarithromycin từ phức hợp nhựa – dược chất Kết quả thử hòa tan cho thấy sau 6 giờ dược chất được giải phóng tối đa và gần như không gây đắng (do phức hợp tạo thành ức chế sự giải phóng thuốc trong nước bọt) [23]

1.4 Một số n h n ứu về t n ộ hòa tan của fenofibrat

Fenofibrat là hoạt chất thuộc nhóm acid fibric, ra đời vào năm 1975 và được đưa vào sử dụng từ những năm 90 thế kỷ XX FB có nhiều ưu điểm hơn hẳn các dẫn chất khác trong nhóm về tần suất và cường độ gây ra tác dụng phụ, đ c biệt là không gây tương tác dược động học với các dẫn chất thuộc nhóm statin [20], [24] Điều đó rất thuận lợi khi sử dụng kết hợp 2 loại thuốc điều trị rối loạn tăng mỡ máu theo cơ chế riêng biệt làm tăng hiệu quả điều trị mà lại rất an toàn cho người sử dụng [18], [59] Ngoài tác dụng làm giảm triglycerid, LDL – C (cholesterol xấu), cholesterol toàn phần (TC) và apolipoprotein B, FB còn tăng đáng kể HDL – C (cholesterol tốt) và apolipoprotein A [42], [56] Vì các ưu điểm vượt trội đó, hiện

nay FB được dùng rất ph biến và là một trong những thuốc hạ mỡ máu được kê đơn nhiều nhất

Tuy nhiên, FB có độ tan thấp, tốc độ hòa tan chậm, sự hấp thu phụ thuộc vào các thể, chế độ ăn và tình trạng tháo rỗng dạ dày Nồng độ tối đa của FA trong máu có thể dao động từ 0,5 đến 10 g/ml Sự dao động lớn của nồng độ thuốc trong máu không những làm sinh khả dụng không n định, hiệu quả điều trị không n định mà còn gây tăng tần suất xuất hiện và cường độ các tác dụng phụ của thuốc [9] Do vậy, tăng sinh khả dụng bằng cách tăng độ hòa tan của FB là đề tài được nhiều nhà khoa học quan tâm

Để cải thiện khả năng hòa tan và nâng cao sinh khả dụng của FB, đã có các nghiên cứu bào chế theo phương pháp khác nhau nhằm tạo ra dạng bột siêu mịn FB Tác giả Vogt M và cộng sự (2008) đã thực hiện nghiên cứu biện pháp làm tăng độ tan của FB bằng phương pháp tạo vi hạt, nghiền có phối hợp chất diện hoạt và phun sấy Bằng phương pháp phân t ch nhiệt vi sai và nhiễu xạ tia X xác định được có sự chuyển từ dạng kết tinh sang dạng vô định hình của FB khi áp dụng phương pháp phun sấy [62]

Để giảm liều dùng của FB và loại bỏ sự phụ thuộc vào tình trạng tháo rỗng dạ dày (không phụ thuộc sự có m t của thức ăn) các nghiên cứu bào chế FB dưới dạng nano đã được công bố Một số dạng thuốc mới bào chế trên cơ sở các tiểu phân nano của FB xuất hiện như: TriCor® của hãng Abbott được FDA chứng nhận vào 11/2004 với phương pháp chế tạo xay nghiền, dạng bào chế là viên nén hàm lượng

48 mg và 145 mg Các chế phẩm này có SKD không phụ thuộc vào thức ăn [1] Bằng kỹ thuật tạo hệ phân phối các dược chất không tan dạng vi cầu, viên nén fenofibrat 160 mg có sinh khả dụng không phụ thuộc vào tình trạng tháo rỗng của

dạ dày Các tác giả Guivarc’ch PH., Vachon MG và Najib J đã nghiên cứu ảnh hưởng của thức ăn đến sinh khả dụng của viên bào chế từ vi cầu fenofibrat, kết quả cho thấy hai nhóm dùng thuốc khi đói và no có các thông số dược động học tương đương nhau [30], [42] Tác giả Hanafy và cộng sự (2007) nghiên cứu dạng hỗn dịch nano DissoCubes với cỡ hạt khoảng 338 nm và dạng nano lipid rắn cỡ hạt < 58 nm

là tương đương sinh khả dụng Cả hai dạng này đều có sinh khả dụng cao hơn dạng hỗn dịch vi hạt có k ch thước hạt < 5 mm [33] Theo tác giả Yaping Chen và cộng

sự, kết quả mẫu liposome sử dụng lecithin cho sinh khả dụng lớn gấp 4 lần so với viên nang bào chế từ bột siêu mịn FB [21] Tác giả Gogotsi và cộng sự đã nghiên cứu phương pháp nghiền bi tạo nano FB với muối ăn mịn k ch thước 300 m đã tạo được siêu vi hạt FB k ch thước giảm xuống dưới 100 nm [38] Tác giả Tran Tuan Hiep đã nghiên cứu bào chế được nano lipid fenofibrat làm tăng khả năng thẩm thấu của thuốc qua hàng rào tiêu hóa Và đã chọn được công thức tối ưu hóa để đạt kích thước hạt nhỏ (~ 150 nm), PDI nhỏ (< 0,4), giải phóng tốt (khoảng 60% thuốc đã được giải phóng khỏi công thức trong 4 giờ đầu tiên, tiếp theo là sự giải phóng tương đối chậm đến 24 giờ), độ n định vật lý tốt, hiệu suất nạp thuốc cao Hơn nữa còn chứng minh được có sự tăng cường rõ rệt tỷ lệ và mức độ sinh khả dụng thuốc [57]

Tác giả Võ Quốc Ánh, Hoàng Kiều Vân (2010) đã nghiên cứu thành công viên nén FB 160 mg từ hỗn dịch đ c vi hạt fenofibrat có độ hòa tan trong môi trường SLS 1% sau 20 phút đạt khoảng 98%, tương đương viên Lypanthyl supra 160 mg; cao hơn dạng bột siêu mịn fenofibrat (đạt khoảng 33%) và dạng bột nguyên liệu fenofibrat (đạt khoảng 8%) [1], [14]

Hiện nay, tại Việt Nam đã có những nghiên cứu làm tăng độ hòa tan và sinh khả dụng của FB sử dụng công nghệ nano Tuy nhiên, chưa thấy nghiên cứu nào rắn hóa

hệ tiểu phân nano sử dụng phương pháp tạo hạt tầng sôi Do vậy, sau khi xây dựng được công thức, quy trình bào chế hệ tiểu phân nano FB và đánh giá một số đ c tính của hệ, khóa luận này bước đầu nghiên cứu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano FB

theo phương pháp đã đề cập

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đố tượn

2.1.1 Nguyên v t iệu

Bảng 2.1 Nguyên liệu đ ợc sử dụng trong quá trình thực nghiệm

5 Natri lauryl sulfat Trung Quốc USP 36 – NF 31

6 Natri starch glycolat Trung Quốc USP 36 – NF 31

7 Polyvinyl alcol (205) Singapore USP 36 – NF 31

8 Ethyl acetat Trung Quốc Tinh khiết hóa học

11 Kali dihydro phosphat Đức Tinh khiết phân tích

2.1.2 hiết b

- Máy đo thế Zeta và xác định phân bố KTTP Zetasizer NanoZS90 (Anh)

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC Agilent 1260 (Mỹ)

- Máy siêu âm cầm tay Vibra Cell, Sonics & Materials, INC (Mỹ)

- Ống ly tâm chứa màng siêu lọc 10000Da, Millipore, Billerica, MA (Mỹ)

- Tủ lạnh sâu Unicryo (Mỹ)

- Máy tầng sôi Mini – Glatt (Đức)

- Máy đông khô Alpha 1-2 LDplus, Martin Christ G GmnH (Đức)

- Máy quang ph hồng ngoại FT-IR 6700 JASCO (Nhật Bản)

- Máy quang ph UV-VIS Optima SP-3000 nano (Nhật Bản)

- Máy lắc Vortex Mixter VM300 (Đức)

- Máy lọc nước PURELAB classic UV, ELGA (Anh)

- Máy đo pH SATORIUS TE 412 (Đức)

- Máy đo độ trơn chảy ERWEKA GWF (Đức)

- Máy đo tỷ trọng biểu kiến ERWEKA SMV (Đức)

2.2 Nộ un n h n ứu

- Xây dựng quy trình bào chế tiểu phân nano FB Đánh giá được ảnh hưởng của một số yếu tố tới đ c tính của tiểu phân nano

- Bước đầu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano FB theo 3 phương pháp:

(i) Tạo hạt tầng sôi

(ii) Tạo hạt kép: tạo hạt ướt – tạo hạt tầng sôi

(iii) Tạo hạt mang dược chất bằng nhựa trao đ i ion

Đánh giá một số đ c tính của hạt: định lượng, khả năng giải phóng, KTTP nano sau khi phân tán lại, tương tác giữa dược chất và các tá dược

2.3 Phươn pháp n h n ứu

2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat

Qua tham khảo đề tài “Nghiên cứu bào chế nano azithromycin bằng phương pháp nhũ hóa khuếch tán dung môi” của dược sĩ Nguyễn Cảnh Hưng [12], xây dựng phương pháp bào chế tiểu phân nano FB như sau:

Dung dịch PVA 0,5% (bão hoà với 5 ml ethyl acetat) 50 ml

Dung dịch PVA 0,1% (pha pha loãng) Thay đ i

2.3.1.2 Quy trình bào chế:

- Chuẩn bị pha dầu: hoà tan FB và polyme Eudragit EPO vào ethyl acetat

- Chuẩn bị pha nước: dd polyvinyl alcol (PVA) nồng độ 0,5% Trong đó:

 Phương pháp 1: dd PVA không có EA

 Phương pháp 2: dd PVA bão hòa bằng EA

- Giai đoạn nhũ hoá: pha dầu được nhỏ từ từ vào pha nước (dung dịch PVA 0,5%) Thiết bị đồng nhất là máy siêu âm cầm tay Trong quá trình đồng nhất duy trì nhiệt độ 5 – 10oC bằng nước đá kết hợp khuấy từ

- Khuếch tán dung môi: phối hợp nhanh nhũ tương thu được với pha pha loãng (dung dịch PVA 0,1%) được khuấy trộn bằng khuấy từ

- Bốc hơi dung môi: tiếp tục khuấy từ nhẹ nhàng để bốc hơi dung môi hữu cơ

- Sản phẩm được đánh giá các chỉ tiêu và rắn hóa

- Chuẩn bị bột kép: Rây, cân, trộn bột kép với các thành phần trong bảng 2.3 Đưa hỗn hợp vào buồng bao

Bảng 2.3 Thành phần bột kép

Thành phần Khố lƣợng (g)

Natri starch glycolat 0,4

- Phun tá dược dính đã chuẩn bị vào buồng bao với các thông số như sau:

 Lưu lượng khí vào: 9,0 – 20,0 m3

 Đường kính vòi phun: 0,5 mm

 Thời gian giũ: 4 giây/lần

- Sau khi phun hết tá dược dính, sấy hạt thêm 10 phút rồi lấy ra để bảo quản trong túi nilon kín

2.3.2.2 Tạo hạt ớt – tạo hạt tầng sôi

 Thiết bị: Máy tầng sôi Mini – Glatt được lắp đ t với súng phun từ trên xuống

 Sơ đồ quy trình:

 Mô tả cách tiến hành:

- Bước 1: Tạo hạt ướt

 Chuẩn bị tá dược dính: với PP 1 là dd PVP K30 10% trong nước, PP 2 là

HD nano tương ứng 0,75 g FB được bào chế như trình bày ở mục 2.3.1

 Chuẩn bị bột kép: Nghiền, rây ( = 0,355 mm), cân, trộn bột kép với thành phần như bảng 2.3

 Tạo hạt: Nhào ẩm khối bột với lượng tá dược dính vừa đủ, ủ khối bột ẩm trong 15 – 30 phút Xát hạt ướt qua rây 1,0 mm, sấy ở 50oC/2 giờ Sửa hạt

và chọn hạt trong khoảng k ch thước từ 0,8 – 1,0 mm

 Bảo quản trong túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến khi sử dụng

- Bước 2: Tạo hạt tầng sôi

 Chuẩn bị dịch phun: với PP 1 là hỗn dịch nano tương ứng với 0,75 g FB; với PP 2 là phần hỗn dịch nano còn lại sau tạo hạt ướt Phân tán 0,15 g Aerosil vào hỗn dịch nano Rây hỗn dịch qua rây 0,125 mm

 Chuẩn bị nhân bồi: là hạt ướt tạo thành ở bước 1

 Tạo hạt tầng sôi: phun dịch với các thông số như mục 2.3.2.1 Sau khi hết dịch, sấy hạt thêm 10 phút

 Bảo quản trong túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến khi đánh giá các chỉ tiêu chất lượng của hạt

2.3.2.3 Tạo hạt ma g d ợc chất bằng nhựa trao đổi ion

- Chuẩn bị hỗn dịch nano: Như trình bày ở mục 2.3.1 không sử dụng pha pha loãng (tương ứng 150 mg FB)

- Chuẩn bị nhựa: Cân 5 g nhựa (thay đ i) Rửa với nước cất nhiều lần để loại các chất bẩn và bụi nhiễm vào trong quá trình sản xuất và bảo quản [49]

- Hoạt hóa nhựa bằng dd NaOH 4% trong 3 giờ Sau đó nhựa được trung tính lại bằng nước [49]

- Nạp nano vào nhựa: Nhựa được phối hợp với hỗn dịch nano: khuấy ở các tỷ lệ khối lượng và khoảng thời gian (khảo sát)

- Thu sản phẩm: Rửa sản phẩm 2 lần với nước RO Sấy ở nhiệt độ 50oC đến hàm ẩm 3 – 4% Chọn hạt có k ch thước lớn hơn 0,8 mm Bảo quản trong túi nilon kín

2.3.3 ác phương pháp đánh giá

2.3.3.1 h g h đị h ợ g fe ofibrat

 Phương pháp đo quang: Định lượng tại bước sóng 291 nm

- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 10,0 mg FB cho vào bình định mức 100,0 ml; thêm 10 ml MeOH, lắc ho c siêu âm cho tan hết; b sung đủ thể tích bằng dd NaLS 0,72% Pha loãng 10 lần bằng NaLS 0,72% Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn tại bước sóng 291 nm

- Dung dịch thử: Cân ch nh xác lượng hạt chứa khoảng 10 mg FB vào bình định mức 100,0 ml; tiến hành tương tự như dd chuẩn thu được dd có nồng độ

FB khoảng 10 g/ml Đo độ hấp thụ của các dung dịch thử

- Tính toán, xử lý kết quả

 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPL )

Fenofibrat trong các mẫu thử được định lượng bằng phương pháp HPLC với các điều kiện sắc ký cụ thể tham khảo theo USP 36 như sau [60]:

- Pha động: hỗn hợp methanol: dd KH2PO4 10-3 M pH 2,9 (80:20)

- Dung dịch chuẩn: dd có nồng độ 60 µg/ml FB trong pha động

- Dung dịch thử: mẫu thử định lượng, mẫu thử để đánh giá EE và LC, mẫu thử hòa tan của hạt ở mục 2.3.2.3, mẫu thử đánh giá lượng nano sau khi phân tán lại hạt tầng sôi với nước

Mẫu chuẩn và mẫu thử được lọc qua màng lọc 0,45 µm

 Chế độ tiêm mẫu: tiêm mẫu tự động

Tính toán và xử lý kết quả dựa vào nồng độ và diện t ch pic tương ứng

2.3.3.2 h g h đ h gi đặc tính hệ tiểu phân nano fenofibrat

a Đ h gi hâ bố kích th ớc tiểu phân và thế zeta

 Thiết bị: máy phân t ch k ch thước tiểu phân Zetasizer Nano ZS90

 Quy trình: Tiến hành pha loãng hỗn dịch bằng nước cất để chỉ số “Cou t Rate”

nằm trong khoảng 200 – 400 kcps Mẫu pha loãng được đưa vào buồng đo ở điều kiện nhiệt độ đo 25oC

b Đ h gi hiệu suất mang thuốc trong tiểu phân nano

Qua tham khảo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ của Vũ Thị An Hòa (2016) [11], tiến hành đánh giá hiệu suất mang thuốc trong tiểu phân nano như sau:

Xác định lượng dược chất tự do: Lấy chính xác một thể tích hỗn dịch chứa tiểu phân nano FB đưa vào ống ly tâm có màng siêu lọc 10 kDa Tiến hành ly tâm 5000 vòng/phút trong thời gian 30 phút ở nhiệt độ phòng, lấy phần dịch lọc trong phía dưới màng siêu lọc tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng FB tự do Xác định lượng dược chất toàn phần: Lấy chính xác một thể tích hỗn dịch nano

FB pha loãng trong bình định mức thích hợp để thu được nồng độ dược chất trong khoảng 1 g/ml đến 100 g/ml, cho pha động vào siêu âm cho tan hết, b sung thể tích bằng pha động Lọc dịch toàn phần qua màng 0,45 µm rồi tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng FB toàn phần

Hiệu suất tạo nano của d ợc chất đ ợc tính theo công thức sau:

EE (%) = Ctp - Ctd x 100%

CtpTrong đó:

+ Ctp: Là nồng độ toàn phần của dược chất trong hỗn dịch nano (µg/ml) + Ctd: Là nồng độ tự do của dược chất trong hỗn dịch nano (µg/ml)

Hiệu suất mang thuốc của hệ tiểu phân nano:

LC (%) = mNano x 100%

mHệ