Cấu trúc mô của một số hệ cơ quan trên cá tra

Header Page of 126 PHẦN GIỚI THIỆU Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) vùng kinh tế trọng điểm nằm cực Nam đất nước Bên cạnh lúa gạo, ĐBSCL vùng nuôi trồng thủy sản lớn nước Với hệ thống sông ngòi chằn chịt, ĐBSCL nơi thuận lợi cho ngành nuôi trồng thủy sản phát triển, sản lượng thủy sản vùng đóng góp phần đáng kể vào sản lượng thủy sản xuất nước, góp phần tăng thu nhập cho người dân Sản lượng thủy sản ĐBSCL chiếm khoảng 50%, diện tích nuôi trồng khoảng 60% giá trị xuất thủy sản chiếm đến 51% nước (Dương Nhựt Long, 2003) Trung Chính phong trào nuôi trồng thủy sản thu hút người dân, với sách nhà nước chuyển đổi cấu ngành nghề loại bỏ đất nông nghiệp lạc hậu để chuyển sang nuôi thủy sản mô hình nuôi: nuôi thâm canh, bán thâm canh, nuôi ao mươn vườn, nuôi kết hợp cá-lúa…đang phát triển rầm rộ Bên cạnh tôm Sú cá Tra mặt hàng xuất quan trọng vùng, nuôi phổ biến Cần Thơ, An Giang, Đồng Tháp…và xuất sang nước như: EU, Nga, ASEAN, Ucraina, tâmMỹ, Học liệu ĐH CầnsảnThơ Tàibasa liệu học nghiên Trung Quốc…Tổng lượng@ cá tra, xuất khẩutập Việt Nam năm cứu 2007 đạt 383.2 nghìn với kim ngạch đạt 974.12 triệu USD, tăng 31% lượng 26.07% so với năm 2006 (http://www.fistenet.gov.vn/details.asp?Object=26125735&News_ID=263852 08) Tuy nhiên nuôi cá tra thâm canh thường nuôi với mật độ dày sử dụng thức ăn nhiều nên lâu ngày dẫn đến nguồn nước bị ô nhiễm, mầm bệnh dễ có hội công tình trạng dịch bệnh xuất ngày nhiều khó điều trị Để điều trị có hiệu cao phải chuẩn đoán bệnh, phương pháp mô học có vai trò quan trọng khâu Nếu dựa vào hình thái tổn thương bên mà kiện khác có liên quan đến cá tôm bệnh thường có kết luận sai lầm hình thái tổn thương vài bệnh giống gây nhầm lẫn chẩn đoán (Đặng Thị Hoàng Oanh, 2007) Hiện có nhiều nghiên cứu mô bệnh học cá tra như: Bước đầu nghiên cứu mô bệnh học bệnh đốm trắng nội tạng cá tra Nguyễn Quốc Thịnh (2002); nghiên cứu cấu trúc mô biến động số lượng hồng cầu cá tra bị bệnh vàng da Phan Thị Hừng (2004); khảo sát mô học cá tra bị bệnh mủ gan điều kiện gây cảm nhiễm Trần Thị Ngọc Hân Footer Page of 126 Header Page of 126 (2006)…nhưng chưa có nghiên cứu nghiên cứu hoàn thiện cấu trúc mô cá tra khỏe làm sở cho nghiên cứu mô bệnh học Do đề tài: “Cấu trúc mô số hệ quan cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)” thực nhằm: Mục tiêu: Xác định đặc điểm, cấu trúc mô hệ quan cá tra khỏe từ làm thành sưu tập hình ảnh mô học làm sở cho việc chẩn đoán, phát tác nhân gây bệnh thông qua việc so sánh mô cá tra bệnh với mô cá tra khỏe Nội dung: Dùng phương pháp mô học để xác định đặc điểm, cấu trúc hệ quan như: da, cơ, dày, ruột, gan, mang, bóng hơi, tim, thận, tỳ tạng Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page of 126 Header Page of 126 PHẦN LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học cá tra Trung Cá tra có tên khoa học Pangasianodon hypophthalmus trước có tên gọi Pangasius micronemus, cá tra phân bố lưu vực sông Mêkông, có mặt nước Lào, Việt Nam, Campuchia Thái Lan Trước chưa có sinh sản nhân tạo, cá bột cá tra giống vớt sông Tiền, sông Hậu cá trưởng thành thấy ao nuôi, gặp điều kiện tự nhiên địa phận Việt Nam, cá có tập tính di cư ngược dòng sông Mê-kông để sinh sống tìm nơi sinh sản tự nhiên Về đặc điểm hình thái cá tra thuộc dạng cá da trơn, nhẵn, vẩy Cá tra có đầu lớn, thân thon hẹp dần phía đuôi, vây lưng cao có gai cứng có cưa, vây ngực có ngạnh có độc tố, cá tra thường có màu xám đen lưng phần bụng màu trắng bạc Cá tra loài sống đáy, ăn tạp Trong tự nhiên, cá ăn mùn bã hữu cơ, rễ thủy sinh, rau quả, tôm tép, cua, côn trùng, ốc cá Cá tra không đẻ ao nuôi bãi đẻ tự nhiên Việt Nam, cá tra đẻ Cam-pu-chia, cá bột theo dòng nước Việt Nam Cá tra có quan hô hấp phụ ruột cá sống điều kiện ao tù nước đọng, nhiều chất hữu cơ, tâmnênHọc liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu oxy hoà tan thấp nuôi với mật độ cao Cá tra có tốc độ tăng trưởng tương đối nhanh, sau tháng nuôi cá đạt trọng lượng 1-1,2 kg/con Cá nuôi ao đạt trọng lượng 25 kg cá 10 năm tuổi (Dương Nhựt Long, 2003) 2.2 Lịch sử mô học Chúng ta biết, bệnh cá xuất ngày nhiều khó điều trị Vì cá sống môi trường nước nên tốc độ lây lan nhanh làm cho cá chết hàng loạt gây thiệt hại nghiêm trọng kinh tế cho người dân Dó công tác chữa trị kịp thời điều cần thiết Để điều trị với chi phí thấp hiệu cao việc quan trọng phải chẩn đoán bệnh Phương pháp mô học phương pháp có ý nghĩa đặc biệt quan trọng khâu Người xem cha đẻ ngành tế bào học mô học nhà phân loại học đồng thời nhà giải phẩu học người pháp Xanvier Bichat Ông xác định mô đơn vị sống có 21 loại mô thể (Trần Thị Ngọc Hân, 2006) Theo Đặng Thị Hoàng Oanh (2007) mô bệnh học phương pháp xác định tổn thương mô tế bào dựa thủ thuật nhuộm tế bào quan sát Footer Page of 126 Header Page of 126 kính hiển vi Phương pháp cho phép người phân tích kết luận tính chất vùng bị tổn thương Theo Roberts (1995) phân tích mô bệnh học nghiên cứu thay đổi hiển vi diễn mô thể suốt trình bệnh Những thay đổi thường đặc điểm đặc trưng bệnh cho phép chẩn đoán xác bệnh Việc nghiên cứu tế bào học mô học tiến hành từ sớm từ cuối kỷ XII đến kỷ XIX tế bào học mô học xem môn khoa học Sau học thuyết tế bào đời năm 1839, đặc biệt lĩnh vực mô học mô tả đời thành phần cấu tạo khác quan mô nghiên cứu cẩn thận, tỉ mỉ Thành tựu lớn giai đoạn chế tạo máy cắt lát mỏng (microtome) cho phép nghiên cứu sâu cấu trúc vi thể tế bào mô (Nguyễn Quốc Thịnh, 2002) Trung Ngoài theo Phạm Trần Nguyên Thảo (2003) lịch sử mô học kính hiển vi chế tạo Antoni Van Leuwenhoek (16321723) người Hà Lan đến cuối kỷ XVIII nhà khoa học người Anh Robert Hooke (1635-1703) xác định tế bào đơn vị cấu tạo thể sinh vật Vào cuối kỷ XIX, Rudolf Virchow (1821-1902) nhà giải phẩu học người Đức khẳngliệu định: ĐH “ Bệnh tật làThơ tổn@ thương loạnhọc tế bào” Trên sở mà cứu tâmđãHọc Cần Tàirốiliệu tập vàcơnghiên người ta hiểu bệnh tật không tổn thương, rối loạn quan, nội tạng mà mức độ mô tế bào Mô học định nghĩa hệ thống tế bào chất gian bào có nguồn gốc, cấu tạo chức năng, chúng hình thành trình tiến hoá sinh học xuất thể đa bào trình biệt hoá (Phạm Trần Nguyên Thảo, 2003) Ở nước ta mô học trở thành môn khoa học quan trọng từ lâu đưa vào giảng dạy trường Đại học nước Và mô học nghiên cứu nhiều người, gia súc, gia cầm, thủy sản … 2.3 Ứng dụng mô bệnh học chẩn đoán bệnh thủy sản Young (1959), Johnson (1980) ứng dụng giải phẩu học mô học việc hệ thống bệnh thường gặp tôm nuôi Châu Mỹ, Châu (Lightner ctv, 1992); năm 1997 Wang, Tang Chen chứng minh diện vi rút đốm trắng tôm Giant tiger shrimp, Penaeus monodon, Kuruma shrimp, Penaeus japonicus việc quan sát tiêu mô học kính hiển vi quang học điện tử (trích dẫn Phạm Trần Nguyên Thảo, 2003) Footer Page of 126 Header Page of 126 Trong “Histopathology of walking catfish” Chinabut Limsuwan (1983) tác giả nghiên cứu mô học cá trê trắng (Clarias batrachus) bị nhiểm khuẩn Aeromonas hydrophyla Kết thấy cá bị nhiểm khuẩn Aeromonas hydrophyla gan, thận bị thoái hoá hoại tử; tỳ tạng bị sung huyết… Trung Nash ctv (1986) nghiên cứu “bệnh vi khuẩn có liên quan đến dịch bệnh cá chẽm (Lates calcarifer) cá bống mú (Epinephalus tauvina)” Nghiên cứu cho thấy bị vi khuẩn công có thay đổi như: lớp biểu bì da bị thoái hóa, vẩy bị mất, lớp bì trung tâm bó xuất huyết hoại tử dội, tế bào bị viêm, sưng, chứa đầy khuẩn lạc lớn gram âm Trên thận tỳ tạng xuất vùng mô tạo máu bị hoại tử hết tế bào máu trưởng thành, viêm cầu thận có xâm nhập lympho bào Gan, tuyến tụy xuất dịch viêm, hoại tử rãi rác trung tâm hoại tử Ở gan, thận tỳ tạng tuyến tụy có gia tăng trung tâm đại thực bào sắc tố Tắt nghẽn mạch máu tim xuất dịch viêm vách bóng Rukyani (1990a) nghiên cứu thay đổi mô bệnh học mang cá chép (Cyprius carpio) bị nhiểm thích bào tử trùng (Myxobolus) Nghiên cứu mô cho thấy mang cá bị túi thích bào tử trùng ký sinh nhiều phiến mang bị dính lại, sưng viêm, xung huyết hoại tử (trích dẫn Bùi Châu tâmTrúc Học ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Đan,liệu 2003) Angka (1990) nghiên cứu bệnh cá trê trắng (Clarias batrachus) bị nhiễm vi khuẩn Aeromonas hydrophyla Tác giả nghiên cứu mô tả đặc điểm bệnh lý, LD50 mô bệnh học Kết cho thấy cá bị nhiễm vi khuẩn Aeromonas hydrophyla thấy xuất vùng xuất huyết, hoại tử gan, thận, tỳ tạng quan sinh dục Tác giả cho nguyên nhân chất Cytoxin vi khuẩn tiết Sisi Hla Bu Leong Tak Seng (1997) nghiên cứu mô bệnh học cá bống mú bị bệnh “Sleepy Gouper Desease” điểm cá bệnh lấy mẫu cá khoẻ mẫu cá bệnh khảo sát quan: mang, tim, thận, tỳ tạng, não, da, dày ruột quan cố định, xữ lý nhuộm quan sát kính hiển vi quang học kết có quan có thay đổi cấu trúc hiển vi so sánh cá khoẻ cá bệnh gan, mang, tim, thận tỳ tạng (trích dẫn Nguyễn Quốc Thịnh, 2002) Nguyễn Quốc Thịnh (2002) nghiên cứu mô bệnh học bệnh đốm trắng nội tạng cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) Tác giả khảo sát mô bệnh học quan: gan, thận, tim, tỳ tạng, da cá khỏe lẫn cá bệnh kết cho thấy cá bị bệnh trắng gan quan bị huỷ hoại nhiều Footer Page of 126 Header Page of 126 gan, thận tỳ tạng mang cuối bị ảnh hưởng nhẹ tim Nguyên nhân làm cho cá chết gan, thận, tỳ tạng, mang bị hư hại dẫn đến chức quan Bùi Châu Trúc Đan (2003) nghiên cứu đặc điểm mô học bệnh phù mắt cá tra Tác giả nghiên cứu 10 quan gồm: gan, thận, tỳ tạng, tim, mang, ruột, dày, bóng hơi, mắt, da Kết đại thể đặc điểm đặc trưng bệnh là: hai mắt phù to, ổ mắt chứa đầy chất dịch màu trắng đục, xuất huyết thể, vi thể tổn thương chủ yếu sung huyết, xuất huyết Nguyên nhân làm cá chết thay đổi cấu trúc mô gan, thận, tỳ tạng với vùng hoại tử cấu trúc thay đổi tổn thương mắt dẫn đến rối loạn hoạt động sinh lý, sinh hóa thể Các quan khác bình thường Trần Hồng Ửng (2003) bước đầu xác định thay đổi tế bào bạch cầu mô tỳ tạng cá tra bị bệnh trắng gan Kết cho thấy cá tra bị bệnh trắng gan thành phần bạch cầu thay đổi, tế bào lymphocyte thấp so với cá khỏe, neutrophil monocyte tăng cao Cấu trúc tỳ tạng biến đổi thành phần tủy trắng nhiều tủy đỏ Trung “Nghiên cứu cấu trúc mô biến động số lượng hồng cầu cá tra bị vàng da” ĐH Phan ThịThơ Hừng @ (2004), giả khảotập sát cấu mô cứu tâmbệnh Học liệu Cần Tàitácliệu học vàtrúc nghiên quan: gan, thận, tỳ tạng Kết cá bị bệnh vàng da cấu trúc mô quan không thay đổi so với cá khỏe số lượng tế bào hồng cầu giảm 50% so với cá khỏe Nguyễn Quốc Thanh (2004) nghiên cứu ảnh hưởng Aflatoxin lên tốc độ tăng trưởng tỉ lệ sống cá tra cá basa Kết cho thấy cá bị nhiểm độc tố Aflatoxin cấu trúc gan, thận bị sung huyết, xuất huyết, nhân tế bào bị hoại tử… Phạm Thị Như Sang (2006) khảo sát mô học số quan cá tra nuôi ao bè thâm canh Tác giả phân tích mô học quan: gan, thận tỳ tạng Kết cho thấy quan có trùng bào tử sợi ký sinh Ngoài phát giun tròn mô gan cá Cùng thời gian này, Trần Thị Ngọc Hân (2006) khảo sát mô học cá tra bị bệnh mủ gan điều kiện gây cảm nhiễm Kết phân tích mô bệnh học quan: gan, thận, tỳ tạng, dày, bóng hơi, cơ, mang, tim, ruột cho thấy cá bị bệnh mũ gan thận tỳ tạng quan biến đổi đầu tiên, gan biến đổi chậm thận tỳ tạng Các quan tim dày, bóng hơi, ruột biến đổi Tung et al (1999) nghiên cứu mô học quan sát kính hiển vi điện tử tôm xanh bị bệnh vi rút Macrobrachium muscle virus Footer Page of 126 Header Page of 126 (MMV) Đài Loan Dấu hiệu bệnh lý tôm có màu trắng đục phần bụng, ăn yếu, bơi lờ đờ Mô bệnh học tương tự bệnh hoại tử (IMP) tác giả tìm thấy thể vùi bị hoại tử ; Bhavan and Geraldine (2002) nghiên cứu mô bệnh học gan tuỵ mang tôm Macrobrachium malcolmsonii tiếp xúc với endosulfan Kết có nhiều biến đổi mô học gan tụy mang tôm Những biến đổi bao gồm: tích tụ tế bào hồng cầu khe xoang, ống gan tụy bị hoại tử, mang không bình thường phát triển mức, bị hoại tử; Andersen et al (2000) nghiên cứu bệnh vỏ cua (Sylla serrata) Queensland (Australia) Dấu hiệu mô bệnh học ống bị hư bên thấy có lây nhiễm ký sinh trùng cho nguyên nhân gây đốm nâu vỏ cua (trích dẫn Nguyễn Kim Cương, 2006) Theo Trần Thị Ngọc Hân (2006), Hibiya (1982) mô tả trình biến đổi mô bệnh học tất quan thể cá bệnh cá chình, cá chép, cá hồi Trung Nghiên cứu mô bệnh học cá thơm (Plecoglossus altivelis) bị bệnh xuất huyết vi khuẩn Nghiên cứu mô học phát tổn thương tỳ tạng, thận, gan, ruột , tim mang Những tổn thương tỳ tạng mô tạo máu dễ nhận biết bị công vi khuẩn Những vết hoại tử kèm với tâmxuất Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu huyết, đông máu trương phòng xuất phần tủy tỳ tạng, biểu bì mô thận Trên gan có tượng hoại tử hình thành vùng áp-xe Tuy nhiên ruột, tim mang bị vi khuẩn P altivelis công mức không đáng kể Tuy nhiên tổn thương vi khuẩn không xuất não (http://www.mekongfish.net.vn/modules/news/article.php?storyid=102) Ngoài có nghiên cứu mô học nghiên cứu cá khỏe như: Chinabut ctv (1991) nghiên cứu mô học cá trê trắng Tác giả khảo sát mô khỏe quan thuộc hệ tiêu hoá, hệ tuần hoàn, hệ sinh dục…mục đích chủ yếu làm sở để so sánh nghiên cứu mô học Grizzle et al (1976) giải phẩu nghiên cứu mô học cá nheo Tác giả mô tả đặc điểm mô nhiều quan cá nheo hệ thần kinh, hệ cơ, hệ tiêu hoá Groman (1982) nghiên cứu mô học cá chẽm Ông quan sát cấu trúc mô khỏe hệ hô hấp, hệ thần kinh, hệ tuần hoàn, hệ tiêu hoá, hệ sinh dục, hệ tiết… nhiều giai đoạn cá từ cá giống đến cá năm tuổi Nghiên cứu cá khỏe nghiên cứu Herrera (1996) cá rô phi (Oreochromis niloticus) Ông dùng phương pháp mô học để tiến hành Footer Page of 126 Header Page of 126 nghiên cứu quan da, cơ, xương, hệ tiêu hóa, hệ hô hấp, hệ tuần hoàn, hệ tiết, hệ sinh dục, hệ thần kinh… Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page of 126 Header Page of 126 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng nghiên cứu Cá tra khoẻ giai đoạn cá thịt, thu khoảng 30 con, khoảng 500 gram 3.2 Địa điểm thời gian thực Địa điểm thu mẫu: Cần Thơ Địa điểm phân tích mẫu: phòng mô học, khoa Thủy Sản, trường Đại Học Cần Thơ Thời gian thực đề tài: từ tháng 2/2008 đến tháng 6/2008 3.3 Vật liệu nghiên cứu 3.3.1 Dụng cụ: gồm có đồ tiểu phẩu, khay nhựa, kính hiển vi, lame, lamell, keo nhựa, cốc thủy tinh (lớn, nhỏ), máy cắt lát mỏng (Microtome), khuôn đúc mẫu, cassette, máy nhuộm mẫu tự động, máy Slide warmer, máy đúc khối, tủ lạnh, tủ hút, viết chì, máy ảnh số vật dụng khác Trung 3.3.2 Hóa chất: gồm có nước cất, cồn tuyệt đối, formol thương mại, Bouin Xylem, paraffin, sáp ong, dung dịch nhuộm Haematocyline Eosin, keo dán tâmEnterlan Học liệu ĐHsốCần Thơ hóa chất khác.@ Tài liệu học tập nghiên cứu 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Phương pháp thu mẫu lấy mẫu mô Thu mẫu: cá tra khỏe Về đặc điểm bên ngoài: Cá khỏe cá bơi lội linh hoạt, nhanh nhẹn, bắt mồi nhanh, phản ứng nhanh với tiếng động Màu sắc cá bình thường, lưng có màu xám đen, bụng có màu trắng bạc Hình dạng bên bình thường, vây không bị rách hay bị xuất huyết, vết lỡ loét, xuất huyết da gốc vây Không có dấu hiệu bỏ ăn, bơi lờ đờ mặt nước (hình 3.1) Footer Page of 126 Header Page 10 of 126 Hình 3.1: Đặc điểm bên cá tra khỏe Về đặc điểm bên trong: Khi mổ cá bên thể chất dịch lạ, quan nội tạng phải có màu sắc bình thường, đồng quan, quan không bị sưng hay bị nhũn Trung Lấy mẫu mô Mẫu mô lấy quan: da, cơ, hệ tiêu hoá (dạ dày, ruột), mang, bóng hơi, tim gan, thận, tỳ tạng  Gan, thận, bóng hơi: dùng dao, kéo cắt nguyên quan, sau cắt nhỏ làm phần bỏ vào dung dịch cố định  Da, cơ: dùng lưỡi dao bén cắt dứt khoát, lưỡi dao thẳng góc với bề mặt tâm Họccơliệu Tài liệukhoảng học 1cm tập nghiên cứu quan.ĐH Mẫu Cần cắt dàyThơ khoảng@ 2cm, bề dày  Tỳ tạng, tim: dùng kéo cắt nguyên quan  Mang: dùng kéo cắt đứt gốc xương cung mang lấy toàn cung mang  Dạ dày, ruột: dùng kéo cắt lấy nguyên quan, sau cắt làm đoạn Đối với quan có kích thướt lớn lấy mẫu mô nên cắt làm nhiều phần nhỏ để dung dịch cố định ngấm tốt vào mẫu 3.4.2 Phương pháp làm tiêu mẫu mô  Cố định mẫu Mẫu cố định Formol 10% Bouin Mẫu sau lấy cho vào keo nhựa có chứa dung dịch Bouin để cố định (tỉ lệ 1:10) Riêng mẫu da, bóng cố định Formol 10% cho mẫu mềm Thời gian cố định 24-48 Footer Page 10 of 126 10 Header Page 45 of 126 kính hiển vi phần tủy đỏ bắt màu nhạt phần tủy trắng bắt màu đậm (hình 4.41) D A B C Hình 4.41: Mặt cắt ngang tỳ tạng cá tra (H&E, 10X) A: lớp tỳ tạng; B : tủy đỏ; C: tủy trắng; D : trung tâm đại thực bào sắc tố Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu B A Hình 4.42: Mặt cắt ngang tỳ tạng cá tra (H&E, 100X) A: tủy đỏ; B: tủy trắng Theo Nguyễn Quốc Thịnh (2002) đơn vị cấu tạo tỳ tạng tiểu thể, tiểu thể gồm phần tủy đỏ tủy trắng cá nhỏ khó phân biệt tiểu thể với quan sát kính hiển vi tỳ tạng có cấu trúc gần đồng Đối với cá lớn phần tủy đỏ tủy trắng phân biệt Footer Page 45 of 126 45 Header Page 46 of 126 rỏ ràng Tủy đỏ chứa nhiều tế bào hồng cầu trưởng thành, tế bào máu nguyên thủy, trung tâm đại thực bào, tế bào lưới số tế bào bạch cầu tủy trắng chứa nhiều loại tế bào bạch cầu khác nhau, số tế bào hồng cầu, tế bào máu nguyên thủy trung tâm đại thực bào Ngoài tỳ tạng mô liên kết ngoại trừ động mạch tĩnh mạch, có nhiều trung tâm đại thực bào sắc tố (melano macrophage centre) nằm rải rác tỳ tạng Chúng điểm có màu nâu vàng nâu đen Đây cấu trúc tế bào có cá xương mà động vật bậc cao khác (Roberts, 1989) Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 46 of 126 46 Header Page 47 of 126 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Cấu trúc vi thể quan: da cơ, dày, ruột, mang, bóng hơi, tim, gan, thận, tỳ tạng quan sát mô tả Bộ sưu tập hình ảnh cấu trúc mô học hệ quan cá tra xác lập với 540 lame 5.2 Đề xuất Cần tiến hành nghiên cứu nhiều nơi quan để biết thêm khác biệt Ngoài quan nghiên cứu cần tiến hành nghiên cứu thêm số sơ quan mắt, não cá, thực quản, bàng quan Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 47 of 126 47 Header Page 48 of 126 TÀI LIỆU THAM KHẢO Angka, S.L., 1990 The pathology of the walking catfish, Clarias batrchus, infected intraperitoneally with Aeromonas hydrophyla Asian fish Sci 3: 343-351 Bùi Châu Trúc Đan 2003 Bước đầu nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học bệnh phù mắt cá tra (Pangasius hypophthalmus) LVTN Khoa Thủy Sản Đại Học Cần Thơ Bước đầu phát vi khuẩn Clostridiu m sp nhiễm gan, thận cá tra (http://www.ria1.org/modules/PDdownloads/wiewcat.php?list=B Cập nhật ngày 2/7/2008) Các bệnh thường gặp cá tra basa (http://www.fistenet.gov.vn/details.asp?Object=7126825&news_ID=13 1265952 Cập nhật ngày 30/6/2008) Chinabut, S., and C Limsuwan, 1983b Histopathology of walking catfish, Clarias batrachus, infected by Aeromonas hydrophyla Natl Inl Fish Techn Pap No.24, 8p Trung tâm Chinabut, S., C Limsuwan and P Kitsawat, 1991 Histology of the catfishCần (Clarias batrachus) Họcwalking liệu ĐH Thơ @ Tài liệu học tập nghiên Đặng Thị Hoàng Oanh 2007 Giáo trình ”Nguyên lý kỹ thuật chẩn đoán bệnh thủy sản” Khoa thủy sản Đại Học Cần Thơ Dương Nhựt Long 2003 Giáo trình “ Kỹ thuật nuôi thủy sản nước ngọt” Khoa thủy sản Đại Học Cần Thơ Grizzle, J.M and W.A Rogers 1976 Anatomy and Histology of the Chanal catfish Argicultural experiment station, Auburn University 10 Groman, D.B 1982 Histology of the Striped Bass Department of Pathobiology University of Connectcut Storrs, Connecticut 06268 Bethesda, Maryland 115pp 11 Herrera, A.A., 1996 Histology of Tilapia (Oreochromis niloticus) 12 Nghiên cứu mô bệnh học cá thơm (Plecoglossus altivelis) bị bệnh xuất huyết vi khuẩn (http://www.mekongfish.net.vn/modules/news/article.php?storyid=102 Cập nhật ngày 20/01/2008) 13 Nguyễn Bạch Loan 2004 Giáo trình “ Ngư loại I” Khoa Thủy Sản Đại Học Cần Thơ 14 Nguyễn Kim Cương 2006 Khảo sát ký sinh trùng, mô học thử nghiệm cảm nhiểm bệnh đốm trắng tôm xanh Footer Page 48 of 126 48 cứu Header Page 49 of 126 (Macrobrachium rosenbergii) nuôi ruộng lúa LVTN Khoa Thuỷ Sản Đại Học Cần Thơ 15 Nguyễn Quốc Thịnh 2002 Bước đầu nghiên cứu mô bệnh học bệnh đốm trắng nội tạng cá tra (Pangasius hypophthalmus) LVTN Khoa Thủy Sản Đại Học Cần Thơ 16 Phạm Thị Như Sang 2006 Khảo sát mô học số quan cá tra nuôi ao bè thâm canh (Pangasius hypophthalmus) LVTN Khoa Thuỷ Sản Đại Học Cần Thơ 17 Phạm Trần Nguyên Thảo 2003 Ứng dụng kỹ thuật mô bệnh học chẩn đoán bệnh đốm trắng tôm sú (Penaeus monodon) LVTN Khoa Thuỷ Sản Đại Học Cần Thơ 18 Phan Thị Hừng 2004 Nghiên cứu cấu trúc mô biến động số lượng hồng cầu cá tra (Pangasius hypophthalmus) bị bệnh vàng da LVTN Khoa thủy sản Đại Học Cần Thơ 19 Roberts, R J., 1989 Fish pathology 20 Roberts, R J., 1995 Short Couse on Fin Fish histopathology The Animal Research Institute, Deparment of fisheries, Kasetsart University Campus, Jutujak, Bangkok 10900, Thailand Trung tâm 21 Tổng lượng cá tra, basa xuất Việt Nam năm 2007 đạt 383.2 nghìn với kim ngạch đạt 947.12 triệu USD, tăng 31% tổng lượng so Tài liệu với học tập nămvà nghiên 2006 cứu Họcvàliệu ĐH26.07% Cần Thơ @ (http://www.fistenet.gov.vn/details.asp?Object=26125735&News_ID= 26385208 Cập nhật ngày 20/01/2008) 22 Trần Hồng Ửng 2003 Bước đầu xác định thay đổi số lượng tế bào bạch cầu mô tỳ tạng cá tra (Pangasius hypophthalmus) bệnh trắng gan LVTN Khoa Thuỷ Sản Đại Học Cần Thơ 23 Trần Thị Ngọc Hân 2006 Khảo sát mô học cá tra (Pangasius hypophthalmus) bị bệnh mủ gan điều kiện gây cảm nhiểm LVTN Khoa Thuỷ Sản Đại Học Cần Thơ 24 www Fisternet.gov.vn Footer Page 49 of 126 49 Header Page 50 of 126 PHỤ LỤC Công thức pha chế số hóa chất sử dụng Formol trung tính (Neutral buffered formalin: NBF) Formalin 100 ml NaH2PO4 4g Na2HPO4 6,5 g Nước cất 900 ml Dung dịch cố định Buoin’s Acid picric bão hòa 750 ml Formol 125 ml Glacial acetic acid 50 ml Harris’s haematoxyline Haematoxyline 5g 100% alcohol 50 ml Potassium alum 50 g Nước cất lít Mercuric 2,5 g tập nghiên cứu Trung tâm Học liệuoxide ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học Glacial acetic acid 40 ml Hòa tan Potassium alum nước ấm Hòa tan Haematoxyline cồn, sau đổ vào dung dịch Potassium alum vừa pha trên, thêm Mercuric oxide vào khoấy Để ngụi, thêm Glacial acid vào lọc lại Eosin/Phloxine Stock Eosin (1% Eosin Y nước) 100 ml Stock Phloxine (1% Phloxine B nước) 10 ml 95% Ethanol 780 ml Glacial acetic acid ml Acid/ Alcohol Alcohol 70% 990 ml Hydrochloric acid 10 ml 2% Potassium acetate Footer Page 50 of 126 Potassium acetate 20 g Nước cất 1lít 50 Header Page 51 of 126 LỜI CẢM TẠ Xin chân thành cảm ơn quý thầy cô khoa Thủy sản, trường Đại học Cần Thơ truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báo suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến cô Đặng Thụy Mai Thy thầy Phạm Thanh Liêm nhiệt tình hướng dẫn suốt thời gian thực đề tài Xin gởi lời cảm ơn bạn thủy sản K30 giúp đỡ thời gian học tập trường thời gian thực đề tài Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 51 of 126 Header Page 52 of 126 TÓM TẮT Kết phân tích mô học 30 mẫu cá tra với tổng số 30 tiêu thực từ tháng 02/2008 đến tháng 06/2008 phòng mô học khoa Thủy Sản trường Đại Học Cần Thơ mô tả hệ quan với đặc điểm sau: Da: cấu tạo gồm lớp: lớp biểu bì lớp hạ bì Lớp biểu bì cấu tạo tế bào biểu mô hình vảy, xen kẽ biểu mô hình vảy tế bào tiết dịch nhờn tế bào chùy có kích thướt lớn (Club cells) Cơ: gồm có trơn, vân tim Cơ trơn tìm thấy chủ yếu vách nội tạng, ống dẫn, mạch máu…còn vân thường tìm thấy bên vách thân Cơ tim phân bố tim cá Dạ dày: cấu tạo gồm lớp: lớp mạc (cấu tạo mô liên kết sợi) cùng, lớp trơn có nhiệm vụ co bóp thức ăn, lớp niêm mạc cấu tạo mô liên kết có nhiều mạch máu lớp niêm mạc dày cấu tạo biểu mô trụ đơn Ruột: có cấu tạo giống dày bao gồm lớp: lớp mạc, lớp trơn, Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu lớp niêm mạc niêm mạc ruột, lớp trơn lớp mạc ruột mỏng dày Gan: lát cắt ngang gan cá bao bọc bên tế bào biểu mô lát đơn, lớp tế bào gan có hình đa giác, gan có đảo tụy cấu tạo tế bào nang tuyến, ống mật dẫn mật từ gan đến túi mật trung tâm đại thực bào sắc tố Mang: mang cá tra nằm bên phần đầu, bên có cung mang, cung mang có mang, mang cấu tạo nhiều tơ mang (sợi mang sơ cấp) tơ mang lại có nhiều phiến mang (sợi mang thư cấp) Bóng hơi: cấu tạo lớp: lớp lớp mạc, lớp bên lớp bên Lớp bên cấu tạo sợi mô liên kết, lớp bên cấu tạo lớp biểu mô lát đơn, lớp xốp màng nhày có nhiều mô liên kết mạch máu Tim: gồm có phần: xoang tĩnh mạch, tâm nhĩ, tâm thất bầu động mạch Xoang tĩnh mạch nơi tiếp nhận máu từ tim đổ quan, cấu tạo lớp biểu mô lát đơn mỏng bên lớp tim bên Tâm nhĩ cấu tạo Footer Page 52 of 126 ii Header Page 53 of 126 lớp tim bao gồm lớp biêu mô mô liên kết có cấu trúc xốp chứa tế bào máu bên Tâm thất phận co bóp chủ yếu tim cấu tạo gồm lớp: lớp bên mô liên kết lớp bên lớp tim chứa nhiều khoảng không bào chứa tế bào máu bên Thận: gồm phần: thận trước thận sau Thận trước có chức tạo máu, cấu tạo chủ yếu mô kẽ trung tâm đại thực bào sắc tố nằm rải rác Thận sau có chức tiết chủ yếu, cấu tạo ống thận quản cầu thận, trung tâm đại thực bào sắc tố Tỳ tạng: bao phủ lớp biểu mô lát đơn, cấu trúc tỳ tạng gồm phần: tủy đỏ tủy trắng Khi quan sát kính hiển vi phần tủy đỏ bắt màu nhạt phần tủy trắng bắt màu đậm Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 53 of 126 iii Header Page 54 of 126 MỤC LỤC Trang Trung LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii-iii MỤC LỤC iv-v DANH SÁCH HÌNH vi-vii PHẦN 1: GIỚI THIỆU PHẦN 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học cá tra 2.2 Lịch sử mô học 2.3 Ứng dụng mô học chuẩn đoán bệnh thủy sản PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng nghiên cứu 3.2 Địa điểm thời gian thực 3.3 Vật liệu nghiên cứu 3.3.1 Dụng cụ 3.3.2 Hóa chất tâm Học liệu ĐH @ Tài liệu học tập nghiên 9cứu 3.4 Phương phápCần nghiênThơ cứu 3.4.1 Phương pháp thu mẫu lấy mẫu mô 3.4.2 Phương pháp làm tiêu mẫu mô 10  Cố định mẫu 10  Rửa nước 11  Cắt tỉa định hướng 11  Xử lý mẫu 11  Đúc khối 12  Cắt mẫu 13  Dán mẫu .13  Nhuộm mẫu 14  Dán lamelle vào lame 14  Đọc kết 15 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 4.1 Da 16 4.2 Dạ dày ruột .20 4.3 Gan 25 4.4 Mang .30 Footer Page 54 of 126 iv Header Page 55 of 126 4.5 Bóng 34 4.6 Tim 36 4.7 Thận 40 4.7.1 Tiền thận .40 4.7.2 Trung thận .41 4.8 Tỳ tạng 46 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 44 5.1 Kết luận 47 5.2 Đề xuất 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 50 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 55 of 126 v Header Page 56 of 126 DANH SÁCH HÌNH Trung Trang Hình 3.1: Đặc điểm bên cá tra khỏe 10 Hình 3.2: Khối paraffin trước cắt 13 Hình 4.1: Mặt cắt dọc da cá tra (H&E, 10X) 17 Hình 4.2: Mặt cắt dọc lớp biểu bì da cá tra (H&E, 100X) .17 Hình 4.3: Mặt cắt dọc lớp hạ bì (H&E, 100X) 18 Hình 4.4: Mặt cắt dọc vân cá tra (H&E, 100X) 19 Hình 4.5: Mặt cắt ngang vân cá tra (H&E, 40X) 19 Hình 4.6: Mặt cắt ngang dày (H&E, 10X) 20 Hình 4.7: Mặt cắt ngang dày (H&E, 10X) 21 Hình 4.8: Mặt cắt ngang lớp niêm mạc dày (H&E, 40X) 21 Hình 4.9: Các tế bào tuyến dày (H&E, 40X) 22 Hình 4.10: Mặt cắt ngang ruột cá tra (H&E, 5x) .23 Hình 4.11: Mặt cắt ngang ruột cá tra (H&E, 10X) 23 Hình 4.12: Mặt cắt ngang lớp thành ruột cá tra (H&E, 40X) 24 Hình 4.13: Mặt cắt ngang lớp niêm mạc ruột cá tra (H&E, 40X) 24 Hình 4.14: Mặt cắt ngang lớp niêm mạc ruột cá tra (H&E, 40X) 25 tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Hình 4.15: Mặt cắt ngang gan cá tra (H&E, 10X) 26 Hình 4.16: Mặt cắt ngang gan cá tra (H&E, 10X) 26 Hình 4.17: Mặt cắt ngang gan cá tra (H&E, 20X) 27 Hình 4.18: Tế bào gan cá tra khỏe (H&E, 100X) 27 Hình 4.19: Mặt cắt ngang tĩnh mạch trung tâm gan cá tra (H&E, 10X) 28 Hình 4.20: Đảo tụy (H&E, 100X) 28 Hình 4.21: Mặt cắt ngang ống mật (H&E, 100X) .29 Hình 4.22: Xoang mao mạch (H&E, 100X) 30 Hình 4.23: Mang cá tra (H&E, 10X) 31 Hình 4.24: Mang cá tra (H&E, 40X) .31 Hình 4.25: Sợi mang sơ cấp (H&E, 100X) .32 Hình 4.26: Sợi mang thứ cấp (H&E, 100X) 33 Hình 4.27: Sợi mang thứ cấp (H&E, 100X) 33 Hình 4.28: Mặt cắt ngang bóng cá tra (H&E, 10X) 34 Hình 4.29: Mặt cắt ngang bóng cá tra (H&E, 20X) 35 Hình 4.30: Mặt cắt ngang bóng cá tra (H&E, 10X) 35 Hình 4.31: Lớp bên bóng cá tra (H&E, 40X) 36 Hình 4.32: Tâm thất cá tra (H&E, 10X) 37 Footer Page 56 of 126 vi Header Page 57 of 126 Hình 4.33: Tâm thất cá tra (H&E, 100X) 38 Hình 4.34: Cơ tim tâm thất cá tra (H&E, 100X) .39 Hình 4.35: Bầu động mạch (H&E, 10X) .39 Hình 4.36: Van bán nguyệt (H&E, 10X) .40 Hình 4.37: Mặt cắt ngang tiền thận (H&E, 10X) 41 Hình 4.38: Mặt cắt ngang trung thận cá tra (H&E, 10X) 42 Hình 4.39: Tiểu cầu thận (H&E, 100X) 43 Hình 4.40: Ống thận (H&E, 100X) .43 Hình 4.41: Mặt cắt ngang tỳ tạng cá tra (H&E, 10X) .45 Hình 4.42: Tỳ tạng cá tra (H&E, 100X) 45 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu Footer Page 57 of 126 vii Header Page 58 of 126 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN VÕ QUỐC HÀO CẤU TRÚC MÔ CỦA MỘT SỐ HỆ CƠ QUAN TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2008 Footer Page 58 of 126 Header Page 59 of 126 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN VÕ QUỐC HÀO CẤU TRÚC MÔ CỦA MỘT SỐ HỆ CƠ QUAN TRÊN CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập nghiên cứu LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ts PHẠM THANH LIÊM K.s ĐẶNG THỤY MAI THY 2008 Footer Page 59 of 126 ... thiện cấu trúc mô cá tra khỏe làm sở cho nghiên cứu mô bệnh học Do đề tài: Cấu trúc mô số hệ quan cá tra (Pangasianodon hypophthalmus)” thực nhằm: Mục tiêu: Xác định đặc điểm, cấu trúc mô hệ quan. .. cứu mô học Grizzle et al (1976) giải phẩu nghiên cứu mô học cá nheo Tác giả mô tả đặc điểm mô nhiều quan cá nheo hệ thần kinh, hệ cơ, hệ tiêu hoá Groman (1982) nghiên cứu mô học cá chẽm Ông quan. .. sát cấu trúc mô khỏe hệ hô hấp, hệ thần kinh, hệ tuần hoàn, hệ tiêu hoá, hệ sinh dục, hệ tiết… nhiều giai đoạn cá từ cá giống đến cá năm tuổi Nghiên cứu cá khỏe nghiên cứu Herrera (1996) cá rô