Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học thân rễ nghệ vàng tỉnh Quảng Nam

Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS.NGUYỄN THỊ BÍCH TUYẾT NGUYỄN THANH HÙNG Phản biện 1: PGS.TS TRẦN THỊ XÔ NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC THÂN RỄ NGHỆ VÀNG TỈNH QUẢNG NAM Phản biện 2: PGS.TS LÊ THỊ LIÊN THANH Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: Đà Nẵng, Năm 2012 Footer Page of 126 - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU ñề tài: “ Nghiên cứu chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học Lý chọn ñề tài thân rễ nghệ vàng tỉnh Quảng Nam” Một xã hội tồn phát triển ñược nhờ tư duy, ý thức Để góp phần xây dựng kinh kế cho ñịa phương, nâng cao người Con người luôn tìm hiểu, phát minh, vận dụng, mức sống cho người dân, tăng thu nhập quốc danh Đề tài khai thác thiên nhiên cho lợi ích nhằm giúp người trở sở khoa học cho sản xuất nghệ vàng qui mô lớn toàn ñịa thành chủ thể tự nhiên Từ thời xa xưa cho ñến xã hội loài người phương ñều khai thác nguồn tài nguyên tự nhiên ñể làm thực phẩm, thuốc Mục ñích nghiên cứu chữa bệnh, vật liệu nhiên liệu cho sống thường Nghiên cứu chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ ngày Nước ta nước nằm vùng nhiệt ñới ẩm nên hệ thực nghệ vàng tỉnh Quảng Nam vật phong phú ña dạng Đó nguồn tài nguyên sinh học quý Đối tượng phạm vi nghiên cứu giá, thuộc loại tài nguyên tái tạo ñược * Đối tượng nghiên cứu: Dịch chiết etanol thân rễ (rhizome) Trong số loài cỏ quen thuộc gắn bó với sống nghệ vàng (Curcuma parviflora Wall aff ), thôn 4, xã Tam thường ngày nước ta, phải kể ñến nghệ thuộc họ Gừng Xuân 1, huyện Núi Thành, tỉnh Quảng Nam (Zingiberaceae) Họ Zingiberaceae thảo dược ñộc tính, * Phạm vi nghiên cứu: nguồn cung cấp gia vị cho nhiều ăn, dược liệu trị + Phương pháp xác ñịnh ñộ ẩm ñược nhiều bệnh Chi nghệ (Curcuma) thuộc họ Zingiberaceae + Ngâm chiết rắn lỏng bột nghệ dung môi etanol Củ nghệ ñược biết ñến loại gia vị, thuốc gia truyền chữa + Chưng cất thu tinh dầu dịch chiết etanol thân rễ nghệ ñược nhiều bệnh, làm liền sẹo… Phần lớn, chúng cho tinh dầu có vàng mùi thơm ñặc biệt, ñó có số ñược dùng làm chất + Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu thân rễ nghệ vàng thơm hương liệu, mỹ phẩm , ñược sử dụng + Xác ñịnh thành phần hóa học dầu nghệ dịch chiết etanol loại thuốc giảm ñau, chống viêm nhiễm, chữa bệnh cúm, + Xác ñịnh số vật lý hóa học dầu nghệ chữa chứng khó tiêu, tẩy mùi hôi….Do tính chất sử dụng rộng rãi, + Xác ñịnh hàm lượng curcumin nghệ bột phương pháp nên ñã có nhiều công trình khoa học nghiên cứu thực vật ngâm chiết dung môi etanol hóa học, nhằm lựa chọn nâng cao giá trị sử dụng loài Phương pháp nghiên cứu: Công dụng nghệ vàng ngày ñược ứng dụng nhiều + Nghiên cứu lý thuyết: Tìm hiểu phương pháp nghiên cứu hợp lĩnh vực y học khả phòng chữa bệnh sau sinh, chất tự nhiên, tổng quan ñặc ñiểm hình thái thực vật, thành phần khả chữa số bệnh nan y: ung thư, AIDS,… Chính nhiều hoá học, ứng dụng loài thuộc chi Curcuma họ Zingiberaceae lý với nguồn nguyên liệu có sẳn ñịa phương nên ñã chọn + Phương pháp chiết: chiết lỏng – rắn dung môi hữu Footer Page of 126 Header Page of 126 + Phương pháp tách tinh dầu: tinh dầu thu ñược phương pháp cụm hoa nằm thân rễ sát mặt ñất Hoa có màu; kích thước chưng cất thường trung bình, có lớn, ñối xứng hai bên lưỡng tính + Phương pháp xác ñịnh thành phần hoá học tinh dầu: sắc kí khí - Đài có dài dính lại với thành vòng phía dưới, phần khối phổ liên hợp (GC/MS) chia làm thuỳ Tràng dính lại với phần thành + Phương pháp tách xác ñịnh cấu trúc cấu tử dịch ống phần chia làm ba thuỳ, ñó thuỳ lưng thường to hai chiết: sắc ký khí - khối phổ liên hợp (GC/MS), sắc ký lỏng hiệu thuỳ bên Bộ nhị lại nhị sinh sản có hai bao phấn cao (HPLC) hướng mở khe dài nằm thuỳ lưng Một cánh Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài môi hình lớn ba nhị biến thành dính lại với nhau, nằm ñối Từ nghiên cứu trên, luận văn ñã thu ñược số kết với diện với nhị có màu sặc sỡ Hai nhị lại tạo thành hai nhị lép ñóng góp thiết thực sau: hình cánh nhỏ nằm hai bên bao phấn, nhiều giảm lại 5.1 Ý nghĩa khoa học vảy hay có hoàn toàn Quả nang hay mọng Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết etanol từ (Elettaria, Aframomum) Hạt có phôi thẳng, bao nhũ thân rễ nghệ, tỉnh Quảng Nam giầu nội nhũ, nhiều trường hợp có áo hạt [3], [4] 5.2 Ý nghĩa thực tiễn 1.2 Đặc ñiểm hình thái thực vật thành phần hóa học Bố cục luận văn số thuộc loài nghệ Luận văn gồm chương: 1.2.1 Đặc ñiểm hình thái thực vật nghệ vàng Chương 1: Tổng quan Cây cao 0.6-1m, thân rễ to mang củ hình trụ hay hình bầu Chương 2: Những nghiên cứu thực nghiệm dục màu vàng cam sẫm, thơm Lá hình trái xoan thon nhọn hai ñầu, Chương 3: Kết nghiên cứu bàn luận hai mặt ñều nhẵn, dài tới 45cm, rộng tới 18cm; cuống có bẹ Cán Chương TỔNG QUAN 1.1 Sơ lược số loại họ Gừng (Zingiberaceae) hoa nằm lá, dài tới 20cm, mang cụm hoa hình trụ hay hình trứng dài; bắc dạng màng, màu trắng hay lục, bắc phía Các thuộc họ Zingiberaceae thảo sống lâu năm, có không sinh sản hẹp có màu tím nhạt Đài có thân rễ lớn chứa nhiều chất dự trữ Lá có nhiều bẹ dài, ôm lấy tù, không ñều Tràng có ống dài 2-3 lần, có thuỳ bên làm thành thân giả, có cuống ngắn có phiến lớn Giữa bẹ ñứng phẳng, thuỳ lớn có mũi nhọn Quả nang có cuống có lưỡi hay thìa lìa Mạch gần ñặc biệt có rễ Yếu tố ô, mở van; hạt có áo hạt mạch thủng lỗ hình thang, thủng lỗ ñơn Ở nhiều loài thân khí Nghệ vàng phân bố nhiều nơi giới như: Campuchia, Trung sinh xuất hoa, mọc lên từ thân rễ, xuyên qua thân Quốc, Ấn Độ, Indonesia, Lào, Madagasca, Malaysia Việt Nam giả ngoài, mang ñầu cuối cụm hoa (Alpinia), có loài Nó ñược trồng rộng rãi khắp Trung Quốc, Ấn Độ, Indonesia, Thái Footer Page of 126 Header Page of 126 Lan xuyên suốt vùng nhiệt ñới bao gồm vùng nhiệt ñới châu Phi Một số tài liệu cho ñây hai loài nghệ khác Ở Việt nam 1.7.2 Nguyên tắc phép ño Chương NHỮNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM có hai loài nghệ trồng khác nhau, thường gọi nghệ nếp nghệ tẻ 2.1 Đối tượng nghiên cứu Tại Việt Nam có Quảng Bình, Quảng Nam, Đắc nông Loài nghệ 2.1.1 Nguyên liệu nhà ñã ñược sử dụng từ lâu, ñặc biệt nước vùng Đông Nam Á Cây nghệ vàng ñược trồng xã Tam Xuân 1, huyện Núi Ấn Độ với cơm cari Tại Việt Nam, nghệ ñược sử dụng làm Thành, tỉnh Quảng Nam ñược thu hái vào tháng 1-3 dương lịch gia vị: kho cá với nghệ, xào bún với nghệ; làm thực phẩm: mứt gừng, 2.1.2 Hoá chất mứt nghệ, làm chất màu dùng chất làm thuốc: bôi nghệ 2.1.3 Thiết bị - Dụng cụ lên vết sẹo ñể giúp lên da non 2.2 Phương pháp thực nghiệm 1.2.2 Công dụng số loài nghệ thuộc chi Curcuma 2.2.1 Mô tả nghệ Curcuma parviflora Wall aff *Một số ñơn thuốc có nghệ vàng: [23] Cây thân thảo cao 40-60 cm, có thân củ nhỏ, ñường kính 1.2.3.Thành phần hóa học số loài nghệ vàng ñã nghiên khoảng 1,5-2 cm, vỏ có vảy, ruột màu vàng, phân thành vòng, vòng cứu nước nước ñậm vòng 1.2.4 Tìm hiểu curcumin [12] Lá thường từ 3-5, phiến hình bầu dục, dài khoảng 20-30 cm, 1.2.5 Một số chất có nghệ Curcuma parviflora Wall aff [12] rộng khoảng 6-9 cm, mặt không lông, ñáy lệch; cuống dài 1.3 Cơ sở lý thuyết phương pháp chiết tách hợp chất hữu 10-20 cm; bẹ (thìa lìa) ngắn Phát hoa lá, cao 5-8 cm; hoa x 1-1,5 cm, hoa 1.3.1 Phương pháp hoà tan dung môi hữu màu xanh nhạt, hoa khác màu, có xu hướng ngã 1.3.2 Phương pháp chiết qua màu trắng hồng; ñài hoa cao khoảng 7-8 mm, có răng; vành 1.3.3 Phương pháp tách hoa có ống, cánh hoa cao khoảng mm; bao phấn móng; 1.3.4 Phương pháp kết tinh nhị lép màu trắng, thon, dài cánh hoa; môi dài ngang, màu 1.4 Cơ sở lý thuyết phương pháp chưng cất lôi nước tim tím có sọc trắng 1.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 2.2.2 Lấy mẫu xử lý mẫu 1.5.1 Giới thiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 2.2.3 Xác ñịnh ñộ ẩm bột nghệ 1.5.2 Nguyên tắc phương pháp 2.2.4 Xác ñịnh hàm lượng tro bột nghệ 1.6 Phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) 2.2.5 Xác ñịnh hàm lượng kim loại bột nghệ 1.7 Phương pháp ño quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 1.7.1 Giới thiệu phương pháp Footer Page of 126 Header Page of 126 10 + Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu thân rễ nghệ vàng 2.2.6 Qui trình nghiên cứu + Xác ñịnh thành phần hóa học dầu nghệ Nghệ vàng 200 (g) + Xác ñịnh hàm lượng curcumin dịch chiết clorofom curcumin kết tinh, từ ñó xác ñịnh hàm lượng curcumin nghệ Xử lí nguyên liệu bột + Xác ñịnh số vật lý hóa học dầu nghệ Dịch chiết etanol (1,6l) 2.2.7 Khảo sát ñiều kiện chiết thu dầu nghệ Chưng cất 2.2.8 Xác ñịnh số vật lý số hóa học dầu nghệ 2.2.9 Phương pháp xác ñịnh thành phần dịch chiết Etanol bay hơi, tinh dầu bay Nước, etanol, chất ko bay Chiết n-hexan GC-MS Xác ñịnh thành phần chất Phần tan Đuổi dung Dầu nghệ GC-MS xác ñịnh thành phần chất Phần không Chiết clorofom Dịch chiết Đuổi bớt, dung môi Phần không tan Cô ñặc, tinh chế Dịch clorofom 295.39 (g) Curcumin thô 5.43 (g) HPLC Xác ñịnh hàm lượng curcumin HPLC Xác ñịnh hàm lượng curcumin + Khảo sát thời gian chiết ñể tìm thời gian chiết tối ưu Khảo sát tỉ lệ chiết dung môi etanol thời gian tối ưu tìm tỉ lệ rắn 2.2.9.1 Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu phương pháp phân tích sắc ký khí khối phổ ( GC/MS) Mẫu tinh dầu thu ñược ñem phân tích sắc ký khí khối phổ GC/MS trường Đại học Sư phạm Huế - Khoa Hóa học 2.2.9.2 Xác ñịnh thành phần hóa học dầu nghệ phương pháp phân tích sắc ký khí khối phổ ( GC/MS) Mẫu dầu nghệ thu ñược ñem phân tích sắc ký khí khối phổ GC/MS Trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng 2.2.9.3 Xác ñịnh hàm lượng curcumin mẫu rắn kết tinh dịch clorofom phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Chất rắn kết tinh dịch clorofom ñược xác ñịnh hàm lượng curcumin sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN lỏng tối ưu cho trình tách chiết dầu nghệ phương pháp 3.1 Nghiên cứu số thông số nghệ bột ngâm chiết 3.1.1 Độ ẩm nghệ bột + Chưng cất thu tinh dầu dịch chiết etanol thân rễ nghệ vàng Footer Page of 126 Độ ẩm trung bình nghệ bột 5.6938 % Từ bảng ta thấy nghệ bột có ñộ ẩm thấp nghệ ñã ñược phơi khô với ñộ ẩm Header Page of 126 11 12 nghệ bột ñược bảo quản thời gian dài, nguyên liệu có tính nặng, tạp chất từ ñó nâng cao hiệu sử dụng nghệ bột ổn ñịnh cao, không bị ẩm móc hay hư thối thực phẩm, dược phẩm,… 3.1.2 Hàm lượng tro 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian ảnh hưởng Hàm lượng tro trung bình nghệ bột 4.3534 % Từ tỉ lệ rắn lỏng ñến hàm lượng dầu nghệ phương pháp ngâm bảng ta thấy nghệ bột chứa lượng chất vô chiết ñó có mặt muối số kim loại 3.2.1 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian ñến hàm lượng 3.1.3 Hàm lượng kim loại dầu nghệ Kết thực nghiệm thu ñược tiến hành ngâm chiết nghệ bột Bảng 3.3 Hàm lượng số kim loại nghệ bột ñã gọt vỏ Kim loại Hàm lượng (mg/ kg) với dung môi etanol 960 theo thời gian tăng dần từ 4, 5, 6, 7, ngày Pb < 0.05 hàm lượng dầu nghệ tăng Tuy nhiên, hàm lượng dầu nghệ mẫu Cd < 0.05 ngâm chiết 4, 5, 6, ngày tăng ñều mẫu ngày thứ hàm Cu 8,76 lượng dầu nghệ tăng không ñáng kể Do ñó, thời gian ngâm chiết nghệ Fe 51.1 bột dung môi etanol 960 ngày thời gian chiết tối ưu Bảng 3.4 Hàm lượng số kim loại nghệ bột không gọt vỏ 3.2.2 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ rắn-lỏng ñến hàm lượng dầu nghệ Kim loại Hàm lượng (mg/ kg) Pb 0.092 Kết thực nghiệm thu ñược tiến hành ngâm chiết nghệ bột Cd < 0.05 với dung môi etanol 960 theo thời gian ngâm chiết ngày tỉ lệ rắn/lỏng Cu 5.78 tương ứng: 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 theo hàm lượng dầu nghệ thu ñược Fe 217 tăng dần theo tỉ lệ dung môi tăng Hàm lượng dầu nghệ tăng tới tỉ lệ Hàm lượng số kim loại bột nghệ ñã gọt vỏ chưa gọt vỏ có khác biệt Đặc biệt ñối với hàm lượng Fe: hàm lượng Fe nghệ ñã gọt vỏ Fe (51.1 mg/kg) gấp khoảng lần so với hàm lượng Fe nghệ chưa gọt vỏ (217 mg/kg) Như vậy, hàm lượng kim loại nặng Pb, Cd, thấp ñược phép sử dụng Do ñó, việc sử dụng bột nghệ theo phương pháp dân gian không gọt vỏ, gây ảnh hưởng xấu ñến sức khỏe người Từ kết nghiên cứu, ñể sử dụng nghệ bột ta cần phải gọt vỏ ñể loại kim loại 1:8, 1:9, 1:10 tăng không ñáng kể Do ñó, tỉ lệ rắn/lỏng 1:8 tối ưu *Như vậy, trình khảo sát thực nghiệm cho ta biết ñược thời gian ngâm chiết tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu ngày 1:8 ñể chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ nghệ vàng tỉnh Quảng Nam Kết xác ñịnh hàm lượng dầu nghệ phương pháp ngâm chiết dung môi etanol 2.8479% từ nghệ bột, phương pháp mang lại hiêu suất cao, tiện ích Dựa vào thời gian ngâm chiết, tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu giúp cho trình nghiên cứu Footer Page of 126 Header Page of 126 13 14 thuận lợi hơn, mang lại hiệu chiết tách cao hơn, lợi ích kinh tế nhiều 3.3 Quy trình chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ nghệ vàng Thuyết minh quy trình: Ta cân cân phân tích 200g nghệ bột ñã xác ñịnh ñộ ẩm Đồng thời, ta dùng ống ñong lấy 1600ml dung môi etanol 960 cho vào bình thủy tinh (hình 3.1) Tiến hành ngâm chiết ngày ñiều kiện phòng thí nghiệm (nhiệt ñộ 300C ) Hình 3.2 Bộ dụng cụ chưng cất thu hồi dung môi Hình 3.1 Dụng cụ ngâm chiết nghệ bột dung môi etanol 960 Hình 3.3 Tinh dầu etanol bay Lọc dịch chiết thu ñược ñem chưng cất Hỗn hợp khoảng Phần không bay (thể tích khoảng 200ml) thêm 200ml nước cất 1300ml dung môi etanol tinh dầu bay (hình 3.2) Trong dịch etanol ñem chiết với dung môi n-hexan (chiết ñến dịch n-hexan hòa tan tinh dầu bay chất lỏng, màu vàng nhạt, có mùi thơm có màu nữa, lúc ñó dầu nghệ ñã tan hết dung môi) Dịch chiết n- nhẹ Mẫu tinh dầu etanol bay ñược xác ñịnh thành phần hóa học hexan (thể tích 550ml) ñược chưng cất thu hồi dung môi thu ñược dầu phương pháp phân tích sắc ký khí khối phổ GC/MS trường nghệ (hình 3.4) Dầu nghệ thu ñược chất lỏng, sánh, màu vàng ñậm, ta Đại học Sư phạm Huế - Khoa Hóa học xác ñịnh số lý hóa Dầu nghệ dịch chiết n-hexan xác ñịnh Footer Page of 126 Header Page of 126 15 16 thành phần hóa học phương pháp phân tích sắc ký khí khối phổ GC/MS Trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng Hình 3.6 Dịch chiết clorofom Hình 3.4 Dầu nghệ dịch chiết n-hexan Dịch không tan n-hexan ñược chiết nhiều lần dung môi clorofom (cho ñến phần dịch clorofom không màu) (hình 3.5) Thu ñược 600ml dung dịch Phần dịch clorofom ñược chưng cất thu hồi bớt dung môi (hình 3.6) Sau cô bớt lại khoảng 200ml có khối Hình 3.8 Curcumin thô kết tinh lượng 295,39g, ñem phân tích phương pháp sắc ký lỏng hiệu 3.4 Kết xác ñịnh số vật lý số hóa học dầu cao HPLC ñể xác ñịnh hàm lượng curcumin Trung tâm kỹ thuật ño nghệ lường chất lượng 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng 3.4.1 Chỉ số khúc xạ Phần không tan clorofom ñem cô ñặc bếp cách thủy Dầu nghệ có số khúc xạ 1.5146 số tương gần với sau ñó kết tinh lại etanol 96 , thu ñược curcumin thô (hình 3.4) có giá trị dầu nghệ vàng Bình Định (theo luận văn thạc sĩ khối lượng 5,43 g, ñược xác ñịnh hàm lượng phương pháp sắc ký Nguyễn Thị Nghĩa), kết nghiên cứu phù hợp lỏng hiệu cao HPLC Trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 3.4.2 Tỉ trọng dầu nghệ 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng Dầu nghệ có tỉ trọng 0.8819 (/ml), nhẹ tỉ trọng nước dầu nghệ lên bề mặt nước Footer Page of 126 Header Page of 126 17 3.4.3.Chỉ số axit (X) 18 Bảng 3.11 Thành phần hóa học dung môi etanol bay thân Chỉ số axit trung bình: 3.0470 rễ nghệ C parviflora Wall 3.4.4 Chỉ số este (E) Chỉ số este trung bình: 32.9017 STT * Nhận xét: Chỉ số axit dầu nghệ (3.0470) tương ñối RT (phút) NHẬN DANH CTPT Conc (%) nhỏ ñiều chứng tỏ hàm lượng axit tự có dầu nghệ 5.847 Alpha-Pinene C10H16 0.170 lượng este dầu nghệ tương ñối nhiều 7.175 Beta-Myrcene C10H16 0.160 3.5 Thành phần hóa học tinh dầu ñược xác ñịnh phương 7.578 Alpha-Phellandrene C10H16 5.012 7.900 (+)-4-Carene C10H16 0.087 8.109 Beta-Cymene C10H14 0.589 8.233 (+)-(R)-Limonene C10H16 0.447 8.330 P-Cineole C10H18O 7.684 9.056 Gama-Terpinene C10H16 0.254 9.861 (+)-2-Carene C10H16 0.576 10 11.997 Terpinenol-4-ol C10H18O 0.175 11 12.274 Alpha-Terpineol C10H18O 0.214 12 16.073 (-)-Zingiberene C15H24 0.136 13 16.145 Cedr-8-en-13-ol C15H24O 0.095 14 16.448 Caryophyllene C15H24 1.495 C20H32 1.715 C15H24 1.792 thấp Chỉ số este dầu nghệ (32.9017) tương ñối cao ñó tổng pháp phân tích sắc ký khí khối phổ ( GC/MS) (E,E)-7,11,15-TrimethylHình 3.9 Sắc kí ñồ GC/MS dịch etanol có tinh dầu bay 15 16.821 thân rễ nghệ C Parviflora Wall tetraene 16 Footer Page of 126 3-methylene-1,6,10,14- 16.821 Isocaryophillene Header Page 10 of 126 19 20 17 17.026 Alpha-Humulene C15H24 0.753 18 17.083 Acoradiene C15H24 0.152 C15H22 5.919 19 17.381 Alpha-Curcumene or ArCurcumene (5.792%), Alpha-Curcumene Ar-Curcumene Zingiberene (0.136%), Beta-Secquiphellandrene (11.543%), Bergamotene 15.856%), …trong ñó có chất như: Tumerone, Ar- 17.381 Beta-Bisabolene C15H24 5.919 21 17.607 Bergamotene C15H24 15.856 22 17.863 Cis-alpha-bisabolene C15H24 2.178 23 17.925 Cedr-8-ene C15H24 0.619 24 18.185 Beta-Secquiphellandrene C15H24 11.543 25 18.348 Alpha-Patchoulene C15H24 0.922 26 18.763 C11H10O2 0.285 C14H24O2 0.336 C10H16O 0.214 0(5,14).0(7,11)]tetraene tumerone (5.919%), Alpha-Phellandrene (5.012%), P-Cineole (7.684%), (-)- 21 Pentacyclo[7.5.0.0(2,8) nhiều chất, ñó cấu tử chính: Tumerone (21.478%), Ar- tumerone, Alpha-Curcumene, Ar-Curcumene có giá trị y học cao 3.6 Thành phần hóa học dầu nghệ ñược xác ñịnh phương pháp phân tích sắc ký khí khối phổ ( GC/MS) 2,5,927 18.896 Trimethylcycloundeca4,8-dione 1-(1,2,3-Trimethyl- 28 19.058 cyclopent-2-enyl)- Hình 3.10: Sắc kí ñồ GC/MS dầu nghệ dịch n- hexan thân rễ nghệ C parviflora Wall ethanone 29 21.422 Alpha-Bisabolol C15H26O 0.277 30 21.616 Ar-tumerone C15H20O 5.792 31 21.738 Tumerone C15H22O 21.476 32 22.217 (-)-Spathulenol C15H24O 0.279 thân rễ nghệ C Parviflora Wall Trên sắc kí ñồ GC/MS dịch etanol bay cho thấy gồm Footer Page 10 of 126 Bảng 3.12: Thành phần hóa học dầu nghệ dịch n- hexan STT RT (phút) 6.074 NHẬN DANH Eucalyptol CTPT C10H18O Conc (%) 0.32 Header Page 11 of 126 11.621 12.314 21 Caryophyllene Benzene, 1-(1,5-dimethyl4-hexenyl)-4-methyl- 22 C15H24 0.20 clorofom ñược xác ñịnh phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) C15H22 1.23 - Với phương pháp ngâm chiết kết tinh thu ñược 5.43 gam tinh thể curcumin màu nâu ñỏ, không tan nước 1,3-cylohexadiene, 5-(1,54 12.463 dimethyl-4-hexenyl)-2- - Dịch chiết clorofom thu ñược sau thu hồi dung môi có C15H24 1.84 methyl-, [S-(R*,S*)]- bình tam giác 250ml Cyclohexene, 3-(1,55 12.829 dimethyl-4-hexenyl)-6- khối lương 295.39 gam có màu nâu ñỏ, thể tích 200ml ñựng Kết hàm lượng curcumin ñược trình bày qua bảng 3.13, 3.14 C15H24 1.88 Bảng 3.13: Kết kiểm nghiệm curcumin chất rắn kết tinh methyl-, [S-(R*,S*)]- phương pháp HPLC 14.550 Ar-tumerone C15H20O 25.07 14.588 Tumerone C15H22O 14.30 14.947 Curlone C15H22O 17.07 17.478 n-hexadecanoic acid C16H32O2 1.78 10 19.165 C18H32O2 2.50 11 19.348 C20H36O2 1.39 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)Linolleic acid ethyl ester Chỉ tiêu kiểm nghiệm Đơn vị tính Kết Phương pháp Curcumin % 42.20 HPLC Bảng 3.14: Kết kiểm nghiệm curcumin dịch clorofom phương pháp HPLC Chỉ tiêu kiểm nghiệm Đơn vị tính Curcumin % Kết Phương pháp 1.05 HPLC Trên sắc kí ñồ GC/MS dịch n- hexan cho thấy gồm nhiều chất, ñó cấu tử có thời gian lưu RT = 14.550 phút Ar-tumerone có hàm lượng 25.07%, Curlone chiếm 17,07% có thời gian lưu 14.947 phút thời gian lưu 14.588 phút Tumerone chiếm hàm lượng 14.30%, cấu tử khác: Eucalyptol (0.32%), alpha-Zingiberene ( 1.23%), 1,3-cylohexadiene, 9,12Octadecadienoic acid (z,z)- (2.50%)… Đó cấu tử của dầu nghệ sau ngày ngâm chiết dung môi etanol 960 3.7 Hàm lượng curcumin mẫu rắn kết tinh dịch Footer Page 11 of 126 Hình 3.11: Sắc kí ñồ HPLC curcumin chuẩn sản phẩm kết tinh Header Page 12 of 126 23 24 Bảng 3.15: Kết trình chiết tách curcumin nghệ bột Khối lượng nghệ bột (g) 200.00 Khối lượng Khối lượng curcumin I (g) 295,39 (g) dịch clorofom 3.10 Hàm lượng curcumin I (g) curcumin I 5.43 (g) theo nghệ chất rắn kết khô (%) tinh 2.29 2.70 Kết thu ñược bảng 3.15 cho biết hàm lượng curcumin I Hình 3.12: Sắc kí ñồ HPLC curcumin chuẩn nghệ bột khô Quảng Nam 2.70% Trong tự nhiên curcumin tồn dạng: Curcumin I, Curcumin II, Curcumin III (trình bày phần 1.2.4) ñó Curcumin I chiến ñến 75% Curcumin tổng Do ñó, Curcumin I thường gọi Curcumin *Phổ Curcumin dịch chiết clorofom (hình 3.13) có xuất pic ñó dạng tồn Curcumin Phổ chuẩn Curcumin (hình 3.12) Tại trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 2, số 2, Ngô Quyền, Đà Nẵng phổ chuẩn Curcumin I Từ kết ño ñược (bảng 3.13, 3.14) tính toán giá trị thực nghiện (bảng 3.15) kết hợp với nghiên cứu lý thuyết (mục 1.2.4) tính tương ñối hàm lượng Curcumin tổng từ thân rễ nghệ vàng tươi Quảng Nam Bảng 3.16: Kết tương ñối hàm lượng curcumin tổng Hình 3.13: Sắc kí ñồ HPLC curcumin dịch clorofom thân rễ nghệ vàng tỉnh Quảng Nam Từ kết bảng 3.13, 3.14 ta tính ñược hàm lượng curcumin I 200 gam nghệ bột phương pháp ngâm chiết dung môi etanol 960 ngày ñiều kiện phòng thí nghiêm (300C) Khối lượng nghệ tươi (g) Footer Page 12 of 126 ≈ 1000 Khối lượng nghệ bột (g) 200.00 Hàm lượng curcumin I theo nghệ khô (%) 2.70 Hàm lượng curcumin tổng theo nghệ khô (%) ≈ 3.60 Header Page 13 of 126 25 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ chiếm 17,07%, Tumerone chiếm hàm lượng 14.30%, Eucalyptol (0.32%), Benzene, 1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4-methyl- ( 1.23%), A KẾT LUẬN 1,3-cylohexadiene, 5-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-2-methyl-, Qua trình nghiên cứu thực nghiệm, ñã thu (R*,S*)]- (1.84%), Cyclohexene, ñược kết sau: [S- 3-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-6- methyl-, [S-(R*,S*)]- (1.88%), 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)- Đã xác ñịnh số thông số vật lý nghệ bột khô Quảng Nam: Độ ẩm chiếm 5.6938 %, hàm lượng tro chiếm 4.3534 (2.50%)…, ñó cấu tử của dầu nghệ Đặc biệt Artumerone, Tumerone chất có tác dụng làm sáng da %, hàm lượng số kim loại nặng nghệ bột ñã gọt vỏ Pb: < Quá trình nghiên cứu ñã xác ñịnh hàm lượng curcumin 0.05 mg/kg, Cd: < 0.05 mg/kg, Cu: 8.76 mg/kg, Fe: 51.1 mg/kg nghệ bột khô 2.70%, hàm lượng tổng chất rắn kết tinh nghệ bột không gọt vỏ Pb: 0,092 mg/kg, Cd: < 0.05 mg/kg, Cu: dịch chiết clorofom 200g nghệ bột khô ñem ngâm chiết với 5.78 mg/kg, Fe: 217 mg/kg Qua so sánh kết hàm lượng kim loại dung môi etanol 960 ngày ñiều kiện phòng thí nghiệm(300C) nặng sử dụng nghệ ta cần gọt vỏ *Kết luận: Loài nghệ vàng Quảng Nam có thành phần Đã khảo sát xác ñịnh ñược ñiều kiện tối ưu ñể ngâm chiết nghệ bột với dung môi etanol 96 ñiều kiện phòng thí nghiệm 0 hóa học quan trọng tinh dầu, dầu nghệ, hàm lượng curcumin, tất ñều có giá trị kinh tế cao (30 C) là: Tỉ lệ khối lượng nghệ bột/thể tích dung môi etanol 96 1:8, B KIẾN NGHỊ thời gian ngâm chiết ngày Mở rộng phạm vi nghiên cứu ñề tài theo hướng: Đã xác ñịnh số số vật lý, hóa học dầu nghệ Nghiên cứu theo hướng sâu hơn: tiếp tục nghiên cứu tìm dung môi n-hexan: Chỉ số khúc xạ (28.50 C): 1.5146, tỉ trọng: phương pháp tối ưu ñể nâng cao hiệu suất chiết tách, tinh chế 0.8819 g/ml, số axit: 3.0470, số este: 32.9017 curcumin Đồng thời, nghiên cứu lựa chọn dung môi tốt nhất, không Thành phần cấu tử thu ñược tinh dầu nghệ Quảng Nam bay etanol là: Tumerone (21.478%), Artumerone (5.792%), Alpha-Curcumene Ar-Curcumene (5.919%), Alpha-Phellandrene (5.012%), P-Cineole (7.684%), (-)Zingiberene (0.136%), Beta-Secquiphellandrene (11.543%), Bergamotene 15.856%), …trong ñó có chất như: Tumerone, Artumerone, Alpha-Curcumene, Ar-Curcumene có giá trị y học cao Thành phần cấu tử dầu nghệ thu ñược dung môi n-hexan: Ar-tumerone có hàm lượng 25.07%, Curlone Footer Page 13 of 126 gây ñộc hại, lợi ích kinh tế cao cho trình ngâm chiết nghệ bột Thử hoạt tính sinh học dầu nghệ, curcumin, ứng dụng vào ñời sống nghiên cứu ứng dụng làm thuốc y học  ... 126 10 + Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu thân rễ nghệ vàng 2.2.6 Qui trình nghiên cứu + Xác ñịnh thành phần hóa học dầu nghệ Nghệ vàng 200 (g) + Xác ñịnh hàm lượng curcumin dịch chiết clorofom... ñích nghiên cứu chữa bệnh, vật liệu nhiên liệu cho sống thường Nghiên cứu chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ ngày Nước ta nước nằm vùng nhiệt ñới ẩm nên hệ thực nghệ vàng tỉnh Quảng Nam. .. thời gian ngâm chiết tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu ngày 1:8 ñể chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ nghệ vàng tỉnh Quảng Nam Kết xác ñịnh hàm lượng dầu nghệ phương pháp ngâm chiết dung môi