Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 2-9
BÀI NGHIÊN cuuẾ ˆ
rd ˆ a ` A 7 ˆ
Tơng quan hệ thống và phản tích gộp
z on z z ~ ow at a cúc nghién cou quan sat vé bién cé bat lợi
2 L4 ot ° x
cua thuéc trong diéu tri lao da khang/lao siêu khúng
Nguyễn Thị Thủy!, Nguyễn Hồng Dương?, Cao Thị Thu Huyền?, Vũ Đình Hịa?, Nguyễn Hồng Anh?, Nguyễn Viết Nhung’ 1Bệnh viện Phổi Trung ương, ?Trường Đại học Dược Hà Nội
SUMMARY
Adverse drug events (ADE) have been mentioned as the most crucial obstacle in the management of multi/extensively drug-resistant tuberculosis (MDR/XDR-TB) using second-line drug chemotherapy The information of such ADE was found diverse among studies and a systematic summary was therefore required to assist clinical practice The study aimed to identify the proportion and type of ADEs reported in published medical literature, A systematic search for ADEs in MDR/XDR-7B treatment from Medline in January 2016 was carried out and subsequently the search result was reviewed under pre-defined criteria, Extracted data was summarized and the pooled incidence for each specific ADE and for cases with at least one ADE was presented Of 1504 searched articles, 69 were selected for the review A total of 5313 (68.2%) patients in 49 studies experienced at least one ADE, In addition, 2000 patients (21.8%) in 46 studies required change of MDR/XDR-TB treatment The most three common side effects were gastrointestinal disorders (39.6%), red blood ceil disorders (18.8%), and general disorders (18,3%) Most of the P values were over 90%, These results revealed that ADE was found to be common in MDR/XDR-7B treatment The high heterogeneity of the result suggested a wide variation among studies in assessing and reporting ADE during the treatment of MDR/XDR-TB,
Từ khĩa: Biến cố bất lợi, MDR-TB, XDR-TB, tổng quan hé théng, phan tich g6p
Dat van dé
Lao kháng thuốc đã và đang trở thành một thử thách lớn đối với việc kiểm sốt bệnh lao trên tồn cầu Riêng trong năm 2014, đã cĩ khoảng 190 000 trường hợp tử vong do lao đa kháng (MDR-TB) Ước tính chỉ cĩ 50% số bệnh nhân MDR-TB được điều trị khỏi và đã cĩ khoảng 9,7% số ca MDR-TB bị siêu kháng thuốc (XDR-TB) Việt Nam nằm trong nhĩm 27 quốc gia cĩ gánh nặng lao đa kháng cao nhất thế giới, xếp thứ 11/20 nước cĩ số lượng bệnh nhân MDR-TB nhiều nhất [5] Bệnh nhân MDR/XDR-TB phải sử dụng nhiều thuốc đồng thời với thời gian điều trị bệnh kéo dài, đặc biệt các thuốc lao hàng hai thường cĩ độc tính cao hơn thuốc lao hàng một, dẫn đển tăng khả năng xuất hiện biến cố bất lợi Vì vậy, việc nhận diện, đánh giá và xử trí biến cố bất lợi trong điều trị lao đa kháng đĩng một vai trị quan trọng
trong việc sử dụng thuốc hợp lý, an tồn và điều trị thành cơng MDR/XDR-TB [9], Tuy nhiên, thơng tin về các biến cố do thuốc điều trị MDR/XDR-TB thu được
trên thực tể từ hệ thống báo cáo tự nguyện tại Việt Nam cịn rất hạn chế do số lượng và chất lượng bảo
cáo chưa cao Bên cạnh đĩ, các nghiên cứu theo dõi chủ động biển cổ bất lợi của thuốc điều trị lao mới
bắt đầu được triển khai trong những năm gần đây
Trang 2Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tập 8, Số 1,trang 2-9
đa kháng đã được tiến hành vào năm 2012 [10],
nhưng kể từ thời điểm đĩ đến nay đã cĩ thêm nhiều
nghiên cứu được thực hiện bổ sung thêm vào dữ liệu
biến cố bất lợi khi điều trị MDR/XDR-TB Do vậy, để
cĩ được gĩc nhìn tương đối tồn diện về biến cố bất lợi của thuốc trong điều trị lao đa kháng và siêu kháng đã được ghi nhận trên thể giới, từ đĩ cung cấp những thơng tin hữu ích phục vụ cho cơng tác điều trị MDR/XDR-TB, nghiên cứu này được thực hiện với mục tiêu phân tích tần suất xuất hiện các biến cố bất lợi xảy ra trong điều trị lao đa kháng/siêu kháng thuốc thơng qua tổng quan hệ thống và phân tich gộp từ các nghiên cứu quan sát
Đối lượng và phương pháp nghiên cứu Đổi tượng nghiên cửu
Các bài báo từ nguồn dữ liệu PubMed/Medline được cập nhật đển tháng 1/2016, Chiến lược tìm kiếm là sử dụng MeSH để thu được danh mục các từ đồng nghĩa của”“MDR-TB',“XDR-TB”và“Adverse Drug Events”; giới hạn ngơn ngữ là tiếng Anh
Phương pháp nghiên cứu Quy trình lựa chọn nghiên cứu
Hai thành viên trong nhĩm nghiên cứu đọc tiêu để và tĩm tất của các nghiên cứu một cách độc lập và sốt chéo Nếu cĩ kết quả khác nhau, tiến hành thảo luận lại hoặc xin ý kiến thành viên thứ ba trong nhĩm nghiên cứu để thống nhất Sau đĩ, đọc bản đẩy đủ các nghiên cứu đã chọn Những nghiên cứu thỏa mãn
tiêu chuẩn lựa chọn và khơng nằm trong tiêu chuẩn
loại trừ được đưa vào trong tổng quan hệ thống
Tiêu chuẩn lựa chọn
Các nghiên cứu quan sát phải thỏa mãn những tiêu chuẩn như sau: cĩ dữ liệu đầu ra là biến cố cĩ hại của thuốc; nghiên cứu về lao đa kháng và lao siêu kháng thuốc; là tài liệu cấp một; phác đồ điều trị lao của các nghiên cứu cĩ bao gồm các thuốc hàng hai; ngơn ngữ bằng Tiếng Anh
Tiêu chuẩn loại trừ
Các nghiên cứu được loại bỏ nếu đối tượng nghiên cứu cĩ trẻ em, phụ nữ cĩ thai, người cao tuổi Ngồi ra, các nghiên cứu báo cáo ca, báo cáo chuỗi, nghiên cứu bệnh chứng, nghiên cứu chỉ quan sát một biến cố bất lợi hoặc chỉ quan sát biến cố bất lợi
của một thuốc cũng khơng được đưa vào tổng quan hệ thống
Đảnh giá chất lượng nghiên cứu
Sử dụng thang NOS§ (Newcastle-Ottawa Scale) [6] để đánh giá chất lượng các nghiên cứu trước khi đưa vào phân tích gộp dựa trên 3 tiêu chí: Khả năng lựa chọn (tối đa 4 điểm); khả năng so sánh (tối đa 2
điểm); kết quả đầu ra (tối đa 3 điểm) Thang điểm này
BÀI NGHIÊN cuuẾ
đã được nhiều nghiên cứu sử dụng để đánh giá chất lượng trong phần tích gộp, đặc biệt là trong các phân tích đánh giá biến cổ bất lợi của thuốc điều trị lao [21, [31, [4] Trong tổng quan hệ thống này, nhĩm nghiên cứu quy định những nghiên cứu cĩ mức
điểm đánh giá theo thang NOS đạt từ 5 điểm trở lên (> 50%) được coi là nghiên cứu đạt chất lượng để
đưa vào tiến hành phân tích gộp Chiết xuất dữ liệu
Một thành viên trong nhỏm nghiên cứu tiến hành phân loại và nhập dữ liệu theo các trường dữ liệu xác định, thành viên thứ hai trong nhỏm nghiên
cứu kiểm tra lại Trong trường hợp cĩ ý kiến khơng
đồng nhất, tiến hành thảo luận lại hoặc xin ý kiến thành viên thứ ba trong nhĩm nghiên cứu, Các trường dữ liệu liên quan đến nghiên cứu được chiết
xuất bao gồm: Thơng tin chung về nghiên cứu (tên tác giả chính, nằm xuất bản, thiết kế nghiên cứu, địa điểm nghiên cứu, thời gian tiến hành nghiên cửu, cỡ
mẫu); đặc điểm bệnh nhân (tuổi trung bình, giới tính, tiển sử điều trị lao, đồng nhiễm HIV, số thuốc điều trị lao bị kháng trung bình); phác đồ điều trị (thời gian điều trị, số thuốc trung bình trong phác đồ, phác đồ chuẩn hĩa/cá nhân hĩa); kết cuộc của ADE liên quan đến điều trị (số bệnh nhân xuất hiện ít nhất 1 ADE, số bệnh nhân xuất hiện ít nhất 1 ADE nghiêm trọng, số bệnh nhân tử vong do ADE, số bệnh nhân phải
thay đổi phác đồ do ADE, số bệnh nhân xuất hiện
từng loại ADE) Phân tích dữ liệu
Kết quả tổng quan hệ thống được trình bày dưới dạng bảng tĩm tắt thơng tin của các nghiên cứu đạt tiêu chuẩn Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2010 Sử dụng mơ hình ảnh hưởng ngẫu nhiên để phân tích và ước lượng kết quả gộp bằng phần mềm Open MetaAnalyst [1], [7] Độ dị biệt giữa các nghiên cửu
được đánh giá thơng qua chỉ số l° Tiến hành phân
tích gộp từng nhĩm nhỏ/phân tích dưới nhĩm
(sub-group) theo một số tiêu chí về đặc điểm quần thể
bệnh nhân, cỡ mẫu nghiên cứu, tiền sử điều trị,
Kết quả nghiên cứu
Từ 1504 bài báo được tìm thấy, qua các bước lựa chọn và loại trừ, đã cĩ 69 nghiên cứu được đưa vào
tổng quan hệ thống Quy trình lựa chọn các nghiên cửu sử dụng trong tổng quan hệ thống và phân tích
gộp được trình bày ở hình 1 (Xem bảng)
Đặc điểm các nghiên cứu được lựa chọn
Trang 3Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 2-9
tại 35 quốc gia, trong đĩ Ấn Độ là nước cĩ nhiều nghiên cứu nhất với 15 nghiên cứu Đặc biệt, cĩ 1 nghiên cứu được thực hiện tại Việt Nam Cỡ mẫu của nghiên cứu dao động từ 9 đến 1390 bệnh nhân, cĩ 37 nghiên cứu cĩ cỡ mẫu dưới 100 và 32 nghiên cứu cĩ cỡ mẫu trên
100 bệnh nhân Quần thể nghiên cứu cĩ tuổi trung bình từ 26 đến 46 tuổi, trong đĩ cĩ 49
nghiên cứu cĩ tuổi trung bình nằm trong khoảng từ 30 đến 40 tuổi Phần lớn bệnh nhân âm tính với HIV và đã cĩ tiền sử điều trị lao Về mặt phác đồ điều trị, cĩ 41 nghiên cứu sử dụng phác đồ cá nhân hĩa, 26 nghiên cứu sử dụng phác đồ chuẩn, 1 nghiên cứu bao gồm cả phác
đồ cá nhân hĩa và phác đồ chuẩn, 1 nghiên cứu khơng rõ thơng tin về phác đề sử dụng
Tơng số nghiên cứu tìm được trên Pubmed (N=1504)
I
‘Doe tiéu dé và tơm tất (N=1504)
†-
Tim doe ban day đủ (\
Các nghiên cứu đạt tiêu chuẩn (101)
"Nghiên cứu được đưa vào tổng quan hệ thống và phân tích gộp (N=69)
BÀI NGHIÊN CỨU ế
“Khơng tìm được bản đây đủ) 1 - Khơngphù hợp với tiêu chuẩn lựa chọn tu chuẩn loại trừ của tổng quan
Hình 1 Quy trình lựa chọn các nghiên cứu
Bang 1 Một số thơng tin của các nghiên cứu được đưa vào tổng quan hệ thống
sir Tát giả đầu tiên của Năm (8mäu(n) Tiển sử điều trị | Tỷ lệ đồng nhiễm Phác đồ Số BN gặp ít nghiên cửu xuất bản TB (%) HIV (%) điều trị nhất 1 ADE
1 |NgB.Hoa 2015 282 (huẩn 14
2 Pym 2015 233 948 AO (huẩn 219
3 |Meresa 2015 612 985 17 (huẩn 544
4 Gavanaugh 2016 7 100 0[n=13) Khơng rõ 55
5 Lytvynenko 2014 484 86 31 (á nhân hĩa 226
6 Vaghela 2015 101 100 20 (á nhân hĩa
7 Kuaban 2015 150 20,0 (huấn
8 | Kibleur 2015 231 59 €á nhân hĩa
9 _| Avong 2015 460 10,0 Chuan 203
10 |Hire 2014 T10 00 (huẩn 55
T Piubello 2014 65 98 1,7 {n=58) Chuan Al
12 | Charles 2014 110 88,88 250 {á nhân hĩa 61
13 |Jđn 2014 T30 (huẩn
14 |Bhany 2014 930 (huẩn
15 |Mpagama 2013 61 98 140 (huẩn 49
16 | Shean 2013 115 420 (á nhân hĩa 67
17 |Jang 2013 158 7⁄4 0,0 (á nhân hĩa 81
18 |Wah 2013 1390 9 391 (huẩn
19 | Rodriguez 20 29 SA a5 Chudin vi nhân hĩa xử
20 |Brust 2013 91 840 (huẩn 90
21 | Sagwa 2012 59 92 53,0 (á nhân hĩa 53
22 |aakidis 2012 67 92,5 100,0 {á nhân hĩa
3 Bhatt 2012 81 531 142 (huẩn 76
24 |Brust 2012 80 825 (huẩn 70 (n=71)
23 |Xu 2012 18 100 00 {á nhân hĩa 17
Trang 4
Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tập 8, Số 1, trang 2-9 ye
¢
BAI NGHIEN CUUS
sm Tác giả đầu tiên của Năm tðmáu (n) Tiền sử điều trị | Tỷ lệ đồng nhiễm Phác đồ Sổ BN gặp ít nghiên cứu xuất bản TB (%) HIV (%) điều trị nhất 1 ADE
26 | Carrol 2012 655 66 (á nhân hĩa
27 _| Miller 2012 407 (á nhân hĩa 367
28 _| Isaakidis 2011 58 91 (n=56) 100,0 (á nhân hĩa 26
29 |Abbate 2012 17 94,] 0,0 (á nhân hĩa 9
30 Kennedy 2011 13 846 140 (huẩn 12
31 Singla 2012 29 100 0,0 (á nhân hĩa
32 |Lee 2011 MAI 49,4 06 (á nhân hĩa 8]
33 |Jnseph 2011 38 100 0,0 Chuan 33
34 | Kvasnovsky 2011 206 100 55,4 (á nhân hĩa
35 |Dheda 2010 1⁄4 7 470 (á nhân hĩa 67 (n=115)
36 [Van Deun 2010 7 100 (huẩn 203
37 |Anger 2010 16 100 19,0 (á nhân hĩa 16
38 |Bloss 2010 1027 @ 31 (á nhân hĩa 807
39 _| Singh Datta 2010 52 1,9 Chuan 36
40 | Malla 2009 175 98,2 (n=166) thuần
41 Karagoz 2009 142 100 0,0 (á nhân hĩa 79
42 |Baghaei 2011 80 5,0 (huẩn 45
43 |Pawar 2009 2 6 80 (á nhân hĩa
44 |Singla 2009 126 100 0,0 Chugn B
45 O'Donnel 2009 60 70 720 (á nhân hĩa 31
46 |Jaœb 2009 3 56,5 5 (n=21) (á nhân hĩa 3
47 |Keshavjee 2008 608 99,5 08 (á nhân hĩa 407
48 |Prasad 2005 46 100 00 Chun 16
49 Masjedi 2008 4 100 0,0 Chuan
50 [Shin 2007 24 100 (á nhân hĩa 179
31 Cox 2007 87, 100 (á nhân hĩa
52 | Thomas 2007 66 100 (á nhân hĩa 3
53 Uffredi 2007 45 a7 20,0 (ả nhân hĩa 15
54 | Escudero 2006 25 88 00 (á nhân hĩa 7
55 Codecassa 2006 38 54 53 (á nhân hĩa 32
56 | Torun 2005 263 00 (á nhân hĩa 182
57 | Nathanson 2004 818 (á nhân hĩa
58 |Palmero 2004 1 645 00 (á nhân hĩa
59 Van Deun 2004 58 Chuan
60 | Yew 2003 99 0,0 (á nhân hĩa 4
61 Furrin 2001 60 100 17 (á nhân hĩa 60
62 |Tahaoglu 2001 T58 100 (á nhân hĩa
63 |Singla 2001 9 100 00 (huẩn 7
64 |6eerlgs 2000 4 34 0,0 (á nhân hĩa 4
65 Wai Yew 2000 63 65,1 100,0 (á nhân hĩa 3
66 | Mannheimer 1997 3 23 100,0 (á nhân hĩa 4
67 lee 1996 36 100 (á nhân hĩa 10
68 |Halarto 1996 3 100 0,0 (huẩn
69 Telzak 1995 25 32 0,0 (á nhân hĩa
Trang 5
Nghién ctu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 2-9
Phân tích gộp về biến cố bất lợi trong điều trị lao
đa kháng và lao siêu kháng thuốc
BÀI NGHIÊN CỨU Š
Bảng 2 Phân tích gộp về tỷ lệ xuất hiện biến cố
ms ep a “ân cửu Số | SốBN Tỷ lệ xuất
Kết quả đánh giá chất lượng các nghiên cứu NC |xuấthiện sé BNy hiện ADE os Với 69 bài báo được đưa vào tổng quan hệ thống, sp| ave |SPÌ @sgqpp | PÉĐ chúng tơi thực hiện chấm điểm để đánh giá sự đồng BN mất hiện Rnhất
đều về chất lượng của các nghiên cứu trước khiđưua || gape - 4| #13 | 7875) 68,2 (6/733) | 95,07
vào tiến hành phân tích gộp Kết quả: tất cả nghiên Đhuthnhnhốt
cứu đều đạt mức >5 điểm (trên thang tối đa 9 điểm) |;ap nghiêm trạng | ” | 51 2526) 269 (0.0353) | 917
trong tất cả các tiêu chí đánh giá nên đều được đưa BN thay fi phic as
vào phân tích gộp, cụ thể: 23 nghiên cửu (33%) đạt ove, pach | „ | 000 | 4959] 21,8 (17,0-27,4) | 95,67 8 điểm, 40 nghiên cứu (58%) đạt 7 điểm và 6 nghiên a
cứu (9%) đạt 6 điểm BNtửvongdoADE |1! | 12 |29| 32 (0252) | 61,77
Phân tích gộp về tỷ lệ xuất hiện biến cố chung
Studies Estimate (95% C.T.) — Bv/Trt
Nguyen Binh Hoa 2015 0.507 (0.449, 0.565) 143/292 —=—
Alexander S Pym 2015 0.940 (0.901, 0.964) 219/233 _.- Meressa 2015 0.883 (0 544/612 - ‘Cavanaugh 2016 ° 38/77 —i.—_ Lytyynenko 2014 ° 226/404 —m— Avong 2016 ° 203/460 —m— Hire 2014 ° 55/110 a Pubelo 2014 ° 41/65 ~ Chades 2014 Mpagama 2013 ° ° 61/110 49/61 —* —«— Karen Shean 2013 ° 61/115 ——— Jiang 2013 ° 31/158 —=—— Rodriguez 2013 ° 207/209 a Brust (1) 2012 Sagwa 2012 ° ° 90/91 53/59 ——=— — Bhatt 2012 ° 26/81 —=- Brust (2) 2019 ° 30/80 —z— Xu2012 ° 17/18 — Miter 2012 ° 367/407 -_ Isaakidis 2011 ° 26/58 ——-—— Abbate 2012 ° 9/17 oo
Kennedy 2011 Lee (1)2011 ° ° 12/13 e117 ——— —————
doseph 2011 ° 33/38
Dheda 2010 ° 67/174 ——
Van Deun 2010 ° 203/421 —.—
Anger 2010 ° 16/16
Bioss 2010 Singh Datta 2010 ° ° 807/1027 36/52 -
Karagoz 2009 0 19/142 —=—— Baghaei 2011 o 45/80 —— Singla (1) 2009 ° 73/126 — 0onnel 2009 ° 31/60 ——>——— Jacob 2008 ° 23/23 ————~ Keshaviee 2008, o 407/608 _.— Prasad 2005 ° 16/46 ——>——— ‘shin 2007 ° 179/244 —m— Thomas 2007 ° 39/66 ——-——T UWredi 2007 ° 15/45 ———>——— Escudero 2006 ° 3⁄22 ————»—————— Codecassa 2006 ° 32/38 Tonnn 2005 0 182/263 Yew 2003 ° 41/99 —>—— Fumin 2001 Đ 60/60 —s Singla (2) 2001 ° 1⁄9 — Geerlgs 2000 ° 44/44 ———nm Wai Yew 2000 ° 25/63 —>——— Mannheimer 1997 ° 442 ————————— Lee (2) 1996 9 10/36 ee ‘Overall (192=95.07 % , P< 0.001) 0.682 (0.624, 0.735) 5313/7675 ——
*Tác giả cĩ hơn 1 bài báo được ký hiệu (1) (2) bên cạnh năm xuất bản Logit Proportion
Trang 6Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tập 8, Số 1, trang 2-9
Phân tích gộp về số tỷ lệ xuất hiện ít nhất một biến cố bất lợi BÀI NGHIÊN au
ết quả phân tích gộp dưới nhĩm
Z tÂn cứ An thơng tìn về cế Bằng 4 Phân tích gộp dưới nhĩm về tỷ lệ xuất hiện Cĩ 49 nghiên cứu thu thập thơng tin về số lượng 9 sộp “ oe ệ
ˆ ng DI CN NẠP CỐ ong itnhdt 1 ADE
bệnh nhân xuất hiện ít nhất một ADE Trong đĩ, cỡ
mẫu gộp là 7875 bệnh nhân và số bệnh nhân xuất Tiu dự sone | Tỷ uất hiện tnhất1 | hisố P hiện ít nhất 1 ADE là 5313 bệnh nhân Tỷ lệ gộp thu " ADE (95% C1) (96) (6) dugc la 68,2% (95% Cl: 62,4% - 73,5%) “Dhan vĩnh nên z4 hiển cá hết li rrr, br Phân tích gộp về biến cổ bất lợi trên từng hệ cơ quan 2 luẩn thểnghiên cứu
„ chau A 24 612 643-676) 92,76
Bảng 3 Tỷ lệ xuất hiện ADE trên các hệ cơ quan
(ấckhu vực khác 4 | 749 (654-82,5) | 96,01
SINH pm | „ụ (ả(huÂvàácKVMhác | 1
SH Biểndbftlel | Ne | Mion | mạ | HE Tỷ - -
ADE |nhếm| 5%G)69) Pitt kénghien ce
= Tién ctu 1% | 628 61372 | 92,73
1 |Rốilantiuhúa | 47 | 3415 | 7910 | 396 (0A- 484) | 977
Hồidu 3 | 799 (0770 | 9568
2 | Réiloanhéngcéu | 6 | 61 | 886 | 18,8 (04,4-53,9) | 92,67
Hiến sử điều trịtheo 9 số bệnh nhân tham gia hin cu tg iu rl)
|RỚ loạn tần rp | 2y | 20 | "BÊ (sz.2sz) | 8943 thân „an BE <1 1Ð | 634 489765) | 94,70
Rồiloạn thần kinh 275% % | 72 (680780) | 9554
4 |tung ương và| 50 | 1715 | 9676 | 152 (I20-192) | 9491 thínknhngaivi Khơng cĩ thơngtin — 1| Ø4 5277) | 9M [peng nhiém HIV
s | n0 | T78 | 8875 | 17 (9- 195)| 9680 úp Khơng nhiễm HIV 14 BA 604672) | 83,69
6 |RẾ Mạn tính | øs | 1y | 967 | 140 (08-180) | 913 giác tiến định {6 đồng nhiễm HIV 2 | 735 (67800 | %3
7 | Rốiloantâmthần | 40 | 1511 | 8612 | 13,6 (103-178) | 95,73 buu nhi lui 6 | 8 6370 | 535
Dðigianđiểutrị
Bồi lun chuyển THẾ và
8 li 7% |5 08-180) | 9/6 <]#tháng 19 | 67 634729) | 9145
Bồi loạn da và tổ > 18tháng a | ma (614780) | 942
9 Íadgdag | 53 | 725 | 88 | 88 67-119 | 9/8
Khơng cĩ thơngtin 4 | 58 8953) | 945
10 |Rốiloantaidư | 8 | 125 | 1804 | 65 (l7-21/9 | 8686 (máu
Bối luạn nội tiết 6A
1 Íygạp) 20 | #18 | 6030 88-104) | 95,27 <10 » | 77 62784 | 8801 12 | Réiloanbachedu | 8 | 4 | 137 | 60 (15-212) | 93,58 >100 20 69 84743) | 9A2 13 | Rốiloạnganmật | 37 | 569 | 86M | 5/8 56-7 | 9149 14 | Rổiloạntiểtniu | 23 | 249 | 5490 | 43 (50-62) | 85,53 (23-46) | 66,15 15 | Roiloan thigige | 19 | 134 | 40 | 33
Những biến cổ trên hệ tiêu hĩa, rối loạn hồng cầu, rối loạn tồn thân, rối loạn trên hệ thần kinh trung ương và tại chỗ, rối loạn hệ cơ xương khớp là những biến cố cĩ tỷ lệ gộp cao nhất, Biến cố bất lợi trên đường tiêu hĩa cĩ tỷ lệ gộp cao rõ rệt: 34,8% (95% Cl: 26,2% - 44,6%), Các rối loạn trên hệ thần kinh trung ương, hệ tiêu hĩa, rối loạn thính giác và tiền đình được nhiều nghiên cứu ghi nhận nhất,
Trang 7Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 2-9
Bùn luận
Trong nghiên cứu này, 69 bài báo đã được đưa vào tổng quan hệ thống và phân tích gộp, vượt trội hơn hẳn về số lượng cơng trình tìm kiếm ban đầu cũng như bao gồm trong phân tích cuối cùng so với nghiên cứu của Shanshan Wu, một tổng quan cĩ phương pháp tương tự được tiến hành vào năm 2012 với 39 nghiên cứu [7] Nghiên cứu của Wu đã đánh giá các nghiên cứu dựa trên thang điểm được để xuất bởi nhĩm nghiên cứu ”Phân tích gộp của các nghiên cứu quan sát” [11, [2] Thang Newcasle- Ottawa (NOS) được sử dụng trong nghiên cứu của chúng tơi giúp đánh giá các nghiên cứu một cách tồn diện hơn thang điểm trong nghiên cứu của Wu, thé hiện qua một số mặt như: mức độ đầy đủ của việc theo dõi, so sánh các nghiên cứu dựa trên
thiết kế [6], [10]
Trong tổng số 69 nghiên cứu quan sát được đưa vào tổng quan hệ thống, cĩ 39 nghiên cứu sử dụng phương pháp hồi cứu từ bệnh án để lấy thơng tin về ADE (các kết quả xét nghiệm, bản ghi chép của nhân viên y tế trong những lần tái khám định kỳ và một nghiên cứu thu thập ADE từ báo cáo tự nguyện của bệnh nhân) và 30 nghiên cứu tiến cứu cĩ phương pháp thu thập ADE, trong đĩ chủ yếu là phương pháp theo dõi tích cực (theo dõi định kỳ) với mẫu báo cáo được thiết kể sẵn Tất cả các biến cố ghi nhận từ các nghiên cứu đã được chuẩn hĩa lại theo thuật ngữ WHO-ART [7] So với nghiên cứu của Wu [10], nghiên cứu của chúng tơi đã tổng hợp các kết quả phân tích gộp về tỷ lệ xuất hiện ít nhất một ADE nghiêm trọng (26,9%), tỷ lệ bệnh nhân tử vong do ADE (3,2%), đây là những con số rất cĩ ý nghĩa đổi với thực hành lâm sàng, định hướng cho các bác sĩ điều trị thấy thực sự quan trọng hơn trong cơng tác theo dõi, đánh giá, xử trí và báo cáo ADE trong điều trị MDR/XDR-TB
Tý lệ gộp xuất hiện ít nhất 1 biến cố là 68,2% từ 7875 bệnh nhân của 49 nghiên cứu Rối loạn tiêu hĩa
là biến cố bất lợi phổ biến nhất với tỷ lệ gộp là 39,6%
từ 47 nghiên cứu Những rối loạn khác cũng cĩ tỷ lệ gộp khá cao 8ĩ là rối loạn hồng cầu (18,8%), rối loạn tồn thân (18,3%), rối loạn thần kinh trung ương và
thần kinh ngoại vi (15,2%) Cĩ thể thấy, tỷ lệ xuất
hiện biến cố ở bệnh nhân MDR/XDR-TB là rất cao, với khoảng một phần ba trong số này (21,8%) cần phải thay đổi phác đồ, ảnh hưởng rất lớn đến quá trình điều trị cũng như chất lượng sống của người bệnh
Cĩ nhiều biến cố là phản ứng khơng mong muốn
- 2
BÀI NGHIÊN CỨU Š- điển hình của các thuốc lao hàng hai được đề cập trong y văn đã được nhiều nghiên cứu ghi nhận (> 40/69 nghiên cứu) như rối loạn thần kinh, thính gidc-tién đình, tiêu hĩa, da và tổ chức dưới của da, rối loạn tâm thần Một số biển cố khác tuy được ít nghiên cứu ghỉ nhận hơn nhưng lại là những biến cố bất lợi nghiêm trọng như biến cố trên huyết học (rối loạn hồng cầu, bạch cầu), rối loạn điện giải (hạ kali máu), rối loạn chuyển hĩa (tăng acid uric), rối loạn nội tiết (suy giáp) Trong đĩ, rối loạn hồng cầu là một biến cố bất lợi đáng chú ý và cĩ tỷ lệ khá cao mặc dù chỉ được ghỉ nhận trong 6 nghiên cứu Kết quả này cho thấy sự cần thiết phải theo dõi sát sao cơng thức máu của bệnh nhân, đặc biệt theo dõi trên những bệnh nhân được chỉ định phác đồ chứa các thuốc cĩ độc tính trên hệ tạo máu như linezolid
Một trong những hạn chế chủ yếu của nghiên cứu này là chỉ số bất đồng nhất I? khá cao, dao động từ 61,77% đến 97,72%, khiến cho kết quả gộp chưa đại diện được cho từng nhĩm trong phần tích gộp Mặc dù tỷ lệ gộp xuất hiện ít nhất một ADE trong một số phân nhĩm cụ thể là cao hơn các nhĩm khác, phân tích gộp dưới nhĩm cho thấy khơng cĩ sự khác
biệt đáng kể giữa các phân nhĩm này, cĩ thể từ các
Trang 8Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tập 8, Số 1,trang 2-9
định thêm những yếu tố gây bất đồng nhất giữa các nghiên cứu và khả năng ảnh hưởng đến kết quả phân tích gộp Bên cạnh đĩ, nghiên cứu cũng khơng
thể đánh giá được ảnh hưởng của ADE đến kết quả
điều trị do thiếu các dữ liệu cần thiết cĩ liên quan do chúng tơi khơng thể tiếp cận sầu hơn tới dữ liệu gốc của các nghiên cứu và tơn trọng ghi nhận của từng bài báo được lựa chọn
Kết luận
Từ phân tích gộp cho thấy tỷ lệ xuất hiện ít nhất một ADE là khá cao (68,2%) trong đĩ tỷ lệ gặp ít nhất
- 2
BÀI NGHIÊN CỨU Š- một ADE nghiêm trọng là 26,9% và tỷ lệ tử vong do ADE là 3,2% (l? = 61,77%) Các biến cố trên hệ tiêu hĩa là phổ biển nhất (39,6%) sau đĩ là biển cố trên rối loạn hồng cầu (18,8%) và cĩ tình trạng rối loạn tồn thân (18,3%) Kết quả nghiên cứu nhấn mạnh việc cần thiết phải theo dõi biểu hiện lâm sàng cũng như giám sát tình trạng của bệnh nhân thơng qua các kết quả xét nghiệm cận lâm sàng thường quy trong suốt quá trình điều trị để tầm sốt các biến cố bất lợi nghiêm trọng cĩ nguy cơ xảy ra để từ đĩ cĩ những can thiệp điều trị phù hợp
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Egger Matthias, Davey-Smith George, et al (2008), Systematic reviews in health care: meta-analysis in context, John Wiley & Sons, pp.336-346,
DeyT,, Brigden G,, et al (2013), "Outcomes of clofazimine for the treatment of drug-resistant tuberculosis: a systematic review and meta-analysis’, J Antimicrob Chermother, 68(2), pp 284-293
Jiang R H., Xu H B., et al (2015), "Outcomes of Chinese herb medicine for the treatment of multidrug-resistant tuberculosis: a systematic review and meta-analysis", Complement Ther Med, 23(4), pp 544-554
Langendam M.W.,Tiemersma E.W,, et al (2013), "Adverse events in healthy individuals and MDR-TB contacts treated with anti-tuberculosis drugs potentially effective for preventing development of MDR-TB: a systematic review", PLOS ONE, 8(1), pp 53599
Stroup D-F., Berlin J.A., et al (2000), "Meta-analysis of observational studies in epidemiology: a proposal for reporting Meta-analysis Of Observational Studies in Epidemiology (MOOSE) group", JAMA, 283(15),
pp 2008-2012
6 Wells GA, Shea B., et al (2000), The Newcastle-Ottawa Scale (NOS) for assessing the quality of nonrandomised 7
8 9
studies in meta-analyses, "http://www.ohri.ca/programs/clinical_ epidemiology/nos_manual.pdf" World Health Organisation - The Uppsala Monitoring Centre (2012), WHO Adverse Reaction Terminology - WHO-ART
World Health Organisation (2015), Global tuberculosis report pp.66-73
World Health Organisation (2014), Companion handbook to the WHO guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis pp 8-9; 18; 76-86; 149; 152-165
10 Wu S., Zhang Y,, et al, (2013), "Adverse Events Associated With the Treatment of Multidrug-Resistant Tuberculosis: A Systematic Review and Meta-analysis", American journal of therapeutics, 23{2), pp 521-30 *Do khuơn khổ giới hạn số trang theo quy định của tạp chí, danh sách đây đủ các nghiên cứu: liên hệ nhĩm
tác giả để cĩ thơng tin chỉ tiết
Trang 9Nghiên cứu dược & Théing tin thuée 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
ES
we
BAI NGHIEN CUU
Loại bỏ ảnh hưởng nên tron phan tich ° 9 9 khúng sinh cloramphenicol bang cột súc g g »
ký úi lực miễn dịch ° e
Nguyễn Duc Thinh’2, Chu Phạm Ngọc Sơn3, Trần Linh Thước? "Viện Y tế Cơng cộng Thành phố Hồ Chí Minh, ?Trường Đại học Khoa học Tự nhiên (ĐHQG-HCM),
SUMMARY
*Trung tâm Sắc ký Hải đăng
Cloramphenicol is an banned antibiotic which is absolutely not permitted to present in food The currently analytical
methods for Cloramphenicol have many problem with complex samples In thịs article, we reported experimental results using
specific immunoaffinity chromatography column to remove matrix effect from fish, honey and animal feed The results showed JAC column could removed interference from complex matrix samples
Từ khĩa: cloramphenicol, cột sắc ký ái lực cloramphenicol, loại ảnh hưởng nên, thức ăn, LC-MS/MS
Đặt vấn đẻ
Cloramphenicol (CAP) là kháng sinh thường được sử dụng trong điều trị cho người cũng như động vật Mặc dù cĩ tác dụng điều trị trên nhiều loại vi khuẩn khác nhau nhưng cloramphenicol cũng cĩ nhiều ảnh hưởng xấu đến sức khỏe con người như suy tủy, tác nhân gây ung thư [4], [5] Vì vậy cloramphenicol là kháng sinh bị cấm tuyệt đối khơng được phép cĩ mặt trong thực phẩm ở bất kỳ hàm lượng nào [2] Để giám sát sự tồn dư của cloramphenicol trong thực phẩm người ta thường sử dụng phương pháp sắc ký lỏng kết ghép khối phổ (LC-MS/MS)I3], I4] Bên cạnh những ưu điểm về độ nhạy, độ chọn lọc, phương pháp sắc ký lỏng ghép nối khối phổ cũng cĩ những hạn chế khi sử dụng đối với một số nền mẫu phức tạp như mật ong hay thức ăn chăn nuơi do nhiễu nền hay suy giảm ion (ion suppression) dẫn đến làm
giảm độ nhạy cũng như độ chính xác của kết quả
phân tích Để xứ lý mẫu cloramphenicol người ta thường sứ dụng phương pháp chiết pha rắn với cột chiét Cis Loại cột này cĩ tính chọn lọc khơng cao, qui trình xử lý phức tạp dịch mẫu sau xử lý cịn chứa nhiều tạp chất ảnh hưởng đến quá trình phân tích trên khối phổ [3], [8] Để tăng hiệu quả quá trình xử
lý mẫu thực phẩm khi định lượng cloramphenicol cũng như giảm thiểu ảnh hưởng của nền mẫu, chúng tơi tiến hành nghiên cứu sử dụng cột tách chiết miễn dịch (IAC) cloramphenicol trong cơng đoạn xử lý mẫu với mục tiêu loại bỏ ảnh hưởng nền
mẫu qua đĩ nâng cao chất lượng quá trình phân tích
đảm bảo khả năng phát hiện cloramphenicol ở nồng
độ thấp (0,3 ppb) theo qui định châu Âu
Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu
Nguyên liệu
Chuẩn cloramphenicol (Supelco-442513), cột sắc ký ai luc cloramphenicol (IAC-Cloramphenicol) được sản xuất tại phịng thí nghiệm Viện Y tế Cơng cộng TP Hồ Chí Minh, NazHPOa.2HzO (1.06580), KH2PO4(104873), NaCl (166400), Methanol (106007) đều của hãng Merck, Đức và các hĩa chất tinh khiết phịng thí nghiệm khác
Thiết bị
Hệ thống sắc ký lỏng ghép khối phổ ba tứ cực (LC-MS/MS) Applied Biosystem Triple Quad 5500 va các thiết bị phịng thí nghiệm cơ bản khác
Mẫu thử
Mẫu thử nghiệm bao gồm mẫu cá thu, mật ong Việt Honey được mua tại siêu thị Coopmart; thức ăn
Trang 10Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
gia súc CP được mua tại cửa hàng thức ăn chăn nuơi Tồn bộ các mẫu được mua tại thành phố Hồ Chí Minh năm 2015
Phương pháp nghiên cứu
Khả năng loại bỏ tạp chất của cột sắc ký lAC được thực hiện bằng cách xác định tín hiệu của cloramphenicol thêm vào dịch nền mẫu đã được xử lý bằng cột IAC Nếu khả năng loại bỏ tạp chất tốt thì tín hiệu thu được sẽ cao và ổn định hơn qua đĩ sẽ nâng cao được kha nang phát hiện cloramphenicol trong mẫu Nền mẫu khảo sát bao gồm từ đơn giản như mẫu cá hay phức tạp như mẫu mật ong và thức ăn gia súc
Qui trình xử lý mẫu bằng cột IAC
Đồng nhất mẫu, cân 2 g mẫu, thêm vào 20 ml dung dịch đệm phosphat chứa muối (Phosphate Buffered Saline-PBS) lắc đều trên máy lắc khoảng 1 giờ, sau đĩ ly tâm 6000 vịng/phút trong 15 phút Lấy dịch nổi vào ống nhựa 50 ml sạch Nạp dịch mẫu vào cột IAC với tốc độ dịng 1ml/phút Tiếp tục rửa cột bằng 20 ml dung dịch PBS, tiếp theo là 20 ml nước Rửa giải cloramphenicol ra khỏi cột 02 lần, mỗi lần bằng 0,5 ml methanol Sau đĩ dịch nền mẫu này (1ml) sẽ được thêm chuẩn cloramphenicol và phân tich bang LC-MS/MS,
Phương pháp xác định cloramphenicol bằng LC-MS/MS
Cloramphenicol được phân tích bằng hệ thống sắc ký khối phổ ba tứ cực LC-MS/MS với các điều kiện: cột phân tích Acclaim RSLC (150 x 2,1 mm;
2,2 ym), pha dong methanol: nudc (50:50), tốc độ
dịng 0,5 ml/phút, thể tích tiêm mẫu 5 Hl Khối phổ sử dụng nguồn ion hĩa Turbo Spray (ESI), nhiệt độ nguồn ion hĩa 650°%C, tốc độ khí GS1 30, tốc độ khí GS2 40, tốc độ khí cắt đuơi CUR 20, điện thế ion hĩa -3500 V, điện thế đầu dị CEM 2200 V Chế độ đọc loại ion âm, MRM với mảnh định lượng m/z =152 (CE= -27V) và mảnh xác nhận m/z = 257 (CE= -15V) [8], [9] Thời gian phân tích 6 phút
Thẩm định phương pháp
Các thơng số đánh giá bao gồm độ chọn lọc, độ tuyến tính, giới hạn phát hiện, hệ số thu hồi, độ biến thiên và tý lệ ion Độ chọn lọc được đánh giá bằng cách so sánh mẫu trắng của cá, mật ong và thức ăn gia suc sau khi xử lý bằng cột IAC và chuẩn cloramphenicol Độ tuyến tính và giới hạn phát hiện được khảo sát dựa trên chuẩn cloramphenicol thêm
, 2
BÀI NGHIÊN CỨU «đê
vào dung dịch nền mẫu đã được xử lý bang cot IAC cĩ hàm lượng 0,5; 1; 2; 5 và 10 ng cloramphenicol/g mẫu Hệ số thu hồi được tính bằng cách so sánh tín hiệu của cloramphenicol trong dung dịch nền mẫu đã qua xử lý và trong dung dịch chuẩn Độ biến thiên được tính dựa trên các kết quả phân tích của cùng một nồng độ Giới hạn phát hiện được tính tốn dựa trên độ lệch chuẩn tại nồng độ thấp nhất của đường chuẩn [6] Các tiêu chí đánh giá dựa trên qui định của cộng đồng châu Âu về phân tích cloramphenicol (2002/657/ECQ) [1], [2]
Phương pháp xử lý số liệu
Giá trị đo trên LC-MS/MS được thực hiện bằng phần mềm Analyst phiên bản 1.5.2 Xử lý thống kê số liệu bằng phần mềm Microsoft Excel
Kết quủ nghiên cứu
Độ chọn lọc
Khả năng loại bỏ tạp chất nền của cột sắc ký ái lực được đánh giá bằng cách đối chiếu dung dịch nền của cá, mật ong và thức ăn gia súc sau khi qua cột IAC với mẫu chuẩn cloramphenicol 1ng/ml Kết quả khảo sát cho thấy các mẫu sau khi xử lý bằng cột IAC khơng xuất hiện các pic tap tại thời gian lưu của chuẩn ứng với mảnh cĩ m/z= 152 (hình 1 và 2) Như vậy quá trình xứ lý các nền mẫu trên bằng cột lAC đã loại bỏ hầu hết các tạp chất cĩ thể ảnh hưởng đến q trình phân tích chứa trong nền mẫu
Intens 6000 at 4000 1 2000 152 100 150 200 % 300 350 400 aft
Hình 1 Phổ phân mảnh của cloramphenicol chuẩn Tỷ lệ cường độ ion 257/ cường độ ion 152
Hiện nay trong phương pháp phân tích khối phổ qui định 2002/657/EC bắt buộc phải tính tốn tỷ lệ cường độ ion để đảm bảo tính chính xác của kết quả phân tích Kết quả khảo sát (Bảng 1) cho thấy tỷ lệ cường độ ion trung bình giữa cặp ion xác nhận (m/z=257) và ion định lượng (m/z=152) của
Trang 11Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
a
BÀI NGHIÊN CỨU €
m/¿=152 m/e=l52 (a) (b) m/z=152 (©)
cloramphenicol trén cac nén dung dich mau ca, mat ong và thức ăn gia súc trên dải nồng độ từ 0,5 ng đến 10 ng cloramphenicol⁄g mẫu dao động trong khoảng từ 0,64 đến 0,74 và sự biến thiên tý lệ ion trong cùng một nồng độ nhỏ hơn 10% (từ 0,0 đến 7,85%) Với tỷ lệ cường độ ion > 0,5 các nền mẫu khảo sát đều đạt yêu cầu về độ biến thiên tỷ lệ ion <20% theo qui định châu Âu
Bảng 1 Trị số tỷ lệ cường độ ion 257/cường độ
ion 152- CV% (n = 5)
Nơng độ Tỷ lệ cường độ ion 257/cường độ ion 152 ~ (CV%) doramphenic
ol nag mau) Mẫu tả Mẫu mật ong Mẫu thức ăn gia súc 05 0,65-(3,23) 0,67-(3,18) 0,69-(1,74) 1 0,64-(2,20) 0,70-(3,05) 0,70-(4,85) 2 0,69-(4,09) 0,66-(3,23) 0,65-(3,10) 5 0,73-(0,97) 0,68-(3,14) 0,66-(1,78) 10 0,72-(7,85) 0,66-(0) 0,65-(1,15)
Hình 2 Sắc ký đơ phân tich mdu béing LC MS/MS
Mẫu trắng nên cd (a), nên mật ong (b), nền thức ăn gia súc (c), chuẩn cloramphenicol 1ng/ml (d) Độ tuyến tính
Độ tuyến tính được xác định dựa trên mẫu bổ sung cloramphenicol trên khoảng nồng độ từ 0,5 đến 10 ng cloramphenicol/g mẫu Kết quả khảo sát cho thấy cĩ tương quan tuyến tính cao trong khoảng từ 0,5-10ng cloramphenicol/g mẫu với hệ số tương quan (R?>0,99) trên cả 3 nền mẫu khảo sát (hình 3)
Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng
Từ phương trình đường chuẩn và độ lệch chuẩn tín hiệu tại nồng độ thấp nhất của đường chuẩn (0,5 ng cloramphenicol/g mẫu), tính giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) đối với 3 nền mẫu trên (Bảng 2) Các kết quả khảo sát cho thấy phương pháp xác định đạt yều cầu về độ nhạy dùng để phát hiện cloramphenicol (0,3 ppb) theo qui định của EC
Hiệu suất thu hồi
Kết quả khảo sát (Bảng 3) cho thấy trong dải nồng độ từ 0,5 đến 10 ng cloramphenicol/g hiệu suất thu hồi đạt từ 91,41% đến 100,41%, độ biến thiên từ 3,19% đến 7,86% Mẫu mật ong cĩ hệ số thu
Trang 12Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
Bảng 2 Kết quả xác định LOD và LOQ của cloramphenicol
= ,
BÀI NGHIÊN CỨU 2“
trên nên mẫu
Nến Độ lệch chuẩn Phương trình Lop | Log ãuhg | S2)*210,5ng/9 hồi ui
mẫu tl (n=5) q (ng/g) | (na/g)
Miu ci 1160 y=123181x-45757 | 0,03 | 009 Mau mat ong 43 y=130385-2055 | 0/1 | 003 Mau TAGS 2320 y=1W8lx-3274 | 006 | 0,18
TAGS: Thức ăn gia súc
Chuẩn dựng trên nền cá của cặp ion 321/152 1.40E+08 y= 12318 -45757 120E+08 a R?=0.997 = 1.006 +06 8.00E+05 8.00E+05 4.00E+05 Tinhigu (cps) 2.00E+05 0.00E+00
Chuẩn dựng trên nên mật ong của cặp ion 321/152 140E+08 120E+08 % 100E408 a y = 13088 - 20455 R2= 0.995 Ÿ 800E+05 “ 3 2 Ế 800E405 : “ b ÊÊ 400E+05 ee đ) 200E+05 ` ô 0006400 T&-CT—————————— 0 2 4 6 8 10 Néng 46 chloramphenicol (ppb) (9) Néng độ chloramphen
Hình 3 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính giữa nơng độ cloramphenicol và diện tích pic (ion m/⁄z=152) đối với nên mẫu cá (a), mật ong (b) và thức ăn gia súc (c)
hồi từ 94,65% đến 125,67%, độ biến thiên từ 0,51%
đến 6,34%, trừ nồng độ 2 ng là 10,19% Mẫu thức ăn gia súc cĩ hệ số thu hồi từ 71,71% đến 90,19%, độ
biến thiên từ 1,70% đến 11,60%
Bàn luận
Hiện nay, ở nước ta chưa cĩ nghiên cứu nào về chế tạo cột IAC dùng để xác định kháng sinh trong thực phẩm Các cột lAC nhập ngoại thường cĩ giá thành cao (khoảng 300.000 đồng/cột) do đĩ khơng phù hợp với điều kiện của các phịng thí nghiệm Việc chế tạo cột lAC trong nước (được sản xuất tại phịng thí nghiệm Viện Y tế Cơng cộng Tp Hồ Chí Minh) sẽ giúp giảm giá thành (cịn khoảng 120.000 đồng/cột) do đĩ các phịng thí nghiệm sẽ dễ dàng tiếp cận hơn với phương pháp xử lý mẫu này
Kết quả nghiên cứu cho thấy trên nền mẫu cá và mật ong hiệu suất thu hồi của tín hiệu chuẩn lớn hơn
90% (từ 91,41% đến 100,41% cho cá và 94,65% đến
125,67% cho mật ong) Đổi với nền mẫu thức ăn gia súc mặc dù cột IAC đã loại bỏ được phần lớn tạp
chất, nhưng văn cịn một số tạp chất gây ảnh hưởng đến việc phân tích trên khối phổ Do đĩ, tỷ lệ thu hồi tín hiệu trên nền mẫu này chỉ đạt từ 71,71% đến 90,19%, thấp hơn hai nền mẫu cá và mật ong Độ biến thiên tín hiệu giữa các mẫu nhỏ hơn 10% và độ
Bảng 3 Hiệu suất thu hồi (H%) trên các nền mẫu của ion
(n=10)
Hàm lượng Mẫu dá Mẫu mậtong |Mẫu thứcăn giasúc|
Viên trang) He) trungbinh fW% | trungbình | (W% trung bình œ% Nữ) HO)
Trang 13Nghiên cứu dược & Thénng tin thuée 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
biển thiên của tỷ lệ ion cũng nhỏ hơn 10% Kết quả nghiên cứu cho thấy hệ số thu hồi của cột lAC do chúng tơi chế tạo cĩ hệ số thu hồi tương tự như cột IAC đã cơng bổ của tác giả Mackie là từ 84% đến 108% cho thủy sản và 83% đến 103% cho mẫu mật ong [7] Bằng việc sử dụng cột IAC quá trình xử lý mẫu đã được đơn giản hĩa nhiều chỉ cần làm đồng nhất mẫu, chiết bằng dung mơi và cho qua cột IAC, so với các qui trình phân tích trước đây phải tách chiết, làm sạch bằng cột C18, thổi khơ dung mơi, hồn nguyên chất phân tích Giới hạn phát hiện cũng như giới hạn định lượng cloramphenicol trong
LS
BAI NGHIEN CUU ©
các nền mẫu là khoảng 0,1 ppb tốt hơn các qui định trong nước và quốc tế (0,3 ppb) [2]
Kết luận
Sử dụng cột sắc ký ái lực miễn dịch IAC trong qua trình làm sạch mẫu để phân tích cloramphenicol đã loại bỏ ảnh hưởng của các tạp chất chứa trong các nền mẫu cá, mật ong và thức ăn gia súc Quá trình xử lý mẫu bằng cột IAC két hợp với phân tích trên sắc ký lơng khối phổ LC-MS/MS cho phép xác định chính xác sự hiện diện của cloramphenicol trong các loại mẫu trên phù hợp với các qui định của quốc tế
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 COMMISSION DECISION of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (2002/657/EC), Official Journal of the European Communities
COMMISSION DECISION of 13 March 2003 amending Decision 2002/657/EC as regards the setting of minimum required performance limits (MRPLs) for certain residues in food of animal origin, Official Journal of the European Communities
Douny C, Widart J, Pauw E, Maghuin-Rogister G and Scippo M-L (2013),’Determination of Cloramphenicol in honey, shrimp, and poultry meat with liquid chromatography—mass spectrometry: validation of the method according to Commission Decision 2002/657/EC’, Food Analytical Methods,6, pp.1458-1465, FAO/WHO (Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organization) (1995), “Toxicological evaluation of certain veterinary drug residues in food Cloramphenicol’, WHO Food Additives Series
FAO/WHO (Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organization) (2004), “Residues of some veterinary drugs in animals and foods Cloramphenicol’, FAO Food and Nutrition paper,
41(6), pp.1-12
Hubaux A., Vos G (1970) Decision and detection limits for linear calibration curves, Analytical Chemistry,
48, pp 849 -855
Mackie Ji, Marley E, Donnelly C (2013), “Immunoaffinity column cleanup with LC/MS/MS for the
determination of chloramphenicol in honey and prawns: single-laboratory validation’, Journal of AOAC International, 96 (4), pp.910-916
Renning HT, Einarsen K and Asp TN (2006), "Determination of Chloramphenicol residues in meat, seafood, egg, honey, milk, plasma and urine with liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and the validation of the method based on 2002/657/EC’, Journal of Chromatography A,1118, pp.226-233 Yiqing Yang, Qian Wang, Qiao Wang and Shijie Yan (2013), “Determination of Chloramphenicol Residual in Freshwater Fish by HPLC’, Advanced Materials Research, Vols 781-784, pp 1708-1711
Trang 14Nghiên cứu dược & Thơng tin thuée 2017, Tap 8, $6 1, trang 15-20
BAI NGHIEN cuuẾ
Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, ibuprofen và tạp C cua
ibuprofen bang phuong phap UPLC/DAD
Nguyễn Thị Ngọc Vân, Trần Thị Tiết Nghĩa Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ
SUMMARY
A reverse phase UPLC method was developed for simultaneous determination of paracetamol, ibuprofen and related impurity of ibuprofen Separation was complete in less than 10 min The mobile phase was a gradient mode of methanol - triethylamine in water, Two wavelengths were used 230 nm for paracetamol and ibuprofen; and 254nm for related impurity of ibuprofen All calibration curves showed good linear regression (r >0.999) within the concentration ranges of 5 - 60ug/mi for paracetamol, 5-100 g/ml for ibuprofen and 0.05-5yg/mi for impurity The RSDs of intra-day and inter-day were under 2% for paracetamol, ibuprofen and under 2.5% for impurity compound The LOD and LOQ of ibuprofen impurity were 0.03ug/ml and 0.05ug/ml, respectively The recovery of three compounds was 98-102%, The results of the studies showed that the proposed RP -UPLC method is simple, rapid, precise and accurate, which can be applied for the routine assessment of paracetamol, ibuprofen and impurity of ibuprofen in pharmaceutical dosage forms
Từ khĩa: UPIC, tạp chất liên quan, tạp C của Ibuprofen
Đặt vấn đẻ
Jbuprofen cĩ 5 tạp chất liên quan đã được cơng bố, bao gồm tap A: 2-(3-Isobutylphenyl) propanoic acid; tạp B; 2-(4-Butylphenyl) propanoic acid; tap C: 2-(4-Isobutylphenyl) propanamide; tap D: 2-(4-Methylphenyl) propanoic acid; tap E: 1-(4-Isobutylphenyl) ethanon Hiện tại chi cỏ tap B được quy định trong Dược điển Anh [3], trong đĩ quy định về phương pháp định lượng tạp B bằng phương pháp HPLC và mức giới hạn cho phép là
khơng quá 0,1 % Dược điển Mỹ quy định kiểm sốt
giới hạn cho tạp C với mức cho phép là khơng quá 0,25% trong 1 viên bằng phương pháp HPLC [10] và trong Dược điển Việt Nam IV đến nay thì chưa cĩ quy định về kiểm sốt giới hạn tạp ibuprofen trong thuốc Tạp C của ibuprofen được hình thành trong thời gian bảo quản của thuốc do đĩ nĩ được khuyến cáo cần kiểm sốt dư lượng tạp này trong suốt thời gian cịn hạn dùng của thuốc [5] Paracetamol (PARA) cĩ tác dụng hạ sốt và giảm đau, thường được phối hợp với thuốc giảm đau khác như ibuprofen (IBU) Trên thị trường, nhiều biệt dược cĩ chứa đồng thời hai hoạt chất trên như Alaxan, Lopenca, Aliaxon
Tuy nhiên trong DĐVN IV, Dược Điển Anh (BP 2015), Dược điển Mỹ (USP 38) vẫn chưa cĩ chuyên luận riêng định lượng đồng thời paracetamol, ibuprofen
và tạp C của ibuprofen, vì vậy để kiểm tra chất lượng
các phịng thí nghiệm phải áp dụng 2 hay 3 quy trình định lượng riêng biệt, gây tốn kém thời gian và chỉ phí Trên thế giới, cĩ nhiều cơng bố về định lượng đồng thời paracetamol và ibuprofen bằng phương phap HPLC [4], [B8] nhưng chưa cĩ nghiên cứu nào về định lượng đồng thời paracetamol, ibuprofen và tap €C của ibuprofen bằng HPLC được cơng bố Do đĩ, nghiên cứu này được thực hiện với mục tiêu phát
triển phương pháp và thẩm định việc định lượng
đồng thời 3 chất trên bằng phương pháp UPLC với việc sử dụng 2 bước sĩng trên đầu dị DAD, đồng thời ứng dụng quy trình đã xây dựng trong xác định hàm lượng paracetamol, ibuprofen và tạp C của một
số chế phẩm trên thị trường
Nguyên liệu và phương phúp nghiên cứu
Nguyên liệu
Viên nén Lopenca chứa 325 mg paracetamol và 200 mg ibuprofen của Cơng ty Cổ phần Dược Hậu Giang
Trang 15Nghién ctu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 15-20
Dung mơi, hĩa chất
Các chất chuẩn paracetamol QT009 150414, hàm lượng 99,84% và ibuprofen QT026 091113, hàm
lượng 99,76% của Viện Kiểm nghiệm Thuốc Tp Hồ
Chí Minh Tạp C của ibuprofen (tạp C) hàm lượng 99,4% của Sigma Aldrich, Mỹ Methanol (MeOH), acetonitril (MeCN), Triethylamin (TEA) loại HPLC của Merck, Đức
Thiết bị
May UPLC Acquity HCLASS Water, dau dd DAD
(Mỹ) Phần mềm xử lý số liệu MassLynx SCN 855
Phương pháp nghiên cứu
Điều kiện sắc ký
Khảo sát về thành phần pha động, tỷ lệ dung mơi, tốc độ dịng, chúng tơi xây dựng chương trình sắc ký như sau: cột UPLC BEH C› (2,1 x 100 mm, 1,7 um); tốc độ dịng: 0,2 ml/phút; bước sĩng 230 nm cho paracetamol và ibuprofen; bước sĩng 254 nm cho tạp C Thể tích tiêm mẫu 10 HÌ Pha động là hỗn hợp kênh A: MeOH; Kênh B: nước (TEA 0,01%, pH 7) với chương trình gradient:
Bang 1: chương trình gradient pha động
Thời gian (phút) MeOH Nước (TEA 0,01%, pH7)
025 2 9
25-45 50 50 45-19 98 0
Dung dịch chuẩn
Cân chính xác khoảng 325 mg chuẩn đối chiếu paracetamol, 200 mg ibuprofen và 0,5 ml tạp chuẩn €C của ibuprofen (1000 hg/ml), vào bình định mức 1000 ml Hịa tan và pha lỗng đến vạch bằng pha động Hút chính xác 10 ml hỗn hợp chuẩn vào bình định mức 100 ml, pha lỗng đến vạch bằng pha động Lọc qua màng lọc 0,45 um Hỗn hợp mẫu chuẩn cĩ nồng độ: paracetamol 32,5 g/ml, ibuprofen 20 Hg/m|, tạp chuẩn C 0,05 hg/ml tương ứng giới hạn cho phép trong viên của tạp C là 0,25% trong 1 viên [10]
Dung dịch thử
Xác định khối lượng trung bình của 20 viên nén Lopenca Nghiền mịn Cân chính xác một lượng bột thuốc tương ứng 1 viên, cho vào bình định mức 100 mi, thêm 0,5 ml tạp chuẩn C {1000 jig/ml) va them khoảng 20 ml pha động Siêu âm trong 15 phút, để nguội về nhiệt độ phịng, bổ sung pha động vừa đủ 100 ml, loc bd 20 ml dịch lọc đầu Hút chính xác 1 ml
BÀI NGHIÊN cuuẾ
dịch lọc, pha lỗng bằng pha động vừa đủ 100 mÌ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,45 pm
Thẩm định quy trình
Xác định độ phù hợp của hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ chính xác và độ đúng của phương pháp khi thêm 80-120% mẫu chuẩn vào mẫu thử theo hướng dẫn của ICH Q2A [6]
Kết quả nghiên cứu
Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký
Quét phổ hấp thụ UV trong khoảng 200 - 400 nm tại thời gian lưu của píc paracetamol, ibuprofen va tap € trên sắc ký đồ để lựa chọn bước sĩng mà tại đĩ tin hiệu các pic chính là cao nhất và đường nền ít bị nhiễu nhất, Kết quả cho thấy, tại bước sĩng 230 nm đường nền ít bị nhiễu bởi pic dung mơi và tín hiệu của 2 pic paracetamol và ibuprofen đều tốt, tuy nhiên tín hiệu pic tạp C của ibuprofen chưa đắp ứng cho định lượng tạp chất vì quy trình phân tích đồng thời hoạt chất chính và tạp chất liên quan cĩ mức giới hạn cho phép trong viên khơng quá 0,25% tương ứng 0,5 mg trong viên [10] Tại bước sĩng 254 nm, tín hiệu pic tạp C rất lớn (đạt yêu cầu cho phân tích tạp chất) nhưng tín hiệu của pic ibuprofen rất thấp Ở bước sĩng 230 nm kếthợp 254nm hinh dang pic paracetamol, ibuprofen va tap C cân đối; píc tách tốt (Rs > 1,5), tín hiệu tạp C là cao nhất Do đĩ chọn bước sĩng 230 nm kết hợp 254 nm dé phan tich 3 chất
Thực hiện sắc ký hỗn hợp 3 chất với hệ pha động
gồm 2 thành phần MeCN và dung dich amoni acetat
5 mM; MeCN: dung dịch acid acetic 0,25M với tỷ lệ thay đổi của MeCN từ 50- 80% (AC = 5%), tốc độ dịng
0,2 ml/phút Kết quả cho thấy với 2 hệ dung mơi này
pic paracetamol va ibuprofen khơng đổi xứng và pic tạp C lưu giữ khá lâu trong cột (trên 30 phút)
Thay đổi hệ pha động gồm 2 thành phần MeOH
và dụng dịch acid phosphoric 0,1M với tỷ lệ thay đổi của MeOH từ 50 - 80% (AC = 5%), tốc độ dịng 0,2 ml/phút Kết quả cho thấy với hệ dung mơi này cả 3 pic đều tách nhau tốt (Rs ~ 1,7) tuy pic paracetamol và ibuprofen cịn kéo đuơi Nếu sử dụng điều kiện này để định lượng đồng thời với tạp C của ibuprofen (0,5 mg trong viên tương ứng giới hạn cho phép trong viên khơng quá 0,25%), nồng độ của ibuprofen lớn gấp 400 lần nồng độ tạp trong viên, sẽ cĩ hiện tượng che phủ pic khi pic tạp (minor peak) cĩ thời gian lưu gần pic chính (major peak), do dé điều kiện này cũng khơng được chọn
Trang 16
Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 15-20
Từ kết quả trên cho thấy với tỷ lệ pha động lựa chọn ban đầu theo cách rửa giải đẳng dịng khơng phù hợp để tách tốt 3 chất trên Vì vậy chương trình rửa giải gradient tiếp tục được khảo sát, ảnh hưởng của nồng độ TEA (từ 0,01 đến 0,04%) và pH {khoảng pH từ 5-8) cũng được khảo sát TEA là một base hữu cơ được thêm vào pha động cĩ tác dụng cạnh tranh tương tác với PARA va IBU trén pha tinh, hạn chế liên kết hydro của chất phân tích với pha tĩnh, giúp các phân tử của cùng một chất được rửa giải cùng lúc (pic khơng bị kéo đuơi) Ở nồng độ 0,01% Rs cua pic ibuprofen va tap C > 7, dat yéu cầu và hình dang 3 pic déu dat (0,8< As< 1,5) Trong mơi trường acid (pH<7) khơng xuất hiện pic ibuprofen khi tiến hành phân tích trên 30 phút, Ở điều kiện pH=8, pic ibuprofen khơng tách ra pic
BÀI NGHIÊN CỨU
dung mơi và hình dạng pic đạt yêu cầu, cả 3 pic đều đạt các thơng số sắc ký, đường nền ít nhiễu nhất Do đĩ, pH phù hợp để tách đồng thời 3 chất là pH trung tính bằng 7
Như vậy đã lựa chọn được điều kiện sắc ký thích hợp định lượng đồng thời paracetamol, ibuprofen và tạp C của ibuprofen trong chế phẩm bằng phương pháp UPLC/DAD như đã trình bày trong phần phương pháp nghiên cứu Với điều kiện này thời gian lưu của paracetamol, ibuprofen và tạp C lần lượt là 5,44; 6,99 và 7,B7 phút, phù hợp cho quy trình phân tích thường quy với thời gian < 10 phút (hình 1)
Thẩm định quy trình
Độ phù hợp hệ thống
Độ phù hợp hệ thống được xác định bằng cách
tiêm 6 lần liên tiếp dung dịch chuẩn, Kết quả được
dung mơi pH=7, pic ibuprofen tách ra khĩi _ trình bày trong bảng 2 =— Name: HH CHUAN S0ppm 0,07 TEA PH 7
| TẠP © Diode Array
lbtank injection Rane 1722.87.55 Ta 3.161¢+006 HG PARACETAMOL ‘5.44 1219.44.74 se] 7.18 eu 6.99 "yh 6708.26 a) Sả8 wo 5 35 35 3 so 70 so mộc go
Sample Name: PA-IBU-TAPC Diode Array Jbtank injection Ge PARACETAMOL_ TAPS 2.1060+006 HG
‘5.49 7.09 8638113 +-| IBUPROFEN 7.04 SSO ——— 26126.28 5.34) © "do Trrrrtrrttrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrk tỏ 2ư 2 T5 510 So x
[Sample Name: PA-IBU-TAPC MAU THU- Diode Array
1005 PARACETAMOL TAPS 2.5a60+008
8350.90 fi
~ wwueRoreN 7.07 p | 7900 7960 26550.07 ES
5.16 sĩc (3) coo io 2o 30 áo So eo 0 BOO 1
Hinh 1 Sac ky d6 cia mau chudn va mau thử ở điều kiện sắc ký tối ưu (1) Hỗn hợp chuẩn 3 chất ở nồng độ 50 ag/ml, (2) Hỗn hợp chuẩn tương ng nồng độ/viên (PARA 32,5ug/mi; IBU 20 ug/ml; tạp C 0,05 ug/ml hay 0,25% trong viên), (3) Hỗn
hợp mẫu thử tương ứng nồng độ viên
Trang 17Nghiên iu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, Số 1, trang 15-20
Bảng 2 Kết quả khảo sát tính phù hợp hệ thống
(hấtphân taphít(n=6? ĐiệnHhpc Độphán Hệsố
tkh TB (RSDM) TB(RSD%) giải ining
Paracetarnol 539100) 116314 (0,18) — 225 1
Ibuprofen 7,02 (00) 59739 (0,88) 173 0,82
TapC 7,87 (0,0) 17448 {0,48) 672 142 Tính đặc hiệu
Các pic cĩ trong mẫu thử cĩ thời gian lưu tương ứng với các pic cĩ trong mẫu chuẩn, khi thêm một lượng chuẩn của ba chất phân tích vào mẫu thử thì cĩ sự tăng lên về chiều cao và diện tích đỉnh ở các pic cĩ thời gian lưu tương ứng với các pic cĩ trong mẫu chuẩn Sắc ký đồ của mẫu pha động và dung mơi pha mẫu khơng xuất hiện pic cĩ thời gian lưu trùng với thời gian lưu pic cia ba chấttrong hỗn hợp dung dịch chuẩn Điều đĩ chứng tơ quy trình phân tích đúng chất là paracetamol, ibuprofen va tap C
Tính tuyến tính
Tính tuyến tính của ba chất được xây dựng trên khoảng rộng, kết quả được trình bày ở bảng 3
BÀI NGHIÊN au
Bằng 3, Kết quả khảo sát tính tuyến tỉnh của PARA, IBU va tap C
(hấpphân — Nồngđộ Phương tình HỆ số tương quan
tíh (yim) hồi quy ứ)
Paracetamol 560 y = 2672,1x-6084,7 0/9995
Ibuprofen 5-100 YHT25A 272A 0/9898
Tap 0,05-5,00 y=9478 6816.1 0.9995
Trong khoang néng dé khao sát của mỗi chất, cĩ
sự tương quan tuyến tính chặt chẽ giữa nồng độ và
diện tích pic đáp ứng với hệ số tương quan xấp xỉ bằng 1 (r > 0,999)
Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng của tạp C Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) được xác định tại nồng độ mà ở đĩ tỷ lệ chiều cao của pic chất phân tích so với độ nhiễu đường nền là 2-3 và 10 lần Nồng độ LOD của tạp C là 0,03 à/ml, nồng độ LOQ của tạp C là 0,05 Hg/ml Giá trị LOD và LOQ thấp chứng tỏ phương pháp cĩ độ nhạy cao, cĩ thể sử dụng để định lượng tạp chất ở nồng độ giới hạn của tạp trong dược phẩm
he «4
Hình 2 Sắc ký đỗ (1) mẫu pha động, (2) mẫu chuẩn, (3) mẫu thử, (4) mẫu thử thêm chuẩn ở điều kiện sắc kỷ tối ưu
Trang 18Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tap 8, $6 1, trang 15-20
Độ chính xác
Tiến hành phân tích 6 mẫu độc lập, thực hiện 3 ngày liên tiếp Kết quả được trình bày ở bảng 4 Bằng 4, Kết quả khảo sát độ chính xác trung gian của PARA,
BÀI NGHIÊN au
định lượng 3 lần độc lập và lấy giá trị trung bình Kết quả được trình bày trong bảng 6
Bảng 6, Kết quả định lượng PARA, IBU và tạp C của ibuprofen trong chế phẩm trên thị trường
IBU và tạpC Hàm lượng thất phân tích trong chế phẩm"
Hàm lượng (%) ——————————————
thất phân tíh Ngàyi Ngày? Ngày3 Trngbìh - RSD% _— Wiuthit Paracetamol (mgbiên) — (mghiên) Ibuprofen a ¢(mg/vién
Paracetamal 10201003101 WIS 089 éngtyDHG ice saisaas79—wrsi2so—-<025%
Ibuprofen 9735 9665 S20 9730 1,62 pm
Tap 027 028 0250 0252 177 tgyA JỘ HR2HSM I6BI320 025%
——————————— 300,82:13,07 1842-34
Kết qua cho thấy độ lặp lại hàm lượng của mẫu {es 600101 3 "mm thứ trong 3 ngày liên tiếp cĩ RSD < 2% phương pháp —— ”
đạt độ chính xác theo AOAC (RSD <4%) cingtyB 4315 7BES AS I98,063AT 5 025%
Độ đúng bs an 319/64:445 — 1958223/58
Độ đúng của phương pháp được xác định bằng " 6 321232408 192,0423,54 - phương pháp thêm chuẩn, xác định giá trị phần trăm ——————————————————————————— tìm lại Cho lượng chuẩn tương ứng 80%, 100%, ciggyc | RR BBR
120% của nồng độ định lượng vào mẫu thử, xứ lý lê6806S - ° 317214423 139/01256
mẫu như đã trình bày trong phương pháp nghiên 9
cứu, ở mỗi mức nồng độ được thực hiện độc lập 3 mẫu riêng biệt Kết quả được trình bày ở bảng 5,
Bảng 5 Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp (n=3) Paracetamol Ibuprofen Tape
Micnơngiộ Ty timiai 06) RSD (96) tìm lại) RSD (%) tim lai (6) RSD (%) we We
80% 101,69 121 16118 067 9/67 205
1009 9853 110 IƠ4 122 10867 327 120% 9864 042 10/13 001 T017 2,61
Trung bình 99,61 176 (18158 1/03 1025 0334
Tỷ lệ tìm lại ở các mức của paracetamol và ibuprofen đều nằm trong khoảng 98-102% véi RSD đều < 2% Riêng tạp C của ibuprofen cĩ hàm lượng nhỏ trong cơng thức (giới hạn cho phép < 0,25% trong viên) tương ứng nồng độ 0,05 Hø/ml trong dung dịch định lượng nên tỷ lệ tìm lại trung bình đạt 102,5% cho thấy phương pháp định lượng tạp vẫn đạt yêu cầu về độ đúng theo ICH (92-105%)
Ứng dụng định lượng
Ứng dụng quy trình đã xây dựng và thẩm định
vào định lượng 3 chất trong viên nén Lopenca và 9 mẫu chế phẩm trên thị trường, trong đĩ thuốc của cùng cơng ty và cùng lơ sản xuất được mua ở 3 nhà thuốc khác nhau Mỗi mẫu thuốc được tiến hành
25 19632+248 - 7: giá trị trung bình + SD (n=3)
*®% Khơng phát hiện
Bàn luận
Trên thế giới, đã cĩ một số nghiền cứu sử dụng HPLC để định lượng các đồng thời 2 chất chính
paracetamol va ibuprofen [4], [8] điều kiện sắc ký sử dụng thường dùng các hệ đệm phosphat Các hệ đệm vơ cơ này nếu sử dụng thường xuyên và khơng
rửa hệ thống sắc ký đúng quy cách sẽ gây đĩng muối
làm hư hỏng thiết bị, gây sai lệch kết quả phân tích So với nghiên cứu của Detlef Wilhelm [9] năm 2010, thực hiện định lượng đồng thời ibuprofen và 5 tap của nĩ bằng phương pháp HPLC sử dụng hệ pha động hỗn hợp acetonitril và acid phosphoric với chương trình gradient pha động, bước sĩng phát
hiện 214 nm, tách đồng thời 6 pic với tổng thời gian
phân tích là 40 phút Nghiên cứu của chúng tơi cĩ ưu điểm là thời gian phân tích ngắn hơn (<10 phút)
Quy trình định lượng đồng thời 2 chất
paracetamol, ibuprofen và tạp chất liên quan C của ibuprofen bằng phương pháp UPLC được cơng bố lần đầu tiên Nghiên cứu sử dụng pha tĩnh là cột C¡; và pha động là hỗn hợp methanol và triethylamin
0,01% trong nước Đây là các điều kiện phân tích sắc ký lỏng rất cơ bản và cĩ thể dễ dàng áp dụng Chế
độ gradient đã được nghiên cửu nhằm tách được đồng thời chất và tạp chất đồng thời đưa điều kiện
Trang 19Nghiên cứu dược & Thơng tìn thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 15-20
pha động về trạng thái ban đầu để phân tích các mẫu tiếp theo Kết quả xây dựng phương pháp cho
thấy, các chỉ tiêu thẩm định đáp ứng tiêu chuẩn của
ICH với thời gian phân tích ngắn (10 phút), cĩ giá trị LOD của tạp C (0,03ùg/m)) và LOQ (0,05ug/ml) bằng với giới hạn cho phép của tạp C theo quy định của
Dược điển Mỹ, do đĩ phương pháp cĩ thể ứng dụng kiểm tra giới hạn tạp C trong chế phẩm
Quy trình phân tích đã được sử dụng định lượng paracetamol, ibuprofen va tap C của ibuprofen trong viên nén Lopenca và 9 mẫu chế phẩm trên thị trường Kết quả định lượng paracetamol, ibuprofen
trong chế phẩm theo quy định Dược điển Việt Nam
IV cho thấy viên nén Lopenca và 9 mẫu chế phẩm đều đạt hàm lượng ghỉ trên nhãn Kiểm tra giới hạn tap C của ibuprofen theo quy định Dược Điển Mỹ
BÀI NGHIÊN cuuẾ ˆ
(USP 36) trong viên Lopenca và 9 mẫu chế phẩm cho thấy các chế phẩm này đều đạt yêu cầu về giới hạn đối với chỉ tiêu tạp C (< 0,25%), [10]
Kết luận
Bằng phương pháp UPLC với việc sử dụng 2 bước sĩng trên đầu dị DAD, đã xây dựng được qui trình định lượng đồng thời paracetamol, ibuprofen và tap € của ibuprofen Phương pháp cĩ tính đặc hiệu, đúng và chính xác, đã ứng dụng quy trình để định lượng 9 mẫu chế phẩm trên thị trường chứng tỏ phương pháp cĩ tính khả thi cao Phương pháp này
cĩ thể triển khai để đồng thời định lượng
paracetamol, ibuprofen và xác định giới hạn tạp C
của ibuprofen trong kiểm nghiệm các chế phẩm
chứa hai hoạt chất paracetamol, ibuprofen lưu hành trên thị trường
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Hội đồng Dược điển (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất bản Y hoc, tr 841-842
AOAC (2012), Guidelines for Standard Method Performance Requirements British Pharmacopoeia (2013), pp 3128 - 3135, 4548 - 4552
2 3
4, Boyka G Tsvetkova, Ivanka P Pencheva, Alexander B, Zlaykov, Plamen T Peikov (2012),“Development and
validation of RP-HPLC method for simultaneous determination of paracetamol and ibuprofen in fixed dose combinations’, int J Pharm Sci Rev Res., 16(1), pp.13-16
Higgins J.D., Gilmore T.P, Martellucci $.A., Bruce R.D (2001), “Analytical Profiles of Drug Substances and Excipients’, vol 27, Academic Press, New York,
ICH (2005), Validation of analytical procedures: Text and Methodology Q2{R1)
Sarowar J., Jahirul |., Begum r., Kayesh r,, and Rahman A (2014), “A study of method development, validation, and forced degradation for simultaneous quanlitification of paracetamol and ibuprofen in pharmaceutical dosage form by RP-HPLC method", Analytical Chemistry Insights, pp.75-81
Samson D,, Israel K., Chaitanya K., Gowri D S., Vijayalakashmi A (2013), “Method development and validation for simultaneous determination a multiple drug dosage from of paracetamol, ophenedrine, ibuprofen by RP-HPLC” Journal of Global in Pharmaceutical Sciences, pp 1153-1162
Wilhelm D (2010), “Development and validation of an HPLC method to analyze ibuprofen and impurities according to the European Pharmacopoeia’, Agilent Technologies inc
10 United States Pharmacopoeia USP38, ban online
Trang 20Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, Số 1,trang 21-25
= dl
BÀI NGHIÊN CỨU Š-
Tổng hợp va thi tác dụng ức chế enzym glutaminyl cyclase của một số dán chốt pyrimidin cua N-(5-methyl-1H-imidazol-
1-yl) propyl-N’-(3-methoxy-4-alky-
loxyphenyl}thiouren
Trần Phương Thảo", Trần Thị Thu Hiền? "Trường Đại học Dược Hà Nội, ?Học viện Y Dược học Cổ truyền Việt Nam SUMMARY
Glutaminyl cyclase (QC) is an important target for the design of anti-Alzheimer agents 1-(3,4-Dimethoxyphenyl)-3- (3-(5-methyl-1H-imidazol-1-y))propyl)thiourea is an established QC inhibitor in this study, a series of new N-(5-methyl- 1H-imidazol-1-yl)propyl-N’-(3-methoxy-4-alkyloxyphenyl)thiourea incorporating pyrimidine ring were designed,
synthesized and evaluated for QC inhibition The compounds were obtained via 5 or 6 steps with well-known reactions
Three of four compounds synthesized showed higher potency (ICso values of 18.4-21.3 {4M) compared to compound 7 UCs0 value of 29.2 uM )
Từ khĩa: N-(5-methyl-1H-imidazol-1-yl)propyl, pyrimidin, thiourea, tie ché glutaminyl cyclase
Đặt vấn đẻ
Glutaminyl cyclase (EC 2.5.2.3, QC) la mot enzym xúc tác cho quá trình đĩng vịng nội phân tử các glutaminyl đẩu gắn với nitơ thành acid pyroglutamic Các nhà khoa học đã chứng minh rằng ức chể enzym QC sẽ ngăn cản quá trình tạo ra các acid pyroglutamic, làm giảm sự tạo thành các xơ và các đám xơ rối - nghỉ phạm gây nên sự hủy hoại tế bào và tổn hại mơ trong não bị bệnh
Alzheimer [21, [5], [8]
Hiện nay, chất 1 (hình 1) do các nhà khoa học thuộc Cơng ty Probiodrug (Đức) tìm ra, được chọn là một chất dẫn đường trong nghiên cứu và phát
triển các chất ức chế QC hướng điều trị bệnh
Alzheimer Dựa trên cấu trúc của cơ chất (H-Gln- Phe-Arg-NH;) và chất dẫn đường 1, cấu trúc của các chất ức chế QC được chia làm ba phần: phần A, chứa 5-methylimidazol liên kết với kẽm; phần B cĩ
chứa liên két cho hydro; phan C cĩ cấu trúc thân dầu (hình 1) [3]
Các nghiên cứu đã cho thấy hợp chất của
pyrimidin cé vai trị quan trọng trong phát triển thuốc mới điều trị nhiều loại bệnh như lao, nhiễm khuẩn, nhiễm nẩm, nhiễm virus, ung thư, [9]
Tiếp tục hướng nghiên cứu thay thể nhĩm 4-methoxyphenyl ở phan C trong cẩu trúc của chất dẫn đường † bằng các mạch dài hơn nhằm tầng tính
ky nước cho các chất tạo thành [1], kết hợp với phổ tác dụng sinh học rộng đã được biết đến của pyrimidin; nghiên cứu này được thực hiện với mục tiêu là tổng hợp được 4 dẫn chất N-(5-methyl-1H- imidazol-1-yl)propyl-N’-(3-methoxy-4-
alkyloxyphenyl) thiourea mới với cầu nối alkyl ở phần € gồm 3 hoặc 4 carbon cĩ gắn nhân pyrimidin (hình 1) và thử tác dụng ức chế enzyme QC của các chất
tổng hợp được
Trang 21Nghiên du dược &Thơng tín thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 21-25
R=-H, -NH, n=1,2
Gấu trúc chung cúa các dẫn chất moi dude thiét kế
Hình 1 Cấu trúc của cơ chất, chất dẫn đường 1 và cấu trúc chung của các dẫn chất mới được thiết kế
Nguyên vật liệu và phương phúp nghiên wu
Nguyên vật liệu
Sắc ký lớp mỏng thực hiện trên bản mỏng silica gel 60Fzsa (Merck) và quan sát dưới đèn UV, bước sĩng 254nm Nhiệt độ nĩng chảy được đo bằng máy Buchi B-540 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân được ghi trên mảy JEOL JNM-LA 300 hoặc máy Bruker Analytik, DE/AVANCE Digital 400, với TMS lam chat chuẩn nội, độ dịch chuyén héa hoc (6) được báo cáo theo số liệu ppm Phổ khối được đo trên mảy VG Trio-2 GC-MS bằng kỹ thuật bắn phá nhanh bằng nguyên tử (FAB), Hĩa chất, dung mơi được mua từ
các nhà cung cấp (Cơng ty hĩa chất Aldrich, Merck,
Acros) với độ tinh khiết trên 98% và sử dụng khơng qua tinh chế
Phương pháp nghiên cứu Tổng hợp hĩa học
2-{Di-boc-amino)-5-bromopyrimidin (4) được tổng hợp từ 2-amino-5-bromopyrimidin qua phần ứng gắn nhĩm thế bảo vệ Boc như sau: hịa tan 522 mg (3 mmol) 2-amino-5-bromopyrimidin vao 10 ml dicloromethan (DCM) trong binh cau day tron dung
tich 50 ml; thém 0,5 ml (3,6 mmol) triethylamin (EtsN)
và 1,3 g (6 mmol) di-tert-butyl dicarbonat (Boc20)
BAI NGHIEN au
trong DCM vao trong hén hgp phan ứng Khuấy hỗn hợp ở nhiệt độ phịng trong 24 giờ Kết thúc phản ứng, thêm nước vào, chiết bằng DCM (3 lần), gộp dịch chiết, làm khan bằng Na;SOx và cất quay loại hết DCM thu được sản phẩm (chất 4) ở dạng lỏng, màu vàng nhạt [4]
Các nitro thơm 13-16 được tổng hợp theo sơ đồ
trong hình 2 qua 3 bước như sau:
Bước 1: Hịa tan 5-bromopyrimidin [2) hoặc 2- (di-Boc-amino)-5-bromopyrimidin (4) (2 mmol) vào 10 ml DCM trong bình cầu 3 cổ dung tích 100 ml, thêm đồng iodid (Cul, 20 mg, 0,1 mmol), tetrakis (triphenylphosphin) paladi (0) (Pd(PPhs)s, 116 mg, 0,1 mmol), EtsN (6 mmol) và propargyl alcol (đối với chất 5, 7) hoặc 3-butyl-1-ol (đối với chất 6, 8) (4 mmol) Gia nhiệt phản ứng đến 50°C và khuẩy trong vịng 24 giờ Xử lý phản ứng bang cach thém 30 ml ethyl acetat (EtOAC); lọc băng phễu lọc xốp G4, rửa bằng dung dịch NH:C] bão hịa (2 lần) Chiết hỗn hợp dịch lọc thu được bằng EtOAc, rửa bằng dung dịch nước muối bão hịa, làm khan bằng NazSOx và cất quay loại hét EtOAc, tinh ché bang sac ký cột (hệ dung mơi EtOAc:n-hexan = 1:6) thu được sản phẩm tinh khiết 5-8 dạng rắn, màu vàng nhạt
Bước 2: Hịa tan chất 5-8 (1 mmol) trong 10 ml methanol (MeOH), thém 10% paladi trong carbon (20 mg), khử hĩa bằng khí hydro, ở nhiệt độ phịng, sau 24 giờ phản ứng kết thúc Lọc, loại paladi qua Celite, rửa bằng MeOH (3 lần), gộp dịch lọc, cất quay loại MeOH thu được các alkyl tương ứng 9-12
Bước 3: Hịa tan 4-nitroguaiacol (136 mg; 0,8 mmol) vao 3 ml DCM trong binh cầu đáy trịn dung tich 50 ml, thém triphenylphosphin (PPh, 263 mg, 1 mmol), chat 5-8 (1 mmol) va 2 ml dung dich diethyl azodicarboxylat (DEAD, 174 mg, 1 mmol) trong DCM Khuấy hỗn hợp phản ứng ở nhiệt độ phịng trong 2 giờ Kết thúc phản ứng, tỉnh chế bằng sắc ký cột (hệ dung mơi EtOAc:n-hexan = 1:8) thu được sản phẩm tỉnh khiết 13-16 dạng rắn, màu vàng nhạt (hình 2)
Các chất cuối 21, 22, 25, 26 được tạo ra từ các nitro thơm 13-16 qua 2 hoặc 3 bước theo sơ đồ trong hình 3 Đầu tiên, các nitro thơm 13-16 được khử hĩa bằng khí hydro, xúc tác là paladi trong carbon ở nhiệt độ phịng trong vịng 24 giờ để tạo thành các amin thơm tương ứng 17-20 Các amin này tham gia vào phan ứng cộng hợp thiourea với 3-(5-methyl-1H- imidazol-1-yl)propan-1-amin (1,1 đương lượng mol) I6], xúc tác là 1,1-thiocarbonyldiimidazol (TCDI; 1,02 đương lượng mol), trong mơi trường kiểm (Et:N, 1
Trang 22Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $6 1, trang 21-25 fal PT ho “Tf | | DCM, nhiệt độ phịng, 24 giờ Dor ah hp “ly “hy BÀI NGHIÊN au 2| VỊ toy Aa Als) PD
Tác nhân va diéu kién phan tng: (a) Cul, Pd{PPhs)s, triethylamin (EtsN), DCM, 50°C, 24 gid, (b) Pd/C, MeOH, H2, nhiệt độ
phịng, 24 giờ; (c) 4-nitroguaiacol, DEAD, PPh›, DCM, nhiệt độ phịng, 2 giờ; (d) di-rerr-butyl dicarbonat ((Boc)20), EtsN, (J
JOP
i HER SPAR TE FE
Hình 3 Sơ đồ tổng hợp các chất cuối (21, 22, 25, 26)
Tác nhân và điêu kiện phân ứng: (a) Pd/C, MeOH, He, nhiét dé phdng, 24 gids; (a) 3-(5-methyl-1H-imidazol-1-yl)propan-1-
amin, TCDI, EtsN, DCM, 25-40°C, 24 gid; (b) TFA, DCM, nhiệt độ phịng, 2 giờ
đương lượng mol) tạo ra 4 chất, trong đĩ chất 21 va 22 là hai chất cuối Chất 23, 24 sau khi tách loại nhĩm bảo vệ Boc bằng acid trifluoroacetic (TFA) trong DCM, ở nhiệt độ phịng trong vịng 2 giờ thu được hai chất
cuối 25 và 26
Thử tác dụng ức chế enzym Glutaminyl cyclase Thứ tác dụng ức chế enzym QC được thực hiện tại Khoa Dược, Đại học Quốc gia Seoul, Hàn Quốc và Cơng ty Medifron DBT, Hàn Quốc, Tác dụng ức chế QC của các chất tổng hợp được xác định bằng phương pháp huỳnh quang [7], gia tri ICso được tinh dựa trên kết quả thu được sau 3 lần tiến hành thí nghiệm độc lập so sánh với IC50 của chất dẫn đường 1
Kết quả nghiên cứu
Tổng hợp hĩa học
Chúng tơi đã tổng hợp được 4 dẫn chất pyrimidin
của _ N-(5-methyl-1H-imidazol-1-yl)propyl-N'-(3- methoxy-4-alkyloxyphenyl)thiourea
Hợp chất 21: 1-(3-methoxy-4-(3-(pyrimidin-5-
yl)propoxy)phenyl)-3-(3-(5-methyl-1H-imidazoi-1-
yl)propyl)thiourea
Chất rắn, màu trắng, khổi lượng là 76mg, hiệu
suất 66% (tính theo amin 17), nhiệt độ nĩng chảy
298-299°C, Ri = 0,54 (DCM/MeOH = 9/1) "H-NMR {400 MHz, CD:OD); 6 8,97 (s, 1H); 8,69 (s, 2H); 7,58 (d, J=0,68 Hz, 1H); 6,93-6,91 (m, 2H); 6,76 (dd, J: = 8,52 Hz, J2= 2,40 Hz, 1H); 6,66 (br, 1H), 4,03 (t, J = 3,84 Hz, 2H); 3,99 (t, J = 7,28 Hz, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,61 (t, J = 6,92 Hz, 2H); 2,91 (t, J = 7,36 Hz, 2H); 2,21 (d, J = 0,72 Hz, 3H); 2,17 (quintet, J = 6,08 Hz, 2H); 2,07 (quintet, J = 7,16 Hz, 2H) FAB-MS m/z: 441 [M+HI*
Hợp chất 22: 1-(3-methoxy-4-(4-(pyrimidin-5-
yl)butoxy)phenyl)-3-(3-(5-methyl-1H-imidazol-1- yl)propyl)thiourea
Chất rắn, màu trắng, khối lượng là 58mg, hiệu suất 48% (tính theo amin 18), nhiệt độ nĩng chảy 104-105°C, Rr = 0,56 (DCM/MeOH = 9/1) 'H-NMR (300 MHz, CDsOD): 6 8,97 (s, 1H); 8,70 (s, 2H); 7,59 (s, 1H); 6,94 (d, J = 8,58 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 2,22 Hz, 1H); 6,75 (dd, Jr = 8,43 Hz, Jo = 2,37 Hz, 1H); 6,66 (br, 1H); 4,05 (t, J = 5,67 Hz, 2H); 3,99 (t, J = 7,32 Hz, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,61 (t, J = 6,78 Hz, 2H); 2,79 (t, J = 6,93 Hz, 2H); 2,21 (d,J= 0,72 Hz, 3H); 2,07 (quintet, J= 7,14 Hz, 2H); 1,85-1,83 (m, 4H) FAB-MS m/z: 455 [M+HI* Hop chdt 25: 1-(4-(3-(2-aminopyrimidin-5-yl) propoxy)-3-methoxyphenyl)-3-(3-(5-methyl-1H- imidazol-1-yl)propyl)thiourea
Chất rắn, màu trắng, khối lượng là 67mg, hiệu suất 45% (tính theo chất 23), nhiệt độ nĩng chảy 88-89°C, Rr = 0,42 (DCM/MeOH = 9/1) "H-NMR (300 MHz, CD:OD): õ 8,15 (s, 2H); 7,58 (s, 1H); 6,94-6,91 (m, 2H); 6,75 (d, J: = 8,43 Hz, J2= 2,37 Hz, 1H; 6,66 (br,
Trang 23Nghiên du dược &Thơng tín thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 21-25 TH); 4,00-3,94 (m, 4H); 3,82 (s, 3H); 3,62 (t,J= 7,14Hz, 2H); 2,69 (t,./ = 7,14 Hz, 2H); 2,21 (d, J = 0,90 Hz, 3H); 2,05-2,01 (m, 4H) FAB-MS m/z: 456 [M+HỊ' Hop chất 26: 1-(4-(4-(2-aminopyrimidin-5-yl) butoxy)-3-methoxyphenyl)-3-(3-(5-methyl-TH- imidazol-1-yl)propyl)thiourea
Chất rắn, màu trắng, khối lượng là 82mg, hiệu suất 77% (tính theo chất 24), nhiệt độ nĩng chảy 74-75°C, Rr = 0,45 (DCM/MeOH = 9/7) '!H-NMR (300 MHz, CDCls): & 8,13 (s, 2H); 7,87 (s, 1H); 7,55 (s, 1H); 6,84 (d, J = 8,25 Hz, 1H); 6,75-6,71 (m, 3H); 6,24 (br, 1H); 4,98 (br, 2H); 4,04 (t, J = 6,03 Hz, 2H); 3,94 (t,J= 7, 14 Hz, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,67 (q, J = 6,60 Hz, 2H); 2,55 {t, J = 7,53 Hz, 2H); 2,18 (d, J = 0,93 Hz, 3H); 2,09-2,01 {m, 2H); 1,88-1,71 (m, 4H) FAB-MS m/z: 470 [M+HỊ' Két qua thử hoạt tính ức chế QC Kết quả thử tác dụng ức chế QC của các dẫn chất 21, 22, 25 và 26 được trình bày trong bảng 1
Bảng ï Tác dụng ức chế QC của các dẫn chất pyrimidin tổng hợp được § XÃ H
sm | chit " R Hse (ny
1 bài 1 H 35,5 2 2 2 H 213 3 25 1 NH 205 4 26 2 NH BA thất dẫn đường}? co | wp
1Nồng độ ức chế 50% sự phát triển của tế bào ?Chất dẫn đường 1, chất đối chiểu dương tính
Bùn luận
Bốn dẫn chất pyrimidin của N-(5-methyl-1H- imidazol-1-yl)propyl-N’-(3-methoxy-4- alkyloxyphenyl) thiourea mới với cầu nối alky]l ở phần C gồm 3 hoặc 4 carbon thay thế nhĩm 4-methoxyphenyl 6 phan C trong cơng thức cấu tạo của cơ chất và chất dẫn đường 1 (hình 1) đã được tổng hợp theo quy trình qua 5 hoặc 6 bước Bước đầu tiên là phản ứng Sonogashira giữa các dẫn chất pyrimidin bromid (2, 4) với propargyl alcohol hoặc 3-butyl-1-ol trong mơi trường kiểm (Et:N), xúc tác là Cul và Pd(PPh›)z) ở 50°C để tạo ra các alkyn 5-8 Bước
BÀI NGHIÊN cuuế ˆ
2, phản ứng khửhĩa bằng khí hydro các alkyn thành alky] 9-12 tương ứng với xúc tác là 10% paladi trong carbon, phần ứng tạo ra các alken trung gian, tiếp đĩ các alken được khử hĩa thành các alkyÌ tương ứng Bước 3 là phản ứng Mitsunobu giữa 4-nitroguaiacol với các 5-(hydroxyalkyl)pyrimidin (9-12) trong DCM, xúc tác là DEAD và PPhs, phản ứng xảy ra nhanh (2 giờ) và dễ dàng ở nhiệt độ phịng cho các phenyl ether 13-16 với hiệu suất cao Bước 4 là phản ứng khử hĩa các nitro thơm 13-16 thành các amin thơm 17-20 với điều kiện tương tự như bước 2, tuy nhiên phần ứng xảy ra dễ dàng với hiệu suất cao hơn phản ứng khử các allkyn thành alkyl do khơng tạo thành các alken trung gian Phản ứng cộng hợp thiourea với chất xúc tác đặc hiệu TCDI trong mơi trường kiểm (EtsN) cho các thỉourea tương ứng 21-24 Việc tách loại nhĩm bảo vệ Boc ở chất 23, 24 bằng một acid mạnh (TFA) tạo thành các amin bậc nhất 25, 26 trong thời gian ngắn (2 giờ)
Nhiệt độ nĩng chảy của các chất cuối {21, 22, 25,
26) đều cĩ khoảng dao động từ 1 - 2°C, điều này chứng tỏ các chất tổng hợp được đều tinh khiết Trên phổ 'H-NMR của các chất thấy xuất hiện các tín hiệu đặc trưng của vịng pyrimidin khơng cĩ nhĩm thế (tín hiệu singlet xuất hiện ở õ 8,97 ppm tương ứng với 1 proton và tín hiệu singlet xuất hiện & 6 8,69; 8,70 ppm tương ứng với 2 proton), vịng pyrimidin với nhĩm thế amino ởyị trí para (tín hiệu singlet xuất hiện ở ð 8,15 và 8,13 ppm tương ứng với 2 proton), vong phenyl va mach alkyl (propyl, butyl) Phé MS của các chất đều cho pic giả phân tử m/z [M+ HỊ'
Như vậy qua dữ liệu phổ 'H-NMR và phổ MS cho
phép xác định cấu trúc của các chất cuối là đúng như dự kiến
Các chất sau khi khẳng định cấu trúc được đánh giá tác dụng ức chế QC bằng phương pháp huỳnh quang [7] Kết quả trình bay 6 bang 1 cho thấy cả 4
chất tổng hợp được đều cĩ tác dụng ức chế QC
mạnh, với lCzo từ 18,4 đến 35,5 nM So sánh với chất đối chiếu dương tính 1 và các chất cĩ cấu trúc tương tự đã được cơng bố trước đây [1], thì các chất 21, 22,
25, 26 được thiết kế cầu nối alky| dài hơn nhằm làm
tăng tính ky nước; thêm vào đĩ pyrimidin cĩ chứa 2 nitơ - nguyên tố giàu điện tử, cĩ thể tham gia vào các liên kết hydro với các acid amin khác trong vùng hoạt động của enzym, từ đĩ dự đốn cĩ thể tăng tác dụng ức chế enzym QC Kết quả thử tác dụng ức chế QC in vitro (bang 1) cho thấy chất 21 (cầu nối alkyl cĩ 3 carbon gắn với nhân pyrimidin khơng cĩ nhĩm
Trang 24Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $6 1, trang 21-25
thể) cĩ tác dụng ức chế QC yếu hơn chất đối chiếu dương tính 1; trong khi đĩ, các chất 22, 25, 26 kéo dai mach alkyl thanh 4 carbon hoặc gắn nhĩm thể amino (NH;) vào vị trí para trên vịng pyrimidin cho tác dụng mạnh hơn chất 1 Cĩ thể, việc kéo dài cầu nối alky| với 4 carbon và/hoặc gắn vịng pyrimidin với nhĩm thế đẩy điện tử (-NH;) cĩ liên quan tới sự tăng hoạt tính ức chế enzym QC Vì vậy, trong các nghiên cứu tiếp theo cấu trúc của các chất sẽ được
tiếp tục thay đổi theo hướng tương tự để tìm ra mối
liên quan mang tính quy luật giữa cấu trúc và tác dụng ức chế QC của các chất tạo thành
Kết luận
Chúng tơi đã tổng hợp thành cơng 4 hợp chất
pyrimidin với bộ khung N-(5-methyl-1H-imidazol-1- y))propyl-N-{3-methoxy-4-alkyloxyphenyl)thiourea qua 5 hoặc 6 bước, bằng các phản ứng hĩa học thơng thường như: Sonogashira, Mitsunobu, khử
BÀI NGHIÊN cuuẾ ˆ
hĩa, cộng hợp thíourea, tách loại nhĩm bảo vệ Boc
Cấu trúc của các chất tổng hợp đã được khẳng định
bằng các phương pháp H-NMR, MS và độ tinh khiết được kiểm tra thơng qua đo nhiệt độ nĩng chảy Các chất tổng hợp được cĩ tác dụng ức chế enzym QC với lCzo từ 18,4 đến 35,5 nM; 3 trong 4 chất (22, 25,
26) cĩ tác dụng ức chế QC tốt hơn chất đối chiếu
dương tính 1 Lời cảm ơn
Để tài được hồn thành nhờ một phần kinh phí từ Chương trình Phịng Nghiên cứu trọng điểm Quốc gia, Bộ Khoa học và Cơng nghệ Hàn Quốc (NRF-2014M3A9D9069725) Các tác giả xin chân thành cảm ơn G5 Lee.Jeewoo, Khoa Dược - Đại học Quốc gia Seoul, Hàn Quốc và Cơng ty Medifron DBT, Hàn Quốc đã giúp thử tác dụng ức chế enzym QC của các chất trong bài báo
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Trần Phương Thảo, Phạm Thế Hải, Hồng Văn Hải (2016) "Thiết kế, tổng hợp các dẫn chất dị vịng của N-(3-methoxy-4-aminoalkyloxyphenyl) thiourea mới hướng tới thử tác dụng ức chế enzym Glutaminyl cyclase trong diéu trị bệnh Alzheimer” Tap chỉ Nghiên cứu Dược và Thơng tin thuốc tập 7, số 4+5, tr 128-131
2 Agamanolis, D P (2014), "Chapter 9: Degenerative diseases’, http://neuropathology-web.org/ chapter9/chapter9bAD.html , June 2014
3 Buchholz, M et al (2009) “Inhibitors for Human Glutaminyl Cyclase by Structure Based Design and Bioisosteric Replacement” J Med Chem (52): pp 7069-7080
4 Nettekoven, M (2001) “Combinatorial synthesis of 5-aryl-[1, 2, 4]-triazolo-[1, 5-al-pyridine derivatives as potential inhibitors of the adenosine 2a receptor” Synlett, pp 1917-1920,
5 Nussbaum, J M et al (2012) “Prion-like behaviour and tau-dependent cytotoxicity of pyroglutamylated amyloid-B” Nature (485): pp 651-655
6 Oscar M B et al (2014).”N-Methyl-N-((1-methyl-5-(3-(1-(2-methylbenzy))piperidin-4-yl)propoxy)-1H-indol- 2-yl) methyl) prop-2-yn-1-amine, a New Cholinesterase and Monoamine Oxidase Dual Inhibitor” J Med Chem (57): pp 10455-10463
7 Schilling, S et al (2002) “Continuous spectrometric assays for glutaminyl cyclase activity” Anal Biochem
(303): pp, 49-56
8 Schilling, 5 et al (2008) “Inhibition of glutaminyl cyclase prevents pGlu-Aa formation after intracortical/hippocampal microinjection in vivo/in situ’ J Neurochem, (106): pp 1225-1236
9 Yerragunta, V et al (2013).”Pyrimidine and Its Biological Activity: A Review" PharmaTutor 1 (2): pp 39-44 (Ngày gửi đăng: 23/11/2016 - Ngày duyệt đăng: 17/02/2017)
Trang 25Nghiên cứu dược & Théing tin thuée 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
ES
we
BAI NGHIEN CUU
Loại bỏ ảnh hưởng nên tron phan tich ° 9 9 khúng sinh cloramphenicol bang cột súc g g »
ký úi lực miễn dịch ° e
Nguyễn Duc Thinh’2, Chu Phạm Ngọc Sơn3, Trần Linh Thước? "Viện Y tế Cơng cộng Thành phố Hồ Chí Minh, ?Trường Đại học Khoa học Tự nhiên (ĐHQG-HCM),
SUMMARY
*Trung tâm Sắc ký Hải đăng
Cloramphenicol is an banned antibiotic which is absolutely not permitted to present in food The currently analytical
methods for Cloramphenicol have many problem with complex samples In thịs article, we reported experimental results using
specific immunoaffinity chromatography column to remove matrix effect from fish, honey and animal feed The results showed JAC column could removed interference from complex matrix samples
Từ khĩa: cloramphenicol, cột sắc ký ái lực cloramphenicol, loại ảnh hưởng nên, thức ăn, LC-MS/MS
Đặt vấn đẻ
Cloramphenicol (CAP) là kháng sinh thường được sử dụng trong điều trị cho người cũng như động vật Mặc dù cĩ tác dụng điều trị trên nhiều loại vi khuẩn khác nhau nhưng cloramphenicol cũng cĩ nhiều ảnh hưởng xấu đến sức khỏe con người như suy tủy, tác nhân gây ung thư [4], [5] Vì vậy cloramphenicol là kháng sinh bị cấm tuyệt đối khơng được phép cĩ mặt trong thực phẩm ở bất kỳ hàm lượng nào [2] Để giám sát sự tồn dư của cloramphenicol trong thực phẩm người ta thường sử dụng phương pháp sắc ký lỏng kết ghép khối phổ (LC-MS/MS)I3], I4] Bên cạnh những ưu điểm về độ nhạy, độ chọn lọc, phương pháp sắc ký lỏng ghép nối khối phổ cũng cĩ những hạn chế khi sử dụng đối với một số nền mẫu phức tạp như mật ong hay thức ăn chăn nuơi do nhiễu nền hay suy giảm ion (ion suppression) dẫn đến làm
giảm độ nhạy cũng như độ chính xác của kết quả
phân tích Để xứ lý mẫu cloramphenicol người ta thường sứ dụng phương pháp chiết pha rắn với cột chiét Cis Loại cột này cĩ tính chọn lọc khơng cao, qui trình xử lý phức tạp dịch mẫu sau xử lý cịn chứa nhiều tạp chất ảnh hưởng đến q trình phân tích trên khối phổ [3], [8] Để tăng hiệu quả quá trình xử
lý mẫu thực phẩm khi định lượng cloramphenicol cũng như giảm thiểu ảnh hưởng của nền mẫu, chúng tơi tiến hành nghiên cứu sử dụng cột tách chiết miễn dịch (IAC) cloramphenicol trong cơng đoạn xử lý mẫu với mục tiêu loại bỏ ảnh hưởng nền
mẫu qua đĩ nâng cao chất lượng q trình phân tích
đảm bảo khả năng phát hiện cloramphenicol ở nồng
độ thấp (0,3 ppb) theo qui định châu Âu
Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu
Nguyên liệu
Chuẩn cloramphenicol (Supelco-442513), cột sắc ký ai luc cloramphenicol (IAC-Cloramphenicol) được sản xuất tại phịng thí nghiệm Viện Y tế Cơng cộng TP Hồ Chí Minh, NazHPOa.2HzO (1.06580), KH2PO4(104873), NaCl (166400), Methanol (106007) đều của hãng Merck, Đức và các hĩa chất tinh khiết phịng thí nghiệm khác
Thiết bị
Hệ thống sắc ký lỏng ghép khối phổ ba tứ cực (LC-MS/MS) Applied Biosystem Triple Quad 5500 va các thiết bị phịng thí nghiệm cơ bản khác
Mẫu thử
Mẫu thử nghiệm bao gồm mẫu cá thu, mật ong Việt Honey được mua tại siêu thị Coopmart; thức ăn
Trang 26Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
gia súc CP được mua tại cửa hàng thức ăn chăn nuơi Tồn bộ các mẫu được mua tại thành phố Hồ Chí Minh năm 2015
Phương pháp nghiên cứu
Khả năng loại bỏ tạp chất của cột sắc ký lAC được thực hiện bằng cách xác định tín hiệu của cloramphenicol thêm vào dịch nền mẫu đã được xử lý bằng cột IAC Nếu khả năng loại bỏ tạp chất tốt thì tín hiệu thu được sẽ cao và ổn định hơn qua đĩ sẽ nâng cao được kha nang phát hiện cloramphenicol trong mẫu Nền mẫu khảo sát bao gồm từ đơn giản như mẫu cá hay phức tạp như mẫu mật ong và thức ăn gia súc
Qui trình xử lý mẫu bằng cột IAC
Đồng nhất mẫu, cân 2 g mẫu, thêm vào 20 ml dung dịch đệm phosphat chứa muối (Phosphate Buffered Saline-PBS) lắc đều trên máy lắc khoảng 1 giờ, sau đĩ ly tâm 6000 vịng/phút trong 15 phút Lấy dịch nổi vào ống nhựa 50 ml sạch Nạp dịch mẫu vào cột IAC với tốc độ dịng 1ml/phút Tiếp tục rửa cột bằng 20 ml dung dịch PBS, tiếp theo là 20 ml nước Rửa giải cloramphenicol ra khỏi cột 02 lần, mỗi lần bằng 0,5 ml methanol Sau đĩ dịch nền mẫu này (1ml) sẽ được thêm chuẩn cloramphenicol và phân tich bang LC-MS/MS,
Phương pháp xác định cloramphenicol bằng LC-MS/MS
Cloramphenicol được phân tích bằng hệ thống sắc ký khối phổ ba tứ cực LC-MS/MS với các điều kiện: cột phân tích Acclaim RSLC (150 x 2,1 mm;
2,2 ym), pha dong methanol: nudc (50:50), tốc độ
dịng 0,5 ml/phút, thể tích tiêm mẫu 5 Hl Khối phổ sử dụng nguồn ion hĩa Turbo Spray (ESI), nhiệt độ nguồn ion hĩa 650°%C, tốc độ khí GS1 30, tốc độ khí GS2 40, tốc độ khí cắt đuơi CUR 20, điện thế ion hĩa -3500 V, điện thế đầu dị CEM 2200 V Chế độ đọc loại ion âm, MRM với mảnh định lượng m/z =152 (CE= -27V) và mảnh xác nhận m/z = 257 (CE= -15V) [8], [9] Thời gian phân tích 6 phút
Thẩm định phương pháp
Các thơng số đánh giá bao gồm độ chọn lọc, độ tuyến tính, giới hạn phát hiện, hệ số thu hồi, độ biến thiên và tý lệ ion Độ chọn lọc được đánh giá bằng cách so sánh mẫu trắng của cá, mật ong và thức ăn gia suc sau khi xử lý bằng cột IAC và chuẩn cloramphenicol Độ tuyến tính và giới hạn phát hiện được khảo sát dựa trên chuẩn cloramphenicol thêm
, 2
BÀI NGHIÊN CỨU «đê
vào dung dịch nền mẫu đã được xử lý bang cot IAC cĩ hàm lượng 0,5; 1; 2; 5 và 10 ng cloramphenicol/g mẫu Hệ số thu hồi được tính bằng cách so sánh tín hiệu của cloramphenicol trong dung dịch nền mẫu đã qua xử lý và trong dung dịch chuẩn Độ biến thiên được tính dựa trên các kết quả phân tích của cùng một nồng độ Giới hạn phát hiện được tính tốn dựa trên độ lệch chuẩn tại nồng độ thấp nhất của đường chuẩn [6] Các tiêu chí đánh giá dựa trên qui định của cộng đồng châu Âu về phân tích cloramphenicol (2002/657/ECQ) [1], [2]
Phương pháp xử lý số liệu
Giá trị đo trên LC-MS/MS được thực hiện bằng phần mềm Analyst phiên bản 1.5.2 Xử lý thống kê số liệu bằng phần mềm Microsoft Excel
Kết quủ nghiên cứu
Độ chọn lọc
Khả năng loại bỏ tạp chất nền của cột sắc ký ái lực được đánh giá bằng cách đối chiếu dung dịch nền của cá, mật ong và thức ăn gia súc sau khi qua cột IAC với mẫu chuẩn cloramphenicol 1ng/ml Kết quả khảo sát cho thấy các mẫu sau khi xử lý bằng cột IAC khơng xuất hiện các pic tap tại thời gian lưu của chuẩn ứng với mảnh cĩ m/z= 152 (hình 1 và 2) Như vậy quá trình xứ lý các nền mẫu trên bằng cột lAC đã loại bỏ hầu hết các tạp chất cĩ thể ảnh hưởng đến quá trình phân tích chứa trong nền mẫu
Intens 6000 at 4000 1 2000 152 100 150 200 % 300 350 400 aft
Hình 1 Phổ phân mảnh của cloramphenicol chuẩn Tỷ lệ cường độ ion 257/ cường độ ion 152
Hiện nay trong phương pháp phân tích khối phổ qui định 2002/657/EC bắt buộc phải tính tốn tỷ lệ cường độ ion để đảm bảo tính chính xác của kết quả phân tích Kết quả khảo sát (Bảng 1) cho thấy tỷ lệ cường độ ion trung bình giữa cặp ion xác nhận (m/z=257) và ion định lượng (m/z=152) của
Trang 27Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
a
BÀI NGHIÊN CỨU €
m/¿=152 m/e=l52 (a) (b) m/z=152 (©)
cloramphenicol trén cac nén dung dich mau ca, mat ong và thức ăn gia súc trên dải nồng độ từ 0,5 ng đến 10 ng cloramphenicol⁄g mẫu dao động trong khoảng từ 0,64 đến 0,74 và sự biến thiên tý lệ ion trong cùng một nồng độ nhỏ hơn 10% (từ 0,0 đến 7,85%) Với tỷ lệ cường độ ion > 0,5 các nền mẫu khảo sát đều đạt yêu cầu về độ biến thiên tỷ lệ ion <20% theo qui định châu Âu
Bảng 1 Trị số tỷ lệ cường độ ion 257/cường độ
ion 152- CV% (n = 5)
Nơng độ Tỷ lệ cường độ ion 257/cường độ ion 152 ~ (CV%) doramphenic
ol nag mau) Mẫu tả Mẫu mật ong Mẫu thức ăn gia súc 05 0,65-(3,23) 0,67-(3,18) 0,69-(1,74) 1 0,64-(2,20) 0,70-(3,05) 0,70-(4,85) 2 0,69-(4,09) 0,66-(3,23) 0,65-(3,10) 5 0,73-(0,97) 0,68-(3,14) 0,66-(1,78) 10 0,72-(7,85) 0,66-(0) 0,65-(1,15)
Hình 2 Sắc ký đơ phân tich mdu béing LC MS/MS
Mẫu trắng nên cd (a), nên mật ong (b), nền thức ăn gia súc (c), chuẩn cloramphenicol 1ng/ml (d) Độ tuyến tính
Độ tuyến tính được xác định dựa trên mẫu bổ sung cloramphenicol trên khoảng nồng độ từ 0,5 đến 10 ng cloramphenicol/g mẫu Kết quả khảo sát cho thấy cĩ tương quan tuyến tính cao trong khoảng từ 0,5-10ng cloramphenicol/g mẫu với hệ số tương quan (R?>0,99) trên cả 3 nền mẫu khảo sát (hình 3)
Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng
Từ phương trình đường chuẩn và độ lệch chuẩn tín hiệu tại nồng độ thấp nhất của đường chuẩn (0,5 ng cloramphenicol/g mẫu), tính giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) đối với 3 nền mẫu trên (Bảng 2) Các kết quả khảo sát cho thấy phương pháp xác định đạt yều cầu về độ nhạy dùng để phát hiện cloramphenicol (0,3 ppb) theo qui định của EC
Hiệu suất thu hồi
Kết quả khảo sát (Bảng 3) cho thấy trong dải nồng độ từ 0,5 đến 10 ng cloramphenicol/g hiệu suất thu hồi đạt từ 91,41% đến 100,41%, độ biến thiên từ 3,19% đến 7,86% Mẫu mật ong cĩ hệ số thu
Trang 28Nghiên cứu dược & Thơng tỉn thuốc 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
Bảng 2 Kết quả xác định LOD và LOQ của cloramphenicol
= ,
BÀI NGHIÊN CỨU 2“
trên nên mẫu
Nến Độ lệch chuẩn Phương trình Lop | Log ãuhg | S2)*210,5ng/9 hồi ui
mẫu tl (n=5) q (ng/g) | (na/g)
Miu ci 1160 y=123181x-45757 | 0,03 | 009 Mau mat ong 43 y=130385-2055 | 0/1 | 003 Mau TAGS 2320 y=1W8lx-3274 | 006 | 0,18
TAGS: Thức ăn gia súc
Chuẩn dựng trên nền cá của cặp ion 321/152 1.40E+08 y= 12318 -45757 120E+08 a R?=0.997 = 1.006 +06 8.00E+05 8.00E+05 4.00E+05 Tinhigu (cps) 2.00E+05 0.00E+00
Chuẩn dựng trên nên mật ong của cặp ion 321/152 140E+08 120E+08 % 100E408 a y = 13088 - 20455 R2= 0.995 Ÿ 800E+05 “ 3 2 Ế 800E405 : “ b ÊÊ 400E+05 ee đ) 200E+05 ` ô 0006400 T&-CT 0 2 4 6 8 10 Néng 46 chloramphenicol (ppb) (9) Néng độ chloramphen
Hình 3 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính giữa nơng độ cloramphenicol và diện tích pic (ion m/⁄z=152) đối với nên mẫu cá (a), mật ong (b) và thức ăn gia súc (c)
hồi từ 94,65% đến 125,67%, độ biến thiên từ 0,51%
đến 6,34%, trừ nồng độ 2 ng là 10,19% Mẫu thức ăn gia súc cĩ hệ số thu hồi từ 71,71% đến 90,19%, độ
biến thiên từ 1,70% đến 11,60%
Bàn luận
Hiện nay, ở nước ta chưa cĩ nghiên cứu nào về chế tạo cột IAC dùng để xác định kháng sinh trong thực phẩm Các cột lAC nhập ngoại thường cĩ giá thành cao (khoảng 300.000 đồng/cột) do đĩ khơng phù hợp với điều kiện của các phịng thí nghiệm Việc chế tạo cột lAC trong nước (được sản xuất tại phịng thí nghiệm Viện Y tế Cơng cộng Tp Hồ Chí Minh) sẽ giúp giảm giá thành (cịn khoảng 120.000 đồng/cột) do đĩ các phịng thí nghiệm sẽ dễ dàng tiếp cận hơn với phương pháp xử lý mẫu này
Kết quả nghiên cứu cho thấy trên nền mẫu cá và mật ong hiệu suất thu hồi của tín hiệu chuẩn lớn hơn
90% (từ 91,41% đến 100,41% cho cá và 94,65% đến
125,67% cho mật ong) Đổi với nền mẫu thức ăn gia súc mặc dù cột IAC đã loại bỏ được phần lớn tạp
chất, nhưng văn cịn một số tạp chất gây ảnh hưởng đến việc phân tích trên khối phổ Do đĩ, tỷ lệ thu hồi tín hiệu trên nền mẫu này chỉ đạt từ 71,71% đến 90,19%, thấp hơn hai nền mẫu cá và mật ong Độ biến thiên tín hiệu giữa các mẫu nhỏ hơn 10% và độ
Bảng 3 Hiệu suất thu hồi (H%) trên các nền mẫu của ion
(n=10)
Hàm lượng Mẫu dá Mẫu mậtong |Mẫu thứcăn giasúc|
Viên trang) He) trungbinh fW% | trungbình | (W% trung bình œ% Nữ) HO)
Trang 29Nghiên cứu dược & Thénng tin thuée 2017, Tap 8, $61, trang 10-14
biển thiên của tỷ lệ ion cũng nhỏ hơn 10% Kết quả nghiên cứu cho thấy hệ số thu hồi của cột lAC do chúng tơi chế tạo cĩ hệ số thu hồi tương tự như cột IAC đã cơng bổ của tác giả Mackie là từ 84% đến 108% cho thủy sản và 83% đến 103% cho mẫu mật ong [7] Bằng việc sử dụng cột IAC quá trình xử lý mẫu đã được đơn giản hĩa nhiều chỉ cần làm đồng nhất mẫu, chiết bằng dung mơi và cho qua cột IAC, so với các qui trình phân tích trước đây phải tách chiết, làm sạch bằng cột C18, thổi khơ dung mơi, hồn nguyên chất phân tích Giới hạn phát hiện cũng như giới hạn định lượng cloramphenicol trong
LS
BAI NGHIEN CUU ©
các nền mẫu là khoảng 0,1 ppb tốt hơn các qui định trong nước và quốc tế (0,3 ppb) [2]
Kết luận
Sử dụng cột sắc ký ái lực miễn dịch IAC trong qua trình làm sạch mẫu để phân tích cloramphenicol đã loại bỏ ảnh hưởng của các tạp chất chứa trong các nền mẫu cá, mật ong và thức ăn gia súc Quá trình xử lý mẫu bằng cột IAC két hợp với phân tích trên sắc ký lơng khối phổ LC-MS/MS cho phép xác định chính xác sự hiện diện của cloramphenicol trong các loại mẫu trên phù hợp với các qui định của quốc tế
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 COMMISSION DECISION of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (2002/657/EC), Official Journal of the European Communities
COMMISSION DECISION of 13 March 2003 amending Decision 2002/657/EC as regards the setting of minimum required performance limits (MRPLs) for certain residues in food of animal origin, Official Journal of the European Communities
Douny C, Widart J, Pauw E, Maghuin-Rogister G and Scippo M-L (2013),’Determination of Cloramphenicol in honey, shrimp, and poultry meat with liquid chromatography—mass spectrometry: validation of the method according to Commission Decision 2002/657/EC’, Food Analytical Methods,6, pp.1458-1465, FAO/WHO (Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organization) (1995), “Toxicological evaluation of certain veterinary drug residues in food Cloramphenicol’, WHO Food Additives Series
FAO/WHO (Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organization) (2004), “Residues of some veterinary drugs in animals and foods Cloramphenicol’, FAO Food and Nutrition paper,
41(6), pp.1-12
Hubaux A., Vos G (1970) Decision and detection limits for linear calibration curves, Analytical Chemistry,
48, pp 849 -855
Mackie Ji, Marley E, Donnelly C (2013), “Immunoaffinity column cleanup with LC/MS/MS for the
determination of chloramphenicol in honey and prawns: single-laboratory validation’, Journal of AOAC International, 96 (4), pp.910-916
Renning HT, Einarsen K and Asp TN (2006), "Determination of Chloramphenicol residues in meat, seafood, egg, honey, milk, plasma and urine with liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and the validation of the method based on 2002/657/EC’, Journal of Chromatography A,1118, pp.226-233 Yiqing Yang, Qian Wang, Qiao Wang and Shijie Yan (2013), “Determination of Chloramphenicol Residual in Freshwater Fish by HPLC’, Advanced Materials Research, Vols 781-784, pp 1708-1711
Trang 30Nghién ctu dược &Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 26-29
- 2
BAINGHIEN CUU S
Nghiên cứu đặc điểm hình thái và xác định
lại tên khoa học của cây thuốc Tơ mành
SUMMARY
Nghiêm Đức Trọng!, Trần Văn Ơn", Nguyễn Văn Hiếu? "Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Thực vật học, Viện hàn lâm khoa học Trung Quốc
In previous documents of medicinal plants, the scientific name of plant called “To manh” was determined as Hiptage benghalensis (L.) Kurz or Hiptage sp The scientific name of this plant was confirmed by our laboratory as Plagioteron suaveolens Griff, (Plagiopteraceae), The result has corrected the scientific name of “To manh’; which had been erroneously determined, and recorded a new species and a new family for the Flora of Vietnam as well
Từ khĩa: xác định lại tén khoa hoc, Plagiopteron suaveolens, Plagiopteraceae, To manh
Dat vin dé
Cây Tơ mành, cịn cĩ tên là đây mạng nhện, dây chỉ Sở dĩ cĩ tên như vậy là do khí bẻ thân và lá ra cĩ những sợi mành như sợi chỉ Thân, cành và lá cây Tơ mành được dùng để chữa di tỉnh, cơ thể suy kiệt, ra nhiều mồ hơi, đái rắt, thấp khớp cấp và mạn tính, Ngày dùng 30 - 50 g sắc uống, trẻ em dùng liều thấp hơn [1] Dùng ngồi, để bĩ gẫy xương, cầm máu vết thương, chữa lở loét ngồi da, sâu quảng [1], [2] Trong các tài liệu về cây thuốc, cây Tơ mành được xác định với tên khoa học là Hiptage benghalensis (L.) Kurz [2] hay Hiptage sp,, ho Mang rơ (Malpighiaceae) [1] Mặc dù lồi Tơ mành cĩ một số đặc điểm phù hợp với chi Hiptage Gaertn nhu dây leo, lá đơn mọc đối, quả cĩ 3 cánh, tuy nhiên các đặc điểm mơ tả của lồi Tơ mành khơng phù hợp với đặc điểm của lồi Hiptage benghalensis (L.) Kurz cũng như của chỉ Hiptage Gaertn., đặc biệt là ở đặc điểm cĩ sợi như chỉ khi bẻ thân và lá ra Vì vậy, nhằm cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng và những nghiên cứu tiếp theo về cây thuốc Tơ mành, chúng tơi thực hiện nghiên cứu này nhằm mơ tả đặc điểm hình thái và xác định lại tên khoa học cây
thuốc Tơ mành,
Nguyên vật liệu và phương pháp nghiên
cứu
Nguyên vật liệu
Mẫu nghiên cứu được Nghiêm Đức Trọng thu ở Khu bảo tồn lồi và sinh cảnh Nam Xuân Lạc (xã Bản Thị, huyện Chợ Đồn, tỉnh Bắc Kạn; ngày 30 tháng 11 năm 2014) và xã Tồn Sơn, huyện Đà Bắc, tỉnh Hịa Bình (ngày 9/7/2011) và được lưu trữ tại Phịng tiêu bản Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP)
Phương pháp nghiên cứu
Tên khoa học được xác định bằng phương pháp so sánh hình thái thực vật đối chiếu với tài liệu thực vật [6], [7], [8], [13] va cdc tiêu bản mang mã số PE/01331476 (Phịng tiêu bản Quốc gia Trung Quốc), IBK00161097, IBK00161098 (Viện Thực vật Quảng Tây), P01035473 (Bảo tàng Lịch sử Tự nhiên Paris)
Kết quả nghiên cứu
Đặc điểm hình thái lồi Tơ mành
Dây leo gỗ Cành mang nhiều lơng hình sao màu trắng hoặc nâu, cành già cĩ vỏ màu nâu, nứt dọc Lá đơn, mọc đối, khí bẻ ra cĩ những sợi mành như sợi chỉ Cuống lá khoảng 1 - 1,3 cm, phủ lơng dày đặc; phiến lá hình trứng đến elip, 10 — 15 x 4- 7 cm,
Trang 31Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $6 1, trang 26-29
Hình 1 Hinh anh lodi Plagiopteron suaveolens Griff: a Canh mang hog; b cành già;
BAI NGHIEN CUU ể
„ cảnh non;
d lá mang sợi mành; e mặt dưới lá; f: mặt trên lá; g-h cụm hoa; ¡ quả cĩ cánh mặt dưới phủ lơng hình sao dày, mặt trên cĩ lơng
hình sao rải rắc, nhiều hơn ở trên gân; gân chính nổi rõ ở mặt dưới, hơi nối ở mặt trên, gân bên 5 hoặc 6 đơi; gốc lá trịn hoặc hơi hình tim, ít khi nhọn hay tù, mép lá nguyên, đỉnh nhọn hoặc cĩ mũi nhọn Cụm hoa hình chùy, hướng về phía ngọn, ở nách lá và đầu cành, thường ngắn hơn phiến lá; trục cụm hoa phủ đẩy lơng hình sao màu nâu, phần trục phía dưới khơng phân nhánh dài khoảng 4 6 cm, trên mỗi trục cĩ 5 - 9 nhánh mang nhiều hoa, tập trung dày ở đỉnh nhánh Cuống hoa 4 - 6 mm, phủ lơng dày; lá bắc con hình giáo, 2 - 3 mm Đài thường 4, màu xanh, uốn cong lại về phía sau khi hoa nở, khơng bằng nhau, hình giáo, dài 1 - 1,5 mm, cĩ lơng ở cả hai mặt Tràng hoa 3 - 4, màu xanh, dạng đài hoa, hình trứng hẹp, dài 3 - 4 mm, mặt ngồi cĩ
lơng, mặt trong lơng ít hơn Nhị nhiều, khoảng 50; chỉ nhị màu trắng, dạng sợi, to dần về phía đỉnh, dài 4- 5 mm, nhẫn; bao phấn màu trắng, hình thoi hoặc hình quả lê, nhỏ, nhẫn, mở bằng lỗ ở đỉnh Bầu
trên, phủ đầy lơng màu nâu, 3 ơ; nỗn 2 ở mỗi ơ; vịi
nhụy màu xanh, mảnh, thon dần về phía đỉnh, dài gần bằng chỉ nhị, cĩ lơng màu trắng ở gốc; núm nhụy nhỏ Quả nang cứng, dài khoảng 4 cm, cĩ nhị tổn tại, cĩ 3 cánh hình trứng ngược, cánh dài khoảng 3 cm, cĩ nhiều gân chạy dọc, phủ lơng hình sao rải rác (Hình 1)
Mùa hoa quả: Tháng 7 - 1] Tên khoa học của lồi Tơ mành
Dựa vào đặc điểm hình thái của lồi Tơ mành và
so sánh với các tài liệu gốc cơng bố lồi Plagiopteron suaveolens Griff [6], Thực vật chí
Trang 32Nghiên dúu dược &Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 26-29
Quảng Tây [7], Thực vật chí Thái Lan [8], Thực vật chí
Trung Quốc [13] và các tiêu bản mang mã số PE/01331476 (Phịng tiêu bản Quốc gia Trung
Quốc), IBK00161097, IBK00161098 (Viện Thực vật Quảng Tây), P01035473 (Bảo tàng Lịch sử Tự nhiên Paris), chúng tơi xác định được tên khoa học của cây Tơ mành là Plagiopteron suaveolens Griff., họ Plagiopteraceae
Phân bố và Sinh thái
Chúng tơi đã gặp lồi này ở Đồng Nai (VOG Cát Tiên), Quảng Bình (VQG Phong Nha - Kẻ Bàng), Hịa Bình (Lương Sơn, Đà Bắc), Bắc Kạn (Khu bảo tồn lồi và sinh cảnh Nam Xuân Lạc)
Cây thường mọc ở lùm bụi, ven rừng, rừng thứ
sinh, nương rẫy Độ cao 70 - 200m Bản luận
Đặc điểm của mẫu nghiên cứu cĩ nhiều điểm khác biệt rõ ràng so với đặc điểm của chỉ Hiptage
Gaertn„ sự khác biệt được thể hiện ở Bảng ï
Bảng 1 So sánh đặc điềm mẫu nghiên cứu (lồi Plagiopteron suaveolens Griff) với đặc điểm của chi
Hiptage Gaertn
š Mẫu nghiên cửu ('lagiopteron | 4
Đặc điểm Xmvenlos trif) hi Hiptage Gaertn [10]
lá Khi bê ra œ những sự mành như |hi bê ra khơng cĩ sợi mành
sựid nhưsợi dĩ
Gum hoa |thủy chim
Cuốnghoa_ |Khơng c đốt (đất
Baohoa _ |Đàithường4,tàng3-4 Đồi 5,tàng5
Nhị Nhiều, khoảng50, băng nhau,rời 10, khơng đều, cĩ một nhị lớn hơn nhiều so với ác nhị khắc, hàn liền ðgốc
Theo một số quan điểm trước đây thì chỉ Plagiopteron Griff được xếp vào các họ khác nhau
_ BÀI NGHIÊN CỨU
như họ Mùng quân (Flacourtiaceae) [4], ho Day (Tiliaceae) [5] Một số bằng chứng về phân tử cho thay chỉ Plagiopteron cĩ quan hệ chặt chẽ với họ Dây gối (Celastraceae), và được xếp vào họ này [9], [11], [12] Tuy nhién, đa số các quan điểm hiện nay đều đồng ý xếp chỉ Plagiopteron thành họ riêng Plagiopteraceae [3], [7], [8], [13] Vi vay, trong bai bao này, chúng tơi van xép loai Plagiopteron suaveolens Griff vào họ Plagiopteraceae
Ngồi phân bố ởViệt Nam, lồi Tơ mành cịn phân
bố ởTrung Quốc (Quảng Tây), Myanmar (Tenasserim),
Thái Lan (Lampang, Kalasin, Nakhon Ratchasima, Sa Kaeo, Chachoengsao, Rayong, Trat, Chanthaburi),
Bangladesh (Sylhet), Ấn Độ [8], [13]
Việc xác định chính xác lại tên khoa học của cây Tơ mành, một cây thuốc đã được nhân dân ta sử dụng từ lau đã bổ sung một lồi mới {Plagiopteron suaveolens Griff.) cũng như một họ mới (Plagiopteraceae) cho hệ thực vật Việt Nam Đồng thời, cũng cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng và những nghiên cứu tiếp
theo về cây nay Các thơng tin tổng quan được về
thành phần hĩa học và tác dụng dược lý của cây Tơ mành dựa vào tên khoa học cũ (Hiptage benghalensis (L.) Kurz) ghi trong các tài liệu trước đây cần được loại bỏ
Kết luận
Trong nghiên cứu này, chúng tơi đã mơ tả và xác định lại được tên khoa học của cây Tơ mành là Plagiopteron suaveolens Griff, ho Plagiopteraceae, Các kết quả của nghiên cứu này là cơ sở cho việc sử dụng và các nghiên cứu tiếp theo về cây này Đồng thời, bổ sung một lồi và một họ mới cho Hệ thực vật Việt Nam
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn
Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đồn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Tồn (2006), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Tập 1, tr 664 - 665
Trang 33Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập &, $6 1, trang 26-29
- Â>
BÀI NGHIÊN CỨU Š- 3 Armen Takhtajan (2009), Flowering Plants, Springer, pp 412
4 Arthur Cronquist (1981), An integrated System of Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York, pp 388 - 390
5, Chang Hung-Ta (1989), Plagiopteron, In: Chang Hung-Ta (ed.), Flora Reipublicae Popularis Sinicae, Tomus 49(1), Science Press, Beijing, pp 47-50
6 Griffith W (1844), Calcutta Journal of Natural History and Miscellany of the Arts and Sciences in India, W Ridsdale, Bishop's College Press, Volume IV, pp 244-246
7 Guangxi Institute of Botany, Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and Academia Sinica (2005), Flora of Guangxi, Volume 2, Spermatophyta, Guangxi Science and Technology Publishing House, pp
104-106
8 Phongsak Phonsena (2008), Plagiopteraceae, In: Tem Smitinand, Kai Larsen (eds.), Flora of Thailand, Volume 9 (2), Forest Herbarium, Royal Forest Department, Bangkok, pp 148 - 151
9 Savolainen V., Fay MLF.,, Albach D.C., Backlund A., Van der Bank M., Cameron K.M., Johnson S.A,, Lledo M.D,, Pintaud Jean-Christophe, Powell M., Sheahan M.C., Soltis D.E., Weston P,, Whitten W.M,, Wurdack K.J,, Chase M.W, (2000), “Phylogeny of the eudicots: a nearly complete familial analysis based on rbcL gene sequences’, Kew Bulletin, 55, pp 257-309
10 Shu-kun Chen, Michele Funston (2008), Malpighiaceae, In; Wu, Z Y„ P H Raven & D Y, Hong (eds), Flora of China, Vol 11 (Oxalidaceae through Aceraceae), Science Press, Beijing, and Missouri Botanical Garden Press, St Louis, pp 135
11 Simmons M.P, Clevinger C.C., Savolainen V., Archer R.H., Mathews S., Doyle J.J (2001), “Phylogeny of the Celastraceae inferred from phytochrome B gene sequence and morphology’, American Journal of Botany, 88 (2), pp 313 - 325
12 Soltis D.E., Soltis P.S., Chase M.W., Mort MLE, Albach D.C., Zanis M., Savolainen V., Hahn W.H., Hoot S.B., Fay M.F., Axtell M., Swenson S.M., Prince L.M., Kress W.J., Nixon K.C., Farris J.S (2000), “Angiosperm phylogeny inferred from 185 rDNA, rbcL, and atpB sequences’, Botanical Journal of the Linnean Society,
133, pp 381 ~ 461
13 Ya Tang, Sue Zmarzty (2008), Plagiopteraceae, In: Wu, Z Y., P H Raven & D Y Hong (eds.), Flora of China, Vol 11 (Oxalidaceae through Aceraceae), Science Press, Beijing, and Missouri Botanical Garden Press, St Louis, pp 493
(Ngày gửi đăng: 13/09/2016 - Ngày duyệt đăng: 24/3/2017)
Trang 34Nghiên du dược &Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 30-33
BÀI NGHIÊN cuuẾ
Túc dụng giảm ho, long địm của cao đặc bài thuốc AZK trên mơ hình thực nghiệm
Nguyễn Mạnh Tuyển, Phùng Hịa Bình,
Đỗ Thị Thu Thủy, Nguyễn Thùy Dương
Trường Đại học Dược Hà Nội
SUMMARY
The viscous extracts made from AZK decoction were evaluated separately for antitussive and expectorant activities by the experiment models of ammonia liquor-induced cough and phenol-sulfone-phthalein in mice The results showed that, the viscous extracts prepared from the aqueous extracts of AZK at the doses of 1.5g {equivalent 6g on raw materials) per kg body weight of rats showed the significantly in antitussive and expectorant activities This suggested the benefit of the viscous extracts made from AZK decoction in the antitussive and expectorant effects
Từ khĩa: bài thuốc AZK, cao đặc, giảm ho, long đờm, chuột nhất
Đặt vấn đề
Ho là phản xạ tự nhiên của cơ thể nhằm giúp tăng thơng khí đường hơ hấp Tuy nhiên, ho nhiều, ho kéo dài là triệu chứng của một số bệnh lý hơ hấp, khiến người bệnh mệt mỏi, ảnh hưởng đến người xung quanh Ho và đàm cĩ quan hệ mật thiết, y học cổ truyền gọi là chứng khái thấu, thuốc chỉ ho thường cĩ tác dụng trừ đàm và ngược lại, thuốc trừ đàm cũng cĩ tác dụng chỉ ho [1] Bài
thuốc AZK là một bài thuốc nghiệm phương được
thiết ké dựa trên cơ sở cơng năng, chủ trị của các vị thuốc, thành phần hố học, tác dụng dược lý của các vị thuốc theo hướng chống ho, trừ đờm, thanh nhiệt như: Huyền sâm, Mạch mơn, Mơ muỗi, Tơ
diệp, Trắc bách diệp, thạch cao [2], [3] Để cĩ
những minh chứng khoa học cụ thể, nghiên cứu này được thực hiện nhằm đánh giá tác dụng giảm ho, long đờm trên thực nghiệm của cao đặc bào chế từ bài thuốc A7ZK để làm cơ sở ứng dụng bài
thuốc trong điều trị các chứng ho, đờm
Nguyên vệt liệu và phương pháp nghiên cou
Đối tượng nghiên cứu
Bài thuốc AZK gơm: Tỳ giải (Rhizoma Heterosmilacis) 8 g, Đơn lá đỏ (Folium Excoecariae) 4 g, Thạch cao (Gypsum fibrosum) 4 g, Huyền sâm
(Radix Scrophulariae) 3 g, Tơ diệp (Folium Perillae frutescensis) 3 g, Mo muéi (Fructus Armeniacae praeparatus) 3 g, Mạch mơn {Radix Ophiopogonis japonici) 3 g, Trắc bách diệp (Folium Platycladi) 3 g
đạt tiêu chuẩn DĐVN IV
Cao đặc bào chế từ dịch chiết nước bài thuốc AZK (gọi là cao đặc AZK) được bào chế như sau: Dược liệu được sơ chế, loại tạp, rửa sạch Cân riêng từng vị theo tỷ lệ bài thuốc để được 3 kg dược liệu, Cao đặc AZK được bào chế theo phương pháp chiết nĩng với dung mơi nước bằng cách sắc 3 lần, lần 1 đun sơi 3 giờ, lần 2 và 3 đun sơi 2 giờ mỗi lần Gạn lọc dịch chiết qua lưới lọc, gộp dịch chiết cả 3 lần,
cơ đặc đến thể chất phù hợp thu được 800 g cao
đặc 4:1, hay 1 g cao đặc tương ứng 4 g dược liệu Hĩa chất, thuốc thử
Codein phosphat (chất chuẩn đối chiếu - Viện
Kiểm nghiệm thuốc TW), amoni clorid (tiêu chuẩn
phân tích- Merck, Đức)
Thiết bị
Máy phun mù Omron CX (Nhật Bản) Động vật nghiên cứu
Chuột nhắt trắng trưởng thành chủng Swiss, 20 ~ 25 g, do Vién Vệ sinh dịch tế Trung tương cung cấp Động vật được nuơi ổn định bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tế Trung ương cung cấp,
Trang 35Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập 8, $6 1, trang 30-33
uống nước tự do ở điều kiện phịng thí nghiệm của Bộ mơn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội (nhiệt độ 26 + 2°C, độ ẩm 55- 60%) ít nhất 5 ngày trước khi thực hiện nghiên cứu
Phương pháp nghiên cửu
Xác định liều thử trên động vật thí nghiệm Căn cứ liều dự tính của bài thuốc AZK là 50 g được liệu/người (50 kg)/ngày (tương đương 1 g được liệu/kg người/ngày)
Tỷ lệ cao đặc AZK là 1 g cao tương đương 4 g dược liệu, liều dự tính của cao đặc AZK trên người là 0,25 g cao/kg người
Hệ số quy đổi liều của chuột nhắt trắng là 12 I4] Quy đổi sang liều dùng tương đương trên
chuột nhắt trắng của cao đặc AZK là 3 g cao/kg
chuột/ngày
Thiết kế nghiên cứu đánh giả tác dụng sinh học của cao đặc AZK trên 3 mức liều thử tương ứng là:
~ Lơ AZK 1: mức liều 1⁄ liều dự tính: 1,5 g cao/kg chuột
-Lơ AZK2: mức liều bằng liều dự tính: 3 g cao/kg chuột
- Lơ AZK 3: mức liều gấp đơi liều dự tính: 6 g cao/kg chuột
Đánh giá tác dụng giảm ho
Đánh giá tác dụng giảm ho bằng mơ hình gây ho sử dụng tác nhân amoniac [4], [7], [8] Động vật được cho hít tác nhân gây kích ứng là dung dịch amoniac để kích thích các receptor nhận cảm ở
đường dẫn khí và gây phản xạ ho, Thực nghiệm
được tiến hành như sau:
Chuột được chia ngẫu nhiên vào 5 lơ:
- Lơ chứng: uống nước cất 10 ml/kg chuột/ngày - Lơ đối chiếu: uống thuốc đối chiếu codein phosphat liều 20 mg/kg chuột/ngày
- Lơ AZK 1: uống cao đặc AZK liều 1,5 g/kg chuột/ngày
- Lơ AZK 2: uống cao đặc AZK liều 3 g/kg chuột/ngày
- lơ AZK 3: uống cao đặc AZK liều 6 g/kg
chuột/ngày
Chuột được uống mẫu nghiên cứu hoặc nước
cất liên tục 3 ngày, mỗi ngày một lần Ngày thứ ba sau khi uống mẫu nghiên cứu 1 giờ, đặt chuột vào buồng phun mù, sử dụng máy phun mù Omron CX
BÀI NGHIÊN cuuế
(Nhật Bản) với dung dịch amoniac 7% trong thời gian ï phút Ngay sau đĩ, chuột được đưa vào buồng quan sát Một cơn ho được tính khi động vật cĩ biểu hiện thao tác hơ hấp bất thường như co thắt khoang bụng và há miệng liên tiếp [6] Đếm số cơn ho của chuột trong 5 phút kể từ lúc phun mù
Đánh giá: Tỷ lệ (%) giảm ho cúa lơ thử so với lơ chứng
Đánh giá tác dụng long dom
Đánh giá tác dụng long đờm trên mơ hình theo
mơ tả của Liu Wei [6]
Chuột được chia ngẫu nhiên vào 5 lơ: - Lơ chứng: uống nước cất 10 ml/kg chuột - Lơ đối chiếu: uống thuốc đối chiếu amoni
clorid liều 1,5 g/kg chuột
- Lơ AZK 1: uống cao đặc AZK liều 1,5 g/kg
chuột
- Lơ AZK 2: uống cao đặc AZK liều 3 g/kg chuột - Lơ AZK 3: uống cao đặc AZK liều 6 g/kg chuột Chuột được uống mẫu nghiên cứu hoặc nước cất bằng kim đầu tù với cùng thể tích Sau khi cho uống 30 phút, tiêm màng bụng cho các chuột dung dịch phenol sulfonphtalein 0,25% với liều 25 ml/kg chuột Sau 30 phút, tiêm thêm ï liều như trên Chờ 30 phút, bộc lộ khí quản và luồn vào đĩ 1 kim đầu tù Rửa khí quản bằng cách dùng bơm tiêm lấy 0,5 ml dung dịch NaHCO: 0,5%, bơm vào khí quản, hút ra nhẹ nhàng
rồi chuyển vào trong một ống nghiệm đã đánh dấu từ trước, Làm 3 lần với mỗi động vật, tập trung dịch
rửa của cùng một động vật trong một ống nghiệm Li tâm Đo quang dịch nổi ở 546 nm
Đánh giá: Tỷ lệ {%) tăng mật độ quang của dịch tiết phể quản chuột ở lơ thử so với lơ chứng
Xử lý số liệu: Với các số liệu thuộc phân phối
chuẩn, kết quả được biểu diễn dưới dạng M + SE
(M: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình giữa các lơ bằng phân tích one-way ANOVA, hậu kiểm để so sánh giữa thử với chứng Với các số liệu khơng thuộc phân phối chuẩn, biến phân hạng, kết quả được trình bày dưới dạng trung vị (giá trị nhỏ nhất, giá trị lớn nhất) Dùng thuật tốn Kruskal Wallis để so sánh giữa các lơ,
Mann-Whitney U test để so sánh giữa thử với
chứng Sự khác biệt được coi là cĩ ý nghĩa thống
kê khi p < 0,05
Trang 36Nghién cu duce & Théng tin thude 2017, Tap 8, $61, trang 30-33
Kết quả nghiên cửu
Tác dụng giảm ho
Kết quả đánh giá tác dụng giảm ho của cao đặc
AZK trên chuột nhắt trắng được thể hiện ở bảng 1
Bảng 1 Tỷ lệ (%) giảm ho của cao đặc AZK
trên thực nghiệm Số lần họ liểuthử Tyee)
S.| lơtử (oh) |" | Pena n | wong5phứt | P gimbo t 18,5
1 |thmg PL man
2_ |(œdenphosphat |20mọflg | 10 Đo P.00 | 100
3 [AIK 150 |IDỈ ges) |P=90| 196
4 |AM2 300g |9 oe Heys 89 | Px=000 5 |aK3 00g [0| gry | P89 | 2 „4= 0,13 (m là trung vị, a là giá trị nhỏ nhất, b là giá trị lớn nhất)
Kết quả ở bảng 1 cho thấy lơ chứng dương dùng codein phosphat liều 20 mg/kg, tỉ lệ giảm ho 100%, thể hiện tác dụng giảm ho rõ rệt Cao đặc
AZK ở cả 3 mức liều thử đều cĩ tác dụng làm giảm
số cơn ho với tỷ lệ giảm so với lơ chứng lần lượt là 100%; 89% va 73% (p < 0,01) Ở các mức liều thấp 1,5 g và 3 g/kg chuột, tác dụng giảm ho của cao đặc AZK là tương đương (p > 0,05) Tuy nhiên khi tăng liều, cao đặc AZK liều 6 g/kg chuột khơng làm tăng tác dụng giảm ho so với mức liều thấp (p < 0,05)
Tác dụng long đờm
Kết quả đánh giá tác dụng long đờm của cao đặc AZXK trên chuột nhất trắng được thể hiện ở bảng 2
Bảng 2 Tỷ lệ (%) tăng mật độ quang dịch khí quản chuột
svt | tê ‘mn n t8 P line vúi chứng 1 (hứng - 8 | 0,11+0,01
2 | wna [15o%g [8 [owsoo06 [P.xo02 | 29 3 [ar — [15any [8 [014920008 [roo | 35
4 | ane 3ụAg [8 |0,16420,022 an tà 9 P= 0,015 5 AIK3 6g 8 | 0,165 40,015 |P;v=0442 50 e=0505
(X gid trị trung bình; SE: sai số chuẩn)
BÀI NGHIÊN au
Kết quả ở bảng 2 cho thấy lơ chứng dương dùng NH¡CI liều 1,5 g/kg chuột làm tăng rõ mật độ quang của dịch tiết ra ở khí quản, tỷ lệ tăng là 29,09% so với lơ chứng (p < 0,05) Cao đặc AZK ở cả 3 mức liều 1,5 g/kg chuột, 3 g/kg chuột, 6 g/kg chuột làm tăng
tổng lượng phenol sulfonphtalein tiết ra ở chuột so
với lơ chứng Tỷ lệ tăng mật độ quang so với lơ chứng lần lượt là 35%; 49% và 50% (p < 0,05) Khơng cĩ sự khác biệt giữa các mức liều cao đặc AZK trên lượng phenol sulfonphtalein tiết vào khí quan (p > 0,05)
Bùn luận
Tác dụng giảm ho
Amoniac là khí khơng màu, mùi khai, nhẹ hơn khơng khí và dễ tan trong nước Tiếp xúc trực tiếp với amoniac đặc làm hạn chế thơng khí gây ho, kích ứng mũi họng, co thắt phế quản Vì vậy cĩ thể dùng khí amoniac làm tác nhân gây ho trong thứ nghiệm đánh giá tác dụng giảm ho, Trên thực nghiệm, mơ hình gây ho bằng khí amoniac đã được sử dụng rộng rãi [4], [7], [8] Thuốc thử được coi là cĩ tác dụng giảm ho khi làm giảm số lần ho trong 5 phút quan sát so với lơ chứng
Cao đặc AZK thể hiện tác dụng giảm ho tốt ở cả
3 liều thử, ở hai mức liều 1,5 g/kg chuột và 3 g/kg chuột tác dụng giảm ho là tương đương và tốt hơn
ở mức liều 6 g/kg chuột Điều này cĩ thể do ở mức liều cao hơn là 6 g/kg chuột, thể chất của cao đặc
làm cần trở việc hấp thu thuốc của chuột, Kết quả này cĩ thể là cơ sở lựa chọn mức liều thấp nhất cĩ hiệu quả điều trị tốt, và phù hợp với cơng năng của các vị thuốc, bài thuốc,
Tác dụng long dom
Đánh giá tác dụng long đờm trên mơ hình theo mơ tả của tác giá Liu Wei [6] Dịch phế quần bài tiết ra làm tăng khả năng trừ đờm trong đường hơ hấp, dùng chất cĩ màu đỏ là phenol sulfonphtalein (PSP) 0,5%, tiêm màng bụng của chuột, sau một thời gian PSP sẽ bài tiết cùng dịch tiết của khí phể quản Định lượng PSP trong dịch phể quản bằng đo quang để tính lượng dịch bài tiết của khí phể quản [4], [6], [7] Thuốc thử cĩ tác dụng long đờm sẽ làm tảng thể
tích đờm, tăng bài tiết dụng dịch phenol
sulfonphtalein vào dịch tiết và do đĩ làm tăng độ hấp thụ (OD) khi đo quang
Trang 37Nghiên cứu dược & Thơng tin thuốc 2017, Tập &, $6 1, trang 30-33
Cao đặc AZK ở cả 3 mức liều thử đều làm tăng tổng lượng phenol sulfonphralein tiết ra ở chuột so với lơ chứng, sự khác nhau giữa các mức liều trên lượng phenol sulfonphtalein tiết vào khí quản
khơng cĩ ý nghĩa thống kê nên cĩ thể nĩi tác dụng
long đờm của cao đặc bài thuốc AZK ở cả 3 mức liều là tương đương nhau,
Cao đặc AZK cĩ tác dụng giảm ho long đờm tốt cĩ liên quan đến tác dụng của một số vị thuốc trong thành phần của bài thuốc Huyền sâm cĩ tác dụng chống viêm, sinh tân dịch giúp lỗng đờm [2] Huyền sâm được dùng phối hợp trong một số bài thuốc với tác dụng chữa viêm họng, ho, khản tiếng [T1, I2] Mạch mơn cĩ cơng năng nhuận phế chỉ ho [3] Theo Chinese Herbal Medicine - Materia Medica, Mạch mơn cĩ tác dụng thanh tâm, nhuận phé, giảm viêm, trị ho [5] Dịch sắc nước của mạch mơn đã được chứng minh cĩ tác dụng ức chế phản xạ ho trên chuột nhắt trắng [3] Mạch mơn được sử dụng kết hợp trong bài thuốc với tác dụng trị ho, long đờm [1], [3] Mơ muối cĩ cơng năng nhuận phế, cĩ
BÀI NGHIÊN CỨU ý:
tác dụng sát khuẩn đường hơ hấp, dùng trong trường hợp ho lâu ngày phế hư, viêm họng, được phổi hợp trong một số bài thuốc chữa ho lâu ngày, khan tiểng, viêm họng Tơ diệp đã được chứng minh cĩ cơng năng kiện vị chỉ ho, dùng trong các trường hợp cảm mạo phong hàn gây ho [3] Kết quả nghiên cứu này là phù hợp với cơng năng của các vị thuốc, bài thuốc cũng như các nghiên cứu về tác dụng dược lý của các vị thuốc trong bài thuốc đã cơng bố
Kết luận
Cao đặc bào chế từ bài thuốc AZK ở cả 3 mức liều thử (1,5; 3,0 và 6,0 g/kg chuột) cĩ tác dụng giảm số cơn ho trên chuột nhắt trắng, tỷ lệ giảm so với chứng lần lượt là 100%; 89% và 73%; các mức
liều này đồng thời thể hiện tác dụng long đờm, tỷ lệ tăng mật độ quang dịch tiết hơ hấp chứa phenol
sulphonphtalein so với chứng tương ứng là 35%; 49% và 50%, Ở liều 1,5 g/kg chuột, cao đặc AZK cĩ tác dụng giảm ho tốt nhất và cĩ tác dụng long đờm rõ rệt
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1 Nguyễn Thị Thu Trang, Bùi Hồng Cường, Phạm Thị Vân Anh (2015), “Nghiên cứu tác dụng chống viêm
cấp, giảm ho và long đờm của cao lỏng Vĩ ngắn trên thực nghiệm”, Tạp chí Dược học, số 469 Tr 61-66 2 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam tập 1, nhà xuất bản Khoa học và kỹ
thuật, Hà Nội Tr 1017-1020
3 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam tập 2, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội Tr 216-220, 297-300, 943-948, 997-1000
4 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cúu tác dụng dược lý của thuốc từ được tháo, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội Tr 125-127, 129
5 Dan Bensky, Steven Clavey, and Erich Stéger (2004), Chinese Herbal Medicine - Materia Medica, 3"
edition, pp 371-465
6 Liu W., Cheng X et al (2015), “In vivo evaluation of the antitussive, expectorant and bronchodilating effects of extract and fractions from aerial parts of Peganumharmala linn’, Journal of Ethnopharmacology
162, pp 79-86
7 Wang D., Wang § et al (2012), “Antitussive, expectorant and anti-inflammatory activities of four alkaloids isolated from Bulbus of Fritillaria wabuensis’ Journal of Ethnopharmacology; 139 (1), pp 189-193 8 Zhou Q,, Liang D et al (2013), “Antitussive, expectorant and bronchodilating effects of ethanol extract
of Sorghum bicolor (L.) Moench roots” Journal of Ethnopharmacology 149 (1), pp 297-302 (Ngày gửi đăng: 07/12/2016 - Ngày duyệt đăng: 24/3/2017)
Trang 38Nghiên du dược &Thơng tín thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 3-37
9
THƠNG TIN THUỐC EY
Pa ow x » +
Cúc biến chứng tim mạch của
hiếm + f
Nhiễm toan ceton là một cấp cứu nội khoa
nghiêm trọng cần nhập viện để điều trị Nhiễm toan ceton thường gặp nhất liên quan đến đái tháo đường và nghiện rượu, mỗi loại cĩ cách xử trí khác nhau Một số biện pháp điều trị nhiễm toan ceton, như sử dụng insulin và kali, là các thuốc cĩ nguy cơ cao, và các biện pháp khác cĩ thể gây mất cân bằng điện giải Một số biến chứng tim mạch liên quan đến nhiễm toan ceton là hậu quả của mất cân bằng điện giải, bao gồm loạn nhịp tim, bất thường trên điện tâm đồ, nhịp nhanh thất và ngừng tim, cĩ thể dự phịng thơng qua điều trị ban đầu thích hợp Nhồi mau co tim cấp cĩ thể dẫn đến nhiễm toan ceton ở bệnh nhân đái tháo đường và làm trầm trọng thêm
các hậu quả trên tim mạch Các biển chứng tim -
phổi như phù phổi và suy hơ hấp cũng được ghi nhận trong nhiễm toan ceton Nhìn chung, tý lệ tử vong do nhiềm toan ceton là thấp trong trường hợp bệnh nhân được điều trị đúng và kịp thời Dược sĩ bệnh viện cĩ thể giúp đảm bảo phác đồ điều trị được chuẩn hĩa và tăng cường độ an tồn trong sử dụng thuốc điều trị nhiễm toan ceton Với bệnh nhân ngoại trú, dược sĩ cĩ thể giáo dục bệnh nhân về dự phịng nhiễm toan ceton và khi nào bệnh nhân cần
đến khám ngay tại cơ sở y tế
Nhiễm toan chuyển hĩa là kết quả của sự gia tăng sản xuất acid nội sinh, giảm bicarbonat, hoặc tích lũy acid nội sinh Nhiễm toan ceton là rối loạn chuyển hĩa, trong đĩ sự điều hịa ceton bị phá vỡ, dẫn đến sản sinh ceton quá mức, gây tích lũy và giảm pH máu Nhiễm toan được định nghĩa là khi pH huyết thanh < 7,35, trong đĩ pH < 6,8 được coi là khơng phù hợp với sự sống Ceton được hình thành
do sự phân giải các acid béo Insulin ức chế quá trình
beta-oxy hĩa của các acid béo; vì vậy, nồng độ insulin thấp làm tăng hình thành ceton, cĩ thể thay ở những bệnh nhân đái tháo đường Nơng độ
Nguén: US Pharm 2016, 41(2):39-42 Người dịch: Lê Thị Quỳnh Giang, Lương Anh Tùng glucose mau tảng quá cao dẫn đến bài niệu thẩm thấu, tăng bài tiết cortisol và catecholamin, thúc đẩy quá trình oxy hĩa acid béo và hình thành ceton Tăng nồng độ glucagon, do bị kích thích bởi hạ đường huyết và thiểu hụt insulin, dẫn đến phân giải lipid, làm tăng sản xuất acid béo tự do và hình thành thể ceton
Cae dang nhiém toan ceton
Hai dạng phổ biến của nhiễm toan ceton là nhiễm toan ceton do đái tháo đường (DKA) và nhiễm toan ceton do rượu (AKA) Tỷ lệ tử vong của DKA từ 1% đến 10%, với nguyên nhân tử vong phổ biến là nhiễm trùng hoặc biến cố liên quan đến tìm mạch như trụy tuần hồn và hạ kali máu Các trường hợp tử vong do AKA cũng đã được báo cáo, nhưng tỷ lệ tử vong nhìn chung thấp trong trường hợp bệnh nhân được điều trị kịp thời DKA và AKA được coi là cấp cứu nội khoa nghiêm trọng và cần được xử trí khẩn cấp 5o sánh giữa 2 dạng nhiễm toan ceton được trình bày trong bảng 7
Nhiễm toan ceton do dai thúo đường
Nhiễm toan ceton thường xảy ra ở bệnh nhân đái tháo đường phụ thuộc insulin bị thiếu hut insulin hoặc tăng nhu cầu insulin trong giai đoạn cấp của bệnh, dẫn đến phân giải các acid béo và hình thành ceton Thiểu hụt insulin làm tăng các hormon đối kháng như glucagon, catecholamin, cortisol và hormon tăng trưởng Dư thừa glucagon và catecholamin cùng với nồng độ insulin thấp làm thúc đẩy hình thành ceton DKA đặc trưng với biểu hiện tăng đường huyết, pH máu động mạch < 7,3, cĩ ceton trong huyết thanh và nhiễm toan cĩ khoảng trống anion cao Kali huyết thanh cĩ thể tăng mặc dù tổng lượng kali trong cơ thể giảm, và giảm thể tích tuần hồn và tăng đường huyết che giấu sự thiếu hụt natri, clorid, phospho và magnesi
Trang 39Nghiên cứu dược& Thơng tin thuốc 2017, Tập & $6 1, trang 34-37 Bảng 1, So sánh DKA và AKA DKA I ANA Triệu thứng
- Buốn hơn Bun nbn,
-Nơn -Nơn
- Đại bụng - Đầu bụng
- NhátRiễu nhiều - Kigu tho Kussmaul -Hưïthổ cĩ mùitải ty
- Tăng huyếtáp
- Nhíp tìm nhanh
Ngun nhân
dụng khơng đùiểu insuln
- Nhiễm trùng
§Jidụng sácthuốc hướng thần bị ấm, - Thiến máu qục bộ ở mơ tại tìn huặt não
~ äï năm đột ngột ð bệnh nhân
nghiện rượu mạntĩnh kết hợp với
thếộdnh dưng kém
-lần đu uốngbúarượi qu
Điều trị
~ BU dich; 2-31 dung dich natri dorid 0,9% trong 1-3 Í - BD dich vi glucose: dextrose
gi tiệp theo dùng dụng địch nari lord 0,45% 250-| 5% trong dung dich nat lvid 500 l/l Khi ghucose dat 13,9 mmol/l, chuyển sang | 0,9% cho đến khi bù đủ các glucose 596 va dung dch natrl cord 0,4596 150-250 | thất điện gi, sau 8ĩ chuyển
mi/gib sang dextrose 5% trong dung
- Sit ng insulin tc dung ngin dug tinh mach 0,1 | dich nat or 045% cho én Ug, sau a6 truyén lên tuc (0,1 U/kg/gid) C6 thé] khi lang nap qua ding wong tăng liều lên +3 lần nếu khơng cĩ áp ứng trong 2-4 | được đảm bảo
gi và giảm liu ínsuin xuống cịn 0,5-1,1 U/kg 6€ | Bì mansi vàkali, tly t glucose mau trong Khodng 8,3-13,9 mmol, | ~ C6 thé sit dung 50-100 mg ~ Nng tp kali huyétthanh phat > 3,3 mEq/L tric kh | thiamin (vltamin B1) vi 1 mg
dling insulin acid folic tng tinh mach
~ Sit yng 10-20 mEq Kall tong tng mal It dich
truyền (ngừng truyền kali nếu nồng độ kali ban đầu
tăng tiếnkhi nắng độ klitrởvề bình thường)
Bệnh nhẫn cĩ thế buồn nơn, nơn, khát nước quá mức, đi tiểu thường xuyên và đau bụng, xuất hiện trong vịng 24 giờ, Tăng đường huyết cĩ thể dẫn đến
bài niệu thẩm thấu và nhịp tim nhanh, trong khi
giảm thể tích cùng giãn mạch ngoại vi cĩ thể gây hạ huyết áp, Bệnh nhân cĩ thể cĩ hơi thở mùi trái cây, thé sau và nặng nhọc (kiểu thở Kussmaul) thứ phát do toan chuyển hĩa
Điều trị DKA: biện pháp chính điều trị DKA là sử dụng insulin đường tĩnh mạch và bù dịch, và DKA được điều trị tốt nhất thơng qua cách tiếp cận điều trị theo protocol trong phịng Hồi sức tích cực (ICU) Ngay lập tức, nên dùng một liều nạp tiêm tĩnh mach 0,1 U/kg insulin tác dụng ngắn, sau đĩ truyền liên tục insulin 0,1 U/kg/giờ và tăng liều nếu bệnh nhân khơng cĩ đáp ứng trong 2-4 giờ Liều insulin
cĩ thể giảm xuống cịn 0,05-0,1 U/kg để duy trì
glucose huyết tương ở mức 8,3-13,9 mmol/l và ngăn ngừa hạ đường huyết Khi tình trạng nhiễm toan được giải quyết và bệnh nhân ổn định, cĩ thể
9
THƠNG TIN THUỐC $
ăn được, cĩ thể chuyển sang tiêm gối đầu insulin tác dụng kéo dài qua đường tính mạch 2-4 giờ trước khi truyền tĩnh mạch liên tục và tiêm dưới da insulin để ngăn ngừa tái phat DKA Insulin tac dung ngắn cũng nên được dùng vào trước các bữa ăn Nếu nồng độ kali ban đầu < 3,3 mEo/L, insulin nên được tạm ngừng cho đến khi nồng độ kali tăng lên Ngồi insulin, ban đầu nên nạp 2-3L natri clorid 0,9% trong 1-3 giờ Khí bệnh nhân ổn định huyết động và cĩ thể bài niệu, chuyển sang natri clorid 0,45% sẽ làm giảm nguy cơ tăng clo máu
Insulin ức chế hình thành các thể ceton, thúc đẩy sử dụng ceton và tăng cường sản xuất bicarbonat Tuy nhiên, tăng đường huyết hồi phục nhanh hơn so với nhiễm toan ceton, vì vậy khi glucose máu đạt 13,9 mmol/l, dextrose được bổ sung để duy trì glucose máu trong khoảng từ 8,3-13,9 mmol/l trong khi tiếp tục truyền insulin Kali tồn phần trong cơ thể bị thiếu hụt ở bệnh nhân DKA, và khi nồng độ kali ban đầu khơng tăng, nên bổ sung 10-20 mEq kali trong mỗi lít dịch truyền tĩnh mạch Natri bicarbonat khơng được khuyến cáo trừ khí pH giảm xuống dưới 7,0, vì việc đảo chiều nhanh chĩng trong nhiễm toan cĩ thể dẫn đến suy tim Bù phosphat và magnesi nên được cá thể hĩa trên từng bệnh nhân dựa trên các kết quả xét nghiệm
Nhiếm toan celon do rượu
Nghiện rượu cũng cĩ thể gây nhiễm toan ceton khi cai rượu đột ngột kết hợp với dinh dưỡng kém, khi đĩ cơ thể khơng cĩ đủ glucose làm nguồn năng lượng phục vụ cho các hoạt động Trong tình trạng này, cơ thể tăng chuyển hĩa acid béo, và càng tăng thêm thơng qua giảm tiết insulin và tăng glucagon AKA thường đi kèm với nhiễm toan cĩ khoảng trổng anion cao và tăng nồng độ lactat huyết thanh Một số bệnh nhân cĩ thể cĩ pH máu bình thường vì cĩ rối loạn acid-base hỗn hợp do nơn và nhiễm kiểm hơ hấp Các triệu chứng của bệnh nhân bao gồm buồn nơn, nơn và đau bụng
Điều trị AKA: biện pháp điều trị tiêu chuẩn cho AKA la sử dung glucose và bù dich Sif dung glucose thúc đẩy tiết insulin, ngừng phân giải lipid va hình thành acid béo tự đo, nhờ đĩ tạm ngừng sự hình thành ceton Ban đầu, nên sử dụng dextrose 5% trong dung dịch natri clorid 0,9% và chuyển sang dùng dextrose 5% trong dung dịch natri clorid 0,45% khi đã bù đủ các chất điện giải Khi lượng nạp đường uống được đảm bảo, cĩ thể ngừng bù dịch qua đường tĩnh mạch Việc sử dụng kali và magnesi nên
Trang 40Nghiên du dược &Thơng tín thuốc 2017, Tập 8, $61, trang 3-37
được cá thể hĩa trên từng bệnh nhân và dựa vào các kết quả xét nghiệm Thiamin và folat cĩ thể được sử dụng nếu bệnh nhân được xác định hoặc cĩ nguy cơ thiếu vitamin để ngăn ngừa bệnh não Wernicke Insulin khơng được sử dụng vì cĩ thể gây hạ đường huyết do mức glycogen thấp và nồng độ glucose thấp hoặc ở mức bình thường Giống với DKA, natri bicarbonat chỉ được chỉ định trong nhiễm toan nặng với pH < 7,0 Bù phosphat chỉ được áp dụng khi nồng độ phosphor < 1 mg/dL Trong các trường hợp này, thường cĩ yếu tố khác gĩp phần gây nhiễm toan,
như các thuốc được dùng đồng thời
€úc biến chứng tim mạch
Cĩ nhiều biển chứng tìm mạch trong nhiễm toan ceton thứ phát do rối loạn điện giải và giải phĩng catecholamin Nhiễm toan ceton cĩ thể gây phù phổi, và bệnh nhân nhồi máu cơ tìm cấp cĩ thể dẫn đến nhiễm toan ceton, tiếp tục gây tổn thương cơ tim
Nhiễm toan ceton dẫn đến mất cân bằng điện giải, đặc biệt là giảm kali, magnesi và phospho, cĩ thể dẫn đến các biến chứng tìm mạch nếu khơng được bù điện giải cẩn than (bang 2) Ban dau, kali cĩ thể tăng do sự di chuyển từ nội bào ra huyết tương thứ phát do nồng độ insulin thấp Trong quá trình điều trị với bù dịch và sử dụng insulin, kali ngoại bào cĩ thể đi vào trong tế bào, dẫn đến nồng độ kali thấp gây nguy hiểm cho bệnh nhân Nồng độ kali rất quan trọng do cả tăng và hạ kali máu đều cĩ thể gây loạn nhịp tim Nồng độ kai huyết thanh bình thường là 3,5-5 mEq/L Nồng độ kali huyết thanh < 3 mEq/L cĩ thể dẫn đến loạn nhịp và ngừng tim, trong khi nồng độ > 5,5 mEq/L cĩ thể gây bất thường trên điện tâm đồ, nhịp nhanh thất hoặc rung thất
Bảng 2 Các biến chứng tim mạch của mắt cân bằng điện giải
Mất cân bằng điện giải | tácbiếnchửngtiếmtàng Ha kali mau Loạn nhịp, ngừng từm
Tang kali mau Bất thường điện tâm đĩ, nhịp nhanh thất, nung thất Hạ mamesi máu Giảm hơ hấp, ấn tiến độ bão hịa my thấp, làm trầm
trọng thêm tình trạng mất kali,
Ha phospho mau Thay đối trạng thải tâm thần, giảm thơng khí, ngìng
tim - phổi
Nồng độ magnesi cũng cần được theo dõi chặt chẽ, do hạ magnssi cĩ thể làm trầm trọng thêm tình trạng mất kali do làm suy giảm sự hấp thu kali của tế bào và tăng bài tiết qua thận Magnesi cũng đĩng
9
Trơnemmusc
vai trị như một chất giãn cơ và hạ magnesi máu cĩ thể dẫn đến suy hơ hấp, độ bão hịa oxy thấp, rất nguy hiểm cho bệnh nhân hen phế quản hoặc bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính (COPD)
Mất cân bằng điện giải cũng cĩ thể do tăng nồng độ phospho Mặc dù nồng độ phospho ban đầu cĩ thể ở mức bình thường hoặc tăng, nồng độ chất điện giải này vẫn rất nhạy cảm với điều trị nhiễm toan ceton tiêu chuẩn Thực tế, đã cĩ nhiều báo cáo về các trường hợp biến chứng do giảm mạnh nồng độ phospho Một báo cáo ghi nhận nồng độ phospho của bệnh nhân giảm từ 4,9 mg/dL xuống cịn 0,6
mg/dL trong vịng 1 ngày điều trị nhiễm toan ceton
Nồng độ phospho bình thường là 2,5-4,5 mg/dL Nồng độ phospho giảm dẫn đến thay đổi ý thức của bệnh nhân Sau khi bù phospho, tình trạng tâm thần của bệnh nhân trở lại bình thường vào ngày thứ 5 của liệu trình điều trị nhiễm toan ceton Thiếu hụt phospho cĩ thể làm yếu cơ xương, giảm thơng khi, dẫn đến ngừng tim - phổi Bù phosphat mạnh cĩ thể làm giảm calci máu, vì vậy phải giám sát cả nồng độ phospho và calci,
Việc giải phĩng catecholamin trong nhiễm toan ceton ảnh hưởng trực tiếp lên hệ tìm mạch Giảm pH huyết thanh thường dẫn đến tăng thơng khí và kiểu thở Kussmaul Dù tính co thắt của tim cĩ thể suy yếu, việc giải phĩng catecholamine dẫn đến chức năng co bĩp của tìm bình thường Trong nhiễm toan nhẹ (pH 7,2-7,35), catecholamin được tảng cường giải phĩng và cơ thể phản ứng lại bằng cách tăng cung lượng tim thơng qua tăng nhịp tim và tăng chức năng co thất của tim Khi pH máu < 7,2 tìm bị suy yếu trực tiếp do ion H", cuối cùng dẫn đến giảm cung lượng tim và nguy cơ sốc nặng Nồng độ glucose máu tăng cao dẫn đến bài niệu thẩm thẩu, cĩ thé làm giảm thể tích tuần hồn Tình trạng này liên quan đến tầng nỗng độ cortisol và tiết catecholamin, dẫn đến kích thích sản xuất acid béo tự do và hình thành ceton
Biển chứng tim - phổi như phù phổi và hội chứng suy hơ hấp cấp đã được ghi nhận ở bệnh nhân nhiễm toan ceton Giãn động mạch ngoại vỉ và co tính mạch trung tâm cĩ thể xuất hiện trong nhiễm toan ceton, và sự co mạch này cĩ thể gĩp phần trong tiến triển phù phổi ngay cả với quá tải tuần hồn nhẹ Hiện tượng bù trừ thơng khí phế nang đã được ghi nhận ở bệnh nhân DKA, cĩ thể dẫn đến độ bão