2018 của Bộ Y tế về việc ban hành tài liệu Hướng dẫn Quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh - Cục quản lý khám chữa bệnh

Nếu nồng độ IgE đặc hiệu biểu mô của chuột vượt quá ngưỡng đo của máy thì có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm, sau đó nhân kết quả với độ hòa loãng (trường hợp có hò[r]

(1)

(2)

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

BỘ Y TẾ …… ***……

HƢỚNG DẪN

QUY TRÌNH KỸ THUẬT CHUN NGÀNH HĨA SINH

(8)

STT DANH MỤC KỸ THUẬT Trang Định lượng 17-0HP (17 alpha-Hydroxyprogesterone) máu

2 Định lượng α2- Macroglobulin máu

3 Định lượng acid amin máu dịch sinh học máy sắc ký lỏng siêu hiệu (UPLC)

8

4 Định lượng acid béo tự máu 23

5 Định lượng acid hữu niệu 25

6 Định lượng acylcarnitine máu MSMS 27

7 Định lượng Adiponectin máu theo kỹ thuật miễn dịch đo độ đục 31 Định lượng Aldosteron máu theo kỹ thuật hóa phát quang/điện

hóa phát quang

33

9 Định lượng AMH (anti –mullerrian hormon) máu theo kỹ thuật

hóa phát quang/điện hóa phát quang

36

10 Định lượng Amikacin máu 41

11 Định lượng Androstenedion máu theo kỹ thuật hóa phát quang 44

12 Định lượng anpha microglobulin niệu 46

13 Định lượng beta-hydroxybutyrate máu 48

14 Định lượng BTP (Beta-Trace Protein) máu 50

15 Định lượng C1 Esterase Inhibitor máu 54

16 Định lượng calprotectin phân 56

17 Định lượng CDT (Carbohydrate Deficient Transferrin) máu 60

18 Định lượng Chì máu 65

19 Định lượng Chì niệu 68

20 Định lượng CRP (C reactive protein) máu 70

(9)

22 Định lượng đồng niệu 77

23 Định lượng Ecstasy niệu 80

24 Định lượng ELF (Enhanced Liver Fibrosis) máu 84

25 Định lượng EPO (Erythropoietin) máu 87

26 Định lượng Everolimus máu 89

27 Định lượng GADA (Glutamic Acid Decarboxylase Autoantibodies) máu

94

28 Định lượng GH (Growth hormone) máu theo kỹ thuật hóa phát quang/điện hóa phát quang

96

29 Định lượng Hemopexin máu 99

30 Định lượng HVA (Homovanillic acid) VMA (Vanillyl mandelic acid)niệu

103

31 Định lượng IA2A ( Islet antigen 2) máu 108

32 Định lượng ICA (Islet cells autoantibodies) máu 100 33 Định lượng IgE đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus máu 112 34 Định lượng IgE đặc hiệu Enterotoxin A (S Aureus) máu 115 35 Định lượng IgE đặc hiệu albumin trứng máu 120 36 Định lượng IgE đặc hiệu Alpha – lactalbumin máu 123 37 Định lượng IgE đặc hiệu AMOXICILIN 128

38 Định lượng IgE đặc hiệu AMPICILIN 131

(10)

45 Định lượng IgE đặc hiệu biểu mô gàu mèo (Cat dander

epithelium)

159

46 Định lượng IgE đặc hiệu Blomia tropicallis máu 163 47 Định lượng IgE đặc hiệu cà chua máu 168 48 Định lượng IgE đặc hiệu cá hồi máu 173 49 Định lượng IgE đặc hiệu cá ngừ máu 176 50 Định lượng IgE đặc hiệu cà rốt máu 179

51 Định lượng IgE đặc hiệu cam máu 184

52 Định lượng IgE đặc hiệu cần tây máu 189 53 Định lượng IgE đặc hiệu Candida albicans máu 194 54 Định lượng IgE đặc hiệu casein máu 199 55 Định lượng IgE đặc hiệu chuối máu 204 56 Định lượng IgE đặc hiệu Cladosporium herbarium máu 207

57 Định lượng IgE đặc hiệu cua máu 212

58 Định lượng IgE đặc hiệu đào máu 215

59 Định lượng IgE đặc hiệu dâu tây máu 218 60 Định lượng IgE đặc hiệu đậu tương máu 223 61 Định lượng IgE đặc hiệu Dermatophagoides farinae máu 226

62 Định lượng IgE đặc hiệu dứa máu 229

63 Định lượng IgE đặc hiệu dừa máu 232

64 Định lượng IgE đặc hiệu gạo máu 237

65 Định lượng IgE đặc hiệu gàu chó (Dog dander) 240

66 Định lượng IgE đặc hiệu gián máu 243

(11)

69 Định lượng IgE đặc hiệu khoai lang máu 254 70 Định lượng IgE đặc hiệu khoai tây máu 259

71 Định lượng IgE đặc hiệu lạc máu 264

72 Định lượng IgE đặc hiệu Latex máu 267 73 Định lượng IgE đặc hiệu lông gà (Chicken feathers) 272 74 Định lượng IgE đặc hiệu lòng trắng trứng máu 275 75 Định lượng IgE đặc hiệu lông vịt (Duck feathers) máu 278 76 Định lượng IgE đặc hiệu lúa mì máu 281

77 Định lượng IgE đặc hiệu mật ong máu 284 78 Định lượng IgE đặc hiệu mù tạt máu 287 79 Định lượng IgE đặc hiệu mùi tây máu 290

80 Định lượng IgE đặc hiệu nấm máu 293

81 Định lượng IgE đặc hiệu nọc ong mật máu 296 82 Định lượng IgE đặc hiệu nọc ong vàng máu 299 83 Định lượng IgE đặc hiệu ong bắp cầy trắng máu 302 84 Định lượng IgE đặc hiệu ong bắp cầy vàng máu 305 85 Định lượng IgE đặc hiệu ong giấy máu 308 86 Định lượng IgE đặc hiệu Penicillium notatum máu 311 87 Định lượng IgE đặc hiệu PENICILLOYL G máu 316 88 Định lượng IgE đặc hiệu PENICILLOYL V máu 319 89 Định lượng IgE đặc hiệu Kiwi máu 322 90 Định lượng IgE đặc hiệu sữa dê máu 327 91 Định lượng IgE đặc hiệu sữa đun sôi máu 330

92 Định lượng IgE đặc hiệu sữa máu 333

(12)

94 Định lượng IgE đặc hiệu thịt bò máu 341 95 Định lượng IgE đặc hiệu thịt lợn máu 346

96 Định lượng IgE đặc hiệu tôm máu 351

97 Định lượng IgE đặc hiệu Toxocara canis máu 354 98 Định lượng IgE đặc hiệu trứng máu 359 99 Định lượng IgE đặc hiệu Vanilla máu 362

100 Định lượng IgE đặc hiệu xoài máu 365

101 Định lượng IGF -1 (insulin-like Growth factor - 1) máu 368

102 Định lượng IgG nhóm máu 371

103 Định lượng IL2-R (interleukin receptor) máu 375

104 Định lượng Inhibin Amáu 377

105 Định lượng Lactat dịch não tủy 380

106 Định lượng LBP máu 382

107 Định lượng Lithium máu 385

108 Định lượng Lp(a) máu 387

109 Định lượng Methadone máu 390

110 Định lượng osteocalcin máu 392

111 Định lượng P2PSA (2Pro Prostate-specific antigen) máu 394

112 Định lượng PIVKA II máu 399

113 Định lượng Pyrilinks -D máu 403

114 Định lượng Pyruvat máu 407

115 Định lượng Quinidine máu 409

(13)

118 Định lượng Renin máu theo kỹ thuật hóa phát quang 418

119 Định lượng SAA (serum Amyloid A) máu 421

120 Định lượng Salicylate máu 424

121 Định lượng sản phẩm chuyển hóa Nicotine 426

122 Định lượng Sirolimus máu 429

123 Định lượng TNFα (tumor necrosis factor alpha ) máu 434

124 Định lượng Troponin I hs máu 437

125 Định lượng UIBC (Unsaturated Iron Binding Capacity) máu 441

126 Định lượng Zn (Kẽm) máu 443

127 Đo hoạt độ lipase dịch chọc dò 445

128 Đo hoạt độ P - Amylase máu 447

129 Đo hoạt độ Thymidin kinase máu 450

(14)

ĐỊNH LƢỢNG 17- HYDROPROGESTERONE MÁU Chữ viết tắt:

17 - Hydroxyprogesterone: 17-OHP

Tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh: CAH (Congential Adrenal Hyperplasia) I NGUYÊN LÝ

17-hydroxyprogesterone (17-OHP) hormone steroid sản xuất phần trình tạo hormone cortisol Xét nghiệm định lượng 17-OHP máu để phát và/hoặc đánh giá tăng sản tuyến thượng thận bẩm sinh (CAH), tình trạng di truyền dẫn đến giảm cortisol, giảm aldosterone thượng thận tăng sản xuất hormon sinh dục nam (androgen)

Trong giếng phản ứng có gắn sẵn kháng thể kháng 17-OHP Khi cho bệnh phẩm vào giếng, 17-OHP mẫu thử cạnh tranh với 17OHP đánh dấu enzym peroxidase (kháng nguyên gắn enzym) gắn với kháng thể gắn giếng Sau ủ, phần không gắn loại bỏ rửa Phức hợp miễn dịch tạo thành kháng thể- kháng nguyên gắn enzym phát cách cho chất TMB (tetramethylbenzidine ), phản ứng chuyển chất thành sản phẩm màu xanh Đậm độ màu phản ứng tạo lên tỉ lệ nghịch với nồng độ 17-OHP mẫu Dung dịch acid Sulphuric thêm vào để dừng phản ứng Kết tạo phức hợp màu vàng, đo độ hấp thụ ánh sáng bước sóng 450nm máy đọc ELISA (plate reader)

II CHUẨN BỊ 1 Ngƣời thực

Người thực kỹ thuật có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất

2.1 Phương tiện:

+ Máy đọc ELISA, trang bị để đo độ hấp thụ bước sóng 450nm + Thiết bị rửa giếng xét nghiệm tay tự động

+ Pipettes để cung cấp lượng dung dịch từ 10 đến 1000μl + Vortex trộn

+ Nước cất

+ Ống nghiệm dùng lần, đồng hồ

+ Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… + 01 Giá đặt giếng phản ứng

+ 02 miếng dán đậy giếng phản ứng làm xét nghiệm 2.2 Hóa chất:

 96 giếng gắn kháng thể kháng 17-OHP IgG

(15)

 Dung dịch Conjiugate chứa 17-OHP gắn enzym peroxidase

 Dung dịch chất TMB: lọ chứa 3,3, 5,5 tetramethylbenzidine (H2O2-TMB 0,25 g/L)

 Chuẩn 170HP: lọ x 1mL: 0.0 ng/mL, 0.2 ng/mL , 0.4 ng/mL, 1.6 ng/m\Ll, 6.4 ng/mL, 19.2 ng/mL

3 Ngƣời bệnh

Cần giải thích cho người bệnh người nhà người bệnh hiểu mục đích việc lấy máu làm xét nghiệm

4 Phiếu xét nghiệm

- Phiếu xét nghiệm theo quy định Bộ Y tế bệnh viện

- Trên phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin người bệnh: họ tên, tuổi, giới tính, số giường, khoa phịng, chẩn đốn, xét nghiệm cần làm

- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, thời gian định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm

III CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1 Lấy bệnh phẩm

- Huyết khuyến cáo sử dụng cho xét nghiệm

- Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đông Máu không vỡ hồng cầu

- Ly tâm mẫu 4000 vòng phút, tách huyết

- Bệnh phẩm ổn định ngày 15-25oC Nếu không thực xét nghiệm ngày, phải bảo quản đông lạnh

- Bệnh phẩm tan đông lần phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phịng trước phân tích Trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đông Để tránh tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân tích vịng

2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng 17-OHP máu Máy chuẩn với xét nghiệm OHP Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm 17-OHP đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Người thực phân tích mẫu nhập liệu thông tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

(16)

- Giá trị tham chiếu 17-OHP huyết thanh, huyết tương: Trẻ nhỏ: 0.2-0.9 ng/mL

Nam: 0.2-2.3 ng/mL

Nữ: 0.2-1.3 ng/mL (thời kỳ kinh nguyệt: 1.0-4.5 ng/mL)

- Nồng độ 17-OHP huyết phụ thuộc vào tuổi, với nồng độ cao suốt thai kỳ sau sinh Ở trẻ tuần tuổi nồng độ 17-OHP huyết giảm 50 lần so với nồng độ 17-OHP máu cuống rốn Đối với trẻ nam 30-60 ngày tuổi sau sinh có tăng 17-OHP thống qua Trong suốt thời kỳ thơ ấu giá trị 17-OHP hai giới trì khơng đổi mức thấp, sau tăng dần lên thời kỳ dậy (giá thị 17-OHP khoảng 3.03 nmol/l ~10.0 ng/mL) Cũng cortisol, 17-0HP thay đổi ngày, với nồng độ đạt cao vào buổi sáng thấp vào ban đêm Đối với phụ nữ 17-OHP tăng thời kỳ kinh nguyệt, tháng đầu thai kỳ

- Nếu trẻ sơ sinh có nồng độ 17-OHP cao đáng kể, trẻ có khả mắc CAH Nếu người có mức độ tăng vừa phải, người bị CAH nghiêm trọng bị thiếu 11-beta-hydroxylase (một khiếm khuyết enzyme khác có liên quan đến CAH)

- Kết 17-OHP bình thường có nghĩa người bệnh không mắc CAH thiếu 21-hydroxylase

- Nồng độ thấp giảm người mắc CAH cho thấy có đáp ứng với điều trị V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ

Phản ứng chéo: 17 OH prognenolone : 1.3%

(17)

ĐỊNH LƢỢNG α2-MACROGLOBULIN MÁU I NGUYÊN LÝ

Alpha 2-macroglobulin chất ức chế proteasecó tác động đặc biệt đến enzyme tiêu hóa Nó vận chuyển hormone enzyme, thể chức kích thích ức chế việc phát triển hệ thống bạch huyết ức chế thành phần bổ thể hệ thống đông máu Nồng độ thay đổi suốt đời khác giới Với tình trạng tăng tiêu hủy fibrin, sau phẫu thuật lớn, người bệnh bị nhiễm trùng huyết suy gan nặng có mức α2-macroglobulin thường thấp Người bệnh bị viêm tụy cấp có nồng độ thấp huyết thể mối tương quan với độ nặng bệnh Đối với người bệnh nhồi máu tim cấp có nồng độ α2-macroglobulin thấp có tiên lượng tốt với thời gian sống > năm Xét nghiệm α2-macroglobulin xét nghiệm chẩn đoán phân biệt quan trọng hội chứng viêm thận Ở đây, tăng tỉ lệ α2-macroglobulin/albumin biểu huyết niệu thận Ở người bệnh xơ hóa gan đái tháo đường, mức α2-macroglobulin tăng

Protein chứa dịch thể người hình thành phức thể miễn nhiễm phản ứng hóa miễn dịch với kháng thể đặc hiệu Các phức hợp phân tán chùm ánh sáng chiếu xuyên qua mẫu Cường độ ánh sáng phân tán tỉ lệ thuận với nồng độ protein tương ứng mẫu Kết đánh giá cách so sánh với chuẩn biết nồng độ

II CHUẨN BỊ 1 Ngƣời thực

01 cán đại học có thẩm quyền ký kết 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh người thực phân tích có trình độ phù hợp, đào tạo sử dụng máy hóa sinh tự động

2 Phƣơng tiện, hóa chất 2.1 Phƣơng tiện

- Máy phân tích: BN ProSpec, … - Máy ly tâm

- Tủ lạnh bảo quản: hóa chất, chất chuẩn, QC mẫu bệnh phẩm - Ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm

- Pipep loại, đầu côn xanh, côn vàng

- Vật tư tiêu hao: ống lấy máu, kim tiêm, cồn sát trùng, găng tay,… 2.2 Hoá chất

Hóa chất cung cấp hộp thuốc

o N Antiserum to Human α2-Macroglobulin huyết động vật sản xuất tạo miễn dịch thỏ với α2-macroglobulin người độ tinh khiết cao Nồng độ kháng thể hoạt động < 26 g/L

(18)

o Đóng gói: 1x 2.0 mL 1x5 mL o Bảo quản độ ổn định:

Chưa mở hộp: ổn định 2–8 °C ngày hết hạn ghi hộp thuốc Đã mở hộp thuốc: tuần lưu trữ 2–8 °C, đậy nắp cẩn thận sau sử dụng khơng bị nhiễm (eg., vi sinh vật)

Hóa chất khác không cung cấp hộp thuốc N Protein Standard SL

N/T Protein Controls SL/L, M H N/T Protein Control LC

N Reaction Buffer N Diluent

- Trên phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin người bệnh: họ tên, tuổi, giới tính, số giường, khoa phịng, chẩn đoán, xét nghiệm cần làm

III CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1 Lấy bệnh phẩm

Mẫu máu:

Huyết huyết tương (Lithium heparin)

- Mẫu huyết thanh, huyết tương tốt Lưu nhiệt độ đến °C không ngày; Tại nhiệt độ -20 °C đến tháng

- Mẫu trữ đơng vịng 24 sau lấy mẫu sử dụng không trữ đông lại Mẫu huyết thanh, huyết tương sau rã đông cần phải làm cách ly tâm (10 phút tốc độ 15,000 x g) trước thực xét nghiệm

Mẫu nƣớc tiểu

- Mẫu nước tiểu ngẫu nhiên ghi nhận thời gian - Mẫu nước tiểu trữ đông không khuyến cáo sử dụng

- Mỗi mẫu nước tiểu cần ly tâm trước xét nghiệm Đối với mẫu nước tiểu có giá trị pH < 6.0 cần phải điều chỉnh pH 7-9 sớm tốt sau nhận mẫu

(19)

- Máy phân tích chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm α2-macroglobulin Máy chuẩn với xét nghiệm α2-macroglobulin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm α2-macroglobulinđạt yêu cầu: dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Nạp mẫu bệnh phẩm vào máy phân tích

- Ra lệnh cho máy thực phân tích mẫu bệnh phẩm - Đợi máy phân tích mẫu theo protocol máy

- Khi có kết cần xem xét đánh giá kết sau in báo cáo ghi kết vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

2.2 Xây dựng đƣờng cong hiệu chuẩn

Đường cong hiệu chuẩn xây dựng nhiều nồng độ chuẩn Một chuỗi pha loãng N Protein Standard SL thực tự động máy sử dụng N Diluent Dung dịch chuẩn pha loãng sử dụng vịng Đường cong chuẩn sử dụng chất kiểm chuẩn với phương pháp tương ứng, N/T Protein Controls SL/L, M H cho huyết huyết tương N/T Protein Control LC cho nước tiểu, lặp lại khoảng tin cậy tương ứng Cần thiết lập đường chuẩn lô thuốc thử đưa vào sử dụng

2.2.1 Mẫu bệnh phẩm

Mẫu huyết huyết tương pha loãng tự động 1:20 với N Diluent Mẫu nước tiểu khơng cần pha lỗng Mẫu pha lỗng cần đo vòng Nếu kết thu nằm khoảng đo, cần chạy lại mẫu với độ pha loãng cao thấp

2.2.2 Nội kiểm (IQC)

Cần phân tích hai mức IQC α2-macroglobulin: ví dụ /T Protein Controls SL/L, M H cho α2- macroglobulin mẫu huyết thanh, huyết tương IQC cần tuân theo qui định hành yêu cầu quản lý chất lượng

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Khoảng tham chiếu α2-macroglobulin

- Huyết huyết tương người lớn khỏe mạnh: 1.3 đến 3.0 g/L

- Nước tiểu người khỏe mạnh thấp giới hạn phát xét nghiệm

- Tuy nhiên, phòng xét nghiệm nên thiết lập khoảng tham chiếu riêng giá trị khác theo nhóm dân số

(20)

- Mẫu máu: nồng độ triglycerid lên đến 6,5 mmol/L (5,7 g/L), bilirubin 1026 mol/L (0,6 g/L) hemoglobin 10 g/Lkhông ảnh hưởng đến kết xét nghiệm

- Chưa ghi nhận gây nhiễu từ loại thuốc thông thường

- Bệnh phẩm đục hạt mẫu ảnh hưởng đến kết xét nghiệm; đó, mẫu có chứa hạt cần ly tâm làm trước thực xét nghiệm cách ly tâm 15.000g/10 phút)

- Những thay đổi từ người sử dụng khơng khuyến cáo ảnh hưởng đến hiệu máy kết xét nghiệm Người sử dụng có trách nhiệm thẩm định thay đổi so với hướng dẫn Siemens Application Sheets IFU

(21)

ĐỊNH LƢỢNG ACID AMIN MÁU VÀ DỊCH SINH HỌC BẰNG MÁY SẮC KÝ LỎNG SIÊU HIỆU NĂNG (UPLC)

I NGUYÊN LÝ

- Mẫu thử khử protein dung dịch acid sulfosalicylic (SSA) chứa nội chuẩn norvaline (Nva) Phương pháp phân tích acid amin bao gồm giai đoạn sau:

o Kiềm hoá mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu trắng (blank) khử tạp SSA dung dịch NaOH/ borat

o Phản ứng tạo dẫn xuất:

- Dẫn xuất hoá acid amin mẫu thử AQC (6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate) để chuyển acid amin bậc bậc hai thành chất phát đầu dị cực tím (UV)

- Phản ứng tạo dẫn xuất hồn tồn địi hỏi lượng dư số mol AQC Lượng dư bị thủy phân thành sản phẩm phụ 6-aminoquinoline (AMQ), N-hydroxysuccinimide (NSH) CO2, sản phẩm phụ khơng gây cản trở cho q trình phân tích Riêng AMQ tạo peak có ý nghĩa dễ dàng nhận biết Phản ứng thủy phân xảy chậm so với phản ứng tạo dẫn xuất

- Lưu ý: Creatinin không dẫn xuất thuốc thử AMQ nên không xuất peak sắc ký creatinin Riêng urê dẫn xuất kép (do cấu tạo phân tử đặc biệt) để tạo nên dẫn xuất urê đối xứng Peak urê đánh dấu chữ “Derivation Peak” sắc ký đồ

(22)

* Phản ứng tạo dẫn xuất

- Hệ thống UPLC ứng dụng phân tích acid amin có đặc điểm: sử dụng áp suất cao chạy cột phân tích có kích thước tiểu phần 1,7µm, đường kính cột 2,1mm, chiều dài cột 150mm Hệ thống cho phép phát định lượng 42 loại acid amin phổ biến hợp chất có liên quan với tốc độ 45 phút/ mẫu Thời gian phân tích rút ngắn độ nhạy, độ đặc hiệu hiệu phân tách cải thiện ưu điểm hệ thống UPLC so với phương pháp khác

II CHUẨN BỊ

1 Ngƣời thực

o ACQUITY UPLC System: Hệ thống bao gồm:  Hệ thống bơm cao áp quản lý dung mơi  Bộ quản lý dung mơi bốn dịng dung môi  Bộ quản lý mẫu với Flow Through Needle

 Bộ ổn nhiệt cho cột với tiền làm nóng linh hoạt  Khay chứa dung mơi

 Bộ kít hoạt động cho máy  Các sensors phát rò rỉ  Detector

 Phần mềm điều khiển, máy tính, máy in  Bộ phụ kiện cho chuẩn bị mẫu

Hình: Sơ đồ hệ thống UPLC

(23)

o Tủ ấm

o Máy rửa dụng cụ sóng siêu âm o Bộ lọc dung môi

o Cột sắc ký: cột phân tích có kích thước tiểu phần 1,7µm, đường kính cột 2,1mm, chiều dài cột 150mm

o Giấy lọc với kích thước lọc 0,2 µm

2.2 Hóa chất: tất dung dịch hóa chất sử dụng cho hệ thống phải chuẩn HPLC tốt

Acetonitrile đậm đặc Nƣớc cất

Methanol đậm đặc Acid fomic đậm đặc

MasTrak AAA standards (bộ kít chuẩn): gồm có  Các amino acid tan acid

 Các amino acid tan base  allo-Isoleucine

 Glutamine  Norvaline  Tryptophan

MasTrak AAA eluent A: thành phần 8-10% acetonitrile, 4-6% formic acid, 84-88% ammonium acetate/water solution

MasTrak AAA derivatization kit: kít tạo dẫn xuất gồm có  Borate buffer: <5% sodium tetraborate and >95% water

 Reagent powder (2A): 6-aminoquinolyl-N-hydroxy-succinimidyl carbamate (AQC)

 Reagent diluents (2B): acetonitrile 3.Ngƣời bệnh

(24)

Huyết tương, nước tiểu dịch não tủy mẫu bệnh phẩm sử dụng cho xét nghiệm

- Thu thập, xử lý bảo quản mẫu máu:Máu toàn phần tĩnh mạch thu thập vào ống chống đơng heparin với thể tích tối thiểu mL, tối đa mL Sau thu thập, mẫu vận chuyển tới phòng xét nghiệm Tiến hành ly tâm sau nhận mẫu với tốc độ 3000 vòng/phút phút, tách huyết tương bảo quản -20oC phân tích Bệnh phẩm tan đơng lần phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước phân tích Trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đơng

- Thu thập, xử lý bảo quản nước tiểu: Nước tiểu ngẫu nhiên thu thập vào ống đựng bệnh phẩm sạch, khơng có chất bảo quản Thể tích tối thiểu mL Vận chuyển tới phòng xét nghiệm, ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút phút, chắt dịch bảo quản -20oC phân tích Một phần nước tiểu sử dụng để định lượng

- Thu thập, xử lý bảo quản dịch não tủy: Dịch não tủy thu thập vào ống đựng bệnh phẩm sạch, khơng có chất bảo quản Thể tích tối thiểu 0,5 ml Vận chuyển tới phòng xét nghiệm, ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút phút, chắt dịch bảo quản -20oC phân tích

- Mẫu huyết tương/ nước tiểu từ bệnh viện cần phải bảo quản đông lạnh 2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin đạt yêu cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng - Người thực phân tích mẫu nhập liệu thơng tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

- Thực xét nghiệm theo protocol máy IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

(25)

Bảng Khoảng tham chiếu acid amin huyết tương (đơn vị: umol/L):

Acid amin

Kết

thông báo 0-1 tháng 1-24 tháng 2-18 tuổi >18 tuổi

Alanine Có 131-710 143-439 152-547 177-583

Allo-isoleucine Không 0-5 0-5 0-5 0-5

Alpha-aminoadipic acid Không 0-1 0-1 0-1 0-6

Alpha-aminobutyric acid Khơng 8-24 3-26 4-31 5-41

Arginine Có 6-140 12-133 10-140 15-128

Argininosuccinic acid Có 0-8 0-8 0-8 0-8

Asparagine Có 29-132 21-95 23-112 35-74

Aspartic acid Có 0-129 0-23 0-24 0-25

Beta-alanine Khơng 0-10 0-7 0-7 0-12

Citrulline Có 10-45 3-35 1-46 12-55

Cystathionine Có 0-3 0-5 0-3 0-3

Cystine Có 17-98 16-84 5-45 5-82

Ethanolamine Không 0-115 0-4 0-7 0-153

Glutamic acid Có 62-620 10-133 5-150 10-131

Glutamine Có 376-709 246-1182 254-823 205-756

Glycine Có 232-740 81-436 127-341 151-490

Histidine Có 30-138 41-101 41-125 41-125

Homocitrulline Không 0-15 0-8 0-8 0-8

Homocystine Có 0-1 0-1 0-5 0-1

Hydroxylysine Khơng 0-7 0-7 0-2 0-1

Isoleucine Có 26-91 31-86 22-107 30-108

Leucine Có 48-160 47-155 49-216 72-201

Lysine Có 92-325 52-196 48-284 48-284

Methionine Có 10-60 9-42 7-47 10-42

1-Methylhistidine Không 0-43 0-44 0-42 0-42

Ornithine Có 48-211 22-103 10-163 48-195

Phenylalanine Có 38-137 31-75 26-91 35-85

Phosphoethanolamine Không 0-27 0-6 0-69 0-40

Phosphoserine Khơng 0-47 0-20 0-30 0-14

Serine Có 99-395 71-186 69-187 58-181

Taurine Không 46-492 15-143 10-170 54-210

(26)

Bảng Khoảng tham chiếu acid amin niệu (đơn vị: umol/mmol creatinine)

(tham khảo bảng acid amin không thông báo kết quả)

Amino Acid 0-1 tháng 1-12 tháng 1-3 năm 3-8 năm 8-16 năm >16 năm

Alanine 34-358 27-313 12-185 15-97 12-67 10-57

Allo-is oleucine 0-5 0-5 0-5 0-5 0-5 0-5

Alpha-aminoadipic acid 7-96 7-110 7-93 10-74 6-45 3-36 Alpha-aminobutyric acid 0-43 0-58 0-20 0-29 0-26 0-11

Arginine 0-81 0-40 0-15 0-11 0-9 0-5

Argininos uccinic acid 0-8 0-8 0-8 0-8 0-8 0-8

As paragine 15-223 18-197 19-79 13-73 10-86 11-56

As partic acid 0-57 0-69 0-73 0-59 0-60 0-40

Beta-alanine 0-41 0-38 0-27 0-18 0-9 0-11

Citrulline 0-18 0-46 0-29 0-23 0-17 0-15

Cys tathionine 0-26 0-11 0-29 0-21 0-13 0-4

Cys tine 5-109 2-42 1-23 1-20 1-17 0-21

Ethanolamine 33-253 57-221 37-144 26-111 26-111 11-88

Glutamic acid 0-96 0-102 0-89 0-53 0-44 0-47

Glutamine 37-600 63-446 57-205 45-165 33-125 20-92

Glycine 127-2042 133-894 103-404 100-280 83-254 37-371

His tidine 23-676 69-392 57-262 61-259 43-211 21-164

Homocitrulline 0-25 0-20 0-20 0-20 0-20 0-20

Homocys tine 0-5 0-5 0-5 0-5 0-5 0-5

Hydroxylys ine 0-49 0-50 0-14 0-7 0-15 0-4

Is oleucine 0-37 0-21 0-12 0-7 0-8 0-7

Leucine 4-84 4-72 3-45 3-22 3-17 3-10

Lys ine 6-464 4-80 4-37 5-51 1-65 2-63

Methionine 0-24 0-18 0-12 0-8 0-10 0-7

1-Methylhis tidine 0-78 0-98 2-242 4-359 3-362 2-290

Ornithine 0-37 0-19 0-15 0-8 0-5 0-4

Phenylalanine 2-49 7-42 4-33 5-25 2-26 2-13

Phos phoethanolamine 0-167 0-216 0-225 0-195 0-177 0-325

Phos phos erine NA NA NA NA NA NA

Serine 48-509 34-329 46-143 40-94 28-94 15-85

Taurine 12-1057 10-809 6-267 7-264 28-268 13-534

Threonine 9-337 12-145 7-73 10-67 10-48 4-48

Tryptophan 1-46 3-37 2-29 2-27 2-27 2-12

(27)

Bảng Khoảng tham chiếu acid amin dịch não tuỷ (Đơn vị: umol/L.)

Tỷ số glycine DNT/ huyết tương trẻ sơ sinh: Tỷ số glycine DNT/ huyết tương: 0.012 - 0.040

Có nhiều bệnh chuyển hố di truyền gây bất thường acid amin huyết tương / nước tiểu, bệnh cystin niệu (cystinuria), bệnh siro niệu (maple syrup urine disease), bệnh lý chu trình ure (urea cycle defects), tăng glycin máu không nhiễm keton (nonketotic hyperglycinemia), homocystin niệu phenylceton niệu (phenylketonuria) Một số bệnh lý acid amin lành tính, nhiên số khác lại gây vấn đề sức khoẻ trầm trọng Nếu phát sớm điều trị thích hợp, cứu sống người bệnh biến chứng ngăn ngừa kiểm soát

Rất nhiều bệnh di truyền gây thiếu hụt enzyme ảnh hưởng đến q trình dị hố acid amin, làm tăng nhiều acid amin huyết tương Khi nồng độ acid amin huyết tương tăng cao, xuất acid amin niệu (aminoaciduria)

Amino Acid 0-12 tháng 1-18 năm >18 năm

Alanine 15-60 12-41 12-48

Alpha-aminoadipic acid 0-1 0-1 0-1

Alpha-aminobutyric acid 1-5 1-5 0-8

Arginine 7-40 13-31 13-35

Asparagine 3-37 3-16 0-18

Aspartic acid 0-17 0-11 0-5

Citrulline 0-9 0-8 0-6

Cystine 0-1 0-1 0-1

Ethanolamine 3-32 9-26 9-26

Glutamic acid 0-50 0-11 0-11

Glutamine 231-940 352-824 284-680

Glycine 3-19 3-8 2-14

Histidine 7-38 9-30 11-25

Homocystine 0-1 0-1 0-1

Isoleucine 1-16 1-12 0-13

Leucine 5-35 6-20 4-27

Lysine 7-42 10-37 15-43

Methionine 2-30 1-7 0-9

Ornithine 2-21 2-19 2-9

Phenylalanine 6-40 4-23 2-19

Phosphoserine 3-7 3-7 3-7

Serine 25-105 21-86 19-38

Taurine 4-62 4-14 3-12

Threonine 12-178 14-130 22-53

Tryptophan 0-8 0-8 0-8

Tyrosine 5-54 5-25 2-14

(28)

Một số bệnh di truyền ảnh hưởng đến chế tái hấp thu acid amin thận, gây amino acid niệu nồng độ acid amin huyết tương bình thường thấp Nhiều yếu tố ảnh hưởng đến nồng độ acid amin huyết tương / nước tiểu, nhịp ngày đêm, thức ăn/ dinh dưỡng ngồi đường tiêu hố, trẻ đẻ non, bệnh gan thận, tác động thuốc/ chất độc, tạp chất có mẫu thu thập mẫu khơng hay q trình khử protein Bảng sau liệt kê danh sách theo trình tự alphabe acid amin bất thường gặp

Acid Amin Bất thƣờng Alanine Tăng trong:

 Các trường hợp tăng lactate/pyruvate

 Thứ phát nhiễm acid lactic ( lactic acidosis)  Rối loạn tiên phát chuyển hoá pyruvate

 Rối loạn chu trình ure (có tăng glutamine)  Sử dụng valproate làm tăng alanine glycine Allo-isoleucine Tăng MSUD (bệnh siro niệu)

-Aminoadipic acid

Tăng 2-ketoadipic acidemia (do thiếu 2-ketoadipic dehydrogenase)

Arginine  Tăng argininemia (UCD thiếu hụt arginase)  Tăng nước tiểu chứng cystin niệu,

 Tăng nước tiểu chứng acid amin dibase niệu không dung nạp protein chứa lysin (cystine không tăng)  Tăng truyền arginine

 Tăng sau ăn dưa hấu

 Giảm huyết tán nhiễm tế bào máu huyết tương, chuyển arginine thành ornithine arginase hồng cầu

Argininosuccini c acid

 Tăng argininosuccinic niệu (UCD thiếu hụt argininosuccinase)

 Tăng nước tiểu citrullinemia type II Asparagine  Có thể tăng giảm khử độc amoniac

 Giảm phân huỷ tự phát hay vi khuẩn thành aspartic acid

(29)

tương

-Alanine  Tăng bệnh tăng -alanine máu (được cho tổn thương trình trao đổi amin -alanine)

 Tăng nước tiểu sau ăn thịt, đặc biệt thịt gia cầm (1-methylhistidine, carnosine anserine tăng)

 Tăng thuốc: sử dụng thuốc chống co giật -vinyl-GABA (Vigabatrin) làm tăng -alanine huyết tương, GABA acid -amino-isobutyric

Citrulline Tăng trong:

 Citrullinemia (UCD thiếu hụt argininosuccinate synthetase)

 Ứ mật gan sơ sinh thiếu hụt citrin (NICCD)

 Không dung nạp protein chứa lysine (Lysinuric protein intolerance)

 Ăn dưa hấu Cystathionine Tăng trong:

 Cystathionin niệu tiên phát (Primary cystathioninuria) (thiếu -cystathionase)

 Cystathionin niệu thứ phát (Secondary cystathioninuria) liên quan đến thiếu vitamin B6, nhiễm độc tuyến giáp, neuroblastoma ung thư tế bào gan

Cystine  Tăng nước tiểu chứng cystin niệu (tổn thương trình vận chuyển cystine, ornithine, arginine lysine), tạo sỏi cystine thận

Ethanolamine  Tăng bệnh gan

 Ethanolamin niệu (Ethanolaminuria) dấu hiệu không đặc hiệu bệnh thần kinh nặng

Glutamic acid  Tăng nước tiểu dicarboxylic aminoaciduria  Tăng phân huỷ glutamine ngẫu nhiên vi khuẩn  Tăng huyết tán huyết tương bị nhiễm tế bào

máu

 Tăng nước tiểu nhiễm phân

Glutamine  Tăng rối loạn chu trình urea (urea cycle disorders) với tăng ammoniac huyết tương

(30)

(lysinuric protein intolerance)

 Giảm phân huỷ thành glutamic acid ngẫu nhiên vi khuẩn

Glycine Tăng

 Tăng glycin máu không nhiễm ceton (Nonketotic hyperglycinemia – gọi bệnh não glycine, tổn thương phức hợp enzyme thoái hoá glycine ty thể, tăng tỷ số glycine DNT/ huyết tương)

 Propionic acidemia  Methylmalonic acidemia

 Sử dụng valproate (tăng glycine alanine) Huyết tán huyết tương nhiễm tế bào máu Tăng nước tiểu trong:

 Tăng proline máu type I (do thiếu proline oxidase) and type II (có thể thiếu pyrroline-5-carboxylate dehydrogenase)  Iminoglycinuria (rối loạn vận chuyển qua màng lành tính)  Nước tiểu nhiễm vi khuẩn (phân huỷ hippuric acid) Histidine  Tăng histidine máu (thiếu histidase)

 Tăng histidine nước tiểu (tổn thương vận chuyển histidine ruột/ thận)

 Tăng nước tiểu có thai

Homocitrulline  Tăng ornithine máu-tăng ammoniac máu- chứng homocitrulline niệu (hyperornithinemia-hyperammonemia- homocitrullinuria (hội chứng HHH, tổn thương vận chuyển ornithine qua màng ty thể vào matrix)

 Tăng trẻ em dùng sữa công thức (nguyên nhân hay gặp tăng nước tiểu)

Homocystine Tăng homocysteine máu giảm hoạt tính Cystathionine -synthase (methionine huyết tương tăng):

 Tổn thương cystathionine -synthase di truyền  Dùng 6-Azauridine triacetate (an anti-psoriatic)  Điều trị Isoniazid (lao)

(31)

hoặc thấp):

 Thiếu hụt Methylenetetrahydrofolate reductase

 Tổn thương q trình hấp thu chuyển hố vitamin B12  Suy dinh dưỡng thiếu B12 folate

Tăng homocystine giả tạo:

 Cystathionine niệu (chuyển cystathionine thành homocystine vi khuẩn)

Tăng homocysteine giả tạo máu tồn phần chưa ly tâm nhiệt độ phịng

Giảm homocystine mẫu chậm khử tạp protein

Giảm homocysteine toàn phần (<1uM) thiếu hụt sulfite oxidase cofactor molybdenum

Lưu ý: huyết tương phải khử protein sau thu thập

Isoleucine  Tăng bệnh siro niệu (nước tiểu người bệnh có mùi thơm)

 Tăng nhịn đói 1-2 ngày  Tăng nước tiểu nhiễm phân Leucine  Tăng bệnh siro niệu

 Tăng nhịn đói 1-2 ngày  Tăng nước tiểu nhiễm phân

Lysine Tăng bệnh tăng lysin máu gia đình saccharopin niệu (tổn thương protein hai chức -aminoadipic semialdehyde synthase)

Tăng nước tiểu trong:

 Không dung nạp protein chứa lysin (Tăng acid amin dibase niệu type II, di truyền lặn bất thường vận chuyển lysin, arginine ornithine)

 Tăng acid amin dibase niệu type I (Di truyền trội NST thường)

 Tăng lysine niệu đơn độc (Isolated lysinuria)  Cystin niêu argininemie

Methionine Tăng trong:

(32)

 Tyrosinemia type I (thiếu hụt fumarylacetoacetate hydrolase)

 Homocystine niệu thiếu hụt cystathionine -synthase  Tăng methionine máu tạm thời trẻ nhỏ

 Trẻ nhỏ ăn thực phẩm có DL-methionine

 Chỉ định 6-Azauridine triacetate (an anti-psoriatic)  Tăng methionine máu không rõ chế

1-Methylhistidine

Tăng nước tiểu sau ăn thịt, đặc biệt gia cầm (-alanine, carnosine anserine tăng nước tiểu) Ornithine Tăng trong:

 Làm teo màng mạch võng mạc (thiế aminotransferase)

 Tăng ornithine máu- tăng ammoniac máu- chứng homocitrulline niệu

 Điều trị Isoniazid (nhiễm lao)

 Huyết tán, huyết tương nhiễm tế bào máu chuyển arginine thành ornithine RBC arginase

Tăng nước tiểu trong:  Cystine niệu

 Chứng acid amin dibase niệu không dung nạp protein chứa lysin

Phenylalanine Tăng trong:

 Phenylketon niệu (PKU) tăng phenylalanine máu thiếu hụt tiên phát phenylalanine hydroxylase

 Giảm tổng hợp tái sử dụng cofactor tetrahydrobiopterin (BH4)

 Tăng phenylalanine máu thời trẻ sơ sinh  Tyrosinemia thời trẻ sơ sinh

 Sử dụng Paracetamol (một số sản phẩm có chứa phenylalanine tiền chất aspartame)

 Bệnh gan

Lưu ý: Sàng lọc PKU cần lấy mẫu 48 sau sinh để trẻ sử dụng protein ngày

Phosphoethanol amine

(33)

 Giảm thoái hoá thành ethanolamine tự phát vi khuẩn

Saccharopine Tăng saccharopin niệu tăng lysin máu gia đình (rối loạn chuyển hoá lysine)

Serine Giảm thiếu hụt 3-phosphoglycerate dehydrogenase (rối loạn sinh tổng hợp serine) Glycine thấp

Taurine  Tăng nước tiểu thiếu molybdenum cofactor thiếu sulfite oxidase đơn độc

 Tăng nước tiểu bệnh tăng -alanine máu  Tăng thoái hoá

 Tăng sau ăn tơm cua sị (shellfish) thực phẩm bổ sung taurine

 Tăng huyết tán huyết tương nhiễm tế bào máu (leukocytes platelets)

Threonine  Tăng trẻ nhỏ ăn sữa công thức  Có thể tăng bệnh gan

 Rối loạn chuyển hố khơng đặc hiệu Tyrosine Tăng

 Tyrosinemia thời trẻ sơ sinh  Rối loạn nặng chức tế bào gan

 Tyrosinemia type I (hepatorenal tyrosinemia), thiếu fumarylacetoacetate hydrolase, tăng succinylacetone -aminolevulinic acid

 Tyrosinemia type II (Oculocutaneous tyrosinemia), thiếu tyrosine aminotransferase

 Tyrosinemia type III, Thiếu 4-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase

 Sau ăn

 Chảy máu thiếu vitamin C (Scurvy)  Cường giáp

Valine  Tăng bệnh siro niệu

 Tăng valine máu (leucine isoleucine khơng tăng)  Nhịn đói 1-2 ngày

(34)

Acid amin trung tính

Tăng nước tiểu bệnh Hartnup (do tổn thương hệ thống vận chuyển acid amin trung tính Acid amin trung tính glycine cystine khơng tăng)

Amino acid Amino acid niệu tồn thể do:

 Cystinosis (tích lũy cystine tiêu thể mơ khác thể), nguyên nhân hay gặp hội chứng Fanconi di truyền thứ phát trẻ em

 Galactosemia  Bệnh Wilson  Tyrosinemia type I

 Không dung nạp fructose di truyền (Hereditary fructose intolerance)

 Bệnh dự trữ Glycogen type I  Hội chứng Lowe

 Hội chứng Fanconi

 Dinh dưỡng hồn tồn ngồi đường tiêu hố

 Ngộ độc kim loại nặng (cadmium, uranium, mercury, chì platinum)

 Tăng thối giáng protein đói bệnh  Hoại tử ống thận cấp

 Rất nhiều thuốc (đặc biệt kháng sinh) V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ

Một số yếu tố nhiễu trình bày bảng Có thể tóm tắt lại đây: Phân huỷ tự phát

a) Glutamine asparagine không ổn định thoái hoá từ từ tương ứng thành glutamic acid aspartic acid

b) Phosphoethanolamine thoái hoá thành ethanolamine (và phosphate) Huyết tán huyết tương nhiễm tế bào máu

a) Giảm arginine tăng ornithine

b) Tăng aspartic acid, glutamic acid glycine c) Tăng taurine leukocytes tiểu cầu Nhiễm khuẩn

(35)

b) Trong nước tiểu, giảm glycine, alanine nhiều acid amin khác xảy nhiễm khuẩn, glycine tăng phân huỷ hippuric acid vi khuẩn

c) Cystathionine chuyển thành homocystine Nước tiểu nhiễm phân

Tăng cao glutamic acid acid amin mạch nhánh (branched-chain amino acids)

5 Chậm khử protein

Giảm acid amin chứa disulfide, chủ yếu cystine homocystine Các acid amin thực phản ứng trao đổi với phân tử protein chứa nhóm sulfhydryl, gắn protein

6 Ví dụ yếu tố nhiễu thực phẩm thuốc: a) glycine alanine cao dùng valproate

b) beta-alanine (cả GABA beta-aminoisobutyric acid) cao dùng gamma-vinyl-GABA (vigabatrin™)

c) Tăng acid amin máu/ nước tiểu ăn nhiều, đặc biệt chế độ ăn nhiều protein

d) Tăng tiết beta-alanine 1-methylhistidine (cả carnosine anserine) ăn thịt, đặc biệt thịt gia cầm

e) Tăng tiết taurine sau ăn tơm cua sị

(36)

ĐỊNH LƢỢNG ACID BÉO TỰ DO MÁU I NGUYÊN LÝ

Acid béo tự máu định lượng phương pháp đo màu Acyl CoA + O2 > 2,3-trans-Enoyl-CoA + H2O2 H2O2 + TOOS + 4-AAP Sản phẩm màu tím + H2O 4-AAP: 4-aminoantipyrine

TOOS: N-ethyl-N-(2hydroxy-3-sulphopropyl) m-toluidine II.CHUẨN BỊ

1 Ngƣời thực hiện: nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1 Phương tiện

- Máy hóa sinh tự động Ví dụ : AU2700/AU680 - Máy ly tâm

2.2 Hoá chất

- Thuốc thử định lượng acid béo tự Thuốc thử ổn định 30ngày khay thuốc thử

- Huyết kiểm tra mức - Huyết kiểm tra mức - Huyết chuẩn

- Nước cất 3 Ngƣời bệnh:

Người bệnh người nhà cần chuẩn bị giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

4.Phiếu xét nghiệm:

- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, thời gian định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm III.CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH

1 Lấy bệnh phẩm:

- Huyết huyết tương chống đông EDTA Không sử dụng huyết tương chống đông heparin

- Lấy máu tĩnh mạch để tạo cục đông trước ly tâm lấy huyết Máu sau lấy để đá

(37)

- Bảo quản bệnh phẩm - 20ºC 30 ngày

- Chỉ rã đông bệnh phẩm lần trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đông 2 Tiến hành kỹ thuật:

- Chuẩn bị máy hóa sinh tự động: chuẩn xét nghiệm (nếu cần) tiến hành nội kiểm tra chất lượng (chạy IQC) cho xét nghiệm acid béo tự

- Nhận mẫu bệnh phẩm từ khoa lâm sàng

- Ly tâm mẫu bệnh phẩm phút với vận tốc 5000 vòng/phút - Đưa vào máy phân tích

- Thao tác vận hành máy theo quy trình vận hành máy - Duyệt kết

- Kiểm soát chất lượng:

+ Hàng ngày : Chạy mức chất chứng vào đầu ngày làm việc Tất kết

kiểm tra chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi chất chứng Chỉ thông báo kết xét nghiệm hai mức chất chứng nằm khoảng cho phép

+ Định kỳ : Chuẩn lại chạy mức chất chứng sau thay lô thuốc thử

sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi chuẩn máy XN

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1.Giá trị tham chiếu:

Khoảng tham chiếu acid béo tự máu Lúc đói: 0,1 – 0,9 mmol/L 2.Ý nghĩa lâm sàng:

Vì thể ceton tạo từ acid béo tự để giúp trì nồng độ glucose máu; acid béo tự do, glucose máu D-3-hydroxybutyrat cần định lượng lúc để đánh giá rối loạn chuyển hoá thể ceton số rối loạn chuyển hoá khác

Glucose x D-3-hydroxybutyrat máu khoảng 8~12 người bệnh hạ glucose máu Nếu glucose 2mM, D-3-hydroxybutyrat nên 4-6mM tình trạng kiểm sốt, D-3-hydroxybutyrat 1mM, bất thường giảm tạo thể ceton (hypoketotic)

Tỷ số FFA/ D-3-hydroxybutyrat thường gần (0.5- 2.5)

Bất thường tạo thể ceton (ketogenesis) oxy hoá acid béo tỷ số tăng (>3), bất thường thoái hoá thể ceton (ketolysis) tỷ số giảm (<0.3)

V.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

(38)

ĐỊNH LƢỢNG ACID HỮU CƠ NIỆU I NGUYÊN LÝ

Phương pháp cổ điển phân tích acid hữu cơ: Chiết tách ethyl acetate/ tạo dẫn xuất oxime-trimethylsilyl/ phân tích GCMS Thể tích nước tiểu chứa 2.65 µmol creatinin tối đa mL dùng để chiết tách Hai chất chuẩn nội sử dụng là: 2-oxo-caproic acid cho oxo-acid, 3-phenylbutyric acid cho loại acid hữu khác Các dẫn xuất oxime tạo thành phản ứng với hydroxylammonium chloride pH14 Sau phản ứng, hỗn hợp chiết tách ethyl acetate điều kiện pH1 bão hòa NaCl Lớp ethyl acetate chuyển sang lọ làm khô khí nito Các acid hữu chiết tách tạo dẫn xuất thêm BSTFA để lò 80ºC h 15 phút Các alkane thêm vào trước bơm mẫu, dùng làm chuẩn nội thời gian lưu Phân tách, xác định bán định lượng acid hữu thực GCMS

II CHUẨN BỊ

 Agilent 7890A GC System

 Agilent 5975C inert XL EI/ CI Mass Selective Detector with Triple Axis Detector

 Agilent 7693 Autosampler  Carrier gas: helium (99.995%)

 Column: HP- 5MS 30m x 0.25 mm id x 0.25 um film thickness Catalog number 190915S-433

2.2 Hóa chất:

Hóa chất định lượng acid hữu niệu 3.Ngƣời bệnh

(39)

Nước tiểu tươi, khơng có chất bảo quản, đựng ống nghiệm khơ có nắp đậy Thể tích tối ưu 10 mL tối thiểu mL

Bệnh phẩm bảo quản -40ºC vòng 24 thu thập, ổn đinh năm

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng acid hữu niệu Máy chuẩn với xét nghiệm acid hữu niệu Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm acid hữu niệu đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

Tăng tiết acid hữu nước tiểu gặp nhiều bệnh rối loạn chuyển hóa di truyền, phần lớn thiếu hụt enzym đặc hiệu dẫn đến tích tụ sản phẩm chuyển hóa trung gian phía trước phản ứng xúc tác enzyme đó, với chất chuyển hóa khác chất chuyển hóa trung gian biến đổi theo đường thay Biểu lâm sàng khác không đặc hiệu Phân tích acid hữu niệu GCMS chẩn đoán theo dõi bệnh lí

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ

(40)

ĐỊNH LƢỢNG ACYLCARNITINE MÁU BẰNG MSMS I NGUYÊN LÝ

MSMS thiết bị sử dụng để phân tách định lượng ion dựa tỷ số khối lượng/ điện tích chúng (mass/charge ratio) MSMS tạo phần tử tích điện từ mẫu cần phân tích, sau sử dụng điện từ trường để phân tách đo lường khối lượng phần tử tích điện Bộ phận phát tạo đồ thị phổ khối đỉnh định lượng chuẩn nội để xác định lượng chất có mặt mẫu

MSMS gồm MS nối với phận gọi collision cell Trước vào MS thứ nhất, mẫu ion hoá fast atom bomardment electrospray (FAB-MS/MS ES-MS/MS) Q trình tạo điện tích không phân cắt hợp chất hữu mẫu

MS thứ phân tách ion gốc (parent ions) theo trình tự số khối (mass/charge ratio) chuyển sang collision chamber

Bộ phận collision chamber phân cắt ion gố chuyển mảnh ion sang MS thứ hai Mẫu hình mảnh ion ion gốc phân tích so sánh với phổ biết chất chuẩn nội Tồn q trình ion hố phân tích kết khoảng phút

MS/MS cơng cụ hiệu giúp phân tích định lượng acylcarnitine để sàng lọc chẩn đoán rối loạn chuyển hoá acid béo

(41)

 Hệ thống MSMS  Máy đục lỗ

 Máy lắc  Tủ sấy

 Thiết bị thổi khô khí nito

 Tủ hơt, máy ly tâm trang thiết bị PXN 2.2 Hóa chất:

 Hóa chất định lượng Acylcarnitin  Chất chuẩn

 Nước cất 3.Ngƣời bệnh

Huyết thanh/ huyết tương

- Lấy mL máu tĩnh mạch cho vào ống nghiệm Máu không vỡ hồng cầu - Ly tâm mẫu 4000 vòng phút, tách huyết

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng acylcarnitine Máy chuẩn với xét nghiệm acylcarnitine Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm acylcarnitine đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

(42)

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Các bệnh lý gây bất thường nồng độ carnitine/acylcarnitine Acylcarnitine Nguồn

gốc

Thay đổi

Bệnh

Carnitine (total) Máu ↓↓ Khiếm khuyết vận chuyển carnitine Acetyl (C2) Máu Thiếu hụt giảm carnitine

Propionyl (C3) Propionic acidemia;

Methylmalonic acidemia Thiếu hụt Holocarboxylase Thiếu hụt Biotinidase

Butyryl/Isobutyryl (C4)

Thiếu hụt SCAD

Thiếu hụt SCAD (thể nhẹ)

Thiếu hụt Isobutyryl-CoA dehydrogenase;

Thiếu hụt multiple acyl-CoA dehydrogenase (MAD)

Tiglyl/3-Methylcrotonyl (C5:1)

Thiếu hụt 3-Oxothiolase; 3-MCC

Isovaleryl/2-Methylbutyryl (C5)

Isovaleric acidemia

Thiếu hụt 2-Methylbutyryl-CoA dehydrogenase

Thiếu hụt MAD 3-Hydroxyisovaleryl

(C5-OH)

Thiếu hụt 3-Methylcrotonyl-CoA

carboxylase (3-MCC)

Thiếu hụt 3-OH-3-methylglutaryl-CoA (HMG3-OH-3-methylglutaryl-CoA) lyase

Thiếu hụt Holocarboxylase Thiếu hụt Biotinidase

3-Hydroxy-2-Mebutyryl (C5-OH)

Thiếu hụt 3-Oxothiolase Methylmalonyl

(C4-DC)

MMA

Glutaryl (C5-DC) Glutaric acidemia, type I (GA-I)

Hexanoyl (C6) Thiếu hụt MCAD; Thiếu hụt MAD

Octanoyl (C8) Thiếu hụt MCAD; Thiếu hụt MAD

(43)

Methylglutaryl (C6-DC)

Thiếu hụt HMG-CoA lyase

Decanoyl (C10) Thiếu hụt MAD

Dodecanoyl (C12) Thiếu hụt MAD

Tetradodecenoyl (C14:2)

Thiếu hụt VLCAD Tetradecenoyl (C14:1) Thiếu hụt VLCAD

Tetradecanoyl (C14) Thiếu hụt VLCAD; Thiếu hụt MAD

Palmitoyl (C16) Thiếu hụt VLCAD; Thiếu hụt

CPT-II; Thiếu hụt CAT; Thiếu hụt LCHAD; Thiếu hụt MAD; Thiếu hụt CPT-I

Linoleoyl (C18:1) Thiếu hụt VLCAD; Thiếu hụt CPT-II; Thiếu hụt CAT; Thiếu hụt LCHAD

Thiếu hụt CPT-I 3-Hydroxypalmitoyl

(C16-OH)

Thiếu hụt LCHAD; Thiếu hụt TFP 3-Hydroxylinoleoyl

(C18:1-OH)

Thiếu hụt LCHAD; Thiếu hụt TFP

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ Kết xét nghiệm khơng bị ảnh hưởng khi:

(44)

ĐỊNH LƢỢNG ADIPONECTIN Theo kỹ thuật miễn dịch đo độ đục

I NGUYÊN LÝ

Adiponectin polypeptid tiết từ tế bào mỡ, Adiponectin tham gia vào q trình chuyển hóa lipid, góp phần điều chỉnh: huyết áp, bảo vệ thành mạch, hệ thống bổ thể , kích thích hoạt động giảm tình trạng kháng insulin Ở người trưởng thành Adiponectin máu tỷ lệ nghịch với phần trăm lượng chất béo nội tạng Adiponectin tác động có lợi hội chứng béo phì, hội chứng chuyển hóa, kháng insulin, xơ vữa động mạch, thiếu máu tim cục bộ… cách tác động lên thành phần mô mạch

Định lượng theo phương pháp tủa miễn dịch đo độ đục (turbidimetric): Mẫu bệnh phẩm trộn với thuốc thử xảy gắn kết (kháng nguyên - kháng thể) hạt latex gắn kháng thể đơn dòng kháng adiponectin người với adiponectin mẫu bệnh phẩm cần phân tích tạo thành phức hợp latex-adiponectin kháng thể Phức hợp ngưng kết tỷ lệ thuận với nồng độ adiponectin mẫu bệnh phẩm Trên máy phân tích hóa sinh tự động kết xác định dựa đường chuẩn thực

II CHUẨN BỊ

01 cán đại học chuyên ngành có thẩm quyền ký kết 01 kỹ thuật viên chuyên ngành Hóa sinh người thực phân tích có trình độ phù hợp, đào tạo sử dụng máy hóa sinh tự động

2 Phƣơng tiện, hóa chất 2.1 Phương tiện

- Máy phân tích hóa sinh tự động hãng thực dược như: AU 640, AU680, AU2700, AU 5800; Các máy Cobas: C501, 502, số máy khác

- Máy ly tâm,

- Tủ lạnh đựng hóa chất, tủ lạnh bảo quản QC, mẫu bệnh phẩm - Pipep loại, đầu côn xanh, côn vàng

- Giá đựng ống nghiệm, ống lấy mẫu, ống sample cup

2.2 Hóa chất

- Thuốc thử: Human adiponectin latex kit Chất chuẩn, QC mức khác 3 Ngƣời bệnh

(45)

- Có thể sử dụng mẫu bệnh phẩm huyết huyết tương Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng ống có chất chống đơng thích hợp như: lithium heparin, EDTA,

- Mẫu tiến hành phân tích theo quy trình

- Bệnh phẩm tách huyết thanh, huyết tương để ổn định 2-80C ngày tháng -200C

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm Adiponectin Máy chuẩn với xét nghiệm Adiponectin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Adiponectin đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1 Giá trị tham chiếu

Chỉ số BMI (Body Mass Index) (Kg/m2)

Nam (mcg/mL)

Nữ

(mcg/mL)

< 25 -26 – 37

25- 30 -20 – 28

>30 - 20 - 22 V CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

(46)

ĐỊNH LƢỢNG ALDOSTERON MÁU theo kỹ thuật hóa phát quang

I NGUYÊN LÝ

Aldosteron hormon steroid vỏ thượng thận có trọng lượng phân tử 360,4 dalton Vai trị aldosteron chuyển hóa muối nước điều hịa nồng độ natri kali, quy định khối lượng chất lỏng thể Aldosteron có tác dụng làm giảm tiết natri tăng tiết kali thận, tuyến mồ hôi tuyến nước bọt

Aldosteron định lượng phương pháp miễn dịch cạnh tranh sử dụng kháng thể đơn dòng cừu để kết hợp với phân tử Aldosteron

II.CHUẨN BỊ

1 Ngƣời thực hiện:

- Người thực kỹ thuật cần có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

- Máy móc: Liaison XL số máy miễn dịch khác - Máy ly tâm

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay

- Hóa chất: Hóa chất định lượng Aldosteron, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng Aldosteron

3.Ngƣời bệnh:

Người bệnh, người nhà người bệnh cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

- Trên phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin người bệnh: họ tên, tuổi, giới tính, số giường, khoa phịng, chẩn đốn, xét nghiệm cần làm - Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm,

họ tên người lấy mẫu, thời gian định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm

III.CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1.Lấy bệnh phẩm:

(47)

Mẫu lấy khoảng từ 7-10 h sáng người bệnh phải tư nằm hay đứng 30 phút trước lấy máu

Huyết thanh, huyết tương nên tách khỏi cục máu đông sớm tốt Bệnh phẩm ổn định ngày kể từ ngày lấy mẫu giữ nhiệt độ 2-8°C; Nếu lưu mẫu bệnh phẩm lâu cần lưu trữ đông lạnh sâu -20°C thấp Các mẫu bệnh phẩm không nên đông lạnh rã đông nhiều lần

Nước tiểu: Thu thập nước tiểu 24 giờ, giữ nước tiểu tủ lạnh, đo ghi thể tích Thêm vào g acid boric/100 ml nước tiểu Trộn nước tiểu trước lấy mẫu phân tích Mẫu nước tiểu có chất bảo quản Borat ổn định ngày 2-8°C tuần bảo quản -20°C Mẫu nước tiểu ổn định qua lần đông lạnh/rã đông

2.Tiến hành kỹ thuật:

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm Aldosteron Máy chuẩn với xét nghiệm Aldosteron Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Aldosteron đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Thực xét nghiệm theo protocol máy

IV.NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

+ Giá trị tham chiếu Aldosteron phụ thuộc vào mẫu thử huyết hay huyết tương tư lấy mẫu

+ Huyết

- Tư đứng: 2,52 – 39,2 ng/dL - Tư nằm: 1,76 – 23,2 ng/dL + Huyết tƣơng (EDTA)

- Tư đứng: 2,21 – 35,3 ng/dL - Tư nằm: 1,17 – 23,6 ng/dL + Nƣớc tiểu

Nước tiểu 24h: 1,19 – 28,1 g/24h + Tăng Aldossteron:

- Tăng Aldosteron nguyên phát (hội chứng Conn)

(48)

- Tăng Aldosteron thứ phát gặp suy tim sung huyết, xơ gan, bệnh thận…

+ Giảm Aldossteron: - Suy thượng thận

- Ở trẻ sơ sinh với tăng sản thượng thận bẩm sinh, trẻ sơ sinh thiếu loại enzyme cần thiết để sản xuất cortisol, số trường hợp, điều làm giảm sản xuất aldosteron Đây nguyên nhân gặp aldosteron thấp V.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ

- Mẫu bệnh phẩm máu không tách huyết hay huyết tương khỏi cục đông Khắc phục: Tách huyết hay huyết tương khỏi cục đơng sau bệnh phẩm gửi đến phịng xét nghiệm

- Mẫu nước tiểu bảo quản không cách: Cần tập huấn qui trình lấy bảo quản nước tiểu cho nhân viên

+ Những yếu tố gây nhiễu cho kết xét nghiệm

Các mẫu có nồng độ chất tối đa sau không ảnh hưởng đến kết qủa xét nghiệm

Các mẫu huyết tán hemoglobin đến 600 mg/dL, huyết vàng bilirubin đến 684 µmol/L (40 mg/dL), huyết đục triglycerid đến 33.9 mmol/L (3000mg/dL) protein 120g/L …

(49)

ĐỊNH LƢỢNG AMH (ANTI-MULLERRIAN HORMONE) MÁU theo kỹ thuật hóa phát quang/điện hóa phát quang

AMH (Anti Mulerian Hormone), có chất glycoprotein, lưu hành máu người Ở phụ nữ, tế bào hạt granulosa tiền nang noãn buồng trứng chế xuất AMH Nồng độ AMH máu phản ánh trữ lượng tiền nang noãn khả sinh trứng buồng trứng AMH cung cấp dấu hiệu số lượng trứng sản xuất rụng vào chu kỳ hàng tháng phụ nữ Mức độ AMH máu số giúp đánh giá dự trữ buồng trứng phụ nữ hữu ích việc đánh giá tình trạng sinh sản Sự giảm tiết AMH đời sống sinh sản người phụ nữ phản ánh suy giảm số lượng trứng/nang noãn theo tuổi theo lão hóa buồng trứng Mặc dù nồng độ AMH giảm theo tuổi, dao động theo ngày nồng độ hormone chu kỳ kinh nguyệt phụ nữ nhỏ, đo nồng độ AMH ngày chu kỳ kinh

Ở nam giới, AMH tế bào Sertoli sản sinh, tế bào sinh tinh tinh hoàn Nồng độ AMH máu phản ánh trữ lượng tiền tinh trùng khả sinh tinh tinh hoàn

I NGUYÊN LÝ

Định lượng AMH dựa nguyên lýmiễn dịch kiểu “Sandwich” Có thể sử dụng hai phương pháp:

Theo phương pháp hóa phát quang –CLIA:

Định lượng AMH dựa phương pháp miễn dịch enzyme bước đồng thời (kiểu “Sandwich”) Mẫu bệnh phẩm thêm vào giếng phản ứng với chất cộng hợp kháng thể (đơn dòng, chuột) kháng AMH – phosphatase kiềm đệm MES, protein đệm muối TRIS vàcác hạt thuận từ phủ kháng thể (đơn dòng, chuột) kháng AMH đệm TRIS Sau ủ giếng phản ứng, chất gắn với pha rắn giữ lại từ trường, thành phần không gắn bị rửa trôi Tiếp đó, chất quang hóa Lumi-Phos 530 thêm vào giếng phản ứng ánh sáng tạo phản ứng đo phận đo quang (luminometer) Cường độ ánh sáng tạo tỷ lệ thuận với nồng độ AMH có mẫu phản ứng Lượng chất cần phân tích mẫu xác định dựa đường cong chuẩn đa điểm lưu máy

Theo phương pháp điện hóa phát quang - ECLIA):

Nguyên lý bắt cặp Tổng thời gian xét nghiệm: 18 phút

(50)

▪ Giai đoạn ủ thứ hai: Sau thêm vi hạt phủ streptavidin, phức hợp miễn dịch trở nên gắn kết với pha rắn thông qua tương tác biotin streptavidin

▪ Hỗn hợp phản ứng chuyển tới buồng đo, vi hạt đối từ bắt giữ bề mặt điện cực Những thành phần khơng gắn kết bị thải ngồi buồng đo dung dịch ProCell/ProCell M Cho điện áp vào điện cực tạo nên phát quang hóa học đo khuếch đại quang tử

▪ Các kết xác định thông qua đường chuẩn xét nghiệm máy tạo nên xét nghiệm 2‑điểm chuẩn thơng tin đường chuẩn qua mã vạch hộp thuốc thử mã vạch điện tử

Ghi chú:* Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy) ) II CHUẨN BỊ

2 Phƣơng tiện hóa chất 2.1 Phương tiện:

- Máy miễn dịch tự động như: Unicel DxI 800 , máy e 170, E601, E602 số máy miễn dịch khác

- Máy ly tâm,

- Tủ lạnh đựng hóa chất, tủ lạnh bảo quản QC, mẫu bệnh phẩm - Pipep loại, đầu côn xanh, côn vàng

- Giá đựng ống nghiệm, ống lấy mẫu, ống sample cup 2.2 Hóa chất

Các hóa chất cần thiết cho phân tích máy Unicel DxI 800 gồm:

- Hóa chất Access AMH: Hóa chất tích hợp sẵn sàng cho sử dụng, đóng gói 100 xét nghiệm/hộp Bảo quản 2-8o

C

- Chất hiệu chuẩn Access AMH Calibrators: dùng để xây dựng đường cong chuẩn cho xét nghiệm AMH Chất hiệu chuẩn có mức, dạng bột đông khô Được bảo quản 2- 10oC Sau hoàn nguyên, chất chuẩn ổn định 90 ngày 2-10o

C

- Chất kiểm chứng Access AMH QC: Dùng để kiểm tra tính xác kết xét nghiệm AMH

- Access Substrate: Cơ chất phát quang

- Sample diluent A: dùng để pha loãng mẫu cần thiết - Unicel DxI Wash buffer II: Dung dịch rửa phản ứng - Unicel DxI Reaction Vessel: Giếng phản ứng

(51)

- M Vi hạt phủ Streptavidin (nắp trong), chai, 6.5 mL: Vi hạt phủ Streptavidin 0.72 mg/mL; chất bảo quản

- R1 Anti-AMH-Ab~biotin (nắp xám), chai, mL: Kháng thể đơn dòng kháng AMH đánh dấu biotin (chuột) 1.0 mg/L, đệm phosphate 50 mmol/L, pH 7.5; chất bảo quản

- R2 Anti-AMH-Ab~Ru(bpy) (nắp đen), chai, mL: Kháng thể đơn dòng kháng AMH (chuột) đánh dấu phức hợp ruthenium 1.0 mg/L, đệm phosphate 50 mmol/L, pH 7.5; chất; chất bảo quản

- Có thể sử dụng mẫu bệnh phẩm huyết huyết tương Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng ống có chất chống đơng thích hợp lithium heparin Khơng sử dụng chất chống đông EDTA

- Mẫu máu tách riêng huyết thanh, huyết tương ổn định ngày 20‑25 °C, ngày 2‑8 °C tháng nhiệt độ -20 °C (± °C) Mẫu nên đông lạnh lần

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm AMH Máy chuẩn với xét nghiệm AMH Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm AMH đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

(52)

AMH có liên quan với số lượng nang nỗn nguyên thủy buồng trứng Nếu dự trữ buồng trứng tốt khả sinh sản buồng trứng cao, ngược lại dự trữ buồng trứng yếu gây tình trạng muộn phụ nữ Nồng độ AMH không thay đổi đáng kể suốt chu kỳ kinh giảm dần theo tuổi tác

2 Giá trị tham chiếu

Khả sinh sản buồng

trứng ng / mL pmol / L

Khả sinh sản tối ưu 4,0 - 6,8 28,6 - 48,5 Khả sinh sản tốt 2.2 - 4.0 15,7 - 28,6 Khả sinh sản 0,3 - 2,2 2.2 - 15.7 Khả 0,0 - 0,3 0,0 - 2,2 Hội chứng buồng trứng đa

nang > 6,8 > 48,5

- AMH giúp đánh giá dự trữ đáp ứng buồng trứng thực thụ tinh ống nghiệm

- Tiên lượng yếu tố có lơi cho người bệnh Phụ nữ có nồng độ AMH thấp thường đáp ứng với thuốc kích thích buồng trứng phải sử dụng nhiều thuốc để kích thích buồng trứng

- Nếu AMH nhỏ 3, khả đáp ứng với thuốc kích thích buồng trứng làm thụ tinh ống nghiệm cao kết thành công bị ảnh hưởng nhiều Ngược lại AMH cao, khả bị hội chứng kích buồng trứng cao

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

Khơng sử dụng mẫu bệnh phẩm máu bị vỡ hồng cầu, cần loại bỏ lấy lại mẫu - Mẫu thực xét nghiệm AMH không nên rã đông lần

- Tránh sử dụng mẫu nhiễm mỡ (mẫu bị đục quá) vỡ hồng cầu

- Các yếu tố có nguy gây nhiễu khác mẫu bệnh phẩm xuất gây kết sai xét nghiệm miễn dịch Một số mẫu chứa yếu tố dạng thấp, phosphatase kiềm nội sinh, fibrin, protein có khả liên kết với phosphatase kiềm ảnh hưởng đến kết Đánh giá cẩn thận kết xét nghiệm người bệnh nghi ngờ có yếu tố gây nhiễu

(53)

ĐỊNH LƢỢNG AMIKACIN MÁU I NGUYÊN LÝ

Amikacin sulfat kháng sinh bán tổng hợp họ aminoglycosid Thuốc diệt khuẩn nhanh gắn hẳn vào tiểu đơn vị 30S ribosom vi khuẩn ngăn chặn tổng hợp protein vi khuẩn Dùng amikacin thận trọng, đặc biệt người cao tuổi trẻ nhỏ, có nguy cao độc cho tai cho thận Phải giám sát chức thính giác chức thận Cần phải tránh dùng đồng thời nối tiếp với thuốc khác có độc tính cho thính giác thận (cả dùng tồn thân chỗ) Nhất thiết phải định lượng nồng độ thuốc huyết dùng cho người bị tổn thương thận Việc kiểm tra chức thận trình điều trị aminoglycosid người bệnh cao tuổi có giảm chức thận đặc biệt quan trọng

Nguyên lý: dựa nguyên lý miễn dịch độ đục ức chế tăng cường hạt (Particle-enhanced turbidimetric inhibition immunoassay)

Xét nghiệm dựa cạnh tranh amikacin mẫu thuốc tráng vào mộtvi hạt cho vị trí liên kết kháng thể kháng thể amikacin có thuốc thử Vi hạt từ phủ amikacin nhanh chóng bị kết tụ diện thuốc thử kháng thể chống amikacin trường hợp khơng có loại thuốc cạnh tranh mẫu Tỷ lệ thay đổi độ hấp thụ đo tỷ lệ thuận với tỷ lệ kết tụ hạt Khi mẫu có chứa amikacin thêm vào, phản ứng kết tụ bị ức chế phần, làm chậm lại tỷ lệ thay đổi hấp thụ Một đường cong nồng độ ức chế kết tụ đạt với tốc độ tối đa kết tụ nồng độ amikacin thấp chậm nồng độ amikacin cao

2 Phƣơng tiện hóa chất 2.1 Phƣơng tiện

- Các máy, thiết bịphân tích: Architect c4000, Architect c8000, Architect c16000 số máy khác

- Máy ly tâm

- Tủ lạnh bảo quản hóa chất, calibrator, control mẫu bệnh phẩm - Pipet loại

- Ống chứa mẫu bệnh phẩm - Đầu pipet tùy chọn

(54)

- Multigen Amikacin Reagent (Bộ Thuốc thử) bao gồm:

+ Hóa chất R1: x21 mL : Anti –amikacin monoclonal Antibody (mouse) <1.0%

+ Hóa chất R2: x8 mL: Amikacin-coated microparticles < 0.5% - MULTIGENT Amikacin Calibrators

- Chất kiểm chuẩn QC mức khác

- Nước muối sinh lý : Saline (0.85% to 0.90% NaCl) 3 Ngƣời bệnh

- Có thể sử dụng mẫu bệnh phẩm huyết huyết tương Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng ống có chất chống đơng thích hợp lithium heparin, EDTA,

- Bệnh phẩm tách huyết thanh, huyết tương để ổn định 2-80C ngày tháng -200

C 2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm Amikacin Máy chuẩn với xét nghiệm Amikacin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Amikacin đạt yêu cầu: không nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Người thực phân tích mẫu nhập liệu thơng tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

-Thực phân tích mẫu bệnh phẩm theo protocol máy

(55)

Khi suy thận, dùng amikacin thật cần điều chỉnh liều theo thay đổi nồng độ creatinin máu độ thải creatinin Phải giám sát chức thận và thính giác Cần phải kiểm tra nồng độ thuốc huyết

Sau tiêm bắp liều đơn 7,5 mg/kg amikacin cho người lớn có chức thận bình thường nồng độ đỉnh huyết tương 17 - 25 microgam/ml đạt 45 phút đến Khi truyền tĩnh mạch liều giờ, nồng độ đỉnh thuốc huyết tương trung bình 38 microgam/mL đạt sau truyền

Nửa đời huyết - người có chức thận bình thường 30 - 86 người bị suy chức thận nặng Nửa đời huyết - trẻ nhỏ ngày tuổi đẻ đủ tháng ngày tuổi, - trẻ đẻ nhẹ cân - ngày tuổi

Ở người lớn có chức thận bình thường, 94 - 98% liều đơn, tiêm bắp tĩnh mạch, đào thải khơng biến đổi qua cầu thận vịng 24

Căn vào nồng độ thuốc huyết mức độ suy giảm thận, người suy thận, dùng liều 7,5 mg/kg thể trọng, theo khoảng cách thời gian ghi bảng đây, tùy thuộc vào nồng độ creatinin huyết vào độ thải creatinin

Creatinin huyết Độ thải creatinin Khoảng cách liều (micromol/L ) (ml/phút/1,7 m2) (giờ)

<= 110 > 100 12

111 - 150 100 - 55 15

151 - 200 54 - 40 18

201 - 255 39 - 30 24

256 - 335 29 - 22 30

>= 335 < 22 36 lâu

Khơng sử dụng mẫu bệnh phẩm máu bị vỡ hồng cầu, cần loại bỏ lấy lại mẫu khác

- Trong trường hợp gặp, mẫu bệnh phẩm chứa kháng thể heterophile, cho kết thấp với xét nghiệm Amikacin MULTIGENT Các kháng thể interfering heterophile xảy tần số thấp dân số nói chung Những kháng thể gây kết tụ tự nhiên phản ứng dẫn đến kết thấp không phát

(56)

ĐỊNH LƢỢNG ANDROSTENEDION MÁU theo kỹ thuật hóa phát quang

I NGUYÊN LÝ

Androstenedion định lượng phương pháp miễn dich enzym hoá phát quang cạnh tranh

II CHUẨN BỊ 1 Ngƣời thực hiện:

nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1 Phương tiện:

Hệ thống máy miễn dịch tự động IMMULITE 2000 Máy ly tâm

2.2 Hoá chất

Thuốc thử androstenedion Vật liệu kiểm tra (QC) Nước cất

3 Ngƣời bệnh:

Người bệnh cần chuẩn bị giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, thời gian định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm III CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH

1 Lấy bệnh phẩm: - Huyết

Không sử dụng huyết tương chống đông EDTA hay heparin

- Lấy máu tĩnh mạch để tạo cục đơng hồn tồn trước ly tâm lấy huyết Ly tâm, sau tách huyết

- Mẫu bệnh phẩm nhiễm mỡ, huyết tán, vàng da gây sai số cho kết XN - Bảo quản bệnh phẩm 2-8ºC 24

- Bảo quản bệnh phẩm - 20ºC tháng 2.Tiến hành kỹ thuật:

(57)

- Vận hành máy theo hướng dẫn tài liệu hướng dẫn sử dụng máy miễn dịch IMMULITE 2000

- Máy tự động in kết sau hồn tất q trình phân tích - Kiểm soát chất lượng:

Hàng ngày : Chạy mức chất chứng vào đầu ngày làm việc Tất kết

quả kiểm tra chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi chất chứng Chỉ thông báo kết xét nghiệm hai mức chất chứng nằm khoảng cho phép

Định kỳ : Chuẩn lại chạy mức chất chứng sau thay lô thuốc thử

hoặc sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi chuẩn máy XN

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1.Giá trị tham chiếu:

Giá trị tham chiếu androstenedion: Nam: 2,1 – 10,8 nmol/L (0,6 – 3,1 ng/mL ) Nữ: 1,0- 11,5 nmol/L (0,3- 3,3 ng/mL ) 2.Ý nghĩa lâm sàng:

Androstenedion steroid, tiền chất testosteron estron Giá trị lâm sàng androstenedion: thường tăng chứng rậm lơng nam hố Khơng giống androgen dehydoepiandrosteron vỏ thượng thận dẫn xuất sulfat hố nó, androstenedion máu có nguồn gốc từ tuyến vỏ thượng thận buồng trứng Nồng độ androstenedion máu tăng định từ tuổi giảm dần sau 30 tuổi Androstenedion có biến thiên ngày theo chu kỳ kinh nguyệt, cao vào buổi sáng kỳ kinh Khi mang thai, nồng độ androstenedion máu tăng

(58)

12 ĐỊNH LƢỢNG ANPHA MICROGLOBULIN NIỆU

I NGUYÊN LÝ

Anpha microglobulin glycoprotein có trọng lượng phân tử nhỏ, khoảng 33 000 dalton Nó tổng hợp gan phân bố rộng rãi dịch thể Anpha microglobulin lọc qua cầu thận, tái hấp thu đoạn đầu ống thận Nồng độ anpha microglobulin cao nước tiểu phá hủy ống thận bệnh viêm thận, đái tháo đường có biến chứng thận sớm, sau ngộ độc kim loại nặng ngộ độc thuốc

Anpha microglobulin định lượng phương pháp miễn dịch đo độ đục Độ đục tạo nên phức hợp kháng nguyên kháng thể

II CHUẨN BỊ 1.Ngƣời thực hiện:

- cán đại học có thẩm quyền ký duyệt kết quả;

- KTV chuyên ngành hóa sinh người có trình độ phù hợp để thực phân tích đào tạo sử dụng máy phân tích hóa sinh tự động 2.Phƣơng tiện hóa chất:

2.1 Phƣơng tiện:

- Máy xét nghiệm hóa sinh tự động - Máy ly tâm

- Tủ lạnh đựng hóa chất, tủ lạnh bảo quản mẫu QC, mẫu bệnh phẩm - Pipet loại, đầu côn xanh, đầu côn vàng

- Giá đựng ống nghiệm, ống lấy mẫu, sample cup … 2.2 Hóa chất:

- Hóa chất định lượng phù hợp DIALAB, … - Các chất chuẩn, QC, dung dịch pha loãng, …

3 Ngƣời bệnh: cần giải thích cho người bệnh người nhà hiểu mục đích việc lấy máu làm xét nghiệm

4 Phiếu xét nghiệm:

- Theo quy định y tế bệnh viện

- Thực theo y lệnh bác sỹ lâm sàng phiếu định xét nghiệm - Trên phiếu xét nghiệm ghi đầy đủ thông tin người bệnh bao gồm họ

tên, tuổi, giới, số giường, khoa phịng, chẩn đốn, xét nghiệm cần làm - Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký, họ tên bác sỹ định xét nghiệm,

họ tên người lấy máu, ngày định xét nghiệm ngày lấy mẫu bệnh phẩm

(59)

Mẫu bệnh phẩm nước tiểu sạch, ly tâm loại bỏ vòng phút 3000 vòng/ phút

2.Tiến hành kỹ thuật

- Kiểm tra chất lượng: thực nội kiểm chất lượng diễn trước thực phân tích mẫu cho người bệnh tuân thủ theo quy trình nội kiểm chất lượng phòng xét nghiệm Vật liệu làm nội kiểm có mức nồng độ khác Kết nội kiểm chất lượng xem xét theo quy định quy trình nội kiểm chất lượng Chỉ nội kiểm chất lượng đạt tiến hành phân tích mẫu bệnh phẩm

- Thực kỹ thuật máy phân tích tự động theo chương trình cài đặt sẵn

- Lấy in trả kết sau người có thẩm quyền duyệt kết IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

1 Khoảng tham chiếu:

- Mỗi phòng xét nghiệm nên tự thiết lập giá trị tham chiếu riêng cho để đảm bảo tính đại diện quần thể người bệnh

- Người lớn trưởng thành: < 12mg/L

2 Tăng trong: viêm thận, giai đoạn sớm biến chứng thận người bệnh đái tháo đường, ngộc độc kim loại nặng, ngộc độc thuốc gây độc thận

(60)

ĐỊNH LƢỢNG BETA-HYDROXYBUTYRAT MÁU I NGUYÊN LÝ

Theo phương pháp enzyme đo quang

3-hydroxybutyrat dehydrogenase D-3-hyNroxybutyrat + NAD+ -> acetoacetat + H+ + NADH

Phương pháp động học enzyme sử dụng để định lượng D-3-hydroxybutyrat huyết thanh/ huyết tương D-3-hydroxybutyrat oxy hoá thành acetoacetat tác dụng xúc tác enzym 3-hydroxybutyrate dehydrogenase Sự thay đổi mật độ quang bước song 340 nm tỷ lệ với nồng độ D-3-hydroxybutyrat mẫu bệnh phẩm

Nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1.Phương tiện

- Máy hóa sinh tự động - Máy ly tâm

2.2 Hoá chất:

- Thuốc thử định lượng D-3-hydroxybutyrat (hãng Randox) Thuốc thử ổn định 30ngày khay thuốc thử

- Huyết kiểm tra mức - Huyết kiểm tra mức - Huyết chuẩn

- Nước cất

3 Ngƣời bệnh: cần giải thích cho người bệnh người nhà hiểu mục đích việc lấy máu làm xét nghiệm

- Huyết huyết tương chống đông heparin hay EDTA

- Lấy máu tĩnh mạch để tạo cục đông trước ly tâm lấy huyết - Ly tâm sau tách huyết thanh/ huyết tương

(61)

2 Tiến hành kỹ thuật:

- Chuẩn bị máy sinh hóa tự động: chuẩn xét nghiệm (nếu cần) tiến hành nội kiểm tra chất lượng (chạy QC) cho xét nghiệm beta-hydroxubtyrat

- Nhận mẫu bệnh phẩm từ khoa lâm sàng

- Xác định mã phòng xét nghiệm (lab barcode) hệ thống mạng thơng tin phịng xét nghiệm mạng bệnh viện

- Ly tâm mẫu bệnh phẩm phút với vận tốc 5000 vịng/phút - Đưa vào máy phân tích

- Vận hành máy theo quy trình vận hành máy Beckman Coulter AU 2700/AU680 - Duyệt kết

- Kiểm soát chất lượng: Hàng ngày : Chạy mức chất chứng vào đầu ngày làm việc Tất kết kiểm tra chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi chất chứng Chỉ thông báo kết xét nghiệm hai mức chất chứng nằm khoảng cho phép

Định kỳ : Chuẩn lại chạy mức chất chứng sau thay lô thuốc thử

hoặc sau bảo dưỡng, sửa chữa máy cố, thay trang thiết bị phân tích quan trọng Ghi lại kết vào bảng theo dõi chuẩn máy XN

1.Giá trị tham chiếu: Khoảng tham chiếu: Lúc đói 0.03- 0.3 mmol/L 2.Ý nghĩa lâm sàng:

Thể ceton gồm chất: D-3-hydroxybutyrat, acetoacetat, aceton Bình thường, lượng nhỏ thể ceton- sản phẩm thoái hoá acid béo- tạo thành gan Chỉ lượng nhỏ thể ceton có máu, 78% D-3-hydroxybutyrat, 20% acetoacetat 2% aceton

Định lượng D-3-hydroxybutyrat cho phép chẩn đoán phân biệt loại nhiễm toan chuyển hoá.Các bệnh / tình trạng gây tăng D-3-hydroxybutyrat máu (ketonemia) xuất ceton niệu (ketonuria):

- Đói, stress nặng thể chất

- Nhiễm toan ceton đái đường: chủ yếu đái đường typ - Nhiễm toan ceton nghiện rượu

- Rối loạn chuyển hoá bẩm sinh: bệnh acid hữu niệu, nhiễm toan acid lactic, khiếm khuyết trình tân tạo glucose, bệnh fructose niệu, MSUD, galactose niệu, tyrosinemia I

- Tăng ceton máu viêm tuỵ cấp

IV.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

(62)

ĐỊNH LƢỢNG BTP (BETA TRACE PROTEIN) I NGUYÊN LÝ

1 Tổng quan

Beta-Trace Protein (BTP), gọi prostaglandin D2 synthase, loại

protein có khối lượng phân tử thấp khoảng 24 kDa (tùy vào mức độ glycosyl hóa) phận họ protein lipocalin BTP chủ yếu tổng hợp hệ thần kinh trung ương tế bào thần kinh đệm đám rối màng mạch tạo thành thành phần thiết yếu dịch não tủy (CSF) BTP diện tất loại mơ (ngoại trừ buồng trứng) tìm thấy loại dịch sinh học thể BTP lọc qua thận nên nồng độ BTP huyết tương phụ thuộc vào mức lọc cầu thận (GFR) Ở người bệnh chạy thận nhân tạo, BTP chất điểm thay cho chức thận lại, tiên lượng người bệnh cần phải điều trị thay thận (như chạy thận nhân tạo thẩm phân phúc mạc) Nồng độ BTP dịch não tủy cao nhiều so với huyết huyết tương, BTP trở thành chất điểm lý tưởng để phát rò rỉ dịch não tủy chất tiết mũi hay tai sau chấn thương tổn thương phẫu thuật sọ não

2 Nguyên lý xét nghiệm

Định lượng theo phương pháp tủa miễn dịch đo độ đục Trong thuốc thử, hạt polystyrene phủ kháng thể kháng BTP người ngưng kết trộn với mẫu bệnh phẩm có chứa BTP Trên máy phân tích ngưng kết làm phân tán chùm ánh sáng qua cuvet có chứa mẫu phân tích Cường độ ánh sáng phân tán tỷ lệ thuận với nồng độ BTP mẫu bệnh phẩm Kết phân tích xác định dựa đường chuẩn thiết lập

2 Phƣơng tiện hóa chất a Phƣơng tiện

- Máy phân tích: BN ProSpec - Máy ly tâm

- Tủ lạnh để bảo quản hóa chất, chất hiệu chuẩn, QC mẫu bệnh phẩm - Ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm

b Hoá chất

(63)

- Các hạt polystyrene phủ kháng thể kháng BTP người sản xuất từ thỏ, dạng đông khô chất bảo quản Sodium azide < 1g/L

- Đóng gói: 3x 2.0 mL

- Bảo quản: ổn định 2–8 °C ngày hết hạn ghi hộp thuốc - N latex BTP hóa chất phụ:

- Immunogloubin thỏ dung dịch đệm chất bảo quản Sodium azide < 1g/L

- Đóng gói: 3x 0.6 mL

- Bảo quản: ổn định 2–8 °C ngày hết hạn ghi hộp thuốc Vật liệu QC, dung dịch pha loãng tiêu hao

- N Protein Standard UY: chất hiệu chuẩn

- N Protein Control LC: chất QC mức độ thực xét nghiệm với mẫu huyết thanh/huyết tương

- N Protein Control LC2: chất QC mức độ thực xét nghiệm với mẫu huyết thanh/huyết tương

- N/T Protein Control LC: chất QC thực xét nghiệm với mẫu nước tiểu, dịch não tuỷ, dịch tiết từ tai/mũi

- N Diluent: dung dịch pha loãng mẫu huyết thanh/huyết tương

- N Sample Diluent: dung dịch pha loãng mẫu nước tiểu, dịch não tuỷ, dịch tiết từ tai/mũi

- BN II Evaporation Stoppers: nắp đậy hoá chất & QC trữ máy để chống bay

- Thực xét nghiệm theo y lệnh bác sĩ lâm sàng phiếu định xét nghiệm

- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, ngày định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm

Mẫu bệnh phẩm thích hợp bao gồm mẫu huyết thanh, mẫu huyết heparin EDTA, mẫu nước tiểu, mẫu dịch não tủy, dịch tiết mũi và/hoặc tai

(64)

- Ly tâm mẫu: 10 phút 15000 x g Kiểm tra mẫu: mẫu huyết khơng chứa hạt nhỏ dấu tích fibrin Mẫu bị đục mẫu lipid, mẫu nước tiểu đục, mẫu để đơng lạnh cần làm hồn toàn sau ly tâm

- Mẫu tự động hệ thống pha loãng 1:100 Mẫu pha loãng dùng vòng

Mẫu nước tiểu/dịch não tủy/dịch tiết mũi và/hoặc tai - Ly tâm mẫu (10 phút 15000 x g)

- Pha loãng mẫu tay: pha loãng tỉ lệ 1:5 với N Sample Diluent Trường hợp lượng mẫu pha lỗng tỉ lệ 1:20 với NaCl đẳng trương N diluent Mẫu huyết thanh, huyết tương EDTA/heparin mẫu dịch não tuỷ nên thực xét nghiệm lưu trữ không ngày 2–8 °C lưu trữ không tháng -20 °C nhiệt độ thấp (trong trường hợp trữ đơng vịng 24 sau lấy mẫu tránh chu kỳ rã đông/đông mẫu nhiều lần)

Mẫu nước tiểu, dịch tiết từ mũi/tai nên thực xét nghiệm Không sử dụng mẫu nước tiểu trữ đông

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm BTP Máy chuẩn với xét nghiệm BTP Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm BTP đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng - Người thực phân tích mẫu nhập liệu thông tin người bệnh

định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có) - Thực phân tích mẫu bệnh phẩmtheo protocol máy

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1 Giá trị tham chiếu

- BTP mẫu huyết ≤ 0,70 (0,50) mg/L - BTP mẫu nước tiểu ≤ 3,75 (1, 11) mg/L - BTP dịch não tủy, dịch tiết:

BTP dịch tiết < 0,7 mg/L: khơng có khả rò rỉ dịch não tủy dịch tiết

BTP dịch tiết ≥ 1,3 mg/L: có khả rị rỉ dịch não tủy dịch tiết BTP dịch tiết 0,7-1,29 mg/L: tính tỉ lệ dịch tiết/huyết thanh: < khơng có khả rị rỉ; ≥ 2, có khả rị rỉ dịch não tủy

(65)

BTP chất điểm lý tưởng để phát rò rỉ dịch não tủy chất tiết mũi hay tai sau chấn thương tổn thương phẫu thuật sọ não

2 Tăng trƣờng hợp

Tăng mẫu dịch tiết: có khả rị rỉ dịch não tủy chất tiết tai/ mũi

Tăng mẫu huyết thanh: chức thận lại giảm

- Nồng độ BTP người bệnh lọc thận cao gấp khoảng 15 lần (so với đối tượng khoẻ mạnh).1

- Nồng độ BTP 8,2 mg/L cho thấy hoàn toàn chức thận

- Nồng độ BTP tăng 8,8 mg/L kèm với tỉ lệ tử vong cao 63% V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

(66)

ĐỊNH LƢỢNG C1- ESTERASE INHIBITOR MÁU I.NGUYÊN LÝ

Human C1-esterase inhibitor chất điều hịa quan trọng q trình hoạt hóa bổ thể, ức chế hoạt động enzyme serine proteases C1s C1r4 Trong phản ứng hóa miễn dịch, protein có mẫu bệnh phẩm (huyết tương/huyết thanh)hình thành phức hợp miễn dịch với kháng thể đặc biệt Phức hợp phản xạ ánh sáng xuyên qua mẫu, cường độ ảnh sáng phản xạ tỉ lệ với nồng độ protein cần đo mẫu Kết so sánh với chất chuẩn biết nồng độ II.CHUẨN BỊ

1.Ngƣời thực hiện:

- Người thực có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1.Phƣơng tiện

- Máy phân tích: BN ProSpec - Máy ly tâm

- Pipet chuyển mẫu, nước cất nước khử ion 2.2 Hố chất

Các hóa chất cần thiết gồm:

- Thuốc thử định lượng Human C1-Inhibitor - Chất chuẩn

- Vật liệu kiểm tra chất lượng (IQC) 3.Ngƣời bệnh:

Người bệnh người nhà cần chuẩn bị giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

(67)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm C1 Inhibitor Máy chuẩn với xét nghiệm C1 Inhibitor Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm C1 Inhibitor đạt yêu cầu: không nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Thực phân tích mẫu bệnh phẩmtheo protocol máy

Giá trị tham chiếu: Mẫu huyết thanh: 0,21 – 0,39 g/L Mẫu huyết tương Citrat: 0,18 – 0,32 g/L

Định lượng C1 inhibitor hỗ trợ việc chẩn đoán bệnh phù mạch di truyền (tăng tính thấm mạch máu dẫn tới sưng mơ) dạng phù mạch liên quan tới bệnh u lympho Thiếu hụt C1 Inhibitor xảy với bệnh hệ thống tế bào B, liên quan tới mức độ C1 Inhibitor giảm bệnh bạch cầu lympho mạn, đa u tủy

(68)

ĐỊNH LƢỢNG CALPROTECTIN TRONG PHÂN I NGUYÊN LÝ

Calprotectin hay neutrophil cytoplasmic protein A100A8/A9 protein thuộc họ S100 diện chủ yếu bào tương bạch cầu đa nhân trung tính Trong trường hợp ruột bị viêm, niêm mạc ruột bị tổn thương hạt tế bào bạch cầu đa nhân trung tính vỡ phóng thích calprotectin vào phân Định lượng calprotectin phân giúp phát đánh giá mức độ bệnh viêm ruột (inflammatory bowel disease : IBD) bao gồm viêm loét ruột (ulcerative colitis)và bệnh Crohn’s

Nguyên tắc xét nghiệm: theo nguyên tắc xét nghiệm miễn dịch hấp phụ bổ thể gắn kết men Chuẩn, QC, mẫu phân xử lý (mẫu pha loãng III) chứa calprotectin thêm vào giếng có gắn kháng thể đơn dòng lực cao kháng calprotectin người Trong giai đoạn ủ ban đầu, calprotectin gắn với kháng thể bất động Sau kháng thể thứ hai kháng calprotectin người gắn với enzym peroxidase thêm vào giếng, phức hợp bánh kẹp trả tạo thành calprotectin kháng thể Tetramethylbenzidin dùng làm chất cho enzym peroxidase Cuối cùng, dung dịch acid thêm vào để dừng phản ứng Màu sắc chuyển từ xanh da trời sang màu vàng Cường độ màu vàng tỷ lệ thuận với nồng độ calprotectin Đường chuẩn mối liên quan mật độ quang nồng độ dung dịch chuẩn thiết lập (bước sóng 450 nm) Nồng độ calprotectin mẫu thử tính dựa vào đường chuẩn

Định lượng Calprotectin dựa nguyên lý:

- ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay): xét nghiệm hấp phụ bổ thể gắn kết enzym

- Hóa phát quang trực tiếp II CHUẨN BỊ

1 Ngƣời thực hiện: nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất

- Hệ thống ELISA bán tự động - Máy miễn dịch Liaison

2.2.Hóa chất

- Kít định lượng Calprotectin phân

- Kít sử lý mẫu phân (Stool sample application System - SAS) - Pipet

- Tủ lạnh

(69)

3.Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy phân để làm xét nghiệm

- Phân loại mẫu sử dụng cho xét nghiệm

- Lấy phân vào lọ đựng phân theo quy trình lấy phân thơng thường - Độ ổn định mẫu:

- Phân chưa xử lý ổn định ngày nhiệt độ phòng (15- 30oC), ngày 2-8ºC, dài ngày -20o

C

- Mẫu chiết tách từ phân ổn định ngày nhiệt độ phòng, 2-8ºC - 20ºC, tối đa lần rã đông

2 Chiết tách mẫu phân (xử lý mẫu phân)

- Pha loãng dung dịch đệm IDK (Extract buffer concentrate IDK extract): tỷ lệ pha loãng 1: 2,5 với nước siêu tinh khiết Ví dụ: 100 mL đệm cô đặc thêm 150 mL nước tinh khiết, trộn Trước pha loãng, cần làm tan cặn muối có bể ấm 37oC Dung dịch đệm pha loãng ổn định tháng 2-8ºC đựng bình kín

- Xử lý phân với hệ số pha loãng 1:100 Các bước tiến hành sau: a Phân đồng hoá

b Cho vào ống chiết tách phân 1,5 mL dung dịch đệm pha loãng Lưu ý để dung dịch đệm nhiệt độ phòng (nếu sử dụng loại ống chứa dung dịch đệm khơng cần cho đệm vào nữa)

(70)

d Lắc kỹ ống chiết tách phân phân khơng cịn bám vào vết khía que nhúng Nếu mẫu phân rắn, lắc khoảng 10 phút để đảm bảo tạo dịch treo

e Để mẫu 10 phút cặn lắng lại Bỏ qua vật vỏ hạt f Cẩn thận mở nắp ống bao gồm phần xanh da trời que nhúng Bỏ nắp

và que nhúng Đảm bảo chất lắng không bị khuấy trộn Ta mẫu pha loãng I 1:100

g Pha loãng mẫu để làm xét nghiệm: Dịch ống tách chiết (mẫu pha loãng 1:100) pha lỗng tiếp với tỷ lệ 1: 25 SAMPLEBUF Ví dụ: 40 µl dịch + 960 µl SAMPLEBUF, trộn ta mẫu pha loãng II (1:25)

h Như vậy, tỷ lệ pha loãng cuối 1: 2500

i Để làm xét nghiệm, hút 100 µl mẫu pha loãng II cho vào giếng 3 Tiến hành kỹ thuật

Tùy phịng xét nghiệm có trang thiết bị máy Liaison hay hệ thống ELISA có bước tiến hành theo protocol Với hệ ELISA thao tác sau:

- Để thuốc thử mẫu nhiệt độ phòng, lắc

- ELISA wash buffer concentrate cần pha loãng 1:10 nước tinh khiết trước sử dụng Trước pha lỗng, cần làm tan cặn muối có nhiệt độ phòng bể ấm 37oC Dung dịch rửa pha loãng ổn định tháng 2- 8oC

- Chuẩn QC: Pha loãng 500 µl nước tinh khiết Trộn nhẹ nhàng để đảm bảo hoà tan hoàn toàn để ổn định 10 phút Chuẩn QC hoàn nguyên ổn định tuần 2-8o

C

- Đánh dấu vị trí chuẩn, QC mẫu thử giấy - Lấy số lượng microstrip cần dùng

- Thêm 100 µl chuẩn, QC, mẫu thử vào giếng tương ứng - Đậy kín giếng lại ủ 30 phút nhiệt độ phòng (15- 30oC)

- Loại bỏ tất chất chứa giếng Rửa giếng lần cách thêm 250 µl wash buffer pha loãng vào giếng Sau lần rửa cuối cùng, loại bỏ đệm cịn dính giếng gõ đĩa giấy thấm

- Thêm 100 µl conjugate vào giếng

- Đậy kín đĩa ủ 30 phút nhiệt độ phòng (15- 30oC)

- Loại bỏ tất chất chứa giếng Rửa giếng lần cách thêm 250 µl wash buffer pha lỗng vào giếng Sau lần rửa cuối cùng, loại bỏ đệm cịn dính giếng gõ đĩa giấy thấm

- Thêm 100 µl chất (SUB) vào giếng

- Ủ 10-20 phút nhiệt độ phòng (15- 30oC) bóng tối

(71)

- Đo mật độ quang ELISA reader bước sóng 450 nm, đối chiếu với bước sóng 620 nm (hoặc 690 nm) Nếu khơng có bước sóng phụ, đo 450 nm Nếu mật độ quang dung dịch chuẩn cao vượt dải máy đo quang, đo mật độ quang 405 nm đối chiếu với bước sóng 620 nm

Tính kết quả:

Có thể sử dụng phương pháp sau để tính kết quả, nhiên nhà sản xuất khuyến cáo sử dụng phương pháp “4 parameter algorithm”

- parameter algorithm: trục tung tuyến tính mật độ quang, trục hồnh logarit nồng độ Khi sử dụng trục hoành logarit, chuẩn phải có giá trị nhỏ (ví dụ 0,001)

- Point- to-point calculation: trục tung tuyến tính mật độ quang, trục hồnh tuyến tính nồng độ

- Spline algorithm: trục tung tuyến tính mật độ quang, trục hồnh tuyến tính nồng độ

Kết thu nhân với 2500 để nồng độ mẫu phân

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ Giá trị tham chiếu:

Tuổi Calprotectin (mg/kg)

0 -3 tháng 195- 621

3 - tháng 85-988

6 - 12 tháng 109- 418

1 - tuổi 53- 119

4- 17 tuổi < 50 Người lớn < 50

 Trả lời kết xét nghiệm với dải giá trị tham chiếu  Báo với bác sĩ lâm sàng kết bất thường  Chỉ định calprotectin phân:

- Viêm cấp tính

- Đánh giá mức độ viêm dạy- ruột

- Theo dõi bệnh Crohn, viêm loét đại tràng, người bệnh sau cắt polyp - Phân biệt bệnh viêm ruột cấp với hội chứng kích ứng ruột

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Xử lý mẫu khơng xác

(72)

ĐỊNH LƢỢNG CDT

(CARBOHYDRATE-DEFICIENT TRANSFERRIN ) MÁU

I NGUYÊN LÝ

Thành phần transferrin huyết glycoprotein với khối lượng phân tử khoảng 80kD chứa hai chuỗi bên polysaccharide Mỗi chuỗi bên chứa hai gốc đầu axit sialic Tuy nhiên, transferrin huyết người biểu đồng phân khác với mức độglycolization khác Tetrasialoform với hai chuỗi bên carbohydrate, chuỗi đặc trưng hai gốc đầu axitsialic, biểu trênkhoảng 90% người khỏe mạnh Phân tử transferrin với chuỗi bên carbohydrate (disialotransferrin) chí khơng có chuỗi carbohydrate (asialotransferrin) diện người sử dụng rượu Các đồng phân đồng phân khác có thay đổi cấu trúc sử dụng rượu gọi CDT (carbohydrate-deficient transferrin)

Như quy luật, việc tiêu thụ rượu hàng ngày với khoảng 50-60 g ethanol hai tuần dẫn đến tăng mức CDT Giá trị tăng CDT mong đợi trở giá trị bình thường sau ngừng sử dụng rượu khoảng hai đến bốn tuần, phụ thuộc vào độ nghiêm trọng mức CDT

Việc xác định CDT đóng góp quan trọng vào việc nhận diện người bệnh nghiện rượu mạn tính, theo dõi thay đổi tiêu thụ ngừng sử dụng rượu Nhiều nghiên cứu cho thấy CDT dấu ấn đặc hiệu cho tiêu thụ rượu cao khoảng thời gian dài

Các bệnh không rượu làm tăng CDT bao gồm viêm gan mạn hoạt động, xơ gan mật nguyên phát, suy gan hội chứng gặp CDG (carbohydratedeficient glycoprotein)

Việc tính tốn %CDT từ CDT transferrin cho phép giảm thiểu ảnh hưởng mức chuyển vị, tình trạng sắt, giới hạn từ thấp đến trung bình chức gan kết CDT Có thể nâng cao độ chẩn đoán cách kết hợp CDT γGT(γ-glutamyltransferase)

Nguyên lý xét nghiệm: Hóa phát quang miễn dịch cạnh tranh

CDT mẫu bệnh phẩm cạnh tranh với hạt polystryrene phủ CDT để liên kết với kháng thể đơn dòng đặc hiệu kháng CDT người, kháng thể liên kết với hạt polystyrene Với diện CDT mẫu, hạt polystyrene khơng có ngưng kết Ngược lại, mẫu khơng có CDT, có ngưng kết hạt polystyrene CDT cao, tín hiệu ánh sáng phát xạ thấp Kết xác định cách so sánh chuẩn biết nồng độ II CHUẨN BỊ

(73)

2.Phƣơng tiện hóa chất 2.1.Phƣơng tiện

- Vật tư tiêu hao: ống lấy máu, kim tiêm, cồn sát trùng, găng tay,… 2.2.Hố chất

Hóa chất đƣợc cung cấp hộp thuốc

Thuốc thử NCDTReagent1

o Hỗn dịch hạt polystyrene phủ carbohydratedeficient transferrin (< 0.017g/L)

o Đóng gói: x 0.9 mL

Thuốc thử NCDTReagent2

o Hỗn dịch hạt polystyrene phủ với kháng thể kháng CDT đơn dòng (chuột) (< 9mg/L)

o Đóng gói: x 0.9 mL

Thuốc thử phụ NCDTSupplementaryReagent

o Dung dịch muối đệm phosphate với

polyethyleneglycolsorbitanmonolaurate(5g/L)vàEDTA(<0.2mol/L) o Đóng gói: x mL

Chất hiệu chuẩn NCDTStandardSL

o Huyết người ổn định CDT Nồng độ CDT hiệu chuẩn với CDT tham chiếu tinh khiết

o Đóng gói: x mL

Chất kiểm chuẩn NCDTControlSL/1vàNCDTControlSL/2

o Mỗi loại bao gồm huyết người ổn định CDT Nồng độ CDT hiệu chuẩn với NCDTStandard SL tham chiếu

o Đóng gói: x mL

Chất bảo quản

o NCDTReagent1vàNCDTReagent2:Gentamicin6.25mg/L,Amphotericin0.6 25mg/L

(74)

N CDT Contro SL/2: sodium azide < g/L 2.2.1.Chuẩn bị thuốc thử

Thuốc thử, chất hiệu chuẩn, chất kiểm chuẩn sẵn sàng cho sử dụng không cần chuẩn bị Lắc trước lần sử dụng

2.2.2.Bảo quản độ ổn định

- Tránh ánh sáng, hộp chưa mở nhiệt độ đến 80C ổn định đến ngày hết hạn ghi nhãn hộp

- Độ ổn định sau mở hộp thuốc:

Hai tuần cho tất thuốc thử, chất hiệu chuẩn chất kiểm chuẩn bảo quản 2đến 8°C, đậy nắp cẩn thận sau lần sử dụng Không để đông thuốc thử

- Thời gian ổn định máy:Ít ba ngày với tám ngày lượng thời gian tương đương

Hóa chất yêu cầu nhƣng không đƣợc cung cấp hộp thuốc N SupplementaryReagentL

NDiluent

NAntiserumtoHumanTransferrin N ProteinStandardS

N/TProteinControlSL/L,M,H N Reaction Buffer

4.Phiếu xét nghiệm

(75)

lấy cho rã đơng hồn tồn vàsau ly tâm để loại trừ hạt dấu vết fibrin Mẫu máu nhiễm mỡ mẫu bị đục sau rã đông cần phải làm cách ly tâm 15,000 x g /10 phút trước thực xét nghiệm

2 Tiến hành kỹ thuật 2.1.Cách vận hành:

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm CDT Máy chuẩn với xét nghiệm CDT Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm CDTđạt yêu cầu: không nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng

-Thực phân tích mẫu bệnh phẩmtheo protocol máy

2.1 Thành lập đường cong hiệu chuẩn

Đường chuẩn thành lập nồng độ chuẩn Một chuỗi pha loãng N CDT Standard SL thực tự động máy sử dụng N Diluent Dung dịch chuẩn pha lỗng sử dụng vịng Đường cong chuẩn có hiệu lực vòng hai tuần chất kiểm chuẩn NCDTControl,SL/1and SL/2 lặp lại khoảng tin cậy tương ứng Cần thiết lập đường cong chuẩn lô thuốc thử sử dụng Khoảng đo xác phụ thuộc vào nồng độ protein lô NCDTStandardSL

2.2 Mẫu xét nghiệm

Mẫu pha loãng tự động1:5bằngNDiluent cần đo vịng Việc lựa chọn độ pha lỗng khác 1:5 không phép

2.3 Nội kiểm

Chạy NCDTControlsSL/1vàSL/2Sau lần thiết lập đường cong chuẩn, trước lần sử dụng lọ thuốc thử với lần chạy mẫu Mẫu IQC thực điều kiện giống mẫu người bệnh

Tuân theo qui định hành yêu cầu quản lý chất lượng cho tần suất chạy nội kiểm Cần thực lại giá trị IQC nằm khoảng chấp nhận Nếu kết chạy lại xác nhận sai lệch, cần tiến hành chạy lại chuẩn để thiết lập đường cong chuẩn

Sử dụng đơn vị mg / L đơn vị người sử dụng lựa chọn hệ thống

(76)

Khoảng tham chiếu:

Nghiên cứu 561 người khỏe mạnh từ Châu Âu không sử dụng rượu, kết NLatexCDTReagent khoảng 28.1 – 76.0 mg/L CDT (bách phân vị thứ đến thứ 99) Cũng với nhóm dân số này, %CDT khoảng 1.19 – 2.47% ( bách phân vị thứ đến thứ 99)

Tuy nhiên, phòng xét nghiệm nên thiết lập khoảng tham chiếu riêng giá trị khác theo nhóm dân số

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

- Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng nồng độ triglycerid ≤ 18.3 mmol/L, bilirubin ≤1026 mol/L hemoglobin tự ≤ 10 g/L yếu tố dạng thấp RF ≤3390 IU/mL

- Chưa thấy có ảnh hưởng từ loại thuốc thông thường

- Mẫu bệnh phẩm đục hạt mẫu ảnh hưởng đến kết xét nghiệm; đó, mẫu có chứa hạt cần ly tâm làm trước thực xét nghiệm Không sử dụng mẫu máu nhiễm mỡ đục mà làm cách ly tâm (10 phút 15000 g)

- Đối với mẫu có chứa kháng thể heterophil phản ứng miễn dịch cho kết cao thấp giá trị thực tế Xét nghiệm thiết kế nhằm tối thiểu ảnh hưởng từ kháng thể heterophil Tuy nhiên, loại bỏ tất cả ảnh hưởng tất mẫu người bệnh không đảm bảo - Đánh giá chẩn đoán giá trị% CDT thành lập với N Latex CDT bị

hạn chế mẫu với nồng độ transferrin thấp (<1,2 g / L transferrin)

- Những thay đổi từ người sử dụng không khuyến cáo ảnh hưởng đến hiệu máy kết xét nghiệm Người sử dụng có trách nhiệm thẩm định thay đổi so với hướng dẫn Siemens Application Sheets IFU

(77)

ĐỊNH LƢỢNG CHÌ MÁU I NGUYÊN LÝ

Dựa nguyên lý phổ hấp thụ nguyên tử Một lượng nhỏ mẫu hóa nguyên tử hóa nhiệt độ cao ống graphit Các nguyên tử chì (Pb) tự sinh ống graphit hấp thụ tia sáng đơn sắc từ đèn catod (cathode) rỗng tạo thành phổ hấp thụ nguyên tử xác định phận phát (detector) nhân quang điện

II CHUẨN BỊ

- Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AA-7000 sử dụng lò điện GFA-7000

- Máy ly tâm

- Dung dịch chuẩn Pb 1g/L – Merck

- Whole blood control for trace elements, mức: cho xét nghiệm chì máu

- ClinCheck Urine Control for trace elements, mức: cho xét nghiệm chì niệu

- Axit nitric đặc 65% Suprapure - Merck - Triton X-100 - Sigma-Alldrich T9284

- Chất chống bọt Antifoam B - Sigma A6707 - Khí Argon có độ tinh khiết cao

- Nước khử ion

- Lọ nhựa PP 100 mL, 500 mL, 1000 mL - Bình định mức 100 mL

- Ống nghiệm PP 15 mL

- Micropipet đầu tip 10 mL, 1000 mL - Ống Eppendorf 1,5 mL

3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy máu tĩnh mạch để làm xét nghiệm định lượng chì máu 4 Phiếu xét nghiệm:

(78)

- Máu tồn phần tĩnh mạch chống đơng heparin EDTA - Lượng mẫu cần 60 µl mẫu máu cho phép đo

- Lưu ý: dụng cụ chứa mẫu BP khơng phép nhiễm chì

(Khuyến cáo: Các dụng cụ rửa acid sử dụng chứa BP yêu cầu phải tuân thủ)

.2 Tiến hành kỹ thuật - Chuẩn bị hóa chất

+ Axit HNO3 6,5%: Pha chuẩn

Cho khoảng 60 mL nước khử ion vào bình định mức 100 mL, thêm 10 mL axit HNO3 đặc 65% vào, thêm nước khử ion định mức tới vạch 100mL, đậy nắp lắc kỹ

+ Dung dịch pha loãng mẫu (0,1% Triton X-100; 0,1% NH4H2PO4

nước deion)

+ Dung dịch rửa ( 0.01% HNO3 0.002% Triton X-100) + Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc

Xử lý mẫu

Chuẩn bị ống Eppendorf 1,5 mL để xử lý mẫu Bước Dung dịch Blank, chuẩn

từ 1-5

MẫuQC Mẫu bệnh phẩm

1 Pha lỗng mẫu 450 µL 450 µL 450 µL

2 Blank chuẩn từ 1-

50 µL

3 QC mức cho máu 50 µL 50 µL

4 BP

5 Trộn kỹ máy lắc va cho sang cup để chạy máy Các thông số kỹ thuật phương pháp

Các thông số quang học - Bước sóng: 283.3 nm - Độ rộng khe đo: 0.7 nm - Đèn: BGC-D2

(79)

Step No

Temp Time (sec) Heat mode Sensitivity Gas type Flow rate

1 60 RAMP #1 0.1

2 120 20 RAMP #1 0.1

3 250 10 RAMP #1 0.1

4 700 10 RAMP #1

5 700 10 STEP #1

6 700 STEP v #1 0.0

7 2000 STEP v #1 0.0

8 2500 STEP #1

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ + Báo cáo kết quả:

Đơn vị: mol/L , lấy số sau dấu phẩy Giá trị tham chiếu:

• Chì máu:

- Trẻ em: < 10 µg/dL (CDC guideline)

- Phụ nữ có thai: < 10 µg/dL (CDC guidelines)

- Người lớn: < 30 µg/dL (ACGIH guidelines -American Conference of Governmental Industrial Hygienists,2007)

(80)

ĐỊNH LƢỢNG CHÌ NIỆU I NGUYÊN LÝ

- Định lượng chì niệu phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử sử dụng lò điện

- Nguyên lý: Một lượng nhỏ mẫu hóa nguyên tử hóa nhiệt độ cao ống graphit Các nguyên tử chì (Pb) tự sinh ống graphit hấp thụ tia sáng đơn sắc từ đèn catod (cathode) rỗng tạo thành phổ hấp thụ nguyên tử xác định phận phát (detector) nhân quang điện

II CHUẨN BỊ

2.1 Máy móc

- Các loại máy quang phổ hấp thụ nguyên tử sử dụng lò điện - Máy ly tâm

2.2 Hoá chất

- Dung dịch chuẩn Pb 1g/L – Merck - QC mức: cho xét nghiệm chì niệu - Axit nitric đặc 65% Suprapure - Merck - Triton X-100 - Sigma-Alldrich T9284

3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy nước tiểu 24h, cách thức lấy nước tiểu 24h để làm xét nghiệm định lượng chì niệu

1 Lấy bệnh phẩm

- Nước tiểu 24h không cần chất bảo quản

- Lượng mẫu cần 60 µl mẫu nước tiểu cho phép đo ( định lượng cách pha lỗng mẫu)

(81)

.2 Tiến hành kỹ thuật - Chuẩn bị hóa chất

Cho khoảng 60 mL nước khử ion vào bình định mức 100 mL, thêm 10 mL axit HNO3 đặc 65% vào, thêm nước khử ion định mức tới vạch 100mL, đậy nắp lắc kỹ

+ Dung dịch pha loãng mẫu (0,1% Triton X-100; 0,1% NH4H2PO4

nước deion)

+ Dung dịch rửa ( 0.01% HNO3 0.002% Triton X-100) + Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc

Xử lý mẫu

Chuẩn bị ống Eppendorf 1,5 mL để xử lý mẫu Bước Dung dịch Blank, chuẩn từ

1-5

MẫuQC Mẫu bệnh

phẩm

1 Pha lỗng mẫu 450 µL 450 µL 450 µL

2 Blank chuẩn từ 1-

50 µL QC mức cho nước

tiểu 50 µL 50 µL

4 BP

5 Trộn kỹ máy lắc va cho sang cup để chạy máy

Mẫu sau xử lý đưa vào phân tích máy theo quy trình vận hành máy IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Giá trị tham chiếu: Chì nước tiểu: - Bình thường: < 80 µg/24 h

- Giá trị báo động: > 125 µg/24 h

(82)

ĐỊNH LƢỢNG CRP MÁU (C-reactive protein)

C-reactive protein (CRP) protein pha cấp gan sản xuất phóng thích vào máu sau vài mơ bị tổn thương, bị nhiễm trùng, nguyên nhân khác gây viêm Xét nghiệm CRP thường định trong bệnh nhiễm trùng vi khuẩn, nhồi máu tim, bệnh tự miễn…

I NGUYÊN LÝ

CRP định lượng phương pháp miễn dịch đo độ đục Kháng thể kháng CRP thuốc thử kết hợp với CRP mẫu thử tạo phức hợp miễn dịch kháng nguyên-kháng thể khiến dung dịch phản ứng có độ đục Nồng độ CRP có mẫu thử tỷ lệ thuận với độ đục phức hợp miễn dịch kháng nguyên-kháng thể tạo II CHUẨN BỊ

1.Ngƣời thực

- cán đại học, kỹ thuật viên chuyên ngành hóa sinh 2.Phƣơng tiện, hóa chất

+ Phương tiện: Máy xét nghiệm Cobas 501, AU 640…

+ Hóa chất: Hóa chất xét nghiệm CRP, chất chuẩn CRP, chất kiểm tra chất lượng CRP

Người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng hay ống có chất chống đơng Li-/Na-heparin, Na-/K3-EDTA, hay citrate Máu không vỡ hồng cầu

- Sau lấy máu, đem ly tâm tách lấy huyết huyết tương

(83)

- Bệnh phẩm rã đông lần phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phịng trước phân tích Để tránh tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân tích vịng h

2.Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm CRP Máy chuẩn với xét nghiệm CRP Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm CRP đạt u cầu khơng nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng

-Người thực phân tích mẫu nhập liệu thơng tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ + Trị số bình thường: < 0.5 mg/dl

+ CRP máu tăng trong: Thấp khớp dạng thấp, sốt thấp khớp, Nhồi máu tim, Nhiễm khuẩn, Phế viêm phế cầu…

V.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ Những yếu tố gây nhiễu cho kết xét nghiệm + Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

- Huyết vàng: Bilirubin < 60 mg/dL hay 1026 µmol/L - Tán huyết: Hemoglobin < 1000 mg/dL hay 621 µmol/L - Huyết đục: Triglyceride <1600 mg/dL (18.2 mmol/L) - Yếu tố dạng thấp < 1200 IU/mL

(84)

ĐỊNH LƢỢNG DHEAS MÁU I NGUYÊN LÝ

Dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-SO4, DHEAS) steroid tuyến thượng thận, có vai trị quan trọng nghiên cứu tình trạng mọc lơng bất thường (chứng rậm lơng) hói đầu (chứng rụng tóc) nữ giới Chất có giá trị việc đánh giá tình trạng tăng hoạt động vỏ thượng thận dậy muộn DHEA-SO4 tuần hoàn gần hoàn toàn bắt nguồn từ tuyến thượng thận, dù nam giới xuất phát từ tinh hồn, góp phần vào khác biệt giới tính bật rõ nét khoảng 15 tuổi Mặt khác, hc-mơn khơng sản xuất buồng trứng tình trạng bệnh lý Bản thân DHEA-SO4 có hoạt tính androgen yếu, chuyển hóa thành androgen mạnh androstenedione testosterone nguyên nhân gián tiếp gây rậm lơng hay nam hóa Nồng độ DHEA-SO4 huyết tương tăng đặn từ khoảng bảy tuổi sau giảm dần sau ba mươi tuổi

Nguyên lý xét nghiệm: miễn dịch enzym hóa phát quang cạnh tranh, pha rắn Chu kỳ ủ: × 30 phút

01 cán đại học có thẩm quyền ký kết 01 kỹ thuật viên chun ngành Hóa sinh người thực phân tích có trình độ phù hợp, đào tạo sử dụng máy hóa sinh tự động

2 Phƣơng tiện&hóa chất 2.1.Phương tiện

- Máy phân tích: IMMULITE®/IMMULITE 1000, … - Máy ly tâm

- Vật tư tiêu hao: ống lấy máu, kim tiêm, bơng cồn sát trùng, găng tay,… 2.2 Hố chất

Hóa chất cung cấp hộp thuốc Đơn vị xét nghiệm DHEA-SO4 (LDS1)

Mỗi đơn vị đánh dấu mã vạch chứa hạt bọc kháng thể đa dòng thỏ kháng DHEA-SO4 Ổn định 2-8°C ngày hết hạn LKDS1:100 đơn vị

Để túi Đơn vị xét nghiệm đến nhiệt độ phòng trước mở Mở cách cắt dọc theo cạnh trên, để khía khóa kéo nguyên vẹn Gắn kín miệng túi để tránh ẩm

(85)

Có mã vạch 7,5 mL photphatase kiềm (ruột bê) liên hợp với DHEA-SO4 chất protein người, có chất bảo quản Bảo quản điều kiện đóng nắp lạnh: ổn định 2–8°C ngày hết hạn Khuyến cáo sử dụng vòng 30 ngày sau mở bảo quản quy định

LKDS1: hộp hình nêm

Các chất điều chỉnh DHEA-SO4 (LDSL, LDSH)

Hai lọ (nồng độ Thấp nồng độ Cao) DHEA-SO4 đông khơ huyết người, có chất bảo quản Hồn nguyên lọ với 2,0 mLnước cất nước khử ion Để yên 30 phút Trộn cách lắc đảo đảo lại nhẹ nhàng chất đơng khơ hịa tan hồn tồn Chiết tách đông lạnh Ổn định -20°C tháng sau hoàn nguyên

LKDS1:

Các thành phần dụng cụ cung cấp riêng Chất pha loãng mẫu DHEA-SO4 (LDSZ)

Để pha loãng mẫu người bệnh theo cách thủ cơng 25 mL huyết người khơng có DHEA-SO4 xử lý, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết tách) -20°C

LSUBX: Cơ chất hóa phát quang Bảo quản độ ổn định

Thuốc thử: Bảo quản 2–8°C Thải bỏ phù hợp với pháp luật hành. 3 Ngƣời bệnh

Lấy mẫu máu vào ống khơng có chất chống đơng (nắp đỏ) Chờ q trình đơng máu diễn hồn tồn tiến hành ly tâm tách huyết

Mẫu máu đục triglycerid tăng cao khuyến nghị cần sử dụng máy siêu ly tâm để loại bỏ mẫu có tăng lipid huyết

Mẫu ngày 2–8°C ống thủy tinh polypropylene, tháng -20°C

(86)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm DHEA-SO4 Máy chuẩn với xét nghiệm DHEA-SO4 Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm DHEA-SO4 đạt yêu cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng - Người thực phân tích mẫu nhập liệu thơng tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

Lưu ý để có hiệu suất tối ưu, điều quan trọng cần phải thực tất quy trình bảo dưỡng định kỳ theo quy định Sổ tay hướng dẫn vận hành hệ thống IMMULITE IMMULITE 1000 Xem Sổ tay hướng dẫn vận hành hệ thống IMMULITE IMMULITE 1000 để biết quy trình chuẩn bị, thiết lập, pha lỗng, điều chỉnh, xét nghiệm kiểm soát chất lượng

Kiểm tra mắt Đơn vị xét nghiệm để xem có hạt hay không trước tải vào hệ thống.Khoảng điều chỉnh khuyến nghị:4 tuần

Các mẫu kiểm soát chất lƣợng: Tuân theo quy định yêu cầu cấp phép phủ tần suất kiểm soát chất lượng

Sử dụng chất kiểm chuẩn nhóm mẫu với hai mức (thấp cao) DHEA-SO4 Siemens Healthcare Diagnostics khuyến nghị sử dụng chất kiểm chuẩn có bán thị trường với mức (thấp cao) Có thể đạt mức độ hiệu suất thỏa đáng giá trị cần phân tích thu nằm Phạm vi kiểm chuẩn chấp nhận hệ thống, phạm vi thiết lập xác định theo chương trình kiểm sốt chất lượng phịng thí nghiệm nội thích hợp

n Giá trị trung vị Phạm vi

(Phạm vi trungtâm 95%)

Nữ 132 170 μg/dL 35–430 μg/dL

Nam 70 280 μg/dL 80–560 μg/dL

Các giới hạn tham khảo Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập phạm vi tham chiếu riêng

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Mẫu bị tan huyết ảnh hưởng đến kết

(87)

toàn Một số mẫutừ người bệnh điều trị thuốc chống đông máu, cần phải tăng thời gian đơng máu

- Ống thu thập máu nhà sản xuất khác cho giá trị khác nhau, tùy thuộc vào vật liệu phụ gia, bao gồm gel rào cản vật lý, chất hoạt hóa đơng máu và/hoặc thuốc chống đơng máu IMMULITE/IMMULITE 1000 DHEA-SO4 chưa xét nghiệm với tất loại ống khác xảy

- Các mẫu người bệnh tiếp xúc thường xuyên với động vật sản phẩm huyết động vật có biểu

lộ loại nhiễu có khả gây kết bất thường Những thuốc thử tạo để giảm thiểu nguy bị nhiễu; nhiên, xảy tương tác có khả xảy huyết gặp thành phần xét nghiệm Đối với mục đích chẩn đốn, kết có từ xét nghiệm cần sử dụng kết hợp với thăm khám lâm sàng, bệnh sử người bệnh phát khác

Theo y văn, giới hạn phạm vi bình thường người trưởng thành trẻ tuổi khoảng 300 μg/dL nữ giới 500 μg/dL nam giới Mang thai uống thuốc tránh thai làm giảm nồng độ mức vừa phải DHEA-SO4 tiết vào dòng máu tốc độ cao chút so với DHEA, có tốc độ chuyển hóa chậm nhiều DHEA-SO4 có thời gian bán thải gần ngày trì nồng độ huyết tương cao gần nghìn lần Khác với cortisol, DHEA-SO4 không biểu mức biến thiên ngày đáng kể Khác với testosterone, chất khơng tuần hồn dạng gắn với globulin gắn kết hc-mơn sinh dục khơng bị ảnh hưởng thay đổi nồng độ protein vận chuyển Sự dồi dào, với tính ổn định ngày từ ngày qua ngày khác khiến DHEA-SO4 báo trực tiếp tuyệt vời sản lượng androgen tuyến thượng thận ưu việt, chắn, phép đo 17-ketosteroid niệu bối cảnh

(88)

(89)

ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG NIỆU I NGUYÊN LÝ

- Định lượng đồng niệu theo phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử sử dụng lò điện

- Nguyên lý: Một lượng nhỏ mẫu hóa nguyên tử hóa nhiệt độ cao ống graphit Các nguyên tử đồng tự sinh ống graphit hấp thụ tia sáng đơn sắc từ đèn catod (cathode) rỗng tạo thành phổ hấp thụ nguyên tử xác định phận phát (detector) nhân quang điện

II CHUẨN BỊ

2.1 Phương tiện

- Máy quang phổ hấp thụ nguyên tử sử dụng lò điện - Máy ly tâm

2.2 Hoá chất

- Dung dịch chuẩn Cu 1g/L – Merck - QC mức

- Axit nitric đặc 65% Suprapure - Merck - Triton X-100 - Sigma-Alldrich T9284

3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy nước tiểu 24h, cách thức lấy nước tiểu 24h để làm xét nghiệm định lượng Cu niệu

- Nước tiểu 24h không cần chất bảo quản

- Lượng mẫu cần 600 µl mẫu nước tiểu cho phép đo ( định lượng cách pha loãng mẫu)

(90)

2 Tiến hành kỹ thuật - Chuẩn bị hóa chất

Cho khoảng 60 mL nước khử ion vào bình định mức 100 mL, thêm 10 mL axit HNO3 đặc 65% vào, thêm nước khử ion định mức tới vạch 100mL, đậy nắp lắc kỹ

+ Dung dịch pha loãng mẫu nước tiểu

( 0,5% HNO3; 2% Triton X-100; 0,1% Antifoam B nước khử ion)

Ủ lọ Triton X-100 buồng ủ 37 C trước dùng (để giảm độ nhớt lấy pipet)

+ Dung dịch rửa ( 0.01% HNO3 0.002% Triton X-100) + Chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc

Xử lý mẫu

Dung dịch Ống Blank Ống Chuẩn Ống QC Ống BP Dung dịch pha loãng

mẫu nước tiểu 300 L 300 L 300 L 300 L Nước khử ion 300 L

Dung dịch chuẩn 300 L

Dung dịch QC 300 L

Bệnh phẩm 300 L

Mẫu sau xử lý đưa vào phân tích máy theo quy trình vận hành máy IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Giá trị bình thường:

µmol/24h µg/24h

Người lớn 0.16- 0.95 10- 60

Bệnh Wilson > 1.57 > 100 (0.1 mg/24h)

Nước tiểu ngẫu nhiên 2- 80 µg/L

(91)

ĐỊNH LƢỢNG ESCSTASY (AMPHETAMIN) NIỆU I.NGUYÊN LÝ

(92)

giới hạn phê duyệt để sử dụng chứng ngủ rũ, béo phì… Tuy nhiên, chất kích thích thần kinh trung ương mang lại cảm giác tự tin, hạnh phúc, sảng khoái, nên chúng gây nghiện, bị lạm dụng rộng rãi, chất bị kiểm sốt Lạm dụng dẫn đến hậu y tế, tâm lý xã hội Tác hại cho sức khỏe bao gồm trí nhớ, hăng, hành vi loạn thần kinh, tổn thương tim, suy dinh dưỡng, vấn đề miệng nghiêm trọng Amphetamin chất chuyển hóa số loại thuốc khác bao gồm methamphetamine Thông thường khoảng 30 % tiết dạng khơng đổi nước tiểu 24 giờ, thay đổi tới số 74 % nước tiểu acid giảm đến % nước tiểu kiềm

Xét nghiệm dựa tương tác động học vi hạt dung dịch đo thay đổi dẫn truyền ánh sáng Trong trường hợp khơng có thuốc mẫu, thuốc liên hợp hòa tan gắn với vi hạt liên kết với kháng thể, tạo thành vi hạt kết tập Khi phản ứng kết tập thực trường hợp khơng có thuốc mẫu, độ hấp thu tăng lên

Khi mẫu nước tiểu chứa thuốc nghi ngờ, thuốc cạnh tranh với dẫn xuất thuốc liên hợp với vi hạt liên kết với kháng thể Kháng thể gắn với thuốc mẫu thử khơng cịn khả thúc đẩy hình thành hạt ngưng kết, sau ức chế hình thành lưới hạt Sự có mặt thuốc mẫu thử làm giảm gia tăng độ hấp thu tỷ lệ với nồng độ thuốc mẫu thử Hàm lượng thuốc mẫu thử xác định tương ứng với giá trị thu cho ngưỡng nồng độ biết trước thuốc

II.CHUẨN BỊ 1.Ngƣời thực hiện:

Người thực kỹ thuật cần có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

Phƣơng tiện

- Máy phân tích: COBAS C, AU… - Máy ly tâm

- Pipet chuyển mẫu, nước cất nước khử ion Hố chất

Các hóa chất cần thiết gồm:

- Thuốc thử định lượng Amphetamin: Khi chưa mở nắp thuôc thử ổn định 2- °C hết hạn sử dụng ghi hộp Thuốc thử mở nắp để lạnh máy ổn định 8tuần

- Chất chuẩn

(93)

Người bệnh người nhà người bệnh cần chuẩn bị giải thích mục đích việc lấy nước tiểu để làm xét nghiệm

Nước tiểu: Lấy mẫu nước tiểu dụng cụ chứa thủy tinh plastic Mẫu nước tiểu không yêu cầu xử lý hay tiền xử lý đặc biệt nào, phải hút mẫu cẩn thận để tránh cặn pH mẫu phải nằm khoảng từ 5-8 Không cần sử dụng chất bảo quản

Có thể bảo quản mẫu nước tiểu 2-8 °C vòng ngày sau lấy mẫu Ly tâm mẫu có độ đục cao trước xét nghiệm

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm Amphetamin Máy chuẩn với xét nghiệm Amphetamin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Amphetamin đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Thực phân tích mẫu bệnh phẩm theo protocol máy

Với xét nghiệm định tính, ngưỡng mẫu chuẩn sử dụng để tham chiếu phân biệt mẫu dương tính sơ mẫu âm tính Mẫu cho giá trị độ hấp thu dương hay “0” xem dương tính sơ Mẫu dương tính sơ báo cờ hiệu >Test Mẫu cho giá trị độ hấp thu âm xem âm tính Mẫu âm tính ghi dấu trừ phía trước Kết xét nghiệm phân biệt mẫu dương tính sơ (≥ 300 ng/mL, ≥ 500 ng/mL ≥ 1000 ng/mL phụ thuộc vào ngưỡng mẫu chuẩn) so với mẫu âm tính Khơng thể ước lượng lượng thuốc phát mẫu dương tính sơ

(94)

Nó cho phép phịng xét nghiệm thiết lập quy trình kiểm tra chất lượng đánh giá hiệu kiểm chứng Đối với xét nghiệm bán định lượng, máy phân tích vẽ đường cong chuẩn từ kết đo độ hấp thu mẫu chuẩn hàm điều chỉnh thông số logit-log (RCM) Hàm logit-log vẽ đường thẳng qua điểm liệu Máy phân tích sử dụng giá trị độ hấp thu mẫu thử để tính nồng độ thuốc chất chuyển hóa thuốc cách nội suy từ hàm điều chỉnh logit-log Kết xét nghiệm cho nồng độ tích lũy gần thuốc chất chuyển hóa

Xem lại liệu Reaction Monitor mẫu thử so sánh với liệu Reaction Monitor mẫu chuẩn cao Nguyên nhân thường gặp nồng độ chất phân tích mẫu thử cao, trường hợp giá trị độ hấp thu mẫu thử nhỏ giá trị mẫu chuẩn cao Pha lỗng mẫu thích hợp sử dụng mẫu chuẩn ng/mL chạy mẫu lại Có thể thay mẫu chuẩn ng/mL nước tiểu bình thường khơng chứa thuốc nước tiểu quy trình thẩm định phịng xét nghiệm

Để đảm bảo mẫu thử khơng bị pha lỗng mức, kết pha loãng, trước nhân với hệ số pha lỗng, phải 1/2 giá trị ngưỡng chất phân tích Nếu kết nằm 1/2 giá trị ngưỡng chất phân tích, xét nghiệm lại mẫu thử với độ pha loãng nhỏ Độ pha loãng cho kết gần với ngưỡng chất phân tích giá trị ước lượng xác

Để ước lượng nồng độ mẫu dương tính sơ bộ, nhân kết với hệ số pha lỗng thích hợp Chỉ nên pha lỗng để biện luận kết báo hiệu Calc.? Samp.?, cần ước lượng nồng độ mẫu đo phương pháp GC/MS

Hãy thận trọng báo cáo kết có yếu tố khác ảnh hưởng đến kết xét nghiệm nước tiểu Như với xét nghiệm nhạy lạm dụng thuốc máy phân tích hóa sinh lâm sàng tự động, có khả chất phân tích từ mẫu thử có nồng độ cao nhiễm vào mẫu bình thường (âm tính) xét nghiệm sau Khẳng định tất kết dương tính sơ phương pháp khác

(95)

ĐỊNH LƢỢNG ELF ( ENHANCED LIVER FIBROSIS) MÁU I NGUYÊN LÝ

Enhanced Liver Fibrosis (ELF) test xét nghiệm số định lượng chẩn đoán in vitro dùng để cung cấp điểm ELF cách kết hợp thuật toán với phép đo định lượng axit hialuronic (HA), amino-terminal propeptide procollagen loại III (PIIINP) yếu tố ức chế mô metalloproteinase (TIMP-1) huyết người cách sử dụng Atellica™ IM/Centaur Analyzer.Xét nghiệm ELF Test, với phát phòng xét nghiệm đánh giá lâm sàng khác, coi công cụ hỗ trợ chẩn đoán đánh giá mức độ nghiêm trọng bệnh xơ gan người bệnh có dấu hiệu triệu chứng mắc bệnh gan mạn tính

ELF Test định lượng chất phân tích dấu hiệu trực tiếp bệnh xơ gan PIIINP dấu hiệu tình trạng xơ hóa viêm nhiễm sớm, TIMP-1 chất ức chế tuần hồn enzyme MMP cải thiện tình trạng xơ hóa HA glycosaminoglycan tế bào gan hình sản sinh Các xét nghiệm đánh giá thay đổi định lượng định tính chất ngoại bào (ECM) ECM nhóm đại phân tử hình thành nên khn ngoại bào gan Một số dấu hiệu ECM phản ánh tình trạng xơ hóa dấu hiệu khác phản ánh thoái trào bệnh xơ hóa, cho phép đánh giá động hoạt tính ECM

Điểm ELF, suy từ thuật toán kết hợp kết riêng lẻ HA, PIIINP TIMP-1, dùng để đánh giá tình trạng xơ gan người bệnh chẩn đốn mắc bệnh gan mạn tính Điểm ELF dùng làm sở để xác định bệnh xơ gan; để theo dõi thay đổi tình trạng xơ hóa theo thời gian (bệnh sử tự nhiên); trước, sau trị liệu thay đổi lối sống; hỗ trợ xác định tiên lượng

2 Phƣơng tiện hóa chất 2.1.Phƣơng tiện

- Máy phân tích: Atellica IM; Centaur; … - Máy ly tâm

(96)

Điểm ELF Test xác định dựa kết xét nghiệm HA, PIIINP TIMP‑1 cách sử dụng thuật toán nên cần làm xétnghiệm thành phần trước tiến hành xét nghiệm ELF

Hóa chất cần thiết nhƣng không đƣợc cung cấp - Atellica IM/Centaur HA

- Atellica IM/Centaur PIIINP - Atellica IM/ Centaur TIMP-1

Hóa chất cụ thể xét nghiệm thành phần tham khảo thêm hướng dẫn sử dụng xét nghiệm thành phần

Huyết loại mẫu khuyến nghị cho xét nghiệm

Lấy mẫu bệnh phẩm theo quy trình quy định Để mẫu máu đơng hồn tồn trước ly tâm

Chuẩn bị mẫu:

Xét nghiệm cần có 65 μL mẫu để thực lần xét nghiệm cách sử dụng toàn ba xét nghiệm thành phần Thể tích khơng bao gồm thể tích không sử dụng chứa hộp đựng mẫu thể tích bổ sung theo quy định thực lặp lại thực xét nghiệm khác mẫu

Lƣu ý Không sử dụng mẫu bị nhiễm bẩn rõ ràng

Trước đặt mẫu lên hệ thống, đảm bảo mẫu không có: • Bong bóng bọt

• Tơ huyết hạt vật chất khác 2 Tiến hành kỹ thuật

(97)

- Đảm bảo nạp bật xét nghiệm thành phần trước lên lịch Xét nghiệm ELF

- Điểm Atellica IM ELF Test xác định dựa kết xét nghiệm HA, PIIINP TIMP-1 cách sử dụng thuật tốn

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1 Giá trị tham chiếu

Hệ thống tính điểm ELF cách sử dụng kết xét nghiệm thành phần Hệ thống báo cáo điểm ELF dạng giá trị số không đơn vị

Điểm ELF Mức độ nghiêm trọng bệnh xơ gan < khơng có bệnh bệnh nhẹ

≥ 7,7– < 9,8 Trung bình

≥ 9,8 Nghiêm trọng

- Tất xét nghiệm thành phần dùng để xác định điểm ELF (HA, PIIINP TIMP-1) phải cho kết vòng để điểm ELF hợp lệ - Các mẫu bị huyết tán cho thấy nồng độ PIIINP giảm rõ rệt mẫu sử

dụng xét nghiệm PIIINP

(98)

ĐỊNH LƢỢNG EPO (ERYTHROPOIETIN) MÁU I.NGUYÊN LÝ

Erythropoietin (EPO) glycoprotein có trọng lượng phân tử khoảng 30 400 Dalton, sản xuất chủ yếu thận, yếu tố điều hịa q trình sản xuất tế bào hồng cầu động vật có vú Việc sản xuất EPO thận điều hòa thay đổi lượng oxy máu Trong tình trạng thiếu hụt oxy mơ, nồng độ EPO tuần hồn tăng, dẫn đến việc tăng sản xuất tế bào hồng cầu

EPO đinh lượng theo nguyên lý miễn dịch sandwich sử dụng cơng nghệ hóa phát quang (CLIA-Chemiluminescence Immunoassay)

Mẫu bệnh phẩm có EPO thêm vào thuốc thử có hạt từ gắn kháng thể chuột đơn dịng kháng EPO Sau ủ bình phản ứng, EPO liên kết với pha rắn hạt từ thuốc thử Sau đó, thuốc thử khơng liên kết rửa Tiếp theo, hợp chất hóa phát quang Lumi-Phos* 530 bổ sung vào ánh sáng tạo phản ứng đo quang tử Cường độ ánh sáng tỷ lệ thuận với nồng độ EPO mẫu thử

II.CHUẨN BỊ 1 Ngƣời thực

- Máy móc: máy miễn dịch Unicel® DxI 800 số máy miễn dịch khác - Máy ly tâm

- Tủ lạnh

- Hóa chất: Hóa chất định lượng EPO, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng EPO

Cần giải thích cho người, người nhà người bệnh bệnh hiểu mục đích việc lấy máu làm xét nghiệm

(99)

Do nồng độ erythropoietin dao động ngày Do đó, khuyến cáo cần lấy mẫu bệnh phẩm thời điểm thích hợp ngày Thời điểm lấy mẫu nên khoảng 7h30 – 12h

Mẫu bệnh phẩm cần ln ln đậy nắp

Có thể sử dụng huyết huyết tương chống đông heparin để định lượng EPO Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng có chất chống đơng heparin Sau ly tâm 4000 vịng/5 phút để tách lấy huyết huyết tương

Bệnh phẩm ổn định ống có nút đậy chặt nhiệt độ phịng (15-30°C) khơng q

Nếu xét nghiệm khơng thực vịng giờ, mẫu cần bảo quản nhiệt độ từ 2-8°C Mẫu ổn định 48

Nếu xét nghiệm không thực vòng 48 giờ, mẫu cần bảo quản nhiệt độ -20°C lạnh Không rã đông lần

Không lưu trữ mẫu ống thủy tinh 2.Tiến hành kỹ thuật:

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm EPO Máy chuẩn với xét nghiệm EPO Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm EPO đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

+ Giá trị tham chiếu: 2,59-18,5 mIU/mL

Nồng độ EPO tăng trong: thiếu máu tán huyết, đa hồng cầu thứ phát, hội chứng loạn sinh tủy, có thai…

Nồng độ EPO tăng tình trạng thiếu hụt lượng oxy mô người sống vùng cao, bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính, bệnh tim bẩm sinh (dẫn đến lượng oxy máu thấp), hội chứng ngừng thở ngủ, hội chứng rối loạn hemoglobin lực cao với oxygen, hút thuốc tình trạng thiếu hụt oxy cục thận

(100)

lành tính (leiomyomas)

- Nồng độ EPO giảm trong: bệnh thận giai đoạn cuối, đa hồng cầu nguyên phát, hội chứng AIDS, thiếu máu bệnh mạn tính…

V.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ

Xét nghiệm khơng bị ảnh hưởng số chất nồng độ sau:

(101)

ĐỊNH LƢỢNG EVEROLIMUS MÁU I.NGUYÊN LÝ

Everolimus dẫn xuất sirolimus tổng hợp khử nhóm 2-hydroxyethyl nguyên tử carbon vị trí 40 sirolimus Thuốc có nhiều ứng dụng lâm sàng, điển hình ghép tạng, ung thư tim mạch Đã có chứng minh việc thay sớm chất ức chế calcineurin cyclosporin với phác đồ sử dụng everolimus cải thiện kết lâu dài người bệnh ghép thận

Khoảng 75% everolimus tuần hoàn gắn với tế bào hồng cầu gần 75% phần lại gắn với protein huyết tương Thời gian bán thải người bệnh ghép thận 18-35 giờ, người bệnh ghép gan thời gian bán thải kéo dài chút vào khoảng 35- 40

Nồng độ everolimus máu người bệnh ghép tạng đặc có mối liên quan với hiệu điều trị tần xuất tác dụng phụ Do khoảng trị liệu thuốc hẹp, tương tác dược động học thuốc đáng kể khác nhiều người bệnh, nên việc theo dõi nồng độ trị liệu everolimus máu toàn phần khuyến cáo tất người bệnh ghép tạng đặc, giúp cải thiện hiệu điều trị

Everolimus định lượng phương pháp miễn dịch cạnh tranh sử dụng công nghệ điện hóa phát quang Trước thực định lượng tự động máy, cần tiến hành bước tiền xử lý mẫu tay,

II.CHUẨN BỊ

- Máy móc: Cobas e601, e602, e170 số máy miễn dịch khác… - Máy ly tâm

- Tủ lạnh

- Hóa chất: Hóa chất định lượng Everolimus, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng Everolimus

(102)

Xét nghiệm sử dụng máu toàn phần Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống có chất chống đơng K2 K3-EDTA

Mẫu máu tồn phần bảo quản đến ngày 15- 25°C ngày 2- 8°C Nếu xét nghiệm muộn ngày sau, cần bảo quản mẫu đông lạnh - 20°C thấp đến tháng

Chỉ đông lạnh lần Mẫu thử phải trộn sau rã đông để đảm bảo quán kết

Trộn mẫu rã đông kỹ tay máy trộn lăn hay máy lắc Kiểm tra mẫu mắt Nếu quan sát thấy bị tách lớp phân tầng, tiếp tục trộn mẫu đồng rõ ràng

Đảm bảo nhiệt độ mẫu bệnh phẩm, mẫu chuẩn mẫu chứng 20-25°C trước tiền xử lý

Mẫu có nồng độ everolimus khoảng đo (>30ng/mL) pha lỗng thủ cơng theo tỷ lệ 1:2 với Diluent Universal Diluent Universal trước tiến hành tiền xử lý mẫu thủ công Nồng độ mẫu sau pha loãng phải > 12 ng/mL

Sau pha lỗng thủ cơng, nhân kết với hệ số pha loãng 2.Tiến hành kỹ thuật:

Xét nghiệm Everolimus yêu cầu có bước tiền xử lý mẫu tay cụ thể sau:

Bước Ghi kỹ thuật

1 Cân tất thuốc thử, mẫu chuẩn, mẫu chứng mẫu thử 20- 25°C Trộn tất mẫu chuẩn, mẫu chứng mẫu thử cách nhẹ nhàng kỹ trước sử dụng

Khơng trộn xốy Các chất lỏng trộn thủ công máy trộn trục lăn máy lắc

Các mẫu chuẩn mẫu chứng mẫu ly huyết máu tồn phần khác biệt vẻ so với mẫu máu toàn phần Dán nhãn ống vi ly tâm cho

mỗi mẫu chuẩn, mẫu chứng và/hoặc mẫu thử tiền xử lý

Không

3 Sử dụng pipette xác, chuyển 300 μL mẫu chuẩn, mẫu chứng và/hoặc mẫu thử vào ống vi ly tâm dán nhãn thích hợp

(103)

4 Sử dụng pipette xác, thêm 300 μL thuốc thử ISD Sample Pretreatment vào ống vi ly tâm Lập tức đậy nắp ống thực bước

Lưu ý: ISD Sample Pretreatment dễ bay Đóng chặt nắp khơng sử dụng để tránh bay Trộn xoáy ống vi ly tâm

trong 10 giây Khơng thực bước dẫn đến dung dịch phía xuất màu đỏ Xem bước 6, ghi kỹ thuật

Lưu ý: Khơng trộn xốy ống sau thêm thuốc thử ISD Sample Pretreatment dẫn đến kết xét nghiệm sai

Hỗn hợp mẫu thuốc thử phải hoàn toàn đồng sau trộn xoáy Cần kiểm tra mắt thường

6 Ly tâm mẫu phút máy vi ly tâm

(≥ 10000 g)

Các mẫu ly tâm phải có hạt hình dạng rõ ràng dung dịch phía suốt Dung dịch phía khơng mờ đục đỏ Nếu dung dịch phía có màu đỏ, loại bỏ thay mẫu tách chiết

7 Chuyển phần dung dịch phía trực tiếp vào lọ thích hợp đóng nắp lọ

Các mẫu sẵn sàng để xét nghiệm

Mẫu tiền xử lý bảo quản ống đậy kín đến nhiệt độ phòng

Do hiệu ứng bay hơi, mẫu tiền xử lý phải phân tích vòng 30 phút sau mở lọ nạp mẫu lên hệ thống Tránh trì hỗn thời gian việc nạp mẫu đo mẫu để đảm bảo độ ổn định 30 phút mẫu tiền xử lý

Điều đảm bảo cách

chạy mẫu everolimus theo đợt: Dựa thời gian xử lý mẫu trung bình hệ thống, nạp khơng 35 mẫu everolimus đồng thời lên máy phân tích cho buồng đo chuẩn

- Để phân tích mẫu tiền xử lý trước máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm Everolimus Máy chuẩn với xét nghiệm Everolimus Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Everolimus đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

(104)

Khơng có khoảng nồng độ trị liệu định everolimus máu tồn phần Tính phức tạp tình trạng lâm sàng, khác biệt cá thể nhạy cảm tác dụng ức chế miễn dịch tính độc với thận everolimus, sử dụng đồng thời chất ức chế miễn dịch khác, dạng cấy ghép, thời gian sau cấy ghép, nhiều yếu tố khác góp phần tạo nồng độ tối ưu khác everolimus máu Các giá trị everolimus riêng lẻ sử dụng làm thị để tiến hành thay đổi chế độ điều trị Mỗi người bệnh cần đánh giá lâm sàng cách kỹ lưỡng trước tiến hành điều chỉnh chế độ trị liệu, người sử dụng xét nghiệm phải thiết lập khoảng giá trị người bệnh dựa kinh nghiệm lâm sàng

Các khoảng thay đổi theo xét nghiệm chẩn đoán in vitro sử dụng phải thiết lập cho xét nghiệm

Xét nghiệm khơng bị nhiễu diện chất có nồng độ sau mẫu:

Hợp chất Nồng độ thử nghiệm

Albumin ≤ 70 g/L

Bilirubin ≤ 1129 μmol/L

Biotin ≤ 287 nmol/L

≤ 70.0 ng/mL

Cholesterol ≤ 12.95 mmol/L

HARA (kháng thể người kháng thỏ) ≤ 10.0 μg/mL

Hematocrit 15-60 %

Triglycerid ≤ 22.6 mmol/L

Các yếu tố thấp khớp tối đa đến 1200 IU/mL

(105)

ĐỊNH LƢỢNG GADA MÁU

(Glutamic acid decarboxylase autoantibodies)

I NGUYÊN LÝ

GADA- Glutamic acid decarboxylase autoantibodies-kháng thể kháng GAD GADA định lượng kỹ thuật ELISA

Huyết người bệnh ủ với GAD gắn vi giếng Nếu mẫu có GADA, kháng thể đặc hiệu gắn GAD Kháng thể gắn với GAD đánh dấu biotin thêm vào bước ủ thứ hai Để phát phức hợp gắn biotin, enzyme POD gắn avidin thêm vào, enzyme có khả tạo phản ứng có sản phẩm màu Đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ GADA mẫu thử

Nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1 Phương tiện

Hệ thống ELISA (máy ủ, máy rửa máy đọc) Máy ly tâm

2.2 Hoá chất

Kit định lượng GADA Vật liệu kiểm tra chất lượng Nước cất

-Phiếu xét nghiệm theo quy định Bộ Y tế bệnh viện

-Trên phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin người bệnh: họ tên, tuổi, giới tính, số giường, khoa phịng, chẩn đốn, xét nghiệm cần làm

-Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, thời gian định xét nghiệm thời gian lấy mẫu bệnh phẩm

III CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1.Lấy bệnh phẩm:

- Huyết

(106)

- Ly tâm ống máu 15 phút với vận tốc 1500xg / phút - Tách huyết thanh/ huyết tương

- Tiến hành bước kỹ thuật theo quy trình nhà sản xuất

- Tính kết sau hồn tất q trình phân tích dựa vào dung dịch chuẩn

Chạy mức QC thực xét nghiệm Tất kết kiểm tra

chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi QC Chỉ thông báo kết xét nghiệm QC nằm khoảng cho phép

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ 1 Giá trị tham chiếu:

Giá trị tham chiếu: Người khoẻ mạnh GADA âm tính 2 Ý nghĩa lâm sàng:

Bệnh đái tháo đường typ1 bệnh tự miễn gây phá huỷ tế bào đảo tuỵ qua chế hoạt hoá tế bào T tạo tự kháng thể Bệnh gặp chủ yếu người trẻ chiếm khoảng 10% người bệnh đái tháo đường Việc xác định kháng thể tự miễn chống lại kháng nguyên tế bào tiểu đảo sử dụng để khẳng định chẩn đoán ĐTĐ typ xác định phản ứng tự miễn giai đoạn tiền lâm sang người có nguy Phần lớn trường hợp, nhiều kháng thể tự miễn phát biểu lâm sang

(107)

ĐỊNH LƢỢNG GH (Growth Hormone) MÁU Theo kỹ thuật hóa phát quang/điện hóa phát quang I.NGUYÊN LÝ

Hormon tăng trưởng người (hGH- Human Growth Hormone) tồn hai dạng phân tử khác có phân tử lượng 20 kDa 22 kDa Trên 90 % hGH tuần hoàn đồng phân 22 kDa, bao gồm 191 acid amin Đồng phân 20 kDa tiết đồng thời với hGH 22 kDa, thiếu acid amin từ vị trí 32- 46 chiếm khoảng 10 % lượng hGH toàn phần

Sự tăng trưởng kích thích kiểm sốt hoạt động đồng hóa gây phân bào hormon tăng trưởng yếu tố tăng trưởng giống insulin (IGFs) hGH thường có tác động đồng hóa (tăng hấp thu glucose, tổng hợp protein, phân giải lipid) chức kích thích kéo dài xương người chưa trưởng thành

GH định lượng phương pháp miễn dịch sandwich sử dụng cơng nghệ điên hóa phát quang hóa phát quang

II.CHUẨN BỊ

- Người thực kỹ thuật cần có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

- Máy móc: COBAS e601, e602, e170, unicel DxI,… - Máy ly tâm

- Tủ lạnh

- Hóa chất: Hóa chất định lượng GH, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng GH

(108)

Có thể sử dụng huyết huyết tương chống đông Li heparin, K2- K3- EDTA để định lượng GH Với phương pháp hóa phát quang sử dụng huyết huyết tương heparin

Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng có chất chống đơng Li heparin, K2- K3- EDTA Sau ly tâm 4000 vòng/5 phút để tách lấy huyết huyết tương

Bệnh phẩm ổn định 15- 25 °C,1 ngày - °C, 28 ngày -20 °C Chỉ đông lạnh lần

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy cài đặt chương trình xét nghiệm GH Máy chuẩn với xét nghiệm GH Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm GH đạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

Để chẩn đốn, ngồi đo mức GH cần làm nghiệm pháp kích thích hay ức chế

+ Giá trị tham chiếu (phương pháp điện hóa phát quang máy COBAS e) Giá trị thay đổi theo giới độ tuổi

+ Lứa tuổi – 10 tuổi

- Nam: 0,094 – 6,29 ng/mL - Nữ: 0,12 – 7,79 ng/mL + Lứa tuổi 11 – 17 tuổi

- Nam: 0,077 – 10,8 ng/mL - Nữ: 0,123 – 8,05 ng/mL + Lứa tuổi 21 – 77 tuổi

- Nữ: 0,126 – 9,88 ng/mL + Lứa tuổi 20 – 79 tuổi

- Nam: <0,03 – 2,47 ng/mL

+ Giá trị tham chiếu (phương pháp hóa phát quang máy DxI)

Giá trị áp dụng cho người trưởng thành thay đổi theo giới Nữ: 0,010 - 3,607 ng/mL

Nam: 0,003 - 0,971 ng/mL

Thừa hormon tăng trưởng: Bệnh khổng lồ bệnh to cực

(109)

béo bụng tăng yếu tố nguy cho tim mạch (bất thường lipid, xơ vữa động mạch)

- Mẫu bệnh phẩm máu không tách huyết hay huyết tương khỏi cục đông Khắc phục: tách huyết hay huyết tương khỏi cục đông sau bệnh phẩm gửi đến phòng xét nghiệm

+ Những yếu tố gây nhiễu cho kết xét nghiệm

Các mẫu có nồng độ chất tối đa sau không ảnh hưởng đến kết qủa xét nghiệm: Bilirubin < 428 μmol/L ( < 25 mg/dL), tán huyết Hb < 0.310 mmol/L (< 0.500 g/dL), triglycerid < 16.95 mmol/L ( <1500 mg/dL) biotin < 123 nmol/L (< 30 ng/mL)

Xét nghiệm bị ảnh hưởng pegvisomant (chất đối kháng thụ thể GH chọn lọc) nên khơng thích hợp xét nghiệm cho người bệnh điều trị với pegvisomant

Hiệu ứng mẫu phẩm có nồng độ cao không ảnh hưởng đến kết xét nghiệm với nồng độ hGH lên đến 2000 ng/mL

Xét nghiệm khơng thích hợp dùng định lượng hGH cho thai phụ phản ứng chéo với hGH thai hGH thai biến thể hGH tuyến yên nồng độ máu tăng trình mang thai

Trường hợp sử dụng phương pháp điện hóa phát quang, yếu tố sau ảnh hưởng đến kết xét nghiệm:

- Ở người bệnh dùng liều cao biotin (> mg/ngày), khơng nên lấy mẫu sau dùng liều biotin cuối Kết xét nghiệm không bị nhiễu yếu tố thấp với nồng độ lên đến 600 IU/mL

(110)

ĐỊNH LƢỢNG HEMOPEXIN I NGUYÊN LÝ

Hemopexin đóng vai trị tương tự haptoglobin việc gắn kết với thành phần heme hemoglobin, thành phần phóng thích q trình phân hủy hồng cầu Trong trường hợp tán huyết nghiêm trọng, sau phá hủy haptoglobin, trình dẫn đến giảm mức hemopexin huyết huyết tương Tương phản với haptoglobin, hemopexin khơng phải protein giai đoạn cấp tính

Nguyên lý xét nghiệm: miễn dịch tán xạ

Hemopexin mẫu bệnh phẩm (kháng nguyên) tạo thành phức hợp miễn dịch với kháng thể đặc hiệu có thuốc thử Các phức phân tán chùm ánh sáng chiếu xuyên qua mẫu Cường độ ánh sáng phân tán tỉ lệ thuận với nồng độ Hemopexin mẫu cần phân tích Kết đánh giá dựa đường chuẩn với nồng độ biết

II CHUẨN BỊ 1.Ngƣời thực

Phƣơng tiện hóa chất 2.1.Phƣơng tiện

- Vật tư tiêu hao: ống lấy máu, kim tiêm, cồn sát trùng, găng tay,… 2.2.Hố chất

Hóa chất đƣợc cung cấp hộp thuốc

Thuốc thử huyết động vật sản xuất tạo miễn dịch thỏ với hemopexin người có độ tinh khiết cao Nồng độ kháng thể hoạt động <3.5 g/L Chất bảo quản: Sodium Azide <1 g/L Đóng gói: x mL

Bảo quản độ ổn định

- Ổn định 2-8°C: đến ngày hết hạn nhãn hộp thuốc

- Độ ổn định sau mở hộp thuốc: tuần lưu trữ 2-8°C, đậy nắp kín sau lần sử dụng để tránh bị nhiễm vi sinh vật

(111)

- Độ ổn định máy: Ít ngày với tiếng/ ngày, khoảng thời gian tương ứng

- Ghi chú: Độ ổn định máy thay đổi, tùy thuộc vào máy BN sử dụng điều kiện phịng xét nghiệm Để biết thêm thơng tin chi tiết, tham khảo thêm hướng dẫn sử dụng BN II and BN ProSpec®

Hóa chất u cầu nhƣng không đƣợc cung cấp hộp thuốc - N Protein Standard SL (người)

- N/T Protein Controls SL/L, M H (người), - N Reaction Buffer,

- N Diluent 3 Ngƣời bệnh

4.Phiếu xét nghiệm

- Trên phiếu xét nghiệm cần có: chữ ký họ tên bác sĩ định xét nghiệm, họ tên người lấy mẫu, ngày định xét nghiệm ngày lấy mẫu bệnh phẩm

- Huyết huyết tương (Lithium heparin)

- Mẫu huyết thanh, huyết tương tốt Nếu khơng phân tích lưu nhiệt độ đến 80

C không ngày; Tại nhiệt độ −20°C đến tháng

- Mẫu trữ đơng vịng 24 sau lấy mẫu cần tránh lưu trữ đông lần Mẫu bị đục sau rã đông cần phải làm cách ly tâm (10 phút tốc độ 15000 g) trước thực xét nghiệm

2 Tiến hành kỹ thuật

2.1 Thành lập đƣờng cong hiệu chuẩn

(112)

2.2 Mẫu xét nghiệm

Mẫu pha loãng tự động 1:20 với N Diluent Mẫu pha lỗng cần đo vịng bốn Nếu kết thu nằm khoảng đo, cần chạy lại mẫu với độ pha loãng cao thấp

2.3 Nội kiểm (IQC)

Chạy N/T Protein Controls SL/L, M H sau thiết lập đường cong hiệu chuẩn, trước lần sử dụng lọ thuốc thử với lần chạy mẫu Mẫu kiểm chuẩn thực đánh giá giống mẫu người bệnh

Cần tuân theo qui định hành yêu cầu quản lý chất lượng cho tần suất chạy nội kiểm Thực lại kết kiểm chuẩn nằm khoảng tin cậy kết chạy lại xác nhận sai lệch, cần thiết lập đường chuẩn

2.4 Cách vận hành:

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫuHemopexin Máy chuẩn với xét nghiệm Hemopexin Kết IQC Hemopexinđạt u cầu: khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Thực phân tích mẫu bệnh phẩmtheo protocol máy

- Giá trị tham chiếu: Hemopexin: 0.5 - 1.15 g/L - Hemopexin giảm trng trường hợp tán huyết

- Tuy nhiên, phòng xét nghiệm nên thiết lập khoảng tham chiếu riêng giá trị khác theo quần thể dân cư

V CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

- Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng nồng độ triglycerides ≤ 2,71mmol/L(2,4 g/L), bilirubin ≤ 1026 mol/L hemoglobin tự ≤10 g/L

- Không ghi nhận nhiễu từ loại thuốc thông thường

- Mẫu bệnh phẩm đục hạt mẫu ảnh hưởng đến kết xét nghiệm; đó, mẫu có chứa hạt cần ly tâm làm trước thực xét nghiệm Không sử dụng mẫu máu nhiễm mỡ đục mà làm cách ly tâm (10 phút 15000 x g)

(113)

(114)

ĐỊNH LƢỢNG HVA (Homovanillic acid) VMA (Vanillyl mandelic acid) NIỆU

I NGUYÊN LÝ

Dựa phương pháp cổ điển để xác định thành phần acid hữu niệu gồm: chiết tách ethyl acetate/ tạo dẫn xuất trimethylsilyl/sử dụng hệ thống máy GCMS Sử dụng 1mL nước tiểu để chiết tách, thêm vào chất nội chuẩn 3- phenyl butyric acid, hỗn hợp bão hòa NaCl chiết tách ethyl acetate môi trường acid (pH 1) Sau làm khơ mẫu Ủ mẫu với BSTFA 75 phút 80°C để gắn nhóm trimethylsilyl (trong BSTFA) với nhóm OH phân tử HVA, VMA Phân tách xác định HVA, VMA thực phương pháp SIM máy GCMS để định lượng nồng độ HVA, VMA

II CHUẨN BỊ

- Phương tiện:

+ Máy GCMS

Agilent 7890A GC System

Agilent 5975C inert XL EI/CI Mass Selective Detector with Triple Axis Detector

Agilent 7693 Autosampler Carrier gas: helium (99.995%)

Column: HP- 5MS 30m x 0.25 mm id x 0.25 um film thickness Catalog number 190915S-433

+ Máy ly tâm

+ Máy trộn multi- vortexer

+ Hệ thống làm bay dung môi + Tủ sấy

- Hóa chất:

 Phenylbutyric acid (nội chuẩn 1), Hydroxylamonium 1%, BSTFA, Hexane, Ethyl acetate, Acid HCl 37%, NaCl

 Nước cất

 QC mức (hãng Bio – rad)  QC mức (hãng Bio – rad)  Chuẩn VMA/HVA/5-HIAA Hoàn nguyên chuẩn

(115)

- Để 15 phút nhiệt độ phòng

- Trộn cẩn thận (dùng máy lắc ngang) - Để thêm 15 phút

- Trộn cẩn thận

- Chia 1,25 mL dung dịch chuẩn vào ống nhựa Eppendoft, dán nhãn HVA-VMA STD, bảo quản ngăn đá tủ lạnh

- Chuẩn dùng chuẩn bị Chuẩn mức đến mức Hoàn nguyên QC

- Thêm 10 mL HCl 0,05M

- Để đứng yên 15 phút nhiệt độ phòng - Trộn cẩn thận

- Để đứng yên thêm 15 phút - Trộn cẩn thận

Chia 1,1 mL dung dịch chuẩn vào cup nhựa, dán nhãn HVA-VMA QC1 HVA-VMA QC2, bảo quản ngăn đá tủ lạnh

3 Ngƣời bệnh: người bệnh cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

Nước tiểu tươi nước tiểu 24 mẫu bệnh phẩm cho xét nghiệm Hướng dẫn xử lý bảo quản bệnh phẩm nước tiểu:

* Nƣớc tiểu tƣơi: - Chia làm ống:

+ Ống số 1: chứa sẵn 0,5 mL HCl 0,1M, làm đầy xác thành 5mL + Ống số 2: khơng có chất bảo quản, thể tích - 3mL

Đậy nắp kín

(116)

Tiêu chuẩn nhận nước tiểu:

Ống số 1: pH<3, kiểm tra lượng nước tiểu ống có xác 5mL hay khơng, khơng ghi lại xác thể tích nước tiểu đo vào phiếu xét nghiệm

Bệnh phẩm ống số lắc đều, cất vào ống Eppendorf tối thiểu 1,5mL, bảo quản ngăn đá tủ lạnh

Bệnh phẩm ống số định lượng nồng độ Creatinin niệu ghi kết vào phiếu xét nghiệm

* Nƣớc tiểu 24 giờ:

Dùng HCl đặc để bảo quản, thể tích HCl cho người bệnh: 2mL Thu thập nước tiểu 24 theo nguyên tắc thu thập nước tiểu 24

Ghi tổng thể tích nước tiểu 24 vào phiểu xét nghiệm Tiêu chuẩn nhận nước tiểu: pH<3

Bệnh phẩm lắc đều, cất vào ống Eppendorf tối thiểu 1,5mL, bảo quản ngăn đá tủ lạnh

2.1 Quá trình chiết tách mẫu bệnh phẩm nƣớc tiểu

Kiểm tra áp lực bình khí heli u cầu thay bình khí áp lực < 100 psi Rã đông bệnh phẩm, nội chuẩn mức QC

Kiểm tra nhiệt độ lò ủ đạt 80°C

Chuẩn bị phận tự động hút bệnh phẩm Agilent 7963 (autosampler):

- Thay dung môi (hexane) lọ đựng dung môi để rửa syringe Chú ý: lượng hexane lọ phải đầy ngang vai lọ.\

- Rửa lọ đựng chất thải ethyl acetate Chạy chương trình “Baking” máy GCMS Chương trình chạy kết thúc sau khoảng

Dán nhãn ống thủy tinh (kích thước 20 x 125 mm) chuẩn bị cho chiết tách Trong ống thủy tinh này, dùng pipet hút nội chuẩn, QC, bệnh phẩm theo bảng sau:

Ống STT

Bệnh phẩm Chuẩn/QC/

Bệnh phẩm

HCl 0,2M Nội chuẩn

1 Chuẩn mức 200 uL 800 uL 50 uL

2 Chuẩn mức 400 uL 600 uL 50 uL

3 Chuẩn mức 1000 uL uL 50 uL

4 QC 1000 uL uL 50 uL

(117)

6 Nước tiểu người bệnh 1000 uL uL 50 uL Trộn ống để 30 phút nhiệt độ phòng

9 Acid hóa đến pH1 giọt HCl 37% Kiểm tra giấy quỳ 10 Thêm thìa nhỏ NaCl để tạo thành dung dịch bão hòa

11 Thêm mL ethyl acetate Đậy nắp trộn với máy trộn phút 12 Ly tâm 2500 vòng phút

13 Chuyển lớp chất lỏng phía vào lọ thủy tinh nắp xoáy 4mL:

Sử dụng pipet pasteur hút thật chậm Bắt đầu hút từ lớp chất lỏng tới giao diện lớp chất lỏng mà không chạm vào thành ống thủy tinh

14 Sấy khô máy làm bay dung môi với khí nitơ nhiệt độ phịng 15 Kiểm tra lọ thật khô trước tiến hành bước

16 Thêm 200 uL BSTFA, đậy nắp, trộn đặt vào lò ủ 80°C 1h 15 phút

17 Chuẩn bị lọ đựng mẫu (autosampler vial), dán nhãn, nhãn ghi ngày chiết tách bệnh phẩm Đặt glass insert vào lọ đựng mẫu

18 Chuyển bệnh phẩm chiết tách vào glass insert tương ứng pipet 200 uL

19 Đậy nắp trộn

20 Để lọ đựng mẫu vào khay đựng bệnh phẩm phận bơm mẫu tự động theo vị trí

2.2 Vận hành GCMS

Vận hành máy GCMS tiến hành phân tích mẫu theo hướng dẫn sử dụng máy GCMS phòng Xét nghiệm

- Xác định kết nằm giới hạn bình thường:

Lứa tuổi (năm) HVA (mol/24h) HVA (mol/mmol Creatinin)

0 - <8 4.7 - 21

1 - <17 2.8 - 15.8

5 - 10 - 37 0.7 - 9.5

10 - 20 - 40 <

(118)

Tuổi (năm) VMA (mol/mmol Creatinin)

0 – < 11

2 – <

5 – <

10 – 19 <

>19 <

- Trả kết theo yêu cầu với khoảng bình thường

- Nếu kết rơi vào khoảng nguy hiểm, báo cho bác sĩ lâm sàng V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ

- Khơng lấy đủ thể tích mẫu nước tiểu 24h Yêu cầu lấy lại

(119)

ĐỊNH LƢỢNG IA2A (Islet Antigen 2-autoantibodies) MÁU I NGUYÊN LÝ

IA2A định lượng kỹ thuật ELISA

Huyết người bệnh ủ với IA2A gắn vi giếng Nếu mẫu có kháng thể kháng IA2A, kháng thể đặc hiệu gắn IA2A Kháng thể gắn với IA2A đánh dấu biotin thêm vào bước ủ thứ hai Để phát phức hợp gắn biotin, enzyme POD gắn avidin thêm vào, enzyme có khả tạo phản ứng có sản phẩm màu Đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ kháng thể kháng IA2A mẫu thử

II CHUẨN BỊ

Nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1 Phương tiện:

2.2 Hoá chất Kit định lượng IA2A

Vật liệu kiểm tra chất lượng (QC 1,2) Pipet, ống nghiệm

Nước cất

- Huyết thanh, huyết tương chống đông EDTA

(120)

Chạy mức QC thực xét nghiệm Tất kết kiểm tra

chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi QC Chỉ thông báo kết xét nghiệm QC nằm khoảng cho phép

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ Giá trị tham chiếu:

Người khoẻ mạnh IA2A < 10 IU/mL Ý nghĩa lâm sàng:

(121)

ĐỊNH LƢỢNG ICA (Islet cells autoantibodies) MÁU I NGUYÊN LÝ

ICA- Islet cells autoantibodies- Kháng thể kháng tế bào tiểu đảo,ICA định lượng kỹ thuật ELISA

Huyết người bệnh ủ với kháng nguyên tế bào tiểu đảo gắn vi giếng Nếu mẫu có ICA, kháng thể đặc hiệu gắn kháng nguyên tế bào tiểu đảo Kháng thể gắn với kháng nguyên đánh dấu biotin thêm vào bước ủ thứ hai Để phát phức hợp gắn biotin, enzyme POD gắn avidin thêm vào, enzyme có khả tạo phản ứng có sản phẩm màu Đậm độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ ICA mẫu thử

II CHUẨN BỊ

Nhân viên thực xét nghiệm có trình độ phù hợp 2.Phƣơng tiện, hóa chất:

2.1.Phương tiện:

2.2 Hoá chất Kit định lượng ICA

Vật liệu kiểm tra chất lượng (QC 1,2) Nước cất

- Phiếu xét nghiệm theo quy định Bộ Y tế bệnh viện

III CÁC BƢỚC TIẾN HÀNH 1 Lấy bệnh phẩm:

- Huyết

(122)

Chạy mức QC thực xét nghiệm Tất kết kiểm tra chất lượng phải ghi lại bảng theo dõi QC Chỉ thông báo kết xét nghiệm QC nằm khoảng cho phép

IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ Giá trị tham chiếu:

Người khoẻ mạnh ICA âm tính Ý nghĩa lâm sàng:

(123)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU Dermatophagoides pteronyssinus máu

I NGUYÊN LÝ

IgE globulin miễn dịch có vai trị quan trọng miễn dịch với ký sinh trùng giun sán… Ngồi cịn có vai trị q trình dị ứng thể phản vệ số bệnh dị ứng hen, viêm mũi dị ứng…

IgE đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm; - Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme xúc tác ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Khi gặp enzyme, chất hoá phát quang phát quang, cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE

II CHUẨN BỊ

1 Ngƣời thực hiện: người thực kỹ thuật có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện, hóa chất

- Máy xét nghiệm: IMMULITE 2000, Beckman Access, Cobas e411, - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2 Hóa chất

+ Gói hạt có gắn anti-ligand; + Hộp thuốc thử IgE đặc hiệu;

+ Chất chuẩn: kháng thể IgE có nguồn gốc từ người, mức nồng độ (thấp cao); + Mẫu nội kiểm: kháng thể IgE có nguồn gốc từ người, mức nồng độ;

+ Hộp dị nguyên đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

- Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích nghiệm phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời

(124)

- Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Sau lấy nghiệm phẩm, đem ly tâm tách huyết thanh, nên tiến hành phân tích vịng để tránh tuợng bay hơi;

- Nghiệm phẩm bảo quản ngày 2-8°C, tháng -20°C;

- Nghiệm phẩm rã đông lần đảm bảo nhiệt độ phòng trước phân tích 2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần đựơc chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích nghiệm phẩm cụ thể:

+ Cài đặt chương trình xét nghiệm IgE đặc hiệu;

+ Cho hộp dị nguyên đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy hiệu chuẩn xây dựng đường chuẩn;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu Dermatophagoides pteronyssinus, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu;

+ Cho chất hóa phát quang vào vị trí máy

- Nhập liệu thông tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có);

- Cho ống nghiệm có chứa nghiệm phẩm vào giá mẫu thử, sau đặt giá vào khay mẫu máy;

- Thực buớc thao tác máy theo hướng dẫn sử dụng;

- Khi có kết quả, cần xem xét đánh giá kết quả, sau in báo cáo ghi kết vào phiếu trả kết xét nghiệm để trả cho người bệnh bác sĩ lâm sàng IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Hệ thống phân loại tiêu chuẩn sử dụng ngưỡng theo nhóm: Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên  0.10 Khơng có khơng thể phát

(125)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên

I 0.35–0.69 Thấp

II 0.70–3.49 Vừa phải III 3.50–17.49 Cao IV 17.5–52.49

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

V.NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

+ Nồng độ bilirubin ≤ 200 mg/L; + Nồng độ hemoglobin ≤ 500 mg/dL; + Nồng độ triglycerid ≤ 3000 mg/dL

(126)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU ENTEROTOXIN A (S AUREUS) TRONG MÁU

Bảng viết tắt

- IgE : Immunoglobulin E

- S aureus : Staphylococcus aureus - PXN: Phòng xét nghiệm

I NGUYÊN LÝ

Enterotoxin A độc tố tiết Staphylococcus aureus (S aureus), tác nhân gây bệnh ngộ độc thực phẩm sốc nhiễm độc Định lượng IgE đặc hiệu enterotoxin A xét nghiệm nhằm xác định tình trạng dị ứng thể với dị nguyên enterotoxin A

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu enterotoxin A (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Pha rắn (hạt) bọc kháng thể kháng phối tử Pha lỏng chứa enzyme phosphatase kiềm (ruột bê) liên hợp với kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người chất dung dịch đệm huyết người/không phải người

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu enterotoxin A (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu enterotoxin A có mặt mẫu bệnh phẩm

Chu kỳ ủ: x 30 phút; Tổng thời gian xét nghiệm: 65 phút II.CHUẨN BỊ

Người thực kỹ thuật có trình độ kỹ thuật phù hợp 2 Phƣơng tiện , hóa chất

- Máy máy phân tích tự động IMMULITE®2000 số máy khác - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vòng/phút

- Tủ lạnh

(127)

- Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit Thành phần kit gồm có:

- Gói hạt 3gAllergy™ Specific IgE (L2UN12): gồm 200 hạt, bọc kháng phối tử Ổn định 2–8°C ngày hết hạn Số lượng gói

- Hộp thuốc thử 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNA6): Chứa 30 mL enzyme phosphatase kiềm (ruột bê) liên hợp với kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người chất dung dịch đệm huyết người/không phải người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2–8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

Trước sử dụng, xé bỏ phần đầu nhãn phần có lỗ châm kim, mà khơng làm hỏng mã vạch Bóc màng kim loại khỏi nắp hộp hình nêm; bẻ nắp trượt xuống vào mặt nghiêng nắp thuốc thử

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

Trước thực việc điều chỉnh, đặt nhãn ống ngắn để đầu đọc mã vạch qt mã vạch xác

- Kháng thể điều chỉnh 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNS1): Hai ống, 2,75 mL chất lỏng ống, chứa kháng thể đa dòng dê kháng IgE người đánh dấu phối tử chuẩn bị sẵn sàng để sử dụng Ổn định 2–8°C ngày hết hạn

Thuốc thử đặt hộp hình nêm chứa dị nguyên thực điều chỉnh

- Chất chứng 3gAllergyTM Specific IgE Universal Kit (SPE) (L2UNC1, L2UNC2): Hai lọ, lọ mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 30 ngày nhiệt độ 2-8o

C sau mở nắp, sáu tháng (chiết vào lọ nhỏ) nhiệt độ - 20o

C

Tham khảo thông tin tờ hướng dẫn sử dụng chất kiểm chuẩn đính kèm thuốc thử để biết xác hai mức nồng độ Trước dùng nhớ dán mã vạch ngắn để đầu đọc mã vạch quét xác

- Kháng thể chứng 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNS2): Hai ống, 2,75 mL chất lỏng ống, chứa kháng thể đa dòng dê kháng IgE người đánh dấu phối tử chuẩn bị sẵn sàng để sử dụng Ổn định 2–8°C ngày hết hạn Thuốc thử đặt hộp hình nêm chứa dị nguyên chạy chất kiểm chuẩn IMMULITE 2000 IgE

Thành phần kit cung cấp riêng

(128)

sẵn để sử dụng), có chất bảo quản Bảo quản: 30 ngày (sau mở nắp) 2– 8°C tháng (được chiết vào lọ nhỏ) -20°C Thải bỏ phù hợp với pháp luật hành

- Nhãn mã vạch cung cấp để sử dụng với dung dịch pha loãng Trước sử dụng, dán nhãn phù hợp lên ống nghiệm 16 × 100 mm, cho đọc hệ thống đọc mã vạch

- L2SUBM: Cơ chất hóa phát quang - L2PWSM: Dung dịch rửa đầu dò - L2KPM: Bộ dụng cụ làm đầu dò - LRXT: Ống phản ứng (dùng lần)

- L2AW1-3: Hộp hình nêm chứa dị nguyên (được dán mã vạch) - L2AW1, 400930-02: chứa mã (code) 1–33

- L2AW2, 400930-03: chứa mã (code) 34–66 - L2AW3, 400930-04: chứa mã (code) 67–99 - L2ATC: Nắp ống chứa dị nguyên

- L2ATS2: Miếng ngăn ống dị nguyên

- Các thuốc thử có: MC6LCM, DC1LCM, DC2LCM, L2SNCCM: Chất chứng IgE đặc hiệu với dị nguyên huyết người

- Nước cất nước khử ion; ống nghiệm; chất chứng

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu enterotoxin A: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

Mỗi ống dị nguyên chứa dị nguyên đặc hiệu hỗn hợp dị nguyên chất dung dịch có đệm protein, có chất bảo quản

Không đông đá, Bảo quản tủ lạnh: ổn định 2-8oC hạn sử

dụng ghi lọ 90 ngày máy Khơng sử dụng có dấu hiệu nhiễm vi sinh chẳng hạn quan sát thấy có màu đục

Các dị nguyên riêng biệt bảng dị nguyên hỗ hợp dùng với hệ thống phân tích IMMULITE 2000

4 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

(129)

- Lấy máu tĩnh mạch để tạo cục đông trước ly tâm lấy huyết

- Sử dụng máy siêu ly tâm để loại bỏ thành phần lipid mẫu bệnh phẩm có tăng lipid

- Từ chối nhận mẫu tiêu huyết Chờ cục máu đơng hồn tồn khơng có tạo thành fibrin Trường hợp người bệnh dùng thuốc kháng đông phải chờ máu đông lâu

- Khơng sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Thể tích mẫu quy định: 50 uL huyết

- Bảo quản bệnh phẩm: 2-8ºC ngày, -20ºC 06 tháng - Chỉ rã đông bệnh phẩm lần trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đông 2 Tiến hành kỹ thuật

Các trang thiết bị phải định kỳ kiểm tra độ xác, bảo dưỡng - Kiểm tra hạn dùng điều kiện bảo quản hóa chất, chất chứng

- Các nhân viên có kinh nghiệm PXN chịu trách nhiệm đánh giá lực người thực qui trình (kiểm tra, quan sát việc thực qui trình) - Chạy chất chứng chạy mẫu bệnh phẩm

- Kết chất chứng phải ghi nhật ký theo dõi chất chứng - Chọn vị trí mở băng chuyền thuốc thử thông qua phần mềm

- Thay nắp ống dị nguyên với miếng ngăn Không đảo ngược ống dị nguyên gắn miếng ngăn

- Đặt ống dị nguyên có chứa dị nguyên đặc hiệu alpha - lactalbumin, bảng dị nguyên đặc hiệu, kháng thể điều chỉnh IgE đặc hiệu, và/hoặc kháng thể kiểm chuẩn IgE đặc hiệu IMMULITE 2000 vào hộp hình nêm chứa dị nguyên, với mã vạch hướng vào mặt mở hộp hình nêm

- Đóng hộp hình nêm lại quét mã vạch dị nguyên máy quét

- Khi việc quét hoàn tất, nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên vào băng chuyền thuốc thử

- Lặp lại quy trình để nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên

- Hộp hình nêm chứa dị nguyên phải quét trước gắn vào thiết bị để đảm bảo vận hành thiết bị xác Việc loại bỏ thay lọ hộp hình nêm chứa dị nguyên yêu cầu quét lại hộp hình nêm với máy quét mã vạch để cập nhật thông tin dị nguyên

(130)

- Các mẫu kiểm soát chất lượng: để theo dõi việc điều chỉnh, sử dụng chất kiểm chuẩn cung cấp với dụng cụ Chất kiểm chuẩn dị nguyên đặc hiệu alpha - lactalbumin có sẵn

Hệ thống phân loại tiêu chuẩn sử dụng ngưỡng theo nhóm:  Hệ thống phân loại tiêu chuẩn:

Nhóm KU/L Phản ứng với dị nguyên/ riêng trong bảng

0 < 0,10 Khơng có khơng phát 0,1 - 0,34 Rất thấp

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

V NHỮNG SAI SĨT VÀ XỬ TRÍ

- Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi: + Nồng độ bilirubin ≤ 200 mg/L;

+ Nồng độ hemoglobin ≤ 500 mg/dL; + Nồng độ triglycerid ≤ 3000 mg/dL

(131)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU ALBUMIN TRỨNG TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

IgE globulin miễn dịch có vai trị quan trọng miễn dịch với ký sinh trùng giun sán… Ngoài cịn có vai trị q trình dị ứng thể phản vệ số bệnh dị ứng hen, viêm mũi dị ứng…

IgE đặc hiệu albumin trứng định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu albumin trứng chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu albumin trứng đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

- Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme xúc tác ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Khi gặp enzyme, chất hoá phát quang phát quang, cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE

II CHUẨN BỊ

- Máy xét nghiệm: IMMULITE 2000, Beckman Access, Cobas e411, … - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút

- Tủ lạnh

+ Hộp dị nguyên đặc hiệu albumin trứng có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

- Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích nghiệm phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời

3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà người bệnh cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

(132)

- Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đông, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Nghiệm phẩm rã đông lần đảm bảo nhiệt độ phịng trước phân tích 2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích nghiệm phẩm cụ thể:

+ Cho hộp dị nguyên đặc hiệu albumin trứng quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu albumin trứng, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu;

- Thực bước thao tác máy theo hướng dẫn sử dụng; - Khi có kết quả, cần xem xét đánh giá kết quả, sau in báo cáo ghi kết vào phiếu trả kết xét nghiệm để trả cho người bệnh bác sĩ lâm sàng IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

0.10–0.34 Rất thấp

(133)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên II 0.70–3.49 Vừa phải

III 3.50–17.49 Cao IV 17.5–52.49

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

(134)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU ALPHA – LACTALBUMIN TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu alpha-lactalbumin (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệualpha- lactalbumin (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu alpha-lactalbumin có mặt mẫu bệnh phẩm

Chu kỳ ủ: x 30 phút

Tổng thời gian xét nghiệm: 65 phút II.CHUẨN BỊ

- Máy xét nghiệm IMMULITE 2000 - Máy ly tâm

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2 Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit Thành phần kit gồm có:

- Gói hạt 3gAllergy™ Specific IgE (L2UN12): gồm 200 hạt, bọc kháng phối tử Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Số lượng gói

(135)

người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

Trước sử dụng, xé bỏ phần đầu nhãn phần có lỗ châm kim, mà không làm hỏng mã vạch Bóc màng kim loại khỏi nắp hộp hình nêm; bẻ nắp trượt xuống vào mặt nghiêng nắp thuốc thử

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 2-8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

Trước thực việc điều chỉnh, đặt nhãn ống ngắn để đầu đọc mã vạch quét mã vạch xác

- Kháng thể điều chỉnh 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNS1): Hai ống, 2,75 mL chất lỏng ống, chứa kháng thể đa dòng dê kháng IgE người đánh dấu phối tử chuẩn bị sẵn sàng để sử dụng Ổn định 2-8°C ngày hết hạn

- Chất chứng 3gAllergyTM Specific IgE Universal Kit (SPE) (L2UNC1, L2UNC2): Hai lọ, lọ mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 30 ngày nhiệt độ 2-8o

C

- Kháng thể chứng 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNS2): Hai ống, 2,75 mL chất lỏng ống, chứa kháng thể đa dòng dê kháng IgE người đánh dấu phối tử chuẩn bị sẵn sàng để sử dụng Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Thuốc thử đặt hộp hình nêm chứa dị nguyên chạy chất kiểm chuẩn IMMULITE 2000 IgE

Thành phần kit cung cấp riêng

- Chất pha loãng mẫu 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNZ): Để pha loãng mẫu hệ thống Một lọ, chất albumin huyết người, đậm đặc (chuẩn bị sẵn để sử dụng), có chất bảo quản Bảo quản: 30 ngày (sau mở nắp) 2-8°C tháng (được chiết vào lọ nhỏ) -20°C Thải bỏ phù hợp với pháp luật hành

(136)

- L2PWSM: Dung dịch rửa đầu dò - L2KPM: Bộ dụng cụ làm đầu dò - LRXT: Ống phản ứng (dùng lần)

- L2AW1-3: Hộp hình nêm chứa dị nguyên (được dán mã vạch) - L2AW1, 400930-02: chứa mã (code) 1-33

- L2AW2, 400930-03: chứa mã (code) 34-66 - L2AW3, 400930-04: chứa mã (code) 67-99 - L2ATC: Nắp ống chứa dị nguyên

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu alpha - lactalbumin: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

Không đông đá, Bảo quản tủ lạnh: ổn định 2-8oC hạn sử dụng ghi lọ 90 ngày máy Khơng sử dụng có dấu hiệu nhiễm vi sinh chẳng hạn quan sát thấy có màu đục

Các dị nguyên riêng biệt bảng dị nguyên hỗ hợp dùng với hệ thống phân tích IMMULITE 2000 Để có danh sách đầy đủ số catalog, vui lòng tham khảo Menu 3gAllergy

3.Ngƣời bệnh

(137)

- Lấy mL máu tĩnh mạch để tạo cục đông trước ly tâm lấy huyết Máu không vỡ hồng cầu

- Chờ cục máu đơng hồn tồn khơng có tạo thành fibrin Trường hợp người bệnh dùng thuốc kháng đông phải chờ máu đông lâu

- Không sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Ly tâm mẫu 4000 vòng phút, tách huyết

- Bệnh phẩm ổn định ngày 2-8ºC, tháng -20ºC, năm (-15)-(25)oC - Bệnh phẩm tan đông lần phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phịng trước

khi phân tích Trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đông Để tránh tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân tích vịng

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu Alpha-lactalbumin đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng - Người thực phân tích mẫu nhập liệu thông tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

0 < 0,10

Không có khơng phát

0,1 - 0,34 Rất thấp

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(138)

(139)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU AMOXICILIN I NGUYÊN LÝ

IgE globulin miễn dịch có vai trị quan trọng miễn dịch với ký sinh trùng giun sán… Ngoài cịn có vai trị q trình dị ứng thể phản vệ số bệnh dị ứng hen, viêm mũi dị ứng…

IgE đặc hiệu AMOXICILLIN định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu AMOXICILLIN chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu AMOXICILLIN đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

II CHUẨN BỊ

2.1.Phương tiện

- Máy xét nghiệm: IMMULITE 2000, Beckman Access, Cobas e411… - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vòng/phút

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2.Hóa chất

+ Hộp dị nguyên đặc hiệu AMOXICILLIN có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích nghiệm phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời 3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà người bệnh cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

(140)

- Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đông, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Sau lấy bệnh phẩm, đem ly tâm tách huyết thanh, nên tiến hành phân tích vịng để tránh tượng bay hơi;

- Bệnh phẩm bảo quản ngày 2–8°C, tháng -20°C;

- Bệnh phẩm rã đông lần đảm bảo nhiệt độ phịng trước phân tích 2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy phân tích cần đựơc chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích bệnh phẩm cụ thể:

+ Cho hộp dị nguyên đặc hiệu AMOXICILLIN quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu AMOXICILLIN, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu;

- Cho ống nghiệm có chứa bệnh phẩm vào giá mẫu thử, sau đặt giá vào khay mẫu máy;

- Thực bước thao tác máy theo hướng dẫn sử dụng;

0.10–0.34 Rất thấp

(141)

III 3.50–17.49 Cao IV 17.5–52.49

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

VI NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

(142)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU AMPICILIN I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu AMPICILLIN định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu AMPICILLIN chia thành chu kỳ: - Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu AMPICILLIN đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

II CHUẨN BỊ

- Máy xét nghiệm: IMMULITE 2000, Beckman Access, Cobas e411… - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút

- Tủ lạnh

+ Hộp dị nguyên đặc hiệu AMPICILLIN có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích nghiệm phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời

(143)

- Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đông, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Sau lấy bệnh phẩm, đem ly tâm tách huyết thanh, nên tiến hành phân tích vòng để tránh tượng bay hơi;

- Bệnh phẩm rã đông lần đảm bảo nhiệt độ phịng trước phân tích 2 Tiến hành kỹ thuật

+ Cho hộp dị nguyên đặc hiệu AMPICILLIN quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu AMPICILLIN, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu;

- Nhập liệu thông tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích

hoặc hệ thống mạng (nếu có);

- Cho ống nghiệm có chứa bệnh phẩm vào giá mẫu thử, sau đặt giá vào khay

mẫu máy;

0.10–0.34 Rất thấp

I 0.35–0.69 Thấp

(144)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên IV 17.5–52.49

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

VII NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm khơng bị ảnh hưởng khi: + Nồng độ bilirubin ≤ 200 mg/L;

(145)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU ANISAKIS TRONG MÁU Bảng viết tắt

- IgE: Immunoglobulin E - PXN: Phòng xét nghiệm I NGUYÊN LÝ

Anisakis loại giun tròn thường ký sinh động vật biển cá thu, cá hồi, cá trích, mực ống Đối với người, bệnh thường gặp đối tượng người bệnh có tập qn, sở thích ăn gỏi loại cá biển, mực, bạch tuộc sống, chưa nấu chín kỹ Ấu trùng giun xâm nhập qua đường tiêu hóa ăn phải thức ăn hải sản nói khơng bảo đảm an tồn vệ sinh thực phẩm Định lượng IgE đặc hiệu ấu trùng Anisakis xét nghiệm nhằm xác định tình trạng nhiễm, dị ứng thể với ấu trùng Anisakis

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu ấu trùng Anisakis(tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệuấu trùng Anisakis(được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu ấu trùng Anisakiscó mặt mẫu bệnh phẩm

1 người có trình độ đại học, kỹ thuật viên chuyên ngành hóa sinh 2 Phƣơng tiện , hóa chất

(146)

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… - Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit Thành phần kit gồm có:

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

(147)

- Chất pha loãng mẫu 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNZ): Để pha loãng mẫu hệ thống Một lọ, chất albumin huyết người, đậm đặc (chuẩn bị sẵn để sử dụng), có chất bảo quản Bảo quản: 30 ngày (sau mở nắp) 2– 8°C tháng (được chiết vào lọ nhỏ) -20°C Thải bỏ phù hợp với pháp luật hành

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu ấu trùng Anisakis: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

(148)

- Không sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Thể tích mẫu quy định: 50 uL huyết

- Đóng hộp hình nêm lại quét mã vạch dị nguyên máy quét

- Khi việc quét hoàn tất, nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên vào băng chuyền thuốc thử

- Lặp lại quy trình để nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên

- Hộp hình nêm chứa dị nguyên phải quét trước gắn vào thiết bị để đảm bảo vận hành thiết bị xác Việc loại bỏ thay lọ hộp hình nêm chứa dị nguyên yêu cầu quét lại hộp hình nêm với máy quét mã vạch để cập nhật thông tin dị nguyên

(149)

- Các mẫu kiểm soát chất lượng: để theo dõi việc điều chỉnh, sử dụng chất kiểm chuẩn cung cấp với dụng cụ Chất kiểm chuẩn dị nguyên đặc hiệu alpha - lactalbumin có sẵn

Nhóm KU/L Phản ứng với dị nguyên/ riêng

trong bảng

0 < 0,10 Khơng có không phát 0,1 - 0,34 Rất thấp

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

VI NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

(150)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU ASPERGILLUS FUMIGATUS TRONG MÁU

Bảng viết tắt

Aspergillus fumigatus vi nấm gặp chủ yếu người bệnh sử dụng kháng sinh phổ rộng kéo dài người bệnh suy giảm miễn dịch Định lượng IgE đặc hiệu Aspergillus fumigatus xét nghiệm nhằm xác định tình trạng nhiễm, dị ứng thể với tác nhân

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu Aspergillus fumigatus (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệuAspergillus fumigatus (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu Aspergillus fumigatus có mặt mẫu bệnh phẩm

1 người có trình độ đại học, kỹ thuật viên chuyên ngành hóa sinh 2 Phƣơng tiện , hóa chất

(151)

- Tủ lạnh

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C Trước thực việc điều chỉnh, đặt nhãn ống ngắn để đầu đọc mã vạch quét mã vạch xác

C

(152)

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu Aspergillus fumigatus: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

Khơng đơng đá, Bảo quản tủ lạnh: ổn định 2-8oC hạn sử

(153)

- Huyết khuyến cáo sử dụng cho xét nghiệm

- Lấy máu tĩnh mạch để tạo cục đông trước ly tâm lấy huyết

- Sử dụng máy siêu ly tâm để loại bỏ thành phần lipid mẫu bệnh phẩm có tăng lipid

- Từ chối nhận mẫu tiêu huyết Chờ cục máu đơng hồn tồn khơng có tạo thành fibrin Trường hợp người bệnh dùng thuốc kháng đông phải chờ máu đông lâu

- Khơng sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Thể tích mẫu quy định: 50 uL huyết

- Khi việc qt hồn tất, nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên vào băng chuyền thuốc thử

- Hộp hình nêm chứa dị nguyên phải quét trước gắn vào thiết bị để đảm bảo vận hành thiết bị xác Việc loại bỏ thay lọ hộp hình nêm chứa dị nguyên yêu cầu quét lại hộp hình nêm với máy quét mã vạch để cập nhật thông tin dị nguyên

(154)

0 < 0,10 Không có khơng phát 0,1 - 0,34 Rất thấp

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(155)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BẠCH TUỘC TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu bạch tuộc (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu bạch tuộc (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu bạch tuộc có mặt mẫu bệnh phẩm

1 Ngƣời thực hiện

- Máy máy phân tích tự động IMMULITE®2000

- Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút - Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay…

2.2 Hóa chất Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit

Thành phần kit gồm có:

(156)

- Hộp thuốc thử 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNA6): Chứa 30 mL enzyme phosphatase kiềm (ruột bê) liên hợp với kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người chất dung dịch đệm huyết người/không phải người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 2-8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

(157)

- L2AW1-3: Hộp hình nêm chứa dị nguyên (được dán mã vạch) - L2AW1, 400930-02: chứa mã (code) 1-33

- L2AW2, 400930-03: chứa mã (code) 34-66 - L2AW3, 400930-04: chứa mã (code) 67-99 - L2ATC: Nắp ống chứa dị nguyên

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu Enterotoxin A: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

Khơng đông đá, Bảo quản tủ lạnh: ổn định 2-8oC hạn sử

dụng ghi lọ 90 ngày máy Không sử dụng có dấu hiệu nhiễm vi sinh chẳng hạn quan sát thấy có màu đục

(158)

- Chờ cục máu đông hồn tồn khơng có tạo thành fibrin Trường hợp người bệnh dùng thuốc kháng đông phải chờ máu đông lâu

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu bạch tuộc máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu bạch tuộc Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu bạch tuộc đạt yêu cầu, không nằm ngồi dải cho phép khơng vi phạm luật kiểm tra chất lượng

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

(159)

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ HƢỚNG XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

(160)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BETA-LACTOGLOBIN TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu beta - lactoglobin (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu beta - lactoglobin (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu beta - lactoglobin có mặt mẫu bệnh phẩm

- Máy ly tâm có tốc độ vòng quay 3000-5000 vòng/phút - Tủ lạnh

2.2 Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit Thành phần kit gồm có:

(161)

IgE người chất dung dịch đệm huyết người/không phải người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 2-8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

(162)

(163)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu Beta-lactoglobulin máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu Beta-lactoglobulin Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu Beta-lactoglobulin đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng - Người thực phân tích mẫu nhập liệu thông tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có)

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(164)

(165)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BIỂU MƠ CỦA CHĨ (DOG EPITHELIUM)

I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu biểu mơ chó (Dog epithelium) định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mơ chó (Dog epithelium) chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu biểu mô chó (Dog epithelium) đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu bệnh phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm; - Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme alkaline phosphatase ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cơ chất hóa phát quang có chất dioxetane-phosphate phát quang gặp enzyme alkaline phosphatase Cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE II.CHUẨN BỊ

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2 Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit + Gói hạt có gắn anti-ligand;

+ Hộp thuốc thử IgE đặc hiệu: chứa 30 mL enzyme alkaline phosphatase gắn với kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột, có chất bảo quản;

+ Dị ngun đặc hiệu biểu mơ chó (Dog epithelium) kèm hộp Allergen Wedder có mã vạch;

+ Cơ chất hóa phát quang

Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích bệnh phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời

(166)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu biểu mơ chó Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mơ chó Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mơ chó đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

0.10–0.34 Rất thấp

(167)

III 3.50–17.49 Cao IV 17.5–52.49

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

(168)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BIỂU MÔ CỦA CHUỘT (MOUSE EPITHELIUM)

I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu biểu mô chuột (Mouse epithelium) định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mô chuột (Mouse epithelium) chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu biểu mô chuột (Mouse epithelium) đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu bệnh phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

- Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme alkaline phosphatase ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cơ chất hóa phát quang có chất dioxetane-phosphate phát quang gặp enzyme alkaline phosphatase Cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE II.CHUẨN BỊ

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2 Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit + Gói hạt có gắn anti-ligand;

+ Hộp thuốc thử IgE đặc hiệu: chứa 30 mL enzyme alkaline phosphatase gắn với kháng thể đơn dịng kháng IgE từ chuột, có chất bảo quản;

+ Dị nguyên đặc hiệu biểu mô chuột (Mouse epithelium) kèm hộp Allergen Wedder có mã vạch;

+ Cơ chất hóa phát quang

(169)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu biểu mô chuột Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mô chuột Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mô chuột đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

(170)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên  0.10 Khơng có khơng thể phát

0.10–0.34 Rất thấp

I 0.35–0.69 Thấp

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

(171)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BIỂU MÔ GÀU CỦA MÈO (CAT DANDER EPITHELIUM)

I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu biểu mô gàu mèo định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu biểu mô gàu mèo chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu biểu mô gàu mèo đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

II CHUẨN BỊ

2.1 Phương tiện

- Máy xét nghiệm: IMMULITE 2000, Beckman Access, Cobas e411… - Máy ly tâm có tốc độ vòng quay 3000-5000 vòng/phút

- Tủ lạnh

2.2 Hóa chất

+ Hộp dị ngun đặc hiệu biểu mơ gàu mèo có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

(172)

- Lấy mL máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Sau lấy bệnh phẩm, đem ly tâm tách huyết thanh, nên tiến hành phân tích vịng để tránh tượng bay hơi;

- Bệnh phẩm rã đông lần đảm bảo nhiệt độ phòng trước phân tích 2 Tiến hành kỹ thuật

+ Cho hộp dị nguyên đặc hiệu biểu mô gàu mèo quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu biểu mô gàu mèo, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu;

- Cho ống nghiệm có chứa bệnh phẩm vào giá mẫu thử, sau đặt giá vào khay mẫu máy;

(173)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị ngun  0.10 Khơng có phát

0.10–0.34 Rất thấp

I 0.35–0.69 Thấp

V 52.5–99.99 Rất cao VI  100

(174)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU BLOMIA TROPICALLIS TRONG MÁU Bảng viết tắt

Blomia tropicallis thuộc lớp nhện thường có mẫu bụi nhà (cịn có tên mạt nhà) Khi tiếp xúc với thể người, Blomia tropicallis tạo nên yếu tố kích thích, khơi mào cho bệnh viêm dị ứng kết hợp với yếu tố thuận lợi khác gene di truyền Định lượng IgE đặc hiệu Blomia tropicallis xét nghiệm nhằm xác định tình trạng dị ứng thể với tác nhân

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu Blomia tropicallis (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu Blomia tropicallis (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE ngườ

i liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu Blomia tropicallis có mặt mẫu bệnh phẩm

Người thực kỹ thuật có trình độ phù hợp 2 Phƣơng tiện , hóa chất

- Máy máy phân tích tự động IMMULITE®2000 số máy khác - Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút

(175)

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

(176)

- Bảng dị nguyên hỗn hợp dị nguyên đặc hiệu Blomia tropicallis: Các dị nguyên riêng biệt đóng gói thành module 20 xét nghiệm 40 xét nghiệm tích 1,75 2,75 mL theo thứ tự

Khơng đông đá, Bảo quản tủ lạnh: ổn định 2-8o

C hạn sử dụng ghi lọ 90 ngày máy Không sử dụng có dấu hiệu nhiễm vi sinh chẳng hạn quan sát thấy có màu đục

(177)

- Khơng sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Thể tích mẫu quy định: 50 uL huyết

- Khi việc quét hoàn tất, nạp hộp hình nêm chứa dị nguyên vào băng chuyền thuốc thử

(178)

- Khoảng thời gian lần điều chỉnh khuyến nghị: tuần

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(179)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CÀ CHUA TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cà chua (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu cà chua (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu cà chua có mặt mẫu bệnh phẩm

Tổng thời gian xét nghiệm: 65 phút 1 Ngƣời thực

- Máy ly tâm có tốc độ vịng quay 3000-5000 vịng/phút - Tủ lạnh

(180)

người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2–8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20oC

C

(181)

(182)

- Khơng sử dụng bệnh phẩm có bọt, có fibrin chất dạng hạt - Ly tâm mẫu 4000 vòng phút, tách huyết

- Bệnh phẩm ổn định ngày 2-8ºC, tháng -20ºC, năm (-15)-(25)oC - Bệnh phẩm tan đông lần phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước

khi phân tích Trộn kỹ bệnh phẩm sau rã đông Để tránh tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân tích vòng

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cà chua máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu cà chua Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu cà chua đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

V NHỮNG YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG VÀ XỬ TRÍ - Kết xét nghiệm khơng bị ảnh hưởng khi:

(183)

(184)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CÁ HỒI TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu cá hồi định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu cá hồi chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu xoài đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

- Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme alkaline phosphatase ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cơ chất hóa phát quang có chất dioxetane-phosphate phát quang gặp enzyme alkaline phosphatase Cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE II CHUẨN BỊ

- Phương tiện:

- Máy ly tâm có tốc độ vòng quay 3000-5000 vòng/phút - Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… - Hóa chất:

+ Gói hạt có gắn anti-ligand;

+ Hộp thuốc thử IgE đặc hiệu: chứa 30 ml enzyme alkaline phosphatase gắn với kháng thể đơn dịng kháng IgE từ chuột, có chất bảo quản;

+ Dị nguyên đặc hiệu cá hồi kèm hộp Allergen Wedder có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

Chú ý: sử dụng nước cất nuớc khử ion phân tích nghiệm phẩm; bảo quản hóa chất 2-8oC, nơi khơ thống, tránh ánh sáng mặt trời 3 Ngƣời bệnh: người bệnh người nhà người bệnh cần giải thích mục đích việc lấy máu để làm xét nghiệm

(185)

- Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đông, đảm bảo mẫu máu không bị vỡ hồng cầu;

- Sau lấy nghiệm phẩm, đem ly tâm tách huyết thanh, nên tiến hành phân tích vòng để tránh tuợng bay hơi;

+ Cho dị nguyên đặc hiệu cá hồi vào hộp Allergen Wedder, quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu xoài, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu; + Cho hạt có gắn anti-ligand vào khay bi máy;

- Nhập liệu thơng tin người bệnh định xét nghiệm vào máy phân tích hệ thống mạng (nếu có);

Hệ thống phân loại tiêu chuẩn sử dụng ngưỡng theo nhóm: Mức kU/L Mức phản ứng với dị ngun  0.10 Khơng có phát

0.10–0.34 Rất thấp

I 0.35–0.69 Thấp

(186)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên V 52.5–99.99 Rất cao

VI  100

(187)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CÁ NGỪ TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

IgE đặc hiệu cá ngừ định lượng phương pháp miễn dịch hóa phát quang Quy trình xét nghiệm IgE đặc hiệu xoài chia thành chu kỳ:

- Chu kỳ đầu: nghiệm phẩm dị nguyên đặc hiệu cá ngừ đánh dấu ligand ủ với hạt gắn với anti-ligand 30 phút IgE đặc hiệu nghiệm phẩm gắn với dị nguyên, sau phức hợp liên kết với anti-ligand hạt Các thành phần không gắn kết loại bỏ cách rửa ly tâm;

- Chu kỳ thứ hai: kháng thể đơn dòng kháng IgE từ chuột gắn với enzyme alkaline phosphatase ủ với phức hợp 30 phút Kháng thể kết hợp với IgE cố định hạt, thành phần không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cơ chất hóa phát quang có chất dioxetane-phosphate phát quang gặp enzyme alkaline phosphatase Cường độ phát quang tỉ lệ thuận với nồng độ IgE II CHUẨN BỊ

- Phương tiện:

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… - Hóa chất:

+ Gói hạt có gắn anti-ligand;

+ Hộp thuốc thử IgE đặc hiệu: chứa 30 ml enzyme alkaline phosphatase gắn với kháng thể đơn dịng kháng IgE từ chuột, có chất bảo quản;

+ Dị nguyên đặc hiệu cá ngừ kèm hộp Allergen Wedder có mã vạch; + Cơ chất hóa phát quang

(188)

- Lấy ml máu tĩnh mạch vào ống khơng có chất chống đơng, đảm bảo mẫu máu khơng bị vỡ hồng cầu;

- Nghiệm phẩm bảo quản ngày 2–8°C, tháng -20°C;

+ Cho dị nguyên đặc hiệu cá ngừ vào hộp Allergen Wedder, quét mã vạch, đặt vào khay thuốc thử máy;

+ Chạy nội kiểm dị nguyên đặc hiệu cá ngừ, đảm bảo kết nội kiểm đạt yêu cầu; + Cho hạt có gắn anti-ligand vào khay bi máy;

0.10–0.34 Rất thấp

I 0.35–0.69 Thấp

(189)

Mức kU/L Mức phản ứng với dị nguyên V 52.5–99.99 Rất cao

VI  100

(190)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CÀ RỐT TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cà rốt (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu cà rốt (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu cà rốt có mặt mẫu bệnh phẩm

(191)

người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2–8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết người, có chất bảo quản Ổn định 2–8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

(192)

(193)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cà rốt máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu cà rốt Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu cà rốt đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(194)

(195)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CAM TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cam (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu cam (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu cam có mặt mẫu bệnh phẩm

- Máy ly tâm có tốc độ vòng quay 3000-5000 vòng/phút - Tủ lạnh

(196)

người, phân phối đồng vào buồng B C Ổn định 2-8°C ngày hết hạn Số lượng hộp hình nêm

- Chất điều chỉnh 3gAllergy™ SpecificIgE (L2UNJ3, L2UNJ4): Hai lọ (nồng độ thấp nồng độ cao), lọ 2,0 mL IgE người chất huyết khơng phải người, có chất bảo quản Ổn định 2-8°C 30 ngày sau mở, tháng (được chiết vào lọ nhỏ) - 20o

C

- Chất pha loãng mẫu 3gAllergy™ Specific IgE (L2UNZ): Để pha loãng mẫu hệ thống Một lọ, chất albumin huyết người, đậm đặc (chuẩn bị sẵn để sử dụng), có chất bảo quản Bảo quản: 30 ngày (sau mở nắp) 2-8°C tháng (được chiết vào lọ nhỏ) -20°C Thải bỏ phù hợp với pháp luật hành

(197)

dụng ghi lọ 90 ngày máy Không sử dụng có dấu hiệu nhiễm vi sinh chẳng hạn quan sát thấy có màu đục

(198)

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: máy cài đặt chương trình xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cam máu Máy chuẩn với xét nghiệm IgE đặc hiệu cam Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm IgE đặc hiệu cam đạt u cầu, khơng nằm ngồi dải cho phép không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

Nhóm KU/L Phản ứng với dị nguyên/ riêng

trong bảng

0 < 0,10

Khơng có khơng phát

0,1 - 0,34 Rất thấp

I 0,35 - 0,69 Thấp

II 0,70 - 3,49 Vừa

III 3,50 - 17,49 Cao

IV 17,5 - 52,49

Rất cao

V 52,5 - 99,9

VI >100

(199)

(200)

ĐỊNH LƢỢNG IgE ĐẶC HIỆU CẦN TÂY TRONG MÁU I NGUYÊN LÝ

Nguyên lý xét nghiệm định lượng IgE đặc hiệu cần tây (tiến hành máy IMMULITE 2000) dựa phương pháp miễn dịch hóa phát quang, hai bước, pha rắn, sử dụng động học pha lỏng dạng hạt

Trong chu kỳ đầu tiên, mẫu bệnh phẩm dị nguyên đặc hiệu cam (được đánh dấu phối tử) ủ với hạt bọc 30 phút Trong suốt thời gian này, IgE đặc hiệu mẫu gắn kết với dị nguyên đánh dấu phối tử, sau gắn kết với kháng phối tử hạt Thành phần mẫu không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm

Trong chu kỳ thứ hai, kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym thêm vào ống phản ứng ban đầu để ủ thêm 30 phút Kháng thể đơn dòng chuột kháng IgE người liên hợp với enzym gắn kết với IgE cố định Liên hợp enzym không liên kết loại bỏ cách rửa ly tâm Cuối cùng, chất hóa phát quang thêm vào ống phản ứng có chứa hạt cường độ sáng phát tỷ lệ thuận với IgE đặc hiệu cần tây có mặt mẫu bệnh phẩm

- Tủ lạnh

- Dụng cụ lấy máu: Bông cồn, bơm tiêm, ống đựng máu, găng tay… 2.2 Hóa chất: IMMULITE® 2000 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit Thành phần kit gồm có:

Định dạng
Số trang	472
Dung lượng	4,34 MB