Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành hóa sinh

Nếu không phải lưu giữ ở nhiệt độ -200C chỉ được để đông 1 lần Đảm bảo mẫu người bệnh, dung dịch chuẩn và QC phải ở nhiệt độ từ 22-250 C trước khi phân tích Mẫu bệnh phẩm nên được tiến h

Về việc ban hành tài liệu

“Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh”

BỘ TRƯỞNG BỘ Y TẾ

Căn cứ Luật khám bệnh, chữa bệnh năm 2009;

Căn cứ Nghị định số 63/2012/NĐ-CP ngày 31/8/2012 của Chính Phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn và cơ cấu tổ chức của Bộ Y tế;

Xét Biên bản họp của Hội đồng nghiệm thu Hướng dẫn Quy trình kỹ thuật khám bệnh, chữa bệnh chuyên ngành Hóa sinh của Bộ Y tế;

Theo đề nghị của Cục trưởng Cục Quản lý Khám, chữa bệnh,

QUYẾT ĐỊNH:

Điều 1 Ban hành kèm theo Quyết định này tài liệu “Hướng dẫn quy trình kỹ

thuật chuyên ngành Hóa sinh”, gồm 220 quy trình kỹ thuật

Điều 2 Tài liệu “Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh” ban

hành kèm theo Quyết định này được áp dụng tại các cơ sở khám bệnh, chữa bệnh Căn cứ vào tài liệu hướng dẫn này và điều kiện cụ thể của đơn vị, Giám đốc cơ

sở khám bệnh, chữa bệnh xây dựng và ban hành tài liệu Hướng dẫn Quy trình kỹ thuật Hóa sinh phù hợp để thực hiện tại đơn vị

Điều 3 Quyết định này có hiệu lực kể từ ngày ký ban hành

Điều 4 Các ông, bà: Chánh Văn phòng Bộ, Chánh Thanh tra Bộ, Cục trưởng

Cục Quản lý Khám, chữa bệnh, Cục trưởng và Vụ trưởng các Cục, Vụ thuộc Bộ Y tế, Giám đốc các bệnh viện, viện có giường bệnh trực thuộc Bộ Y tế, Giám đốc Sở Y tế các tỉnh, thành phố trực thuộc trung ương, Thủ trưởng Y tế các Bộ, Ngành và Thủ trưởng các đơn vị có liên quan chịu trách nhiệm thi hành Quyết định này./

Nơi nhận:

- Như Điều 4;

- Bộ trưởng Bộ Y tế (để b/c);

- Các Thứ trưởng BYT;

- Bảo hiểm Xã hội Việt Nam (để phối hợp);

- Cổng thông tin điện tử BYT;

- Website Cục KCB;

- Lưu VT, KCB

KT BỘ TRƯỞNG THỨ TRƯỞNG

Đã ký

Nguyễn Thị Xuyên

BỘ Y TẾ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

Độc lập - Tự do- Hạnh Phúc

DANH MỤC QUY TRÌNH KỸ THUẬT CHUYÊN NGÀNH HÓA SINH

(Ban hành kèm theo Quyết định số: 320/QĐ-BYT ngày23 tháng 01 năm 2014 của Bộ trưởng Bộ Y tế)

A MÁU

1 Đo hoạt độ ACP (Phosphatase Acid)

2 Định lượng ACTH

3 Định lượng Acid Uric

4 Định lượng ADH (Anti Diuretic Hormone)

5 Định lượng Adiponectin

6 Định lượng Aldosteron

7 Định lượng Albumin

8 Định lượng Alpha1 Antitrypsin

9 Đo hoạt độ ALP (Alkalin Phosphatase)

10 Đo hoạt độ Amylase

11 Định lượng Amoniac ( NH3)

12 Định lượng AMH ( Anti- Mullerian Hormone)

13 Định lượng Anti CCP

14 Định lượng Anti-Tg (Antibody- Thyroglobulin)

15 Định lượng Anti - TPO (Anti- thyroid Peroxidase antibodies)

16 Định lượng Apo A1 (Apolipoprotein A1)

17 Định lượng Apo B (Apolipoprotein B)

18 Định lượng AFP (Alpha Fetoproteine)

19 Đo hoạt độ ALT (GPT)

20 Đo hoạt độ AST (GOT)

21 Định lượng α1 Acid Glycoprotein

22 Định lượng β2 microglobulin

23 Định lượng Beta Crosslap

24 Định lượng  hCG (Beta human Chorionic gonadotropins)

25 Định lượng Bilirubin trực tiếp

26 Định lượng Bilirubin gián tiếp

Định lượng Bilirubin toàn phần

33 Định lượng CA 19 - 9 (carbohydrate antigen 19-9)

34 Định lượng CA 15 - 3 (cancer antigen 15- 3)

35 Định lượng CA 72 - 4 (cancer antigen 72- 4)

36 Định lượng Calcitonin

37 Định lượng Carbamazepin

38 Định lượng Ceruloplasmin

39 Định lượng CEA (carcino embryonic antigen)

40 Đo hoạt độ Cholinesterase (ChE)

41 Định lượng Cholesterol toàn phần

42 Đo hoạt độ CK (Creatine kinase)

43 Đo hoạt độ CK-MB (Isozym MB of Creatine kinase)

58 Định lượng các chất điện giải (Na, K, Cl)

59 Định lượng FABD (Fatty acid binding protein)

65 Định lượng FSH (Follicular stimulating hormone)

66 Định lượng free  HCG (Free Beta Human chorionic gonadotropin)

67 Định lượng Folate

68 Định lượng FT 3 (Free Triiodothyronine)

69 Định lượng FT4 (Free thyroxine)

70 Định lượng Galectin 3

71 Định lượng Gastrin

72 Đo hoạt độ G6PD (Glucose -6 phosphat dehydrogenase)

73 Định lượng GH (Growth Hormone)

74 Đo hoạt độ GLDH (Glutamat dehydrogenase)

81 Định lượng HBs g (HBs g Quantitative) ( CMI / ECLI )

82 Đo hoạt độ HBDH (Hydroxy butyrat dehydrogenase)

89 Định lượng IL-6 ( Interleukin 6)

90 Định lượng IL-8 (Interleukin 8)

91 Định lượng IL-10 (Interleukin 10)

92 Định lượng IgE (bằng phương pháp ELIS )

93 Định lượng IgE (Immunoglobuline E)

94 Định lượng IgA (Immunoglobuline A)

95 Định lượng IgG (Immunoglobuline G)

96 Định lượng IgM (Immunoglobuline M)

97 Định lượng IGFBP-3 ( Insulin like growth factor binding protein 3)

106 Định lượng Lambda tự do (Free Lambda)

107 Định lượng Leptin human

113 Điện di Lipoprotein

114 Định lượng Lp-PLA2 (Lipoprotein Associated Phospholipase A2)

115 Định lượng Malondialdehyd (MDA)

116 Đo hoạt độ MPO

117 Định lượng Myoglobin

118 Định lượng Mg

119 Định lượng N-MID Osteocalcin

120 Định lượng NSE (Neuron Specific Enolase)

137 Định lượng Pro-GRP ( Pro- Gastrin-releasing peptide)

138 Định lượng PSA tự do (Free prostate-specific antigen)

139 Định lượng PSA toàn phần (Total prostate-specific antigen)

140 Định lượng PTH (Parathyroid hormon)

141 Định lượng Renin activity

142 Định lượng RF (Reumatoid factor)

143 Định lượng Sắt

144 Định lượng SCC (squamous cell carcinoma antigen)

145 Định lượng SHBG (Sex hormon binding globulin)

146 Định lượng Sperm Antibody

147 Định lượng T 3 (Tri iodothyronine)

153 Định lượng TGF β2( Transforming Growth Factor Beta 2)

170 Định lượng PLGF (Placental Growth Factor- yếu tố tân tạo mạch máu)

171 Định lượng sFlt-1 (yếu tố kháng tân tạo mạch máu)

B NƯỚC TIỂU

172 Định lượng các chất điện giải

173 Định tính Amphetamin

174 Định lượng Amphetamin

175 Đo hoạt độ Amylase

176 Định lượng axit uric

210 Đo hoạt độ Amylase

211 Định lượng Bilirubin toàn phần

212 Định lượng Cholesterol toàn phần

Nguyễn Thị Xuyên

MỤC LỤC

4 Định lượng DH ( nti Diuretic Hormone) 20

12 Định lượng MH ( nti- Mullerian Hormone) 51

14 Định lượng nti-Tg (Antibody- Thyroglobulin) 60

15 Định lượng nti - TPO (Anti- thyroid Peroxidase antibodies) 63

16 Định lượng Apo A1 (Apolipoprotein A1) 66

27 Định lượng Bilirubin toàn phần 102

28 Định lượng BNP (B- Type Natriuretic Peptide) 105

31 Định lượng canci ion hóa bằng điện cực chọn lọc 114

32 Định lượng CA 125 (cancer antigen 125) 116

33 Định lượng CA 19 - 9 (carbohydrate antigen 19-9) 119

34 Định lượng CA 15 - 3 (cancer antigen 15- 3) 122

35 Định lượng CA 72 - 4 (cancer antigen 72- 4) 125

39 Định lượng CEA (carcino embryonic antigen) 138

43 Đo hoạt độ CK-MB (Isozym MB of Creatine kinase) 152

57 Định lượng Digitoxin 203

58 Định lượng các chất điện giải (Na, K, Cl) 205

59 Định lượng F BD (Fatty acid binding protein) 208

65 Định lượng FSH (Follicular stimulating hormone) 230

66 Định lượng free HCG (Free Beta Human chorionic

gonadotropin)

233

68 Định lượng FT3 (Free Triiodothyronine) 241

72 Đo hoạt độ G6PD (Glucose -6 phosphat dehydrogenase) 255

74 Đo hoạt độ GLDH (Glutamat dehydrogenase) 264

86 Định lượng Homocystein 303

92 Định lượng IgE (bằng phương pháp ELIS ) 322

97 Định lượng IGFBP-3 ( Insulin like growth factor binding protein

106 Định lượng Lambda tự do (Free Lambda) 375

111 Đo hoạt độ LDH ( Lactat dehydrogenase) 394

112 Định lượng LDL - C (Low density lipoprotein Cholesterol) 397

114 Định lượng Lp-PLA2 (Lipoprotein Associated Phospholipase 403

120 Định lượng NSE (Neuron Specific Enolase) 426

137 Định lượng Pro-GRP ( Pro- Gastrin-releasing peptide) 487

138 Định lượng PS tự do (Free prostate-specific antigen) 492

139 Định lượng PS toàn phần (Total prostate-specific antigen) 495

144 Định lượng SCC (squamous cell carcinoma antigen) 512

145 Định lượng SHBG (Sex hormon binding globulin) 517

149 Định lượng s TfR (solube transferin receptor) 531

152 Định lượng TGF β1( Transforming Growth Factor Beta 1) 541

153 Định lượng TGF β2( Transforming Growth Factor Beta 2) 546

172 Định lượng các chất điện giải 614

2 Phương tiện, hóa chất

- Máy hóa sinh tự động U2700

- Máy ly tâm

- Hóa chất làm xét nghiệm CP (hãng Olympus )

- Huyết thanh kiểm tra mức 1 (QC mức bình thường)

- Huyết thanh kiểm tra mức 2 (QC mức bệnh lý)

Huyết thanh, không dùng huyết tương

2.Tiến hành kỹ thuật

- Ly tâm ống máu trong 5 phút với vận tốc 3000 vòng/ phút

- Tách huyết thanh và thêm một giọt chất ổn định ACP

- Đặt ống bệnh phẩm vào vị trí trên khay chứa mẫu

- Vận hành máy theo hướng dẫn trong tài liệu hướng dẫn sử dụng máy

- Máy sẽ tự động in ra kết quả sau khi hoàn tất quá trình phân tích

- Kiểm soát chất lượng:

Hàng ngày: Chạy 2 mức kiểm QC tra chất lượng hàng ngày vào buổi sáng và ít nhất sau mỗi 8 tiếng Tất cả các kết quả kiểm tra chất lượng phải được ghi lại trong bảng theo dõi QC Chỉ thông báo kết quả xét nghiệm nếu cả hai mức QC nằm trong khoảng cho phép

Định kỳ : Chuẩn lại và chạy 2 mức QC sau khi thay lô thuốc thử mới hoặc sau khi bảo dưỡng, sửa chữa máy do sự cố, thay thế trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết quả vào bảng theo dõi chuẩn máy XN

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1 Giá trị tham chiếu

Hoạt độ CP: Người lớn 4,8- 13,5 U/L ở 37oC

2 ĐỊNH LƯỢNG ACTH MÁU (Adrenocorticotropic hormone)

I NGUYÊN LÝ

ACTH hoặc corticotropin là một hormone peptide gồm 39 amino acid, được sản xuất bởi thùy trước tuyến yên ACTH kích thích sự hình thành và sự bài tiết glucocorticoid (đặc biệt là cortisol) của vùng vỏ của tuyến thượng thận

CTH được định lượng bằng phương pháp miễn dịch kiểu sandwich sử dụng công nghệ điện hóa phát quang (ECLIA) Tổng thời gian phân tích một mẫu là 18 phút

+ Giai đoạn ủ đầu tiên: Tạo thành phức hợp “sandwich” gồm 3 thành phần: Mẫu bệnh phẩm (huyết thanh, huyết tương) kẹp giữa kháng thể đơn dòng đặc hiệu kháng CTH gắn biotin và một kháng thể đơn dòng đặc hiệu, kháng ACTH gắn với ruthenium Ba thành phần tạo thành một phức hợp miễn dịch kiểu bánh sandwich

+ Giai đoạn ủ thứ hai: Sau khi cho thêm các vi hạt được bao phủ bởi Streptavidin Phức hợp được gắn kết vào pha rắn do sự tương tác giữa biotin và streptavidin

+ Phức hợp phản ứng được đưa vào buồng đo Tại đây các vi hạt (microparticles) được giữ lại bằng từ tính trên bề mặt điện cực Những chất thừa được rửa đi bằng procell Dùng một dòng điện một chiều tác động vào điện cực nhằm kích thích phát quang và cường độ tín hiệu ánh sáng phát ra có thể đo được bằng bộ phận nhân quang

+ Kết quả được tính toán dựa vào đường cong chuẩn thu được bằng cách chuẩn

2 điểm và đường cong gốc được cung cấp từ nhà sản xuất Nồng độ chất cần định lượng tỷ lệ thuận với cường độ ánh sáng thu được

II CHUẨN BỊ

1 Người thực hiện

01 Cán bộ đại học chuyên ngành Hóa sinh miễn dịch và 01 Kỹ thuật viên

2 Phương tiện, hóa chất

2.1 Phương tiện

- Lọ 3 (R2)- nắp màu đen: nti-ACTH- b~Ru(bpy), thể tích 8 mL (có chứa Monoclonal anti- CTH antibody (mouse) gắn với phức hợp ruthenium 0.3 mg/L)

- Dung dịch đệm MES (2-morpholino-ethane sulfonic acid) 50 mmol/L, pH 6.2 và chất bảo quản

Thuốc thử được bảo quản ở nhiệt độ 2- 80C, có thể ổn định đến thời hạn ghi trên hộp Thuốc thử sau khi mở nắp bảo quản được 12 tuần ở 2-8oC Nếu để trên máy (không tắt máy) có thể được 4 tuần

+ Procell; Clean cell

Mẫu máu được lấy vào ống chống đông EDT Mẫu được để vào khay đá, chuyển xuống PXN ngay Khi tách huyết tương sử dụng ly tâm lạnh Mẫu cần được phân tích ngay Có thể ổn định 2h ở 220

C Nếu không phải lưu giữ ở nhiệt độ -200C (chỉ được để đông 1 lần)

Đảm bảo mẫu người bệnh, dung dịch chuẩn và QC phải ở nhiệt độ từ 22-250

C trước khi phân tích

Mẫu bệnh phẩm nên được tiến hành phân tích trong vòng 2h

Mẫu sau khi ly tâm được chuyển vào khay đựng bệnh phẩm

Đánh số (hoặc ID của người bệnh); chọn test và máy sẽ tự động phân tích

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Trị số bình thường: Buổi sáng < 18 pmol/L (< 80 pg/mL)

Buổi chiều: < 11 pmol/L (<50 pg/mL)

Hệ số chuyển đổi đơn vị:

- Người bệnh đang điều trị liều cao biotin (> 5 mg/ngày), nên lấy mẫu máu cách xa thời gian uống thuốc lần cuối cùng ≥ 8giờ

Người bệnh bị sang chấn Có thể làm tăng kết quả Chú ý khi nhận định kết

ở đúng nhiệt độ quy định, Tránh gây bọt

3 ĐỊNH LƯỢNG ACID URIC

I NGUYÊN LÝ

Acid Uric là sản phẩm chuyển hóa cuối cùng của base có nitơ nhân purin

Acid Uric máu được định lượng theo phương pháp enzyme so màu

Uric Acid + 2H2O + O2 Uricase Allatoin + CO2 + H2O2

peroxidase

2 H2O2 + H+ + TOOSa + 4-aminophenazone hợp chất màu đỏ + 4H2O

Sản phẩm màu được đo ở bước sóng 546nm

II CHUẨN BỊ

1 Người thực hiện

Bác sỹ hoặc kỹ thuật viên được đào tạo chuyên ngành Hóa sinh

2 Phương tiện, hóa chất

- Máy móc: hệ thống máy sinh hóa

- Thuốc thử: sẵn sàng sử dụng

R 1: buffer, TOOS

R 2: Uricase, POD, 4-AAP

Bảo quản ở 2-80C đến khi hết hạn sử dụng, 8 tuần khi để trên máy phân tích

Các loại dung dịch hệ thống khác

- Chuẩn, nước muối sinh lý

- Control: 2 mức

- Vật tư tiêu hao: ống lấy máu, kim tiêm, bông, cồn, găng tay …

3 Người bệnh: được giải thích trước khi thực hiện XN, tốt nhất là nhịn ăn sáng và lấy

máu vào buổi sáng

4 Phiếu xét nghiệm: có đầy đủ thông tin về người bệnh bao gồm tên, tuổi, khoa phòng,

chẩn đoán, tình trạng mẫu, tên BS chỉ định, các loại thuốc đã sử dụng (nếu có) …

Để bệnh phẩm, chuẩn, control ở nhiệt độ phòng (20-250C) và lắc đều trước khi tiến hành XN

2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy móc, hóa chất đã được cài đặt và chuẩn trước khi thực hiện phân tích Control nằm trong miền cho phép tùy thuộc vào kỹ thuật, thuốc thử của từng công ty Thông thường chạy control 2 miền: bình thường và bất thường Đối chiếu với luật về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

- Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol của máy Khi có kết quả thì phân tích và đối chiếu với phiếu xét nghiệm và trả kết quả

 Nhiễm độc chì, thuỷ ngân

- cid uric máu giảm trong:

Không sử dụng loại chất chống đông này

Bệnh phẩm tăng bilirubin,

huyết tán, tăng lipid máu,

đang sử dụng thuốc

Kết quả ảnh hưởng không rõ

Nồng độ > dải đo (11,9 –

1487 μmol/L)

Sai lệch kết quả Rất ít gặp

Pha loãng bệnh phẩm

4 ĐỊNH LƯỢNG ADH (Anti Diuretic Hormone)

từ nồng độ mẫu đo OD với nồng độ chuẩn

- Nồng độ chuẩn: 80 pg/ml, 40 pg/ml, 20 pg/ml, 10 pg/ml, 5pg/ml, 2.5 pg/ml, 1.25 pg/ml

II CHUẨN BỊ

1 Người thực hiện

Người thực hiện xét nghiệm có trình độ phù hợp

2 Phương tiện, hóa chất

- Mẫu pha loãng

- Biotin-antibody pha loãng

- HRP-avidin pha loãng

- Biotin-antibody

- HRP-avidin

- Stop Solution

- Để góp phần chẩn đoán một số tình trạng bệnh lý có thể gây bài xuất bất thường DH (Ví dụ: hội chứng tiết DH không thích hợp [SI DH])

- Để góp phần chẩn đoán một số tình trạng bệnh lý gây mất bài xuất DH hay gây mất đáp ứng thận đối với tác dụng của DH (Ví dụ: đái nhạt nguồn gốc trung ương và đái nhạt nguồn gốc thận)

- Để chẩn đoán và chẩn đoán phân biệt giữa đái tháo nhạt với tình trạng đái nhiều

do căn nguyên thần kinh (psychogenic polyuria)

- Để chẩn đoán phân biệt các trường hợp giảm natri máu

Xét nghiệm được tiến hành trên huyết tương

- Yêu cầu người bệnh nhịn ăn 10-12 giờ trước khi lấy máu xét nghiệm Người bệnh được yêu cầu tránh các hoạt động thể lực và bị stress trong thời gian xét nghiệm Lấy máu khi người bệnh ở tư thế ngồi

- Mẫu bệnh phẩm sau khi lấy cần được bảo quản trong túi đá lạnh và được chuyển ngay tới phòng xét nghiệm (không được để trong điều kiện nhiệt độ phòng)

2 Tiến hành kỹ thuật ADH ELISA

- Thêm 100 l chất chuẩn, Blank, mẫu bệnh phẩm vào mỗi giếng Đậy nắp và ủ trong 2 giờ ở 370C

- Hút bỏ chất lỏng trên bề mặt giếng Chú ý: không rửa

- Thêm 100 l Biotin-antibody, ủ 1 giờ ở 370C

- Hút hết cơ chất rồi rửa với 200l Wash Buffer

- Lặp lại quy trình 3 lần

- Thêm 100 l HRP-avidin vào mỗi giếng, ủ 1 giờ ở 370C

- Rửa 5 lần với 200l Wash Buffer

- Thêm 90l thuốc thử TMB vào mỗi giếng, ủ 10-30phút ở 370C

- Thêm 50l dung dịch Stop Solution để ngừng phản ứng khi 4 giếng đầu tiên chứa nồng độ chất chuẩn cao nhất đổi sang màu xanh Nếu sự đổi màu không xuất hiện đồng bộ, phải chắc là các các trong mỗi giếng được trộn đều

- Đọc độ hấp thụ tại bước sóng 450nm trong 10 phút

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Sử dụng đường cong chuẩn để tính toán nồng độ ADH trong mẫu:

- Tạo một đường cong chuẩn bằng cách xử lý phân tích dữ liệu dùng phần mềm máy tính thích hợp thống kê 4 tham số

5 ĐỊNH LƯỢNG ADIPONECTIN

diponectin là một polypeptid gồm 244 axit amin diponectin chủ yếu được tổng hợp bởi các tế bào mỡ Mức độ diponectin thấp liên quan chặt chẽ với sự đề kháng insulin và hội chứng chuyển hóa, cũng như tăng nguy cơ đái tháo đường type 2

II CHUẨN BỊ

1 Người thực hiện

Bác sĩ, cử nhân, kỹ thuật viên được đào tạo với máy Evolis Twin Plus

2 Phương tiện, hóa chất

- Máy phân tích ELIS (có thể Evolis Twin Plus)

- Thuốc thử được cung cấp của hãng DRG (Đức) (EI -4820)

Trong đó: HRP- vidin là vidin liên kết với HRP (Horseradish Peroxidase) TMB: 3,3’,5,5’ tetramethyl-benzidine

- Thuốc thử và dụng cụ cần nhưng không được cung cấp

B1: Pha loãng 1:100 (5 mẫu + 495 dung dịch pha loãng)

B2: Pha loãng 1:10 (100 mẫu đã pha loãng + 900 dung dịch pha loãng)

+ Không sử dụng máu đục, máu vỡ hồng cầu

+ Mẫu chưa pha loãng có thể được lưu trữ ở -200C hoặc thấp hơn Chỉ rã đông một lần

- Huyết thanh:

- Dung dịch nổi trong nuôi cấy tế bào

+ Ly tâm với 3000 vòng/ phút, trong10 phút để loại bỏ các mảnh vụn

+ Pha loãng dung dịch nổi trong nuôi cấy tế bào với dung dịch pha loãng mẫu theo tỉ

lệ 1:10

(Ví dụ: 10 mẫu + 90 dung dịch pha loãng)

+ Lưu trữ ở -200C hoặc thấp hơn Chỉ rã đông một lần

2 Tiến hành kỹ thuật

2.1 Chuẩn bị thuốc thử

Đưa tất cả thuốc thử về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng

2.1.1 Dung dịch rửa:

Hòa 50 ml dung dịch rửa với 950 ml nước cất để được dung dịch 1000 ml

Sau khi pha, ổn định 3 ngày ở nhiệt độ phòng, 2 tuần ở 80

- Chuẩn thì không ổn định sau khi pha loãng  sử dụng ngay sau khi pha loãng hoặc làm đông nếu không sử dung trong vòng 1 giờ

c Biotin-kháng thể và HRP-Avidin

Votex đều, nhẹ nhàng trước khi dùng

2.2 Tiến hành

- Tiến hành theo quy trình cài đặt trên máy tự động EVOLIS TWIN PLUS

- Thời gian hoàn thành xét nghiệm này khoảng 255 phút

- Vẽ đường cong chuẩn trước, control đạt thì tiến hành đo mẫu

Các bước tiến hành như sau:

+ Hút 50 μl mỗi calibrator/ QC hoặc mẫu người bệnh vào các giếng

+ Ủ 120 phút ở nhiệt độ phòng

+ Rửa các giếng 5 lần với 300 dung dịch rửa cho mỗi giếng trong một lần rửa

+ Hút 50 μl Biotin - kháng thể vào mỗi giếng

+ Ủ 60 phút ở nhiệt độ phòng

+ Rửa các giếng 5 lần với 300 μl dung dịch rửa cho mỗi giếng trong một lần rửa + Hút 50 μl HRP- vidin liên hợp vào mỗi giếng

+ Ủ 30 phút ở nhiệt độ phòng

+ Rửa các giếng 5 lần với 300 μl dung dịch rửa cho mỗi giếng trong một lần rửa

+ Hút 50 μl cơ chất TMB vào mỗi giếng

+ Ủ 20 phút ở nhiệt độ phòng

+ Hút 25 μl dung dịch ngừng phản ứng vào mỗi giếng

+ Tiến hành đo với bước sóng 450/630 nm ngay lập tức

• Hội chứng chuyển hóa

Bổ sung omega-3, tăng cường chất xơ trong khẩu phần hàng ngày, hoặc tập thể dục điều độ giúp làm tăng nồng độ adiponectin

V NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Có một số sai sót thường gặp:

- Lấy sai ống  lấy lại

- Tuyệt đối không sử dụng máu vỡ hồng cầu, máu đục, máu vàng

- Mẫu máu ở người bệnh có dùng thuốc chống đông thì thời gian co cục máu lâu hơn trước khi ly tâm (hơn 30 phút)

- Mẫu có kết quả vượt quá 15 ng/mL thì phải hòa loãng mẫu với dung dịch pha loãng

- Những sai sót do máy thì hỏi kỹ sư để xử trí

- Lưu ý Calibrator và QC bảo quản thật tốt để có đường cong chuẩn đạt yêu cầu

6.ĐỊNH LƯỢNG ALDOSTEROL

ldosteron là hormon tuyến vỏ thượng thận tăng sự tái hấp thu Natri ở “ống” thận dẫn tới việc bài tiết Kali, điều chỉnh lượng máu tuần hoàn Sản sinh thừa và bài tiết thường xuyên (mạn) ldosteron sẽ dẫn tới chứng tăng huyết áp Đo mức độ ldosteron trong huyết thanh cùng với rennin huyết thanh có thể được dùng để phân biệt giữa ldosteronism tiên phát và thứ phát

I NGUYÊN LÝ

- Aldosteron được định lượng bằng kỹ thuật ELISA

- Mẫu bệnh phẩm (huyết thanh) được thêm vào các giếng đã được tráng bằng kháng thể kháng Aldosteron và ủ trong dung dịch đệm 30 phút ở nhiệt độ phòng Nếu Aldosteron trong mẫu bệnh phẩm, sẽ kết hợp với các kháng thể có trong giếng Giếng được rửa để loại bỏ mẫu dư và kháng thể kháng Aldosteron gắn peroxidase được thêm vào sẽ tạo phức liên kết enzyme và kháng thể kẹp giữa là phân tử Aldosteron

- Sau khi ủ ở nhiệt độ phòng 30 phút, các giếng được rửa để loại bỏ các thành phần dư thừa Cơ chất TMB được thêm vào ủ tiếp dung dịch phản ứng ở nhiệt độ phòng trong

20 phút để chuyển thành màu xanh da trời Tiến hành đọc phản ứng ở bước sóng 450

nm

- Nồng độ Aldosteron tỷ lệ với độ đậm của màu xanh trong giếng

II CHUẨN BỊ

1 Người thực hiện

Người thực hiện xét nghiệm có trình độ phù hợp

2 Phương tiện, hóa chất

- Pipettes thể tích 50, 100, 150 và 300 microL

- Đầu pipet dùng 1 lần

- Nước cất hoặc nước khử Ion

- 3.2 N HCL và 3,2 N NaOH (dùng cho xét nghiệm nước tiểu)

- Ống thủy tinh hay Polypropylene (dùng cho xét nghiệm nước tiểu)

- Nước rửa

- Máy lắc đĩa

- Máy đọc đĩa giếng với kính lọc 450nm và OD > 3.0 hoặc cao hơn

2.1 Các chất được cung cấp

- Đĩa chứa Kháng thể kháng-Aldosteron từ thỏ:

+ Thành phần: 1 dĩa chứa 96 (12x8) giếng trong túi nắp kéo, có chứa chất hút ẩm + Lưu trữ: 2-8C

+ Ổn định: 12 tháng hoặc xem hướng dẫn trên bao bì

- Aldosterone-Biotin: Avidin-Horse Radish Peroxidase (HRP) Conjugate Concentrate – X50:

+ Thành phần: Aldosterone-Biotin và Avidin-Horse Radish Peroxidase (HRP) Conjugate Concentrate trong dung dịch đệm gốc protein không chứa thủy ngân + Thể tích: 300 microL/lọ

+ Lưu trữ: 2-8C

+ Ổn định: 12 tháng hoặc xem hướng dẫn trên bao bì

+ Chuẩn bị: Pha loãng Aldosterone-Biotin và Avidin-HRP Concentrate 1:50 trong dung dịch đệm xét nghiệm trước khi dùng Nếu dùng hết đĩa thì pha 240 microL HRP trong 12 ml dung dịch đệm xét nghiệm Đổ bỏ phần thừa nếu có

- Wash Buffer Concentrate – X10:

+ Thành phần: 01 chai chứa dung dịch đệm không thủy ngân và chứa chất tẩy non-ionic

+ Thể tích: 50 mL/chai

+ Thành phần: 01 lọ chứa dung dịch đệm gốc protein không thủy ngân

+ Thể tích: 15 ml/lọ

+ Lưu trữ: 2-80

C + Ổn định: 12 tháng hoặc xem hướng dẫn trên bao bì

3 Người bệnh

Cần được tư vấn về mục đích xét nghiệm:

- Để chẩn đoán tình trạng cường Aldosteron tiên phát hay thứ phát

- Để đánh giá sản xuất Aldosteron thượng thận

- Để chẩn đoán phân biệt các rối loạn nước và điện giải

- Huyết thanh: không cần

- Nước tiểu: Thủy phân, Trung hòa và Pha loãng

- Tất cả các chất cần phải đạt nhiệt độ phòng trước khi dùng Mẫu bệnh, mẫu chứng, mẫu chuẩn phải được xét nghiệm 2 lần Khi một quy trình bắt đầu thì phải thực hiện các bước hoàn chỉnh, không được ngừng lại

- Chuẩn bị dung dịch conjugate và dung dịch rửa

- Tháo những dải số trên đĩa vi giếng Dán miệng túi và cất những phần chưa dùng vào tủ đông

- Dùng pipet hút 50 µl mỗi mẫu bệnh (huyết thanh hoặc nước tiểu), mẫu chuẩn, mẫu chứng đưa vào giếng tương ứng, làm 2 lần

- Dùng pipet hút 100 µl dung dịch conjugate cho vào mỗi giếng (nên dùng pipet loại

đa kênh)

- Ủ trên máy lắc đĩa (200 vòng/phút) trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng

- Rửa giếng 3 lần bằng 300 µl nước rửa đệm đã pha loãng cho mỗi giếng và nắp chặt đĩa lại bằng giấy hút ẩm để bảo đảm đĩa khô

- Dùng pipet hút 150 µl chất nền TMB cho vào mỗi giếng cùng một khoảng thời gian như nhau

- Ủ trên máy lắc đĩa từ 10-15 phút ở nhiệt độ phòng (hoặc cho tới khi Calibraror đạt màu xanh biển đậm)

- Hút 50 µl dd dừng cho mỗi giếng cùng khoảng thời gian như trong bước 7

- Đọc đĩa trên máy đọc ở 450 nm trong 20 phút sau khi thêm dung dịch ngừng vào

(Trình tự và thời gian thực hiện xét nghiệm theo bộ kit của công ty DRG Internaltional, Inc., Mỹ)

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

- Tính toán mật độ quang của mỗi mẫu chuẩn làm 2 lần

- Vẽ đường chuẩn trên giấy “semi-log” với trục Y là mật độ quang và trục X là nồng

độ chất chuẩn

- Tính toán mật độ quang của mẫu

- Đọc giá trị của mẫu huyết thanh trực tiếp từ đường cong chuẩn Nếu kết quả cao hơn 2000pg/ml thì phải pha loãng chất chuẩn ở tỉ lệ không quá 8 lần, khi đó giá trị đo được phải nhân với hệ số pha loãng

- Đọc giá trị của mẫu nước tiểu trực tiếp từ đường cong chuẩn và nhân với hệ số 60

từ Kế tiếp, nhân với lượng nước tiểu trong vòng 24 giờ thu thập được (lít) Cuối cùng chia với 1000 để đạt được giá trị µg/24 giờ Nếu kết quả lớn hơn 2000 pg/ml, pha loãng chất chuẩn nhưng không quá 2 lần, kết quả nhân lại với hệ số pha loãng

- Nồng độ ldosteron thay đổi trong các trường hợp:

Bệnh ldosteron huyết thanh Renin huyết tương

- Tránh bọt khí trong giếng (Microwell) sẽ ảnh hưởng tới mật độ quang học (ODs) Cẩn thận loại bỏ bọt khí trước khi đọc mẫu

- Dung dịch nền (TMB) rất nhạy sáng và phải duy trì độ trong khi lưu trữ thích hợp Khi dung dịch có màu xanh thì có nghĩa là dung dịch bị nhiễm bẩn, không ổn định và

sẽ không được dung

- Khi pha chế dung dịch nền và dung dịch dừng phản ứng, không được dùng pipet do nguy cơ tiếp xúc với kim loại

- Các chất và dung dịch thừa sau thí nghiệm phải được xem như là chất thải độc hại và phải tiêu hủy theo quy định

2 Hạn chế

- Tất cả các tác chất được cân chỉnh dùng để xác định trực tiếp ldosteron trong huyết thanh và nước tiểu người Bộ kit này không dùng cho các mẫu vật khác của người hoặc động vật

- Không dùng huyết thanh bảo quản không đúng, huyết thanh bị tán huyết và các vấn

01 cán bộ đại học, 1 kỹ thuật viên chuyên ngành hóa sinh

2 Phương tiện, hóa chất

- Phương tiện: Máy xét nghiệm như Cobas C501, U 640…

- Hóa chất: Hóa chất xét nghiệm lbumin, chất chuẩn lbumin, chất kiểm tra chất lượng lbumin

2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu: Máy đã được cài đặt chương trình xét nghiệm lbumin Máy đã được chuẩn với xét nghiệm lbumin Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm lbumin đạt yêu cầu không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Người thực hiện phân tích mẫu nhập dữ liệu về thông tin người bệnh và chỉ định xét nghiệm vào máy phân tích hoặc hệ thống mạng (nếu có)

- Nạp mẫu bệnh phẩm vào máy phân tích

- Ra lệnh cho máy thực hiện phân tích mẫu bệnh phẩm

- Đợi máy phân tích mẫu theo protocol của máy

- Khi có kết quả cần xem xét đánh giá kết quả sau đó in báo cáo hoặc ghi kết quả vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

- Trị số bình thường: 34 – 48 g/l

- lbumin máu tăng trong: Mất nước (nôn nhiều, tiêu chảy nặng)

- Albumin máu giảm trong: Bệnh thận (suy thận, hội chứng thận hư, viêm cầu thận) Bệnh không có albumin huyết bẩm sinh Giảm tổng hợp (viêm gan nặng, xơ gan), kém hấp thu, kém dinh dưỡng, Mất albumin (bỏng, tổn thương rỉ dịch, bệnh đường ruột mất protein) Ung thư, nhiễm trùng

- Huyết thanh đục: Triglyceride <1000 mg/dL

Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó nhân kết quả với độ hòa loãng (Trường hợp có hòa loãng tự động trên máy thì kết quả không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán kết quả)

8 ĐỊNH LƢỢNG ALPHA 1 ANTITRYPSIN

Alpha-1 antitrypsin, còn được gọi là AAT, là một protein do gan sản xuất, lưu thông trong máu Nó giúp bảo vệ các cơ quan của cơ thể khỏi những tác động có hại của các protein khác Thiếu AAT là một bệnh có tính di truyền Những cá thể bị thiếu hụt AAT có thể liên quan đến bệnh lý về phổi hoặc bệnh gan (bệnh hen, khí phế thũng; xơ gan)

I NGUYÊN LÝ

Định lượng T bằng phương pháp miễn dịch đo độ đục Bệnh phẩm được cho thêm thuốc thử 1, sau đó cho thêm thuốc thử 2 (có chứa kháng thể kháng lpha1 ntitrypsin Lúc này xảy ra phản ứng kết hợp giữa kháng thể và kháng nguyên có trong mẫu bệnh phẩm, tạo thành phức hợp ngưng kết Có thể xác định được độ đục từ

đó xác định được nồng độ lpha1 ntitrypsin thông qua đường chuẩn

- Tủ lạnh để bảo quản hóa chất và bảo quản QC, mẫu bệnh phẩm

- Pipet các loại, ống sample cup

- Ống nghiệm, đầu côn xanh và vàng

- Giá đựng ống nghiệm

2.2 Hóa chất

- Thuốc thử 1 (R1): đệm Phosphate: 12.7 mmol/L, pH 7.2; NaCl: 0.13 mol/L;

PEG: 40 g/L; chất bảo quản

- Thuốc thử 2 (R2) Anti-human α1-antitrypsin antibody: > 2 g/L; NaCl: 0.12

mol/L; chất bảo quản

Mẫu bệnh phẩm nên được tiến hành phân tích trong vòng 2h

Mẫu sau khi ly tâm được chuyển vào khay đựng bệnh phẩm

Đánh số (hoặc ID của người bệnh); chọn test và máy sẽ tự động