Nghiên cứu ảnh hưởng của khối lượng phân tử, độ deacetyl và dạng tồn tại của chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  NGUYỄN THỊ THÚY VI NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA KHỐI LƢỢNG PHÂN TỬ, ĐỘ DEACETYL VÀ DẠNG TỒN TẠI CỦA CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA INVITRO ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN NHA TRANG, THÁNG NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  NGUYỄN THỊ THÚY VI NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA KHỐI LƢỢNG PHÂN TỬ, ĐỘ DEACETYL VÀ DẠNG TỒN TẠI CỦA CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA INVITRO ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN GVHD: TS HUỲNH NGUYỄN DUY BẢO NHA TRANG, THÁNG NĂM 2017 i LỜI CÁM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu Trƣờng Đại học Nha Trang đến em hoàn thành đồ án tốt nghiệp đại học Em xin chân thành cám ơn Ban Giám hiệu Trƣờng Đại học Nha Trang, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Thực phẩm tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu chuyên môn Lời cám ơn chân thành tới TS Huỳnh Nguyễn Duy Bảo trực tiếp, tận tình hƣớng dẫn suốt thời gian làm thực tập tốt nghiệp Xin chân thành cám ơn quý thầy cô giáo Khoa Công nghệ Thực phẩm, Trƣờng Đại học Nha Trang tận tình giúp đỡ giải đáp thắc mắc khó khăn tạo điều kiện cho em hoàn thành đồ án Cám ơn cán phòng thí nghiệm Công nghệ Chế biến, Công nghệ Thực phẩm, Công nghệ Sinh học thuộc Trung tâm Thí nghiệm Thực hành, Trƣờng Đại Học Nha Trang tạo điều kiện cho em hoàn thành đề tài Cám ơn giúp đỡ gia đình bạn bè động viên, khích lệ thời gian vừa qua Xin chân thành cảm ơn Nha Trang, tháng 06 năm 2017 Sinh viên thực NGUYỄN THỊ THÚY VI \ ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC H NH vii MỞ ĐẦU .1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN .4 1.1 CẤU TẠO, TÍNH CHẤT VÀ ỨNG DỤNG CỦA CHITOSAN 1.1.1 Cấu tạo 1.1.2 Tính chất chitosan .5 1.1.2.1 Tính chất vật lý .6 1.1.2.2 Tính chất hóa học 12 1.1.2.3 Hoạt tính sinh học 13 1.1.3 Ứng dụng chitosan 16 1.1.3.1 Ứng dụng chitosan thực phẩm 16 1.1.3.2 Ứng dụng chitosan nông nghiệp thủy sản 17 1.1.3.3 Ứng dụng chitosan xử lý nƣớc 18 1.1.3.4 Ứng dụng chitosan y học công nghệ sinh học .18 1.2 HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA CỦA CHITOSAN .19 1.2.1 Cơ chế chống oxy hóa chitosan 19 1.2.2 Ảnh hƣởng độ deacetyl (DD) chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa 20 1.2.3 Ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử (MW) chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa 21 1.2.4 Ảnh hƣởng dạng tồn chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa .23 1.2.4.1 Hoạt tính chống oxy hóa muối chitosan (chitosan hydrochloride) 23 1.2.4.2 Hoạt tính chống oxy hóa nano chitosan 25 1.3 QUÁ TR NH OXY HÓA VÀ CHẤT CHỐNG OXY HÓA .28 1.3.1 Quá trình oxy hóa 28 iii 1.3.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa 30 1.4 CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA .31 1.4.1 Các phƣơng pháp quang phổ 31 1.4.1.1 Phƣơng pháp khử gốc tự DPPH (Scavenging ability towards DPPH radicals): 31 1.4.1.2 Phƣơng pháp tổng lực khử (Total reducing power ability) 32 1.4.1.3 Phƣơng pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa khả khử gốc hydroxyl tự 32 1.4.1.4 Phƣơng pháp Fenton: Phƣơng pháp đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa vào phản ứng Fenton hệ Lipid/Metmyoglobin/H2O2 33 1.4.1.5 Phƣơng pháp TEAC (Trolox equivalent antioxydant capacity): Xác định hoạt tính chống oxy hóa so với khả chống oxy hóa Trolox .34 1.4.1.6 Phƣơng pháp ORAC (Oxygen radical absorbance capacity): Xác định khả hấp thụ gốc chứa oxy hoạt động 34 1.4.1.7 Phƣơng pháp TRAP (Total radical-trapping antioxydant potential): Xác định khả bẩy gốc tự .35 1.4.1.8 Phƣơng pháp FRAP (Ferric reducing-antioxydant power): Lực chống oxy hóa phƣơng pháp khử sắt 35 1.4.1.9 Xác định số acid thiobarbituric (TBARS) hay molodialdehyde (MDA) 36 1.4.2 Các phƣơng pháp điện hóa 37 1.4.2.1 Cyclic voltammetry 37 1.4.2.2 Phƣơng pháp amperometric 37 1.4.2.3 Phƣơng pháp biamperometric: .37 1.4.3 Các phƣơng pháp sắc ký 38 1.4.3.2 Sắc ký lỏng hiệu cao (high performance liquid chromatography): .39 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT .40 2.1.1 Nguyên vật liệu .40 iv 2.1.2 Hóa chất .43 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 43 2.2.1.1 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử chitosan đến khả chống oxy hóa .43 2.2.1.2 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng độ deacetyl chitosan đến khả chống oxy hóa .44 2.2.1.3 Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng dạng tồn (tự nhiên, muối, nano) chitosan đến khả chống oxy hóa .46 2.2.2 PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 48 2.2.2.1 Xác định hoạt tính chống oxy hóa chitosan phƣơng pháp khử gốc tự DPPH 48 2.2.2.2 Phƣơng pháp phân tích hoạt tính chống oxy hóa chitosan dựa vào tổng lực khử 49 2.2.2.3 Xác định hoạt tính chống oxy hóa chitosan phƣơng pháp phản ứng fenton .51 2.3 PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 52 CHƢƠNG – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 53 3.1 ẢNH HƢỞNG CỦA KHỐI LƢỢNG PHÂN TỬ CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA .53 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA ĐỘ DEACETYL CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA 59 3.3 ẢNH HƢỞNG DẠNG TỒN TẠI CỦA CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA 67 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGH 76 4.1 KẾT LUẬN 76 4.2 KIẾN NGH .77 TÀI LIỆU THAM KHẢO 78 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu viết tắt Viết đầy đủ BHT : Butylated hydroxytoluen CTS : Chitosan DD : Deacetyl degree DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DPPH-H : 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl EPA : Acid eicosapentaenoic FerrylMb : Ferrylmyoglobin HMWC : Hight Molecular Weight Chitosan MDA : Malondialdehyde LMWC : Low Molecular Weight Chitosan Mb : Myoglobin MetMb : Metmyoglobin MMWC : Medium Molecular Weight Chitosan MW : Molecular Weight TBARS : Acid thiobarbituric TCA : Tricloacetic acid TPP : Tripolyphosphate-pentasodium vi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Đặc điểm loại Chitosan 41 vii DANH MỤC H NH Hình 1.1 Sự chuyển đổi cấu trúc deacetyl hóa chitin Hình 1.2 Công thức hóa học chitosan Hình 1.3 Tỉ lệ nhóm chức cấu trúc chitin chitosan .8 Hình 1.4 Sơ đồ chế depolyme hóa chitosan dƣới tác nhân hóa học 11 Hình 1.5 Cấu tạo phân tử chitosan hydrochloride .24 Hình 1.6 Liên kết ion chitosan TPP 26 Hình 1.7 Sơ đồ chuyển đổi cấu trúc DPPH hệ phản ứng 31 Hình 1.8 Phản ứng tạo phức màu xanh dƣơng 32 Hình 1.9 Sơ đồ tóm tắt chế phản ứng 33 Hình 1.10 Cơ chế phản ứng phƣơng pháp FRAP (MDA) 36 Hình 1.11 Phản ứng tạo màu MDA TBA .36 Hình 2.1 Đặc điểm mẫu chitosan .42 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử chitosan đến khả chống oxy hóa 44 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng độ deacetyl chitosan đến khả chống oxy hóa .45 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hƣởng dạng tồn (tự nhiên, muối, nano) chitosan đến khả chống oxy hóa 47 Hình 2.5 Đƣờng chuẩn DPPH 49 Hình 2.6 Đƣờng chuẩn BHT 51 Hình 3.1 Hoạt tính khử gốc tự DPPH chitosan có khối lƣợng phân tử khác .53 Hình 3.2 Tổng lực khử chitosan có khối lƣợng phân tử khác 56 Hình 3.3 Hoạt tính ức chế oxy hóa lipid chitosan có khối lƣợng phân tử khác 57 Hình 3.4 Hoạt tính khử gốc tự DPPH chitosan có độ deacetyl khác 60 Hình 3.5 Tổng lực khử chitosan có độ deacetyl khác 62 Hình 3.6 Hoạt tính ức chế oxy hóa lipid chitosan có độ deacetyl khác 64 viii Hình 3.7 Hoạt tính khử gốc tự DPPH chitosan tồn dạng khác 68 Hình 3.8 Tổng lực khử chitosan tồn dạng khác .71 Hình 3.9 Hoạt tính ức chế oxy hóa lipid chitosan tồn dạng khác 74 79 [10] Trang Sĩ Trung, Trần Thị Luyến, Nguyễn Anh Tuấn, Nguyễn Thị Phƣơng Hằng (2010), Chitin – Chitosan từ phế liệu thủy sản ứng dụng, NXB Nông Nghiệp TP.HồChí Minh, trang 14-26, 55-90 Tài Liệu Tiếng Anh [11] Alsharabasy A.M (2016), "Semi-synthesis of Chitosan with High Molecular Weight and Enhanced Deacetylation Degree", Polymer science, 2(2), 1–8 [12] Antolovich M., Prenzler P.D., Patsalides E., et al (2002), "Methods for testing antioxidant activity, The Analyst, 127(1), 183–198 [13] Antonio Rampino, Massimiliano Borgogna, Paolo Blasi, Barbara, Bellich A.C (2013), "Chitosan nanoparticles: Preparation, size evolution and stability", International Journal of Pharmaceutics, 455, 219–228 [14] Aumklad P (2006), Effect Of Molecular Weight And Salt Forms Of Chitosan On Epithelial Permeability Using Caco-2 Cells, Silpakorn University [15] Belitz H.D., Grosch W., Schieberle P., et al (2009), Food Chemistry [16] Casimir C Akoh D.B.M (2002), Food Lipids: Chemistry, Nutrition, and Biotechnology [17] Charernsriwilaiwat N., Opanasopit P., and Rojanarata T (2012), "In Vitro Antioxidant Activity of Chitosan Aqueous Solution Effect of salt form", Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 11, 235–242 [18] Chhabra Pallavi (2004), Antioxidant-Antimicrobial Properties of Chitosan, The University of Georgia [19] Chien P.J., Sheu F., Huang W.T., et al (2007), "Effect of molecular weight of chitosan on their antioxidative activities in apple juice", Food Chem, 102(4), pp 1192–1198 [20] D.A Zahran (2015), "Effectiveness of Gamma Irradiated Chitosan for Fresh Meat Preservation", Arab Journal of Nuclear Science and Applications, 48(3), pp 143-152 [21] D P Chattopadhyay and Milind S Inamdar (2010), "Aqueous Behaviour of Chitosan" 80 [22] D R Berdahl, R I Nahas and J P Barren K (2010), "Synthetic and natural antioxidant additives in food stabilization: current applications and future research", Oxidation in foods and beverages and antioxidant applications, 274 – 278 [23] E A Decker, B Chen and A Panya R.J.E (2010), "Understanding antioxidant mechanisms in preventing oxidation in foods", Oxidation in foods and beverages and antioxidant applications [24] Emilia Szymańska and Katarzyna Winnicka (2015), "Stability of Chitosan - A Challenge for Pharmaceutical and Biomedical Applications", Mar Drugs [25] García M.A., de la Paz N., Castro C., et al (2015), "Effect of molecular weight reduction by gamma irradiation on the antioxidant capacity of chitosan from lobster shells", Journal of Radiation Research and Applied Sciences , 8(2), 190–200 [26] Giuseppe Cirillo and Francesca lemma (2012), Antioxidant polymers, pp,34 [27] Hsia-Yin Lin and Cheng-Chun Chou (2004), "Antioxidative activities of water-soluble disaccharide chitosan derivatives", Food Research International, (37), 883–889 [28] Inmaculada Aranaz, Marian Mengíbar, Ruth Harris, Inés Paños, Beatriz Miralles, Niuris Acosta G.G and Á.H (2009), "Functional Characterization of Chitin and Chitosan", Current Chemical Biology (3), 203–230 [29] Jolanta Kumirska, Mirko X Weinhold J.T and P (2011), "Review: Biomedical Activity of Chitin/Chitosan Based Materials - Influence of Physicochemical Properties Apart from Molecular Weight and Degree of NAcetylation", Polymers (Basel) [30] K Prabu and E Natarajan (2012), "In Vitro Antimicrobial and Antioxidant Activity of Chitosan Isolated from Podophthalmus Vigil", Journal of Applied Pharmaceutical Science [31] Kumirska J., Weinhold, M X Czerwicka M., Kaczyński Z., et al (2011), "Influence of the chemical structure and physicochemical properties of 81 chitin-and chitosan-based materials on their biomedical activity", Biomed Eng Trends Mater , 25–64 [32] Kyung.W Kim and R L Thomas (2007), " Antioxidant activity of chitosan with varying molecular weights", Food Chem [33] Li-Ming Zhao, Lu-E Shi, Zhi-Liang Zhang, Jian-Min Chen, Dong-Dong Shi J.Y and Z.-X.T (2011) "Engineering Preparation and application of chitosan nanoparticles and nanofibers", Brazilian Journal of Chemical [34] M Rinaudo (2006) "Chitin and chitosan: Properties and applications", Prog Polym, 31(7), 603–632 [35] Ming-Tsung Yen, Joan-Hwa Yang, Jeng-Leun Mau (2008), "Antioxidant properties of chitosan from crab shells", Carbohydr Polym, 74(4), 840–844 [36] Ona Gyliene I.R and O.N (2003) "Chemical composition and sorption properties of chitosan produced from fly larva shells" [37] P.Molyneux, "The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity" [38] Pisoschi A.M and Negulescu G.P (2012), "Methods for Total Antioxidant Activity Determination, Biochemistry & Analytical Biochemistry, 1(1), 1–10 [39] Pharmacopoeia E., Infrared I a, It B., et al, "Chitosan Hydrochloride", 24–25 [40] Rajalakshmi a, Krithiga N., and Jayachitra A (2013), "Antioxidant Activity of the Chitosan Extracted from Shrimp Exoskeleton", Middle-East J Sci Res, 16(10), 1446–1451 [41] Ronald L Prior, Xianli Wu and Karen Schaich (2005), "Standardized Methods for the Determination of Antioxidant Capacity and Phenolics in Foods and Dietary Supplements", J Agric Food Chem [42] Shweta I Patel (2015), "Chitosan Nanoparticles Synthesis From Shrimp Shell Waste For Application in The Pharmaceutical Industry", International Journal Of Scientific Research And Education [43] Sun-Ok Fernandez-Kim (2004), "Physicochemical and funtional propertise of crawfish chitosan as afected by different processing protocols" 82 [44] Tungtong S., Okonogi S., Chowwanapoonpohn S., et al (2012), "Solubility, viscosity and rheological properties of water-soluble chitosan derivatives", Maejo International Journal of Science and Technology, 6(2), 315–322 [45] Trang Sĩ Trung, Huỳnh Nguyễn Duy Bảo (2015), "Physicochemical Properties and Antioxidant Activity of Chitin and Chitosan Prepared from Pacific White Shrimp Waste", International Journal of Carbohydrate Chemistry [46] Umesh K Pari, Niranjan Rout B.K.B (2013), "In vitro properties of chitosan nanoparticles induce apoptosis in human lymphoma SUDHL-4 cell line", Advances in Bioscience and Biotechnology, (4), 1118–1127 [47] Vida Zargar M.A and A.D (2014), "A Review on Chitin and Chitosan Polymers: Structure, Chemistry, Solubility, Derivatives, and Applications" [48] Walke S., Srivastava G., Nikalje M., et al (2014), "Physicochemical and functional characterization of chitosan prepared from shrimp shells and investigation of its antibacterial, antioxidant and tetanus toxoid entrapment efficiency" International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 26(2), 215–225 [49] Wenshui Xia, P Liu, J Zhang and J Chen (2010), "Biological activities of chitosan and chitooligosaccharides", Food Hydrocolloids [50] Wojtasz-pająk A "Chitosan Dicarboxylic Acid Salts", 13, 25–34 [51] Xing R., He X., Liu S., et al (2015), "Antidiabetic activity of differently regioselective chitosan sulfates in alloxan-induced diabetic rats", Mar Drugs, 13(5), 3072–3090 [52] Yang chao Luo and Qin Wang (2013), "Recent Advances of Chitosan and Its Derivatives for Novel Applications in Food Science", Journal of Food Processing & Beverages 1(1) [53] Yo Li Chen (2008), "Preparation and Characterization of Water-Soluble Chitosan Gel for Skin Hydration", Universiti Sains Malaysia , 8–12 83 [54] zeldeen S El-Denshary, A Aljawish, Aziza A El-Nekeety, N S Hassan R.H and Saleh, Bertrand H Rihn M.A.A.-W (2015), "Possible Synergistic Effect and Antioxidant Properties of Chitosan Nanoparticles and Quercetin against Carbon Tetrachloride- Induce Hepatotoxicity in Rats" Tài Liệu Website [55] Will Soutter (2013), "Chitosan Nanoparticles - Properties and Applications", website http://www.azonano.com/article.aspx?ArticleID=3232 [56].ChitosanHydrochloride,websitehttp://www.goldenshell.com.cn/WebSite/Produ ctsInfo.asp?CPclass_Id=24&Product_Id=155 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết sử lý số liệu thí nghiệm khảo sát khả chống oxy hóa số loại chitosan phƣơng pháp khử gôc tự DPPH Bảng 1.1 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD90–MW1530 DD90–MW1530 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,253 0,248 0,245 0,238 0,233 0,253 0,249 0,245 0,239 0,232 0,253 0,248 0,246 0,238 0,232 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,00205 0,00327 0,00614 0,00818 0,00164 0,00327 0,00573 0,00859 0,00205 0,00286 0,00614 0,00859 0,00191 0,00314 0,00600 0,00845 0,00024 0,00024 0,00024 0,00024 Bảng 1.2 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD85–MW970 DD85–MW970 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,253 0,238 0,233 0,227 0,219 0,253 0,238 0,233 0,228 0,220 0,253 0,239 0,232 0,228 0,219 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,00614 0,00818 0,01063 0,01391 0,00614 0,00818 0,01023 0,01350 0,00573 0,00859 0,01023 0,01391 0,00600 0,00832 0,01036 0,01377 0,00024 0,00024 0,00024 0,00024 Bảng 1.3 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD90–MW650 DD90–MW650 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,253 0,230 0,224 0,218 0,210 0,253 0,231 0,224 0,218 0,209 0,253 0,230 0,225 0,219 0,209 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,00941 0,01186 0,01432 0,01759 0,00900 0,01186 0,01432 0,01800 0,00941 0,01145 0,01391 0,01800 0,009271 0,011726 0,01418 0,017861 0,000236 0,000236 0,000236 0,000236 Bảng 1.4 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD85–MW420 DD85–MW420 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,253 0,236 0,232 0,225 0,218 0,253 0,237 0,232 0,226 0,217 0,253 0,237 0,231 0,226 0,217 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,00695 0,00859 0,01145 0,01432 0,00654 0,00859 0,01104 0,01473 0,00654 0,00900 0,01104 0,01473 0,006681 0,008726 0,01118 0,014589 0,000236 0,000236 0,000236 0,000236 Bảng 1.5 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD90– MW85 DD90– MW85 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,253 0,225 0,220 0,210 0,204 0,253 0,224 0,219 0,210 0,203 0,253 0,224 0,219 0,211 0,203 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,0115 0,0135 0,0176 0,0200 0,0119 0,0139 0,0176 0,0205 0,0119 0,0139 0,0172 0,0205 0,0117 0,0138 0,0175 0,0203 0,0002 0,0002 0,0002 0,0002 Bảng 1.6 Khả khử gốc tự DPPH chitosan DD95–MW60 DD95–MW60 Thể tích mẫu (ml) Lần Lần Lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,264 0,216 0,210 0,204 0,195 0,264 0,217 0,209 0,204 0,196 0,264 0,217 0,209 0,203 0,196 Nồng độ DPPH bị khử mm 1,2 1,4 1,6 0,01963 0,02209 0,02454 0,02822 0,01922 0,02250 0,02454 0,02781 0,01922 0,02250 0,02495 0,02781 0,01936 0,02236 0,02468 0,02795 0,00024 0,00024 0,00024 0,00024 Bảng 1.7 Khả khử gốc tự DPPH Nano CTS Nano CTS Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,300 0,249 0,239 0,232 0,222 0,300 0,248 0,240 0,233 0,222 0,300 0,248 0,239 0,233 0,221 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,02086 0,02495 0,02781 0,03190 0,02127 0,02454 0,02741 0,03190 0,02127 0,02495 0,02741 0,03231 0,02113 0,02481 0,02754 0,03204 0,00024 0,00024 0,00024 0,00024 Bảng 1.8 Khả khử gốc tự DPPH Muối CTS Muối CTS Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=517nm 0,5 0,6 0,7 0,8 0,233 0,228 0,224 0,217 0,210 0,233 0,229 0,223 0,217 0,211 0,233 0,228 0,223 0,216 0,210 Nồng độ DPPH bị khử mM 1,2 1,4 1,6 0,00205 0,00368 0,00654 0,00941 0,00164 0,00409 0,00654 0,00900 0,00205 0,00409 0,00695 0,00941 0,00191 0,00395 0,00668 0,00927 0,00024 0,00024 0,00024 0,00024 Phụ lục 2: Kết sử lý số liệu thí nghiệm khảo sát khả chống oxy hóa số loại chitosan phƣơng pháp tổng lực Bảng 2.1 Tổng lực khử chitosan DD90–MW1530 DD90–MW1530 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,283 0,288 0,293 0,303 0,282 0,287 0,293 0,302 0,283 0,287 0,294 0,302 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00040 0,00034 0,00040 0,00038 0,00003 0,002 0,00066 0,00061 0,00061 0,00063 0,00003 0,004 0,00093 0,00093 0,00098 0,00094 0,00003 0,006 0,00145 0,00140 0,00140 0,00142 0,00003 Bảng 2.2 Tổng lực khử chitosan DD85–MW970 DD85–MW970 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,285 0,29 0,3 0,313 0,284 0,289 0,301 0,312 0,284 0,289 0,302 0,312 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00050 0,00045 0,00045 0,00047 0,00003 0,002 0,00077 0,00071 0,00071 0,00073 0,00003 0,004 0,00130 0,00135 0,00140 0,00135 0,00005 0,006 0,00198 0,00193 0,00193 0,00195 0,00003 Bảng 2.3 Tổng lực khử chitosan DD90–MW650 DD90–MW650 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC DD90–MW650 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,293 0,3 0,317 0,324 0,294 0,301 0,316 0,325 0,293 0,301 0,317 0,326 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00093 0,00098 0,00093 0,00094 0,00003 0,002 0,00130 0,00135 0,00135 0,00133 0,00003 0,004 0,00219 0,00214 0,00219 0,00218 0,00003 0,006 0,00257 0,00262 0,00267 0,00262 0,00005 Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,293 0,3 0,317 0,324 0,294 0,301 0,316 0,325 0,293 0,301 0,317 0,326 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00093 0,00098 0,00093 0,00094 0,00003 0,002 0,00130 0,00135 0,00135 0,00133 0,00003 0,004 0,00219 0,00214 0,00219 0,00218 0,00003 0,006 0,00257 0,00262 0,00267 0,00262 0,00005 Bảng 2.4 Tổng lực khử chitosan DD85–MW420 DD85–MW420 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,288 0,296 0,307 0,318 0,288 0,295 0,308 0,319 0,289 0,296 0,307 0,318 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00066 0,00066 0,00071 0,00068 0,00003 0,002 0,00108 0,00103 0,00108 0,00107 0,00003 0,004 0,00167 0,00172 0,00167 0,00168 0,00003 0,006 0,00225 0,00230 0,00225 0,00227 0,00003 Bảng 2.5 Tổng lực khử chitosan DD90– MW85 DD90– MW85 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,296 0,305 0,319 0,335 0,295 0,304 0,32 0,336 0,295 0,304 0,32 0,335 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00108 0,00103 0,00103 0,00105 0,00003 0,002 0,00156 0,00151 0,00151 0,00153 0,00003 0,004 0,00230 0,00235 0,00235 0,00234 0,00003 0,006 0,00315 0,00320 0,00315 0,00316 0,00003 Bảng 2.6 Tổng lực khử chitosan DD95–MW60 DD95–MW60 Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,306 0,317 0,334 0,351 0,305 0,316 0,335 0,352 0,306 0,316 0,335 0,352 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00161 0,00156 0,00161 0,00160 0,00003 0,002 0,00219 0,00214 0,00214 0,00216 0,00003 0,004 0,00309 0,00315 0,00315 0,00313 0,00003 0,006 0,00399 0,00405 0,00405 0,00403 0,00003 Bảng 2.7 Tổng lực khử chitosan Nano CTS Nano CTS Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,31 0,323 0,345 0,36 0,311 0,322 0,346 0,361 0,311 0,322 0,345 0,362 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00182 0,00188 0,00188 0,00186 0,00003 0,002 0,00251 0,00246 0,00246 0,00248 0,00003 0,004 0,00368 0,00373 0,00368 0,00369 0,00003 0,006 0,00447 0,00452 0,00458 0,00452 0,00005 Bảng 2.8 Tổng lực khử chitosan Muối CTS Muối CTS Thể tích mẫu (ml) lần lần lần Nồng độ mẫu (mg/ml) lần lần lần GTTB ĐLC Độ hấp thụ (Abs) bƣớc sóng λ=700nm 0,1 0,2 0,4 0,6 0,286 0,293 0,301 0,31 0,287 0,294 0,302 0,309 0,286 0,293 0,302 0,309 Quy đổi tương đương số mg BHT/ml 0,001 0,00056 0,00061 0,00056 0,00057 0,00003 0,002 0,00093 0,00098 0,00093 0,00094 0,00003 0,004 0,00135 0,00140 0,00140 0,00138 0,00003 0,006 0,00182 0,00177 0,00177 0,00179 0,00003 Phụ lục 3: Kết sử lý số liệu thí nghiệm khảo sát khả chống oxy hóa lipid số loại chitosan phƣơng pháp Fenton Bảng 3.1 hoạt tính chống oxy hóa lipid m u chitosan lần Hoạt lặp lần tính chống oxy lần hóa (%) lần GTTB DLC muối CTS DD95– MW60 Nano CTS DD90– DD85– DD90– DD85– DD90– MW1530 MW970 MW650 MW420 MW85 10,194 14,528 17,154 9,118 11,594 12,394 11,681 13,598 10,922 15,254 16,764 10,000 11,884 13,521 13,105 13,881 10,680 15,012 16,569 9,706 11,594 12,958 12,251 13,031 10,599 14,931 0,3708 0,3699 16,829 9,608 0,2978 0,4493 11,691 0,1673 12,958 0,5634 12,346 0,7170 13,503 0,4327 ... chống oxy hóa 20 1.2.3 Ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử (MW) chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa 21 1.2.4 Ảnh hƣởng dạng tồn chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa .23 1.2.4.1 Hoạt. .. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 53 3.1 ẢNH HƢỞNG CỦA KHỐI LƢỢNG PHÂN TỬ CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA .53 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA ĐỘ DEACETYL CHITOSAN ĐẾN HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA ... Đề tài Nghiên cứu ảnh hƣởng khối lƣợng phân tử, độ deacetyl dạng tồn (tự nhiên, muối, nano) chitosan đến hoạt tính chống oxy hóa in vitro nhằm mục đích đánh giá khả chống oxy hóa loại chitosan