CHUYÊN ĐỀ VỀ ENTEROBACTERIACEAE ĐẠI CƯƠNG ENTEROBACTERIACEAE ĐẶC TÍNH ENTEROBACTERIACEAE PHÂN LẬP ENTEROBACTERIACEAE ĐỊNH DANH ENTEROBACTERIACEAE SINH HÓA ENTEROBACTERIACEAE KHÁNG SINH ĐỒ ENTEROBACTERIACEAE các bạn sinh viên y tham khảo
Nhóm – XN39 ENTEROBACTERIACEAE I.ĐẠI CƯƠNG VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT 1.Định Nghĩa Họ vi khuẩn đường ruột (Enterobacteriaceae) họ bao gồm trực khuẩn Gram âm, sống đường tiêu hóa người động vật, gây bệnh không gây bệnh, có lợi cho hệ tiêu hóa người 2.Tính chất đặc trưng Họ Enterobacteriaceae có tính chất đặc trưng: Không sinh nha bào Di động không Hiếu khí kỵ khí tùy nghi Mọc dể môi trường thông thường Lên men Glucose Sinh không Khử Nitrate thành Nitrite Oxidase âm 3.Phân loại Theo EWING năm 1986, họ Enterobacteriaceae xếp thành lạc (Tribe), 20 giống (Genus), 100 loài (Species) Phân loại lạc giống Enterobacterieae Nhóm – XN39 Bộ lạc I.Escherichiea e II.Edwardsielle ae III.Samonellea e IV.Klebsielleae V.Proteae VI.Yesinieae VII.Erwinieae VIII.Citrobacte reae Giống Escherichia Shigella Edwardsiella Một số loài Escherichia coli Sh dysenteriae, Flexneri, Edwardsiella tarda Samonella S.typhi, S enteritidis,… Ariazona Arizona hinshawii Klebsiella Enterobacter Hafnia Serratia Proteus Morganella Providencia Yesinia Erwinia Pectobacterium Citrobacter Sh K pneumonia, K oxytoca,… E aerogenes, E cloacae,… H alvei, Hafnia spp Serratia marcescens,… P mirabilis, P vulgaris M morganii Providencia stuartii,… Y.pestis, Y ruckeri,… Erwinia spp Pectorbacterium spp Citrobacter freundii,… Nguồn: Giáo trình thực tập vi sinh ĐHYD TPHCM 4.Khả gây bệnh số loài vi khuẩn thường gặp a.Escherichia coli Trong đường tiêu hoá E coli chiếm tỷ lệ cao số vi khuẩn hiếu khí (khoảng 80%) E coli lợi khuẩn đường tiêu hóa vi khuẩn gây bệnh quan trọng, đứng đầu vi khuẩn gây tiêu chảy, viêm đường tiết niệu, viêm đưòng mật; đứng hàng đầu nguyên gây nhiễm khuẩn huyết Ngoài E coli gây nhiều bệnh khác viêm phổi, viêm màng não, nhiễm khuẩn vết thương Theo báo cáo chương trình quốc gia giám sát tính kháng thuốc vi khuẩn gây bệnh thường gặp (1988 – 1994) E coli đứng thứ hai (sau Staphylococcus aureus) tỷ lệ phân lập từ loại bệnh phẩm ỗ nưổc ta Nhóm – XN39 b.Shigella spp Gây bệnh lỵ trực khuẩn người, bệnh truyền nhiễm gây thành dịch Triệu chứng bệnh lỵ trực khuẩn: Đau bụng quặn, tiêu nhiều lần, phân nhiều mũ nhày thường có máu Khi có triệu chứng cần đến sở y tế gần để theo dõi, điều trị phòng chống dịch c.Samonella spp Gây bệnh thương hàn người với triệu chứng sau: đau đầu, buồn nôn nôn, chướng bụng, tiêu chảy, khoãng 50% bệnh nhân sờ thấy gan lách sườn Những trường hợp nặng bệnh nhân thường ly bì, hôn mê, trụy tim mạch không chữa trị kịp thời dẩn đến tử vong Theo tổ chức y tế giới (WHO), năm có 16 triệu cas bệnh thương hàn số có 500 nghìn người tử vong Ở nước ta có nhiều cas nhiễm thương hàn thành phố Đồng Hới (Quảng Bình) với gần 250 công nhân nhập viện ăn bánh mì thịt nhiễm khuẩn thương hàn Bệnh thương hàn bệnh tương đối nguy hiểm để mắc phải, người cần thận trọng với thức ăn chưa xác minh nguồn gốc để phòng bệnh d.Klebsiella spp Là vi khuẩn gây bệnh hội Những đối tượng dể mắc bệnh Klebsiella spp bệnh nhân suy kiệt bệnh nhân suy giảm miễn dịch Các bệnh mà Klebsiella gây là: nhiễm trùng hô hấp (viêm phổi, viêm phế quản,…), nhiễm trùng máu, nhiễm trùng tiết niệu,… e.Proteus Là vi khuẩn gây bệnh hội Các bệnh cảnh chúng gây ra: o Viêm tai có mũ o Viêm màng não thứ phát sau viêm tai trẻ bú o Nhiễm khuẩn tiết niệu o Nhiễm khuẩn huyết Nhóm – XN39 II.XÉT NGHIỆM VI SINH 1.Đặc tính hình thái: Trực khuẩn gram âm Cách xếp: rải rác thành đôi Hình ảnh nhuộm gram E.coli E.coli KHV điện tử Kích thước: khoãng – 1,5µm x – µm 2.Đặc tính nuôi cấy o Mọc môi trường nuôi cấy thông thường, môi trường thường sử dụng: MC, EMB, SS o Vi khuẩn hiếu khí tùy nghi o Nhiệt độ: 35 – 37 oC, khí trường thường *Bảng đặc tính khuẩn lạc vi khuẩn đường ruột loại môi trường Nguồn: Giáo trình thực tập vi sinh ĐHYD Thành Phố Hồ Chí Minh Nhóm – XN39 MC EMB SS Escheriachia coli Khúm lớn biên đều, màu đỏ gạch,vùng đỏ bao quanh Khúm lớn, biên đều, màu tím than, ánh kim loại Bị ức chế, mọc ít, khúm hồng đến đỏ Klebsiella spp Khúm lớn, mọc tràn, nhớt, tâm đỏ Khúm lớn, không đều, tâm đỏ, viền nhạt, nhớt Bị ức chế, mọc ít, nhớt, hồng đến đỏ Nhóm vi khuẩn Lactose (+) Nhóm vi khuẩn Lactose (-) Samonella spp Khuẩn lạc nhỏ, trong, không màu Khuẩn lạc nhỏ, đục trong, không màu Shigella spp Giống Samonella nhỏ Giống Samonella nhỏ Khúm lớn không màu Khúm lớn không màu Khúm nhỏ không màu, mọc tràn Khúm lớn không màu Khúm lớn màu nhạt Khúm lớn màu nhạt Khúm nhỏ không màu, mọc tràn Khúm lớn không màu Edwardsiella spp Serratia spp Proteus spp Providencia spp 3.Định danh Khuẩn lạc nhỏ, đục trong, không màu Giống Samonella nhỏ hơn, vài dòng bị ngăn chặn Khúm trong, biên có tâm đen Khúm lớn không màu Khúm nhỏ không màu, có tâm đen Khúm nhỏ không màu Nhóm – XN39 Sơ đồ định danh vi khuẩn đường ruột Dựa vào tính chất sinh vật hóa học để phân biệt loài vi khuẩn đường ruột với Có thể sử dụng đến 48 thử nghiệm sinh hóa khác nhau, thực tế thường sử dụng – 20 thử nghiệm sinh hóa Các phản ứng sinh hóa thường sử dụng: Lên men Glucose, Lên men lactose, Sinh hơi, Sinh gas, Di động, Indol, citrate, urease,… *Môi trường sinh hóa Dùng để xác định tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn đường ruột Các môi trường sinh hóa thường sử dụng o KIA: Glucose, Lactose, khả sinh hơi, sinh H2S Kligler’s iron agar: bao gồm phần thạch đứng chứa Glucose, thạch nghiêng chứa lactose, chất thị màu phenol red, sulfate sắt Nồng độ glucose = 1/10 lactose, nồng độ acid thấp sinh glucose, phần thạch nghiêng bị oxid hóa nhanh chóng, phần lactose không lên men thạch nghiêng trở lại tính kiềm Do đó, vi khuẩn đường ruột cấy lên KIA có khả sau: Thạch đứng vàng, thạch nghiêng vàng: Glucose (+), Lactose (+) Nhóm – XN39 Thạch đứng vàng thạch nghiêng đỏ: Glucose (+), Lactose (-) Nếu thạch đứng màu đỏ (không lên men Glucose), nhóm vi khuẩn đường ruột, thuộc nhóm trực khuẩn gram âm không lên men đường Pseudomonas spp, Acinetobacter spp,… o TSI:(Triple Sugar Iron) khác KIA chổ có bổ sung thêm đường saccharose, nhằm xác định lên men chậm đường lactose, người ta thấy đa số vi khuẩn đường ruột lên men lactose chậm lên men saccharose sau ngày o SIM: H2S, Indol, Motility F Thực hiện: Dùng que cấy cấy vi khuẩn thẳng đứng khoảng 2/3 ống nghiệm F Sự sinh H2S xác định chất thị màu FeSO có môi trường (tạo FeS↓) F Sự sinh Indol: số vi khuẩn có khả sản xuất Indol từ Tryptophane sản xuất men Tryptophanase Tryptophane acid Tryptophanase Indol+ Ammoni + Pyruvic Sự xuất Indol xác nhận thuốc thử Kovacs’ có chứa p-dimethylaminobenzaldehyde tạo muốn dimethylammonium có màu đỏ Phản ứng dương: màu đỏ vài phút Phản ứng âm: F màu vàng môi trường Motility Vi khuẩn có khả di động gây đục môi trường SIM, khồn di động vi khuẩn mọc xung quanh kim cấy o Urease F Vi khuẩn sản xuất men urease phân giải ure có môi trường thành amoniac gây kiềm hóa môi trường, xác nhận dựa vào chất thị phenol có sẳn môi trường Nhóm – XN39 Phản ứng dương: đỏ cánh sen Phản ứng âm: o vàng Citrate: F Môi trường chứa sodium citrate, vi khuẩn sử dụng carbon từ muối biến đổi sodium citrate thành chất làm kiềm hóa môi trường, xác nhận chất thị màu xanh methymol gây đổi màu từ xanh (pH = 6.9) sang xanh dương (pH = 7.6) o F Phản ứng dương: xanh dương F Phản ứng âm: xanh MR – VP (Methyl red - Voges-Proskauer) F Phản ứng methyl red: Kiểm tra khả tạo trì acid tạo từ trình lên men glucose vi sinh vật thông qua chất thị methyl red F Thuốc thử: methyl red F Phản ứng *Phản ứng dương:màu đỏ *Phản ứng âm:không đổi màu F Phản ứng Voges-Proskauer: Xác định khả sinh acetylmethylcarbinol (acetoin) trình lên men glucose số vi sinh vật *Thuốc thử:KOH 40% (trung hòa acid từ phản ứng MR, chất oxi hóa), α-naphtol *Phản ứng dương: Màu đỏ, hồng nhạt bề mặt môi trường *Phản ứng âm:màu vàng (màu thuốc thử) Đọc kết sinh hóa tra vào bảng sinh hóa để định danh vi khuẩn cần tìm Nhóm – XN39 4.Sự đề kháng kháng sinh vi khuẩn đường ruột – Kháng sinh đồ o Sự đề kháng kháng sinh Một số trực khuẩn Gram âm, đặc biệt vi khuẩn đường ruột có khả sinh men β-lactamase phổi rộng (ESBL) có khả ly giải cephalosporin gây khó khăn việc lựa chọn kháng sinh điều trị o Phương pháp phát ESBL *Phương pháp đĩa đôi *Phương pháp đĩa kết hợp *Phương pháp MIC E – Test o Kháng sinh đồ Phương pháp Kirby Bauer Tài liệu nhiều thiếu sót, mong bạn thông cảm !