Khảo sát khả năng ức chế enzyme αamylase của cao chiết lá cây nhàu (morinda citrifolia l.)

Dien dan Ketnooi.com chia se B ộ• GIÁO DỤC • VÀ ĐÀO TẠO • TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC T ự NHIÊN * * ** LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH SINH HỌC Ệ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ức CHẾ ENZYME a-AMYLASE CỦA CAO CHIẾT LÁ CÂY NHÀU (Morinda citrifolia L.) Cán bô hướng dẫn: TS ĐẨl t h ị x u â n t r a n g KHOA KHÓA HỌC T ự NHIÊN B ộ MÔN SINH HỌC Cần Thơ, 2013 sinh viên thực hiện: LÊ BÁ TƯỚC MSSV: 3097459 LỚP: SINH HỌC KHÓA 35 Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 PHÀN KÝ DUYÊT CÁN B ộ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN TH ựC HIỆN Đái Thị Xuân Trang Lê Bá Tước DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐÒNG (Ký tên) Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 L Ờ I CẢM TẠ Trong trình thực đề tài: “Khảo sát khả ức chế enzyme aamylase cao chiết Nhàu (Morỉnda citrifolm L.)”, xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: Ban lãnh đạo Khoa Khoa Học Tự Nhiên, quý Thầy Cô môn Sinh Học-Khoa Khoa Học Tự Nhiên tận tình truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện trường Đặc biệt em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Đái Thị Xuân Trang cán hướng dẫn đề tài tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến cho em trình thực đề tài Quí thầy cô, cán Phòng thí nghiệm Sinh học, phòng thí nghiệm Hóa Học Khoa Khoa Học Tự Nhiên, phòng thí nghiệm Sinh Học Phân Tử Viện Nghiên Cứu Và Phát Triển Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện thuận lợi thời gian điều kiện thực tập Phòng thí nghiệm Tập thể lớp Sinh Học Khóa 35 động viên đóng góp ý kiến cho em trình thực luận văn Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình Gia đình động viên suốt trình học tập nghiên cứu Tạo điều kiện tốt cho học tập Với kiến thức hạn chế chắn không tránh khỏi thiếu sót, mong quý thầy cô góp ý để báo cáo hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 20 tháng năm 2013 Sinh viên thực Lê Bá Tước Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày luận văn tốt nghiệp trung thực chưa công bố công trình luận văn trước Tác giả luận văn Lê Bá Tước Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT i LỜI CẢM TẠ iii LỜI CAM K ẾT iv MỤC LỤ C V DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix DANH MỤC TỪ V ẾT TẮ T X TÓM LƯỢC xi PHẦN 1: GIỚI T H ỆU PHẦN 2: LƯỢC KHẢO TÀI L Ệ U Đại cương bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) 1.1 Định nghĩa bệnh đái tháo đường 1.2 Phân loại bệnh đái tháo đường 1.2.1 Bệnh đái tháo đường loại 1: đái tháo đường phụ thuộc insulin 1.2.1 Bệnh đái tháo đường loại 2: đái tháo đường không phụ thuộc insulin 1.3 Tiêu chuẩn để chẩn đoán bệnh đái tháo đường 1.4 Điều trị 1.6 Tình hình nghiên cứu chữa đái tháo đường thảo dược Enzyme a-amylase 2.1 Giới thiệu chung a-amylase 2.2 Thành phần hệ enzyme amylase 2.3 Đặc tính enzym a-amylase 2.4 Cơ chế tác dụng enzym a-amylase phản ứng thủy phân Sơ lược Nhàu 4.1 Phân loại 4.2 Đặc điểm hình thái phân bố 4.3 Thành phần hóa học có nhàu 10 4.3 Tác dụng dược lý Nhàu 10 PHẦN III: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 12 Luận tốt nghiệp Sinh học K35 Phương tiện 12 1.1 Địa điểm thời gian thực 12 1.2 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 12 1.2.1 Mau vật 12 1.2.2 Hóa chất 12 1.2.3 Dụng c ụ 12 Phương pháp thí nghiệm 12 2.1 Phương pháp chiết tách cao 12 2.1.1 Ly trích cao Nhàu dung môi ethanol 12 2.1.2 Tách phân đoạn cao ethanol Nhàu .13 2.2 Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao ethanol Nhàu (Morinda citrifolia L.) 15 2.3 Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao petroleum ether Nhàu (Morinda citrifolia L.) 16 2.4 Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate Nhàu (Morinda citrifolia L.) 16 Phương pháp xử lý kết 17 PHẦN IV: KẾT QUẢ THẢO VÀ THẢO LUẬN .18 Kết ly trích tách phân đoạn cao Nhàu 18 1.1 Độ ẩm mẫu .18 1.2 Kết ly trích cao ethanol 18 1.3 Kết tách phân đoạn cao từ cao ethanol Nhàu 18 Kết thí nghiệm khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao ethanol Nhàu (Morinda citrifolia L.) 19 Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao petroleum ether Nhàu (Morinda citrifolia L ) 22 Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate Nhàu (Morinda citrifolia L ) 24 So sánh khả ức chế enzyme a-amylase cao ethanol, cao petroleum ether cao ethyl acetate .27 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 vi Luận tốt nghiệp Sinh học K35 Kết luận 29 Kiến nghị 29 TÀI L Ệ U THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC 32 vii Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 DANH SÁCH BẢNG Bảng trang Bảng 1: Độ ẩm Nhàu 18 Bảng 2: Kết tách phân đoạn cao 18 Bảng 3: Khả ức chế enzyme a-amylase cao Nhàu 21 Bảng 4: Khả ức chế enzyme a-amylase cao PE 23 Bảng 5: Khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate Nhàu 25 Bảng : So sánh giá trị nồng độ ức chế 50% (IC50) cao ethanol, cao petroleum ether cao ethyl acetate 27 Bảng 7: So sánh lượng chất ức chế loại cao với lượng Acarbose 27 Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 DANH SÁCH HÌNH Hình trang Hình 1: Cây Nhàu Hình 2: Tách phân đoạn cao 13 Hình 3: Cô quay dịch trích thu sau lắt cao với dung m ôi 14 Hình 4: Sơ đồ tách phân đoạn cao từ cao ethanol nhàu 14 Hình 5: Đường chuẩn khả ức chế Acarbose đến hoạt động enzyme a-amylase 20 Hình : Khả ức chế cao ethanol Nhàu đến hoạt động enzyme aamylase 22 Hình 7: Khả ức chế enzyme a-amylase cao petroleum ether Nhàu 24 Hình : Khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate nhàu 26 Sình học K35 Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BuOH: Butanol DMSO: Dimethyl sulfoxid ĐTĐ: Đái tháo đường EA: Ethyl acetate IC 50: Nồng độ ức chế 50% PE: Petroleum ether Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 Nồng độ cao (mg/ml) Hình 7: Khả ức chế enzyme a-amylase cao Petroleum ether Nhàu Kết trình bày Hình cho thấy tăng nồng độ cao PE từ 10 mg/ml lên 20 mg/ml 30 mg/ml hiệu ức chế tăng tuyến tính theo nồng độ caoễNhưng tăng nồng độ cao PE Nhàu từ 30 mg/ml lên 40 mg/ml hiệu ức chế tăng khác biệt ý nghĩa thống kê hiệu ức chế cao đạt 20,39 ± 0,38% 4ế Khảo sát khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate Nhàu (Morinda citrifolia L.) Cao ethyl acetate (EA) cao tách phân đoạn thứ hai sau cao petroleum ether Dung môi ethyl acetate dung môi có độ phân cực cao petroleum ether chất tan dung môi hầu hết chất có độ phân cực trung bình Để đánh giá hiệu ức chế cao EA Nhàu, kết thí nghiệm tính toán theo nồng độ Acarbose dựa vào phương trình đường chuẩn Acarbose y = l,1386x-13,975 Kết khảo sát trình bày Bảng Hình 24 Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 Bảng 5: Khả ức chế enzyme a-amylase cao ethyl acetate Nhàu Nông độ cao Phần trăm enzyme Nông độ Acarbose (mg/ml) bị ức chế (%) tương đương (pM) l, 68a + 0,09 2,5 1,1T + 0,04 2,75 l,79a + 0,01 l,77a + 0,11 3,25 ll,87b + 0,50 22,70 3,5 33,8C+ 1,38 41,96 3,75 54,74d + 0,10 60,35 69,16e± 0,06 73,02 4,25 79,23f + 0,79 81,86 4,5 81,8® + 0,53 84,12 Ghi chú: Các giá trị cỏ chữ cải theo sau khác biệt ỷ nghĩa Mức độ ỷ nghĩa 5% Các nghiệm thức nồng độ cao 2,5 mg/ml, 2,75 mg/ml, mg/ml không cho khả ức chế enzyme a-amylase Ở nồng độ cao enzyme hoạt động bình thường Hiệu suất phản ứng nghiệm thức đạt tối đa Kết thống kê cho thấy phần trăm enzyme bị ức chế ba nồng độ 1,77% + 0,04, 1,79 + 0,01% 1,77 + 0,11% khác biệt ý nghĩa thống kê so với phần trăm enzyme bị ức chế nghiệm thức cao EA 1,68 + 0,09 Ở nghiệm thức nồng độ cao EA từ 3,25 mg trở cao có hiệu ức chế Hiệu ức chế nồng độ 3,25 mg/ml, 3,5 mg/ml, 3,75 mg/ml, mg/ml, 4,25 mg/ml 4,5 mg/ml 11,87 + 0,50%, 33,8 + 1,38%, 54,74 + 0,10%, 69,16+ 0,06%, 79,23 + 0,79%, 81,8 + 0,53% Nồng độ Acarbose tương ứng với nồng độ cao EA tính theo phương trình đường chuẩn Acarbose 22,70 |iM, 41,96 |iM, 60,35 |iM, 73,02 |iM, 81,86 |iM 84,12 |iM 25 Luận văn tốt nghiệp Sinh học K35 90 79.23Í 80 81.8g - ỉr - 69.16e £ 70 'W ' ^