THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN PHÂN CỰC CỦA CAO ACETONE THÔ TỪ LOÀI ĐỊA Y PARMOTREMA TSAVOENSE

ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHÂN ĐOẠN PHÂN CỰC CỦA CAO ACETONE THÔ TỪ LOÀI ĐỊA Y PARMOTREMA TSAVOENSE GVHD: TS DƯƠNG THÚC HUY SVTH: NGUYỄN NGỌC MẪN MSSV: K39.106.061 Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2017 Xác nhận Hội đồng phản biện: KÍ TÊN VÀ DUYỆT (Kí ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Trên thực tế để đạt thành công, nổ lực, phấn đấu thân, luôn cần có giúp đỡ, hỗ trợ dù nhiều hay ít, dù trực tiếp hay gián tiếp người xung quanh Để hoàn thành báo cáo khóa luận tốt nghiệp này, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ quý Thầy Cô, gia đình bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến quý Thầy Cô Khoa Hóa Học – Trường Đại học Sư Phạm TP.HCM với tri thức tâm huyết để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập trường Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn Thầy TS Dương Thúc Huy, người tận tình hướng dẫn em suốt trình thực đề tài, thầy người giúp em có thêm niềm say mê nghiên cứu khoa học Nếu hướng dẫn, giúp đỡ Thầy báo cáo khó hoàn thiện Một lần xin chân thành cảm ơn Thầy Ngoài ra, không nhắc đến anh chị khóa trên, bạn sinh viên môn hóa Hữu Cơ khoa Hóa học, người động viên, giúp đỡ em trình thực đề tài Và cuối lời cảm ơn gửi tới gia đình, người thân, chổ dựa vững tinh thần suốt trình học tập trường, trình thực đề tài Do báo cáo thực khoảng thời gian ngắn nên tránh khỏi sai sót, em mong nhận ý kiến đóng góp quý báu quý Thầy Cô để em có thêm kinh nghiệm báo cáo sau hoàn thiện Sau cùng, xin chúc quý Thầy Cô bạn thật dồi sức khỏe! i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU Ac Acetone br Mũi dãn rộng (Broad) AcOH Acetic acid C Chloroform DMSO Dimethyl sulfoxide d Mũi đôi (Doublet) EA Ethyl acetate HMBC Tương quan 1H-13C qua 2, nối (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) HSQC Tương quan 1H-13C qua nối (Heteronuclear Single Quantum Correlation) IC50 Nồng độ ức chế phát triển 50% số tế bào thử nghiệm (Half Maximal Inhibitory Concentration) J Coupling constant (Hằng số tương tác spin-spin) m Mũi đa (Multiplet) MIC Nồng độ tối thiểu ức chế phát triển tế bào (Minimum Inhibitory Concentration) NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) N.D Không xác định (Not determined) pTLC Sắc ký lớp mỏng điều chế (Preparative thin layer chromatography) s Mũi đơn (Singlet) SKC Sắc ký cột δ Chemical shift (Độ chuyển dịch hóa học) ii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Ba dạng địa y Hình 1.2 Sinh tổng hợp hợp chất từ địa y Hình 1.3 Các hợp chất cô lập từ địa y thuộc chi Parmotrema Hình 2.1 Sơ đồ sắc ký cột cao acetone Hình 3.1 Cấu trúc hóa học số tương quan HMBC T3 Hình 3.2 Cấu trúc hóa học số tương quan HMBC N3 Hình 4.1 Cấu trúc hai hợp chất cô lập DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Hoạt tính điều tiết tăng trưởng thực vật bậc cao Bảng 1.2 Hoạt tính kháng virus ức chế enzyme virus hợp chất địa y Bảng 1.3 Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm hợp chất địa y Bảng 1.4 Hoạt tính gây độc tế bào kháng đột biến hợp chất địa y Bảng 1.5 Các loại enzyme bị ức chế hợp chất địa y Bảng 3.1 So sánh số liệu phổ NMR hợp chất parmosidone F, T3, parmosidone G N3 DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H 13H-NMR hợp chất T3 Phụ lục Phổ HSQC HMBC hợp chất T3 Phụ lục Phổ 1H 13C -NMR hợp chất N3 Phụ lục Phổ HSQC HMBC hợp chất N3 iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU ii DANH MỤC HÌNH ẢNH iii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC PHỤ LỤC iii MỤC LỤC iv LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa phân loại địa y 1.2 Vai trò sinh thái hợp chất tự nhiên địa y 1.3 Nghiên cứu hoá học hợp chất địa y 1.4 Nghiên cứu hoá học số loài địa y thuộc chi Parmotrema 1.5 Nghiên cứu hóa loài địa y Parmotrema tsavoense 1.6 Hoạt tính địa y hợp chất địa y 1.6.1 Hoạt tính động vật 10 1.6.2 Hoạt tính điều tiết tăng trưởng thực vật bậc cao 10 1.6.3 Hoạt tính kháng virus ức chế enzyme virus hợp chất địa y 11 1.6.4 Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm hợp chất địa y 11 1.6.5 Hoạt tính gây độc tế bào kháng đột biến hợp chất địa y 12 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 15 2.1 Máy móc, thiết bị, hóa chất 15 2.2 Thu hái xử lý mẫu nguyên liệu, ly trích cô lập hợp chất 15 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 iv 3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất T3 17 3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất N3 18 CHƯƠNG KÊT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 21 4.1 KẾT LUẬN 21 4.2 ĐỀ XUẤT 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 PHỤ LỤC 25 v LỜI MỞ ĐẦU Trong khoảng 20 năm trở lại đây, nghiên cứu hóa học sinh học địa y giới trở nên phổ biến Địa y thực vật bậc thấp, kết cộng sinh tảo nấm Địa y sống nhiều nơi đất, đá, thân cây, điều kiện khắc nghiệt khô hạn vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, người ta dễ dàng tìm thấy có mặt địa y nơi quen thuộc với phân bố phong phú đa dạng Ngay từ thời trung đại, nhiều người làm nghề y sử dụng loài địa y làm thuốc chữa bệnh Y học cổ truyền Trung Quốc sử dụng 71 loài địa y 17 chi (9 họ) với mục đích làm thuốc chữa bệnh Địa y thuộc họ Parmeliaceae, Usneaceae, Cladionaceae sử dụng nhiều hết Một vài loại cao điều chế từ địa y sử dụng để trị bệnh khác Lobaria pulmonaria chữa bệnh phổi, Xanthoria parientina chữa bệnh vàng da, chi Usnea để dưỡng tóc, Cetraria islandica (được gọi Ireland moss) chữa nhiễm khuẩn tiêu chảy Ngoài công dụng chữa bệnh, địa y sử dụng làm thực phẩm, mỹ phẩm, xà phòng, nước hoa Theo tác giả Boustie et al (2005)[1], Muller et al (2001)[22], Huneck et al (1999)[17], từ xưa có khoảng gần 1.000 hợp chất địa y cô lập thử nghiệm hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng virus, chống oxy hóa, kháng ung thư, kháng viêm, kháng enzyme… Xuất phát từ ứng dụng y học quý giá kế thừa nghiên cứu có chi Parmotrema nước nghiên cứu hóa học loài địa y Parmotrema tsavoense (Huynh BLC, Duong et al)[4], tiếp tục nghiên cứu loài địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swincow) Krog & Swincow nhằm cô lập hợp hợp chất phenolic có nhiều hoạt tính sinh học CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Định nghĩa phân loại địa y Địa y dạng thực vật bậc thấp, đặc biệt, kết cộng sinh nấm (mycobiont) thành phần quang hợp (photobiont) thường tảo (green alga) hay vi khuẩn lam (cyanobacterium) Hiện có khoảng 17.000 loài địa y tìm thấy Thông thường địa y chia làm dạng (Choi et al., 2008)[30]: Xanthoria sp., (Crustose lichen) Xanthoparmelia cf lavicola, (Foliose lichen) Hình 1.1 Ba dạng địa y Hypogymnia cf tubulosa, (Fructicose lichens) Thành phần tảo địa y sản sinh carbohydrate trình quang hợp, thành phần nấm sản sinh hợp chất tự nhiên (để chống tia UV, ngăn chặn sâu bọ loài động vật ăn cỏ, …), cung cấp nước khoáng chất Kết từ cộng sinh giúp địa y sinh trưởng sống sót điều kiện khắc nghiệt, chủ yếu vùng vĩ độ cao, vùng nhiệt đới, diện khắp nơi đá, đất, cây, thân cây, kim loại, thủy tinh (Choi et al., 2008)[30] Ðể hiểu chất địa y giải thích nguồn gốc chúng, nhà thực vật học thử tổng hợp địa y từ tế bào tảo nấm Mặc dù hai thành phần nuôi cấy riêng rẽ việc tổ hợp lại thành địa y thật khó khăn 1.2 Vai trò sinh thái hợp chất tự nhiên địa y  Bảo vệ trồng bậc thấp bậc cao  Các hợp chất thơm hấp thụ tia UV, bảo vệ địa y chống lại xạ có hại  Các carboxylic acid từ địa y tác chất tạo phức mạnh giúp cho địa y lấy khoáng chất từ vật chủ nơi địa y bám vào (substrate) (Choi et al., 2008)[30]  Giúp xua đuổi thú ăn thịt côn trùng 1.3 Nghiên cứu hoá học hợp chất địa y Có nhiều hệ thống phân loại hợp chất hóa học từ địa y, sử dụng nhiều hệ thống phân loại Shibata et al đề nghị (Huneck 1997)[12]: Các hợp chất hóa học địa y chia làm ba nhóm dựa theo nguồn gốc sinh tổng hợp chúng (Hình 1.2)  Nguồn gốc acid shikimic: terphenylquinone dẫn xuất acid tetronic  Nguồn gốc acid mevalonic: triterpenoid  Nguồn gốc acetate-malonate: acid dây dài acid phenol Tảo Nấm Hình 1.2 Sinh tổng hợp hợp chất từ địa y 1.4 Nghiên cứu hoá học số loài địa y thuộc chi Parmotrema  Parmotrema praesorediosum (+)-Praesorediosic acid (1), (+)-protopraesorediosic acid (2), atranorin (11) chloroatranorin (12) cô lập David F et al (1990)[6] Lecanoric acid (14) stictic acid (18) cô lập Ramesh P et al (1994)[29] Huynh B L Chi et al cô lập prasoether A (42), zeorin (46), 1β,3βdiacetoxyhopan-29-oic acid (57) (2011)[7] CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 Máy móc, thiết bị, hóa chất Phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC ghi máy Bruker Avance 500 Phòng Phân tích trung tâm, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia TP.HCM (phổ 1H-NMR đo tần số 500MHz phổ 13C-NMR đo tần số 125 MHz) Dung môi sử dụng cung cấp hãng Chemsol (Việt Nam) Sắc kí cột pha thuận sử dụng silica gel kích thước hạt (0.040–0.063 mm, Merck) Sắc kí lớp mỏng sử dụng mỏng 20 cm x20 cm phủ silica gel 60 F254 (Merck) 2.2 Thu hái xử lý mẫu nguyên liệu, ly trích cô lập hợp chất Loài địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swinscow) Krog & Swinscow thu hái đá núi Tà Cú, tỉnh Bình Thuận (tháng 8/2012-12/2012) Tên khoa học xác định tiến sĩ Wetchasart Polyiam, Tổ nghiên cứu địa y, Bộ môn Sinh học, Khoa Khoa học, Đại học Ramkhamhaeng, Bangkok, Thái Lan Mẫu ký hiệu số US-B027 lưu tiêu thực vật môn Hoá hữu cơ, Khoa Hoá, Đại học Khoa học Tự nhiên Bột khô địa y nghiền nhỏ (1,350 g) ngâm dầm methanol dịch chiết cô quay áp suất thấp Trong trình methanol bay hơi, tủa trắng P (30.3g) xuất dần lọc riêng Phần dung dịch lọc lại tiếp tục cô quay thu cao methanol thô (249.8 g) Phần cao methanol thô tiến hành nghiên cứu Duong TH (2015)[14] Phần bột địa y khô lại tiếp tục ngâm dầm acetone thu cao acetone thô AC (8.54 g) Tiến hành sắc kí cột silica gel pha thường cao acetone, giải ly với hệ dung môi n-hexane: ethyl acetate: acetone: acetic acid (20:10:10:0.1) để thu 10 phân đoạn AC0 (341.6 mg), AC1 (1.2 g), AC2 (1.3 g), AC3 (209.0 mg), AC4 (264.9 mg), AC5 (1.31 g), AC6 (476.3 mg), AC7 (971.1 mg), AC8 (1.2 g) AC9 (1.1 g) Phân đoạn AC1 (341.6 mg) thực sắc kí lớp mỏng điều chế, giải ly với hệ dung môi n-hexane: chloroform: ethyl acetate: acetone: acetic acid (5:1:2:2:0.1) thu hợp chất N3 (3.2 mg) 15 Phân đoạn AC5 (1.31 g) thực sắc ký cột, giải ly với hệ dung môi nhexane: ethyl acetate: acetone: acid acetic (30:5:1:1) để thu phân đoạn AC5.1AC5.8 Từ Phân đoạn AC5.5 (78.4 mg) thực sắc kí lớp mỏng điều chế, giải ly với hệ dung môi chloroform: ethyl acetate: acetone: acetic acid (10:4:2.4:0.8) thu hợp chất T3 (3.0 mg) Bột khô địa y Parmotrema tsavoense (1350.0g) Ngâm dầm với methanol Tủa P (30.3g) Bột khô lại Cao methanol thô (249.8g) (249.8g) Ngâm dầm với acetone Cao aceton (8.54 g) SKC H:EA:Ac:AcOH 20:10:10:0.1 AC5 AC3 AC4 AC1 AC1 AC2 AC6 AC7 AC8 AC9 AC10 (341.6 mg) (1.2 mg) (1.3 g) (209 mg) (204.9 mg) (1.31 g) (476.3 mg) (971.1 mg) (1.2 g) (1.31 g) (1.1 g) SKC H:EA:Ac:AcOH 30:5:1:1 AC5.1 AC5.2 AC5.3 AC5.4 pTLC H:C:EA:Ac:AcOH 5:1:2:2:0.1 AC5.5 AC5.6 (78.4mg) AC5.7 AC5.8 pTLC C:EA:Ac:AcOH 12:5:1:1 N3 (3.2 mg) T3 (3.0 mg) Sơ đồ quy trình ly trích cô lập hợp chất cao acetone thô 16 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất T3 Hợp chất T3 thu từ phân đoạn cao acetone loài địa y Parmotrema tsavoense chất bột, màu trắng đục Phổ 1H 13C-NMR (phụ lục 1) Phổ HSQC HMBC (phụ lục 2)  Biện luận cấu trúc phổ Phổ 1H-NMR vùng từ trường yếu cho thấy diện hai tín hiệu proton nhóm olefin mũi đôi δH 8.14 (1H, d, J=16) δH 7.38 (1H, d, J=16) ghép đôi với với số ghép J=16.0 Hz giúp xác định cấu hình trans chúng Ngoài phổ cho thấy tín hiệu proton vòng thơm mũi đơn δH 6.83 (1H, s), nhóm methylene –CH2-O- mũi đơn δH 4.48 (2H, s), tín hiệu nhóm methyl gắn với nhóm carbonyl δH 2.64 (3H, s) hai tín hiệu nhóm methyl gắn với vòng thơm δH 2.29 (3H, s) δH 2.25 (3H, s) Phổ 13C-NMR cho thấy hợp chất T3 cho thấy diện nhóm carbonyl (δC 195.0), nhóm carboxyl (δC 171.0), hai carbon olefin (δC 132.0 132.4), nhóm methylene (δC 53.2), ba nhóm methyl (δC 15.3, 21.1, 28.8) carbon tứ cấp khác Bên cạnh đó, phân tích độ dịch chuyển hóa học hai proton nhóm olefin mũi đôi δH 8.14 δH 7.38, chứng tỏ chúng phải có cộng hưởng với nhóm C=O lân cận (–CH=CH-C(O)-) So sánh liệu phổ hợp chất T3 với parmosidone F cô lập trước đó[23], nhận thấy hợp chất T3 có tương đồng nhân thơm A có khác biệt nhóm nhân thơm B Điều thể bảng so sánh số liệu phổ NMR (Bảng 3.1) Tương tự, so sánh liệu phổ hợp chất T3 với parmosidone A cô lập trước đó[14], nhận thấy liệu phổ hợp chất T3 có tương đồng nhân thơm B có khác biệt nhóm C-3 nhân thơm A Điều thể bảng so sánh số liệu phổ NMR (Bảng 3.1) 17 Trên phổ HMBC, nhận thấy nhân thơm B, nhóm methyl CH3-9’ tương quan với carbon δC 115.8 (C-1’), 132.1 (C-5’), 140.0 (C-6’) Proton H-8’ tương quan với carbon δC 162.3 (C-2’), 117.5 (C-3’), 143.5 (C-4’) Từ giúp xác định giúp xác định cấu trúc nhân thơm B hợp chất T3 Trên nhân thơm A, proton H-8 tương quan với carbon δC 163.5 (C-4) 195.0 (C-11), proton H-12 tương quan với carbon δ 195.0 (C-11) phổ HMBC giúp xác định liên kết dây hydrocarbon C-3 Từ tất liệu trên, cấu trúc hợp chất T3 xác định hình 3.1 Đây hợp chất mới, đặt tên parmosidone G Hình 3.1 Cấu trúc hóa học số tương quan HMBC T3 3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất N3 Hợp chất N3 thu từ phân đoạn cao acetone loài địa y Parmotrema tsavoense chất bột vô định hình, màu trắng Phổ 1H 13C-NMR (phụ lục 3) Phổ HSQC HMBC (phụ lục 4) 18 Bảng 3.1 So sánh số liệu phổ NMR hợp chất parmosidone F, T3, parmosidone G N3 T3 Parmosidone F N 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 δH, J (Hz) 6.76 (s) 8.01 (d) 2.35 (s) 7.13 (d) 2.33 (s) 4.49 (s) 2.44 (s) δC 115.5 161.3 111.3 161.6 115.9 145.4 161.8 132.9 20.7 131.1 198.4 27.7 112.0 155.2 116.0 145.9 142.5 130.7 170.5 62.2 15.5 δH, J (Hz) 6.38 (s) 8.14 (d, 16) 2.29 (s) 7.38 (d, 16) 2.25 (s) 4.48 (s) 2.64 (s) N3 Parmosidone A δC 117.8 N.D 111.4 163.5 116.3 143.5 N.D 132.4 21.1 132.0 195.0 28.8 115.8 162.3 117.5 143.5 132.1 140.0 171.0 53.2 15.3 δH, J (Hz) 6.54 (s) 10.61 (s) 2.41 (s) 4.49 (s) 2.62 (s) δC 112.5 161.9 111.6 164.1 116.7 151.9 166.2 192.2 21.4 115.6 162.2 117.5 143.8 131.6 139.6 170.6 52.5 14.2 δH, J (Hz) 6.45 (s) 7.94 (d, 16.5) 2.48 (s) 7.22 (d, 16.5) 2.27 (s) Ba hợp chất parmosidone F, T3 parmosidone A đo dung môi DMSO-d6, hợp chất N3 đo dung môi acetone-d6 19 δC 103.3 165.0 107.5 161.0 111.6 142.1 172.2 133.5 23.6 129.3 197.9 28.3  Biện luận cấu trúc phổ Phổ 1H 13C NMR cho thấy diện carbon methine thơm (δH 6.45, δC 111.6), hai carbon olefine (δH 7.94, δC 133.5 C-8; δH 7.22, δC 129.3 C-10), hai nhóm methyl (δH 2.48, δC 23.6, C-9; δH 2.40, δC 28.3, C-12), nhóm methoxy (δH 3.96, δC 51.8), hai nhóm carbonyl (δC 172.2, 197.9), năm carbon tứ cấp khác Hai tín hiệu proton olefine H-8 H-10 ghép với số ghép J=16, chứng tỏ chúng ghép trans với nhau, đồng thời phân tích độ chuyển dịch hóa học chúng, nhận thấy chúng có cộng hưởng với nhóm carbonyl kế cận So sánh liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất N3 T3, nhận thấy hợp chất N3 có tương đồng nhân thơm A, đồng thời tín hiệu nhân thơm B bị đi, giúp xác định N3 hợp chất đơn vòng có cấu trúc tương tự với nhân thơm A hợp chất T3 (Bảng 3.1) Ngoài ra, phổ HMBC, nhận thấy có tương quan proton H-8 với C-2 (δC 165.0) C-4 (δC 161.0), proton H-10 cho tương quan với C-3 (δC 107.5) khi, proton H-5 cho tương quan tới C-3 C-4 giúp xác định liên kết dây hydrocarbon C-3 Độ dịch chuyển hóa của nhóm hydroxyl kiềm nối xác định C-2 dựa tương quan HMBC 2-OH tới C-1 C-2 Proton 7-OCH3 cho tương quan với C-7 (δC 172.2), giúp xác định cấu trúc nhóm ester Các tương quan HMBC khác giúp xác định cấu trúc đầy đủ N3 Từ kiện trên, hợp chất N3 xác định methyl (E)-2,4-dihydroxy-6methyl-3-(3-oxobut-1-en-1-yl)benzoate Hình 3.2 Cấu trúc hóa học số tương quan HMBC N3 20 CHƯƠNG KÊT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Từ mẫu địa y Parmotrema tsavoense (Krog & Swinscow) Krog & Swinscow thu hái đá núi Tà Cú, tỉnh Bình Thuận cô lập hai hợp chất T3 N3 Bằng phương pháp phổ nghiệm đại kết hợp với so sánh tài liệu tham khảo xác định cấu trúc hai hợp chất hữu gồm parmosidone G (T3) methyl (E)-2,4dihydroxy-6-methyl-3-(3-oxobut-1-en-1-yl)benzoate (N3) (Hình 4.1) Đây hai hợp chất lần đầu tìm thấy Parmosidone G Methyl (E)-2,4-dihydroxy-6-methyl-3-(3-oxobut-1-en-1-yl)benzoate Hình 4.1 Cấu trúc hai hợp chất cô lập 4.2 ĐỀ XUẤT Vì điều kiện thời gian vật chất không cho phép, nên phạm vi đề tài này, khảo sát phân đoạn cao acetone Trong thời gian tới, có điều kiện tiến hành khảo sát phân đoạn cao lại Đồng thời tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học loại cao hợp chất cô lập 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Boustie J., Grube M (2005), “Lichens - a promising source of bioactive secondary metabolites”, Plant Genetic Resources, 3, 273–287 [2] Boustie J., Tomashi S., Grube M (2010), “Bioactive lichen metabolites: alpine habitats as an untapped source”, Phytochemistry Review, 10(3), 287-307 [3] Brandão L F G., Alcantara G B., Matos M de F C., Bogo D., Freitas D dos S., Oyama N M., Honda N K (2013), “Cytotoxic evaluation of phenolic compounds from lichens against melanoma cells”, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 61(2), 176–183 [4] Bui Thi Lan Anh, Duong Thuc Huy (2015), Chemical constituents of the lichen Parmotrema tsavoense (Krog & Swincow) Krog & Swincow, Tạp chí Khoa học-Trường Đại học Sư phạm Tp Hồ Chí Minh, 78, 119125 [5] Bugni T S., Cynthia D A., Ann R P., Prem Rai, Chris M I., Louis R B (2009), “Biologically active components of a Papua New Guinea analgesic and anti-inflammatory lichen preparation”, Fitoterapia, 80 (5), 270-273 [6] David F., Elix J A., Binsamsudin M W (1990), “Two new aliphatic acids from the lichen Parmotrema praesorediosum (Nyl.) Hale”, Australian Journal of Chemistry, 43, 1297–1300 [7] Duong Thuc Huy, Huynh Bui Linh Chi, Ha Xuan Phong, Ton That Quang, Nguyen Kim Phi Phung (2011), “Some phenolic compounds of the lichen Parmotrema planatilobatum (Hale) Hale (Parmeliaceae)”, Journal of Science and Technology Development, 14(6), 5–10 [8] Duong Thuc Huy, Huynh Bui Linh Chi, Ha Xuan Phong, Tuong Lam Truong, Ton That Quang, Joel Boustie, Nguyen Kim Phi Phung (2012), “New diphenyl ether from lichen Parmotrema planatilobatum (Hale) Hale (Parmeliaceae)”, Vietnamese Journal of Chemistry, 50(4A), 199-202 [9] Fazio A T., María D B., Mónica T A., Laura B R., María L R., Lucia M., Armin H., Elfie Stocker W., Marta S M (2009), “Culture studies on the mycobiont isolated from Parmotrema reticulatum (Taylor) Choisy: metabolite production under different conditions”, Mycol Progress, 8, 359-365 22 [10] Ha Xuan Phong (2012), Chemical constituents of lichen Parmotrema sancti- angelii collected in Vienam, A thesis for Master of Science, University of Science, National University-Ho Chi Minh City [11] Honda N K., Pavan F R., Coelho R G., Andrade Leite S R., Micheletti A C., Lopes T I B., Misutsu M Y., Beatriz A., Bruma R L., Leite C Q F (2010), “Antimycobacterial activity of lichen substances”, Phytomedicine, 1−5 [12] Huneck S., Yoshimura I (1997), Identification of lichen substances, Springer, Berlin, 155−311 [13] Huneck S (1999), “The significance of lichens and their metabolites”, Naturwissenschaften, 86, 559–570 [14] Huynh B L C., Duong T H., Do T M L., Pinnock G T., Pratt L M., Yamamoto S., Watarai H., Tanahashi T., Nguyen K P P (2015), “New γ-lactone carboxylic acids from the Lichen Parmotrema prasorediosum (Nyl.) Hale, Parmeliacea”, Records of Natural Products, 10(3), 332-340 [15] Huynh Bui Linh Chi (2014), Chemical constituents of lichen Parmotrema prasorediosum collected in Vienam, A thesis for Doctor of Philosophy, University of Science, National University -Ho Chi Minh City [16] Jayaprakasha G K., Rao L J (2000), “Phenolic constituents from the lichen Parmotrema stuppeum (Nyl.) Hale and their antioxidant activity”, Zeitschrift für Naturforschung [C], 55, 1018−1022 [17] Keogh M F (1977), “Malonprotocetraric acid from Parmotrema conformatum”, Phytochemistry, 16(7), 1102 [18] Kharel M K., Rai N P., Manandhar M D., Elix J A., Wardlan J H (2000), “Dehydrocollatolic acid, a new depsidone from the lichen Parmotrema nilgherrense”, Australian Journal of Chemistry, 53, 891−892 [19] Le Hoang Duy (2012), Chemical study of common lichens in the south of Vienam, A thesis for Doctor of Philosophy, Kobe Pharmaceutical University, 2-8 [20] Lopes T I B., Coelho R G., Yoshida N C and Honda N K (2008), “Radical- scavenging activity of orsellinates”, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 56, 1551−1554 23 [21] Micheletti A C., Beatriz A., Lima D P de, Honda N K (2009), “Chemical constituents of Parmotrema lichexanthonicum Eliasaro & Adler – Isolation, structure modification and evaluation of antibiotic and cytotoxic activities”, Química Nova, 32, 12−20 [22] Muller K (2001), “Pharmaceutically relevant metabolites from lichens”, Applied Microbiology and Biotechnology, 56, 9−16 [23] Ng T Q Như, Ng T T Hương (2017), “Cô lập số hợp chất phenolic từ cao acetone thô loài địa y Parmotrema tsavoense”, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Đại học Sư Phạm TP.HCM [24] Neeraj V., Behera B C., Parizadeh H., Bo S (2011), “Bactericidal activity of some lichen secondary compounds of Cladonia ochrochlora, Parmotrema nilgherrensis and Parmotrema sancti-angelii”, International Journal of Drug Development and Research, 3(3), 222−232 [25] O’Donovan D G., Robert G., Keogh M F (1980), “Structure of the β-orcinol depsidones, connorstictic acid and consalazinic acid”, Phytochemistry, 19, 2497−2499 [26] Sakurai A., Goto Y (1987), “Chemical studies on the lichen I The structure of isolecanoric acid, a new ortho-depside isolated from Parmelia tinctorum Despr.”, Bulletin of the Chemical Society of Japan, 60, 1917−1918 [27] S Morris Kupchan, Herbert L Kopperman (1975), “l-Usnic acid: Tumor inhibitor isolated from lichens”, Experientia, 31, 625-625 [28] Santos L C., Honda N K., Carlos I Z., Vilegas W (2004), “Intermediate reactive oxygen and nitrogen from macrophages induced by Brazilian lichens”, Fitoterapia, 75, 473−439 [29] Ramesh P., Shere E., Baig A (1994), “Chemical investigation of South Indian lichen: Parmelia praesorediosa (Nyl.) and Parmelia reticulate (Tayl.)”, Indian Journal of Heterocyclic Chemistry, 3(3), 211−212 [30] Yit Heng Choi (2008), Generic potential of lichen-forming fungi in polyketide biosynthesis, A thesis for Doctor of Philosophy, RMIT University, 10-15 24 PHỤ LỤC 25 T3-DMSO-1H 9’ 12 8’ 10 T3-DMSO-13C Phụ lục Phổ 1H 13C-NMR hợp chất T3 26 9’ T3-DMSO-HSQC 12 10 12 8’ 9’ 8’ 108 11 9’ T3-DMSO-HMBC 8’ 10 12 9’ 12 8’ 10 11 Phụ lục Phổ HSQC HMBC hợp chất T3 27 7-OCH3 12 2-OH 10 10 7-OCH3 12 Phụ lục Phổ 1H 13C-NMR hợp chất N3 28 7-OCH3 10 12 12 7-OCH3 10 7-OCH3 2-OH 10 Phụ lục Phổ HSQC HMBC hợp chất N3 29 12 ... đồ quy trình ly trích cô lập hợp chất cao acetone thô 16 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất T3 Hợp chất T3 thu từ phân đoạn cao acetone loài địa y Parmotrema tsavoense. .. loại địa y tự nhiên Lê Hoàng Duy (2012)[19] nghiên cứu nuôi c y thành công 10% khoảng 50 loài địa y l y từ Việt Nam Tuy đạt thành công mặt cô lập hợp chất hợp chất cô lập từ địa y nuôi c y khác... th y có mặt địa y nơi quen thuộc với phân bố phong phú đa dạng Ngay từ thời trung đại, nhiều người làm nghề y sử dụng loài địa y làm thuốc chữa bệnh Y học cổ truyền Trung Quốc sử dụng 71 loài địa