Kỹ thuật nhân giống nuôi trồng nấm đùi gà

QUY TRÌNH KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG NẤM ĐÙI GÀ TẠI HÀ TĨNH ( Phần I: THÔNG TIN CHUNG Cơ quan tác giả: Công ty cổ phần sản xuất phát triển nấm Việt Nam Nguồn gốc xuất xứ: Từ kết dự án Ứng dụng KHCN nâng cao lực sản xuất giống nấm Hà Tĩnh” Phạm vi áp dụng: Trên nước Phần II: QUY TRÌNH KỸ THUẬT I.Giới thiệu chung Nấm Đùi Gà: Nấm đùi gà loại Nấm Sò (Bào Ngư) lớn giống nấm Sò, xuất xứ vùng địa Trung Hải, Bắc Phi Quả thể dày,thịt trắng, mũ nhỏ mau nâu, tuổi thọ dài.Thuộc chi pleurotus, họ pleurotaceae, Agaricales, lớp Hymenomycetes, ngành phụ Basidiomycotina, giới nấm Fungi Đặc điểm nấm đùi gà: Quả thể nấm đùi gà mọc chùm mọc đơn, màu trắng ngà, cuống nấm to, dài khoảng 5-10cm, mũ nấm non lồi phẳng, đường kính mũ nấm rộng khoảng 3-8 cm Quả thể hình thành nhiệt độ từ 10-16 độ C, điều kiện nuôi trồng tốt vào mùa đông (từ tháng 12 đến tháng dương lịch) Nuôi nhà lạnh trồng quanh năm II Quy trình nhân giống nấm đùi gà cấp 1: Nguyên liệu: công thức định lượng cho lít môi trường nhân giống Khoai tây: 200g, Đường glucose: 20g, Agar: 20g Nước cất: lít ; pH = 7,0 Ngoài thành phần số môi trường thường bổ sung thêm số nguyên tố khoáng: K, P, Mg…dưới dạng muối vô cơ, thành phần bổ sung với liều lượng khoảng 1-3g/ lít môi trường, có bổ sung thêm vào môi trường tỉ lệ nhỏ loại vitamin, kháng sinh… Các bước tiến hành - Chuẩn bị thiết bị, dụng cụ Nồi Autoclave, tủ ấm, tủ cấy vô trùng; Bếp gas ( bếp từ, lò vi sóng); Nồi nấu môi trường; Cốc thủy tinh, ống đong, ống nghiệm, chai thủy tinh, đũa thủy tinh; Cân kỹ thuật; Máy đo pH, giấy đo pH; Phễu, giá rót môi trường, rổ, vợt, vải lọc, dao cắt; Bông không thám nước, giấy báo, nilon, dây cao su - Chuẩn bị nguyên liệu Nước cất Khoai tây: loại tốt, không bị hư hỏng, không nảy nầm - Chuẩn bị hóa chất Agar; Đường Glucose ( Sachrose); Muối khoáng, vitamin, kháng sinh (nếu cần bổ sung) Pha chế môi trường cấp I Tạo môi trường dinh dưỡng nhân giống nấm cấp I từ hỗn hợp thành phần theo công thức hỗn hợp Sau tạo hỗn hợp môi trường xong, phân môi trường vào ống nghiệm đậy nút không thấm nước *Thao tác thực hiện: Bước 1: Kiểm tra lại dụng cụ, nguyên liệu cần thiết Bước 2: Chiết chất dinh dưỡng từ khoai tây Khoai tây gọt vỏ, rửa sạch, cắt thành khối có kích thước 1-2cm2 Cân xác 200g khoai tây cắt thành hình khối cho vào nồi nấu môi trường Đổ 600ml nước cất vào nồi đun sôi bếp ga (hoặc bếp từ) Đun khoai tây mềm: dùng dũa bẻ đôi khối khoai tây, đến khối khoai tây gãy đôi Lọc qua rổ thu dịch lọc Bước 3: Chuẩn bị dung dịch nước đường Đặt cân vị trí cân bằng, đầy dủ ánh sáng Điều chỉnh cân vị trí cân Cân xác 20g đường glucose cho vào cốc thủy tinh Đong 100ml nước cất cho vào cốc có đường Khấy tan đường Bước 5: Nấu môi trường Cân 20g agar cho vào dung dịch khoai tây Khấy cho agar hòa tan Thêm nước cất thể tích 1000ml Đun sôi môi trường 3-5 phút (lưu ý: nấu agar phải khuấy đều, để agar không bị lắng đáy, dễ bị khét) Thêm dung dịch nước đường vào, ta thu môi trường cấp I Bắt xuống, để nguội Bước 6: Phân phối môi trường vào ống nghiệm hoăc chai thủy tinh Đổ môi trường cấp I vào cốc có miệng để dễ rót vào ống nghiệm, chai Dùng phễu phân nhanh môi trường vào ống nghiệm chai thủy tinh: ống nghiệm lượng môi trường chiếm khoảng 1/5 ống nghiệm (6-7 ml/1 ống nghiệm), chai thủy tinh từ 5-10 ml, nấu đổ vào ống nghiệm phễu cố định giá đỡ Bước 7: Làm nút cho ống nghiệm, chai thủy tinh có môi trường Lấy lượng vừa đủ: cho nút sau làm xong không chắt hay lỏng, phần nút ống nghiệm tròn đều, phần không bị xơ Bước 8: Chuyển ống nghiệm, chai thủy tinh có môi trường vào nồi khử trùng Khử trùng môi trường cấp I Mục đích khử trùng để tiêu diêt hoàn toàn nguồn tạp nhiễm môi trường, môi trường sau hấp khử trùng xong phải đảm bảo vô trùng tuyệt đối không làm giảm chất lượng môi trường Thiết bị thường áp dụng nồi hấp Autoclave 1210C/25 phút Sau hấp trùng kết thúc môi trường trạng thái lỏng ta tiến hành làm thạch nghiêng *Cách tiến hành: -Bước 1: Bó ống nghiệm có môi trường thành bó nhỏ: khoảng 7-10 ống nghiệm/bó -Bước 2: Buộc đầu nút bó ống nghiệm, miệng chai thủy tinh giấy báo giấy nilon để hạn chế thấm nước vào nút trình hấp khử trùng -Bước 3: Xếp môi trường vào dụng cụ đưa vào nôi Autoclave hấp khử trùng 1210C/25 phút -Bước 4: Lấy môi trường khỏi nồi tiến hành làm thạch nghiêng Dùng que gỗ mỏng đặt lên mặt phẳng dùng giá nghiêng thiết kế cho tạo môi trường thạch nghiêng Lấy ống môi trường sau đẫ khử trùng nóng đặt nghiêng que gỗ nghiêng góc 40-450 Cứ tiến hành hết ống môi trường lại Hình 2.4 Làm thạch nghiêng -Bước 5: Để nguội môi trường khoảng thời gian 1-2 -Bước 6: Kiểm tra vô trùng môi trường trước sử dungj nhân giống:các ống, chai môi trường sau đông rắn ta tiến hành chyển vào tủ ấm nhiệt độ 35370C sau ngày, kiểm tra môi trường không thấy có mặt vi sinh vật mọc môi trường, màu môi trường không thay đổi môi trường đạt yêu cầu Các ống nghiệm, chai môi trường đặt vào tủ lạnh, nhiệt độ 2-100C để dùng dần Cấy chyền giống nấm cấp I Cấy chuyền giống nấm cấp I trình chuyển giống nấm từ ống giống gốc sang ống nghiệm, chai thủy tinh chứa môi trường cấp I vô trùng thao tác cấy chuyền thực điều kiện vô trùng a Kiểm tra phòng cấy, tủ cấy dụng cụ cấy giống Trước tiến hành thao tác cấy chuyền giống yêu cầu: phòng cấy phải khử trùng nhằm hạn chế xâm nhập nguồn tạp nhiễm vào giống nấm trình cấy chuyền -Phòng cấy: phải sẽ, cần phải: Quét dọn lau sàn, xung quanh tường nước trước sau lần cấy giống Bậc quạt thông gió -Tủ cấy: Dùng thấm cồn lau tủ bên trong, tủ Phủ tối kín tủ Bật đèn tử ngoại, quạt thời gian 15-30 phút Lấy che khỏi tủ Tắt đèn tử ngoại sau thời gian 15-30 phút để đẩy hết khí ozon khỏi tủ Bật đèn sáng Tiến hành cấy giống: Dụng cụ cấy: dụng cụ sử dụng phòng cấy giống (bình tam giác, que cấy, panh cấy, kéo…) bao gói hấp khử trùng nhiệt độ 160-1700C, sau khử trùng xong phải để vào vị trí chưa sử dụng Cấy chuyền từ ống gốc sang môi trường cấp I Cách cấy chuyền giống thực theo bước sau: -Bước 1: Mang bảo hộ: áo bluse, trang -Bước 2: Khử trùng tay: dùng thấm cồn lau từ khủy tay đến ngón tay, kẽ tay -Bước 3: Kiểm tra lại ống (chai) giống gốc ống (chai) môi trường cấp I dùng thấm lau cồn xung quanh ống ( chai) giống ống (chai) môi trường trước đưa vào tủ -Bước 4: Chuyển dụng cụ cấy giống, đèn cồn, bình tam giác có chứa cồn, khay đựng dụng cụ cấy vào tủ cấy bố trí cho tiện trình thao tác tủ -Bước 5:Ngồi vào vị trí vệ sinh tay lại lần cồn đợi cho tay khô hết cồn -Bước 6: Đốt đèn cồn để đèn cồn cháy tự thời gian 2-3 phút, lửa đèn cồn không nên để lớn nhỏ, nên cao từ 3-4cm -Bước 7: Khử trùng lại dụng cụ cấy cách nhung vaò cồn đốt trực tiếp lửa đèn cồn, thao tác lặp lại 2-3 lần, sau để nguội -Bước 8: Mở nút giữ nút ống gốc ống môi trường kẽ tay út áp út, hơ miệng ống nghiệm lửa đèn cồn, mở quanh lửa đèn cồn tư nằm ngang, quay miệng hướng lửa -Bước 9: Dùng que cấy chuyển mẫu giống từ ống giống gốc sang ống (chai) môi trường cấp I b)Chuyển mẫu giống gốc a) Lấy giống gốc c)Chuyển giống gốc vào môi trường -Bước 10: Hơ miệng ống nghiệm lửa đèn cồn hơ nhanh nút ống môi trường đậy nút lại -Bước 11: Thao tác tiến hành hết lượng giống ống giống gốc Trung bình ống giống gốc ta cấy khoảng 30-40 ống giống cấp I -Bước 12: Dùng giấy báo bọc đầu nút ống giống lại -Bước 13: Ghi tên loại giống, ngày cấy -Bước 14: Xếp ống giống cấp I giá chuyển toàn vào phòng nuôi sợi để giàn kệ nuôi sợi giống -Bước 15: Vệ sinh tủ cấy phòng cấy sau cấy giống xong 2.4.Nuôi sợi giống nấm cấp I Kiểm tra điều kiện phòng nuôi Phòng bụi bẩn, rác thải, không bị ẩm mốc Phòng ánh sáng tốt,khô thoáng, có đầy đủ hệ thống điện Có hệ thống điều chỉnh nhiệt độ cần, thường nhiệt độ thích hợp cho việc nuôi sợi nấm Linh Chi 260C +_2 thời gian ăn kín ống nghiệm 10 +_1 Chọn nhiễm phân lập giống nấm cấp I Tốc độ sinh trưởng phát triển hệ sợi nấm cấp I nấm Linh Chi phụ thuộc vào trạng thái sinh lý, chất lượng, độ tuổi giống đem nhân giống thành phần môi trường điều kiện nuôi sợi Sau thời gian định có ống giống sợi nấm phát triển mạnh, ăn kín toàn bề mắt thạch, sợi nấm ăn khỏe có màu đồng nhất, với ống ta sử dụng trực tiếp chuyển sang bảo quản Tuy nhiên có ống giống không đạt yêu cầu: Bị nhiễm vi sinh vật khác Sợi nấm bị thoái hóa hay lão hóa Sợi sinh trưởng Giống cấp I thường nhiễm loại: Nhiễm khuẩn: Trên môi trường thạch có vết trắng đục sữa Nhiễm mốc: Trên môi trường xuất chấm nhỏ nhiều màu, sợi giống nấm không phát triển Nguyên nhân giống nấm bị nhiễm: + Hấp khử trùng môi trường không tốt: Môi trường khử trùng, để nhiệt độ bình thường khoảng 3-4 ngày có tượng nhiễm khuẩn nồi hấp bị hỏng chế độ khử trùng không đảm bảo + Ống gốc bị nhiễm: Tất ống cấp I cấy từ ống giống bị nhiễm + Do thao tác cấy: Trong cấy ống nghiệm để gần lửa đèn cồn làm cho giống chết, thạch bị chảy dễ nhiễm khuẩn + Có thể tủ cấy không đảm bảo vô trùng phòng cấy không thường xuyên khử trùng + Có thể bị lây nhiễm từ vào trình nuôi sợi Việc lây nhiễm chủ yếu phòng nuôi sợi, ống nghiệm, nút bị ẩm bị nhiễm bẩn… Một số biểu sợi nấm bị thoái hóa?: + Sợi nấm co lại không phát triển, hệ sợi nấm dày, màu sợi nấm mờ + Tơ tiết có màu từ trắng chuyển sang vàng + Sợi nấm đổi màu: bình thường sợi nấm màu trắng chuyển sang màu tối, xám tro, màu nâu + Thời gian ăn kín ống nghiệm lâu III Quy trình nhân giống nấm đùi gà cấp : Nguyên vật liệu: Giống cấp II áp dụng nhiều công thức khác nhau, tất môi trường xốp với nguyên liệu chính: thóc, ngũ cốc, mùn cưa, cám gạo, bột ngô Đối với linh chi, môi trường nhân giống cấp II môi trường dạng hạt Tiến hành: + Thóc luộc + Bột nhẹ (CaCO3): 1% - Các bước tiến hành Chuẩn bị thiết bị, dụng cụ, nguyên liệu hoá chất * Thiết bị, dụng cụ: – Nồi Autoclave hệ thống nồi trùng – Máy trộn nguyên liệu – Bếp gas công nghiệp, nồi luộc, que khuấy – Quạt công nghiệp – Chai thủy tinh 500m1, chai nhựa, nắp nhựa, thau nhựa, rổ – Cân đồng hồ, ẩm kế – Bông không thấm nước, dây cao su, giấy báo, giấy nilon * Nguyên liệu – Nước sạch: pH: 7,0 – Thóc tẻ: có chất lượng tốt, không mốc, không bị sâu mọt đục phá, – Mùn cưa từ loại gỗ mềm, tinh dầu, hoá chất, để nhân giống nên chọn mùn cưa cao su, bồ đề tốt Ngoài chuẩn bị số phụ gia bổ sung: cám gạo, bột ngô * Hoá chất – Vôi sống: hàm lượng CaO > 60% – Cồn công nghiệp – Bột nhẹ: có chất lượng tốt, pH