TÌM HIỂU QUY TRÌNH SẢN XUẤT PROTEASE TỪ VI SINH VẬT

Protease được sản xuất nhiều và sử dụng nhiều trong các lĩnh vực khác nhau. Có nhiều nguồn cung cấp protease khác nhau. Nguồn vi sinh vật được sử dụng nhiều nhất trong công nghiệp : Đa dạng chủng loại ; Năng suất lớn ; Phương pháp đơn giản, dễ thực hiện ; Thực hiện được ở quy mô công nghiệp.

TÌM HIỂU QUY TRÌNH SẢN XUẤT PROTEASE TỪ VI SINH VẬT Sinh viên thực hiện: Trần Viết Đoàn, Trần Thị Kim Dung, Bùi Bá Hân, Phạm Thị Hậu, Nguyên Thị Kim Hòa, Võ Trực Hoài, Ngô Thị Thanh Hương, Võ Quốc Hướng Nguyễn Thị Thu Hà Lớp: 11SHLT Giáo viên môn: ThS Ngô Thái Bích Vân Đà Nẵng, 11/2011 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Nội dung báo cáo • Mở đầu • Giới thiệu chung protease • Các ứng dụng protease • Quy trình sản xuất protease từ nấm mốc • Kết luận 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Mở đầu 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Mở đầu • Protease sản xuất nhiều sử dụng nhiều lĩnh vực khác • Có nhiều nguồn cung cấp protease khác • Nguồn vi sinh vật sử dụng nhiều công nghiệp :  Đa dạng chủng loại ;  Năng suất lớn ;  Phương pháp đơn giản, dễ thực ;  Thực quy mô công nghiệp 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Giới thiệu chung protease 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Chức Protease Protease Protease Protein Polypeptide Peptide Acid amine • Xúc tác trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit phân tử protein, polypeptit đến sản phẩm cuối acid amine • Ngoài ra, nhiều protease có khả thuỷ phân liên kết este vận chuyển acid amine 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Phân loại Hình Sơ đồ phân loại protease 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Nguồn thu nhận • Động vật  Tụy tạng (nguồn lâu đời) : pepsin, tripsin  Dạ dày bê : renin… • Thực vật  Bromelian : chồi, vỏ dứa  Papain : nhựa lá, thân, đu đủ  Ficin : nhựa cọ • Vi sinh vật  Vi khuẩn : Bacillus subtilis…  Xạ khuẩn : Streptomyces grieus…  Nấm mốc : Aspergillus oryzae… 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Nguồn thu nhận Lợi ích nguồn vi sinh vật • Chủ động nguồn nguyên liệu; giống VSV ; • Chu trình sinh trưởng ngắn ; • Điều khiển sinh tổng hợp enzyme dễ dàng • Quy trình đơn giản, tự động hóa ; • Giá thành tương đối thấp ; • Hoạt tính sinh học cao • Tuy nhiên cần ý vấn đề gây độc 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Nguồn thu nhận Hình Sơ đồ thu nhận protease từ nguồn khác 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 10 Thu nhận protease Sắc ký trao đổi ion 06/17/17 Sắc ký lọc gel Protease từ vi sinh vật Sắc ký lực 36 Thu nhận protease • Ly tâm sau ly tâm Trước ly tâm Dịch môi trường nuôi cấy Cặn tủa 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 37 Thu nhận protease • Điện di M 06/17/17 P1 P2 P3 P4 Protease từ vi sinh vật 38 Thu nhận protease pH điểm đẳng điện ABC  pH12 pH pH điểm đẳng điện 06/17/17  Giảm kích thước Giảm pI Protease từ vi sinh vật 39 Thiết bị a Nồi hấp khử trung môi trường • Tiêu diệt toàn vi sinh vật tạp nhiễm ; • Chuyển hóa chất phức tạp ; • Điều kiện kỹ thuật ;  Thời gian : 45-60 phút ;  Áp suất : 1atm ;  Nhiệt độ : 118-125oC 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 40 Thiết bị b Máy nghiền búa • Thu nhận protease nội bào Hình Máy (thiết bị) nghiền búa 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 41 Thiết bị c Máy trích ly • Thu nhận protease nội bào • Thông số kỹ thuât:  Thời gian : 40-60 phút  Nhiệt độ : 25oC Hình Máy (thiết bị) trích ly kiểu vít tải 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 42 Thiết bị d Thiết bị lọc • Loại bỏ thành phần không cần thiết Hình Sơ đồ thiết bị lọc chân không thùng quay tác động liên tục 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 43 Thiết bị đ Thiết bị sấy phun • Thu nhận protease dạng tinh thể Hình Thiết bị sấy phun 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 44 Xác định hoạt tính protease a Phương pháp anson cải tiến • Dựa vào thủy phân protease enzyme • Enzyme thừa tủa protein chưa được loại acid trichloracetide tủa • Định lượng sản phẩm tạo thành phản ứng màu với thuốc thử Foline b Phương pháp chuẩn độ Formol • Dựa vào tăng nhóm carbocyl hay amyl tự dịch thủy phân 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 45 Xác định hoạt tính protease a Phương pháp anson cải tiến - Cơ chất - Enzyme - Trichloracetide acid - Na2CO3 - Forline - 750 nm - Cơ chất  - Trichloracetide acid - Enzyme - Na2CO3 Đồ thị chuẩn protease 06/17/17 - Forline - 750 nm Protease từ vi sinh vật 46 Xác định hoạt tính protease b Phương pháp chuẩn độ Formol - Cơ chất - Enzyme - Hỗn hợp fornol - NaOH chuẩn độ - Màu xanh da trời - Cơ chất - Hỗn hợp fornol - Enzyme - NaOH chuẩn độ - Màu xanh da trời 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 47 Kết luận 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 48 Kết luận • Xác định số chủng VSV ; • Các cách phân loại protease ; • Các phương pháp thu nhận, phân nuôi cấy protease lập,  Nước dung môi thích hợp ;  Ethanol 75% để tủa ;  Chiết rút tủa nhiệt độ 3-5oC ; • Ý nghĩa vai trò protease 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 49 Cảm ơn Sự theo dõi cô bạn ! Thực Nhóm 3_11SHLT Đà Nẵng, 11/2011 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 50 ... chung protease • Các ứng dụng protease • Quy trình sản xuất protease từ nấm mốc • Kết luận 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Mở đầu 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Mở đầu • Protease sản xuất nhiều... • Sản xuất keo động vật, chất tẩy rửa để tẩy chất bẩn có chất protein mỹ phẩm 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 18 Quy trình sản xuất protease từ nấm mốc 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 19 Quy. .. 06/17/17 Protease từ vi sinh vật Nguồn thu nhận Hình Sơ đồ thu nhận protease từ nguồn khác 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 10 Ứng dụng protease 06/17/17 Protease từ vi sinh vật 11 Ứng dụng protease