Nghiên cứu phương pháp động học huỳnh quang xác định tyrosin dựa trên phản ứng với phức Ruteni(II) polypiridin

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - PHẠM THỊ THỦY NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG XÁC ĐỊNH TYROSIN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC RUTENI(II) POLYPIRIDIN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - PHẠM THỊ THỦY NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG XÁC ĐỊNH TYROSIN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC RUTENI(II) POLYPIRIDIN Chuyên ngành: HÓA PHÂN TÍCH Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ ÁNH HƢỜNG TS NGUYỄN XUÂN TRƢỜNG Hà Nội - 2016 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian làm luận văn tốt nghiệp Bộ môn Hóa phân tích, Viện kỹ thuật hóa học, trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội học hỏi đƣợc nhiều kiến thức bổ ích Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin trân trọng cám ơn TS Nguyễn Thị Ánh Hƣờng, TS Nguyễn Xuân Trƣờng tận tình hƣớng dẫn hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo, Thầy cô Bộ môn Hóa phân tích, trƣờng Đại học Bách khoa Hà Nội quan tâm, giúp đỡ suốt trình nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ môn Hoá Phân tích, Khoa Hóa học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ trình làm luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè bên cạnh động viên để hoàn thành tốt luận văn Hà nội, tháng 12 năm 2016 Học viên Phạm Thị Thủy MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Tyrosin 1.2 Phƣơng pháp phân tích Tyrosin 1.2.1 Phương pháp so màu 1.2.2 Phương pháp quang phổ đo quang 1.2.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 1.2.4 Phương pháp phổ huỳnh quang 10 1.3 Tổng quan phƣơng pháp phổ huỳnh quang phân tử 10 1.3.1 Hiện tượng huỳnh quang 10 1.3.2 Sự tạo thành phổ huỳnh quang - chế phát quang 10 1.3.3 Cường độ huỳnh quang 11 1.3.4 Phổ huỳnh quang 12 1.3.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến tạo thành huỳnh quang 13 1.3.5.1 Ảnh hưởng cấu trúc phân tử đến hiệu suất huỳnh quang 13 1.3.5.2 Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến phổ huỳnh quang 14 1.3.6 Máy quang phổ huỳnh quang 15 1.3.7 Thiết bị đo quang phổ huỳnh quang theo thời gian 17 1.3.8 Ứng dụng quang phổ huỳnh quang 18 1.3.9 Động học trình phát quang 19 1.3.9.1 Xác định thời gian sống trạng thái kích thích 19 1.3.9.2 Xác định số tốc độ trình giải hoạt 20 1.4 Tổng quan phức chất Ruteni(II) polypiridin 22 CHƢƠNG II: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tƣợng, mục tiêu nội dung nghiên cứu 24 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu 24 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 24 2.1.2.1 Nghiên cứu đặc trưng quang phổ phức chất Ruteni(II) polypiridin 24 2.1.2.2 Ảnh hưởng pH tới động học phản ứng quang oxi hóa khử phức [Ru(bpy)3]Cl2 phức Tyrosin 24 2.1.2.3 Ảnh hưởng ion lạ tới động học phản ứng quang oxi hóa khử phức [Ru(bpy)3]Cl2 Tyrosin 25 2.1.2.4 Khảo sát ảnh hưởng lực ion tới động học phản ứng phức chất Ruteni(II) polypiridin amino axit Tyrosin 25 2.1.2.5 Xây dựng quy trình định lượng amino axit Tyrosin dựa phản ứng với phức chất Ruteni(II) polypiridin 27 2.1.3 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 28 2.2.1 Hóa chất 28 2.2.2 Dụng cụ thiết bị 28 2.4 Thẩm định phƣơng pháp 28 2.5 Nghiên cứu quy trình xử lý mẫu protein phân tích Tyrosine 30 2.6 Sử dụng phƣơng pháp HPLC làm phƣơng pháp đối chiếu 32 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Phổ hấp thụ phân tử UV-Vis 34 3.2 Phổ phát xạ phân tử trạng thái dừng 36 3.3 Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian (time-domain) 37 3.4 Ảnh hƣởng pH tới động học phản ứng quang oxi hóa khử phức [Ru(bpy)3]Cl2 phức Tyrosin 38 3.5 Ảnh hƣởng ion lạ tới động học phản ứng quang oxi hóa khử phức [Ru(bpy)3]Cl2 , phức Tyrosin 40 3.6 Ảnh hƣởng lực ion tới động học phản ứng quang oxi hóa khử phức [Ru(bpy)3]Cl2 , Tyrosin 42 3.7 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng Tyrosin dựa phản ứng quang oxi hóa khử với phức [Ru(bpy)3]Cl2 phức 44 3.7.1 Độ lặp lại phương pháp 46 3.7.2 Giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ 48 3.7.3 Khoảng tuyến tính 49 3.7.4 Độ phương pháp 51 3.8 Phân tích Tyrosin mẫu protein 53 3.8.1 Kết khảo sát quy trình xử lý mẫu protein phân tích Tyrosin 53 3.8.2 Kết phân tích Tyrosin mẫu protein 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC 61 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Hàm lƣợng Tyrosin số mẫu thực tế…………………………………….7 Bảng 1.2 Tổng hợp dẫn xuất xác định axit amin HPLC………………………… Bảng 3.1:Sự phụ thuộc số tốc độ phản ứng phức [Ru(bpy)3]Cl2, Tyrosin vào pH………………………………………….39 Bảng 3.2: Hằng số tốc độ phản ứng quang oxi hóa-khử (kq) phức [Ru(bpy)3]Cl2 Tyrosin I thay đổi…………………………………………………………… 43 Bảng 3.3: Hằng số tốc độ phản ứng quang oxi hóa-khử (kq) phức Tyrosin I thay đổi………………………………………………………….43 Bảng 3.4: Kết xác định độ lặp lại phƣơng pháp dựa phản ứng với phức [Ru(bpy)3]Cl2…… 47 Bảng 3.5: Kết xác định độ lặp lại phƣơng pháp dựa phản ứng với phức [Ru(dpq)2bxbg]Cl2 47 Bảng 3.6: Kết xác định LOD LOQ dựa phản ứng với phức [Ru(bpy)2]Cl2…….48 Bảng 3.7: Kết xác định LOD LOQ dựa phản ứng với phức [Ru(dpq)2bxbg]Cl2.49 Bảng 3.8: Kết khảo sát khoảng tuyến tính xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức [Ru(bpy)3]Cl2 phức …………………………………….50 Bảng 3.9: Kết xác định độ thu hồi xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức [Ru(bpy)3]Cl2…………………………………………………………………….52 Bảng 3.10: Kết xác định độ thu hồi xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức …………………………………………………………….52 Bảng 3.11: Kết khảo sát thể tích NaOH dùng để thủy phân mẫu protein………………53 Bảng 3.12: Kết khảo sát nhiệt độ thủy phân mẫu protein………………………………53 Bảng 3.13: Kết khảo sát thời gian thủy phân mẫu protein .54 Bảng 3.14: Kết phân tích Tyrosin mẫu protein theo phƣơng pháp động học huỳnh quang phƣơng pháp đối chiếu HPLC…………………… 54 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 (a) Cấu trúcphân tử Tyrosin; (b) Cấu trúc lập thể Tyroin……… …… Hình 1.2 Một số cấu trúc đồng phân Tyrosin……………………………………………3 Hình 1.3: Sự vận chuyển electron pha sáng trình quang hợp (sơ đồ hình chữ Z ) ……………………………………………………………………………………… Hình 1.4 : Quy trình tổng hợp tyrosin từ prephenate…………………………………………4 Hình 1.5: Quá trình chuyển đổi phenylalanine tyrosin từ chất dẫn xuất sinh học…….5 Hình 1.6: Con đƣờng tổng hợp catecholamines amin não ngƣời……………….6 Hình 1.7 Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ huỳnh quang…………………………………… 16 Hình 1.8 Sơ đồ khối hệ thiết bị quang phổ huỳnh quang phân giải thời gian…………… 17 Hình 1.9 Cấu trúc bát diện phức ……………………………………… 22 Hình 2.1 Thế khử chuẩn Tyrosin theo pH…………………………………………… 24 Hình 2.2: Sơ đồ quy trình xử lý mẫu protein phân tích Tyrosin Tryptophan ………… 31 Hình 3.1: (a) Phổ hấp thụ phức [Ru(bpy)3]Cl27.5 M;(b) axit amin Tyrosin (c) hỗn hợp phức [Ru(bpy)3]Cl2+Tyrosin, pH 12……………………………………… 35 Hình 3.2: (a) Phổ hấp thụ phức [Ru(dpq)2bxbg]Cl2 7.5 M;(b) axit amin Tyrosin (c) hỗn hợp phức [Ru(dpq)2bxbg]Cl2+Tyrosin, pH 12…………………………… 36 Hình 3.3: Phổ phát xạ phân tử trạng thái dừng (a) phức [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M, pH 12; (b) phức 7.5M, pH12…………………………………… 37 Hình 3.4: Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian (a) phức [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M, pH 7.5 M, pH 12……………………………… 38 12; (b) phức Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc số tốc độ phản ứng phức Tyr vào pH…………………………………………… 39 Hình 3.6: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M Ca2+ M; (b) [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M + Tyrosin Ca2+ M; pH 12, I = 0.05M………………………………………….41 M Hình 3.7: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức Ca2+ Ca2+ M (b) + Tyrosin M M; pH 12, I = 0.05M…………………………………………….42 Hình 3.8: Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian phức [Ru(bpy)3]Cl2 tăng dần nồng độ Tyrosin……………………………………………………………………… 44 Hình 3.9: Đồ thị biểu diễn 0 / -1 phức [Ru(bpy)3]Cl2 [TyrOH]; pH 12, I = 0.05M, kq = 1,10.109M-1s-1 ………………………………………………………………45 Hình 3.10: Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian phức tăng dần nồng độ Tyrosin…………………………………………………………… 45 Hình 3.11: Đồ thị biểu diễn 0 / -1 phức [TyrOH]; pH 12, I = 0.05M kq = 1.99 109 M-1s-1… …………………………………………………………… 46 Hình 3.12: Đƣờng hồi quy tuyến tính xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức phản [Ru(bpy)3]Cl2……………………………………………………………………50 Hình 3.13: Đƣờng hồi quy tuyến tính xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức …………………………………………………………….51 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ADN Deoxyribonucleic axit Axit đêôxy ribônuclêic Bpy 2,2-bipyrydine 2,2’-bipyridin bxbg Bis(o-xylene)bipyridine Bis(o-xylene)bipyridin glycoluril glycoluril Dipyrido[3,2-d:2,3-f] dipyrido[3,2-d:2,3-f] quinoxaline quinoxaline Phe phenylalanine phenylalanin p-tyr para – tyrosine para- tyrosin m- tyr meta – tyrosine meta-Tyrosin o- tyr orthor-tyrosine orthor-tyrosin Tyr Tyrosine Tyrosin Trp Tryptophan Tryptophan UV – Vis Ultraviolet – visible Tử ngoại – khả kiến HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao dpq Chromatography Đánh giá kết quả:  Mẫu Casein: ttn = = 0,79 √  Mẫu Bovine serum albumin(BSA): ttn = = 0,19 √ Tra bảng: t (0,95;2) = 2,92 > ttn Do khác kết phân tích hai phƣơng pháp Vậy phƣơng pháp có độ đạt yêu cầu Nhận xét: Hàm lƣợng Tyrosin sản phẩm protein khác Kết phân tích cho thấy, phƣơng pháp phân tích động học huỳnh quang phƣơng pháp phân tích truyền thống HPLC cho kết tƣơng đồng So với phƣơng pháp nghiên cứu trƣớc để xác định hàm lƣợng Tyrosin mẫu phƣơng pháp động học huỳnh quang cho độ xác cao, thời gian phân tích nhanh, đơn giản Tuy nhiên, nghiên cứu ban đầu, cần phải tiến hành phân tích nhiều mẫu mở rộng nghiên cứu nhiều đối tƣợng mẫu 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trên sở thực nghiệm nghiên cứu phƣơng pháp động học huỳnh quang xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức Ruteni(II) polypyridin, thu đƣợc kết sau: Nghiên cứu đƣợc đặc trƣng quang phổ phức chất Ruteni(II) polypiridin:  Phức  : (MLCT) = 454 nm,  = 605 nm; Thời gian phát xạ huỳnh quang :  Phức :  (MLCT) = 454 nm,  = 610  (ns) = 620 nm; Thời gian phát xạ huỳnh quang : = 540  (ns) Khảo sát đƣợc ảnh hƣởng pH tới động học phản ứng phức chất Ruteni(II) polypiridin với amino axit Tyrosin: giá trị số tốc độ phản ứng kq tăng theo pH Điều đƣợc giải thích tính khử Tyrosin mạnh môi trƣờng có pH lớn Khảo sát đƣợc ảnh hƣởng số ion lạ tới động học phản ứng quang oxi hóa – khử phức chất Ruteni(II) polypiridin với Tyrosin: số ion nhƣ dung dịch nghiên cứu không gây ảnh hƣởng đến động học phản ứng Khảo sát đƣợc ảnh hƣởng lực ion tới động học phản ứng quang oxi hóa – khử phức chất Ruteni(II) polypiridin với Tyrosin: kq giảm lực ion tăng Xây dựng quy trình phân tích định lƣợng Tyrosin phƣơng pháp động học huỳnh quang dựa phản ứng với phức Ruteni(II) polypiridin - Giới hạn phát hiện: - Độ lặp lại: - Độ đúng: - Khoảng nồng độ tuyến tính: Phân tích định lƣợng Tyrosin số mẫu protein Kết phù hợp với phƣơng pháp phân tích truyền thống HPLC Chứng tỏ phƣơng pháp phân tích động học huỳnh quang đáng tin cậy để định lƣợng Tyrosin 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ y tế (2007), “Hóa phân tích”, tập 2, NXB y học, Hà Nội Hoàng Thị Thuận, Trần Quang Tùng, Nguyễn Xuân Trƣờng (2016) Tổng hợp phức chất Ruthenium(II) polypyridyl ứng dụng làm đầu dò huỳnh quang phát số phân tử sinh học, Tạp chí Phân tích Hóa-Lý Sinh học, 21 (2), 112-119 Lê Kim Long, “Động hóa học”, Đại học quốc gia Hà Nội, tr 1-22 Lê Thị Hồng Hảo, Phạm Luận, Nguyễn Xuân Trung (2006),” Ứng dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao với dẫn xuất trƣớc cột AQC để tách xác định đồng thời 17 axit amin cá”, Tạp chí Phân tích Hóa, Lý Sinh học, Tập 11, số 4/2006, trang 15-23; Phạm Hữu Hùng (2007), “Bài giảng môn Động hóa học”, Đại học Đà Nẵng, tr 1-18 Thái Phan Quỳnh Nhƣ (2002), “Phƣơng pháp phân tích quang phổ huỳnh quang” , Tài liệu tập huấn ứng dụng số phương pháp đo quang kiểm nghiệm thuốc, tr.45-60 Trần Cao Sơn (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Trần Tứ Hiếu (2003), “Giới thiệu phƣơng pháp phát quang”, Phân tích trắc quang, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, tr.163-183 Trần Văn Nhân (2011), “Hóa lí” tr -30, Nhà xuất giáo dục Việt Nam Tiếng anh 10 Almut Hesse and Michael G Weller, (2016) “Protein quantification by derivatization – Free High-Performance Liquid Chromatography of Aromatic Amini Acids”, Volume 11 Chavez-Bejar, M., J Baez-Viveros, A Martinez, F Bolivar, G Gosset (2012) Biotechnological production of L-tyrosine and derived compounds Process Biochemistry 47: 1017-1026 12 Chinevere TD, Sawyer RD, Creer AR, Conlee RK, Parcell AC (2002) "Effects of Ltyrosine and carbohydrate ingestion on endurance exercise performance" J Appl Physiol 93 (5): 1590–7 13 Critima Delgado-Andrade, José A Rùián-Henares, Salvio Jiménez-Pérz, Francisco J Morales, 2006, “ Tryptophan determination in milk – based ingredients and dried sport supplements by liquid chromatography with fluorescence detection” 14 Deijen JB, Orlebeke JF (1994) "Effect of tyrosine on cognitive function and blood pressure under stress" Brain Res Bull 33 (3): 319–23 15 Eagle Biodciences, (2012) “Phenylalanine, Tyrosine and Tryptophan HPLC Assay” 57 16 Freys, J.C., et al., Ru-based donor-acceptor photosensitizer that retards charge recombination in a p-type dye-sensitized solar cell Dalton Trans., 41, p 13105-13111 17 Friedman, A.E., et al., (1990) Molecular “Light Switch” for DNA: J Am Chem Soc , 112, p 4960-4962 18 Hartshorn, R.M and J.K Barton, (1992) “Novel dipyridophenazine complexes of ruthenium (II) : exploring luminescent reporters of DNA” J Am Chem Soc., 114, p 5919 19 Hao S, Avraham Y, Bonne O, Berry EM (2001) "Separation-induced body weight loss, impairment in alternation behavior, and autonomic tone: effects of tyrosine" Pharmacol Biochem Behav 68 (2): 273–81 20 Harriman, A (1987) “Further comments on the redox potentials of tryptophan and tyrosine” J Phys Chem 91 (24), 6102-6104 21.Humphrey, Cara E.; Furegati, Markus; Laumen, Kurt; La Vecchia, Luigi; Leutert, Thomas; Müller-Hartwieg, J Constanze D.; Vögtle, Markus (2007) "Optimized Synthesis of L-m-Tyrosine Suitable for Chemical Scale-Up" Organic Process Research & Development 11: 1069–1075 22 Joseph R Lakowicz, (2006) “Principle of Fluorescence Spectroscopy”, Third Edition, Springer 23.Lieberman HR, Corkin S, Spring BJ, Wurtman RJ, Growdon JH (1985) "The effects of dietary neurotransmitter precursors on human behavior" Am J Clin Nutr 42 (2): 366–370 24.Lei, P., et al., (2008) “The Role of Colloid Formation in the Photoinduced H2 Production with a RuII- PdII Supramolecular Complex”: A Study by GC, XPS, and TEM J Am Chem Soc.,130,p 26-27 25.Lo, K.K.-W., A.W.-T Choi, and W.H.-T Law, (2012) “Applications of luminescent inorganic and organometallic transition metal complexes as biomolecular and cellular probes” Dalton Trans., 41, p 6021-6047 26 Lide, D R., (2007) “CRC Handbook of Chemistry and Physics”, 88th Edition 27 Lutke-Eversloh, T., Santos, C.N.S (2007) Perspectives of biotechnological production of L-tyrosine and its applications Appl Microbiol Biotechnol 77: 751-762 28.Magill RA, Waters WF, Bray GA, Volaufova J, Smith SR, Lieberman HR, McNevin N, Ryan DH (2003) "Effects of tyrosine, phentermine, caffeine D-amphetamine, and placebo on cognitive and motor performance deficits during sleep deprivation" Nutritional Neuroscience (4): 237–46 58 29 Mahoney CR, Castellani J, Kramer FM, Young A, Lieberman HR (2007) "Tyrosine supplementation mitigates working memory decrements during cold exposure" Physiology and Behavior IN PRESS (4): 575–82 30 Molnár GA, Nemes V, Biró Z, Ludány A, Wagner Z, Wittmann I (2005) "Accumulation of the hydroxyl free radical markers meta-, ortho-tyrosine and DOPA in cataractous lenses is accompanied by a lower protein and phenylalanine content of the watersoluble phase" Free Radic Res 39 (12): 1359–66 31.Olof Johanson, (2004) “Ruthenium(II) polypyridyl Complexes, Applications in Artificial Photosynthesis – Thesis” 32 Otto Folin and W Denis, “ Tyrosin in protein as determined by a new colorimetric method”, Biochemical Laboratory of the Harvard Medical School, Boston 33 Peter Atkins and Julio De Paula (2006) “Physical Chemistry” 34 Rita Steed (2010), Analysis of Amino acids by HPLC, Agilent Technologies, Inc 35 Ryan, E., (1991) “Ruthenium Polypyridyl Compounds as Luminescence Probes for Biological Materials-Thesi”s, Dublin City University 36 Satish, S.B., et al., (2011) “Ruthenium(II) polypyridin complexes as carriers for DNA delivery” Chem.Commun., 47, p 11068–11070 37 Satish, S.B., et al., (2010) Self-Association of Ruthenium (II) polypyridyl Complexes and Their Interactions with Calf Thymus DNA Inorganic Chemistry, 49, p 4843-4853 38 Spectrophotometric Determination of Tyrosin in Protein, Food Chemical (1985) 227-230 39.Susana Maria Halpine (2006), Amino acids analysis by HPLC, Encyclopedia of Chromatography 40.Thomas JR, Lockwood PA, Singh A, Deuster PA (1999) "Tyrosine improves working memory in a multitasking environment" Pharmacol Biochem Behav 64 (3): 495–500 41.Truong X Nguyen, Stephan Landgraf, Gueter Grampp (2017), “Kinetics of photoinduced electron transfer reactions of ruthenium(II) complexes and phenols, tyrosine, N-acetyltyrosine and tryptophan in aqueous solutions measured with modulated fluorescence spectroscopy”, J Photochem Photobiol B., 116, 28-34 42 Tyrosine.www.vitamins-supplements.org/amino-acids/php, Accessed September 28, 2007 43 T P Waalkes and S Udenfriend (1957) “Fluorometric method for the estimation of Tyrosine in Plasma and Tissues”, J Lab & Clin Med., 50 (5), 733-736 44 Zhang, M.-T and L.Hammarström, (2011) Proton-Coupled Electron Transfer from Tryptophan: A Concerted Mechanism with Water as Proton Acceptor, J.Am.Chem , 133, p 8806–8809 59 45 Zhang, M.-T., et al., (2011) “Proton-Coupled Electron Transfer from Tyrosine: A Strong Rate Dependence on Intramolecular Proton Transfer Distance” J.Am.Chem.Soc.,133, p 13224–13227 46 University of Maryland Medical Center (UMMC), 2016, Tyrosine 60 PHỤ LỤC 61 62 63 (a) -2 Intensity / V 1.6x10 -3 8.0x10 0.0 -6 -6 3.0x10 -6 6.0x10 9.0x10 time / s (b) -2 Intensity / V 1.2x10 -3 8.0x10 -3 4.0x10 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s Hình PL 1: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M M; (b) [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M + Tyrosin M; pH 12, I = 0.05M 64 M Intensity / V 1.6x10 -2 1.2x10 -2 8.0x10 -3 4.0x10 -3 (a) 0.0 -6 -6 3.0x10 -6 6.0x10 9.0x10 time / s 1.6x10 -2 Intensity /mV (b) 1.2x10 -2 8.0x10 -3 4.0x10 -3 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s Hình PL 2: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M M; (b) [Ru(bpy)3]Cl2 7.5 M + Tyrosin M; pH 12, I = 0.05M 65 M -3 2.0x10 (a) -3 Intensity / V 1.6x10 -3 1.2x10 -4 8.0x10 -4 4.0x10 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s -3 1.6x10 (b) Intensity / V -3 1.2x10 -4 8.0x10 -4 4.0x10 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s Hình PL 3: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức M; (b) M M; pH 12, I = 0.05M 66 + Tyrosin -3 2.0x10 (b) -3 Intensity / V 1.6x10 -3 1.2x10 -4 8.0x10 -4 4.0x10 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s -3 1.6x10 (b) Intensity / V -3 1.2x10 -4 8.0x10 -4 4.0x10 0.0 -6 3.0x10 -6 6.0x10 -6 9.0x10 time / s Hình PL 4: (a) Phổ phát xạ phân tử phân giải thời gian dung dịch phức M; (b) M M; pH 12, I = 0.05M 67 + Tyrosin 2.0 0/-1 1.5 1.0 0.5 Equation Adj R-Square y = a + b*x 0.99644 Value Standard Error 0.00684 0.01902 Intercept 0.0 Slope 0.0 -3 1.0x10 675.34575 16.48242 -3 3.0x10 -3 Value Standard Error 2.0x10 [Tyr] / M 1.6 0/-1 1.2 0.8 0.4 Equation y = a + b*x Adj R-Square 0.99568 Intercept 0.0 Slope 0.0 -3 1.0x10 0.01828 0.02002 644.98879 17.34287 -3 2.0x10 -3 3.0x10 [Tyr] / M Hình PL 5: Đồ thị biểu diễn ⁄ phức [Ru(bpy)3]Cl2 [Tyr]; pH 12, I = 0.05M kq = 1.10 109 M-1s-1 68 0/-1 Equation y = a + b*x Adj R-Square 0.99318 Value J Intercept J Slope 0.0 1.0x10 Standard Error 0.08415 0.03968 1044.22271 38.67277 -3 2.0x10 -3 [Tyr] / M 0/-1 Equation y = a + b*x Adj R-Square 0.99329 Value 0.0 G Intercept G Slope 1.0x10 -3 Standard Error 0.09044 0.0392 1040.25771 38.21165 2.0x10 -3 [Tyr] / M Hình PL 6: Đồ thị biểu diễn ⁄ phức [Tyr]; pH 12, I = 0.05M kq = 1.99 109 M-1s-1 69 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - PHẠM THỊ THỦY NGHIÊN CỨU PHƢƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG XÁC ĐỊNH TYROSIN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC RUTENI(II) POLYPIRIDIN. .. phƣơng pháp đơn giản tiết kiệm thời gian để định lƣợng amino axit Tyrosin Do đó, thực đề tài: Nghiên cứu phƣơng pháp động học huỳnh quang xác định Tyrosin dựa phản ứng với phức Ruteni(II) polypiridin ... xác định LOD LOQ dựa phản ứng với phức [Ru(bpy)2]Cl2…….48 Bảng 3.7: Kết xác định LOD LOQ dựa phản ứng với phức [Ru(dpq)2bxbg]Cl2.49 Bảng 3.8: Kết khảo sát khoảng tuyến tính xác định Tyrosin dựa