Ứng dụng kỹ thuật di truyền

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 2 Kỹ thuật di truyền gồm các kỹ thuật hiện đại được thực hiện trên acid nucleic nhằm nghiên cứu cấu trúc gen, điều chỉnh và biến đổi gen, nhằm t

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 1

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 2

Kỹ thuật di truyền

gồm các kỹ thuật hiện đại

được thực hiện trên acid

nucleic nhằm nghiên cứu cấu

trúc gen, điều chỉnh và biến

đổi gen, nhằm tách, tổng hợp

và chuyển các gen mong

muốn vào các tế bào vật chủ

mới để tạo ra cơ thể sinh vật

mới mang những đặc tính

mới, cũng như tạo ra sản

phẩm mới.

6. Biểu hiện gen lạ vào tế

bào hoặc cơ thể chủ nhận.

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 4

Để thực hiện được các kỹ thuật di

truyền, các thực nghiệm đều cần phải sử dụng DNA tái tổ hợp.

DNA tái tổ hợp (recombinant DNA) là DNA được tạo ra từ hai hay nhiều nguồn vật liệu di truyền khác nhau Phân tử

DNA tái tổ hợp được tạo nhờ kỹ thuật

ghép nối các đoạn DNA của các thể khác nhau trong cùng một loài, hoặc các cá thể khác nhau.

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 5

Tách ADN NST của “tế bào cho”

Enzim cắt

Enzim cắt

vào tế bào nhận E.coli

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 6

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 7

Những ứng dụng của kỹ thuật di truyền

Công nghệ hay kỹ thuật di truyền

cho phép các nhà sinh học lấy gen từ

tế bào này và ghép vào tế bào khác

Khi được ghép vào tế bào mới, gen có

thể biến đổi chức năng cuả tế bào đó,

để tạo ra các giống vật nuôi cây trồng

có lợi

Hơn thế nữa, công nghệ di truyền

còn được ứng dụng trong điều trị gen

và chuẩn đoán gen các bệnh trong y

học và nhiều những ứng dụng to lớn

trong cuộc sống

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 9

I, Áp dụng kỹ thuật di truyền vào chọn và cải tạo giống thủy sản

ích lớn nhất trong việc ứng dụng kỹ thuật di

truyền vào thủy sản đó là chuyển gen vào cá

để tạo ra những giống cá mới có năng suất cao, khả năng chống chịu với môi trường tốt.

những gen tôt, gen mong muốn vào cá để tạo

ra giống cá mong muốn.

3 Kiểm tra kết quả chuyển gen

CÁC BƯỚC

i, Phân hóa DNA nhân bằng enzyme giới hạn.

ii, Tách riêng các đoạn DNA và xác định gen

thành phần của chúng

iii, Đưa đoạn DNA vào plasmid hoặc virus để tạo

phân tử DNA tái tổ hợp

iv, Nhiễm vào vi khuẩn (thường là E.coli) hoặc

nấm men để tạo dòng

- Tạo dòng bằng tế bào

- Tạo dòng nhờ phân tử

Enzim cắt Enzim cắt

Gắn đoạn bị cắt vào plasmit nhờ enzim nối

Chuyển đến tế bào nhận

ADN của tế bào nhận E.coli

ADN Plasmit

tái tổ hợp

dạng vòng

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 13

1.2 Tạo dòng nhờ phương pháp phân tử PCR

thực hiện công việc

thuộc loại này vì có

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 17

Dụng

cụ

Máy vi thao tác gồm 2 phần giống hệt nhau

được bố trí hai bên kính hiển vi, một dùng để

điều chỉnh kim tiêm, một dùng cho kim giữ

Tính năng của máy này là cho phép điều chỉnh

các kim theo không gian 3 chiều.

Dụng cụ

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 18

Nạp gen vào kim tiêm bằng phương pháp capillar (ngâm đầu kim tiêm vào dung dịch gen khoảng 10-12 giờ) hoặc bơm trực tiếp dung dịch gen vào.

Lắp kim tiêm và kim giữ vào máy vi thao tác.

Chuyển trứng tiền nhân vào đĩa petri có chứa môi trường

được đặt dưới kính hiển vi.

Điều chỉnh kính hiển vi để xác định đĩa phôi và điều chỉnh máy vi thao tác để đưa kim tiêm vào vị trí của trứng tiền nhân Khi thấy trứng tiền nhân hơi phồng to và trở nên sáng hơn thì dừng lại và kéo nhanh kim tiêm ra

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 19

Mỗi một nhóm trứng

tiền nhân đã hoàn thành

được chuyển sang một

đĩa môi trường khác để

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 20

2.2 Phương pháp xung điện

 Một dòng điện cao áp trong

khoảnh khắc có khả năng tạo

ra các lỗ thủng trên màng tế

bào khiến DNA ngoại lai từ

môi trường có thể xâm nhập

vào trong tế bào Bằng

phương pháp này hiệu quả

biến nạp khá cao và chuyển

được cả các gen có kích thước

lớn

Máy xung điện

Sơ đồ plasmid chứa DNA ngoại lai

đi qua các lỗ tạm thời trên màng bào chất

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 22

2.3 Phương pháp tiêm trực tiếp

vào tế bào sinh dưỡng.

đã thành công ở nhiều loài như cá mú vằn, cá

vược, tôm sú…

ngược của chính virus

đó Khi xâm nhập vào

tế bào chủ, hệ gen

virus sẽ xen vào hệ

gen của tế bào chủ.

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 25

Sử dụng súng bắn gen

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 26

Sử dụng

tế bào

gốc phôi

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 28

3 Kiểm tra kết quả chuyển gen

một giai đoạn nào khác, sau đó trứng được ấp

nở và nuôi tới một giai đoạn nhất định thì kiểm tra để xác định xem gen chuyển có xen được vào genom cá hay chưa Công việc này được

thấm tách DNA (southern blot) và phương

pháp PCR.

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 29

3.1 Phương pháp thấm tách DNA

 Những dấu hiệu sớm nhất đánh dấu sự thành công của chuyển gen sẽ xuất hiện ở thời điểm tái bản DNA nhiều nhất, thời điểm song song với sự phân chia tế bào rất nhanh của phôi mới được tạo thành

 Sự tái bản đồng thời của đoạn DNA ngoại lai xen vào dọc theo DNA tế bào chủ được xác định trong

DNA được tách ra từ tế bào cá chuyển gen

di trên gel agarose rồi

chuyển lên màng lai (12 3)

 Bổ sung mẫu dò (đoạn

oligonucleotit mạch đơn)

Sau khi rửa sạch mẫu dò

không bám, bằng phóng xạ

tự chụp có thể phát hiện

được mẫu dò đã bám vào

gen được chuyển chứng

minh cho gen ngoại lai đã

xen được vào DNA vật chủ

(456)

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 31

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 32

3.2 Phương pháp PCR

 Tiến hành

- Tách DNA của nhân tế bào ở cá

đã được chuyển gen

- Chế phẩm DNA này cùng với

cặp mồi đặc hiệu cho đoạn gen đã

chuyển trong phản ứng PCR, nếu

kết quả PCR dương tính thì chứng

tỏ gen ngoại lai đã được xen vào

vật chủ

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 33

 Bước cuối cùng : sau khi xác định gen

chuyển đã xen được vào genom của cá chuyển gen thì cần xác định là gen ngoại lai đã xen

vào genom có được biểu hiện hay không và

biểu hiện ở mức độ nào? Công việc này

thường được liểm tra bằng phương pháp miễn dịch…

Tạo cá

có khả năng kháng bệnh

Tạo cá có màu sắc đẹp, ngoại hình

Công nghệ antisene RNA tạo sane

phẩm bổ sung với RNA

virus

1 số gen mã hóa cho pr phát

huỳnh quang màu xanh, màu đỏ hay màu vàng đã

được chuyển vào cá.

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 35

II, Áp dụng kỹ thuật di truyền để phát hiện

bệnh trên con giống.

giống tôm cá là do virus Các phương pháp

xác định bệnh trên con giống đều dựa vào các

bộ kít đặc trưng cho từng loại bệnh Dựa trên

kỹ thuật RT PCR, các kít được thiết kế đặc

trưng cho từng loại bệnh để nhằm phát hiện

nhanh các bệnh trên con giống.

08/31/24 Phương pháp PCR trong nhân dòng gen Ứng dụng KTDT trong thủy sản 36

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 37

Giới thiệu một số bệnh áp dụng kỹ

thuật di truyền để chẩn đoán

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 38

Biểu hiện bệnh: suy

giảm tốc độ sinh

trưởng,tôm kém ăn, sự

gia tăng của các sinh vật

gây thối ở mang và bề

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 40

3 Bệnh đầu vàng trên tôm sú (YHV).

Biểu hiện bệnh: xuất

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 42

Biểu hiện bệnh: màu

thân cá chuyển sang

màu tối, mang cá nhợt

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 43

Cơ sở áp dụng kỹ thuật di truyền:

đoạn DNA đặc trưng trên DNA bộ gen của

virus Dựa vào trình tự gen đặc hiệu cuả virus

mà thiết kế cặp mồi đặc trưng cho từng bộ kit

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 44

Mẫu tôm Chuẩn bị mẫu

Đọc kêt quả Điện di QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN

BỆNH CỦA TÔM

08/31/24 Ứng dụng KTDT trong thủy sản 46

Written by hoangtuan.info Mail: tuannhung87@gmail.com