Bài báo cáo thí nghiệm vi sinh KTMT nhóm 3

Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Nhóm Page Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường BÀI 4: Kỹ Thuật Cấy Chuyền Vi Sinh vật Nguyên tắc I Cấy chuyển vi khuẩn từ mơi trường chúng sống sang mơi trường để chúng tiếp tục phát triển Q trình cấy vi khuẩn nhằm mục đích: • Bảo tồn vi khuẩn nuôi khiết • Ly trích vi khuẩn có mơ trường đất, nước, khơng khí, mẫu thực phẩm, mẫu bệnh lý • Nghiên cứu tính chất sinh học vi khuẩn cấy chúng vào mơi trường chứa chất thí nghiệm Tiến hành thí nghiệm II Q trình cấy thực không gian vô trùng tạo lửa đèn cồn đèn busen Ngọn lửa có tác dụng oxy hóa khơng khí tạo khơng gian vơ trùng đồng thời dùng để khử trùng que cấy, miệng chai lọ, ống nghiệm mở nắp, nút CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH NỘI DUNG HÌNH ẢNH MINH HỌA Giá ống nghiệm để bên trái • Tất dụng cụ cịn lại để bên phải • Lau mặt bàn nơi thao tác với cồn 70◦C • Sắp xếp dụng cụ Nhóm GHI CHÚ • trang Chọn khu vực 40 cm2 để vệ sinh trước thí nghiệm Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Chuẩn bị giấy dán nhãn,ống nghiệm chứa mơi trường để cấy • • Người thao tác cần mang găng tay khử trùng alcool 70◦C • Ghi tên vi khuẩn cần cấy, môi trường, ngày cấy +Nhãn dán cách miệng ống nghiệm khoảng 1,5 cm Cấy giống từ môi trường lỏng sang ống nghiệm chứa mơi trường lỏng • Dùng que cấy CÁC BƯỚC THỰC HIỆN Khử trùng đầu ống nghiệm trước mở nút bơng HÌNH ẢNH MINH HỌA Để ống nghiệm nghiêng cách cồn 2cm Tay trái cầm ống nghiệm có Nhóm GHI CHÚ Cầm thẳng đứng trang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường vi khuẩn, tay phải cầm que cấy que cấy cho que nóng Đốt que cấy có màu đỏ, khử trùng phần cán que cấy đưa vào ống nghiệm Nhóm Tay phải nắm nút bơng ngón út cạnh bàn tay, tay trái xoay nhẹ ống nghiệm Tay phải cầm que cấy,ngó n út lòng bàn tay tay phải cầm giữ nút Cho đầu que cấy khử trùng vào bên ống giống, làm nguội que cấy Không để ống nghiệm xa đèn cồn Thu sinh khối cách nhúng đầu que cấy vào môi trường lỏng ria theo đường dzích dzắc Tránh cấy mạnh gây vỡ thạch Không ria nhiều đường trang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường từ kéo hướng miệng ống đậy nút lại Rút que cấy không để chạm vào thành miệng ống nghiệm Hơ nóng miệng ống nghiệm đậy nút Khử trùng lại que cấy Kiểm tra dán nhãn ,bao gói bảo quản Nhóm trang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường • Dùng pipetman CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH HÌNH ẢNH MINH HỌA Tay phải cầm pipetma n, gắn đầu tip chỉnh thể tích cần hút GHI CHÚ - - Tay trái cầm ống giống vi sinh vật Hút sinh khối theo thể tích chọn Nhóm trang Không đưa pipetma n đầu tip vào lửa Cần khử trùng tay cồn 70oC mang găng tay ,mang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường - Chuyển sinh khối sang môi trường Nhóm - trang trang làm thí nghiệm Nếu nồng độ VSV nhiều ,tiến hành pha lỗng mẫu Khi chuyển sinh khối thao tác phải nhanh gọn, với ống nghiệm phải giữ ống nghiệm cách lửa đèn cồn không 6cm, với đĩa petri mở nhỏ,hư ớng phía Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường lửa đèn cồn Cấy giống từ môi trường rắn sang ống nghiệm chứa mơi trường lỏng • Dùng que cấy chạm nhẹ vào mẫu vi sinh vật cần cấy • Cà nhẹ vào thành ống nghiệm có mơi trường lỏng để làm thành huyền trọc • Lắc nhẹ ống nghiệm để vi khuẩn phân bố ống nghiệm, đậy nút ống nghiệm • Khử trùng que cấy • Cấy giống từ mơi trường rắn sang ống thạch nghiêng • CÁC BƯỚC THỰC HIỆN Khử trùng đầu ống nghiệm trước mở nút bơng HÌNH ẢNH MINH HỌA Để ống nghiệm nghiêng cách cồn 2cm Tay trái cầm ống nghiệm có vi khuẩn, tay phải cầm que cấy Cầm thẳng đứng que cấy cho que nóng Đốt que cấy có màu đỏ, khử trùng phần cán que cấy đưa vào ống Nhóm GHI CHÚ trang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường nghiệm Nhóm Tay phải nắm nút bơng ngón út cạnh bàn tay, tay trái xoay nhẹ ống nghiệm Tay phải cầm que cấy,ngón út lịng bàn tay tay phải cầm giữ nút Cho đầu que cấy khử trùng vào bên ống giống, làm nguội que cấy Không để ống nghiệm xa đèn cồn Lấy sinh khối VSV đậy nút bơng lại,ria theo đường dzích dzắc từ kéo hướng miệng ống đậy nút lại -Ống nghiệm đặt cách lửa đèn cồn phạm vi bán kính 6cm - Khi sử dụng hộp petri để lấy VSV cần lấy khuẩn lạc có kích thước đạt yêu cầu phát triển ( thường dường kính từ 1mm trờ lên) -Tránh cấy mạnh gây vỡ thạch trang Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Không ria nhiều đường Rút que cấy không để chạm vào thành miệng ống nghiệm Hơ nóng miệng ống nghiệm đậy nút Khử trùng lại que cấy Kiểm tra dán nhãn ,bao gói bảo quản Nhóm - Dán nhãn phải ghi đủ thơng số: tên nhóm, ngày phân lập, nồng độ, tên VSV, tên sinh viên, môi trường trang 10 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường III KẾT QUẢ Trong môi trường lỏng: môi trường trở nên đục VSV phát triển Nhóm trang 11 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Trong mơi trường đặc hộp petri, thạch nghiêng: vi khuẩn phát triển tạo vân lên mặt thạch - Rút kinh nghiệm: + Thao tác đổ thạch phải khẩn trương khéo léo để hạn chế nhiễm khuẩn + khử trùng que cấy lửa đèn để lấy vi sinh vật chứa mẫu cần để nhiệt độ que cấy giảm xuống không gian vô trùng để tránh tượng vi sinh vật bị chết ( bỏng nhiệt) làm ảnh hưởng đến kết + Mẫu vi sinh vật cho có lớp màng dịch đầu que cấy vịng đạt yêu cầu +Thực đường cấy dứt khoác, tay + Mọi thao tác tiến hành cấy vi sinh vật cần thực không gian vơ trùng lửa đèn cồn Nhóm trang 12 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường BÀI 5: KỸ THUẬT PHÂN LẬP VI KHUẨN I NGUYÊN TẮC Trong thiên nhiên vật phẩm nghiên cứu, vi sinh vật tồn dạng hỗn hợp gồm nhiều loài khác Muốn nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa nghiên cứu ứng dụng lồi đónhất thiết phải đưa chúng dạng khiết • Nguyên tắc phương pháp pha loãng mẫu vậtcần phân lập (để cho số lượng chúng đi) cấy lên mơi trường đặc trưng Mỗi lồi vi sinh vật có tính đặc trưng mơi trường dinh dưỡng Lợi dụng tính chất người ta tạo mơi trường dinh dưỡng mà phát triển bình thường nhóm vi sinh vật định Các vi sinh vật đối tượng nghiên cứu bị kìm hãm hồn tồn phần Ví dụ: cần phân lập nấm mốc xạ khuẩnthì phân lập mơi trường có thêm chất kháng sinh vào để ức chế vi khuẩn • Như phương pháp phân lập giống vi sinh vật khiết dựa số kỹ thuật pha lỗng kết hợp vói điều kiện nuôi cấy chọn lọc tạo ưu tăng trưởng cho chúng quan tâm • II TIẾN HÀNH Phương pháp pha loãng mẫu + Mẫu chất lỏng Nội dung cơng việc Hình ảnh minh họa Chuẩn bị ống nghiệm chứa 9ml nước cất, dùng nút không thấm nước giấy báo bọc lại ống nghiệm Sau đó, đem hấp khử trùng ống nghiệm Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Ghi -Đậy nút bao bọc ống nghiệm giấy báo cẩn thận Page 13 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường Dùng micropipet hút 1ml dịch mẫu chuyển vào ống nghiệm có sẵn 9ml nước cất, lắc đều, ta độ pha loãng 10-1 -Trước pha loảng mẫu phải kiểm tra thích dán nhãn số ống nghiệm mà yêu cầu chưa Dùng micropipet hút 1ml dịch mẫu độ pha loãng 10-1 chuyển vào ống nghiệm có 9ml nước cất ta độ pha loãng 10-2 -Phải lắc để dịch mẫu nước hịa lẫn vào (có thể dùng máy lắc kết tốt hơn) - Giữa chặt ống nghiệm tránh làm rơi Thực tương tự đạt đạt nồng độ yêu cầu + Mẫu chất đặc (mẫu đất, thực phẩm…) Nội dung cơng việc Hình ảnh minh họa Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường Ghi Page 14 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường -Chuẩn bị bình tam giác chứa 90ml nước vô trùng -Cân 10g mẫu cho vào cối sứ vô trùng Thêm nước bình tam vào cối nghiền nát mẫu Đổ tồn nước cịn lại bình tam giác vào cối chuyển tồn mẫu sang bình tam giác khác, ta mẫu 10-1 -Để có mẫu đất tốt phải chọn đất có rễ cây, độ ẩm tốt, cân phải loại bỏ rễ -Tránh trường hợp cân sai số ( canh chỉnh cân, tắt quạt, ) -Để mẫu lắng khoảng phút -Tránh tượng đầu típ bị tắt chưa lắng hết xuống ( lắng khoảng phút) Dùng micropipet hút 1ml mẫu cho vào ống nghiệm chuẩn bị sẵn ml nước cất Lắc đều, ta nồng độ 10-2 -Phải lắc để mẫu trộn ( sử dụng máy lắc) - Giữa chặt ống nghiệm tránh làm rơi Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Page 15 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường - Tiếp tục pha loãng trường hợp chất lỏng (sử dụng micropipet) -Tùy vào số lượng vi sinh có mẫu mà ta pha lỗng nhiều hay Nhận xét- Rút kinh nghiệm: - Nhận xét: Pha loãng mẫu nhiều nồng độ thập phân liên yêu cầu - Rút kinh nghiệm: +Ống nghiệm chứa nước cất sau hấp khử trùng cần để nhiệt độ phòng cho hạ bớt nhiệt độ trước ngâm nước làm nguội ( để tránh bị vỡ ống nghiệm ) + Phải đổi đầu pipet sau lần pha loãng + Mỗi lần pha loãng mẫu cần lắc để đảm bảo yêu cầu Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Page 16 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường Phương pháp phân lập + Phương pháp hộp ria (streak plate) • Phương pháp hộp ria phương pháp pha loãng hữu hiệu dễ thực nhất, đó, hỗn hợp vi sinh vật trải ria bề mặt môi trường cho tế bào riêng biệt tách Sau ủ, tế bào phát triển thành khuẩn lạc đơn riêng rẽ Khuẩn lạc đơn chủng hậu tế bào ban đầu • Cách tiến hành Nội dung cơng việc Pha chế môi trường cần sử dụng để cấy ria Petri, bao gói giấy báo đem hấp khử trùng Dùng thấm cồn khử trùng tay mặt bàn nơi thực cấy Hình ảnh minh họa Ghi • Chọn khu vực 40 cm2 để vệ sinh trước thí nghiệm Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường Lắc ống nghiệm chứa vi sinh vật máy lắc Giữa chặt ống nghiệm tránh làm rơi Để ống thạch nghiêng gần lửa đèn cồn, dùng ngón út mở nút bơng Tay trái cầm ống nghiệm chứa vi sinh vật, tay phải cầm que cấy, dùng ngón áp út mở nút bơng, hơ miệng ống nghiệm qua lửa để khử trùng Khử trùng que cấy lửa đèn cồn cho đén đầu que cấy chuyển sang màu đỏ Đưa que cấy vào ống nghiệm, chạm đầu que cấy vào thành ống nghiệm để làm nguội trước lấy sinh khối vi sinh vật Dùng que cấy chứa sinh khối vi sinh thực cấy ria bề mặt thạch nghiêng, hơ miệng ống nghiệm qua lửa đèn cồn đậy nút -Nên thực thao tác gần lửa đèn cồn bán kính 6cm -Thao tác nhẹ nhàng tránh làm vỡ thạch -Đường cấy phải cuối ống nghiệm kết thúc gần sát đầu ống nghiệm chứa thạch nghiêng Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường Khử trùng que cấy Dán nhãn cho ống thạch vừa thực cấy ria, bao gói lại để bảo quản -Bao gói, bảo quản cẩn thận tránh nhiễm vi khuẩn khác - Dán nhãn phải ghi đủ thơng số: tên nhóm, ngày phân lập, nồng độ, tên VSV, tên sinh viên, môi trường Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường III KẾT QUẢ Kỹ thuật phân lập Cấy ria Hình ảnh Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường BÀI 9: VI KHUẨN PHÂN GIẢI PHOSPHO I NGUYÊN TẮC Các vi sinh vật đảm nhận chức chuyển hóa phospho vơ thành dạng hịa tan vi khuẩn lưu huỳnh, vi khuẩn nitrat hóa loại vi khuẩn sinh axit lên men nhiều chất khác • Để xác định số lượng vi khuẩn này, người ta thường dùng mơi trường đặc có đường glucose có muối phospho khó tan, thường dùng Ca3(PO4)2 Do kết làm tan phospho mà xung quanh khuẩn lạc hình thành vịng suốt • II TIẾN HÀNH Vi khuẩn phân giải phospho vô khó tan • Pha lỗng mẫu - Cân 10g mẫu cho vào bình tam giác có sẵn 90ml dịch pha loãng hấp khử trùng Lắc cho dung dịch phân bố Hút 1ml dịch huyền phù pipet 1ml hấp khử trùng cho vào ống nghiệm chứa sẵn 9ml dịch pha loãng (đã hấp khử trùng) ta dịch pha lỗng có nồng độ 10-2 - Tiếp tục thực để dịch có độ pha lỗng có 10-3,10-4,10-5 • Cấy mẫu - Hút 0,1ml dịch cấy vào hộp petri chuẩn bị sẵn môi trường độ pha loãng cấy đĩa - Dùng que trang trải mẫu mặt thạch - Úp ngược đĩa petri, ủ nhiệt độ 20-300c 7-14 ngày • Đếm số khuẩn lạc - Chỉ đếm khuẩn lạc hình thành vịng phân giải suốt bao quanh, cịn khuẩn lạc khơng có vịng phân giải bao quanh vi sinh vật phân giải phospho Vi khuẩn phân giải phospho hữu - Pha lỗng mẫu để dịch có độ pha lỗng 10-1,10-2,10-3,10-4 - Chọn nồng độ liên tiếp 10-2,10-3,10-4 - Dùng pipet chuyển 0,1ml dịch cấy vào hộp petri chuẩn bị sẵn mơi trường độ pha lỗng cấy đĩa - Trải mẫu mặt thạch que gạt - Úp ngược đĩa petri, ủ nhiệt độ 20-300C 3-4 ngày - Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường III Đếm khuẩn lạc: đếm khuẩn lạc màu trắng đục có hình trịn, có nếp nhăn khuẩn lạc vi khuẩn phân giải phospho hữu Tính kết KẾT QUẢ Ở độ pha lỗng 10-2 nhóm đếm 156 khuẩn lạc, khuẩn lạc có màu xanh xung quanh có vịng phân giải suốt Tính kết quả: Số tế bào/g =CFU/ml Trong đó: N: số khuẩn lạc có petri V: thể tích mẫu cấy (ml) n: số nghịch đảo nồng độ pha lỗng K: hệ số khơ kiệt IV NHẬN XÉT - - Khi đổ thạch vào hộp petri phải khử trùng xung quanh ( 40 cm2) tay để tránh nhiễm trùng vi sinh vật vào môi trường thạch Khi tiến hành đổ thạch phải thực phạm vi khử khuẩn đèn cồn Ghi nhãn mơi trường nồng độ pha lỗng tránh gây lẫn lộn Do kết thí nghiệm nhóm q dày nên khơng đếm được, nên có sử dụng kết nhóm khác để hồn thiện báo cáo Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường ... lập Cấy ria Hình ảnh Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật môi trường BÀI 9: VI KHUẨN PHÂN GIẢI PHOSPHO I NGUYÊN TẮC Các vi sinh vật đảm nhận chức... loãng + Mỗi lần pha loãng mẫu cần lắc để đảm bảo yêu cầu Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Page 16 Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật mơi trường Phương pháp phân lập + Phương pháp... dung công vi? ??c Hình ảnh minh họa Chuẩn bị ống nghiệm chứa 9ml nước cất, dùng nút không thấm nước giấy báo bọc lại ống nghiệm Sau đó, đem hấp khử trùng ống nghiệm Báo cáo thí nghiệm vi sinh kỹ thuật