Bước đầu nghiên cứu sự sinh trưởng của loài diệp hạ Châu(PHYLLANTHUS AMARUS l ) trồng trong điều kiện ánh sáng khác nhau tại phường xuân hoà, thị xã phúc yên, tỉnh vĩnh phúc

Ảnh hưởng của chế độ che sáng khác nhau tới hình thái và cấu tạo giải phẫu của loài Diệp hạ châu .... Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến một số chỉ tiêu sinh trưởng của loài Diệp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA SINH – KTNN

===o0o===

NGUYỄN THỊ KIM ANH

BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN

CỦA LOÀI DIỆP HẠ CHÂU (PHYLLANTHUS AMARUS L.)

TRỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN ÁNH SÁNG KHÁC NHAUTẠI PHƯỜNG XUÂN HÒA, THỊ XÃ PHÚC YÊN, TỈNH VĨNH PHÚC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh thái học

HÀ NỘI, 2016

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2

KHOA SINH – KTNN

===o0o===

NGUYỄN THỊ KIM ANH

BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN

CỦA LOÀI DIỆP HẠ CHÂU (PHYLLANTHUS AMARUS L.)

TRỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN ÁNH SÁNG KHÁC NHAUTẠI PHƯỜNG XUÂN HÒA, THỊ XÃ PHÚC YÊN, TỈNH VĨNH PHÚC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh thái học

Người hướng dẫn khoa học:

TS Đỗ Thị Lan Hương

HÀ NỘI, 2016

em được nghiên cứu, học tập và hoàn thành khoá luận

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè, những người đã động viên, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp Trong quá trình nghiên cứu, do thời gian còn hạn chế nên không thể tránh khỏi những thiếu sót nhất định Vì vậy, Em kính mong nhận được sự đóng góp của thầy cô và các bạn để đề tài được hoàn thiện hơn

Em xin trân trọng cảm ơn!

Hà Nội, tháng 05 năm 2016

Sinh viên

Nguyễn Thị Kim Anh

LỜI CAM ĐOAN

Đề tài: “Bước đầu nghiên cứu sự sinh trưởng của loài Diệp Hạ Châu(PHYLLANTHUS AMARUS L.) trồng trong điều kiện ánh sáng khác nhau tại phường Xuân Hoà, thị xã Phúc Yên, tỉnh Vĩnh Phúc”

được hoàn thành dưới sự hướng dẫn của TS Đỗ Thị Lan Hương và sự cố

gắng của bản thân Tôi xin cam đoan những kết quả trong khóa luận là kết quả nghiên cứu của bản thân không trùng với kết quả nghiên cứu của tác giả

khác Nếu có gì sai sót tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm

Trong quá trình nghiên cứu và thực hiện khóa luận, tôi đã kế thừa thành tựu của các nhà khoa học với sự trân trọng và biết ơn!

Hà Nội, tháng 05 năm 2016

Sinh Viên

Nguyễn Thị Kim Anh

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU

1.Lý do chọn đề tài 1

2 Mục đích 2

3.Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tế 2

4 Bố cục 3

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về loài Diệp hạ châu 4

1.2 Tình hình nghiên cứu loài Diệp hạ châu ở thế giới và Việt Nam 5

1.2.1 Tình hình nghiên cứu loài Diệp hạ châu ở thế giới 5

1.2.2 Tình hình nghiên cứu loài Diệp hạ châu ở Việt Nam 8

1.3 Tình hình sử dụng cây thuốc ở thế giới 9

1.4 Tình hình sử dụng cây thuốc ở Việt Nam 10

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian nghiên cứu 13

2.2 Địa điểm nghiên cứu 13

2.2.1 Vị trí địa lý 13

2.2.2 Địa hình 13

2.2.3 Khí hậu 13

2.3 Đối tượng nghiên cứu 14

2.4 Phương pháp nghiên cứu 15

2.4.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 15

2.4.2 Phương pháp xác định tỷ lệ nảy mầm 17

2.4.3 Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa 17

2.4.3.1 Phương pháp đo tăng trưởng chiều cao và đường kính 17

2.4.3.2 Xác định số lá sinh ra, số lá rụng và số lá trên cây 17

2.4.3.3 Đo diện tích lá 18

2.4.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 18

2.4.4 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm 18

2.4.4.1 Phương pháp cắt mẫu 18

2.4.4.2 Phương pháp làm tiêu bản hiển vi 18 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1 Ảnh hưởng của chế độ che sáng khác nhau tới hình thái và cấu tạo

giải phẫu của loài Diệp hạ châu 20

3.1.1 Đặc điểm hình thái và cấu tạo giải phẫu của rễ 20

3.1.1.1 Đặc điểm hình thái của rễ 20

3.1.1.2 Cấu tạo giải phẫu của rễ 20

3.1.2 Đặc điểm hình thái và cấu tạo giải phẫu của thân 25

3.1.2.1 Đặc điểm hình thái của thân 25

3.1.2.2 Cấu tạo giải phẫu của thân 25

3.1.3 Đặc điểm hình thái và cấu tạo giải phẫu của lá 31

3.1.3.1 Đặc điểm hình thái của lá 31

3.1.3.2 Cấu tạo giải phẫu của lá 31

3.1.4 Hình thái hoa và quả 34

3.1.4.1 Hình thái hoa 34

3.1.4.2 Hình thái quả 36

3.2 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến một số chỉ tiêu sinh trưởng của loài Diệp hạ châu 36

3.2.1 Chiều cao thân 36

3.2.2 Đường kính thân 39

3.2.3 Biến động số lượng lá 40

3.2.3.1 Số lá trên cây 41

3.2.3.2 Số lá rụng 43

3.2.3.3 Số lá sinh ra 45

3.2.4 Diện tích lá và khối lượng tươi 46

3.2.5 Số chồi thân cây 48

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 1 Kết luận 51

1.1 Hình thái, cấu tạo giải phẫu 51

1.2 Chỉ tiêu sinh trưởng 51

2 Đề nghị 52

TÀI LIỆU THAM KHẢO 53

DANH LỤC CÁC ẢNH Hình 2.1 Ô thí nghiệm I 16 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 2.2 Ô thí nghiệm II 16 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 2.3 Ô thí nghiệm III 16 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 2.4 Ô thí nghiệm IV 16 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 2.5 Ô thí nghiệm đối chứng 16 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.1 Hình thái của rễ Diệp hạ châu 20 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.2 Một phần cấu tạo rễ sơ cấp Diệp hạ châu 22 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.3 Cấu tạo rễ thứ cấp Diệp hạ châu 23 Nguồn: TS Đỗ Thị Lan Hương

Hình 3.4 Một phần cấu tạo trụ giữa rễ Diệp hạ châu 24 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.5 Cấu tạo phần ruột rễ Diệp hạ châu 24 Nguồn: TS Đỗ Thị Lan Hương

Hình 3.6 Hình thái thân Diệp hạ châu 25 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.7 Cấu tạo lát cắt ngang thân Diệp hạ châu 27 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.8 Một phần cấu tạo vỏ sơ cấp thân Diệp hạ châu 27 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.9 Một phần cấu tạo trụ giữa thân Diệp hạ châu 27 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.10 Một phần cấu tạo thân cây Diệp hạ châu 28 Nguồn: TS Đỗ Thị Lan Hương

Hình 3.11 Một phần cấu tạo thân Diệp hạ châu 29 Nguồn: TS Đỗ Thị Lan Hương

Hình 3.12 Một phần cấu tạo tầng sinh trụ thân Diệp hạ châu 30 Nguồn: TS Đỗ Thị Lan Hương

Hình 3.13 Lát cắt ngang phiến lá Diệp hạ châu 32 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.14 Cấu tạo biểu bì trên lá Diệp hạ châu 33 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.15 Lỗ khí kiểu song bào 33 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.16 Lát cắt ngang gân chính 34 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.17 Cấu tạo gân chính lá Diệp hạ châu 34 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.18 Hoa thức và hoa đồ Diệp hạ châu 35 Nguồn: PGS.TS Trương Thị Đẹp

Hình 3.19 Hình thái hoa Diệp hạ châu 35 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

Hình 3.20.Hình thái và Cấu tạo giải phẫu quả Diệp hạ châu 36 Nguồn: Nguyễn Thị Kim Anh

DANH LỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới chiều cao thân loài

Diệp hạ châu qua các tuần 37 Bảng 3.2 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới đường kính thân loài

Diệp hạ châu qua các tuần 39 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới số lượng lá trên cây

loài Diệp hạ châu qua các tuần 41 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới số lượng lá rụng loài

Diệp hạ châu qua các tuần 43 Bảng 3.5 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới số lượng lá sinh ra

loài Diệp hạ châu qua các tuần 45 Bảng 3.6 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến diện tích lá và khối

lượng của lá Diệp hạ châu 47 Bảng 3.7 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến số chồi thân, kích

thước và đường kính chồi của loài Diệp hạ châu 49

DANH LỤC CÁC BIỂU ĐỒ

Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới chiều cao thân

loài Diệp hạ châu qua các tuần 38 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới đường kính thân

loài Diệp hạ châu qua các tuần 40 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới số lá trên cây

Diệp hạ châu qua các tuần 42 Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau tới số lá rụng của loài

Diệp hạ châu qua các tuần 44 Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến số lá sinh ra loài

Diệp hạ châu qua các tuần 46 Biểu đồ 3.6 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến diện tích lá Diệp

hạ châu 47 Biểu đồ 3.7 Ảnh hưởng của việc che sáng khác nhau đến khối lượng lá

tươi loài Diệp hạ châu 48

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

Ô TN: Ô thí nghiệm

Ô TN I: Ô thí nghiệm I che sáng 25%

Ô TN II: Ô thí nghiệm II che sáng 50%

Ô TN III: Ô thí nghiệm III che sáng 75%

Ô TN IV: Ô thí nghiệm IV che sáng 100%

Ô TN ĐC: Ô thí nghiệm đối chứng

Ô ĐC: Ô đối chứng

Diệphạ châu có tên khoa học là Phyllanthus amarus L,họ thầu dầu Euphorbiaceae Chúng có thân thẳng đứng, nhẵn, lá mọc sole, phần lá khá thon, chiều dài của lá từ 5-15mm, bề rộng từ 2-5mm Chúng là loài mọc hoang, sinh sống ở khu vực nhiệt đới, có thể dễ dàng tìm kiếm

Diệp hạ châu có vị ngọt kèm theo vị hơi đắng, tính mát, có tác dụng sát trùng, tiêu độc, thông huyết, điều hòa kinh nguyệt ở chị em phụ nữ, giúp sáng mắt, hạ nhiệt Ngoài ra các nhà khoa học còn phát hiện ra chúng có tác dụng diệt nấm và một số loại khuẩn nhờ vào tác dụng của hoạt chất acid phenolic

và flavonnoid có trong loài cây này, hay hoạt chất coderacin lại được dùng để chế thuốc nhỏ mắt, mỡ tra mắt, diệt một số loại vi khuẩn gây hại cho mắt [5] Chúng còn được dùng dể chữa chứng đau yết hầu, bị viêm cổ họng, giúp chữa trị cho người bị mụn nhọt, đinh râu, người mắc bệnh viêm da thần kinh, trẻ em bị tưa lưỡi, có nốt chàm trên má, phụ nữ sau sinh bị sản hậu ứ huyết Ngoài những bệnh kể trên chúng còn được người ta dùng để trị rắn cắn, chữa bệnh sưng đau đầu khớp [5]

Diệp hạ châu là cây ưa ẩm nhưng không chịu được ngập úng Cây sống được trên nhiều loại đất (đất bazan, đất pha cát, đất cát, đất phù sa,…) và pH thích hợp từ 5,0 đến 6,5 Biên độ nhiệt thích hợp cho cây sinh trưởng là 25-300C Cây ra hoa quả nhiều, tái sinh tốt từ hạt; vòng đời kéo dài 3-5 tháng Cây tập trung ở các nước Trung Quốc, Ấn Độ, Thái Lan, Việt Nam Tại

Để tận dụng khoảng đất trống dưới tán những khu rừng trồng chưa đến

tuổi thu hoạch, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Bước đầu nghiên cứu sự sinh trưởng và phát triển của loài Diệp Hạ Châu trồng trong điều kiện ánh sáng khác nhau tại Phường Xuân Hòa, thị xã Phúc yên, tỉnh Vĩnh Phúc”

2.Mục đích:

- Nghiên cứu hình thái, cấu tạo giải phẫu của rễ, thân, lá của cây Diệp hạ châu

- Đánh giá khả năng sinh trưởng của mẫu nghiên cứu dưới các điều kiện che sáng khác nhau

- Xác định tính đa dạng về hình thái và cấu tạo của Diệp hạ châu ở các mức che sáng khác nhau

- Đề xuất một số giải pháp để trồng cây Diệp hạ châu cho năng suất cao

3 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn

3.1 Ý nghĩa khoa học

+ Kết quả nghiên cứu đề tài góp phân bổ sung thêm thông tin, dữ liệu khoa học về Diệp hạ châu làm tài liệu khoa học phục vụ cho nghiên cứu và giảng dạy

- Phần mở đầu: 3 trang (từ trang 1-3)

- Chương I: Tổng quan tài liệu: 9 trang (từ trang 4-12)

- Chương II: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 6 trang (từ trang 13-18)

- Chương III: Kết quả và bàn luận: 31 trang (từ trang 20-50)

- Kết luận và đề nghị: 2 trang (từ trang 51-522)

- Tài liệu tham khảo: 2 trang (từ trang 53-54)

4

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan về cây Diệp hạ châu

Diệp hạ châu là loại thảo dược quý đến từ thiên nhiên Dân gian truyền tụng nhau cây chó đẻ răng cưa vì người ta thấy chó cái sau khi sinh thường ăn

cây này để chảy ít máu Diệp hạ châu được khoa học gọi là Phyllanthus amarus, họ Thầu dầu và thích ứng tốt với vùng khí hậu nhiệt đới Được gọi

Diệp hạ châu (ngọc dưới lá) là do hình thái hoa mọc dưới lá Loài cây này còn

có tên “cây tán sỏi” theo tiếng Tây Ban Nha vì có công dụng chữa sỏi thân, sỏi bàng quang

Diệp hạ châu đắng thuộc họ Thầu dầu, mọc hoang khắp nới tại các vùng đất ẩm các vùng của Việt Nam và các vùng khí hậu nhiệt đới, cận nhiệt đới Đây là cây thân thảo sống quanh năm, sống dai, cao khoảng 20-30 cm, cây cao khoảng 60-70 cm Thân cây nhẵn, có lá màu xanh Lá hình bầu dục, mọc

so le, xếp sát nhau thành 2 dãy như 1 lá kép hình lông chim Hoa mọc ở kẽ lá Quả nang, hình cầu, hơi dẹt, mọc rủ xuống dưới cuống lá

Diệp hạ châu đắng có vị đắng nhiều, tính mát.Các thành phần có trong Diệp hạ châu đắng là flavonoid, alkaloid phyllanthin, phyteralin,… giúp bảo

vệ gan khỏi sự phân hủy của ethanol có trong rượu, bia Ngoài chữa xơ gan, viêm gan thì Diệp hạ châu đắng còn có tác dụng cho vẻ đẹp tự tin của người phụ nữ vì trị mụn nhọt, lở loét, làm mịn da Dùng Diệp hạ châu đắng là một

sự lựa chọn tốt cho mọi người đặc biệt là những người có nguy cơ viêm gan

do bia, rượu

Kinh nghiệm từ lâu nhân dân rất hay dùng cây chó đẻ răng cưa làm thuốc, giã nát với muối chữa đinh râu, mụn nhọt Còn có tác dụng chữa bệnh gan, chữa sốt, đau mắt, rắn cắn Ngày uống 20 -40g cây tươi, sao khô sắc đặc

mà uống Dùng ngoài không có liều lượng[4]

5

1.2 Tình hình nghiên cứu loài Diệp hạ châu ở thế giới và Việt Nam

1.2.1 Tình hình nghiên loài Diệp hạ châu cứu ở thế giới

Nicole Maxwell, tác giả cuốn Witch Doctor’s Apprentice, được xuất bản lần đầu tiên vào năm 1961 trên cơ sở những nghiên cứu được tiến hành từ năm 1950 tại Peru Ông ta nói rằng có tới 94% bệnh nhân của mình được hỏi đều cho biết sỏi thận đã hoàn toàn loại trừ sau 1-2 tuần điều trị.Ðó chính là

cây Phyllanthus ninuri, một cây thuốc cùng họ với cây Phyllanthus amarus

mà dân ta gọi là Diệp hạ châu đắng, còn cây Diệp hạ châu ngọt được gọi với

tên Phyllanthus urinaria , cũng đã trở nên quen thuộc với người dân Việt

Nam dưới tên gọi dân dã là chó đẻ răng cưa, hoặc mỹ miều hơn là Diệp hạ châu (ngọc dưới lá)

Chất đắng (phyllathin, hypophyllanthin, triacontanal) trong Diệp hạ châu đắng có nhiều tác dụng chữa bệnh, đặc biệt là khả năng giải độc, khôi phục chức năng bình thường của gan, tốt trong các trường hợp suy giảm chức năng gan do sử dụng nhiều bia, rượu Các chất này làm gia tăng lượng glutathione - chất bảo vệ gan thường bị thiếu trầm trọng ở những người thường xuyên sử dụng bia rượu Năm 1995, các nhà khoa học Brazil cũng phát hiện tác dụng giảm đau mạnh và bền vững của loài cây này Tác dụng này được cho là do acid gallic, có ý nghĩa trong tình trạngviêm gan, tổn thương gan do bia rượu Tại Pháp, Chanca Piedra còn được sử dụng điều trị sỏi thận, sỏi mật Sản phẩm của Chanca Piedra gọi là Pilosuryl, được bán như một thuốc lợi tiểu Chanca Piedra có thể sử dụng kéo dài nhằm khôi phục chức năng bình thường của gan và giải độc cơ thể (do gan có chức năng thải độc, chống độc cho cơ thể) Việc ăn các thức ăn có nhiều bơ, sữa, thịt, đường, thức ăn nhanh, hóa chất sát trùng, uống nước tiệt trùng bằng Clo, nước chứa ký sinh trùng, sử dụng thuốc tránh thai ở phụ nữ trẻ và hormone ở phụ nữ mãn kinh, điều trị bằng các hormone steroid, hóa trị liệu điều trị ung thư, sử dụng thuốc chữa

có tác dụng chống co thắt cơ vân và cơ trơn, do vậy có thể giải thích được hiệu quả chữa bệnh của nó trong điều trị sỏi thận, sỏi mật12]

Các nhà nghiên cứu Brazil cũng khám phá tác dụng giảm đau mạnh và bền vững của vài giống Phyllanthus, bao gồm Phyllanthus niruri Trong một cuốn sách có tựa đề "Cats claw, cây leo chữa bệnh" của Peru, tác giả Kenneth Jones đã dành hẳn một chương mục để nói về Chanca Piedra Chúng ta biết rằng, morphin là một thuốc giảm đau gây nghiện cổ điển nhất trên thế giới và indomethacin cũng là một thuốc chống viêm, giảm đau Thế nhưng, trong các cuộc thử nghiệm, Phyllanthus niruri có tác dụng giảm đau mạnh hơn indomethacin gấp 4 lần và mạnh hơn 3 lần so với morphin [12]

Tác dụng giảm đau của Phyllanthus đã được các nhà khoa học Brazil cho

là do acid gallic, ester ethyl và hỗn hợp steroid như beta sitosterol và stigmasterol Từ những năm 1960 đã có thông tin nói về Chanca Piedra Những nghiên cứu của Brazil và Ấn Ðộ trước hết được áp dụng trên những người bản xứ Trong một vài nghiên cứu khác đã được báo cáo, người ta không thấy có sự khác biệt nào của Phyllanthus niruni và Phyllanthus amarus

vì các hoạt chất của 2 cây này là giống nhau Trong thực tế, các nhà khoa học cho rằng nó chỉ là một loại cây với hai tên gọi khác nhau mà thôi Tác dụng chống co thắt của Chanca Piedra trong nghiên cứu giữa năm 1980 của các nhà khoa học Brazil đã giải thích tác dụng điều trị sỏi thận và sỏi bàng quang trong dân gian của cây thuốc này [12]

Những Alkaloid của Phyllanthus có tác dụng làm giãn cơ, đặc biệt là đối với cơ quan bài tiết Các nhà nghiên cứu phỏng đoán nó có tác dụng làm mòn

7

sỏi ở đường tiết niệu (thận và bàng quang) Nghiên cứu của Nhật Bản và Ấn

Ðộ trong năm 1980 đã xác định những tác dụng điều trị của Chanca Piedra đối với bệnh gan là do tác dụng của các hoạt chất phyllanthin, hypophyllathin

và triacontanal Glycoside được tìm thấy trong Chanca Piedra đã ức chế men Aldose reductase (AR), do các nhà nghiên cứu Nhật Bản kết luận thông qua một nghiên cứu tiến hành vào những năm 1988-1989 Còn vào các năm 1994-

1995, các nhà khoa học Brazil đã phát hiện tác dụng giảm đau của Chanca Piedra Trong một ghi chú đặc biệt, cuối những năm 80, Break Stone đã gây được sự chú ý đối với toàn thế giới về tác dụng chống virus viêm gan B của cây thuốc này[12]

Những thử nghiệm lâm sàng trên trẻ em với bệnh viêm gan truyền nhiễm bằng một thuốc chứa Phyllanthus amarus của Ấn Ðộ đã cho kết quả hứa hẹn trong cả Invivo và Invitro Nghiên cứu Invitro về sự ức chế virus viêm gan B của Break Stone được báo cáo tại Ấn Ðộ vào năm 1982 Trong nghiên cứu trên Invivo, Break Stone cũng đã loại trừ virus gây bệnh viêm gan B ở những động vật có vú trong 3-6 tuần

Những nghiên cứu khác tiến hành vào những năm 1990-1995 đã cho thấy Chanca Piedra có tác dụng chống lại virus viêm gan B

Chúng ta cũng biết rằng virus viêm gan B không chỉ tồn tại trong giai đoạn cấp tính mà còn tồn tại trong cơ thể và có thể tiến tới gây ung thư gan Các nghiên cứu cho thấy có tới 90% bệnh nhân bị ung thư gan đã từng mắc bệnh viêm gan virus B và đây quả là một điều đáng sợ! Phyllanthus niruri và Phyllanthus amatrus đã cho thấy các dược chất tự nhiên không độc mà nó chứa đựng có tác dụng đối với virus viêm gan B

Cây thuốc này còn có tác động tới cả hệ thống miễn dịch của cơ thể Khi

mà AIDS trở thành đại dịch nguy hiểm trên thế giới và cho tới nay việc điều trị vẫn còn là một thách thức đối với khoa học, thì những nghiên cứu gần đây

1.2.2 Tình hình nghiên cứu loài Diệp hạ châu ở Việt Nam

Theo một báo cáo tổng hợp của bác sĩ Lê Minh Khôi - Bệnh viện TW Huế nghiên cứu thực hiện năm 2010, 40% người thường xuyên sử dụng bia, rượu (trong nhóm được tổng hợp) mắc chứng gan nhiễm mỡ; 10% số đó tiến triển thành ung thư gan Khoảng một phần hai số bệnh nhân viêm gan do rượu nặng sẽ tiến triển thành xơ gan và khoảng một phần tư tổng số bệnh nhân viêm gan do rượu ở mức độ nhẹ có thể bị xơ gan những năm sau Bệnh nhân

xơ gan thường tử vong do các biến chứng như bệnh não, xuất huyết tiêu hoá, suy kiệt nặng, ung thư gan…[13]

Diệp hạ châu đắng đã được sử dụng hơn 2.000 năm nay Theo y học cổ truyền, loài thuốc này vị đắng hơi ngọt, tính mát, quy kinh vào can, đởm nên

có tác dụng kích thích tiêu hóa, tăng tiết mật Công dụng chính là thanh can lương huyết (mát gan, mát máu), giải độc Trong dân gian, Diệp hạ châu đắng được sử dụng để điều trịviêm gan vàng da, rối loạn tiêu hoá

Nghiên cứu mới của Viện Chiến lược và Chính sách Y tế cho thấy 6,67% dân số Việt Nam thường xuyên sử dụng bia, rượu kéo theo những ảnh hưởng không tốt đến sức khỏe, gây tổn hại nặng đến gan với các bệnh như gan nhiễm mỡ, viêm, xơ gan do rượu [14]

Năm 1961, Phòng đông y Viện vi trùng Việt Nam nghiên cứu thấy cây chó đẻ răng cưa có một số tác dụng kháng sinh[15]

9

1.3 Tình hình sử dụng cây thuốc ở thế giới

Người ta ước lượng hiện nay có khoảng 35.000-70.000 loài trong số 250.000-300.000 loài cây cỏ được sử dụng vào mục đích chữa bệnh khắp nơi trên thế giới Trong đó, Trung Quốc có trên 10.000 loài, Ấn Độ có khoảng 7.500 loài, Indonesia có khoảng 7.500 loài, Malaysia có khoảng 2.000 loài, Nepal có hơn 700 loài, Srilanca có khoảng550-700 loài [16]

Theo một nghiên cứu của nhà thực vật học người Anh Alan Hamilton, thành viên của Quỹ Thế giới Bảo vệ Thiên Nhiên (WWF), có tới 4.000 – 10.000 loài cây cỏ dùng làm thuốc có nguy cơ bị tiệt chủng Nguyên nhân không phải hoàn toàn do sự phát triển của Y học cổ truyền mà theo tác giả là

do thị trường dược thảo ở Châu Âu và Bắc Mỹ tăng trưởng 10% mỗi năm trong vòng 10 năm nay Trên quy mô toàn cầu, doanh số mua bán cây thuốc hàng năm ước tính lên tới 16 tỷ Euro

Ngày càng nhiều các chứng minh khoa học cho thấy các loại thuốc dược thảo có thể dùng để chữa bệnh có hiệu quả tương đương với các loại thuốc chính thống, nhưng lại có ít tác dụng phụ hơn Doanh thu cuả các loại thuốc dược thảo gia tăng đột ngột – chiếm khoảng 55% trên tổng số của toàn nước Mỹ trong năm 1998 – hiện nay nhiều công ty dược phẩm đều chuyển sang xu thế sản xuất và kinh doanh dược thảo [19]

Tại Trung Hoa, dược thảo được ghi nhận từ năm 168 Trước Thiên Chúa, rất phổ thông và đang được hệ thống hóa Năm 1977, quốc gia này đã xuất bản một dược thư gồm trên 5000 thảo dược [20]

Thảo dượcdu nhập Nhật Bản năm 411 sau TC qua ngả Triều Tiên và nền

y học thảo dược rất phát triển và đáng tin cậy

Ai Cập đã tìm ra tài liệu cho thấy dược thảo được dùng từ năm 2000 trước TC La Mã - Hi Lạp đã dùng dược thảo từ thời Aristole, và sách dược thảo cuả Dioscorides viết vào thế kỷ thứnhất sau TC có ghi trên 600 vị thuốc

cỏ cây [20]

Tại Anh, một công trình tương tự cũng đã được hoàn tất Tại Mỹ, dược thảo rất thông dụng với thổ dân bản xứ Năm 1716, nhà thám hiểm Pháp Lafitau đã tìm ra sâm Mỹ ở vùng New World Hiện nay sâm là tài nguyên xuất cảng quan trọng của Hoa Kỳ Cơ quan The American Botanical Council, Austin-Texas, dựa vào hai công trình của Đức và Anh, đã soạn thảo một tài liệu nói về 26 dược thảo thông dụng[20]

Với cơ quan Thực phẩm và Dược phẩm Hoa kỳ (FDA) thì dược thảo được xếp hạng như thực phẩm phụ, được bầy bán không cần thử nghiệm, nghiên cứu như âu dược, mặc dù dược thảo có tính cách trị bệnh và cũng có tác dụng phụ Dược thảo không được quảng cáo là có công dụng trị bệnh mà chỉ được nói chung chung về ích lợi của sản phẩm, thí dụ thuốc làm lợi tiểu tiện, bổ gan, tăng cường miễn nhiễm [20]

1.4 Tình hình sử dụng cây thuốc ở Việt Nam

Ngày nay, việc tìm kiếm các hoạt chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao

để làm thuốc là một xu thế được rất nhiều các nhà khoa học quan tâm Việt Nam là một trong những quốc gia thuộc vùng nhiệt đới, nơi có giá trị đa dạng sinh học cao chưa được khám phá Bên cạnh đó, cộng đồng các dân tộc ở nước ta cũng có vốn tri thức bản địa sử dụng các loài động vật, thực vật làm thuốc Hai lĩnh vực này được các nhà khoa học coi là một tiềm năng, trong việc tìm kiếm nghiên cứu tạo ra những loại thuốc mới, có hiệu lực điều trị cao trong tương lai

11

Theo kết quả điều tra của Viện Dược Liệu gần đây được ghi nhận được 3.948 loài thực vật và nấm lớn có công dụng làm thuốc; 52 loài tảo biển, 408 loài động vật và 75 loại khoáng vật có công dụng làm thuốc ở Việt Nam[17] Kết quả này cũng đã cho thấy nguồn dược liệu ở nước ta rất phong phú Con

số này có thể sẽ còn tăng thêm, nếu đi sâu điều tra cụ thể hơn một số nhóm động - thực vật tiềm năng, mà trong đó số loài Tảo, Rêu, Nấm và Côn trùng làm thuốc mới được thống kê còn quá ít

Trong tổng số 3.948 loài cây thuốc, gần 90 % là cây thuốc mọc tự nhiên, tập trung chủ yếu trong các quần xã rừng, chỉ có gần 10 % là cây thuốc trồng Theo số liệu thống kê của ngành Y tế, mỗi năm ở Việt Nam tiêu thụ từ 30 - 50 tấn các loại dược liệu khác nhau để sử dụng trong y học cổ truyền làm nguyên liệu cho công nghiệp Dược và xuất khẩu Trong đó, trên 2/3 khối lượng này được khai thác từ nguồn cây thuốc mọc tự nhiên và trồng trọt trong nước Riêng từ nguồn cây thuốc tự nhiên đã cung cấp tới trên 20.000 tấn mỗi năm Khối lượng dược liệu này trên thực tế mới chỉ bao gồm từ hơn 200 loài được khai thác và đưa vào thương mại có tính phổ biến hiện nay Bên cạnh đó, còn nhiều loài dược liệu khác vẫn được thu hái, sử dụng tại chỗ trong cộng đồng

và hiện chưa có những con số thống kê cụ thể [17]

Lịch sử y học dân tộc ta gắn với cây thuốc Nam Đại danh y Tuệ Tĩnh chính biểu tượng của trường phái thuốc Nam Ông sống vào cuối thời Trần với khẩu hiệu nổi tiếng: "Nam dược trị nam nhân” (Thuốc Nam Việt trị người Nam Việt) Đương thời trong các tác phẩm của mình, ông không đưa quan niệm “Ngũ hành” (Kim, Mộc Thủy, Hỏa, Thổ) lên hàng đầu như những trước tác của đời trước, mà xếp các yếu tố tự nhiên như cây, cỏ lên trước tiên Ông

là thần y không chỉ vì tài chữa bệnh mà còn ở khả năng tìm tòi, phát hiện nhiều vị thuốc Nam quý Trong cuốn "Hồng nghĩa giác thư y”, ông biên soạn khoảng 500 vị thuốc Nam Đặc biệt, các cuốn "Phú thuốc Nam” và "Nam

Theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO), khoảng 80% dân số tại các quốc gia đang phát triển, việc chăm sóc sức khoẻ ít nhiều có liên quan đến YHCT hoặc thuốc từ dược thảo truyền thống để bảo vệ sức khoẻ Tại Việt Nam, nhu cầu dược liệu trong nước khoảng gần 60.000 tấn một năm, trong đó, Việt Nam mới chỉ cung cấp được cho thị trường khoảng 15.600 tấn một năm, phần còn lại (khoảng 70%) phải nhập khẩu từ Trung Quốc, Đài Loan, Singapore… [18]

13

Chương2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Thời gian nghiên cứu

Từ tháng 9/2015 – 5/2016

2.2 Địa điểm nghiên cứu

Các ô thí nghiệm được trồng tại phường Xuân Hoà, thị xã Phúc Yên, tỉnh Vĩnh Phúc nơi có các đặc điểm cơ bản về điều kiện tự nhiên như sau:

2.2.1 Vị trí địa lý

Phúc Yên là một thị xã thuộc tỉnh Vĩnh Phúc Là đô thị cửa ngõ của tỉnh Vĩnh Phúc, Phúc Yên được xác định như là một trong những đô thị vệ tinh của Vùng thủ đô Hà Nội Thị xã Phúc Yên nằm ở phía Đông Nam tỉnh Vĩnh Phúc, phía Đông Bắc của Thủ đô Hà Nội, cách trung tâm thủ đô 30 km Thị

xã Phúc Yên có chiều dài theo trục Bắc - Nam 24 km, từ phường Hùng Vương đến đèo Nhe, xã Ngọc Thanh giáp với tỉnh Thái Nguyên

2.2.2 Địa hình

Nhìn chung, đất đai của Phúc Yên không nhiều, không giàu chất dinh dưỡng nhưng lại nằm gần kề thủ đô Hà Nội cho nên tài nguyên đất của thị xã

đã trở thành tài nguyên có giá trị kinh tế cao

Tài nguyên khoáng sản quý hiếm của thị xã hầu như không có gì ngoài đá granit, nước mặt và nước ngầm phong phú đáp ứng nhu cầu phát triển trong tương lai

14

2.3 Đối tƣợng nghiên cứu

Loài Diệp hạ châu (Phyllanthus amarus L) thuộc họ Thầu Dầu

Euphorbiaceae

Cây cỏ cao 20-40cm Tiết diện thân tròn, màu xanh, ở gốc có màu nâu

và có những sọc dọc màu trắng Cành dài 6,5-8,5 cm, các cành xếp khít nhau

ở phần ngọn, thưa ở phần gốc Lá đơn, mọc so le, xếp thành 2 dãy, mỗi cành giống như một lá kép lông chim gồm nhiều lá chét Phiến lá hình bầu dục đầu tròn có mũi nhọn, màu xanh lục, đậm ở mặt trên, nhạt ở mặt dưới, gốc đối xứng, kích thước 0,6-1,2 x 0,4- 0,6 cm, bìa phiến nguyên Gân lá hình lông chim, gân phụ không rõ Cuống lá rất ngắn, hình sợi màu xanh, dài 0,5

mm Lá kèm hình tam giác, cao 0,8 mm, màu xanh nhạt [22]

Cụm hoa: ở mỗi nách lá thường có 1 hoa đực và 1 hoa cái, những lá phía gốc cành thường chỉ có 1 hoa cái, rất ít gặp trường hợp ở nách lá có 1 hoa cái và 2 hoa đực Hoa vô cánh, đều, đơn tính cùng gốc, mẫu 5 Hoa đực

có cuống hình trụ màu xanh lục rất ngắn 0,8 mm, ngắn hơn cuống hoa cái Lá đài 5, đều, rời, hình trứng, đầu nhọn, màu xanh lục ở giữa, 2 mép bên màu trắng, kích thước 0,7 x 0,35 mm Tiền khai 5 điểm Nhị 3, đều, dính nhau ở phần lớn chỉ nhị thành 1 cột mang 3 bao phấn ở đỉnh, bao phấn Đĩa mật chia làm 5 khối hình cầu màu vàng hình bầu dục nằm ngang, mở theo đường nứt ngang Hạt phấn hình bầu dục, rời, màu vàng, có rãnh dọc, kích thước 25 x 17,5 Hoa cái có cuống hình trụ màu xanh, gốc nhỏ, đỉnh phình to Lá đài giống lá đài của hoa đực, tồn tại, tiền khai lợp [22]

Lá noãn 3, bầu trên 3 ô, mỗi ô 2 noãn, đính noãn trung trụ 3 vòi nhụy hình sợi màu xanh cong ra bên ngoài, dài 0,1 mm 3 đầu nhụy màu xanh, chia

2 thùy, dài 0,05 mm Đĩa mật chia làm 5 thùy màu xanh Quả nang, hình cầu dẹt, màu xanh, có 6 rãnh, kích thước 2 x 1,1 mm, mang 5 lá đài tồn tại Cuống hình trụ, phình ở đỉnh, màu xanh Quả nứt dọc thành 3 mảnh, mỗi mảnh chứa

- Bốn ô bố trí trồng trong chế độ ánh sáng khác nhau bằng cách sử dụng lưới che ở các mức độ che sáng 25% (ô TN I), 50% (ô TN II), 75% (ô TN III)

và 100% (ô TN IV)

- Một ô đối chứng (ô TN ĐC)

Trên cơ sở đố tiến hành đo các chỉ số về tốc độ sinh trưởng, số lá, kích thước của lá, kích thước của cây với thời gian 7 ngày/1 lần từ đó rút ra nhận xét ảnh hưởng của các chế độ ánh sáng khác nhau đến sinh trưởng của cây

16

Hình 2.1 Ô thí nghiệm I (25% che sáng) Hình 2.2 Ô thí nghiệm II (50% che sáng)

Hình 2.3 Ô thí nghiệm III (75% che sáng) Hình 2.4 Ô thí nghiệm IV (100% che sáng)

Hình 2.5 Ô thí nghiệm đối chứng (ĐC)

2.4.3 Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa

2.4.3.1 Phương pháp đo tăng trưởng chiều cao và đường kính

Để xác định tăng trưởng đường kính của cây, chúng tôi dùng thước kẹp (độ chính xác 0,01mm) đo tại vị trí sát gốc thân chính Chiều cao chồi cây được do bằng thước dây từ vị trí xuất phát của chồi sát thân cây chính tới chồi ngọn Đường kính và chiều cao của thân đo 7 ngày/1 lần

-Tăng trưởng chiều cao ( H)

H = Hn+1 - Hn

+ Hn: chiều cao đo ở lần thứ n

+ Hn+1: chiều cao đo ở lần thứ n+1

-Tăng trưởng đường kính ( D)

D = Dn+1 - Dn

+ Dn+1: Đường kính thân đo ở lần thứ n+1

+ Dn: Đường kính đo ở lần thứ n

2.4.3.2 Xác định số lượng lá sinh ra, số lượng lá rụng và số lá trên cây

Đếm số lá có trên cây và số lá rụng cùng thời gian đo tăng trưởng đường kính và chiều cao cây Số lượng lá rụng được xác định bằng các vết lá trên cây Số lượng lá đã sinh ra là tổng của số lá trên cây và số lá rụng

18

2.4.3.3 Đo diện tích lá

Bằng phương pháp sử dụng giấy kẻ ô ly

2.4.3.4 Phương pháp xử lý số liệu

Xử lý số liệu bằng toán thống kế và xử lý thống kê kết quả nghiên cứu

trên máy tính bằng Excel 5.0 (Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi, 1996) [22]

- Giá trị trung bìnhX :

n

x x

n X

n

i i n

i i

Sử dụng phương pháp cắt bằng dao lam

2.4.4.2 Phương pháp làm tiêu bản hiển vi

- Mẫu vi phẫu sau khi cắt được ngâm ngay và nước Javen khoảng

15-20 phút

- Rửa sạch mẫu bằng nước cất và ngâm mẫu vào trong axit axetic trong khoảng 5 phút

- Rửa lại bằng nước cất

- Đưa mẫu nhuộm trong dung dịch xanh metylen trong 30 giây đên 1 phút

- Lấy mẫu ra rửa sạch bằng nước cất

19

- Nhuộm mẫu trong dung dịch Carmin khoảng 20 phút đến 2 giờ

- Lấy mẫu ra rửa sạch bằng nước cất

- Đưa mẫu vật lên kính hiển vi quan sát

- Quan sát, đo và đếm mẫu vật qua kính hiển vi quang học

- Sử dụng trắc vi thị kính và trắc vi vật kính để xác định kích thước các thành phần cấu tạo tế bào

- Ghi lại hình ảnh quan sát được bằng máy ảnh kỹ thuật số nối với kính hiển vi quang học

20

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Ảnh hưởng của chế độ che sáng khác nhau tới hình thái và cấu tạo giải phẫu của loài Diệp hạ châu

3.1.1 Đặc điểm hình thái và cấu tạo giải phẫu của rễ

3.1.1.1 Đặc điểm hình thái của rễ

Sau khi kết thúc thời gian nghiên cứu các đặc điểm sinh trưởng của cây Diệp hạ châu, chúng tôi tiến hành nghiên cứu các đặc điểm hình thái của rễ Qua quan sát chúng tôi thấy rễ cây Diệp hạ châu tương đối mềm do các thành phần cấu tạo hoá gỗ ít, có màu nâu vàng Trong điều kiện che sáng khác nhau, kích thước và hình thái của rễ không có nhiều sự khác biệt

Rễ của loài Diệp hạ châu thuộc dạng rễ cọc, rễ bên phát triển mạnh, giúp hấp thụ tối đa lượng nước và muối khoáng trong đất

Hình 3.1: Hình thái của rễ Diệp hạ châu (P.amarus)

1.Rễ ở tuần thứ 2 2 Rễ ở tuần thứ 8

3.1.1.2 Cấu tạo giải phẫu của rễ

Xét một cách tổng quát, cấu tạo giải phẫu của rễ cây Diệp hạ châu mang những đặc điểm cấu tạo cơ bản của rễ cây Hai lá mầm Các đặc điểm cấu tạo giải phẫu của rễ cây Diệp hạ châu ở các ô TN che sáng là giống nhau, chỉ

21

khác về kích thước tế bào và kích thước các thành phần cấu tạo

*Cấu tạo sơ cấp

Cấu tạo sơ cấp của rễ cây Diệp hạ châu gồm phần vỏ và phần trụ phân biệt nhau rõ ràng

- Phần vỏ

Ngoài cùng là một lớp tế bào biểu bì hình đa giác, kích thước không đều xếp sát nhau, tế bào không có tầng cuticun bên ngoài do đó các tế bào này thấm nước dễ dàng, thích hợp với chức năng hút nước

Bên trong biểu bì là 1-2 lớp tế bào ngoại bì, gồm các tế bào hình trứng hoặc đa giác, kích thước không đồng đều, có nhiều góc hoá gỗ sớm Ngoại bì phát triển mạnh tạo nên mô bì vững chắc dần thay thế cho biểu bì

Sát với ngoại bì là 10-14 lớp tế bào mô mềm vỏ mô mềm vỏ chia thành

3 vùng rõ rệt, khác biệt nhau về hình thái

Mô mềm vỏ ngoài gồm 2-3 lớp tế bào hình trứng, kích thước không đều, sắp xếp lộn xộn nằm sát lớp biểu bì, có chức năng như mô che chở nên vách