Phân lập, tuyển chọn và nhận diện vi khuẩn cố định đạm, hòa tan lân trong đất vùng rễ và vi khuẩn nội sinh cây ngô (bắp) (Zea mays L.) trồng trên đất xám vùng Đông Nam Bộ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ ĐẶNG THỊ NGỌC THANH PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NHẬN DIỆN VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM, HÒA TAN LÂN TRONG ĐẤT VÙNG RỄ VÀ VI KHUẨN NỘI SINH CÂY NGÔ (BẮP) (Zea mays L.) TRỒNG TRÊN ĐẤT XÁM VÙNG ĐÔNG NAM BỘ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành VI SINH VẬT HỌC Mã số 62 42 01 07 Cần Thơ, 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ ĐẶNG THỊ NGỌC THANH PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NHẬN DIỆN VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM, HÒA TAN LÂN TRONG ĐẤT VÙNG RỄ VÀ VI KHUẨN NỘI SINH CÂY NGÔ (BẮP) (Zea mays L.) TRỒNG TRÊN ĐẤT XÁM VÙNG ĐÔNG NAM BỘ LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành VI SINH VẬT HỌC Mã số 62 42 01 07 Người hướng dẫn khoa học Gs Ts CAO NGỌC ĐIỆP Cần Thơ, 2017 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, nhận động viên, giúp đỡ hỗ trợ thật quý báu nhiều người Xin bày tỏ lòng tri ân chân thành sâu sắc! Lời cảm ơn xin gửi đến Thầy tôi, Gs Ts Cao Ngọc Điệp Thầy tận tình hướng dẫn dạy phương pháp tiếp cận khoa học lĩnh vực nghiên cứu, hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập thực luận án tiến sĩ Chân thành cảm ơn Quý Thầy Cô thuộc Viện Nghiên cứu Phát Triển Công Nghệ Sinh học truyền thụ cho nhiều kiến thức quý báu, phục vụ trình nghiên cứu viết báo cáo khoa học Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Cần Thơ, Ban Lãnh đạo Viện Nghiên cứu Phát Triển Công nghệ Sinh học, Phòng Đào tạo, Phòng Quản lý Khoa học, Khoa Sau Đại học phòng ban khác Trường Đại học Cần Thơ hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu trường Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Sài Gòn, Ban Lãnh đạo Khoa Sư phạm Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Sài Gòn hỗ trợ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm nghiên cứu sinh Chân thành gửi lời cảm ơn đến anh chị, bạn đồng nghiệp thuộc Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học Trường Đại học Cần Thơ Khoa Sư phạm Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Sài Gòn quan tâm, giúp đỡ động viên tơi Xin cảm ơn gia đình anh Nguyễn Văn Đẹp hỗ trợ đất công sức canh tác giúp tơi triển khai thực thí nghiệm đồng Chân thành cảm ơn em sinh viên Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học Trường Đại học Cần Thơ Khoa Sư phạm Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Sài Gòn cộng tác tơi thời gian thực thí nghiệm Đặc biệt gửi lời cảm ơn sâu sắc đến em Nguyễn Thị Xuân Mỵ, người đồng hành tôi, em Lê Duy Tín, Lê Minh Đức, Mai Thị Trà Giang hỗ trợ nhiều trình triển khai thực nghiên cứu Sau xin gửi lời cảm ơn đến cha mẹ, người thân gia đình, chồng hết lòng ưu ái, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập làm việc xa nhà Đặng Thị Ngọc Thanh i TĨM TẮT Ngơ lương thực quan trọng nguồn cung cấp nguyên liệu cho công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi Đông Nam Bộ Đất xám bốn loại đất trồng ngơ vùng, có đặc tính nghèo dinh dưỡng nên để trì sản lượng cao, người ta thường sử dụng lượng lớn phân hóa học, đặc biệt phân đạm Điều góp phần làm gia tăng chi phí sản xuất, gây tác động tiêu cực đến môi trường sức khỏe người Hướng tới sản xuất ngô bền vững giảm lệ thuộc vào phân bón hóa học, cần thiết phải tìm kiếm khai thác lợi ích loại vi khuẩn có khả thúc đẩy tăng trưởng thực vật Do vậy, đề tài “Phân lập, tuyển chọn nhận diện vi khuẩn cố định đạm, hòa tan lân đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh ngô (bắp) (Zea mays L.) trồng đất xám vùng Đông Nam Bộ” thực nhằm mục tiêu tìm kiếm nguồn vi khuẩn địa có khả bổ sung hai nguyên tố quan trọng N P cho ngô Sử dụng loại môi trường không đạm (Burk’s, NFb, LGI) với môi trường NBRIP chứa lân khó tan để phân lập dịng vi khuẩn có hai khả cố định đạm hòa tan lân Khảo sát định lượng phương pháp so màu giúp tuyển chọn dịng có khả cố định đạm hòa tan lân in vitro tốt Tiến hành nhận diện dịng thơng qua trình tự gene 16S rRNA kỹ thuật sinh học phân tử công cụ tin sinh học khảo sát thêm đặc tính thúc đẩy tăng trưởng thực vật khác tổng hợp IAA siderophore nhằm chọn số dòng đưa vào thử nghiệm ngơ trồng chậu ngồi đồng Kết thu 180 dòng vi khuẩn đất vùng rễ 319 dịng vi khuẩn nội sinh có khả cố định N hòa tan P Năm mươi lăm dịng tuyển chọn có tương đồng trình tự 16S rDNA với chủng vi khuẩn có GenBank (NCBI) với mức độ tương đồng từ 97% - 100%, chủ yếu thuộc chi Burkholderia, Enterobacter Bacillus Tất dòng tuyển chọn có khả sản xuất IAA, dịng DDN10b cịn có khả sản xuất siderophore Thử nghiệm khả thúc đẩy tăng trưởng thực vật in vivo cho thấy dòng DDN10b (Burkholderia sp.) VTN2b (Bacillus subtilis) ứng viên có tiềm sử dụng chế phẩm phân bón giúp tiết kiệm 25% phân N P hóa học, đồng thời làm tăng suất thêm 11,7 - 24,9% Các nghiên cứu đề xuất tiếp tục đánh giá hoạt tính thúc đẩy tăng trưởng thực vật khác dòng tuyển chọn, tiếp tục đánh giá hiệu ii dòng DDN10b VTN2b giống ngô trồng vùng trọng điểm Đơng Nam Bộ Từ khóa: cố định đạm, đất xám, hòa tan phosphate, thúc đẩy tăng trưởng thực vật, vi khuẩn nội sinh, vi khuẩn đất vùng rễ iii ABSTRACT Maize is one of the most important food crops and the source of animal feed manufacturing industry in the Southeast of Vietnam In this region, acrisols is one of the four main soil groups used for maize production, but due to its poor nutritional character, it is common to use large amounts of chemical fertilizers, especially nitrogen fertilizers to maintain high yields This contributes to increased production costs, and has a negative impact on the environment and human health Towards sustainable maize production and reducing dependence on chemical fertilizers, it is necessary to seek out and exploit the benefits of plant promoting bacteria Therefore, the topic “Isolation, selection and identification of nitrogen fixation and phosphate solubilization rhizopheric bacteria and endophytic bacteria from maize (Zea mays L.) grown on acrisol soils of the Southeast” was made to target indigenous bacteria having the capability of supplementing two important macronutrients as nitrogen and phosphorus for maize N-free media (Burk’s, NFb, LGI) and NBRIP medium containing insoluble inorganic phosphate were used to isolate bacteria having both nitrogen fixation and phosphate solubilization characteristics Quantitative measurement by colorimetric methods helped to select the best isolates of nitrogen-fixing and phosphate-solubilizing bacteria Identification of these isolates based on 16S rDNA sequences by molecular biological techniques and bioinformatics tools and exploring further plant growth promoting features such as IAA synthesis and siderophore synthesis were employed to select some isolates for testing in potted and field maize The result of isolation was a total of 180 rhizopheric and 319 endophytic isolates having the both abilities Fifty-five selected isolates had 16S rDNA sequences similarities with bacterial strains in data of GenBank (NCBI) with the values ranging between 97% and 100% of similarity in which the majority was Burkholderia, Enterobacter and Bacillus genera All selected isolates are capable of producing IAA; moreover the isolate DDN10b having siderophore producing ability The in vivo plant growth promoting experiments demonstrated that two isolates of DDN10b (Burkholderia sp.) and VTN2b (Bacillus subtilis) are potentially candidates for using as fertilizer inoculants because helping to save 25% of total standard mounts of N and P fertilizers and improved the yields of maize up further from 11.7% to 24.9% The next suggested studies will be other plant growth promotion potentials evaluations as well as continue to assess the effectiveness of the two bacterial iv strains DDN10b and VTN2b on maize planting in the key areas of the Southeast Keywords: acrisols, endophytic bacteria, nitrogen fixation, phosphate solubilization, plant growth promoting, rhizospheric bacteria v Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận án hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác Ngày……………… Nghiên cứu sinh Đặng Thị Ngọc Thanh vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii ABSTRACT iv LỜI CAM ĐOAN vi MỤC LỤC vii DANH SÁCH BẢNG xi DANH SÁCH HÌNH xiii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xvii CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 1.5 Nội dung nghiên cứu 1.6 Đóng góp ý nghĩa luận án CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hiện trạng sản xuất ngô đất xám vùng Đông Nam Bộ 2.1.1 Đặc điểm đất xám vùng Đông Nam Bộ 2.1.2 Đặc điểm vùng ngô Đông Nam Bộ 2.1.3 Tình hình sử dụng phân bón thuốc trừ sâu Đông Nam Bộ 12 2.2 Ứng dụng vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng thực vật: cách tiếp cận tiềm nông nghiệp bền vững 15 2.2.1 Khái niệm nông nghiệp bền vững 15 2.2.2 Mối quan hệ thực vật với loại vi khuẩn liên hiệp thực vật 17 2.2.3 Vi khuẩn vùng rễ, vi khuẩn nội sinh thực vật khái niệm liên quan 18 2.2.4 Cơ chế thúc đẩy tăng trưởng thực vật vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh thực vật 19 2.2.5 Sử dụng vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng thực vật loại chế phẩm chủng cho trồng 26 2.3 Các nghiên cứu vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh ngô giới 30 2.3.1 Sưu tập xác định đặc tính vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh ngô 30 2.3.2 Nghiên cứu đa dạng di truyền vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh ngô dựa trình tự gene 16S rRNA 38 vii 2.3.3 Dị tìm gene nif nifH nghiên cứu khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh BNF 2.3.4 Nghiên cứu khả ứng dụng vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn nội sinh canh tác ngô 2.4 Triển vọng thách thức nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn thúc đẩy tăng trưởng thực vật ngô trồng khác CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu thí nghiệm 3.1.1 Loại đất giống ngô thu mẫu 3.1.2 Các giống ngô trồng thử nghiệm hiệu PGP 3.1.3 Đất xám thí nghiệm trồng ngô 3.1.4 Phân bón hóa học liều lượng 3.2 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.3.1 Thu thập xử lý mẫu 3.3.2 Phân tích đặc tính dinh dưỡng đất 3.3.3 Xác định mật số tế bào vi khuẩn cố định đạm, hòa tan lân đất vùng rễ ngơ tìm hiểu tương quan tuyến tính với tiêu dinh dưỡng đất 3.3.4 Phân lập vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân từ đất vùng rễ ngô 3.3.5 Phân lập vi khuẩn nội sinh cố định đạm hòa tan lân từ thân rễ ngô 3.3.6 Xác định hình thái khuẩn lạc, hình dạng tế bào chuyển động dòng vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân 3.3.7 Xác định Gram dòng vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân 3.3.8 Bảo quản dòng vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân 3.3.9 Khảo sát định lượng khả cố định đạm hòa tan lân dòng vi khuẩn đất vùng rễ nội sinh ngô 3.3.10 Tuyển chọn dòng cố định đạm hòa tan lân tốt từ sưu tập dòng vi khuẩn đất vùng rễ nội sinh ngô 3.3.11 Nhận diện dòng vi khuẩn đất vùng rễ nội sinh ngô tuyển chọn 3.3.12 Một số nghiên cứu “đặc tính hóa phân tử” dịng vi khuẩn tuyển chọn 3.3.13 Khảo sát đặc tính sinh tổng hợp IAA siderophore dòng vi khuẩn tuyển chọn viii 45 46 49 52 53 53 53 54 54 55 55 55 58 58 62 63 65 66 67 67 72 72 77 79 19.2 CHIỀU CAO ĐÓNG BẮP ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) df 3 9 36 SS 5.2025 3106.852 35.2825 609.8475 684.5975 88.215 Total 63 4529.997 CV (a) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 Count 16 16 16 16 MS 1.734167 1035.617 3.920278 203.2825 76.06639 2.450417 F F crit (0.05) F crit (0.01) 264.17 3.862548 6.991917 82.96 31.04 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 2.44 Sum 1104.6 1336.8 1369.2 1373.8 CV (b) = Average 69.0375 83.55 85.575 85.8625 Variance 79.77717 5.085333 5.994 4.019833 LSD.05 = 1.5836 Trung bình nhân tố lơ phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 Count 16 16 16 16 Sum 1217.8 1276.2 1339.2 1351.2 Average 76.1125 79.7625 83.7 84.45 Variance 135.1892 76.9665 21.46133 20.79733 LSD.05 = 1.1224 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups F0B0 F0B1 F0B2 F0B3 F2B0 F2B1 F2B2 F2B3 F3B0 F3B1 F3B2 F3B3 F1B0 F1B1 F1B2 F1B3 LSD.05 = Count 4 4 4 4 4 4 4 4 Sum 227.6 261.4 305.2 310.4 322.4 331 343.4 340 332.4 339 345 352.8 335.4 344.8 345.6 348 Average 56.9 65.35 76.3 77.6 80.6 82.75 85.85 85 83.1 84.75 86.25 88.2 83.85 86.2 86.4 87 2.5040 - 114 - Variance 0.973333 1.556667 6.013333 7.706667 1.44 0.25 0.756667 0.666667 0.706667 5.583333 2.25 2.56 8.89 0.16 0.72 2.666667 1.93 19.3 KHỐI LƯỢNG CHẤT KHÔ ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df 3 9 36 63 SS 32.03422 473106.1 321.5139 40981.67 19832.81 1054.454 535328.6 CV (a) = 16 16 16 16 LSD.05 = F F crit (0.05) F crit (0.01) 4414.48 3.862548 6.991917 466.38 75.23 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 3.86 Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups Count Sum F0 F2 F3 F1 MS 10.67807 157702 35.72377 13660.56 2203.645 29.2904 CV (b) = Average 928.6 1576.5 2893.1 4523.5 Variance 58.0375 98.53125 180.8188 282.7188 89.05317 91.87963 1551.612 2415.62 4.7803 Trung bình nhân tố lô phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 1802.7 2814.5 2538.8 2765.7 Average 112.6688 175.9063 158.675 172.8563 Variance 3797.974 10583.97 8442.267 10132.25 3.8807 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups F0B0 F0B1 F0B2 F0B3 4 4 Sum 172.2 263.7 236.5 256.2 Average 43.05 65.925 59.125 64.05 Variance 0.91 2.689167 4.729167 4.71 F2B0 F2B1 4 346.5 426.3 86.625 106.575 18.18917 1.989167 F2B2 F2B3 4 372.7 431 93.175 107.75 8.789167 3.583333 F3B0 461 115.25 21.41667 F3B1 831.5 207.875 6.395833 F3B2 792 198 10 F3B3 808.6 202.15 11.55667 F1B0 823 205.75 21.58333 F1B1 1293 323.25 62.25 F1B2 1137.6 284.4 116.24 F1B3 1269.9 317.475 174.3025 LSD.05 = Count 8.6571 - 115 - 3.49 19.4 CHIỀU DÀI BẮP ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df 3 9 36 63 SS 0.359317 213.2026 0.723077 48.63894 17.03745 2.542681 282.504 CV (a) = MS 0.119772 71.06752 0.080342 16.21298 1.89305 0.07063 F F crit (0.05) F crit (0.01) 884.56 3.862548 6.991917 229.55 26.80 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 1.53 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 251.11 288.5 315.8 326.8 Average 15.69438 18.03125 19.7375 20.425 Variance 2.58264 0.280958 0.833167 0.923333 Average Variance 0.2267 Trung bình nhân tố lơ phụ (Vi khuẩn) Groups Count Sum B0 16 272.2 17.0125 5.0545 B1 16 306.3 19.14375 4.501292 B2 16 297.5 18.59375 4.480625 B3 16 306.21 19.13813 1.55459 LSD.05 = 0.1906 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum Average F0B1 65 16.25 0.11 F0B2 61.5 15.375 0.0225 F0B3 70.81 17.7025 0.030025 F2B0 68.9 17.225 0.0425 F2B1 73.4 18.35 0.096667 F2B2 73.2 18.3 0.06 F2B3 73 18.25 0.043333 F3B0 73 18.25 0.083333 F3B1 81.5 20.375 0.0625 F3B2 80.6 20.15 0.03 F3B3 80.7 20.175 0.015833 F1B0 76.5 19.125 0.0625 F1B1 86.4 21.6 0.166667 F1B2 82.2 20.55 0.03 F1B3 81.7 20.425 0.2425 LSD.05 = 53.8 13.45 Variance F0B0 0.4251 - 116 - 0.11 1.44 19.5 ĐƯỜNG KÍNH BẮP ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df 3 9 36 63 SS 0.077912 4.691362 0.055 0.430287 0.539725 0.292687 6.086975 CV (a) = MS 0.025971 1.563787 0.006111 0.143429 0.059969 0.00813 F F crit (0.05) F crit (0.01) 255.89 3.862548 6.991917 17.64 7.38 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 1.50 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 77.33 80.9 86.22 88.15 Average 4.833125 5.05625 5.38875 5.509375 Variance 0.021476 0.000532 0.010398 0.067726 Average Variance 0.0625 Trung bình nhân tố lơ phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 Count Sum 16 16 16 16 LSD.05 = 81.91 83.16 82.25 85.28 5.119375 5.1975 5.140625 5.33 0.06742 0.07482 0.07606 0.158813 Average Variance 0.0625 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum F0B0 F0B1 F0B2 F0B3 F2B0 F2B1 F2B2 F2B3 F3B0 F3B1 F3B2 4 4 4 4 4 19.02 19.46 19.1 19.75 20.22 20.24 20.21 20.23 21.15 21.58 21.52 4.755 4.865 4.775 4.9375 5.055 5.06 5.0525 5.0575 5.2875 5.395 5.38 0.001433 0.045967 0.029167 0.002292 0.0009 0.000267 0.000492 0.000958 0.000492 0.001967 0.023467 F3B3 F1B0 F1B1 F1B2 F1B3 4 4 21.6 21.52 21.88 21.42 23.7 5.4 5.38 5.47 5.355 5.925 0.002667 0.023467 0.002267 0.0009 0.005167 LSD.05 = 0.1442 - 117 - 1.74 19.6 SỐ HÀNG/BẮP ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df SS 0.135469 36.41422 1.072656 13.65672 6.211406 2.149375 59.63984 3 9 36 63 CV (a) = MS 0.045156 12.13807 0.119184 4.55224 0.690156 0.059705 F F crit (0.05) F crit (0.01) 101.84 3.862548 6.991917 76.25 11.56 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 2.37 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 219.1 224.1 238.3 249.8 Average 13.69375 14.00625 14.89375 15.6125 Variance 0.197958 0.101958 0.593958 0.6545 Average 13.8 14.91875 14.54375 14.94375 Variance 0.242667 0.796292 1.138625 0.887958 Average Variance 0.2761 Trung bình nhân tố lô phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 220.8 238.7 232.7 239.1 0.1752 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum F0B0 53 F0B1 56.4 14.1 0.04 F0B2 53.5 13.375 0.069167 F0B3 56.2 14.05 0.01 F2B0 54.6 13.65 0.17 F2B1 56.2 14.05 0.01 F2B2 56.9 14.225 0.069167 F2B3 56.4 14.1 0.013333 F3B0 55.8 13.95 0.063333 F3B1 62.3 15.575 0.029167 F3B2 57.8 14.45 0.063333 F3B3 62.4 15.6 0.08 F1B0 57.4 14.35 0.03 F1B1 63.8 15.95 0.01 F1B2 64.5 16.125 0.189167 F1B3 64.1 16.025 0.189167 LSD.05 = 13.25 0.3909 - 118 - 0.083333 1.68 19.7 SỐ HẠT/HÀNG ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df 3 9 36 63 SS 0.081875 799.6981 1.164375 119.8981 34.60812 6.16375 961.6144 CV (a) = MS 0.027292 266.566 0.129375 39.96604 3.845347 0.171215 F F crit (0.05) F crit (0.01) 2060.41 3.862548 6.991917 233.43 22.46 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 1.11 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 425.2 525.5 560.1 566.6 Average 26.575 32.84375 35.00625 35.4125 Variance 6.267333 2.734625 1.373958 0.4185 Average 30.125 33.1625 33.60625 32.94375 Variance 23.43533 8.363833 13.21129 11.10396 0.2877 Trung bình nhân tố lô phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 482 530.6 537.7 527.1 0.2967 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum F0B0 90.1 F0B1 F0B2 F0B3 F2B0 F2B1 F2B2 Average Variance 22.525 1.1425 114.2 28.55 0.143333 110.5 27.625 0.029167 110.4 27.6 0.08 121 30.25 0.09 133.4 33.35 0.036667 138.2 34.55 0.09 F2B3 132.9 33.225 0.069167 F3B0 132.7 33.175 0.2825 F3B1 141.4 35.35 0.09 F3B2 144.4 36.1 0.04 F3B3 141.6 35.4 0.026667 F1B0 138.2 34.55 0.116667 F1B1 141.6 35.4 0.08 F1B2 144.6 36.15 0.09 F1B3 142.2 35.55 0.063333 LSD.05 = 0.6619 - 119 - 1.27 19.8 KHỐI LƯỢNG 1000 HẠT (14%) ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df SS 12.11895 20907.8 105.4737 6888.97 1327.016 415.5406 29656.92 3 9 36 63 CV (a) = MS 4.039648987 6969.266541 11.71930167 2296.323388 147.4461837 11.54279515 F F crit (0.05) F crit (0.01) 594.68 3.862548 6.991917 198.94 12.77 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 CV (b) = 1.91 1.92 Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 Count 16 16 16 16 LSD.05 = 2.7380 Sum 2418.506 2751.866 3047.751 3165.701 Average 151.1566 171.9916 190.4844 197.8563 Variance 92.78339 58.26887 316.6884 115.534 Average 160.4871 185.6089 186.0065 179.3865 Variance 279.5375 540.2089 388.7678 309.3491 Trung bình nhân tố lô phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 2567.793 2969.743 2976.105 2870.184 2.4361 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum Average Variance F0B0 546.7326 136.6831 2.656154 F0B1 608.9826 152.2456 4.078429 F0B2 647.2674 161.8169 4.160188 F0B3 615.5233 153.8808 10.7161 F2B0 639.3314 159.8328 0.017112 F2B1 715.3779 178.8445 8.819167 F2B2 696.0174 174.0044 2.526915 F2B3 701.1395 175.2849 0.389083 F3B0 653.8593 163.4648 1.759881 F3B1 831.2663 207.8166 37.4979 F3B2 801.8023 200.4506 34.9471 F3B3 760.8233 190.2058 2.751821 F1B0 727.8698 181.9674 10.14942 F1B1 814.1163 203.5291 19.74531 F1B2 831.0174 207.7544 21.15016 F1B3 792.6977 198.1744 16.34636 LSD.05 = 5.4345 - 120 - 19.9 NĂNG SUẤT LÝ THUYẾT NGÔ HẠT ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df SS 5.820625 9055.46 31.43459 2273.319 228.4134 89.12752 11683.57 3 9 36 63 CV (a) = MS 1.940208466 3018.48658 3.492732188 757.7729344 25.37926177 2.475764491 F F crit (0.05) F crit (0.01) 864.22 3.862548 6.991917 306.08 10.25 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 3.81 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) Groups F0 F2 F3 F1 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 505.0593 723.7223 911.4454 1001.282 Average 31.56621 45.23264 56.96534 62.5801 Variance 25.35198 21.80719 77.11104 50.93745 1.4947 Trung bình nhân tố lô phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 621.6272 853.7581 846.0128 831.6752 Average 38.8517 53.35988 52.8758 51.9797 Variance 113.5511 177.9763 184.8092 126.018 Average Variance 1.1282 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count Sum F0B0 92.95338 23.23835 0.668906 F0B1 139.7582 34.93956 1.206068 F0B2 136.3024 34.0756 0.319815 F0B3 136.0453 34.01133 0.553896 F2B0 150.4428 37.61069 0.669124 F2B1 191.0552 47.76379 0.491335 F2B2 195.0034 48.75086 1.881633 F2B3 187.2209 46.80524 0.191509 F3B0 172.5369 43.13422 2.783401 F3B1 260.8989 65.22472 5.567242 F3B2 238.5069 59.62673 8.409183 F3B3 239.5027 59.87567 2.035139 F1B0 205.6942 51.42354 1.356419 F1B1 262.0459 65.51147 3.870186 F1B2 276.2001 69.05002 9.911352 F1B3 257.3415 64.33538 2.21237 LSD.05 = 2.5169 - 121 - 3.21 19.10 NĂNG SUẤT THỰC THỤ NGÔ HẠT ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df SS 20.04875 7215.223 52.21965 1927.209 205.8865 168.524 9589.112 3 9 36 63 CV (a) = MS 6.6829182 2405.0744 5.8021839 642.40316 22.876282 4.681221 F F crit (0.05) 414.51 3.86255 6.991917 137.23 4.89 2.86627 2.15261 4.377096 2.946086 5.15 CV (b) = Trung bình nhân tố lơ (Phân) F0 F2 F3 F1 Groups Count 16 16 16 16 LSD.05 = 1.9265 Sum 498.4805 709.0635 859.7404 942.1676 Average 31.15503 44.31647 53.73378 58.88547 Variance 27.98963 36.53969 63.5909 38.86487 Trung bình nhân tố lơ phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 598.339 820.6124 793.2192 797.2814 Average 37.39619 51.28827 49.5762 49.83009 Variance 109.5192 168.1748 140.7451 89.45686 1.5514 Trung bình toàn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups Count F0B0 F0B1 F0B2 F0B3 F2B0 F2B1 F2B2 F2B3 F3B0 F3B1 F3B2 F3B3 F1B0 F1B1 F1B2 F1B3 LSD.05 = Sum 4 4 4 4 4 4 4 4 Average 90.80248 133.829 132.2231 141.626 139.7704 184.0307 186.3699 198.8924 167.3861 250.2321 220.5395 221.5827 200.38 252.5205 254.0867 235.1803 22.70062 33.45724 33.05576 35.40649 34.9426 46.00769 46.59248 49.72311 41.84652 62.55803 55.13487 55.39568 50.09501 63.13013 63.52169 58.79508 3.4609 - 122 - F crit (0.01) Variance 0.278631 6.350733 0.218486 1.813724 5.932428 0.030272 4.47583 5.404432 2.236783 3.948732 5.66513 7.571458 1.75446 13.12143 17.09573 6.629995 4.63 19.11 NĂNG SUẤT THỰC THỤ NGÔ TRÁI ANOVA Source of Variation Replication Fertilizer (A) Error (a) Bacteria (B) A*B Error (b) Total df 3 9 36 63 SS 66.00229 78383.41 399.9053 3078.419 1591.114 996.15 84515 CV (a) = MS 22.00076 26127.8 44.43392 1026.14 176.7904 27.67083 F Groups LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 947.4629 1323.731 2158.576 2281.316 3.862548 6.991917 37.08 6.39 2.866266 2.152607 4.377096 2.946086 6.36 CV (b) = Average 59.21643 82.73318 134.911 142.5823 Variance 12.17062 71.07946 183.0103 142.5123 Average 93.21198 110.7682 106.0991 109.3636 Variance 838.8409 1692.171 1422.914 1475.18 5.3313 Trung bình nhân tố lơ phụ (Vi khuẩn) Groups B0 B1 B2 B3 LSD.05 = Count 16 16 16 16 Sum 1491.392 1772.291 1697.585 1749.818 3.7718 Trung bình tồn thể (Phân*Vi khuẩn) Groups F0B0 F0B1 F0B2 F0B3 F2B0 F2B1 F2B2 F2B3 F3B0 F3B1 F3B2 F3B3 F1B0 F1B1 F1B2 F1B3 LSD.05 = Count 4 4 4 4 4 4 4 4 Sum 233.1563 240.605 243.0637 230.6379 296.5649 335.9999 323.7939 367.3722 463.3296 591.6696 546.8037 556.7731 498.341 604.0169 583.9237 595.0346 Average 58.28907 60.15125 60.76592 57.65948 74.14123 83.99998 80.94847 91.84306 115.8324 147.9174 136.7009 139.1933 124.5852 151.0042 145.9809 148.7587 8.4143 - 123 - F crit (0.01) 588.01 Trung bình nhân tố lơ (Phân) F0 F2 F3 F1 F crit (0.05) Variance 17.91078 15.23132 4.610239 14.35563 43.91577 30.96995 59.03106 6.011675 15.85859 18.84062 69.93379 70.8162 10.82899 25.65868 28.08173 55.29752 5.02 PHỤ LỤC 20: MỘT SỐ HÌNH ẢNH THÍ NGHIỆM Đếm mật số vi khuẩn cố định đạm đất vùng rễ (mẫu VT07) Màng mỏng môi trường LGI bán đặc (mẫu thân ngơ) Quang cảnh khu thí nghiệm PVA3 Mẫu đất PVA3 (trong chậu 8,0 L) Bố trí thí nghiệm trồng ngô giống Wax48 chậu 0,5 L (kiểu CRD) Cây ngô Wax48 tháng tuổi ảnh hưởng mức NPK Các ngô Wax48 tháng tuổi ảnh hường dịng VTN2b Các ngơ Wax48 tháng tuổi ảnh hường dòng DDN10b - 124 - Bố trí thí nghiệm trồng ngơ Wax48 LVN10 chậu (kiểu CRD) Ngơ Wax48 giai đoạn xốy loa kèn Ngô Wax48 giai đoạn thu hoạch Ngô LVN10 giai đoạn trổ cờ Bộ rễ ngô LVN10 ảnh hưởng DDN10b mức bón NP Bắp ngơ LVN10 ảnh hưởng DDN10b+VTN2b mức bón NP Làm cỏ đắp luống giai đoạn 7-8 Bón thúc lần giai đoạn 7-8 - 125 - Đồng ngô giai đoạn lá, 25 ngày sau gieo (F2B3, với rìa phải F3B1) Một góc đồng ngô 40 ngày sau gieo (lô phụ F0B3 chưa trổ cờ đều) Đồng ngô giai đoạn phun râu, 43 ngày sau gieo (F1B2 bên trái, F2B3 bên phải) Một góc đồng ngơ thí nghiệm (khối RI với băng bảo vệ bìa phải) Lơ F0 khối RII Lơ F2 khối RII Lơ F3 khối RIV Lơ F1 khối RIV - 126 - Khác biệt mức phân NP F0 (trái) F1 (phải) Khác biệt mức phân NP F3 (trái) F0 (phải Khác biệt vi khuẩn B1 (trái) B0 (phải) Khác biệt vi khuẩn B0 (trái) B2 (phải) Khác biệt chiều cao F2B3 (trái) F2B1 (phải) khối RI Khác biệt bắp ngô F2B2 (trái) F2B0 (phải) khối RIII Thu hoạch Tách bi tách hạt - 127 - Bắp ngơ nghiệm thức bón 100% NP VK Bắp ngô nghiệm thức bón 100% NP dịng DDN10b Bắp ngơ nghiệm thức bón 100% NP dịng VTN2b Bắp ngơ nghiệm thức bón 100% NP dịng DDN10b+ VTN2b - 128 - ... đất vùng rễ từ thân rễ ngô trồng đất xám vùng Đông Nam Bộ 102 4.4 Khả cố định đạm hòa tan lân dòng vi khuẩn đất vùng rễ nội sinh ngô trồng đất xám vùng Đông Nam Bộ 105 4.4.1 Khả cố định. .. Kết phân lập vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân đất vùng rễ thân, rễ ngô trồng đất xám vùng Đông Nam Bộ 98 4.3 Đặc tính hình thái khuẩn lạc tế bào vi khuẩn cố định đạm hòa tan lân phân lập từ đất. .. chọn nhận diện vi khuẩn cố định đạm, hòa tan lân đất vùng rễ vi khuẩn nội sinh ngô (bắp) (Zea mays L.) trồng đất xám vùng Đông Nam Bộ” thực nhằm mục tiêu tìm kiếm nguồn vi khuẩn địa có khả