NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA ALPHITONIN, MAESOPSIN VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT CỦA CHÚNG

Header Page of 148 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… DIỆP THỊ LAN PHƯƠNG NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA ALPHITONIN, MAESOPSIN VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT CỦA CHÚNG Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 62.44.01.14 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HOÁ HỌC HÀ NỘI – 2015 Footer Page of 148 Header Page of 148 Công trình hoàn thành tại: Học viện Khoa học Công nghệ – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN QUỐC VƯỢNG PGS.TS TRỊNH THỊ THỦY Phản biện 1: PGS TS Phan Minh Giang Phản biện 2: PGS TS Trần Việt Hùng Phản biện 3: PGS TS Trần Thu Hương Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ, họp Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi 09 00’, ngày 25 tháng 01 năm 2016 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Việt Nam Footer Page of 148 Header Page of 148 A GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Các thuốc tác động đến hệ miễn dịch thuốc có giá trị kích thích hệ miễn dịch hay ức chế hệ miễn dịch điều hòa miễn dịch Với hoạt tính kích thích hệ miễn dịch, chúng tăng sức đề kháng thể với hoạt tính ức chế miễn dịch chúng làm thể thích nghi dần với môi trường sống Các thuốc kích thích miễn dịch sử dụng phòng điều trị nhiễm virus HIV, viêm gan B, viêm phổi, lao, cúm gà…(Ví dụ interferon alpha, beta gamma….) Các thuốc ức chế miễn dịch sử dụng sau phẫu thuật để tránh đào thải quan ghép như: gan, thận, da, xương…, dùng để điều trị bệnh mẫn hệ miễn dịch bệnh nhược cơ, luput ban đỏ, thấp khớp thể nhẹ, tiểu đường…(ví dụ cyclosporine, prednisone, azathioprin …) Những loại thuốc tổng hợp, sinh tổng hợp có nguồn gốc từ thiên nhiên, đó, loại thuốc sau ưa chuộng sử dụng tác dụng phụ Ở nước ta, loại thuốc ức chế miễn dịch phải nhập hoàn toàn, giá thành thuốc cao gánh nặng khó vượt qua bệnh nhân, người có nhu cầu sử dụng Các kết nghiên cứu nhóm nghiên cứu GS Trần Văn Sung cho thấy hai hợp chất alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (TAT6) maesopsin 4-O-β-D-glucopyranoside (TAT2) phân lập từ dịch chiết butanol Chay Bắc (Artocarpus tonkinensis A Chev.) có hoạt tính ức chế miễn dịch yếu cyclosporin A không gây tác dụng phụ, cyclosporin A gây độc cho quan nội tạng, gan, thận, tiêu hóa, thần kinh… Các hợp chất auronol auronol glycoside nhóm chất gặp có hàm lượng thấp tự nhiên, lần giới hoạt tính sinh học hợp chất auronol glucoside công bố Hoạt tính ức chế miễn dịch hai auronol glucoside TAT6 TAT2 giả thiết phần đường phân tử có khả thấm Footer Page of 148 Header Page of 148 vào màng tế bào phát huy tác dụng aglycone Tương tự, hoạt chất dược chứa nhóm nitrile (-CN), đưa vào sử dụng lâm sàng ngày nhiều Do nhóm phân tử nhỏ có khả tạo liên kết hydro với amino acid, protein H2O nên nhóm nitrile (-CN) có khả thấm qua màng tế bào; số trường hợp, nhóm có tác dụng thay phần đường phân tử glucoside Nhằm tìm kiếm hợp chất có hoạt tính hệ miễn dịch, từ phát mở đường auronol glucoside tính chất hợp chất mang nhóm nitrile chọn đề tài: “Nghiên cứu tổng hợp khảo sát hoạt tính sinh học alphitonin, maesopsin số dẫn xuất chúng” Đối tượng nghiên cứu nhiệm vụ luận án Đối tượng nghiên cứu: hợp chất Alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside, Maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside, alphitonin maesopsin Các nhiệm vụ luận án - Phân lập hợp chất alphitonin-4-O-β-D-glucoside (TAT6) maesopsin 4-O-β-D-glucoside (TAT2) từ Chay Bắc (Artocapus tonkinensis A Chev.) - Nghiên cứu tổng hợp auronol alphitonin maesopsin số dẫn xuất nitrile chúng - Nghiên cứu phản ứng glucoside hóa tổng hợp alphitonin-4-O-β-Dglucoside - Khảo sát hoạt tính kích thích tế bào lympho hoạt tính độc tế bào sản phẩm tổng hợp Ý nghĩa khoa học đóng góp luận án 3.1 Ý nghĩa khoa học luận án Đề tài nghiên cứu phân lập, tổng hợp khảo sát hoạt tính sinh học auronol, auronol glucoside lớp chất gặp có hàm lượng thấp tự nhiên, theo định hướng ức chế miễn dịch từ Footer Page of 148 Header Page of 148 Chay Bắc Bộ, thuốc dân gian sử dụng thành công điều trị số bệnh mẫn hệ miễn dịch nhược cơ, luput ban đỏ… 3.2 Những đóng góp luận án Đây công trình nghiên cứu thành công nội dung: - Đã xây dựng quy trình tổng hợp hợp chất alphitonin-4-O-βD-glucopyranoside từ alphitonin hợp chất bán tổng hợp từ taxifolin flavonol phân lập từ rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Wall ex Roxb.) Kết nghiên cứu tổng hợp thành công alphitonin-4O-β-D-glucopyranoside cho phép tiến hành nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất tổng hợp - Đã nghiên cứu phản ứng tổng hợp toàn phần methoxyauronol alphitonin đưa phương pháp tổng hợp ngắn gọn aurone, với hiệu suất cao, chất trung gian chìa khóa tổng hợp toàn phần auronol - Đã nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất nitrile alphitonin maesopsin auronol gặp tự nhiên Trong maesopsin (Ag-TAT2) phân lập từ Chay Bắc Bộ (Artocapus tonkinensis A Chev.) Ngoài tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol glucoside maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside - Đã khảo sát hoạt tính kích thích tế bào lympho hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tổng hợp dòng tế bào thường NIH/3T3 dòng tế bào ung thư MCF7, LU-1, KB HepG2 Kết khảo sát cho thấy dẫn xuất alphitonin-4-O-acetonitrile có hoạt tính kích thích tế bào lympho mạnh với SC50 = 11,07 µg/ml; hầu hết hợp chất thu có hoạt tính ức chế yếu với tế bào thường dòng tế bào ung thư kiểm định Bố cục luận án Luận án gồm 172 trang với 20 bảng số liệu, 128 hình, 145 tài liệu tham khảo phân bố sau: Mở đầu (2 trang), Chương Tổng quan (38 trang), Chương Đối tượng, mục tiêu phương pháp nghiên Footer Page of 148 Header Page of 148 cứu (5 trang), Chương Thực nghiệm (29 trang), Chương Kêt thảo luận (79 trang), Kết luận kiến nghị (2 trang), Các công trình công bố liên quan đến luận án (1 trang), Tài liệu tham khảo (16 trang) phụ lục phổ B NỘI DUNG LUẬN ÁN CHƯƠNG TỔNG QUAN Trên sở nghiên cứu tài liệu, phần tổng quan luận án trình bày nội dung sau: - Các hợp chất flavonoid - Hoạt tính sinh học aurone auronol - Tổng hợp aurone - Tổng hợp auronol - Các phương pháp tổng hợp glycoside - Hợp chất chứa nitrile hóa dược phương pháp tổng hợp dẫn xuất nitrile CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, MỤC TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Maesopsin-4-O-β-Dglucopyranoside (116) Alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside (125) Maesopsin (98) Alphitonin (82) 2.2 Mục tiêu Nghiên cứu tổng hợp auronol alphitonin (Ag-TAT6), maesopsin (Ag-TAT2), auronol glucoside alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside Footer Page of 148 Header Page of 148 (TAT6) maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside (TAT2) số dẫn xuất nitrile chúng Khảo sát hoạt tính sinh học chất tổng hợp 2.3 Phương pháp nghiên cứu Chương trình bày phương pháp sử dụng trình nghiên cứu bao gồm: phương pháp phân lập hợp chất, phương pháp tổng hợp hữu cơ bản, phương pháp tổng hợp hữu đặc thù, phương pháp theo dõi trình phản ứng, phương pháp tinh chế, phương pháp phổ xác định cấu trúc, phương pháp nuôi cấy tế bào in vitro, xác định hoạt tính gây độc tế bào tế bào in vitro phương pháp phân lập tế bào lympho, xác định khả kích thích tế bào lympho CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 3.1 Phân lập tổng hợp auronol auronol glucoside 3.1.1 Phân lập maesopsin 4-O-β-D-glucopyranoside (116) alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) ; điều chế maesopsin (98) * Phân lập maesopsin 4-O-β-D-glucopyranoside (116) alphitonin4-O-β-D-glucopyranoside (125) Hai hợp chất maesopsin 4-O-β-D-glucopyranoside (116) alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) phân lập từ 10 kg Chay Bắc phương pháp thường quy sử dụng SKC diaion, silica gel pha thường, pha đảo sephadex thu g 116 0,03 g 125 Chất 116 ESI-MS (m/z): 449 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, DMSO): δ (ppm) 9,14 (OH), 7,56, 7,52 (1 × OH), 6,93/6,91 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2′,6′), 6,56/6,54 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′,5′), 6,00 (1H, d, J = 1,7 Hz, H-5), 5,93 (1H, d, J = 1,7 Hz, H7), 5,20, 5,13, 5,06, 5,01 (4 × OH), 4,97/4,90 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1′′), 4,59/4,50 (1 × OH), 3,64/3,63 (1H, br m, Ha-6′′), 3,48 (1H, m, Hb-6′′), 3,29 - 3,20 (m, H-3′′, H-5′′, H-2′′, H-4′′), 2,96 2,90 (2H, × d, J = 13,5 Hz, CH2-10) Footer Page of 148 Header Page of 148 C-NMR (125 MHz, DMSO): δ (ppm) 192,8/192,4 (C=O), 171,9 (C-8), 168,5 (C-6), 156,8/156,7 (C-4), 155,9 (C-4′), 131,3 (C-2′), 124,2/124,17(C-1′), 114,7/114,6 (C-3′), 105,6/105,5 (C-2), 102,0/101,8 (C-9), 99,5/99,3 (C-1′′), 95,8/95,3 (C-5), 91,7/91,5 (C-7), 77,2/77,1 (C5′′), 76,8/76,7 (C-3′′), 73,0/72,9 (C-2′′), 69,3/69,2 (C-4′′), 60,4/60,3 (C6′′), 40,5 (C-10) 13 Chất 125 ESI-MS (negative): m/z = 465 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,66/6,67 (1H, × d, J = 2,5 Hz, H-2′), 6,57/6,55 (1H, × d, J = 8,5 Hz, H- 5′), 6,52/6,51 (1H, × dd, J = 2,5, 8,5 Hz, H-6′), 6,00/5,98 (1H, × d, J =1,2 Hz, H-5), 5,88/5,87 (1H, × d, J = 1,2 Hz, H-7), 4,88 (1H, tín hiệu chồng chập, H-1′′), 3,88 (1H, br d, J = 12,5 Hz, Hb-6′′), 3,70 (1H, m, Ha-6′′), 3,53 (1H, dd, J = 8,0, 9,0 Hz, H-2′′), 3,48 (1H, m, H-3′′), 3,43 (2H, m, H-4′′ H-5′′), 3,04 (2H, m, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,0/195,8 (C=O), 174,9/174,7 (C-8), 174,8/174,6 (C-6), 158,4/158,3 (C-4), 145,6/145,5 (C-3′), 145,1 (C-4′), 126,5/126,4 (C-1′), 123,1/123,0 (C-6′), 118,7/118,6 (C-2′), 115,9/115,8 (C-5′), 107,6/107,5 (C-2), 102,4/102,3 (C-1′′), 101,7/101,5 (C-9), 99,0/98,3 (C-5), 94,0/93,8 (C-7), 78,3/78,2 (C-5′′), 77,3 (C-3′′), 74,1/74,0 (C-2′′), 71,1 (C-4′′), 62,2 (C-6′′), 42,3/42,2 (C10) * Điều chế maesopsin Kết phân lập hai hợp chất auronol glucoside alphitonin-4-O-βD-glucopyranoside (125) maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside (116) từ Chay Bắc (A Tonkinensis) cho thấy hợp chất auronol glucoside maesopsin-4-O-β-D-Glc (116) có hàm lượng lớn Chay Bắc (> 0,07%) Vì hợp chất maesopsin-4-O-β-D-Glc (116) sử dụng nguồn cung cấp auronol maesopsin (98) Footer Page of 148 Header Page of 148 Hình 3.2 Sơ đồ tổng hợp maesopsin (98) Maesopsin (98) ESI-MS (m/z): 286,9 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 7,02 (2H, d, J = 9,0 Hz, H2′, H-6′), 6,59 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 5,78 (1H, br s, H-7), 5,74 (1H, br s, H-5), 3,08 (2H, brs, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,8(C=O), 173,7 (C-8), 171,0 (C-6), 159,7 (C- 4), 157,2 (C- 4′), 132,5 (C-2′, C-6′), 125,9 (C-1′), 115,7 (C-3′, C-5′), 107,4 (C-2), 103,1 (C-9), 96,8 (C-5), 91,1 (C-7), 42,1 (C-10) 3.1.2 Bán tổng hợp alphitonin Alphitonin (82) nghiên cứu tổng hợp theo phương pháp Kielhmann phản ứng đồng phân hóa taxifolin tác dụng nhiệt Phương pháp thể nhiều ưu điểm nguyên liệu từ nguồn thực vật nước, phản ứng có bước sử dụng dung môi nước thân thiện với môi trường Hợp chất đầu taxifolin điều chế từ astilbin có hàm lượng cao (~ 1%) rễ Thổ phục linh (S glabra) Các bước phân lập astilbin, điều chế taxifolin phản ứng đồng phân hóa taxifolin trình bày sơ đồ sau: Hình 3.3 Sơ đồ tổng quát bán tổng hợp alphitonin (82) Footer Page of 148 Header Page 10 of 148 Astilbin (94) FT-IR max (cm-1): 3427, 3263, 2912, 1640, 1603, 1519, 1476, 1363, 1301, 1177, 1070, 977 H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,98 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′), 6,86 (1H, dd, J = 8,0 , 2,0 Hz, H-6′), 6,83 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 5,92 (1H, d , J = 2,0 Hz, H-8), 5,10 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-2), 4,60 (1H, d, J = 10,5 Hz, H-3), 4,28 (1H, dq, J = 6,0, 9,6 Hz, H-5′′), 4,07 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-1′′), 3,68 (1H, dd, J = 3,0 , 9,6 Hz, H-3′′), 3,56 (1H, dd, J = 1,5 , 3,0 Hz, H-2′′), 3,3 (1H, m, H-4′′), 1,21 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6′′) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,0 (C=O); 168,5 (C-7); 165,5 (C-5); 164,1 (C-9); 147,4 (C-4′); 146,5 (C-3′), 129,2 (C-1′), 120,5 (C-6′); 116,3 (C-5′), 115,5 (C-2′); 102,5 (C-10); 102,1 (C-1′′); 97,4 (C-6); 96,2 (C-8); 83,9 (C-2); 78,5 (C-3); 73,8 (C-4′′); 72,2 (C3′′); 71,8 (C-2′′); 70,5 (C-5′′); 17,8 (C-6′′) Taxifolin (81) FT-IR: νKBr (cm-1): 3416, 3195, 2854, 1644, 1614, 1479, 1267, 1169 ESI-MS (m/z ): 303 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,98 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′); 6,87 (1H, dd, J = 2,0 , 8,0 Hz; H-6′); 6,82 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′); 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6); 5,90 (1H, d, J = 2,0 Hz; H-8); 4,93 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-2); 4,52 (1H, d, J = 11,5 Hz, H-3) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 198,4 (C=O); 168,7 (C-5), 165,3 (C-7), 164,5 (C-9); 147,2 (C-3′), 146,3 (C-4′), 129,9 (C-1′), 120,9 (C-6′); 116,1(C-5′), 115,9 (C-2′), 101,9 (C-10); 97,3 (C-6); 96,3 (C-8), 85,1 (C-2); 73,7 (C-3) Alphitonin (82) ESI-MS (negative): m/z = 303 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, Acetone-d6): δ (ppm) 9,65 (2H, br s, × OH), 7,70 7,66 (2H, × br s, × OH), 6,72 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 6,61 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,54 (1H, d, J = 2,0 , 8,0 Hz, H-6′), 6,43 (1H, br s, OH-2), 5,86 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5), 5,82 (1H, d, J = 1,5 Hz, H7), 3,05 (1H, d, J = 13,5 Hz, Hb-10), 3,02 (1H, d, J = 13,5 Hz, Ha-10) Footer Page 10 of 148 Header Page 17 of 148 Chất 124: Alphitonin-4-O-β-D-tetraacetyl glucopyranoside H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,66/6,64 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-2′), 6,57/6,53 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,52/6,48 (1H, dd, J = 1,5, 8,0 Hz, H-6′), 6,02/6,01 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-5), 5,96/5,93 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-7), 5,35 (1H, t, J = 9,0 Hz, H-3′′), 5,32/5,22 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1′′), 5,23 (1H, dd, J = 8,0 , 9,0 Hz, H-2′′), 5,11 (1H, m, H-4′′), 4,33/4,31 (1H, dd, J = 5,0, 12,0 Hz, Hb-6′′), 4,18/4,11 (1H, dd, J = 1,7, 12,0 Hz, Ha-6′′), 4,09/4,02 (1H, m, H-5′′), 3,02 (2H, m, H-10), 2,00 2,10 (12H, × OAc) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 194,9 (C=O), 174,3 (C-8), 173,5 (C-6), 172,4, 71,6, 171,4 171,3 (4 × OAc), 157,7/157,5 (C-4), 145,6 (C-3′), 145,1 (C-4′), 126,5 (C-1′), 123,1/122,9 (C-6′), 118,8/118,7 (C-2′), 115,9/115,7 (C-5′), 107,4/107,1 (C-2), 103,0/102,9 (C-9), 100,1/99,4 (C-5), 99,8 (C-1′′), 94,6/94,5 (C-7), 74,1 (C-3′′), 73,2/73,1 (C-5′′), 72,4/72,3 (C-2′′), 69,7/69,6 (C-4′′), 63,0/62,9 (C-6′′), 42,3/42,2 (C-10), 20,8 , 20,7 , 20,6 20,5 (4 × OAc) Hợp chất alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) tổng hợp phân lập từ chay Bắc Bộ có số liệu phổ trùng 3.1.5 Tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol maesopsin, alphitonin maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside Hình 3.9 Sơ đồ tổng hợp dẫn xuất nitrile chất 82 98 Hình 3.10 Tổng hợp dẫn xuất nitrile chất 116 Footer Page 17 of 148 15 Header Page 18 of 148 Chất 126: Alphitonin-4-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 342 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 8,65 (2H, br s, OH), 7,51 (1H, br s, OH), 6,54 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2′), 6,49 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,36 (1H, dd, J = 2,0 , 8,0 Hz, H-6′), 5,98 (1H, br s, H-5), 5,96 (1H, br s, H-7), 5,19 5,13 (2H, × d, J = 16,0 Hz, OCH2-CN), 2,90 2,82 (2H, × d, J = 14,0 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 192,4 (C=O), 172,3 (C8), 169,4 (C-6), 155,5 (C-4), 144,4 (C-3′), 143,8 (C-4′), 124,6 (C-1′), 121,2 (C-6′), 117,8 (C-2′), 116,0 (CN), 115,0 (C-5′), 105,9 (C-2), 101,3 (C-9), 94,4 (C-5), 92,3 (C-7), 53,5 (O-CH2-CN), 40,7 (C-10) Chất 127: Maesopsin-4-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 326 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 9,12 (1H, br s, OH), 7,49 (1H, br s, OH), 6,91 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2′, H-6′), 6,53 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 5,91 (1H, br s, H-5), 5,87 (1H, br s, H-7), 5,17 5,12 (2H, × d, J = 16,5, O-CH2-CN), 2,93 2,87 (2H, × d, J = 13,5 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO-d6): δ (ppm) 191,8 (C=O), 172,2 (C-8), 170,5 (C-6), 155,8 (C-4′), 155,5 (C-4), 131,2 (C-2′, C-6′), 124,1 (C-1′), 116,1 (CN), 114,6 (C-3′, C-5′), 105,8 (C-2), 100,6 (C-9), 94,9 (C-5), 92,4 (C-7), 53,4 (O-CH2-CN), 40,5 (C-10) Chất 128: Alphitonin-4,6-di-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 417 [M+2H2O-H]ˉ, 381 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 6,64 (1H, d, J = 2,0 Hz, H2′), 6,55 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 6,51 (1H, dd, J = 2,0 , 8,0 Hz, H-6′), 6,38 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-7), 6,24 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-5), 5,00 – 5,12 (4H, m, × O-CH2-CN), 3,10 3,06 (2H, d, J = 13,5, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,6 (C=O), 174,7 (C-8), 168,4 (C-6), 157,0 (C-4), 145,6 (C-3′), 145,2 (C-4′), 125,9 (C-1′), 123,1 (C-6′), 118,7 (C-2′), 116,0, (CN), 115,9 ( C-5′, CN), 108,1 (C-2), 106,1 (C-9), 95,9 (C-5), 92,7 (C-7), 55,0 (O-CH2-CN), 54,8 (O-CH2-CN), 42,2 (C-10) Footer Page 18 of 148 16 Header Page 19 of 148 Chất 129: Maesopsin-4,6-di-O-acetonitrile ESI-MS (negative): m/z = 365 [M-H]ˉ H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 7,01 (2H, d, J = 8,5 Hz, H2′, H-6′), 6,58 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 6,39 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-7), 6,24 (1H, d, J = 1,8 Hz, H-5), 5,00 – 5,10 (4H, m, × O-CH2CN), 3,16 3,11 (2H, d, J = 14,0 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD): δ (ppm) 196,5 (C=O), 174,6 (C-8), 168,4 (C-6), 157,3 (C-4′), 157,0 (C-4), 132,5 (C-2′, C-6′), 125,2 (C-1′), 115,9 (CN), 115,8 (C-3′, C-5′, CN), 108,1 (C-2), 106,1 (C-9), 96,01 (C5), 92,7 (C-7), 55,0 (O-CH2-CN), 54,8 (O-CH2-CN), 41,9 (C-10) Chất 130: Maesopsin-6-O-cyanomethyllene-4-O-β-Dglucopyranoside H-NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 7,00 (2H, d, J = 8,5 Hz, H2′, H-6′), 6,57 (2H, dd, J = 3,5 , 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 6,31 (1H, br s, H5), 6,29 (1H, br s, H-7), 5,04 (2H, s, O-CH2-CN), 4,97 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-1′′), 3,90 (1H, br d, J = 12 Hz, Ha-6′′), 3,66 (1H, m, Hb-6′′), 3,59 – 3,42 (4H, m, H-2′′, 5′′, 3′′, 4′′), 3,15 3,11 (2H, × d, J = 15,5 Hz, CH2-10) 13 C-NMR (125 MHz, , CD3OD): δ (ppm) 197,7 (C=O), 174,3 (C-8), 168,8 (C-6), 158,1/158,0 (C-4), 157,3 (C-4′), 132,5 (C-2′, C-6′), 125,2 (C-1′), 116,1 (CN), 115,8 (C-3′, C-4′), 108,0 (C-2), 106,0/105,8 (C-9), 101,8 (C-1′′), 97,1/96,8 (C-5), 92,7 (C-7), 78,6/78,5 (C-5′′), 77,5/77,4 (C-3′′), 74,1 (C-2′′), 71,3 (C-4′′), 62,4/62,3 (C-6′′), 54,7 (O-CH2-CN), 42,1/41,9 (C-10) 3.2 Khảo sát hoạt tính ức chế miễn dịch hoạt tính độc tế bào chất tổng hợp Khảo sát hoạt tính kích thích tế bào lympo hoạt tính độc tế bào dòng tế bào thường NIH/3T3 dòng tế bào ung thư: ung thư vú MCF7, ung thư phổi LU-1, ung thư biểu mô KB ung thư gan HepG2 thực phòng thử nghiệm sinh học - Viện Công nghệ sinh học - Viện hàn lâm Khoa học công nghệ Việt Nam Footer Page 19 of 148 17 Header Page 20 of 148 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Phân lập tổng hợp auronol auronol glucoside 4.1.1 Hai hợp chất auronol glucoside maesopsin-4-O-β-Dglucopyranoside (116) alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) * Hai hợp chất auronol glucoside 116 125 Các số liệu phổ chất 116 125 cho tín hiệu phù hợp với cấu trúc phân tử liệu phổ công bố * Điều chế auronol maesopsin Thủy phân 116 (5 g) HCl loãng điều kiện đun hồi lưu nhẹ methanol thu maesopsin với hiệu suất 75% Phổ NMR auronol 98 cho tín hiệu proton carbon khung auronol không tín hiệu phần đường ta không thấy xuất tín hiệu kép phổ NMR Ở vùng trường thơm, phổ 1H-NMR cho cặp doublet H 7,01 (H-2′, H-6′) 6,59 (H-3′, H-5′) với số tương tác Jortho = 8,5 Hz, trường cao tín hiệu singlet tù H 5,78 (1H, H-5) 5,74 (1H, H-7) Phổ 13CNMR cho 15 tín hiệu 15 carbon khung auronol: gồm 12 carbon thơm vòng A B, tín hiệu carbon thơm liên kết với oxy C 173,9 (C-8), 171,0 (C-6), 159,9 (C-4), 157,2 (C-4′); tín hiệu carbon methine thơm C 132,5 (C-2′, C-6′), 115,7 (C-3′, C-5′) C 96,8 , 91,1 (C-5, C-7), tín hiệu carbon thơm bậc C 125,9 (C-1′) 103,1 (C-9); tín hiệu carbon vòng C C 196,8 (3-C=O) carbon hemicetal C 107,0 (C-2); trường cao tín hiệu carbon methylene C-10 C 42,1 Phổ HSQC cho tương tác C-H trực tiếp HMBC cho tương tác xa proton CH2-10 (3,08 ppm)/C-2 (107,0 ppm)/C-1′(125,9 ppm)/C-2′,6′ (132,5 ppm)/C-3 (196,8 ppm), với độ chuyển dịch thấp bất thường carbon C-8 (173,9 ppm) ảnh hưởng sức căng vòng (vòng C) chứng minh T T Thuy, C Kamperdick, P.T Ninh, T P Lien, T T P Thao, T V Sung, “Immunosuppressive auronol glycosides from Artocarpus tonkinensis”, Pharmazie, 2004, 59 (4), 297-300 Footer Page 20 of 148 18 Header Page 21 of 148 cấu trúc khung auronol chất 98 Phổ khối ESI-MS chất 98 cho pic ion âm giả phân tử m/z = 287 [M-H]ˉ phù hợp với số khối công thức phân tử C15H12O6 4.1.2 Bán tổng hợp alphitonin * Phân lập astilbin từ rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Wall ex Roxb.) Với mục tiêu tìm nguồn nguyên liệu cho việc xây dựng quy trình tổng hợp hợp chất auronol khảo sát số tỉnh, thành phố miền Bắc Thổ phục linh Trung Quốc bán phố Lãn Ông Hà Nội Kết khảo sát hàm lượng tách astilbin cho thấy hàm lượng astilbin rễ Thổ phục linh Việt Nam tỉnh cao từ 0,8-1,1% so với trọng lượng mẫu củ khô (trừ vùng Sơn La 0,74%) cao hẳn so với hàm lượng astilbin rễ Thổ phục linh Trung Quốc bán Hà Nội (0,3%) Chúng sơ khảo sát trữ lượng vùng lấy mẫu cho thấy Tuyên Quang Hà giang tỉnh khả thu mua với lượng lớn Thổ phục linh Kết thu sở cho việc khai thác sử dụng nguồn dược liệu quý nước ta Từ 10 kg mẫu rễ thổ phục linh khô thu Tuyên Quang phân lập 100 g astilbin (95%) cung cấp nguồn nguyên liệu cho điều chế auronol alphitonin * Điều chế taxifolin từ astilbin Taxifolin (C15H22O7, 81) thu từ thủy phân astilbin nguồn nguyên liệu cho việc nghiên cứu bán tổng hợp alphitonin Từ astilbin tương đối đạt 95% thủy phân HCl/MeOH theo phương pháp thông thường Sản phẩm thủy phân phân lập kết hợp SKC kết tinh thu taxifolin Cấu trúc sản phẩm xác định phương pháp phổ phù hợp với cấu trúc phân tử liệu phổ taxifolin công bố * Phản ứng đồng phân hóa taxifolin cho alphitonin Chúng khảo sát điều kiện nhiệt độ, dung môi thời gian ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng đồng phân hóa taxifolin Footer Page 21 of 148 19 Header Page 22 of 148 Kết cho thấy phản ứng đồng phân hóa taxifolin cho hiệu suất cao ổn định điều kiện dung môi 1mmol taxifolin/7ml H2O với thời gian phản ứng 95 nhiệt độ dầu cấp nhiệt 155oC, hiệu suất alphitonin đạt 65% Kết hữu ích cho việc nghiên cứu bán tổng hợp alphitonin từ taxifolin lượng cân lớn đáp ứng nhu cầu nghiên cứu chuyển hóa thử hoạt tính alphitonin Tương tự maesopsin (98), phổ NMR hợp chất 82 cho tín hiệu proton carbon khung auronol, số liệu phổ phù hợp với cấu trúc phân tử với số liệu công bố 2, Đặc biệt tín hiệu tù thấp nhóm OH δH 9,65, 7,70 7,66 ppm, chứng tỏ nhóm không tạo cầu với nhóm 3-C=O Phổ khối ion hóa phun mù điện tử cho pic ion phân tử đề proton hóa [M-H]ˉ với m/z = 303 phù hợp với công thức phân tử C15H12O7 4.1.3 Tổng hợp toàn phần auronol alphitonin maesopsin Qua việc đánh giá phân tích phương pháp tổng hợp toàn phần auronol công bố lựa chọn tổng hợp auronol qua giai đoạn: Giai đoạn tổng hợp aurone; Giai đoạn khử nối đôi aurone tiến hành oxy hóa để thu sản phẩm aurone hydrate hóa auronol * Nghiên cứu phương pháp tổng hợp aurone Các aurone tổng hợp theo nhiều phương pháp ngưng tụ benzofuranone với benzaldehyde từ đóng vòng chalcone sử dụng xúc tác cho đóng vòng ketone Trong đó, phương pháp ngưng tụ benzofuranone với benzaldehyde phương pháp phổ biến, nghiên cứu tổng hợp aurone theo phương pháp từ nguyên liệu sẵn có thương mại Bước quan trọng tổng hợp aurone theo phương pháp Paul W Elsinghorst, Taner Cavlar, Anna Muller, Annett Braune, Michael Blaut, and Michael Gutschow, "The Thermal and Enzymatic Taxifolin−Alphitonin Rearrangement", J Nat Prod., 2011, 74, 2243−2249 E Kiehlmann et al., “Isomerization of dihydroquercetin”, J Nat Prod., 1995, 58 (3), 450-455 Footer Page 22 of 148 20 Header Page 23 of 148 việc chuẩn bị chất chìa khóa trung gian benzofuranone Tổng hợp 4,6-dihydroxybenzofuran-3(2H)-one (5b) gồm bước Bước phản ứng ngưng tụ phloroglucinol chloroacetonitrile có mặt ZnCl2, khí HCl tạo nên muối iminium (3) (42%) Muối sau thủy phân đóng vòng để tạo 5b Phản ứng thủy phân đóng vòng tiến hành theo phương pháp Đó là, thủy phân môi trường acid HCl, đun hồi lưu đóng vòng MeONa cho 5b với hiệu suất 46% toàn phần Sản phẩm 5b thu 41% sản lượng từ cách đơn giản đun hồi lưu nước Như vậy, hai phương pháp cho kết tương ứng Tuy nhiên, phương pháp nhiệt phân nước tốn chi phí dễ thực phương pháp đầu Phản ứng ngưng tụ benzofuran-3-one dẫn xuất benzaldehyde tiến hành theo cách, sử dụng hệ KOH/MeOH HCl/ MeOH Cơ chế phản ứng tùy thuộc vào có mặt xúc tác acid hay base Cấu trúc aurone tổng hợp 55, 90, 56, 117 khẳng định phân tích phổ IR, ESI-MS NMR, phù hợp với tài liệu công bố Trong công bố trước chứng minh sản phẩm ngưng tụ hay đóng vòng chalcone đồng phân (Z)-aurone ổn định đồng phân (E)- tương ứng Hai đồng phân phân biệt khác biệt độ chuyển dịch hóa học proton olefine phổ 1H-NMR δH 6,70 ppm cho đồng phân (Z)- δH 7,00 ppm cho đồng phân (E)- Độ chuyển dịch proton olefine aurone tổng hợp (55, 90, 56, 117) khoảng 6,44- 6,72 ppm Đồng thời phổ hồng ngoại FT-IR (Z)-aurone cho dải hấp thụ mạnh khoảng 1600 cm-1 dải hấp thụ yếu biến (E)-aurone Như vậy, aurone tổng hợp dạng đồng phân (Z)- * Tổng hợp auronol từ aurone Các aurone 56, 117, 55, 90 khử hóa khí H2 với xúc tác Pd/C MeOH nhiệt độ phòng cho dihydroaurrone 118, 119, 120, 91 tương ứng với hiệu suất cao Cấu trúc dihydroaurone Footer Page 23 of 148 21 Header Page 24 of 148 khẳng định phương pháp phổ Các tín hiệu phổ dihydroaurone có thay đổi so với aurone tương ứng Do nối đôi phân tử nên phổ NMR dihydroaurone xuất thêm tín hiệu nhóm methylene CH2-10 CH-2 vùng trường cao Các methoxydihydroaurone 120 91 bên cạnh việc ngưng tụ methoxybenzofuranone với methoxybenzaldehyde thu từ phản ứng methyl hóa dihydrohydroxyaurone 118 119 với MeI với xúc tác K2CO3 Phản ứng chuyển hóa aurone trực tiếp auronol quan tâm nghiên cứu nhiều không thành công khả dễ dehydrate auronol trở lại aurone điều kiện acid Vì vậy, để hydrate hóa aurone phải theo đường vòng qua bước chính: Bước từ dihydroaurone hình thành silyl enol ether, sử dụng base LDA THF; Bước tiến hành oxy hóa silyl enol ether theo Rubottom sử dụng m-chloroperbenzoic acid (m-CPBA) CH2Cl2 0oC sau tách loại nhóm TMS tetrabutylamonium fluoride (TBAF) thu auronol 122 93 4.1.4 Tổng hợp auronol glucoside alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside Auronol glucoside alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) tổng hợp gồm bước: Bước glucoside hóa auronol sử dụng tác nhân 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl bromide; bước loại nhóm bảo vệ acetyl phần đường để thu auronol glucoside Phản ứng glucosyl hóa alphitonin (82) với acetyl glycopyranosyl bromide thử nghiệm với xúc tiến khác ZnCl2, CdCO3, HgI2 Ag2CO3 kết hợp với xúc tác base K2CO3 Các kết thu cho thấy thử nghiệm sản phẩm trung gian alphitonin-4-O-β-D-tetraacetyl glucopyranoside (124) không phát Sản phẩm glucoside hóa (chất 124) hình thành với kết hợp hỗn hợp K2CO3/Cs2CO3 đạt với hiệu suất 39% Cấu trúc alphitonin-4-O-β-D-tetraacetyl-glucopyranoside chứng minh phương pháp phổ Trên phổ 1H-NMR chất Footer Page 24 of 148 22 Header Page 25 of 148 124 tín hiệu aglycone alphitonin ta thấy xuất thêm tín hiệu phần đường: tín hiệu proton methine δH 5,35 (t, J = 9,0 Hz), 5,32/5,22 (d, J = 8,0 Hz), 5,23 (dd, J = 8,0 , 9,0 Hz), 5,11 (m), 4,09/4,02 (m); tín hiệu proton methylene CH2-6′′ 4,33/4,31(dd, J = 5,0 , 12,0 Hz) 4,18/4,11 (dd, J = 1,7 , 12,0 Hz) tín hiệu singlet proton methyl nhóm acetyl 2,00- 2,10 ppm (4 × OAc) Tương tự phổ NMR chất 116, chất 125, phổ NMR chất 124 ta thường thấy cặp tín hiệu kép Hiện tượng trung tâm bất đối C*-2 kết hợp với trung tâm bất đối phần đường tạo nên diasteromer tách từ trường đo nên xuất tín hiệu kép phổ NMR chúng Hình 4.44 Phổ 1H-NMR chất 124 (CD3OD) Hình 4.45 Phổ HMBC chất 124 (CD3OD) Footer Page 25 of 148 23 Header Page 26 of 148 Phản ứng glucosyl hóa chọn lọc C-4 xác định rõ qua phân tích phổ NMR hợp chất 124, đặc biệt phổ HSQC kết hợp với HMBC (hình 4.45) cho thấy tương tác xa CH2-10 (3,02 ppm)/C-2′ (118,8/118,7 ppm), C-6′ (123,1/122,9 ppm)/C-2 (107,4/107,1 ppm)/C-1′ (126,5 ppm)/C-3 (194,9 ppm) Ngoài ra, phổ HSQC, phổ HMBC cho ta thấy tương tác xa mạnh proton anome H-1′′ (5,32/5,22 ppm)/C-4 (157,7/157,5) khẳng định phần đường gắn vị trí C-4 khung auronol * Phản ứng deacetyl hóa hợp chất 124 Phản ứng thủy phân nhóm acetyl phần đường phân tử auronol glucoside phản ứng thủy phân ester sử dụng base (NaOH) thông thường Các liệu phổ NMR alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside tổng hợp phù hợp với tài liệu báo cáo Như vậy, alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside tổng hợp từ taxifolin (81) với hiệu suất toàn phần 13,0% Kết tổng hợp cho phép cung cấp hợp chất auronol glucoside 125 lượng gam cho nghiên cứu hoạt tính sinh học 4.1.5 Tổng hợp số dẫn xuất nitrile alphitonin, maesopsin maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside Phản ứng tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol tiến hành môi trường kiềm nhiệt độ 0oC cho sản phẩm lần lần phụ thuộc vào tỉ lệ mol chất tác nhân Ở tỉ lệ mol tác nhân auronol/chloroacetonitrile/NaOH (1/1,1/1,1; mol/mol/mol) ta thu sản phẩm lần vào vị trí C-4 chất 126 127 Khi tăng tỉ lệ mol xúc tác base chloroacetonitrile lên gấp lần lượng mol chất phản ứng (82 98) ta thu sản phẩm lần vào vị trí C-4 C-6 chất 128 129 Nếu ta tiếp tục tăng tỉ lệ mol xúc tác base chloroacetonitrile lên gấp hay lần lượng mol auronol ta thu sản phẩm lần vào vị trí C-4 C-6 Sự ưu tiên vào vị trí 4-OH 6-OH giả thiết ảnh hưởng nhóm C=O vòng C hoạt hóa Footer Page 26 of 148 24 Header Page 27 of 148 nhóm 4-OH 6-OH qua nối đôi liên hợp lượng tác nhân phản ứng dư ta thu sản phẩm vị trí Ở tỉ lệ mol tác nhân auronol/chloroacetonitrile/NaOH (1/1,1/1,1; mol/mol/mol) ta thu sản phẩm lần vào vị trí C-4 kết hợp hiệu ứng –C –I nhóm 3-C=O Ngoài hiệu ứng –C, nhóm 3-C=O có hiệu ứng –I làm bền ion phenolate 4-C-Oˉ nên khả phản ứng nucleophine nhóm tạo sản phẩm C-4 thuận lợi so với C-6 cho ta sản phẩm C-4 trước Kết thực nghiệm cho thấy phản ứng ưu tiên vào vị trí C-4 lần chứng tỏ liên kết cầu hydro nhóm 4-OH (vòng A) với nhóm 3-C=O (vòng C) khẳng định tín hiệu rộng thấp nhóm OH hai vòng A, B 10 ppm phổ 1HNMR alphitonin Kết thu sản phẩm ưu tiên vào nhóm 4-OH khung auronol thú vị chứng minh bắt gặp auronol glucoside (chất 116, 125) với nhóm đường gắn vào vị trí C-4 tự nhiên Tổng hợp auronol glucoside 116 mang nhóm nitrile 130 tiến hành tương tự auronol 82 98, phản ứng cho hiệu suất thấp Cấu trúc sản phẩm chứng minh phương pháp phổ Phổ NMR hợp chất tín hiệu khung auronol / auronol glucoside cho thêm tín hiệu nhóm acetonitrile Phổ khối ion hóa phun mù điện tử cho pic ion âm phân tử đề proton hóa [M-H]ˉ với m/z= 342 [M-H]ˉ phù hợp với công thức phân tử C17H13NO7 (126); tương tự m/z = 326 [M-H]ˉ (C17H13NO6 127); m/z = 381 [M-H]ˉ (C19H14N2O7 128); m/z = 365 [M-H]ˉ (C19H14N2O6 129) chất 130 cho pic ion dương giả phân tử m/z = 512 [M+Na]+ phù hợp với công thức phân tử C23H23NO11 Đặc biệt, phổ HMBC tương tác xa proton nhóm methylene (-OCH2CN) với carbon khung auronol cho biết vị trí nhóm gắn vào khung auronol như: chất 126 [5,19 - 5,13 ppm (-OCH2CN)/155,5 ppm (C-4)]; chất 127 Footer Page 27 of 148 25 Header Page 28 of 148 [5,17 - 5,12 ppm (-OCH2CN)/155,5 ppm (C-4)]; chất 128 [5,19 - 5,12 ppm (OCH2CN)/157,0 ppm (C-4)/168,4 ppm (C-6)]; chất 129 [5,00 5,10 ppm (-OCH2CN)/157,0 ppm (C-4)/168,4 ppm (C-6)] chất 130 [5,04 ppm (-OCH2CN)/ 168,8 ppm (C-6 ) 4,98 - 4,96 ppm (H1′′)/158,1 - 158,0 ppm (C-4 )] Hình 4.51 Phổ HMBC 126 Hình 4.56 Phổ HMBC 128 4.2 Hoạt tính sinh học hợp chất tổng hợp Các chất 82, 98, 116, 125, 126, 127, 128, 129, 130 khảo sát hoạt tính kích thích tế bào lympo hoạt tính độc tế bào Kết quả: 4.2.1 Hoạt tính kích thích tế bào lympho Ở nồng độ nghiên cứu từ 100 – 0,8 (µg/mL) hợp chất tổng hợp có hoạt tính kích thích tế bào lympho yếu không xác định, riêng hợp chất 126 alphitonin-4-O-acetonitrile có hoạt tính kích thích tế bào lympho mạnh với SC50 = 11,07 µg/mL So sánh hoạt tính 126 (nhóm acetonitrile OH-4) 125 (glucopyranose OH-4) cho thấy việc thay glucopyranose nhóm acetonitrile tăng đáng kể hiệu kích thích tế bào lympho Footer Page 28 of 148 26 Header Page 29 of 148 4.2.2 Hoạt tính độc tế bào Hầu hết mẫu nghiên cứu không gây độc tế bào (IC50 > 100 µg/mL) gây độc tế bào yếu (128 , 129) Mẫu alphitonin (82) có hoạt tính gây độc tế bào mức trung bình yếu với tất dòng tế bào ung thư tế bào thường Các mẫu lại hoạt tính nồng độ nghiên cứu Chất đối chứng dương Ellipticine hoạt động ổn định thí nghiệm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Luận án hoàn thành mục tiêu đề Đã nghiên cứu điều chế auronol maesopsin alphitonin từ nguồn nguyên liệu thực vật nước - Từ kết phân lập auronol glucoside alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside (116) maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside (116), dịch chiết Chay Bắc Bộ (Artocapus tonkinensis A Chev.), lựa chọn chất 116 có hàm lượng cao (> 0,07 % trọng lượng khô) điều chế auronol maesopsin (98) - Từ hàm lượng cao astilbin rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Wall ex Roxb.) thuốc phổ biến nước ta, nghiên cứu quy trình phân lập astilbin, điều chế taxifolin tiến hành phản ứng đồng phân hóa taxifolin bán tổng hợp alphitonin (82), quy trình tổng hợp tối ưu hóa ngắn gọn với hiệu suất cao Đã nghiên cứu tổng hợp toàn phần methoxyauronol (chất 122, chất 93) Quy trình cải tiến bước tổng hợp hợp chất aurone làm chất trung gian chìa khóa Bước trình hydrate hóa aurone bao gồm khử hóa oxy hóa để thu hợp chất auronol 122 93 Lần nghiên cứu tổng hợp thành công auronol glucoside alphitonin-4-O-β-D-glucopyranoside (125) hợp chất đánh giá có hoạt tính ức chế miễn dịch cao có hàm lượng thấp Chay Bắc Bộ (Artocapus tonkinensis A Chev.) qua phản ứng glucosyl hóa alphitonin Footer Page 29 of 148 27 Header Page 30 of 148 Cũng lần nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất O-acetonitrile auronol alphitonin maesopsin vị trí C-4 (chất 126 , chất 127) vị trí C-4 C-6 (chất 128, chất 129) vòng A; tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol glucoside 116 maesopsin-6-O-acetonitrile-glucopyranoside (chất 130) Hoạt tính kích thích tế bào lympho hoạt tính độc tế bào dòng tế bào thường NIH/3T3 dòng tế bào ung thư MCF7, LU-1, KB HepG2 sản phẩm tổng hợp lần khảo sát, kết khảo sát cho thấy: - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 126) có hoạt tính kích thích tế bào lympho mạnh với SC50 = 11,07 µg/mL, hợp chất lại không xác định - Hợp chất alphitonin-4-O-acetonitrile (chất 126) hầu hết hợp chất thu có hoạt tính ức chế yếu với tế bào thường dòng tế bào ung thư với IC50 > 100 µg/mL Các dẫn xuất nhóm nitrile 128 129 có hoạt tính độc tế bào mạnh chút với IC50 < 100 µg/mL Alphitonin có hoạt tính độc tế bào trung bình với IC50 50,90 µg/mL (NIH/3T3), 51,41 µg/mL (MCF7), 44,90 µg/mL (LU-1), 55,60 µg/mL (KB) 30,77 µg/mL (HepG2) Kiến nghị: Các hợp chất auronol alphitonin, maesopsin, auronol glucoside dẫn xuất O-acetonitrile chúng chất có tiềm hoạt tính sinh học cao nghiên cứu Đề nghị tiếp tục nghiên cứu tổng hợp chúng với quy mô lượng lớn cho việc đánh giá hoạt tính sinh học sâu chúng Footer Page 30 of 148 28 Header Page 31 of 148 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Quốc Vượng, Vũ Văn Chiến, Nguyễn Thị Thu, Diệp Thị Lan Phương, Phạm Văn Cường, Châu Văn Minh, “Khảo sát hàm lượng Astilbin rễ Thổ phục linh (Smilax glabra Roxb.) bán tổng hợp alphitonin phương pháp đồng phân hóa taxifolin”, Tạp chí hóa học, (4/2013), T.51 (2AB), 208-212 Diệp Thị Lan Phương, Pham Thi Hang, Vu Van Chien, Chau Van Minh, Pham Van Cuong, Nguyen Quoc Vuong, “SYNTHESIS OF 4,6,3′,4′-TETRAHYDROXYAURONES”, proceedings of the nd VAST-KAST workshop biodiversity and bio-active compounds, (2013), 152-158 Quoc Vuong Nguyen, Phuong Diep Thi Lan, Hang Pham Thi, Van Chien Vu, Tuan Nguyen Le, Van Minh Chau and Van Cuong Pham, “Facile, Protection-Free, One-Pot Synthesis of Aureusidin”, Natural Product Communications, Vol (11) 2014, 1563-1566 Diệp Thị Lan Phương, Phạm Thị Hằng, Vũ Văn Chiến, Nguyễn Quốc Vượng, Phạm Văn Cường, "Synthesis of aurones from phloroglucinol" Tạp chí hóa học, 2015, 2E (53), 167 Phuong Diep Thi Lan, Quoc Vuong Nguyen, Van Chien Vu, Tuan Nguyen Le, Thi Hue Nguyen, Thi Hang Pham, Van Minh Chau and Van Cuong Pham, "Synthesis of Auronol Derivatives and Their Immunostimulating Activity", Natural Product Communication, 2015, 10(4), 591 Footer Page 31 of 148 ... nitrile chọn đề tài: Nghiên cứu tổng hợp khảo sát hoạt tính sinh học alphitonin, maesopsin số dẫn xuất chúng Đối tượng nghiên cứu nhiệm vụ luận án Đối tượng nghiên cứu: hợp chất Alphitonin-4-O-β-Dglucopyranoside,... glucoside dẫn xuất O-acetonitrile chúng chất có tiềm hoạt tính sinh học cao nghiên cứu Đề nghị tiếp tục nghiên cứu tổng hợp chúng với quy mô lượng lớn cho việc đánh giá hoạt tính sinh học sâu chúng. .. glucoside 125 lượng gam cho nghiên cứu hoạt tính sinh học 4.1.5 Tổng hợp số dẫn xuất nitrile alphitonin, maesopsin maesopsin-4-O-β-D-glucopyranoside Phản ứng tổng hợp dẫn xuất nitrile auronol tiến