Tối ưu hóa quá trình thủy phân Protein trên đầu tôm thẻ chân trắng bằng Enzyme alcalase và đặc trưng tính chất của dịch thủy phân

1 LỜI CẢM ƠN Khoá luận tốt nghiệp bước cuối đánh dấu trường thành cùa sinh viên giàng đường Đại học đè đóng góp gi học cho phát triển đất nước Trước hết xin gửi lời cảm ơn sâu sấc đến Th.s Nguyền Thị Kim Cúc Th.s Ngô Thị Hoài Dương tận tình hướng dần, dạy truyền đạt kinh nghiệm giúp đờ em suốt thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô giáo Viện Công Nghệ sinh học & Môi trường Thay cô dà tận tinh giúp dở, giảng dạy truyền đạt kiến thức quý báu dê cm cỏ dược tàng kiến thức vừng Con xin gửi tới bò mẹ biết ơn sâu sắc Bô mẹ bên cạnh động viên, ùng hộ yêu thương Con cố găng sống tốt, xứng đáng với niềm tin yêu cũa Con xin cám ơn bố mẹ! Cuôi cùng, xin gửi lời cam ơn đến chị Nguyền Thị Minh Nhật - cán quàn lý Phòng thí nghiệm Viện CNSIỈ&MT bạn lớp 50CNS1I đà quan tâm nhiệt tình giúp đờ đề luận văn hoàn thành Một lần xin chân thành cảm ơn Chúc tất người sức khóc thành công! Nha Trang, tháng năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thị Chính ii MỤC LỤC T rang LỜI CẢM Ơ N ỉ M ỤC L Ụ C ii DANH M ỤC B Ả N G V DANH M ỤC H ỈN H vi DANH M ỤC CÁC T Ừ V IẾT T Ả T vii M Ỏ Đ À U .1 C H Ư Ơ N G I: TỎNG Q U A N 1.1 Tổng quan phế liệu t ô m 1.1.1 Phế liệu tôm clìế biến thủy sản 1.1.2 Thành phần hóa hục phế liệu tôm 1.1.3 Enzyme protease cùa tôm [6] 1.1.4 Các phương pháp thu nhận protein từ phế liệu tô m 1.1.5 Các nghiên cứu việc thu hoi protein băng enzym e 1.2 Tổng quan chất chống oxi h ó a 10 1.2.1 Khái quát chung gốc tự chất chống oxi hóa 10 1.2.1 ỉ Gốc tự do, oxy hoá 10 1.2 ỉ.2 Chat chổng oxi hóa 11 1.2.2 Các phương pháp xác định hoạt tính chống oxi h ó a .12 1.2.2.1 Cúc phương pháp HA T 12 ỉ 2.2.2 Các phương pháp E T 13 1.2.3 Tinh hình nghiên cứu khà chông oxi hóa từ phế liệu thủy sân 14 1.2.4 ứ n g dụng cua chất chống oxi hóa thực phẩm 15 1.3 Tống quan enzym e protease 15 1.3.1 Phân loại đặc điềm loại enzyme protease 15 Ill 1.3.2 Các yếu tổ ảnh hướng đến trình thủy phân 18 1.3.3 ứ n g dụng cùa enzyme protease 20 1.4 Tổng quan enzyme A lcalase 21 C H Ư Ơ N G II: ĐÓI TƯ ỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NG H IÊN c ứ u 22 2.1 Đối tượng nghiên c ứ u 22 2.1.1 Nguyên liệu đẩu tôm 22 2.1.2 Hóa chất 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu xử lý số liệ u 22 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 ỉ Phương pháp bố trí thi nghiệm 22 2.2.1.2 Phương pháp phân tích chi tiê u 23 2.2.2 Phương pháp xứ lí số liệu .27 2.3 Bố trí thí n g h iệm .27 2.3.1 Quy trình nghiên cứu ảnh hường cua việc xừ lí nhiệt nguyên liệu trước thùy phân 27 2.3.2 Đánh giá ảnh hường cùa yếu to thủy phân .29 2.3.3 Tối ưu hóa trình thùy phân protein đầu tôm enzyme Alcalase 33 C H Ư Ơ N G III: KẾT QUẢ N G H IÊN cú u VÀ TH ẢO L U Ậ N 35 3.1 Ảnh hường xứ lí nhiệt trước thúy phân bố sung enzym e alcalase đến hàm lưọng protein hòa tan dịch thủy phân 35 3.2 Ảnh hưóng xử lí nhiệt trước thủy phân đến khả nãng chống oxi hóa dịch thủy ph ân 36 3.3 Ảnh hưởng yếu tố dến hàm lượng protein hòa tan dịch thủy phân protein đầu tô m 37 3.4 Ảnh hưởng yếu tố đến khả chống oxi hóa cúa dịch thủy phân protein đầu tô m 41 IV 3.5 Ket qua tối ưu trình thiiy phân để thu dịch thuý phân có kha khử gốc tự D D PH 45 3.6 Dặc trưng tính chất dịch thúy p h â n 48 K ÉT LUẬN VÀ KIỀN N G H Ị 50 TÀI LIỆU THAM K H Ả O PHỤ LỤC 51 V DANH M ỤC BẢNG Bảng I I Thành phần hóa học ban cùa phế liệu tôm thẻ chân trắng .4 Bàng 2.1 Thể tích dung dịch hóa chất cho vào ống nghiệm 25 Bảng 2.2 Thế tích cùa dung dịch hóa chất cho vào ống nghiệm 26 Bảng 2.3 Ma trận thí nghiệm đánh giá ảnh hường việc xir lý nhiệt ban dâu 29 Bảng 2.4 Thiết kế mức thực nghiệm cùa tham số quy trình xác định ảnh hường cùa yếu tố tới trinh thúy phân 31 Bang 2.5 Mô hình thí nghiệm xác định yếu tố ảnh hường tới trình thủy phân 31 Bảng 2.6 Thiết kế mức thực nghiệm cua tham số tối ưu theo phương pháp Box-Bchnken 34 Bảng 2.7 M ô hình thí nghiệm tối ưu theo phương pháp B ox-B ehnken 34 Bàng 3.3 Ket quà phân tích mức độ ảnh hương cùa yếu tố đến hàm lượng protein hòa tan cua dịch thủy phân protein đàu tôm phần mềm D X .38 Bàng 3.4 Kết quà phân tích tương tác yếu tố đến khả chống oxi hóa cua dịch thủy phân protein đầu tôm 41 Báng 3.5 Kct nghiên cứu tối ưu theo mô hình B ox-B chnken 45 Bảng 3.6 Kct phân tích tương thích cùa mô hình bậc hai hàm lượng protein hòa tan 46 Bảng 3.7 Ket phân tích tương thích cùa mô hình bậc hai hàm lượng Đ D PH bị khử .46 Báng 3.8 Một số chi tiêu phàn tích cùa dịch thủy phân protein từ phế liệu đầu tôm 48 Bảng 3.9 Thành phần acid amin dịch thủy phân protein từ phố liệu đầu tôm bang enzyme A lcalase .49 VI DANH M Ụ C HÌNH Hình ì ỉ Cơ chê hoai động chát chông oxi hỏa [22] 11 Hình 1.3 Mỏ hình enzyme Protease thủy phân phân từ Protein lổ Hình 1.4 Phân loại enzyme protease [8] 16 Hình 2.1 S đồ hố trí trí thí nghiệm tỏng quát 23 Hình 2.3 Sự hắt màu cùa phàn ứng Biuret 24 Hình 2.5 Quy trình nghiên cửu anh hường x lý nhiệt trước thủy phân 27 Hình 2.6 Quy trình xem xét ánh hưởng yếu to thủy phân 30 Hình 2.7 Quy trình thi nghiệm toi u 33 Hình 3.2 Anh hưởng cua x ứ li nhiệt han đầu đên hàm lượng DDPH bị khử 36 Hình 3.3 Kêt phân tích ành hưởng cua yếu tó đến hàm lượng protein hòa tan cùa dịch thúy phân protein dâu tôm dô thị Half-Normal 38 llình 3.4 Phàn tích ảnh hương thời gian đèn hàm lượng protein hỏa tan phần mềm DX8 .39 Hình 3.5 Phân tích anh hướng cùa nhiệt độ đên hàm lượng protein hòa tan phần mem DX8 40 Hình 3.6 Ket phân tích Half-Normal đánh giá ảnh hưởng yếu to đến chong oxi hóa cùa dịch thủy phân protein đầu tôm phần mem DX8 41 Hình Phân ảnh hướng cùa thời gian đến hoạt tỉnh chống oxi hỏa cùa dịch thùy phân phần mem D X8 42 Hình 3.8 Kêt quà phàn tích ảnh hướng nhiệt dộ đên hoạt tinh chống oxi hóa dịch thủy phân phan mem D X 43 Hình 3.9 Kêt quà phân tích ảnh hường nông độ enzyme đên hoạt tính chông oxi hóa cùa dịch thủy phân phẩn mêm D X 44 Hình 3.10 Bê mặt đáp ímg tói UU trình thủy phân 47 vii D A N H M U C C A C T U VI E T T A T DDPH : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl HAT: Hydrogen Atom Transfer ET: Electron Transfer A A PH : 2,2'-Azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride M Ở DÀU Việt Nam có bờ biển dài khoảng 3.200km 236.972 mặt nước nuôi trồng thủy sản đà tạo tiền đề cho ngành chế biến thủy sản phát triển mạnh mẽ Hiện nay, chế biên thủy sản đem lại lợi nhuận cao đóng góp ngân sách cho nhà nước mà giãi công ăn việc làm cho hàng nghìn lao động Theo Hiệp Hội Chế biến Xuất khấu Thủy sản Việt Nam (V A SEP), tháng đầu năm 2011, nước đà xuất 10.872 tôm, trị giá 971.109 triệu USD, tâng 16,9% khối lượng 35,2% giá trị so với kì năm 2010 nhóm hàng cỏ mức tăng trường cao nhóm hàng thũy sàn xuất khâu chũ lực cùa Việt Nam Di đôi với việc tăng sản lượng tôm xuất khấu lượng phế liệu tôm thải tăng lên Tuy nhiên, việc khai thác sản phẩm có giá trị sinh học từ protein đầu tôm chưa đầu tư nghicn cứu nhiều nước ta, protein chù yếu chi tận thu dạng sản phâm phụ cua trình sản xuất chitin đe làm thức ăn gia súc Điều không nhùng gây làng phí tài nguyên mà ánh hướng lớn đến môi trường Min - Soo Heu cộng (2003); Seymour & Li (1996) đà dịch thủy phân protein từ phế liệu đau tôm cỏ chửa thành phần acid amin cao có giá trị mặt sinh học Vì vậy, việc nghiên cứu tối ưu trình thu hồi sản phấm có hoạt tính sinh học từ protein dầu tôm cần thiết, không nhừng vừa nâng cao hiệu quà sử dụng tài nguycn mà góp phẩn khuyến khích tiến công nghệ sàn xuất chitin Việt Nam theo hướng thân thiện với môi trường Xuất phát từ nhừng vấn dề đề tài “T ối ưu trình thuỷ phân protein trẽn dầu tôm thé chân trắng enzym e A lcalase dặc trưng tính chất dịch thuý phân” thực nhằm xác định chế độ thu hồi đánh giá hoạt tính sinh học dịch thu tlìùy phàn đầu tôm bang enzym e A lcalase, cnzvmc thường dùng đê thúy phân đầu tôm nay, từ mớ hướng ứng dụng sàn phẩm thủy phàn vào thực phẩm thực phẩm chức Nội dung đc tài: > Đánh giá ảnh hường việc xử lý nhiệt nguyên liệu trước thủy phân > Đánh giá ảnh hưởng cùa yếu tố đến hàm lượng protein hòa tan khả chống oxi hóa dịch thủy phân đâu tôm > Tối ưu trinh thuỷ phân protein băng enzyme Alcalase dê thu dịch có hoạt tính chống oxi hóa cao dầu tôm thè chân tráng > Đánh giá giá trị dinh dường giá trị sinh học cua dịch thuý phân C H Ư Ơ N G I: T Ố N G Q U A N 1.1 T ồng quan phế liệu tôm / 1.1 Phế liệu tôm chế hiến thủy sán Phế liệu tôm chù yếu đầu, vỏ đuôi tôm, có phần thịt tôm lột vo sai quy cách tôm biến màu Tùv thuộc vào loài, sản phắm chế biến khác mà lượng phế liệu tôm thu khác Chang hạn, tôm xanh Macrobrachium rosenbergiiy đầu tôm chiếm tới 60% trọng lượng tôm Đau tôm sú Penaeus monodon chiếm tới 40% trọng lượng tôm Đ ôi với tôm thè, lượng phế liệu đầu tôm chiếm khoảng 28% Lượng phế liệu giảm cách cài tiến thiết bị công nghệ V iệc tiêu thụ lượng lứn tôm nguyên liệu cùa nhà máy chế biến thủy sản đà thải lượng lớn phế liệu, yếu đầu tôm vỏ tôm Các loại phế liệu thai trực tiếp môi trường gây ô nhiễm môi trường nghicm trọng đem xư lí chất thai chi phí lớn Ngày nay, đă có nhiều hướng nghiên cứu sư dụng phế liệu tôm đố sản xuất chế phấm có giá trị quan trọng chitin-chitosan, Asthaxanthin / 1.2 Thành phần hỏa học p h ế liệu tôm Trong phế liệu tôm có chứa thành phần quan trọng có giá trị protein, chitin, canxi cacbonate T ý lệ giìra thành phần không ổn định, chúng thay đôi theo giống, loài, đặc điếm sinh thái, mùa vụ Thành phần hoá học bàn phé liệu tôm thè chân trắng nghiên cứu bời Trang Sĩ Trung (2009) thề báng 1.1 48 So sánh với két qua Hoàng Thị Nhạn (2011) thủy phân đẩu tôm 55°c, nhiệt độ tối ưu thấp (52,26°C) Tuy nhiên, thời gian thủy phân 3,8 phù hợp với nghiên cửu cùa Hoàng Thị Nhạn (2011): khoảng thời gian từ 4giừ khả khử gốc tự DDPH tăng mạnh sau giảm dần, mẫu thủy phân cỏ khả chống oxi hóa cao Satya s Dey & Krushna Chandra Dora (2011) nghiên cứu thủy phân thu hoi protein từ đâu vó tôm sú Penaeus monodon băng loại enzym e Alcalase, Neutrase, Protamex, Flavourzyme cho thấy Alcalase có tác dụng tốt Chế dộ tối ưu đề xuất thủy phân nhiệt độ 59,37°c, pH 8,25, tỳ lộ enzym e/ chất 1,84%, thời gian 84,42 phút N hiệt độ thủy phân cao so với nhiệt độ 52,26°C’ ti lộ enzyme /cơ chất bô sung cao Điều có the giải thích nghiên cứu Satya s Dey & Krushna Chandra Dora thúy phân đối tượng đầu vò cùa tôm sú khác với chế độ nghiên cứu chi sử dụng đối tượng sử dụng nghiên cửu dâu tôm thè chân trang N goài ra, thành phân cùa phê liệu tôm khác theo vị trí địa lý, mùa vụ sinh trưởng, điều kiện môi trường thủy ph ân nên kết dây có khác 3.6 Đặc trưng tính chất cua dịch thiíy phân Bảng 3.6 Một số chĩ tiêu phân tích dịch thủy phân protein từ phế liệu dầu tôm C hí tiêu H àm lượng Hàm lượng DDPH bị khử 0,292 mM /g Hàm lượng protein hòa tan 18,64 mg/g Protein tổng số 8,35 g/1 Acid amin tổng số 7,06g/l 49 Báng 3.7 T hành phần acid am in cua dịch thúy phân protein từ phế liệu đằu tôm enzym e A lcalase STT A cid a H àm lư ợng (% ) T ryptophan 0,34 Lysine 7,62 Histidine 1,74 Arginine 2,01 Aspartic acid 7,83 Threonine 2,11 Serine 1,82 Glutamic acid 10,5 Pro line 6,84 10 Glycine 6,07 11 Alanine 7,22 12 Cystine 1,16 13 Valine 5,04 14 Methionine 2,27 15 Isoleucine 16 Leucine 8,11 17 Tyrosine 1,04 18 Phenylalanine 3,09 19 Hydroprolinc ND 20 Glutamine ND Qua báng 3.9 ta thấy dịch thủy phàn thu dược từ trình thúy phân protein từ phế liệu đầu tôm enzyme A lcaỉasc chứa tone acid amin cao (7,0óg/l) Đặc biệt acid amin thiết yếu Valine, Lysine, Leucine, Alanine, Glycine tương đối cao có giá trị dinh dường Ngoài ra, dịch thủy phân có chống oxi hóa cao (hàm lượng DDPH bị khử 0,292 mM/g) 50 K É T L U Ậ N V À K IÉ N N G H Ị Kết luận Không cần thiết phải xử lý nhiệt trước thủy phân nhàm tận dụng enzyme có sằn đẩu tôm tiết kiệm enzyme Alcalase bô sung vào Quá trình thùy phân protein đầu tôm sử dụng enzyme Alcalase trinh phức tạp với anh hường cua nhiều yêu tố, dặc biệt yếu tô thời gian nhiệt độ Điều kiện tối ưu cho trình thủy phân phế liệu đầu tôm thẻ chân trắng có hoạt tính chống oxi hóa enzyme Alcalase: o - Tỷ lệ enzyme so với chất: 0,22% - Nhiệt độ thủy phân: 52,26°c - Thời gian thủy phân: 3,8 - Tỳ lệ nước/ nguyền liệu: 1/1 - pH tự nhiên Kiến nghị Do điêu kiện thời gian không cho phép nên chưa nghiên cứu thư nghiệm khả chống oxi hóa cùa dịch thủy phân protein phê liệu đâu tôm số đối tượng nhắt định Do vậy, cần nghiên cứu thư nghiệm chống oxi hóa cùa dịch thúy phân protein phế liệu tôm thực tế Tiếp tục nghiên cứu xác định chiều dài cua đoạn peptide có dịch thủy phân Dịch thủy phân protein từ phố liệu đầu tôm có giá trị sinh học giá trị dinh dường cao cần tiếp tục nghiên cửu để ứng dụng thực phẩm thực phẳm chức Phần lang cặn dịch thủy phân sau ly tâm chửa hàm lượng protein khác cao Do vậy, cần có nhừng biện pháp đê thu hôi hàm lượng protein bô sung vào thức ăn chăn nuôi Tiếp tục nghiên cứu đê tận dụng phần bã sau thúy phân để làm nguyên liệu cho sán xuât chitin-chitosan 51 T À I L IỆ U T H A M K H Ả O > Tài liệu tiếng Việt Phạm Thị Tràn Châu, Nguyền Văn Ngoạn, Phan Thị Hà, Nguyền Văn Lệ, Vũ Thanh Hoa (1993), Protease đâu tôm biên, Tạp chí thủy sản, số 5, tr 10-13 Nguyễn Lệ Hà (2009), Một số tinh chat enzyme ứng dụng tách chiết protease từ đầu tôm sú, Chuyên đề Tiến sĩ, Trường Đại học Nha Trang Dăng Thị Hicn(2008), nghiên cứu san xuất chi tin chỉtosan theo phương pháp sinh học luận văn thạc s ĩ kĩ thuật trường Dại học Nha Trang Đặng Văn Hợp, Đồ Minh Phụng, (1997) “Phân tích kiêm nghiệm san phẩm thúy sán ”, trường Đại học Nha Trang Nguyễn Văn Lệ (1996), Nghiên cứu sử dụng protease đau tôm chế biến thúy sàn, Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Ọuốc gia Hà N ội, Hà Nội Đồ Văn Ninh (2004), Luận văn tiến sT kĩ thuật Trường Đại học Nha Trang Nguyễn Hoàng Báo Trung (2011) "Khảo sát ánh hưởng cùa nhiệt dộ pH đen kha thủy phân protein hệ enzyme protease dịch chiêt đầu tôm thẻ chân trắng ” Dồ án tốt nghiệp Dại học Nha Trang Trang Sĩ Trung (2009), Đcình giá chat lượng sàn phàm hiệu quà môi tnrờng cùa qui trình sán xuất chit in cai tiên kêt hợp xử lí enzyme, Tạp chí khoa học công nghệ thủy sản số Nguyền Văn Truyền (2006), Nghiên cứu chiết xuất protease từ đầu tôm xanh Luận vân Thạc s ĩ kỳ thuật, Truông Đại học Thuy San, Nha Trang > Tài liệu tiếng Anh 10 B.Hallivvell, R.Aeschbacht, J.Loligert & 0.1 Aruoma The characterization o f antioxidants Fd Chem Tox, vol 33, No Pp 601 - 617 1995) 52 11 Dokc S.N., Ninjoor V (1989), “Characteristics o f an alkaline protease and exopeptiddasefrom sh imp (Pennaeus indicus) muscle ”, J.Food Sci.,Volume 52, N o.5,pp 517-526 12 Hui -C hun Wu, Hua-Ming Chen, Chyuan- Yuan Shiau Free aminoaeids and peptides as related to antioxidant properties in protein hydrolysates o f mackerel (Scomber Austriasicus) Food research International 36 (2003) 949-957 13 Huynh N.D Bao, Yoshihiro ochiai, Toshiaki Ohshima Antioxidative activities o f hydrophilic extracts prepared from the fruiting body and spent culture medium o f Flammulina velutipes Bioresource Technology 101 (2010) 6248-6255 14 Nandhsha Faithong, Soottawat Benjakul, Suttirug Phatcharat, Wanwisa Binsan Chemical composition and antioxidative activity o f Thai traditional fermented shrimp and krill products Food Chemistry, Volume 119, Issue 1, March 2010, Pages 133-140 15 Mahmoudreza Ovissipour, Ali Motamedzadcgan, Barbara Rasco, Abbas Esmaeili Mol la Optimization o f enzymatic hydrolysis o f visceral waste proteins o f beluga sturgeon Huso huso using Alcalase Int Aquat Res (2009) 1:31 -38 16 Oyaizu, M, Studies o f products o f browning reactions: antioxidative activities o f products o f browning reaction prepared from glucosamine Jpn J Nutr 1986, 44, 307-315 17 Jiang, S.T., Wang J.H, Cen S.S., (1991), “Purification and some properties o f calpain ¡¡ from tilapia muscle ”, J.Agri.Food.C'hem 18 Jiang, S.T, Moody, M.W and Chen, H.C, (1991), "Purification and characterization o f proteases from digestive tract o f grass shrimp (Penaeus monodon) ", J.Food 53 19 Thomas A.Seymour, Shiao Jing Li and Michael T.M oissey Characterization o f a natural antioxidant from Shrimp Shell Waste J.Agric Food Chem 1996.44.682-685 20 W Binsan, S Bcnjakul, W Visessanguan, S Roytrakul, M Tanaka, H Kishimura Antioxidative activity>o f Mungoong, an extract paste, from the céphalothorax o f white shrimp (Litopenaeus vannamei Food Chemistry (2008) Volume: 106, Issue: 1, Pages: 185-193 21 Wanwisa Binsan, Soottawat Benjakul, Roytrakul Munehiko Tanaka, Hideki Mungoong, an extract paste, from Wonnop Visessanguan, Sittiruk Kishimura Antioxidative activity> o f the céphalothorax o f white shrimp (Litopenaeus vannamei) Food chemistry 106 (2008) Pages 185-193 > Tài lieu Internet 22 www.amazing-glutathione.eom/what-arc-antioxidants.html - http://thuysanvietnam.com.vn/index.php/news/dctails/index/1780.let - http://www.rimf.org.vn/bantin/tapchi_newsdetail.asp?TapChiID=36&muctin_id =2&news_id=2555 - http://en.wikipedia.org/wiki/Antioxidant PHỤ LỤC Phụ lục Khá sát ành hướng cùa việc xử lý nhiệt trước thúy phân Bảng P l l Kết khả sát ảnh hưởng cua việc xử lý nhiệt trước thủy phân Hàm lượng Hàm lượng Mầu thí Std Block p rote in hòa DDPH bị khử tan (mg/g) (mM/g) nghiệm I Ngày M, 17,828±0,324 0,150 Ngày M, 17,977±0,014 0,143 Ngày M, 17,936±0,211 0,139 Ngày m2 19,031 ±0,070 0,215 Ngày m2 19,685±0,386 0,220 Ngày m2 19,070±0,376 0,204 Ngày m3 17,426±0,037 0,066 Ngày m3 17,685±0,011 0,069 Ngày m3 17,573±0,115 0,068 10 Ngày M* 18,610±0,064 0,099 11 Ngày NL» 18,707^0,357 0,104 12 Ngày M4 18,405±0,3 30 0,105 Bang PI.2 Ket phân tích thống kê änh hưỏng chế dộ xử lí han dầu Mean Standard t for Ho Error Coeff=0 Prob > Treatment Difference df vs -1.348602 0.131 -10.295