Lựa chọn và cố định kháng thể cho cảm biến miễn dịch để phát hiện kháng nguyên vi rút gây bệnh

B GIO DC V O TO TRNG I HC BCH KHOA H NI - PHM VN CHUNG TI: LA CHN V C NH KHNG TH CHO CM BIN MIN DCH PHT HIN KHNG NGUYấN VI RT GY BNH LUN VN THC S NGNH: CễNG NGH SINH HC NGI HNG DN KHOA HC: PHAN TH NG H NI 2010 LI CAM OAN Tỏc gi ca ti: La chn v c nh khỏng th cho cm bin dch phỏt hin vi rỳt gõy bnh xin cam oan rng õy l ti chớnh tỏc gi xut v thc hin, khụng trựng lp hay chộp vi bt ký cụng trỡnh nghiờn cu khỏc no Vit Nam cng nh trờn th gii Cỏc kt qu thu nhn c nghiờn cu ny hon ton trung thc Tỏc gi xin hon ton chu trỏch nhim vi ni dung cun lun ny! H Ni, ngy 15 thỏng 10 nm 2010 Tỏc gi Phm Vn Chung LI CM N Li u tiờn tụi xin by t lũng bit n sõu sc ti Phú giỏo s, tin s Phan Th Ng, Vin V sinh Dch t Trung ng, ngi hng dn tụi lm lun v to mi iu kin v c s vt cht cng nh trang thit b quỏ trỡnh tụi thc hin ti nghiờn cu Tụi xin by t lũng bit n chõn thnh ti ThS NCS Trn Quang Huy ngi ó tn tỡnh hng dn, ch bo, tụi lm lun vn, ó gi m cho tụi nhng ý tng nghiờn cu v to mi iu kin v c s vt cht cng nh trang thit b quỏ trỡnh tụi thc hin nghiờn cu phũng thớ nghim hon thnh lun ny Tụi xin chõn thnh cm n cỏc nghiờn cu viờn ca phũng thớ nghim hin vi in t: ThS Nguyn Thanh Thy; TS Th Thoa; CN Nguyn Thi Minh Liờn, CN Trn Minh Hin, nghiờn cu viờn phũng thớ nghim Húa sinh v dch Ths Trn Th Nguyt Lan, Cỏc nghiờn cu viờn phũng sn xut sinh phm chn oỏn, ó to iu kin cng nh chia s nhng kinh nghim tụi hon thin lun ny cú kt qu ny, tụi xin by t lũng bit n Ban giỏm hiu, Vin o to sau i hc, khoa Cụng ngh Sinh hc, lp cao hc K810 Trng i hc Bỏch khoa H Ni; Ban giỏm c v th cỏn b Vin o to Quc t v Khoa hc vt (ITIMS) - Trng i hc Bỏch khoa H Ni ó to iu kin cho tụi hc v thc hin lun ny Cui cựng tụi vụ cựng bit n nhng ngi thõn gia ỡnh, bố bn luụn khớch l, san s nhng khú khn cựng tụi sut thi gian hc tp, hon thnh ti v cuc sng ti ny c s h tr mt phn kinh phớ t Qu phỏt trin Khoa hc v Cụng ngh Quc gia (NAFOSTED), ti mó s: 106 161 181 09 H Ni, ngy 15 thỏng 10 nm 2010 Tỏc gi Phm Vn Chung MC LC Trang ph bỡa Li cam oan Li cm n Mc lc Danh mc ký hiu, ch vit tt Danh mc cỏc bng Danh mc cỏc hỡnh v, th M U CHNG TNG QUAN 1.1 Lch s hỡnh thnh phỏt trin cm bin sinh hc 1.2 Cm bin sinh hc 1.2.1 Khỏi nim cm bin sinh hc 1.2.2 Nguyờn lý hot ng ca cm bin sinh hc 1.2.3 Phõn loi cm bin sinh hc 10 1.3 Tng quan v khỏng th, khỏng nguyờn, vi rỳt viờm nóo Nht Bn 15 1.3.1 Khỏng th 15 1.3.2 Khỏng nguyờn 26 1.3.3 Vi rỳt viờm nóo Nht bn (VNNB) 28 1.4 Cỏc phng phỏp c nh khỏng th lờn b mt in cc 31 1.4.1 Phng phỏp cng hoỏ tr 32 1.4.2 Phng phỏp liờn kt chộo (cross linking) 32 1.4.3 Phng phỏp t gn kt (SAM - Self Assembled Monolayers hoc Multilayer) 33 1.4.4 Phng phỏp hp ph 34 1.4.5 Phng phỏp in hoỏ 34 CHNG 2: PHNG PHP THC NGHIM 36 2.1 Tỏch chit v tinh sch khỏng th 36 2.1.1 Vt liu 36 2.1.2 Phng phỏp thc nghim 37 2.2.2.1 S ch v cụ c IgG bng amonium sulfate bóo hũa 38 2.2.2.2 Tinh sch IgG bng sc k ỏi lc s dng phc hp gn protein G sepharrose 39 2.1.2.3 Xỏc nh hm lng protein t phõn on 41 2.1.2.4 Kim tra tinh sch ca IgG 42 2.2 C nh khỏng th cho cm bin dch 43 2.2.1 Vt liu 43 2.2.2 Phng phỏp thc nghim 45 2.2.2.1 X lý b mt in cc trc c nh khỏng th 45 2.2.2.2 Silan húa lp oxit trc c inh 47 2.2.2.3 Cỏc phng phỏp c nh 48 2.2.2.4 Cỏc phộp o c 52 2.3 ỏnh giỏ nhy ca cm bin 55 2.3.1 B khuch i Lock in SR830 55 2.3.2 B trớ h o 56 2.3.3 Phng phỏp o 56 2.3.4 Thc hin phộp o 57 CHNG 3: KT QU V THO LUN 59 3.1 Tỏch chit v tinh sch khỏng th 59 3.2 C nh khỏng th IgG khỏng vi rỳt VNNB 64 3.2.1 Hin vi in t quột 65 3.2.2 Hin vi lc nguyờn t (AFM) 67 3.2.3 Ph hng ngoi (FITR) 69 3.2.4 Hin vi hunh quang 70 3.3 ỏnh giỏ nhy ca cm bin c c nh theo cỏc phng phỏp khỏc 73 3.3.1 Phng phỏp APTES Khỏng th (APTES-Ab) 74 3.3.2 Phng phỏp APTES - G.A Khỏng th (APTES G.A Ab) 77 3.3.3 Phng phỏp APTES G.A Protein A Khỏng th (APTES GA - PrA Ab) 79 KT LUN 84 KIN NGH 85 DANH MC CC CễNG TRèNH CễNG B CA TC GI 86 TI LIU THAM KHO 87 Ab DANH MC Kí HIU V CH VIT TT Antibody (Khỏng th) AFM Atomic force microscope (Kớnh hin vi lc nguyờn t) APTES 3-aminopropyl-triethoxy-silance (Mt loi polyme) FITC Fluorescein isothiocyanate (cht phỏt hunh quang) Arbo Arthropod borne viruses BOD Biochemical oxygen Demand (nhu cu oxy sinh hoỏ) BSA Bovin Serum Albumin (Huyt bũ) DNA Deoxyribonucleic acid (Axớt ờoxyribụnuclờic ADN) ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay (K thut dch gn enzym) FTIR Fourier transform infrared spectroscopy ( Ph hng ngoi bin i chui Fourier) GA Glutaraldehyde HIV Human immunodeficiency virus (vi rỳt gõy suy gim dch) HPV Human papillomaviruses (vi rỳt gõy ung th c t cung)) HSV Herpes simplex virus Ig Immunoglobulin (Khỏng th) ITIMS International Training Institute for Materials Science (Vin o to quc t v khoa hc vt liu) IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry (Hip hi Húa hc v ng dng Quc t) PCR Polymerase Chain Reaction PPy Polypyrrole (Mt loi polyme) PrA Protein A RNA Ribonucleic acid (Axớt Ribụnuclờic ARN) VNNB Viờn nóo Nht Bn WHO World Hearlth Organization (T chc Y t Th gii) WNV West Nile virus DANH MC CC BNG Trang Bng 1.1 Mt s kt qu ca cm bin dch phỏt hin vi rỳt 12 gõy bnh Bng 1.2 Cỏc loi enzym thng dựng 14 Bng 1.3 Ký hiu cỏc phõn lp khỏng th 17 Bng 2.1 Húa cht dựng cho quỏ trớnh tỏch chit IgG 36 Bng 2.2 Thit b dựng cho quỏ trỡnh tỏch chit IgG 37 Bng 2.3 Th t thnh phn dung dch, húa cht ca bn gel phõn tớch 42 Bng 2.4 Húa cht s dng cho quỏ trỡnh c nh khỏng th 43 Bng 2.5 Thit b dựng cho quỏ trỡnh c nh v o c 44 Bng 2.6 Thc hin cỏc phộp o theo nng v thi gian 58 Bng 3.1 Kt qu s ch IgG bng amonium sulfate bóo hũa 60 Bng 3.2 Kt qu tỏch chit khỏng th IgG bng ct sc ký gn prteinG 61 sepharrose Bng 3.3 Hiu sut s ch v tinh sch IgG qua hai giai on 63 Bng 3.4 Tớn hiu dũ tỡm theo s thay i ca nng khỏng nguyờn 74 v thi gian (phng phỏp APTES Ab) Bng 3.5 Tớn hiu dũ tỡm theo s thay i ca nng khỏng nguyờn 77 v thi gian (phng phỏp APTES GA - Ab) Bng 3.6 Tớn hiu dũ tỡm theo s thay i ca nng khỏng nguyờn 79 v thi gian (phng phỏp APTES GA PrA - Ab) Bng 3.7 Kt qu ỏnh giỏ nhy ca cm bin qua ba phng phỏp c nh vi nng dũ tỡm khỏng nguyờn 20àg/ml 81 DANH MC CC HèNH V V TH Trang Hỡnh 1.1 S phỏt trin cm bin sinh hc, phõn b theo i tng vi rỳt gõy bnh c phỏt hin 10 nm gn õy (nm 2000 n 7/2010) Hỡnh 1.2 Cu to chung ca cm bin sinh hc Hỡnh 1.3 Nguyờn lý hot ng cm bin sinh hc Hỡnh 1.4 S phỏt trin cm bin dch phỏt hin virus gõy 13 bnh 10 nm gn õy (ngun d liu ISI Web of Science t nm 2000 n 7/2010) Hỡnh 1.5 Cu to chung ca khỏng th 16 Hỡnh 1.6 Cu to ca IgG 18 Hỡnh 1.7 Cu to ca IgM 19 Hỡnh 1.8 Cu to ca IgA 20 Hỡnh 1.9 Cu to ca IgD 21 Hỡnh 1.10 Cu to ca IgE 21 Hỡnh 1.11 Hỡnh thỏi vi rỳt VNNB 29 Hỡnh 1.12 Phng phỏp liờn kt chộo (cross-linking) 32 Hỡnh 1.13 Quỏ trỡnh t gn kt ca cỏc phõn t sinh hc lờn b 33 mt cm bin Hỡnh 1.14 Phng phỏp hp ph 34 Hỡnh 1.15 Cu trỳc phõn t polypyrole 35 Hỡnh 2.1 B sinh phm tỏch chit IgG (Mab Trap Kit) 37 Hỡnh 2.2 Quy trỡnh tinh ch s b IgG 38 Hỡnh 2.3 Quy trỡnh tinh sch IgG 40 Hỡnh 2.4 Vi cm bin cú cú cu hỡnh 20 àm X 20àm 44 Hỡnh 2.5 Quy trỡnh l sch b mt in cc 46 Hỡnh 2.6 To nhúm OH lờn b mt cm bin 47 Hỡnh 2.7 Quỏ trỡnh x lý nhit b mt cm bin 47 Hỡnh 2.8 Phn ng silan húa 48 Hỡnh 2.9 Phn ng liờn kt khỏng th trờn nn APTES 49 Hỡnh 2.10 Quy trỡnh c nh khỏng th theo hng APTES - Ab 49 Hỡnh 2.11 Phn ng liờn kt khỏng th trờn nn APTES cú b sung 50 thờm GA Hỡnh 2.12 Quy trỡnh c nh khỏng th theo hng APTES G.A Ab 50 Hỡnh 2.13 Phn ng liờn kt khỏng th trờn nn APTES cú b sung 51 thờm GA v PrA Hỡnh 2.14 Quy trỡnh c nh khỏng th theo hng APTES GA - 51 PrA Ab Hỡnh 2.15 Kớnh hin vi in t quột (S4800 Hitachi) 52 Hỡnh 2.16 Nguyờn lý hot ng ca kớnh hin vi lc nguyờn t ( 53 Multimode, Veeco) Hỡnh 2.17 Mỏy phõn tớch ph hng ngoi bin i chui Fourier 54 (FTIR Thermo Nicolet 6700) Hỡnh 2.18 Kớnh hin vi hunh quang (Elipse 90i Nikon) 55 Hỡnh 2.19 B khuch i (Lock-in SR830, Research system) 56 Hỡnh 2.20 H o vi sai s dng mỏy khuych i (Lock-in SR830) 56 Hỡnh 3.1 Nng IgG cỏc phõn on 62 Hỡnh 3.2 Kt qu xỏc nh tinh sch ca IgG th tinh ch 64 Hỡnh 3.3 Hỡnh thỏi b mt cm bin c quan sỏt bng kớnh hin vi 65 in t quột phõn gii cao FESEM (S4800 Hitachi) Hỡnh 3.4 Hỡnh thỏi in cc quan sat di kớnh hin vi lc nguyờn t 68 (Multimode) Hỡnh 3.5 Ph hp th hng ngoi (FITR) 69 Hỡnh 3.7.A Hỡnh nh phỏt quang ca khỏng th IgG khỏng vi rỳt 70 VNNB trờn in cc, s dng phng phỏp APTES - Ab Hỡnh 3.7.B Hỡnh nh phỏt quang ca khỏng th IgG khỏng vi rỳt VNNB 71 Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung 3.3.3 Phng phỏp APTES G.A Protein A Khỏng th (APTES GA - PrA Ab) Bng 3.6 Tớn hiu dũ tỡm theo s thay i ca nng khỏng nguyờn v thi gian (phng phỏp APTES GA PrA - Ab) Thi gian (phỳt) 10 15 20 25 30 35 40 45 50 u 0,010 0,013 0,008 0,015 0,018 0,013 0,015 0,020 0,018 0,020 Nng khỏng nguyờn (àg/ml) 15 20 10 0,00050 0,00063 0,00038 0,00075 0,00088 0,00063 0,00075 0,00100 0,00088 0,00100 K810 Khoa Công nghệ sinh học u 0,018 0,025 0,330 0,525 0,683 0,705 0,658 0,733 0,803 0,828 0,0009 0,0013 0,0016 0,0263 0,0341 0,0353 0,0329 0,0366 0,0401 0,0414 u 0,910 0,983 1,265 2,078 2,515 2,443 2,703 2,673 2,905 2,745 0,04550 0,04913 0,05325 0,10388 0,12575 0,12213 0,13513 0,13363 0,14525 0,13725 u 1,180 2,135 3,313 4,690 4,993 5,128 5,288 5,308 5,338 5,315 Đại 79 học Bách khoa Hà Nội 0,05900 0,10675 0,16563 0,23450 0,24963 0,25638 0,26438 0,26538 0,26688 0,26575 25 u 1,806 2,175 3,360 4,743 5,053 5,193 5,358 5,330 5,250 5,358 30 0,09031 0,10875 0,16800 0,23713 0,25263 0,25963 0,26788 0,26650 0,26250 0,26788 u 2,060 2,508 3,378 4,470 5,008 5,310 5,343 5,375 5,418 5,383 0,10300 0,12538 0,16888 0,22350 0,26538 0,26550 0,26713 0,26875 0,27088 0,26913 Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung Hỡnh 3.10 Tớn hiu dũ tỡm theo s thay i ca nng khỏng nguyờn v thi gian (phng phỏp APTES GA PrA - Ab) Ging nh hai phng phỏp trờn tng nng v thi gian phn ng thỡ tớn hiu dũ tỡm cng tng theo v n nh sau 20 (phỳt) phng phỏp ny tng nng tớn hiu dũ tỡm tng tuyn tớnh, khụng cú s tng t bin, iu ny c lý gii bi s cú mt ca PrA chỳng lm chc nng trung gian chuyn in t, ng thi lm tng im tip xỳc ca khỏng nguyờn, ú vi nng thp cng cú th to cỏc tớn hiu, nhiờn cỏc tớn hiu dũ tỡm khụng cao, tớn hiu mnh nht ch t 5,358 (mV)/30 (àg/ml)/50 (phỳt) Khi tng nng t n 20 (àg/ml) tớn hiu tng ln lt gp 2, ln, cỏc nng khỏng th cao hn tớn hiu khụng tng hoc cú ch l nhng bin ng nh ỏnh giỏ nhy ca tng loi cm bin tỏc gi tin hnh so sỏnh tớn hiu dũ tỡm vi nng gii hn dũ tỡm 20 (àg/ml) v kho sỏt theo thi gian v thu nhn kt qu c nh sau K810 Khoa Công nghệ sinh học 80 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung Bng 3.7 Kt qu ỏnh giỏ nhy ca cm bin qua ba phng phỏp c nh vi nng dũ tỡm khỏng nguyờn 20àg/ml Thi gian APTES - Ab APTES GA - APTES GA Ab PrA - Ab PBS (phỳt) u u u u 0,223 0,01120 0,601 0,03010 1,180 0,05900 0,002 0,0001 10 0,472 0,02360 1,553 0,07770 2,135 0,10675 0,004 0,0002 15 0,556 0,02780 2,734 0,13670 3,313 0,16563 0,006 0,0003 20 0,787 0,03940 3,258 0,16290 4,690 0,23450 0,007 0,0003 25 0,894 0,04470 3,473 0,17370 4,993 0,24963 0,004 0,0002 30 0,933 0,04670 3,545 0,17730 5,128 0,25638 0,003 0,0001 35 0,935 0,04680 3,571 0,17860 5,288 0,26438 0,007 0,0003 40 0,951 0,04760 3,586 0,17930 5,308 0,26538 0,005 0,0002 45 0,957 0,04790 3,582 0,17910 5,338 0,26688 0,008 0,0004 50 0,959 0,04800 3,632 0,18160 5,315 0,26575 0,007 0,00035 K810 Khoa Công nghệ sinh học 81 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung Hỡnh 3.11 Tớn hiu dũ tỡm ca ba loi cm bin cựng nng khỏng nguyờn 20 (àg/ml) Qua th hỡnh 3.11 mụ t tớn hiu dũ tỡm vi mc gii hn dũ tỡm 20 (àg/ml) ta thy tớn hiu theo thi gian l cỏc ng cong tuyn tớnh, chỳng xut hin sau phỳt v n nh sau khong 20 phỳt tớnh t nhỳng cm bin vo dung dch cha khỏng nguyờn, mc tớn hiu ca cỏc phng phỏp khỏc l khỏc Ta xột ti im cõn bng n nh (20 phỳt) ta thy cỏc tớn hiu 0,787; 3,258; 4,690 (mV) tng ng vi cỏc phng phỏp APTES Ab; APTES GA Ab; APTES GA PrA Ab, t nhng kt qu phõn tớch ny cho thy cựng nng gii hn dũ tỡm tớn hiu ca cm bin c nh khỏng th theo phng phỏp APTES GA PrA - Ab cao hn 5,96 ln so vi phng phỏp c nh ch s dng APTES v cao hn 1,44 ln so vi phng phỏp c nh ch cú GA Nh vy ba phng phỏp c nh trờn ta thy phng phỏp c nh APETS GA PrA - Ab l phng phỏp cú nhy cao nht Theo tớnh toỏn ca chỳng tụi kh nng phỏt hin nng mu nh hn 60 ln so vi pha loóng khỏng nguyờn chun ca k thut MACELISA sn xut ti Vit Nam Tuy nhiờn, ti ch l mt phn quỏ trỡnh K810 Khoa Công nghệ sinh học 82 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung nghiờn cu nhm ch to thit b chn oỏn vi rỳt gõy bnh, nhm to thit b cú nhy cao, nh gn, tin ớch Hn na iu kin thi gian thc hin ti cú hn v nhng yu t khỏch quan khỏc nờn ti cũn tn ti mt s nh: - Kho sỏt tớnh toỏn hm lng khỏng th gn trờn b mt in cc - Ti u húa cỏc iu kin, húa cht, vt lý v cỏc phng phỏp c nh khỏng th - Th nghim c nh vi cỏc loi polyme dn khỏc - Cỏc phộp o vi mu phõn tớch cha lp li nhiu ln, th nghim cỏc iu kin khỏc cho kt qu chớnh xỏc hn - Xỏc nh thi gian sng ca cm bin K810 Khoa Công nghệ sinh học 83 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung KT LUN Sau quỏ trỡnh nghiờn cu nhm ch to v c nh khỏng th cho cm bin dch dũ tỡm vi rỳt gõy bnh, tỏc gi ó hon thnh mc tiờu ca ti lun a vi nhng kt qu c th nh sau: La chn khỏng th phự hp cho cm bin dch - ó la chn c phng phỏp tinh sch khỏng th: Tỏc gi ó thnh cụng vic s dng kt hp hai cung on, tỏch chit s b bng amonim sulfate sau ú tinh sch li vi ct sc ký ỏi lc bng b kớt tỏch chit IgG (Mab Trap Kit) vi hiu sut 80% Khỏng th sau ch cú tinh sch cao ỏp ng yờu cu lm phn t u dũ cho cm bin dch phỏt hin vi rỳt gõy bnh Ti u húa quỏ trỡnh c nh khỏng th IgG cho cm bin dch - La chn, c nh thnh cụng khỏng th IgG khỏng vi rỳt viờm nóo Nht Bn trờn b mt in cc theo cỏc phng phỏp c nh khỏc - Tỡm quỏ trỡnh c nh khỏng th ti u nht cho cm bin dch - Xõy dng phng phỏp kim tra nhy ca vi cm bin Kho sỏt dũ tỡm im gii hn, cng nh s nh hng ca nng khỏng nguyờn v thi gian ỏp ng tớn hiu - ó tỡm phng phỏp c nh khỏng th cho cm bin cú nhy cao, cú kh nng phỏt hin khỏng nguyờn vi rỳt VNNB nng 20 (àg/ml), thi gian dũ tỡm l 20 (phỳt) vi tớn hiu ỏp ng l 4,690 (mV) K810 Khoa Công nghệ sinh học 84 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung KIN NGH Cỏc kt qu ca ti cho thy cm bin dch trờn c s c nh khỏng th cú nhy cao, thi gian ỏp ng nhanh Tuy nhiờn, phỏt hin vi rỳt trờn c s c nh khỏng th trờn b mt in cc, cn cú giai on tinh ch khỏng th ti u, cỏc phn t sinh hc phi gi c c tớnh sinh hc quỏ trỡnh o Vỡ th, vic nghiờn cu bo qun cm bin trc v sau c nh cn phi c quan tõm Mt khỏc, cỏc phõn t khỏng th, khỏng nguyờn, l cỏc phõn t sinh hc cú kớch thc nh bộ, nng ca chỳng mu phõn tớch rt thp, nờn cm bin phi cú nhy cao, vic thit k v ch to cm bin cn c ti u húa v kớch thc tng nhy cm gia cỏc in cc Trong tng lai gn, tim nng ca cm bin sinh hc núi chung v cm bin dch núi riờng cú trin vng rt ln cú th thay th cỏc thit b phõn tớch thụng thng phõn tớch y sinh hc Do ú, cn quan tõm nghiờn cu, phỏt trin v hon thin loi thit b thụng minh v cú tim nng ny K810 Khoa Công nghệ sinh học 85 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung DANH MC CC CễNG TRèNH CễNG B CA TC GI Phm Vn Chung, Trn Quang Huy, Nguyn Vit Hong, Phng Loan, Mai Anh Tun, Nguyn Th Hng Hnh, Phan Th Ng (2010), Cm bin sinh hc/chip sinh hc phỏt hin nhanh vi rỳt gõy bnh trin vng phỏt trin ti Vit Nam, Tp Y hc d phũng, XX(6), tr 222 229 Phm Vn Chung, Trn Quang Huy, Nguyn Th Hng Hnh, Nguyn Th Thng, Mai Anh Tun, Phan Th Ng (2010), Phỏt hin nhanh vt liu di truyn vi rỳt Herpes (HSV) bng cm bin sinh hc, Tp y hc TP.H Chớ Minh, XIV, tr 288 233 K810 Khoa Công nghệ sinh học 86 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung TI LIU THAM KHO Ti liu ting Vit [1] ng c Anh, Nguyn Th Hng Hnh, Phan Th Ng (2010), Virus Y hc, NXB Y hc, tr 115 138 [2] Phm Vn Chung, Trn Quang Huy, Nguyn Vit Hong, Phng Loan, Mai Anh Tun, Nguyn Th Hng Hnh, Phan Th Ng (2010), Cm bin sinh hc/chip sinh hc phỏt hin nhanh vi rỳt gõy bnh trin vng phỏt trin ti Vit Nam, Tp Y hc d phũng, XX(6), tr 222 229 [3] Phm Vn Chung, Trn Quang Huy, Nguyn Th Hng Hnh, Nguyn Th Thng, Mai Anh Tun, Phan Th Ng (2010), Phỏt hin nhanh vt liu di truyn vi rỳt Herpes (HSV) bng cm bin sinh hc, Tp y hc TP.H Chớ Minh, XIV, tr 288 233 [4] Trn Quang Huy, Nguyn Th Thng, Nguyn Th Thanh Thy, Phng ỡnh Tõm, Mai Anh Tun (2007), ng dng cm bin ADN nghiờn cu Y sinh hc Tuyn cụng trỡnh nhng c bn ca khoa hc s sng, tr 170 171 [5] Trn Quang Huy, Nguyn Th Thng, Nguyn Th Thanh Thy, Phng ỡnh Tõm, Mai Anh Tun (2007), Phỏt hin axớt nucleic ca vi rỳt gõy bnh bng cm bin sinh hc ADN, Tp Y hc d phũng, XVII, s (91), tr 57 63 [6] Phan Th Ng (2004), Vi rỳt viờm nóo Nht Bn v cỏc k thut chn oỏn, Nxb y hc [7] Phng ỡnh Tõm (2009), lun ỏn tin s, nghiờn cu ch to cm bin ADN nhm ng dng Y hc v Thc phm [8] ng Th Thu (2004), cụng ngh enzym , NXB Khoa hc v k thut, tr 166 206 [9] Phm Vn Ty (2004), Min dch hc , NXB i hc Quc gia H ni, tr 13 70 K810 Khoa Công nghệ sinh học 87 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung Ti liu ting Anh [10] Ahuja, T., Irfan Ahmad Mira, Devendra Kumar, Rajes (2007), Biomolercular immobilization on conducting polymers for biosensing applications, Biomaterials, (28), pp 791 - 805 [11] Aizawa, M., Yabuki, S (1985), Electrochemical characteristics of an enzyme immobilized conducting polymer membrane In: Proceedings of the 51st annual meeting Japan chemical society, pp [12] Alcock , S.J and Turner, A.P.F (1998), continuous analyte monitoring to aid clincal practice, IEEE Engineering in Medicine and biology, June/July, UK [13] Asenjo, J A and Andrews, B A (2009), protein purfication using chromatography: selection of type, modelling and optimization of operating condition, J Mol Recognit, 22(2), pp 6576 [14] Avraham Rasooly and Keith E.Herold (2009), Methods in Molecular Biology: Biosensor and Biodetection, (504), chapter 23 [15] Boulanger, P (2009), Purification of bacteriphase and SDS PAGE analysis of phage structural protein from ghost particles methods Mol Biol, (502), pp 227 238 [16] Brian WJ Mahy and Hillar O Kangro (1996), Virology Methods Manual, Academic Press [17] Callegavi, A., Cosnier, S., Marcaccio, M., Paolucci, D., Paolucci, F,, Creorgakilas, V., et al (2004), Functionalized single wall carbon nanotubes/polypyrrole composites for the preparation of amperometric glucosebiosensors, J Mater Chem, (5), pp 10 [18] Calvo, E.J., Wolosiuk, electrostatic A (2004), self-assembled Supramolecular archectures of glucose oxidase enzyme electrodes Chem Phys Chem., (5), pp 235-239 [19] Cass, A.E.G., Francis, D.G., Hill, H.A.O., Aston, W.J., Higgins, I.J., Plotkin, E.V., Scott, L.D.L and Turner, A.P.F (1984), enzyme electrode for amperometric determination of glucose, Anal Chem, (56), pp 667 671 K810 Khoa Công nghệ sinh học 88 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung [20] Claire, L., Morgan, et al (1996), Immunosensor: Technology and opportunities in laboratory medicine, Clinical Chemistry 42(2), pp 193 209 [21] Clark, L C Jnr (1962), Electrode system for continous monitoring in cardiovascular surgery, Ann, NY Acard Sci, (102), pp 29 - 45 [22] Clark, L.C Jnr (1956), monitor and control of blood and tissue oxygen tensions, Trans Am Soc Artif Intern Organs, (2), pp 41 - 48 [23] Clemens, A.H., Chang, P.H and Myers, R.W (1976), Development of an automatic system of insulin infusion algenithins, Proc Journes Ann de Diabtologie de lHtel-Dieu, Paris, pp 269 278 [24] Cooney, C.L., Weaver, J.C et al (1974), thermal enzymes proble: a novel approach to chemical analysis in Enzyme Engineering, (Eds E.K Pye and L.B Wingard Jnr.) 2, Plenum, New York, (2) pp 411 417 [25] Daniel, R Toth, Klara, Durst, Richard, A., Wilson, George, S (1999), Electrochemical biosensors: recommended definitions and classification Pure and Applied Chemistry, 71(12), pp 2333-2348 [26] Davis, J., Vaughan DH., Cardosi, MF (1995), Elememts of biosensor construction, Enzyme Microb Technol., (17), pp 1030 [27] Dennison, M.J and Turner, A.P.F (1995), biosensoer for environment monitoring, Biotechlo Adv., (13), pp.1 12 [28] Divis, C (1975), remarques sur loxydation de lethanol par une electrode microbiene dacetobacter zylinum Annals of Microbiology, (126A), pp 175 186 [29] Gambhir, A., Gerard, M., Mulchandani, A., Malhotra, BD (2001), Coimmobilization of urease & glutamate dehydrogenase in electro-chemically prepared polypyrrole-polyvinyl sulphonate films Appl Biochem Biotechnol, (96), pp 57 - 249 K810 Khoa Công nghệ sinh học 89 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung [30] Geoffry, C., Allen, Fabio Sorbello, et al (2005), Macro - , Micro -, and nano investgations on aminopropyltrimethoxysilan self assembly monolayer, Thin Solid Film, (482), pp 306 311 [31] Gulla, KC., Gouda, MD., Thakur, MS,, Karanth, NG (2002), Reactivation of immobilized acetyl cholinesterase in an amperometric biosensor for arganophosphorous pesticide Biochem Biophys Acta, (1597), pp -133 [32] Han, Y., et al (2006), Suface activation of thin silicon oxides by wet cleaning and silanization, Thin Solid Films, (510), pp 175 - 180 [33] Heller, A., Feldman, B (2008), Electrochemical glucose sensors and their applications in diabetes management, Chem Rev., (108), pp 2482-2505 [34] Huy, T.Q., Thuy, N.T.T., Tam, P.D., Tuan, M.A., and Chien, N.D (2007), Investigation of electrochemical DNA sensor for biomedical application Proceedings of the 2sd International Conference on Biomedical Engineering, pp 273 278 [35] John E Coligan, Barbara E Bierer, Davisd H Marguliet, et al (2005), short protocol in immunology, John Wiley & Sons, Inc, pp -36 [36] Kong J., Yu S (2007), Fourier transform infrared spectroscopic analysis of protein secondary structures, Acta Bio Rt Biophys Sini, 39(8), pp 549-559 [37] Koopal, C.G.J., Bos, A.A.C.M., Nolte, R.J.M (1994), Third-generation glucose biosensor incorporated in a conducting printing ink, Sens Actuators B, (18), pp 166 [38] Kress Rogers, E (1996), Handbook of Biosensor and Electronic Noses: Medicine, Food and the Enviroment, CRC Press, Boca Raton, USA [39] Kristien Bonroy et al., (2006), Comparison of random and oriented immobilisation of antibody fragments on mixed self-assembled monolayers, Journal of Immunological Methods, (312), pp 167181 [40] Kuno, G (2001), Transmission of Arbovuruses without involvement of Artropod vector, Acta virologica, (45), pp 139 150 K810 Khoa Công nghệ sinh học 90 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung [41] Liedberg, B., Nylander, C and lundstrm (1983), Sensor and Actuators (4), pp 299 304 [42] Lisdat, F., Dronov, R., Moehwald, H., Scheller, F.W., Kurth, D.G (2009), Self-assembly of electro-active protein architectures on electrodes for the construction of biomimetic signal chains, Chem Commun, (3), pp 274-283 [43] Liu, A., Anzai, J.I., Wang, J.( 2005), Multilayer assembly of calf thymus DNA and poly(4-vinylpyridine) derivative bearing [Os(bpy)2Cl] 2+: Redox behavior within DNA film, Bioelectrochemistry, (67), pp 1-6 [44] Milagres, BG., Neto, GD., Kubota, LT., Yamanka, H ( 1997), A new amperometric biosensor for salicylate based on salicylate hydroxylase immobilized on polypyrrole film doped with hexacyanofer- rate, Anal Chim Acta; (347), pp 35 41 [45] Mosbach, K and Danielsson, B (1974), Biochim Biophys Acta, (364), pp.140 145 [46] Nunes, GS., Jeanty, G.,Marty, JL (2004), Enzyme immobilization procedures onscreen printed electrodes used for detection of anticholine esterase pesticide, comparative study, Anal Chim Acta, (523), pp 15 [47] Palmisano, F., Centonze, D., Zambonin, PG (1994), An in situ electro synthesized amperometric biosensor based on lactate oxidase immobilized in a poly-o-phenylenediamine film: determination of lactate in serum by flow injection analysis, Biosens Bioelectron, (9), pp 54 471 [48] Porter, R.A (2000), investigation of electroplated conducting polymer as antibody receptor in immunosensor, J Immunoassay, (21), pp 51 64], [Wrotnowski, C (1997), Genet Eng News, (17), pp 14 [49] Rahman, MA., Park, D., Chang, S., McNeil CJ., Shim, Y (2006), The biosensorbased on the pyruvate oxidase modified conducting polymer forphosphate ion determinations, Biosens Bioelectron, (21), pp 24 [50] Rajesh, Bisht, V., Takashima, W., Kaneto, K (2005), An amperometric K810 Khoa Công nghệ sinh học 91 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học ureabiosensor Phạm Văn Chung based on covalent immobilization of urease onto anelectrochemically prepared co polymer poly (N-3-amino propylpyrrole-copyrrole) film, Biomaterials, (26), pp 90 - 683 [51] Ramanathan K, Pandey, SS., Kumar, R., Gulati, A., Murthy, ASN., Malhotra, BD ( 2000), Covelent immobilization of glucose exidase to poly(o- amino benzoic acid) for application to glucose biosensor, J Appl Polym Sci, (78), pp - 662 [52] Ramanavi cius, A (2006), Electrochemical sensors based on conducting polymerpolypyrrole, Electrochimica Acta, (51), pp 60256037 [53] Ramanaviciene, A., Vilkanauskyte A., Acaite, J., Ramanavicius A., (2000), Acta Medical Lituanica, (5), pp 49 [55] Saoudi, B., et al., (2000), Study of DNA adsorption on polypyrrole: interest of dielectric monitoring, Sensors and Actuators B, (62), pp 3542 [56] Shichiri, M., Kawamori, R., Yamaski, R., Hakai, Y and Abe, H (1982), Wearable artificial endocrine pancreas with needle stype glucose sensor, Lancet, (2), pp 1129 1131 [57] Sibai A., Elamri K., Barbier D., Renault N.J., Souteyrand E (1996), Analysis of polymer-antibody-antigen interaction in a capacitive immunosensor by FTIR difference spectroscopy, Sens Actuators B, (31), pp 125-130 [58] Sudam K.P., Sukalyan D., Sabita P., Mishra B.K (2006), Adsorption of organic molecules on silica surface Adv in Col Inter Sci, (121), pp 77-110 [59] Takeshi Ikeda, et al (2009), Analytical Biochemistry (358), pp 132 137 [60] Tarushee Ahuja, Irfan Ahmad Mir, Devendra Kumar, Rajesh (2007), Biomolecular immobilization on conducting polymers for biosensing applications, Biomaterials, (28), pp 791-805 [61] Technical Infoemation on Japanese Encephalitis Guidelines for Diagnosis, Surveillance and Control (1988), WHO, NEW Delhi K810 Khoa Công nghệ sinh học 92 Đại học Bách khoa Hà Nội Luận văn thạc sĩ khoa học Phạm Văn Chung [62] Tombelli, S., Maria Minunni, Marco Mascini (2005), Piezoelectric biosensors: Strategies for coupling nucleic acids to piezoelectric devices, Methods, (37), pp 48 - 56 [63] Trojanowicz, M., Geschke, O., Krawozynske, V., Krawczyk, T., Cammann, K (1995), Biosensors based on oxidase immobilized in various conducting polymers, Sens Actuators B , (28), pp 19-191 [64] Trojanowicz, M., Wcislo, M., (2005), Enantioselectivity of potentiometric sensors with application of different mechanisms of chiral discrimination, Anal Lett, (38), pp 523 - 547 [65] Updike, K.J and Hicks, J.P (1967), The Enzyme Electrode, Nature (214), pp 986 - 988 [66] Vidal, JC., Ruiz, EG., Castillo, JR (2003), Recent advances in electropolymerized conducting polymers in amperometric biosensors Microchim Acta, (143), pp 93111 [67] Walk, G (2002), Protein purification and characterizatio, proteins biochemistry and biotechnology, John Wiley Sons LTD., pp 99 116 [68] Warsinke A., Benkert A., Scheler F.W (2000), Electrochemical immunoassays Fresenius, J Anal Chem, (366), pp 622 69 WHO, (1992), Good manufactoring practices for biological products, WHO Technical Report series, (822), pp 20 30 [70] Wrotnowski, C (1997), Genet Eng News, (17), pp 14.], [Ramanaviciene, A., Vilkanauskyte A., Acaite, J., Ramanavicius A., (2000), Acta Medical Lituanica, (5), pp 49 [71] http://www.who.int K810 Khoa Công nghệ sinh học 93 Đại học Bách khoa Hà Nội ... nhit [24], [ 45] Nm 1975, Divis xut hng nghiờn cu mi ú l cỏc in cc vi sinh vt vi yu t nhn bit l cỏc vi sinh vt o nng cn [28] Cụng trỡnh ca Divis ó to tin cho vic nghiờn cu ng dng cỏc loi... m bo cho s bt cp ti u vi khỏng nguyờn Do ú, gúp phn phỏt trin cỏc cm bin dch Vit Nam nhm phỏt hin nhanh, trc tip vi rỳt gõy bnh, tỏc gi nhn thy vic thc hin ti: La chn v c nh khỏng th cho cm... Glutaraldehyde HIV Human immunodeficiency virus (vi rỳt gõy suy gim dch) HPV Human papillomaviruses (vi rỳt gõy ung th c t cung)) HSV Herpes simplex virus Ig Immunoglobulin (Khỏng th) ITIMS International