Đánh giá quần thể véc tơ và sự có mặt của vi rút Chikungunya ở muỗi và người tại một số địa phương có biên giới với Lào và Campuchia, 2012-2014

Bên cạnh đó các nghiên cứu về vai trò của các loại muỗi trong việc duy trì và lan truyền bệnh dịch này cũng chưa được thực hiện.. Nghiên cứu về sự có mặt của vi rút Chikungunya trên ngườ

MỞ ĐẦU

Bệnh Chikungunya (CHIK) hiện nay đang là vấn đề y tế công cộng quan trọng trên toàn cầu do khả năng lây lan nhanh chóng của dịch bệnh trong những năm gần đây[9],[20],[22],[25] Đây là bệnh nhiễm vi rút cấp tính do muỗi truyền và có thể chuyển thành dịch lớn Trong những năm gần đây bệnh dịch xuất hiện tại rất nhiều quốc gia/lãnh thổ trên thế giới đặc biệt là khu vực Châu Á Tại Ấn Độ, chỉ trong giai đoạn ngắn từ năm 2005-2007 đã ghi nhận hơn 1,3 triệu người bị mắc loại dịch bệnh này Bệnh còn ghi nhận nhiều tại các vùng dân cư sống trên các hòn đảo tại Ấn Độ Dương như La Réunion, Seychelles, Mauritius, Mayotte, Comoros và Madagascar Trong những năm gần đây, các nước thuộc khu vực Đông Nam Á và láng giềng quanh Việt Nam như: Malaysia, Singapore, Thái Lan, Lào và Campuchia đều đã ghi nhận các

vụ dịch vừa và nhỏ[7],[10],[12],[13],[23],[26]

Trên thế giới, các nghiên cứu đã chỉ ra rằng có 2 loài muỗi quan trọng

truyền bệnh là muỗi Ae aegypti và muỗi Ae albopictus Muỗi Ae aegypti

phân bố trong vùng nhiệt đới và ôn đới của các châu lục, giữa 45o vĩ tuyến Bắc và 35o vĩ tuyến Nam, trong khoảng nhiệt từ 100C trở lên và ở độ cao từ 0

- 1200 mét Muỗi Ae albopictus phân bố rộng ở nhiều châu lục, giữa 35o vĩ tuyến Bắc và 35o vĩ tuyến Nam, cũng trong khoảng nhiệt từ 100C trở lên Hiện nay việc phòng chống Chikungunya trên thế giới là vô cùng khó khăn vì chưa

có vắc xin phòng bệnh cũng như chưa có thuốc điều trị đặc hiệu Biện pháp phòng chống chủ yếu và có hiệu quả là dựa vào kiểm soát véc tơ truyền bệnh

Do muỗi Ae aegypti và Ae albopictus có các đặc điểm sinh học, dân cư và tập tính rất khác nhau, muỗi Ae aegypti ưa sống trong nhà, trong khi đó Ae albopictus lại ưa sống ngoài nhà ở các bụi cây nên các biện pháp và chiến

lược phòng chống hai loài muỗi này cũng phải có những đặc thù riêng thì mới đạt được hiệu quả

Cho đến thời điểm này, tại Việt Nam chưa có ghi nhận nào về ca bệnh Chikungunya trên người Bên cạnh đó các nghiên cứu về vai trò của các loại muỗi trong việc duy trì và lan truyền bệnh dịch này cũng chưa được thực hiện Tuy nhiên với mức độ du lịch, giao thông đi lại, thương mại giữa các quốc gia hiện nay là rất lớn thì khả năng xâm nhập vi rút Chikungunya vào Việt Nam là hoàn toàn có thể xảy ra, nhất là tại các khu vực vùng biên giới giáp với Lào, Campuchia và Trung Quốc Vì vậy, việc xác định quần thể véc

tơ truyền bệnh, sự có mặt của vi rút cũng như đã thực sự có bệnh nhân hay chưa là những vấn đề cần phải được tìm hiểu Nghiên cứu về sự có mặt của vi rút Chikungunya trên người cũng như véc tơ truyền bệnh là hết sức quan trọng và cần thiết để giúp các nhà quản lý và các nhà chuyên môn trong việc chỉ đạo, lập kế hoạch phòng chống dịch bệnh nguy hiểm này trên người trong thời gian tới ở nước ta Chính vì những lý do trên, chúng tôi đề xuất đề tài nghiên cứu khoa học: "Đánh giá quần thể véc tơ và sự có mặt của vi rút Chikungunya ở muỗi và người tại một số địa phương có biên giới với Lào và Campuchia, 2012-2014"

Nghiên cứu có các mục tiêu sau:

1. Mô tả sự phân bố quần thể của hai loài Aedes aegypti và Aedes albopictus tại các điểm nghiên cứu

2. Xác định sự có mặt của vi rút Chikungunya trên quần thể muỗi Aedes aegypti và Aedes albopictus thu được từ các điểm nghiên cứu

3 Xác định sự có mặt của vi rút Chikungunya trên bệnh nhân nghi mắc tại các điểm nghiên cứu.

CHƯƠNG I

TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU

Bệnh Chikungunya (CHIK) là các bệnh nhiễm vi rút cấp tính do muỗi truyền, có thể gây thành dịch lớn và có triệu chứng lâm sàng tương đối giống nhau Bệnh sốt xuất huyết là bệnh lưu hành địa phương ở Việt Nam, nhất là ở các tỉnh đồng bằng sông Cửu Long, đồng bằng Bắc bộ và vùng ven biển miền Trung Trong khi đó chưa có bằng chứng đáng tin cậy nào xác nhận việc vi rút Chikungunya đã lưu hành tại Việt Nam Bệnh CHIK không lây truyền trực tiếp từ người sang người mà lây truyền qua véc tơ là muỗi Hai loài muỗi

được ghi nhận có vai trò trong dịch bệnh này là muỗi Aedes aegypti và Aedes albopictus Đến nay,bệnh CHIK chưa có thuốc điều trị đặc hiệu và chưa có

vắc xin phòng bệnh, vì vậy diệt véc tơ đặc biệt là diệt bọ gậy (lăng quăng) với

sự tham gia tích cực của từng hộ gia đình và cả cộng đồng là biện pháp hiệu quả trong phòng chống dịch

1 Tình hình dịch bệnh Chikungunya trên thế giới

Ổ dịch Chikungunya đầu tiên đã được ghi nhận tại cao nguyên Makonde, dọc theo biên giới giữa Tanzania (trước đây là Tanganyika) và Mozambique, trong 1952-1953 Nghiên cứu sau này đã chứng minh nó như là một loại vi rút mới mà đã tồn tại ở Đông Phi và duy trì trong một chu kì loài linh trưởng -

muỗi Aedes truyền bệnh - con người[1],[24] Nhiều nghiên cứu hồi cứu sau

này đã khẳng định rằng dịch bệnh Chikungunya xảy ra vào đầu năm 1779 nhưng đã không được ghi nhận mà thông báo như dịch sốt xuất huyết dengue (WHO, 2006) Sau khi dịch bùng nổ vào năm 1952-1953, vi rút này đã phổ biến rộng rãi trên toàn châu Phi cận sa mặc Sahara, Ấn Độ và các nước Đông Nam Á, dẫn đến nhiều dịch bệnh trong những năm tiếp theo Sau đó vi rút này đã trở thành đại dịch ở châu Phi bằng chứng là sự bùng phát dịch thường xuyên ở Tanzania, Uganda, Zimbabwe, Nam Phi, Senegal, Nigeria, Cộng hòa

Trung Phi và Cộng hòa Dân chủ Congo Dịch bệnh tái xuất hiện gần đây nhất được ghi nhận năm 1999-2000 ở Kinshasa Tại châu Á, dịch bệnh được ghi nhận lần đầu tiên tại Thái Lan vào năm 1958, sau đó các nước khác thuộc khu vực này như Campuchia, Lào, Myanmar, Malaysia, Philippines và Indonesia

đã báo cáo có dịch Dịch bệnh tái xuất hiện tại châu Phi và châu Á, với khoảng thời gian 7 đến đến 20 năm hoặc nhiều hơn nữa không ghi nhận ca bệnh nào Kể từ cuối năm 2004, virus Chikungunya đã tấn công các đảo của

Ấn Độ Dương như, Comoros, Mayotte, Seychelles, La Réunion, Mauritius và Madagascar Hòn đảo bị ảnh hưởng nhất là La Réunion, với gần một phần ba tổng dân số báo cáo bị bệnh Chikungunya Bệnh cũng đã được ghi nhận ở một số nước châu Âu (Pháp, Đức, Ý, Thụy Sĩ và Na Uy) Năm 2006, một ổ

dịch Chikungunya được báo cáo ở Malaysia[8],[12],[14],[19],[21],[23],[26]

Dịch đầu tiên của Chikungunya ở Ấn Độ đã được báo cáo từ Kolkatta (trước đó Calcutta), tây Bengal vào năm 1963 với gần 200 bệnh nhân (chủ yếu là trẻ em) Năm 1965 tại các tỉnh Pondicherr, Tamil Nadu, Rajahmundry, Visakhapatnam, Kakinada, Andhra Pradesh và Maharashtra Các vi rút Chikungunya phân lập từ Calcutta có liên quan chặt chẽ với chủng vi rút Chikungunya ở Thái Lan hơn là chủng vi rút Chikungunya ở Châu Phi, điều này cho thấy nguồn gốc của nó từ Đông Nam Sau 3 thập kỷ không xuất hiện bệnh, vào năm 2006, dịch Chikungunya đã được báo cáo ở Ấn Độ Phân tích kiểu gen cho phát sinh loài cho thấy tất vi rút có nguồn gốc từ châu Á và châu Phi Đa số các ca bệnh được ghi nhận từ các bang Andhra Pradesh, Karnataka, Kerala, Tamil Nadu, Gujarat, Madhya Pradesh và Maharashtra Tổng số 1958 ca đã được báo cáo từ 13 bang ở Ấn Độ trong thời gian 2006-

2007, không có tử vong liên quan trực tiếp đến Chikungunya[20],[22]

Bảng 1.1: Sự phân bố ca bệnh Chikungunya trên thế giới giai đoạn 2005 -

2006

Địa điểm

Số ca bệnh

Nguồn: WHO in India, 2007

2 Tình hình bệnh Chikungunya tại Việt Nam

Vào những năm 1958 có thông tin cho rằng tại 1 số nước trong khu vực Đông Nam Á như Thái Lan, Campuchia, Lào, Myanmar, Malaysia, Philippines, Indonesia và Việt Nam đã có dịch bệnh Chikungunya[7],[8],[12],[13],[23],[26] Tuy nhiên không có bằng chứng về dịch tễ học cũng như vi rút học nào để minh chứng cho nhận định này Từ đó đến nay Việt Nam chưa ghi nhận một trường hợp mắc bệnh Chikungunya nào

mà có chẩn đoán xác định bằng xét nghiệm Tuy nhiên bệnh SXH do vi rút

Dengue và bệnh SXH do vi rút Chikungunya có bệnh cảnh lâm sàng tương đối giống nhau và rất khó có thể phân biệt trên lâm sàng Cả 2 bệnh này đều

có cùng véc tơ chính truyền bệnh là Ae aegypti và Ae albopictus Tại Việt

Nam bệnh SXHD đã trở thành lưu hành địa phương và những năm gần đây đang nổi lên là vấn đề y tễ công cộng lớn, số mắc lâm sàng trung bình ghi nhận hàng năm trong giai đoạn 10 năm từ 2001 - 2010 là 75.952 ca và tử

vong là 79 ca (Dự án SXHD quốc gia) Với bệnh cảnh lâm sàng rất giống với

bệnh SXHD nhiều nhà khoa học đã nghi rằng một số các trường hợp mắc bệnh mà xét nghiệm âm tính với vi rút Dengue liệu có thể là Chikungunya hay không? Chính vì vậy mà hiện nay tại Việt Nam SXH do Chikugunya cũng đang là vấn đề được các nhà khoa học rất quan tâm và có những nghiên cứu ban đầu Năm 2008-2009, phòng thí nghiệm các virut Arbo- Khoa virut - Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung Ương (VSDTTW) đã tiến hành xét nghiệm tìm kháng thể của CHIKV bằng kỹ thuật Mac-Elisa trên 1080 mẫu huyết thanh bệnh nhân nghi mắc SXHD ở các tỉnh thành phía Bắc, Việt Nam, đã phát hiện 78/1080 (7.22%) mẫu có phản ứng dương tính với kháng thể của CHIKV [58] Nhưng kết quả phân lập vi rút và xét nghiệm PCR sau đó đều âm tính với virút Chikungunya, như vậy vẫn không thể khẳng định được sự có mặt của vi rút Chikungunya trong các mẫu huyết thanh trên Ngoài ra, trong một nghiên cứu khác của Vũ Xuân Nghĩa và cộng sự khi phân tích các mẫu huyết thanh của bệnh nhân nghi mắc sốt xuất huyết điều trị tại Học Viện Quân Y năm 2009 đã phát hiện 4/50 (8%) mẫu dương tính bằng phương pháp RT- PCR [59], tuy nhiên kết quả này sau đó vẫn chưa được kiểm chứng lại và chưa được công nhận chính thức của các cơ quan có thẩm quyền và của Bộ Y

tế Như vậy với những kết quả ban đầu này cho thấy nhiều khả năng vi rút Chikungunya đã quay trở lại Việt Nam Tuy nhiên đến thời điểm này vẫn chưa khẳng định sự có mặt của vi rút Chikungunya trên các bệnh nhân nghi ngờ

3 Tình hình dịch bệnh Chikungunya tại một số nước lân cận Việt nam

Bệnh Chikungunya được ghi nhận rõ tại khu vực Đông Nam Á vào cuối những năm 1950 và 1960 với phân lập ca bệnh đầu tiên tại Thái Lan vào năm

1958 và trong những năm gần đây các vụ dịch do Chikungunya ngày càng được phát hiện nhiều hơn quy mô lớn hơn, nó thực sự trở thành vấn đề y tế công cộng lớn ở khu vực này

3.1 Tại Malaysia

Trong vòng 15 năm qua, Malaysia có các vụ dịch Chikungunya gây ra bởi

cả hai chủng vi rút châu Á và chủng thuộc dòng ECSA Một đợt bùng phát dịch trong năm 1998 đã được ghi nhận tại khu Klang, cách thủ

đô Kuala Lumpur 30 km, ghi nhận 51 ca bệnh Một ổ dịch thứ hai của Chikungunya được ghi nhận giữa tháng 3 và 4/2006 tại Bagan Panchor, Perak, đã được ghi nhận lên tới hơn 200 ca Trong vụ dịch thứ 2 này, cùng lúc với đỉnh cao của sự bùng nổ 2005- 2006 trên đảo La Reunion và với sự bắt đầu của hàng loạt vụ dịch tại Ấn Độ Dương các nhà khoa học đã chứng minh được vi rút Chikungunya thuộc dòng Châu Á Vụ dịch thứ 3 xảy ra tại Malaysia vào tháng 12 năm 2006 tại Ipoh, Perak, chủng vi rút thuộc nguồn gốc từ Ấn Độ Cho đến năm 2008 dịch Chikungunya bắt đầu bùng phát lớn từ tháng 4/2008, lan rộng đến 14 trong 15 tiểu bang thuộc Malaysia[7]

3.2 Tại Singapore

Singapore là một nước nhỏ nằm ở cuối phía nam của bán đảo Malaysia và các chủng vi rút thường xuyên xâm nhập vào nước này Các trường hợp đầu tiên của dịch bệnh được báo cáo từ ngày 14/1/2008 cho đến 21/2/2008 với tổng số 13 bệnh nhân Sau đó còn có 02 vụ dịch xảy ra tại Malaysia với số lượng ca bệnh được ghi nhận không nhiều Phân tích vi rút học cho thấy ngồn gốc của các chủng vi rút gây bệnh ở đây có nguồn gốc từ

Ấn Độ, Malaysia và Sri Lanka Các vụ dịch tại đây do cả 02 loài muỗi Ae aegypti và Ae albopictus gây ra[17],[18]

3.3 Tại Thái Lan

Thái Lan là quốc gia phải chịu nhiều đợt bùng phát của dịch bệnh Chikungunya, trường hợp mắc đầu tiên được báo cáo đầu tiên vào năm 1960,

và các vụ dịch khác ở tỉnh Prachinburi năm 1976, tỉnh Surin năm 1988, tỉnh Khon Kaen năm 1991, tỉnh Loei và Phayao năm 1993, tỉnh Nakhon Si Thammarat và tỉnh Nong Khai năm 1995 Vụ dịch gần đây nhất là tại các tỉnh miền Nam Thái Lan vào các năm 2008 và 2009 với 22.000 trường hợp Chikungunya mắc trong chỉ 5 tháng đầu năm 2009 Kết quả phân tích cho thấy chủng vi rút thuộc dòng Châu Á Năm 2008 tại tỉnh Narathiwat, một trong cực Nam tỉnh của Thái Lan và tiếp giáp với tiểu bang của Malaysia (Kelantan) Phân tích trình tự cho thấy vi rút thuộc dòng ECSA có nguồn gốc

từ Malaysia Tháng 12/2009 bệnh Chikungunya đã được báo cáo ở 43/75 tỉnh của Thái Lan với hơn 46.000 trường hợp Chủng vi rút được phân lập và cho thấy có nguồn gốc từ Singapore, Malaysia, và Sri Lanka[11],[16]

3.4 Tại Lào và Campuchia

Lào, Campuchia là hai quốc gia có chung đường biên giới với Việt Nam, hàng năm tại hai quốc gia này ghi nhận số lượng lớn các trường hợp mắc sốt xuất huyết Dengue (SXHD) lâm sàng Bên cạnh bệnh SXHD, những năm gần đây tổ chức y tế thế giới cũng đã đưa Lào và Campuchia là 2 trong số các quốc gia nằm trong vùng có sự xâm nhập của vi rút Chikungunya [Hình 1]

Có thể do những vấn đề trong hệ thống giám sát, báo cáo và hệ thống xét nghiệm mà cho tới thời điểm này những số liệu chính xác về dịch Chikungunya tại các nước này còn chưa sáng tỏ Năm 2013, Lào đã khẳng

định vai trò của 2 loại muỗi Aedes đối với bệnh Chikungunya[16],[21],[23]

Hình 1.1: Sự lưu hành vi rút Chikungunya trên thế giới, 2010 (nguồn CDC)

4 Véc tơ truyền bệnh chikungunya

Các nhà khoa học trên thế giới đã chứng minh 2 loài muỗi chính là muỗi

Aedes agypti và muỗi Aedes albopictus lây truyền vi rút chikungunya từ người bệnh sang người lành qua vết đốt Sau đây là các đặc điểm khác nhau

về 2 loài muỗi này

4.1 Muỗi Aedes aegypti

4.1.1 Vài nét về sự phân bố của loài muỗi Aedes aegypti

Ae aegypti phân bố trong vùng nhiệt đới và ôn đới của các châu lục (giữa

450 vĩ tuyến Bắc và 350 vĩ tuyến Nam) giới hạn bằng đường đẳng nhiệt 100C,

về độ cao có mặt từ 0 đến 1200 m, một ít quần thể có mặt đến độ cao 1800 m (ở Ấn Độ) Tại Việt Nam, phân ở hầu hết các tỉnh/thành phố, tuy nhiên mật

độ cao và chiếm ưu thế hơn ở các tỉnh Miền Nam, Miền Trung và Tây

nguyên Tại Miền Bắc Ae aegypti chủ yếu tập trung ở thành phố, rồi đến các

đồng bằng ven biển và các làng mạc gần đường giao thông Đó là những nơi

có dân cư đông đúc, có nhiều dụng cụ chứa nước và các phương tiện giao thông thường xuyên qua lại; hiện nay kinh tế phát triển (rác thải bia, đồ hộp ) và việc đô thị hóa nhanh chóng nhưng không đồng bộ (cấp thoát nước

chưa đầy đủ, vệ sinh môi trường kém), sự thờ ơ của một số người dân với

giáo dục sức khỏe cho cộng đồng, làm cho vùng phân bố của Aedes aegypti

ngày càng mở rộng

Hiện nay trên thế giới đã ghi nhận 2 loài muỗi có khả năng truyền bệnh

SXHD và bệnh chikungunya đó là muỗi Ae aegypti và Ae albopictus Tuy

nhiên, chúng lại có những đặc điểm tương đối khác nhau về hình thái học, sinh thái học, sự phân bố và khả năng truyền các loại bệnh trên

4.1.2 Đặc điểm nhận dạng muỗi Aedes aegypti trưởng thành

Hình thái muỗi Ae aegypti trưởng thành rất dễ nhận biết, với kích thước

trung bình, chân và bụng có các khoang đen trắng rõ rệt Thân có nhiều vẩy trắng bạc tập trung thành từng cụm hay từng đường trên mình muỗi Vòi không có băng trắng, đỉnh pan trắng Trên mặt lưng ngực có hai đường vẩy màu trắng bạc phình ra, như hai nửa vòng cung ôm hai bên lưng nên gọi là hình đàn (Harwood và James, 1979; WHO, 1995; Vũ Đức Hương, 1997) Trên mặt lưng bụng ở gốc các đốt II đến VIII đều có những đường vẩy ngang từng đốt, gốc các đốt bàn chân sau có những khoang trắng, riêng đốt bàn chân thứ V trắng hoàn toàn, cho nên muỗi còn có tên gọi là muỗi vằn (Hình 7)

Muỗi Ae aegypti có kích thước trung bình Độ dài của sải cánh khoảng 4,5 -

5mm Muỗi thường có màu đen điểm vẩy bạc, cho nên còn được gọi là muỗi vằn Cơ thể muỗi chia làm ba phần: đầu, ngực và bụng

- Phần đầu có dạng hình cầu; phía trước đầu là trán, dưới trán là tấm gốc môi, trên trán là đỉnh, dưới đỉnh là gáy Trên đầu phủ nhiều vảy với hình dáng khác nhau, hình dẹt rộng hay hẹp, hình cong lưỡi liềm hay hình đinh vít v.v… Hai bên đầu có đôi mắt kép lớn Giữa hai mắt kép là vòi Hai bên vòi là pan, hai bên pan là râu Râu gồm 14 - 15 đốt Đốt I dẹt khó thấy Đốt II được gọi là đốt gốc râu hình quả táo, không có lông, đôi khi được phủ vảy Từ đốt III trở đi là những đốt roi có dạng hình trụ, xung quanh mang lông phụ râu Lông phụ râu ở con đực rậm hơn con cái rất nhiều Vòi có kích thước gần

bằng nửa thân, hình dáng thon dài Trên vòi thường phủ vẩy màu đen, đôi khi lẫn những vảy bạc Vòi của muỗi có cấu tạo dạng chích hút của côn trùng Pan gồm 5 đốt Ở muỗi đực pan dài hơn vòi, còn muỗi cái pan ngắn hơn vòi Trên pan thường phủ vảy đen, đôi khi xen lẫn những cụm vẩy trắng Ở một số loài những cụm vảy trắng tập trung ở đỉnh làm cho pan có màu trắng

- Phần ngực gồm ba đốt: ngực trước (Pronotum), ngực giữa (Mesonotum) và đốt ngực sau (Metanotum) Mỗi đốt ngực được giới hạn bởi tấm lưng, hai tấm bên và tấm bụng Trên tấm lưng ngực trước tiêu giảm, chỉ còn hai ụ nhỏ ở hai bên tấm lưng của đốt ngực giữa Tấm lưng của đốt ngực giữa lớn nhất và chia làm hai phần, scutum ở phía trước và scutellum ở phía sau Giống như các muỗi khác scutellum có ba thùy Tấm lưng của đốt ngực sau nhỏ và trơn Tấm bên của mỗi đốt chia làm hai thùy, thùy trước và thùy sau Thùy mesoepisternum lớn nhất mang lỗ thở ngực trước ở phía trên Phần trên của thùy mesoepimerum mang gốc cánh Lỗ thở ngực sau nằm ở metapleurum Trên tấm lưng và tấm bên của ngực có phủ nhiều vẩy và lông cứng Các vẩy thường có màu đen, màu nâu hay màu bạc Đặc điểm nổi bật

để xác định loài muỗi Ae aegypti là các vẩy bạc ở mặt lưng ngực

(mesonotum) tập trung thành hình giống như hình vỏ đàn và trên tấm bên ngực giữa không có lông lỗ thở mà chỉ có lông sau lỗ thở Phần ngực mang một đôi cánh và ba đôi chân Đôi cánh bám vào đốt ngực giữa Ở gần gốc cánh, về phía sau có hai thùy nhỏ là alula và squama Cấu tạo của cánh gồm màng cánh và hệ thống gân cánh Khác với gân cánh, màng cánh không phủ vẩy mà chỉ có những lông nhỏ li ti Vẩy trên các gân cánh đều màu đen,

không tập trung thành đốm như giống muỗi Anopheles Hệ thống gân của cánh gồm các gân dọc và gân ngang Ở muỗi Ae aegypti gân dọc 6 vượt quá

chỗ chia nhánh của gân dọc 5 Bàn chân có 5 đốt, đốt cuối bàn có mang một đôi vuốt trơn hay có có răng Trên các phần của chân có phủ vẩy màu đen hay màu trắng bạc tập trung thành những điểm hay khoang trắng

- Phần bụng gồm 10 đốt, có dạng hình ống thon dài Đốt IX và đốt X tiêu giảm, tham gia vào cấu tạo của cơ quan giao phối Từ đốt I đến đốt VIII

có cấu tạo giống nhau Ở mỗi đốt có tấm lưng và tấm bụng Giữa tấm lưng và tấm bụng được liên kết với nhau bởi một màng mỏng đàn hồi Trên tấm lưng

và tấm bụng thường được phủ vẩy màu đen hay trắng Ở đầu và cuối các đốt bụng, các cụm vẩy màu trắng thường được tập trung thành các băng ngang hình chữ nhật hay hình elip Đốt VIII mang cơ quan giao phối Cơ quan giao phối ở con đực và con cái có cấu tạo khác nhau Cơ quan giao phối ở con đực

có cấu tạo phức tạp Hai bên cơ quan này có đôi càng lớn, cấu tạo bởi hai đốt Đốt I hay đốt gốc là phần lớn nhất, hình dáng thay đổi và được phủ bằng lông hoặc vẩy Ở gần gốc và đỉnh của đốt I có thùy gốc và thùy đỉnh mang nhiều lông cứng Đốt II gắn vào đốt I như con dao díp và thường có dạng hình chữ nhật Cơ quan giao phối của con cái có cấu tạo đơn giản, gồm một đôi cerci nằm ở ngay sau đốt bụng VIII

Cũng giống như nhiều giống và loài muỗi khác, muỗi Ae aegypti có sự

khác nhau giữa con đực và con cái về đặc điểm dinh dưỡng Để sống và phát triển con cái phải hút máu (người, động vật); còn con đực không hút máu mà chỉ hút nước, nhựa cây hay dịch hoa quả để tồn tại và phát triển

Hình 1.2 Muỗi Aedes aegypti

4.1.3 Đặc điểm sinh học Aedes aegypti

Vòng đời của Ae aegypti có 4 giai đoạn: Trứng - Bọ gậy - Quăng - Muỗi

trưởng thành Trong đó 3 giai đoạn đầu thì sống trong nước, chỉ có giai đoạn muỗi trưởng thành sống trên cạn Khi muỗi đẻ trứng trong điều kiện thời tiết không thuận lợi, trứng có thể tồn tại được 6 tháng hoặc lâu hơn nữa Muỗi cái cần đốt máu để phát triển trứng, trứng thường được đẻ trước khi đốt máu lần sau, tuy nhiên nếu quá trình đốt máu bị gián đoạn thì muỗi tiếp tục đốt

và hình thành các chu kỳ sinh thực trong đời sống của muỗi Muỗi cái đẻ trứng trong suốt đời sống của nó khoảng 6 - 7 lần, mỗi lần khoảng 60 - 100 trứng, tuy nhiên trong điều kiện phòng thí nghiệm muỗi có thể đẻ đến 13

lần Muỗi Ae aegypti nghiên cứu trong phòng thí nghiệm trung bình sống từ

20 - 40 ngày (WHO, 1995) Như vậy về mặt lý thuyết, mỗi muỗi Ae aegypti

cái có thể đẻ 4 lần

Thời gian phát triển của các pha trước trưởng thành (từ trứng đến quăng) trung bình 7 ngày, bọ gậy và quăng sống trong môi trường nước, thời gian từ quăng đến muỗi trưởng thành khoảng 2 đến 3 ngày, muỗi sống trên cạn, sau khi nở muỗi trú đậu trên thành vật chứa khoảng vài giờ, sau đó muỗi bay phát tán cách xa khoảng 200 mét, muỗi cái trưởng thành giao phối và thực hiện đốt hút máu lần đầu vào khoảng 48 giờ sau khi nở, thường muỗi đốt hút máu ban ngày hoạt động mạnh nhất vào lúc sáng sớm và lúc hoàng hôn, thời gian tiêu sinh của muỗi khoảng 5 ngày, trường hợp đốt hút máu người có chứa vi rút Dengue thời gian ủ bệnh trong muỗi cái thường 8 - 10 ngày, lúc này trong tuyến nước bọt của muỗi có vi rút nhân lên và truyền vi rút sang người khác khi chúng đốt hút máu Muỗi cái sống từ 20 đến 40 ngày, muỗi đực sống ngắn hơn từ 9 đến 12 ngày Muỗi cái mỗi lần đẻ từ 60-100 trứng, trứng muỗi mới

đẻ có màu trắng sau đó chuyển dần có màu đen, riêng rẽ từng quả một đính vào thành vật chứa hay chìm xuống nước, điều kiện thuận lợi trứng muỗi có thể tồn tại đến 6 tháng Trong quá trình sống muỗi đực hút mật hoa để sống,

còn muỗi cái ngoài hút mật hoa như muỗi đực còn đốt hút máu động vật có vú

để phát triển trứng (có thể vài lần đốt hút máu trong một đợt phát triển trứng), chúng phát hiện vật chủ dựa vào các hợp chất hóa học: NH3, CO2, axít lactic

và Octenol tiết ra từ vật chủ

4.1.4 Nơi trú đậu và sinh sản của muỗi

Ae aegypti sống trong nhà gần người, thường trú đậu nơi có ánh sáng yếu

và có độ cao từ 2 mét trở xuống như: Trên các vật dụng vải: Quần áo, màn ngủ, ri do, túi xách…, trên các vật dụng cứng: Gầm bàn có người thường làm việc, ghế tiếp khách, giường, tủ để gần tường Theo thống kê của văn phòng SXHD khu vực Miền Bắc, 71% số muỗi thu thập được đậu trên các vật dụng được làm từ vải, 7% ngay tại ổ bọ gậy nguồn, 7% ở vật dụng làm từ gỗ, 6% ở

dây phơi, còn lại rất hiếm khi muỗi Ae aegypti trú ngụ tại các vật dụng như

vách tường, sắt, nhựa và đồ sành

Ae aegypti thường đẻ trứng ở những nơi nước sạch chứa trong lu vại, bể,

lọ hoa, phuy nước, chậu cây cảnh, chai lọ, vỏ dừa, lốp ô tô cũ, máng nước, đôi khi có ở hốc cây, kẽ lá (dừa, chuối, bẹ khoai)…ở trong và quanh nhà những nơi râm mát, bọ gậy ưa nước có độ pH hơi axít, nhất là nước mưa

4.2 Muỗi Aedes albopictus

4.2.1 Phân bố của loài muỗi Aedes albopictus

Loài muỗi Ae albopictus hiện nay được xếp vào loài muỗi xâm lấn bậc nhất

trên thế giới, chúng phân bố ở nhiều châu lục: Châu Á, châu Mỹ, châu Âu, châu Phi Loài muỗi này phân bố rộng ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới của các châu lục chủ yếu từ 350 vĩ độ Bắc đến 350 vĩ độ Nam và còn phân bố đến

450 vĩ tuyến Bắc, giới hạn bằng đường đẳng nhiệt 10oC Ở Việt Nam phân bố chủ yếu ở vùng nông thôn, miền núi, thành phố có núi đồi hay có nhiều khu vực cây cối um tùm

4.2.2 Đặc điểm nhận dạng muỗi Aedes albopictus trưởng thành

Muỗi có kích thước trung bình, màu đen nâu, có nhiều đốm trắng bạc ở ngực Trên mesonotum có 1 đường vẩy nhỏ màu trắng bạc Trên 6 đốt đầu có

băng ngang vẩy màu trắng bạc Muỗi Ae albopictus là loài muỗi nhỏ con, có

sọc trắng chạy dài từ đầu dọc theo lưng và ra tận phía sau chân, thân muỗi có các khoang vằn

Muỗi Ae albopictus rất giống Ae aegypti tuy nhiên ở trên mặt lưng của

ngực chỉ có 1 đường vảy trắng bạc giữa lưng

Hình 1.3 Muỗi Aedes albopictus

4.2.3 Đặc điểm sinh học Aedes albopictus

Ae albopictus đẻ trứng rời từng chiếc ở nơi ẩm ướt, ngay trên hoặc gần sát

với mặt nước, nơi có nước lên xuống Trứng chịu được độ khô trong nhiều

tháng và chỉ nở khi bị ngập nước Trứng có thể tồn tại qua mùa đông lạnh

Ae albopictus là trung gian truyền bệnh Dengue Đặc điểm của loài muỗi

này là thích sống ở các bụi cây, đám cỏ, chủ yếu ở vùng nông thôn, chúng đẻ trứng rời từng chiếc trên những diện tích ẩm ướt, ngay trên thành hoặc gần sát với mặt nước, trong những dụng cụ chứa nước tạm thời nhưng nó vẫn ưa đẻ trứng tự nhiên ở trong rừng, trong vườn tại các hốc cây, kẽ lá, vũng nước dưới đất, vỏ dừa

Cũng giống như muỗi Ae aegypti, loại muỗi này cũng có thể truyền bệnh

sốt xuất huyết cho người Một số nghiên cứu cũng chỉ ra rằng những nơi nào

có muỗi Aedes albopictus thì tỉ lệ mắc SXHD thấp hơn nơi muỗi Ae aegypti sinh sống Hơn nữa, muỗi Ae albopictus có đặc điểm sống ngoài trời, không thường xuyên tiếp cận với con người chứ không giống như muỗi Ae aegypti

sống trong nhà, tiếp cận với người thường xuyên hơn, cho nên vai trò truyền

bệnh của nó ít hơn muỗi Ae aegypti

Muỗi Ae albopictus có khả năng phát tán xa hơn so với Ae aegypti Phát

tán trung bình của muỗi cái trưởng thành Ae aegypti và Ae albopictus tương

ứng là 35,3m và 50,6m từ điểm phóng thả trong vòng 7 ngày Khả năng phát tán tối đa trung bình trong nhiều nghiên cứu cho thấy muỗi cái trưởng

thành Ae aegypti và Ae albopictus tương ứng là 100m và 180m

4.2.4 Nơi trú đậu và sinh sản của muỗi Aedes albopictus

Ae albopictus đẻ trứng rời từng chiếc ở nơi ẩm ướt, ngay trên hoặc gần sát

với mặt nước, nơi có nước lên xuống Trứng chịu được độ khô trong nhiều

tháng và chỉ nở khi bị ngập nước Trứng có thể tồn tại qua mùa đông lạnh

Ae albopictus là trung gian truyền bệnh dengue Đặc điểm của loài muỗi này

là thích sống ở các bụi cây, đám cỏ, chủ yếu ở vùng nông thôn, chúng đẻ trứng rời từng chiếc trên những diện tích ẩm ướt, ngay trên thành hoặc gần sát với mặt nước, trong những dụng cụ chứa nước tạm thời nhưng nó vẫn ưa đẻ trứng tự nhiên ở trong rừng, trong vườn tại các hốc cây, kẽ lá, vũng nước dưới đất, vỏ dừa

Cũng giống như muỗi Ae aegypti, loại muỗi này cũng có thể truyền bệnh

sốt xuất huyết cho người Một số nghiên cứu cũng chỉ ra rằng những nơi nào

có muỗi Ae albopictus thì tỉ lệ mắc SXHD thấp hơn nơi muỗi Ae aegypti sinh sống Hơn nữa, muỗi Ae albopictus có đặc điểm sống ngoài trời, không thường xuyên tiếp cận với con người chứ không giống như muỗi Ae aegypti

sống trong nhà, tiếp cận với người thường xuyên hơn, cho nên vai trò truyền

bệnh của nó ít hơn muỗi Ae aegypti

Muỗi Ae albopictus có khả năng phát tán xa hơn so với Ae aegypti Phát

tán trung bình của muỗi cái trưởng thành Ae aegypti và Ae albopictus tương

ứng là 35,3m và 50,6m từ điểm phóng thả trong vòng 7 ngày Khả năng phát tán tối đa trung bình trong nhiều nghiên cứu cho thấy muỗi cái trưởng

thành Ae aegypti và Ae albopictus tương ứng là 100m và 180m

Ae albopictus thường đẻ trứng ở những nơi nước sạch ngoài tự nhiên như:

hốc cây, kẽ lá… đôi khi có ở các vật chứa nhân tạo: lu vại, bể, chậu cây cảnh, chai lọ, vỏ dừa, lốp ô tô cũ, máng nước… ở ngoài nhà những nơi râm mát

5 Nghiên cứu về vai trò của muỗi Aedes aegypti và Aedes albopictus và sự

lan truyền vi rút Chikungunya trên thế giới

Rất nhiều nghiên cứu trên thế giới đã chỉ ra rằng Ae aegypti là loại muỗi

gần gũi với con người, đồng thời là véc tơ chủ yếu của bệnh Chik và đã được phân lập nhiều lần từ các vùng có dịch ở Tanganyika, Thái Lan và Calcutta (Shah và cs 1964; Pavri và cs 1964) Sau đó, vào thập niên 50-60 của thế kỷ

19, loài muỗi này cũng nhanh chóng được xác định mang vi rút và lan truyền dịch bệnh tại Ấn Độ và các quốc gia Đông Nam Á (Pavri và cs 1964; Rao 1964; Yergolkar và cs 2006; Bonilauri và cs 2008; Sang và cs 2008) Ngoài ra

vai trò chuyền bệnh của Ae aegypti với bệnh CHIK đã được chứng minh một

cách thuyết phục bởi các nghiên cứu thực nghiệm trong phòng thí nghiệm (Rao và cs 1964; Shah và cs 1964; Soekiman 1987) Tuy nhiên, thật bất ngờ, trong thời gian 2005-06 dịch Chik ở một số quần đảo Ấn Độ Dương và

Kerala và Ấn Độ, muỗi Ae albopictus lại nổi lên và đóng một vai trò chính

trong viện lan truyền dịch bệnh (Schuffenecker và cs 2006; Santosh và cs 2008) Sau đó nghiên cứu trong phòng thí nghiệm của nghiên cứu thực nghiệm của Reiskind và cs (2008); Tsetsarkin và cs (2007) đã làm rõ vai trò

của Ae albopictus Việc duy trì véc tơ CHIK tại châu Á và Châu Phi rất khác

nhau Ở châu Á CHIKV được duy trì trong một chu kỳ muỗi-con người-muỗi ,trong khi ở châu Phi vi rút được duy trì trong các động vật linh trưởng và (McIntosh và cs 1977; Diallo và cs 1999)

Với việc vi rút Chik dễ dàng xâm nhập vào các nước khác nhau thông qua

hoạt động của muỗi, nhất là muỗi Ae albopictus – hiện nay đang lấn át trên

khắp các châu lục, thì dịch bệnh Chik là một trong những dịch bệnh đáng báo

động, cũng như các biện pháp phòng, trừ muỗi muỗi Ae aegypti và Ae albopictus là rất cần thiết để kiểm soát dịch bệnh này

6 Nghiên cứu về sự phân bố và vai trò của muỗi Aedes aegypti và Aedes

albopictus tại Việt Nam

Theo kết quả giám sát bọ gậy từ chương trình phòng chống SXHD quốc

gia, muỗi Aedes có mặt ở khắp mọi vùng miền trên lãnh thổ đất nước ta Tuy nhiên phân bố cụ thể của 2 loài muỗi Ae aegypti và Ae albopictus tương đối

khác nhau tại các vùng miền khác nhau Higa và cộng sự đã tiến hành điều

tra muỗi Aedes dọc trên quốc lộ 1A (không điều tra trong nhà) từ Lạng Sơn đến Cà Mau năm 2008 Kết quả cho thấy tại khu vực Miền Bắc muỗi Ae albopictus trội hơn so với muỗi Ae aegypti, tuy nhiên kết quả lại ngược lại đối với khu vực Miền Nam, Miền Trung và Tây Nguyên muỗi Ae aegypti lại trội hơn so với muỗi Ae albopictus Tại một số tỉnh thành phố của khu vực

Miền Bắc như Hà Nội, Nam Định, Hải Phòng, Bắc Giang, Quảng Ninh và

Bắc Ninh muỗi Ae aegypti tập trung nhiều tại trung tâm tỉnh/thành phố, nơi tập trung đông người và bên cạnh đó muỗi Ae albopictus có xu hướng lan tới

các vùng xa trung tâm như nông thôn và vùng núi

Trong hoạt động giám sát và phòng chống véc tơ là muỗi Aedes truyền tại

Việt Nam mới chỉ tập trung vào hộ gia đình ở 5% - 10% các xã, phường trọng điểm mà chưa chú trọng giám sát tại các điểm công cộng, nơi tập trung đông

người và mật độ muỗi Aedes cũng rất cao Có thể chính các điểm công cộng

này là nguồn cung cấp véc tơ thường xuyên ra cộng đồng Chính vì thế, để

xác định sự phân bố của muỗi Aedes một cách đồng bộ trên diện rộng, cần có

các nghiên cứu tiến hành trên các điểm như trường học, chùa/đình, công viên

và chợ Nghiên cứu của Trần Văn Tiến và cs (2003) cho thấy muỗi Ae albopictus lưu hành rộng rãi ở nhiều địa phương và các vùng sinh thái khác

nhau nhất là khu vực ngoại thành nơi có nhiều cây xanh bao phủ, ổ bọ gậy của loài muỗi này ghi nhận chủ yếu từ các dụng cụ chứa nước tự nhiên, phong

phú về chủng loại Trong khi ấy muỗi Ae aegypti thường xuất hiện ở khu vực

đô thị hóa và nội thành - nơi có mật độ dân cư đông và ổ bọ gậy nguồn được tìm thấy thường là các loại dụng cụ chứa nước nhân tạo Tuy nhiên cho tới thời điểm hiện tại, ở Việt Nam chưa có bất kì một nghiên cứu nào xác định

vai trò của muỗi Ae aegypti và Ae albopictus đối với bệnh Chikungunya

CHƯƠNG II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Do 3 mục tiêu trong đề tài nghiên cứu này có đối tượng và phương pháp nghiên cứu khác nhau, nên chúng tôi trình bầy phương pháp nghiên cứu theo từng mục tiêu

Mục tiêu 1: Mô tả sự phân bố quần thể của hai loài Aedes aegypti và Aedes albopictus tại các điểm nghiên cứu

1 Thiết kế nghiên cứu: Mô tả cắt ngang

2.2 Chọn xã:

Tại mỗi huyện chọn có chủ đích 4 xã là nơi có các tiêu chuẩn sau:

- Có ghi nhận các ca sốt với với biểu hiện xuất huyết

- Có hệ thống y tế vững mạnh, cán bộ nhiệt tình, có thể đáp ứng đủ các điều kiện cho nghiên cứu

3 Đối tượng nghiên cứu:

Muỗi và bọ gậy

4 Thời gian nghiên cứu:

Nghiên cứu được tiến hành từ tháng 9/2012 – tháng 9/2014

6 Phương pháp thu thập mẫu:

- Thu thập mẫu muỗi: Bằng phương pháp soi muỗi đậu nghỉ trong nhà bằng ống tuýp, máy hút cầm tay và máy hút đeo vai Muỗi được thu thập từ ống tuýp, máy hút cầm tay sẽ được tính phân tích và tính làm chỉ số véc tơ Muỗi thu thập từ máy hút đeo vai sẽ được giữ lại để phân lập vi rút sau này (Mục tiêu 2) Người điều tra chia thành nhóm, mỗi nhóm hai người soi bắt muỗi cái đậu nghỉ trên quần áo, chăn màn, các đồ vật trong nhà vào buổi sáng Mỗi hộ gia đình thu thập muỗi trong nhà với thời gian 15 phút vào ban ngày bằng ống tuýp, kết quả thu thập muỗi từ ống tuýp này được tính vào chỉ số muỗi trưởng thành Sau đó dùng máy hút cầm tay và máy hút đeo vai để thu thập muỗi cả trong và ngoài nhà (khu vực sân vườn) Muỗi sau khi bắt được mang về TYTDP tỉnh trong vòng 24 giờ Tại đây muỗi được cho vào tủ lạnh 2 - 8 độ

để gây chết lâm sàng, định loại loài và cho vào ống eppendorf (theo loài) ghi nhãn theo loài, địa điểm, thời gian và bảo quản ở tủ lạnh -20oC đến -80oC, sau đó vận chuyển về phòng thí nghiệm Côn trùng- Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương theo yêu cầu của nghiên cứu

- Thu thập bọ gậy: Sử dụng bộ dụng cụ điều tra côn trùng chuẩn của Tổ chức

Y tế Thế giới để thu thập bọ gậy Aedes trong tất cả các dụng cụ chứa nước

của hộ gia đình điều tra Bọ gậy sau khi thu thập được định loại loài và ghi nhận vào phiếu điều tra

7 Phân tích định loại và các chỉ số côn trùng học:

7.1 Định loại muỗi thu thập từ thực địa: Theo khóa định loại muỗi ở Việt

Nam của Chester J Stojanovich và Harold Georye Scott

7.2 Phân tích chỉ số bọ gậy: Chỉ số bọ gậy mỗi loài được phân tích theo

hướng dẫn của WHO và Bộ Y tế, cụ thể như sau:

- Chỉ số nhà có bọ gậy (CSNBG) là tỷ lệ phần trăm nhà có bọ gậy trên số nhà điều tra

- Chỉ số dụng cụ chứa nước có bọ gậy (CSDCBG) là tỷ lệ phần trăm dụng cụ chứa nước có bọ gậy trên số dụng cụ chứa nước điều tra

- Chỉ số Breteau (BI) là số dụng cụ chứa nước có bọ gậy trên số nhà điều tra

- Chỉ số mật độ bọ gậy (CSMDBG) là số lượng bọ gậy trung bình cho

1 hộ gia đình điều tra, chỉ số này được tính bằng số bọ gậy thu được trên số nhà điều tra

7.3 Phân tích chỉ số muỗi trưởng thành: Chỉ số muỗi trưởng thành mỗi loài

được phân tích theo hướng dẫn của WHO và Bộ Y tế, cụ thể như sau:

- Chỉ số mật độ muỗi (CSMD) là số muỗi cái trung bình trong 1 gia

đình điều tra và được tính bằng số muỗi cái bắt được trên số nhà điều tra

- Chỉ số nhà có muỗi (CSNCM) là là tỷ lệ phần trăm nhà có muỗi cái trưởng thành và được tính bằng số nhà có muỗi cái trên số nhà điều tra

8 Phân tích số liệu và viết báo cáo:

Số liệu được làm sạch và phân tích dựa trên các phần mềm máy tính MS Excel và STATA 10.0 để nhập và phân tích dữ liệu Kết quả được trình bày dưới dạng các bảng, biểu đồ, bản đồ Viết báo cáo theo mẫu quy định

Mục tiêu 2: Xác định sự có mặt của vi rút Chikungunya trên quần thể muỗi Aedes aegypti và Aedes albopictus thu được từ các điểm nghiên cứu

1 Thiết kế nghiên cứu:

Nghiên cứu mô tả cắt ngang và phân tích phòng thí nghiệm

2 Địa điểm nghiên cứu:

- Tại các xã nghiên cứu trong điều tra cắt ngang thuộc mục tiêu 1

- Tại khu vực nhà có bệnh nhân nghi mắc Chikungunya tại các huyện nghiên cứu

3 Đối tượng nghiên cứu:

- Muỗi thu thập được trong các đợt điều tra cắt ngang (trong mục tiêu 1)

- Muỗi thu thập được từ khu vực nhà có bệnh nhân nghi mắc Chikungunya (định nghĩa ca nghi mắc Chikungunya được trình bày ở mục tiêu 3)

4 Thời gian nghiên cứu:

Nghiên cứu được tiến hành từ tháng 9/2012 – tháng 9/2014

5 Phương pháp thu thập muỗi và kỹ thuật xét nghiệm trong phòng thí nghiệm:

5.1 Phương pháp thu thập muỗi:

a) Thu thập muỗi trong các điểm điều tra cắt ngang (đã mô tả chi tiết tại mục tiêu 1)

b) Thu thập muỗi tại khu vực nhà có bệnh nhân nghi mắc Chikungunya

- Hàng năm mỗi tỉnh sẽ chọn ra 10 khu vực có bệnh nhân nghi mắc Chikungunya để tiến hành thu thập muỗi để xác định vi rút Chikungunya trên muỗi

- Cách thức tiến hành thu thập muỗi: Ngay khi phát hiện bệnh nhân nghi ngờ mắc Chikungunya, tiến hành thu thập muỗi tại nhà bệnh nhân và 30 hộ gia đình xung quanh Sử dụng máy hút Aspirator và máy hút đeo vai để thu thập muỗi tại các hộ gia đình Mỗi hộ gia đình thu thập muỗi trong nhà với thời gian 15 phút vào ban ngày Muỗi sau khi bắt được mang về TYTDP tỉnh trong vòng 24 giờ Tại đây muỗi được cho vào tủ lạnh 2 - 8 độ để gây chết lâm sàng, định loại loài và cho vào ống eppendorf (theo loài) ghi nhãn theo loài, địa điểm, thời gian và bảo quản ở tủ lạnh -40oC đến -80oC, vận chuyển

về phòng thí nghiệm Côn trùng- Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương theo yêu cầu của nghiên cứu Toàn bộ mẫu muỗi sau đó được chuyển đến và thực hiện xét nghiệm tại phòng thí nghiệm tương tác tế bào vật chủ - vi rút, trung tâm nghiên cứu công nghệ sinh học về mầm bệnh, trung tâm quốc gia nghiên cứu khoa học Monpellier - Cộng Hòa Pháp

- Định loại muỗi thu thập từ thực địa: Theo khóa định loại muỗi ở Việt Nam của Chester J Stojanovich và Harold Georye Scott

5.2 Phương pháp xét nghiệm:

Vi rút Chikungunya được xác định trên muỗi bằng phương pháp sau: a) Phân lập vi rút

Virút được phân lập trên dòng tế bào C6/36 và được quan sát sự có mặt của virút trong tế bào dựa trên phản ứng IFA, RT-PCR và phương pháp giải trình

tự Phân lập vi rút dựa theo tiêu chuẩn chẩn đoán của CDC

*)Loại mẫu

Mẫu muỗi được nghiền pha loãng

*)Phân lập trên tế bào

- Chuẩn bị týp tế bào nuôi cấy

- Kiểm tra tế bào C6/36 trên kính hiển vi lộn ngược ở độ phóng đại 40x

- Rửa tế bào 2 lần với PBS (-) và 1 lần với D-MEM 10% FBS

- Nuôi cấy trên típ tế bào nuôi cấy

Cấy 10 µl mẫu muỗi được nghiền trong dịch dung dịch pha loãng vào týp tế bào C6/36 mọc 1 lớp Ủ 60 phút nhiệt độ phòng, hoặc tủ ấm 280C Thêm 3m - 5ml môi trường duy trì D-MEM 2% Bovine serum albumin Quan sát sự thay đổi của tế bào hàng ngày dưới kính hiển vi trong 7-14 ngày

- Đọc kết quả và biện luận:

Thu chủng sau 7-14 ngày có thể lấy nước nổi nuôi cấy bằng cách ly tâm tuýp tế bào trong 10 phút ở tốc độ 2000rpm

Lấy 500µl mẫu nước nổi để thực hiện phản ứng RT- PCR, IFA, hoặc giải trình tự Mẫu dương tính được thu giữ để cất – 800C

b) Phương pháp PCR (chi tiết tại phụ lục)

c) Xác định vai trò đồng nhiễm/nhiễm của vi rút Dengue

Các mẫu muỗi thu thập được ngoài xét nghiệm tìm vi rút Chik còn được xét nghiệm tìm vi rút Dengue bằng xét nghiệm RT-PCR

6 Phân tích số liệu và viết báo cáo:

Sử dụng MS Excel, STATA 10.0 để nhập và phân tích dữ liệu

Mục tiêu 3: Xác định sự có mặt của vi rút Chikungunya trên bệnh nhân nghi mắc tại các điểm nghiên cứu

1 Thiết kế nghiên cứu:

Nghiên cứu mô tả cắt ngang và phân tích phòng thí nghiệm

2 Địa điểm nghiên cứu:

- Tại trạm y tế của các xã được chọn trong nghiên cứu

- Tại bệnh viện huyện của các huyện được chọn trong nghiên cứu

3 Đối tượng nghiên cứu:

Các trường hợp nghi mắc Chikungunya được giám sát, phát hiện, lấy mẫu và báo cáo theo định nghĩa ca bệnh như sau:

3.1 Ca bệnh nghi mắc Chikungunya (ca lâm sàng):

Các bệnh nhân có biểu hiện:

(1) Phân lập được vi rút Chinungunya

(2) Phát hiện được đoạn gen đặc hiệu của vi rút Chikunginya bằng phương pháp PCR

Kết quả dương tính ở các phương pháp này tiếp tục được giải trình tự gen bằng phương pháp Sequencing để khẳng định

4 Thời gian nghiên cứu: Nghiên cứu được tiến hành từ tháng 9/2012 – tháng 9/2014

5 Cỡ mẫu và chọn mẫu:

Chọn mẫu toàn bộ: tất cả các bệnh nhân nghi mắc Chikungunya theo đúng định nghĩa ca bệnh được phát hiện tại 20 trạm y tế xã và 5 bệnh viện đa khoa huyện được chọn trong nghiên cứu đều được đưa vào điều tra và lấy mẫu

6 Phương pháp thu thập bệnh phẩm và kỹ thuật xét nghiệm:

6.1 Phương pháp thu thập và vận chuyển bệnh phẩm:

a) Máu toàn phần và huyết thanh (để phân lập vi rút và PCR): được thu thập ở bệnh nhân có sốt trong vòng 5 ngày đầu

Lấy máu tĩnh mạch từ 1 - 5ml theo quy trình lấy mẫu máu của phòng thí nghiệm Mẫu máu sau khi đã được tách huyết thanh, bảo quản lạnh từ -40oC đến -80oC và sau đó được vận chuyển về phòng thí nghiệm và thực hiện xét nghiệm tại la bo vi rút Arbo - Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương

Huyết thanh đã được tách từ mẫu máu toàn phần ở bước, bảo quản huyết thanh ở 4oC trong vòng 24 - 48h, sau đó cất giữ tại -20oC hoặc -400C Nếu máu được lấy tại trạm y tế xã thì cần chuyển đến bệnh viện huyện để tách chiết Nếu lưu giữ huyết thanh lâu cần phải bảo quản ở tủ lạnh -20oC hoặc -

+ Bảo quản phiếu điều tra, giấy yêu cầu xét nghiệm trong một túi nilon khác – không để chung với bệnh phẩm

- Vận chuyển bệnh phẩm

+ Báo trước cho phòng thí nghiệm biết kế hoạch và thời gian chuyển bệnh phẩm (thời gian xuất phát, thời gian đến ước tính)

+ Sử dụng túi lạnh đã được làm lạnh tại -80oC, sử dụng khoảng 10 túi giữ lạnh cho 1 thùng xốp cỡ 450x290x330mm (hoặc tương đương), đảm bảo bệnh phẩm vẫn trong trạng thái đông, tránh tình trạng đông tan băng trong quá trình vận chuyển làm ảnh hưởng đến chất lượng bệnh phẩm và kết quả nghiên cứu

+ Khi vận chuyển qua đường bưu điện hoặc công ty chuyển phát, tuân thủ nghiêm ngặt quy trình đóng gói bệnh phẩm, tránh va đập đổ vỡ trong quá trình vận chuyển

- Quy định về thời điểm chuyển mẫu giữa các tuyến

Các mẫu bệnh phẩm này đều phải được chuyển về Trung tâm YTDP tỉnh rồi tới phòng thí nghiệm Arbo của Viện Vệ sinh Dịch tễ theo tuần hoặc tháng, tùy thuộc yêu cầu của nghiên cứu

Tóm tắt sơ đồ vận chuyển và bảo quản mẫu máu

6.2 Phương pháp xét nghiệm:

Vi rút Chikungunya được xác định bằng phương pháp sau:

- 6.2.1 Phân lập vi rút Chikungunya:

Dung dịch máu toàn phần của bệnh nhân nghi mắc Chikungunya được

dùng để phân lập vi rút (Kỹ thuật và các bước tiến hành như mô tả tại mục tiêu 2)

- 6.2.2 Kỹ thuật PCR:

Huyết thanh của bệnh nhân nghi mắc Chikungunya được dùng để làm

xét nghiệm PCR (Kỹ thuật và các bước tiến hành như mô tả tại mục tiêu 2)

7 Phân tích số liệu và viết báo cáo:

Số liệu được làm sạch và phân tích dựa trên các phần mềm máy tính MS Excel và STATA 10.0 để nhập và phân tích dữ liệu Kết quả được trình bày dưới dạng các bảng, biểu đồ, bản đồ Viết báo cáo theo mẫu quy định

CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 Mô tả sự phân bố quần thể của hai loài Aedes aegypti và Aedes

albopictus tại các điểm nghiên cứu

Bảng 3.1 Một số thông tin cơ bản tại các điểm nghiên cứu

DCCN/nhà

Nhân khẩu mỗi gia đình

Diện tích nhà vườn (m 2 )

1 Hà Tĩnh Huyện

Hương

Khê

-TT Hương Khê -Phú Phong -Hương Vịnh -Gia Phố

2 Quảng

Trị

Huyện Hướng

Hóa

-Tân Thành -TT Lao Bảo -Tân Long -Xã Thuận

Đông

-Khe tre -Hương Hòa -Hương Phú -Hương Lộc

5 Long An Mộc Hóa -Bình Hòa Tây

-Bình Hiệp -Thạnh Trị -Bình Tân

Để thực hiện mục tiêu 1, nhóm nghiên cứu đã tiến hành điều tra định kỳ

về côn trùng học tại 20 xã thuộc 5 tỉnh có biên giới với Lào và Cam Pu Chia (Bảng 3.1) Kết quả điều tra của 4 đợt định kì trong 2 năm cho thấy có sự khác biệt rất nhiều về số dụng cụ chứa nước trung bình giữa các tỉnh nghiên cứu Đặc biệt là Long An, số dụng cụ chứa nước (DCCN) trung bình bình trong một gia đình khá lớn so với các địa bàn khác (5,1 dụng cụ/nhà) có thể giải thích là do người dân có tập quán tích trữ nước trong nhiều chum vại, đây

chính là điều kiện cho muỗi phát triển Điều này cũng phù hợp với mật độ muỗi và bọ gậy tương đối cao tại Long An Không có sự khác biệt về nhân khẩu của mỗi gia đình tại các tỉnh này Tuy nhiên, diện tích nhà và vườn lại khá khác biệt (rộng nhất là Huế: 1089m2/nhà và chật nhất là Long An: 397m2/nhà)

3.1.1 Phân bố chung tỷ lệ muỗi Ae aegypti và Ae albopictus tại các điểm

nghiên cứu

Hình 3.1 Phân bố tỷ lệ muỗi Ae aegypti và Ae albopictus tại các điểm

nghiên cứu, 2011-2013 Hình 3.1 ở trên cho thấy, tại các điểm nghiên cứu có sự hiện diện của cả 2 loài muỗi Ae aegypti và Ae albopictus Tỷ lệ phân bố chung muỗi Ae aegypti và Ae albopictus tại cả 5 tỉnh tương ứng là 96,2% và 3,8% Như vậy tính chung trên các địa bàn được chọn trong nghiên cứu này, tỷ lệ muỗi Ae aegypti ghi nhận cao hơn hẳn so với muỗi Ae albopictus

3.1.2. Phân bố riêng tỷ lệ muỗi Ae aegypti và Ae albopictus tại các điểm

nghiên cứu

Chỉ số muỗi, bọ gậy hai loài Ae aegypti và Ae albopictus ở các tỉnh tham

gia nghiên cứu qua các đợt điều tra cắt ngang được phân tích trong các bảng sau:

Bảng 3.2 Chỉ số loài muỗi Ae aegypti tại các tỉnh 2012-2013

Kết quả ở bảng 3.2 cho thấy tại tất cả các điểm dân cư thuộc 5 tỉnh đều có

sự hiện diện của loài muỗi Ae aegypti Chỉ số DI và HI ghi nhận cao nhất tại

Long An và Đăk Nông (lần lượt là 0,87 con/nhà; 47,3% và 0,84con/nhà; 53,6%) Kế sau đó là DI và HI của các tỉnh Hà Tĩnh và Quảng Trị (lần lượt là

0,23 con/nhà; 21,4% và 0,19 con/nhà; 15,7%) DI và HI ghi nhận ít nhất ở Thừa Thiên Huế với lần lượt là 0,085 con/nhà và 7,61% Chỉ số CSMĐBG và CSNBGghi nhận cao nhất tại Long An và Hà Tĩnh (lần lượt là 13,3 con/nhà; 49,3% và 4,76 con/nhà; 46,6%) Kế sau đó là CSMĐBG và CSNBG của các tỉnh Quảng Trị (3,2 con/nhà; 14,9%), Huế (3 con/nhà; 12,5%) và Đắc Nông (1,6 con/nhà; 8,1%) Chỉ số BI ghi nhận cao nhất tại Long An và Đăk Nông lần lượt là 183 và 136 Kế sau đó là chỉ số BI của Hà Tĩnh và Quảng Trị lần lượt là 46 và 34, ghi nhận BI thấp nhất tại Huế 18

Bảng 3.3 Chỉ số loài muỗi Ae albopictus tại các tỉnh 2012-2013

nhân tỷ lệ rất thấp Chỉ số DI và HI ghi nhận cao nhất tại Huế và Hà Tĩnh ông (lần lượt là 0,17 con/nhà; 12,1% và 0,1 con/nhà; 8,4%) Kế sau đó là DI và HI của các tỉnh Đắk Nông và Quảng Trị (lần lượt là 0,08 con/nhà; 9,7% và 0,05 con/nhà; 5,7%) DI và HI ghi nhận ít nhất ở Long An với lần lượt là 0,02 con/nhà và 3,2% Chỉ số CSMĐBG và CSNBGghi nhận cao nhất tại Huế và

Hà Tĩnh (lần lượt là 2,81con/nhà; 10,5% và 1,01 con/nhà; 16,6%) Chi nhận chỉ số CSMĐBG và CSNBGthấp nhất tại Đăk Nông lần lượt là 0,05 con/nhà

và 4,1% Chỉ số BI ghi nhận cao nhất tại Quảng Trị và Hà Tĩnh lần lượt là 15

và 12 Kế sau đó là chỉ số BI của Huế và Đăk Nông lần lượt là 8 và 5, ghi nhận BI thấp nhất tại Long An là 4

3.1.3 Bản đồ phân bố 2 loại bọ gậy Aedes tại các điểm nghiên cứu