VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT ENTEROBACTERIACEAE

CHUYÊN ĐỀ VỀ ENTEROBACTERIACEAE ĐẠI CƯƠNG ENTEROBACTERIACEAE ĐẶC TÍNH ENTEROBACTERIACEAE PHÂN LẬP ENTEROBACTERIACEAE ĐỊNH DANH ENTEROBACTERIACEAE SINH HÓA ENTEROBACTERIACEAE KHÁNG SINH ĐỒ ENTEROBACTERIACEAE các bạn sinh viên y tham khảo

I.ĐẠI CƯƠNG VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT

1.Định Nghĩa

Họ vi khuẩnđường ruột (Enterobacteriaceae) là một họ bao gồm các trực khuẩn Gram âm, sống ở đường tiêu hóa của người và động vật, có thể gây bệnh hoặc không gây bệnh, hoặc có lợi cho hệ tiêu hóa của con người

2.Tính chất đặc trưng

Họ Enterobacteriaceae có 8 tính chất đặc trưng:

1. Không sinh nha bào

2. Di động hoặc không

3. Hiếu khí hoặc kỵ khí tùy nghi

4. Mọc dể trên các môi trường thông thường

5. Lên men Glucose

6. Sinh hơi hoặc không

7. Khử Nitrate thành Nitrite

8. Oxidase âm

3.Phân loại

Theo EWING năm 1986, họ Enterobacteriaceae được xếp thành 8 bộ lạc (Tribe), 20 giống (Genus), 100 loài (Species)

Phân loại cơ bản về các bộ lạc và giống của Enterobacterieae

ENTEROBACTERIACEAE

Bộ lạc Giống Một số loài

I.Escherichiea

e

Escherichia Escherichia coli Shigella Sh dysenteriae, Sh.Flexneri,

II.Edwardsielle

III.Samonellea

e

Samonella S.typhi, S enteritidis,…

Ariazona Arizona hinshawii

IV.Klebsielleae

Klebsiella K pneumonia, K oxytoca,… Enterobacter E aerogenes, E cloacae,… Hafnia H alvei, Hafnia spp

Serratia Serratia marcescens,…

V.Proteae MorganellaProteus P mirabilis, P vulgarisM morganii

Providencia Providencia stuartii,…

VI.Yesinieae Yesinia Y.pestis, Y ruckeri,…

VII.Erwinieae PectobacteriumErwinia Erwinia sppPectorbacterium spp

VIII.Citrobacte

Nguồn: Giáo trình thực tập vi sinh ĐHYD TPHCM

4.Khả năng gây bệnh của một số loài vi khuẩn thường gặp

a.Escherichia coli

Trong đường tiêu hoá E coli chiếm tỷ lệ cao nhất trong số các vi khuẩn hiếu khí (khoảng 80%) E coli là một lợi khuẩn của đường tiêu hóa và cũng là một vi khuẩn gây bệnh quan trọng, nó đứng đầu trong các vi khuẩn gây tiêu chảy, viêm đường tiết niệu, viêm đưòng mật; đứng hàng đầu trong các căn nguyên gây nhiễm khuẩn huyết Ngoài ra E coli có thể gây nhiều bệnh khác như viêm phổi, viêm màng não, nhiễm khuẩn vết thương Theo báo cáo của chương trình quốc gia giám sát tính kháng thuốc của các vi khuẩn gây bệnh thường gặp (1988 – 1994) thì E coli đứng thứ hai (sau Staphylococcus aureus) về tỷ lệ phân lập được từ các loại bệnh phẩm ỗ nưổc ta

b.Shigella spp

Gây bệnh lỵ trực khuẩn ở người, là một bệnh truyền nhiễm có thể gây thành dịch

Triệu chứng của bệnh lỵ trực khuẩn: Đau bụng quặn, đi tiêu nhiều lần, phân nhiều mũ nhày và thường có máu Khi có các triệu chứng trên cần đến ngay cơ

sở y tế gần nhất để theo dõi, điều trị và phòng chống dịch

c.Samonella spp

Gây bệnh thương hàn ở người với các triệu chứng như sau: đau đầu, buồn nôn hoặc nôn, chướng bụng, tiêu chảy, khoãng 50% bệnh nhân có thể sờ thấy gan và lách dưới sườn Những trường hợp nặng bệnh nhân thường ly bì, hôn mê, trụy tim mạch nếu không được chữa trị kịp thời có thể dẩn đến tử vong

Theo tổ chức y tế thế giới (WHO), hằng năm có trên 16 triệu cas bệnh thương hàn và trong số đó có 500 nghìn người tử vong Ở nước ta đã có nhiều cas nhiễm thương hàn như ở thành phố Đồng Hới (Quảng Bình) với gần 250 công nhân nhập viện vì ăn bánh mì thịt nhiễm khuẩn thương hàn

Bệnh thương hàn là căn bệnh tương đối nguy hiểm và để mắc phải, mọi người cần thận trọng với những thức ăn chưa xác minh nguồn gốc để phòng bệnh

d.Klebsiella spp

Là vi khuẩn gây bệnh cơ hội Những đối tượng dể mắc bệnh do Klebsiella spp

là những bệnh nhân suy kiệt hoặc bệnh nhân suy giảm miễn dịch

Các bệnh mà Klebsiella có thể gây ra là: nhiễm trùng hô hấp dưới (viêm phổi, viêm phế quản,…), nhiễm trùng máu, nhiễm trùng tiết niệu,…

e.Proteus

Là vi khuẩn gây bệnh cơ hội

Các bệnh cảnh chúng có thể gây ra:

o Viêm tai giữa có mũ

o Viêm màng não thứ phát sau viêm tai giữa ở trẻ còn bú

o Nhiễm khuẩn tiết niệu

o Nhiễm khuẩn huyết

E.coli dưới KHV điện tử

II.XÉT NGHIỆM VI SINH

1.Đặc tính hình thái:

Trực khuẩn gram âm

Cách sắp xếp: rải rác hoặc thành đôi

Kích thước: khoãng 1 – 1,5µm x 2 – 6 µm

2.Đặc tính nuôi cấy

o Mọc được trên các môi trường nuôi cấy thông thường, các môi trường thường được sử dụng: MC, EMB, SS

o Vi khuẩn hiếu khí tùy nghi

o Nhiệt độ: 35 – 37 oC, khí trường thường

*Bảng đặc tính khuẩn lạc vi khuẩn đường ruột trên các loại môi trường

Nguồn: Giáo trình thực tập vi sinh ĐHYD Thành Phố Hồ Chí Minh

Hình ảnh nhuộm gram E.coli

MC EMB SS

Nhóm vi khuẩn Lactose (+)

Escheriachia coli

Khúm lớn biên đều, màu đỏ gạch,vùng đỏ bao quanh

Khúm lớn, biên đều, màu tím than, ánh kim loại

Bị ức chế, mọc ít, khúm hồng đến đỏ

Klebsiella spp

Khúm lớn, mọc tràn, rất nhớt, tâm

đỏ

Khúm lớn, không đều, tâm đỏ, viền nhạt, rất nhớt

Bị ức chế, mọc ít, nhớt, hồng đến đỏ

Nhóm vi khuẩn Lactose (-)

Samonella spp trong, không màuKhuẩn lạc nhỏ,

Khuẩn lạc nhỏ, đục hoặc trong, không màu

Khuẩn lạc nhỏ, đục hoặc trong, không

màu Shigella spp Giống Samonellanhưng nhỏ hơn Giống Samonellanhưng nhỏ hơn

Giống Samonella nhưng nhỏ hơn, vài dòng bị ngăn chặn Edwardsiella spp Khúm lớn khôngmàu Khúm lớn màunhạt Khúm trong, biên đềuđôi khi có tâm đen Serratia spp Khúm lớn khôngmàu Khúm lớn màunhạt Khúm lớn không màu Proteus spp

Khúm nhỏ không màu, có thể mọc

tràn

Khúm nhỏ không màu, có thể mọc

tràn

Khúm nhỏ không màu, có thể có tâm

đen Providencia spp Khúm lớn khôngmàu Khúm lớn khôngmàu Khúm nhỏ không màu

3.Định danh

Sơ đồ định danh vi khuẩn đường ruột.

Dựa vào tính chất sinh vật hóa học để phân biệt các loài vi khuẩn đường ruột với nhau

Có thể sử dụng đến 48 thử nghiệm sinh hóa khác nhau, trên thực tế thường sử dụng 7 – 20 thử nghiệm sinh hóa

Các phản ứng sinh hóa thường được sử dụng:

Lên men Glucose, Lên men lactose, Sinh hơi, Sinh gas, Di động, Indol, citrate, urease,…

*Môi trường sinh hóa

Dùng để xác định tính chất sinh vật hóa học của vi khuẩn đường ruột

Các môi trường sinh hóa thường được sử dụng

o KIA: Glucose, Lactose, khả năng sinh hơi, sinh H 2 S

Kligler’s iron agar: bao gồm phần thạch đứng chứa Glucose, thạch nghiêng chứa lactose, chất chỉ thị màu phenol red, sulfate sắt

Nồng độ glucose = 1/10 lactose, nồng độ acid rất thấp được sinh ra bởi glucose, do đó ở phần thạch nghiêng sẽ bị oxid hóa nhanh chóng, nếu phần lactose không được lên men thì thạch nghiêng sẽ trở lại tính kiềm Do đó, nếu vi khuẩn đường ruột được cấy lên KIA thì có các khả năng sau:

Thạch đứng vàng, thạch nghiêng vàng: Glucose (+), Lactose (+)

Thạch đứng vàng thạch nghiêng đỏ: Glucose (+), Lactose (-)

Nếu thạch đứng màu đỏ (không lên men Glucose), đây không phải nhóm vi khuẩn đường ruột, thuộc nhóm trực khuẩn gram âm không lên men đường như Pseudomonas spp, Acinetobacter spp,…

o TSI:(Triple Sugar Iron) chỉ khác KIA ở chổ có bổ sung thêm đường

saccharose, nhằm xác định sự lên men chậm đường lactose, vì người ta thấy rằng đa số vi khuẩn đường ruột lên men lactose chậm đều lên men saccharose sau một ngày

o SIM: H2S, Indol, Motility

F Thực hiện: Dùng que cấy cấy vi khuẩn thẳng đứng khoảng 2/3 ống nghiệm

F Sự sinh H2S được xác định bằng chất chỉ thị màu FeSO4 có trong môi trường (tạo FeS↓)

F Sự sinh Indol: một số vi khuẩn có khả năng sản xuất Indol từ Tryptophane do sản xuất được men Tryptophanase

acid

Sự xuất hiện của Indol được xác nhận bằng thuốc thử Kovacs’ có chứa p-dimethylaminobenzaldehyde do tạo ra muốn dimethylammonium có màu đỏ

Phản ứng dương: màu đỏ trong vài phút

Phản ứng âm: màu vàng của môi trường

F Motility

Vi khuẩn nếu có khả năng di động sẽ gây đục môi trường SIM, nếu khồn di động vi khuẩn chỉ mọc xung quanh kim cấy

o Urease

F Vi khuẩn sản xuất được men urease sẽ phân giải ure có trong môi trường thành amoniac gây kiềm hóa môi trường, được xác nhận dựa vào chất chỉ thị phenol có sẳn trong môi trường

Phản ứng dương: đỏ cánh sen.

Phản ứng âm: vàng

o Citrate:

F Môi trường chứa sodium citrate, nếu vi khuẩn sử dụng được carbon

từ muối này sẽ biến đổi sodium citrate thành những chất làm kiềm hóa môi trường, được xác nhận bằng chất chỉ thị màu xanh methymol gây đổi màu từ xanh lá (pH = 6.9) sang xanh dương (pH

= 7.6)

F Phản ứng dương: xanh dương

F Phản ứng âm: xanh lá cây

o MR – VP (Methyl red - Voges-Proskauer)

F Phản ứng methyl red: Kiểm tra khả năng tạo và duy trì acid được tạo ra từ quá trình lên men glucose của vi sinh vật thông qua chất chỉ thị methyl red

F Thuốc thử: methyl red

F Phản ứng

*Phản ứng âm:không đổi màu

F Phản ứng Voges-Proskauer: Xác định khả năng sinh acetylmethylcarbinol (acetoin) trong quá trình lên men glucose của một số vi sinh vật

*Thuốc thử:KOH 40% (trung hòa acid từ phản ứng MR, chất oxi hóa), α-naphtol

*Phản ứng dương: Màu đỏ, hồng nhạt trên bề mặt môi trường

*Phản ứng âm:màu vàng (màu của thuốc thử)

 Đọc kết quả sinh hóa và tra vào bảng sinh hóa để định danh vi khuẩn cần tìm.

4.Sự đề kháng kháng sinh của vi khuẩn đường ruột – Kháng sinh đồ

o Sự đề kháng kháng sinh

Một số trực khuẩn Gram âm, đặc biệt là vi khuẩn đường ruột có khả năng sinh men β-lactamase phổi rộng (ESBL) có khả năng ly giải cephalosporin gây khó khăn trong việc lựa chọn kháng sinh trong điều trị

o Phương pháp phát hiện ESBL

*Phương pháp đĩa đôi

*Phương pháp đĩa kết hợp

*Phương pháp MIC và E – Test

o Kháng sinh đồ

Phương pháp Kirby Bauer

Tài liệu còn nhiều thiếu sót, mong các bạn thông cảm !