Luận án NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC MỘT SỐ GEN THUỘC HỆ MIỄN DỊCH TÔM SÚ

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. Nội dung nghiên cứu 2 Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 Tôm sú và các bệnh thường gặp ở tôm sú 3 Giới thiệu về tôm sú 3 Tình hình nuôi và dị ch bệ nh tôm sú ở Việ t Nam 5 Các bệnh thường gặp ở tôm sú 7 Phương phá p phòng và trị bệnh ở tôm sú 12 Hệ miễn dịch tôm sú 14 Đáp ứng miễn dịch tế bào 15 Đáp ứng miễn dịch dịch thể 21 Nghiên cứ u gen và tiề m năng ứ ng dụ ng trong phò ng trị bệ nh cho tôm s.u 23 Tình hình nghiên cứu genome tôm sú trên thế giới 23 Nghiên cứu gen liên quan đế n khả năng miễ n dị ch ở tôm sú 24 Tiề m năng ứng dụ ng củ a gen liên quan đế n miễ n dị ch trong phò ng trị bệnh ở tôm sú 28 Chƣơng 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 32 Vật liệu 32 Thu thập mẫu 32 Hóa chất 32 Thiết bị 34 Các vi sinh vật được sử dụng trong nghiên cứu 34 Phương pháp nghiên cứu 35 Tách chiết RNA tổng số 36 Tinh sạch mRNA 37 Tổng hợp cDNA 38 Thiết kế mồi phân lập một số gen (cDNA) lựa chọn 41 Khuếch đại gen bằng phản ứng PCR 48 Tinh sạch sản phẩm PCR 49 Tạo dòng phân tử sản phẩm PCR 49 Xác định trình tự gen (cDNA) 50 Biểu hiện gen ALFPm3 50 Phân tích dữ liệu trình tự và xử lý số liệu 55 Địa điểm nghiên cứu và hoàn thành luận án 55 Chƣơng 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 56 Gen Rab7 protein liên quan đế n cơ chế xâm nhiễ m củ a virus 56 Tạo dòng gen Rab7 từ mẫu tôm sú Việt Nam 56 Xác định và phân tích trình tự gen Rab7 58 Gen syntenin protein liên quan đến con đườ ng dẫ n truyề n tí n hiệ u 61 Phân lậ p đoạn 5‟syntenin từ mẫu tôm sú Việt Nam 62 Tạo dòng gen syntenin hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam 64 Xác định và phân tích trình tự gen syntenin 65 Gen hemocyanin protein có hoạt tính phenoloxidase 68 Phân lập đoạn 5‟hemocyanin từ mẫu tôm sú Việt Nam 69 Tạo dòng gen hemocyanin hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam 72 Phân tích trình tự gen hemoccyanin 74 Gen Ran protein điề u khiể n thự c bà o 76 Tạo dòng một phần đoạn gen Ran từ mẫu tôm sú Việt Nam 77 Phân lập đoạn gen 3‟ và 5‟Ran 78 Tạo dòng gen Ran hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam 82 Xác định và phân tích trình tự gen Ran 83 Gen caspase protein tham gia và o cơ chế apoptosis 84 Tạo dòng gen caspase từ mẫu tôm sú Việt Nam 85 Xác định và phân tích trình tự gen caspase 86 Hệ thống cácgen mã hóa protein khá ng khuẩ n, kháng nấm và kháng virus 90 Gen mã hóa protein khá ng virus PmAV 90 Gen mã hóa peptide khá ng khuẩ n t ương tự crustin (crustin like antimicrobial peptide) 94 Gen mã hóa yếu tố kháng khuẩn (ALF antiliposaccharide factor) 99 Biể u hiệ n yế u tố khá ng khuẩ n tái tổ hợp (rALFPm3) 105 Tạo cấu trúc vector biểu hiện gen 105 Xác định cấu trúc gen ALFPm3 được chuyển vào genome nấm men 108 Xác định đoạn peptide ALFPm3 được biểu hiện 109 Phân tích hoạt tính của rALFPm3 111 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 113 1. Kết luận 113 2. Kiến nghị 114 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 115

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN HOÀNG THỊ THU YẾN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC MỘT SỐ GEN THUỘC HỆ MIỄN DỊCH TÔM SÚ (PENAEUS MONODON) Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62 42 70 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS NÔNG VĂN HẢI TS PHẠM ANH TUẤN LỜI CẢM ƠN ii Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nông Văn Hải TS Phạm Anh Tuấn tận tình hướng dẫn, bảo hết lòng giúp đỡ để hoàn thành công trình nghiên cứu Tôi xin cảm ơn cấp Lãnh đạo Đại học Thái Nguyên, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên, Khoa Sinh - KTNN Khoa Sau đại học tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận án Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới Lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học, Phòng trọng điểm Công nghệ gen, tập thể cán nghiên cứu Phòng ADN ứng dụng thuộc Viện Công nghệ sinh học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, đặc biệt TS Kim Thị Phƣơng Oanh tạo điều kiện vật chất, phương tiện giúp đỡ trình nghiên cứu Tôi xin cảm ơn cấp Lãnh đạo Trường Đại học khoa học, Khoa Khoa học Sự sống, Phòng ĐT - KH QHQT tạo điều kiện giúp đỡ mặt suốt trình nghiên cứu thực đề tài luận án Tôi xin cảm ơn tập thể nghiên cứu thực đề tài cấp nhà nước: “Nghiên cứu giải trình tự phần gen xây dựng sở liệu genome tôm sú (P monodon)” thuộc Chương trình Công nghệ sinh học thủy sản 2008-2010, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn tạo điều kiện kinh phí để thực luận án Tôi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân, bạn đồng nghiệp, người động viên, khuyến khích giúp đỡ mặt để hoàn thành công việc nghiên cứu Thái Nguyên, tháng năm 2012 Tác giả luận án Hoàng Thị Thu Yến LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tấ t cả kết nghiên cứ u luận án trung thực chưa công bố công trình khác Nế u sai xin chị u trá ch nhiệm hoàn toàn Thái Nguyên, tháng năm 2012 Tác giả luận án Hoàng Thị Thu Yến MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề .1 Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tôm sú bệnh thường gặp tôm sú Giới thiệu tôm sú Tình hình nuôi và dị ch bệ nh tôm sú Việ t Nam Các bệnh thường gặp tôm sú .7 Phương phá p phòng trị bệnh tôm sú 12 Hệ miễn dịch tôm sú 14 Đáp ứng miễn dịch tế bào .15 Đáp ứng miễn dịch dịch thể 21 Nghiên cứ u gen và tiề m ứ ng dụ ng phò ng trị bệ nh cho tôm s.u 23 Tình hình nghiên cứu genome tôm sú giới .23 Nghiên cứu gen liên quan đế n khả miễ n dị ch tôm sú 24 Tiề m ứng dụ ng củ a gen liên quan đế n miễ n dị ch phò ng trị bệnh tôm sú 28 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 32 Vật liệu 32 Thu thập mẫu 32 Hóa chất 32 Thiết bị 34 Các vi sinh vật sử dụng nghiên cứu 34 Phương pháp nghiên cứu 35 Tách chiết RNA tổng số 36 Tinh mRNA 37 Tổng hợp cDNA 38 Thiết kế mồi phân lập số gen (cDNA) lựa chọn 41 Khuếch đại gen phản ứng PCR 48 Tinh sản phẩm PCR 49 Tạo dòng phân tử sản phẩm PCR 49 Xác định trình tự gen (cDNA) .50 Biểu gen ALFPm3 50 Phân tích liệu trình tự xử lý số liệu 55 Địa điểm nghiên cứu hoàn thành luận án 55 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 56 Gen Rab7 - protein liên quan đế n chế xâm nhiễ m củ a virus .56 Tạo dòng gen Rab7 từ mẫu tôm sú Việt Nam 56 Xác định phân tích trình tự gen Rab7 58 Gen syntenin - protein liên quan đến đườ ng dẫ n truyề n tí n hiệ u .61 Phân lậ p đoạn 5‟-syntenin từ mẫu tôm sú Việt Nam 62 Tạo dòng gen syntenin hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam 64 Xác định phân tích trình tự gen syntenin 65 Gen hemocyanin - protein có hoạt tính phenoloxidase 68 Phân lập đoạn 5‟-hemocyanin từ mẫu tôm sú Việt Nam .69 Tạo dòng gen hemocyanin hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam 72 Phân tích trình tự gen hemoccyanin 74 Gen Ran - protein điề u khiể n thự c bà o .76 Tạo dòng phần đoạn gen Ran từ mẫu tôm sú Việt Nam .77 Phân lập đoạn gen 3‟ 5‟-Ran 78 Tạo dòng gen Ran hoàn chỉnh từ mẫu tôm sú Việt Nam .82 Xác định phân tích trình tự gen Ran 83 Gen caspase - protein tham gia và o chế apoptosis .84 Tạo dòng gen caspase từ mẫu tôm sú Việt Nam 85 Xác định phân tích trình tự gen caspase 86 Hệ thống cácgen mã hóa protein khá ng khuẩ n, kháng nấm kháng virus 90 Gen mã hóa protein khá ng virus PmAV .90 Gen mã hóa peptide khá ng khuẩ n t ương tự crustin (crustin - like antimicrobial peptide) 94 Gen mã hóa yếu tố kháng khuẩn (ALF - antiliposaccharide factor) 99 Biể u hiệ n yế u tố khá ng khuẩ n tái tổ hợp (rALFPm3) 105 Tạo cấu trúc vector biểu gen .105 Xác định cấu trúc gen ALFPm3 chuyển vào genome nấm men 108 Xác định đoạn peptide ALFPm3 biểu .109 Phân tích hoạt tính rALFPm3 .111 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 113 Kết luận 113 Kiến nghị 114 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN .115 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng Việt Nghĩa tiếng Anh 5‟UTR Vùng 5‟ không dịch mã 5‟ Untranslated region 3‟UTR Vùng 3‟ không dịch mã 3‟ Untranslated region AAP Mồi neo Abridged anchor primer AFLP Đa hình chiều dài DNA Amplified khuếch đại polymorphism ALF Yếu tố kháng khuẩn Anti-lipopolisaccharide factor ALFPm ALF dạng tôm sú Anti-lipopolisaccharide factor fragment length Penaeus monodon isorform ALFPm3 ALF dạng tôm sú Anti-lipopolisaccharide factor Penaeus monodon isorform AMP Peptide kháng khuẩn Antimicrobial peptide apoptosis Tế bào chết theo chương trình Programmed cell death bp Cặp base Base pair B.megaterium Bacillus megaterium Bacillus megaterium cDNA DNA bổ sung Complement DNA DP Mồi suy diễn Degenerate primer DNA Axit deoxyribonucelic Deoxyribonucleic acid dNTPs Hỗn hợp nucleotide (dATP, Deoxyribonucleoside triphosphate dCTP, dGTP, dTTP) ddNTPs Hỗn hợp deoxynicleotide Dideoxyribonucleoside triphosphate (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP) dsRNA RNA sợi kép Double stranded RNA DEPC Chất khử Rnase Diethyl pyrocarbonate E aerogenes Vi khuẩn Enterobacter aerogenes Enterobacter aerogenes E coli Vi khuẩn Escherichia coli Escherichia coli EDTA Axit ethylenediaminetetraacetic Ethylenediaminetetraacetic acid EST Đoạn trình tự gen biểu Expressed sequence tag GSP Mồi đặc hiệu gen Gene specific primer kb Kb Kilo base LB Môi trường LB Luria Bertani mtDNA DNA ty thể Mitochondrial DNA mRNA RNA thông tin Messenger RNA OD Mật độ quang Optical density ORF Khung đọc mở Open reading frame PCR Phản ứng chuỗi polymerase Polymerase chain reaction PmAV Gen khá ng virus ở Penaeus monodon antivrus PmRab7 Rab7 tôm sú Penaeus monodon Rab7 P pastoris Nấm men Pichia pastoris Pichia pastoris 3‟RACE Khuếch đại nhanh đầu 3‟ cDNA Rapid amplification of cDNA 3' ends 5‟RACE Khuếch đại nhanh đầu 5‟ cDNA Rapid amplification of cDNA 5' ends rALFPm3 ALF tái tổ hợp tôm sú dạng từ Recombinant anti-lipopolisaccharide tôm sú tôm sú factor Penaeus monodon RNA Axit ribonucleic Ribonucleic acid RNAi RNA can thiệp RNA interference RNase Enzyme phân hủy RNA Ribonuclease RT Enzyme phiên mã ngược Reverse transcriptase RT-PCR PCR enzyme phiên mã ngược Reverse transcriptase-PCR siRNA RNA can thiệp nhỏ Small interfering RNA SNP Đa hình nucleotide đơn Single-nucleotide polymorphism SSC Dung dị ch Natri citrate Solution sodium citrate TSV Virus gây hội chứng taura Taura syndrome virus UAP Mồi khuếch đại chung Universal amplication primer UPM Hỗn hợp mồi chung Universal primer mix v/p vòng/phút rotor/minute WSSV Virus gây bệnh đốm trắng White spot syndrome virus YHV Virus gây bệnh đầu vàng Yellow head virus YP Môi trường YP Yeast peptone YPD Môi trường YPD Yeast peptone dextrose DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thố ng kê cá c gen liên quan đế n hệ miễ n dị ch tôm .26 Bảng 2.1 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu .34 Bảng 2.2 Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu .47 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh tôm sú Hình 1.2 Tôm sú nhiễm WSSV .10 Hình 1.3 Tôm sú nhiễm YHV 12 Hình 1.4 Tế bà o má u tôm sú 17 Hình 1.5 Hệ thống hoạt hóa proPO tổng hợp melanin .19 Hình 1.6 Cơ chế đông máu tôm 21 Hình 2.1 Sơ đồ phân lập gen 35 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế mồi từ gen biết trình tự 42 Hình 2.3 Sơ đồ thiết kế mồi từ gen biết phần trình tự đầu 3‟ (Invitrogen) 42 Hình 2.4 Sơ đồ thiết kế mồi từ gen biết phần trình tự đầu 3‟ (Clontech) .43 Hình 2.5 Sơ đồ thiết kế mồi biết phần trình tự đầu 5‟ gen 43 Hình 2.6 Sơ đồ thiết kế mồi phân lập gen syntenin 44 Hình 2.7 Sơ đồ thiết kế mồi phân lập gen hemocyanin 44 Hình 2.8 Sơ đồ thiết kế mồi phân lập gen Ran 45 Hình 2.9 Sơ đồ thiết kế mồi để phân lập gen hoàn toàn tôm sú 46 Hình 2.10 Sơ đồ thiết mồi khuếch đại đoạn gen mã hóa peptide ALFPm3 trưởng thành 46 Hình 2.11 Sơ đồ biểu ALFPm3 51 Hình 3.1 Kết điện di sản phẩm khuếch đại tách dòng gen Rab7 57 Hình 3.2 Trình tự gen amino acid suy diễn Rab7 58 Hình 3.3 So sánh trình tự nucleotide gen Rab7 tôm sú Việt Nam với trình tự công bố 59 Hình 3.4 Mô cấu trúc bậc hai phân tích motif chức protein Rab7 60 Hình 3.5 Kết điện di sản phẩm khuếch đại tách dòng đoạn 5‟-syntenin 62 142 Martin G G., Graves B (2005), "Fine structure and classification of shrimp haemocytes", J Morphol 185, pp 339-348 13 Essential Guide for the 143 Mateljan G (2006), "The World's Healthiest Foods, Healthiest Way of Eating", Published World's Healthiest Foods, 880 pp 144 Meng-Yi C., Kuang-Yu H U B., Chih-Cheng H., Yen-Ling S (2005), "More than one type of transglutaminase in invertebrates? A second type of transglutaminase is involved in shrimp coagulation", Dev Comp Immunol 29, pp 1003-1016 145 Motoh H (1984), "Biology and ecology of Penaeus monodon Proceedings of the First International Conference on the Culture of Penaeid Prawns/Shrimp", SEAFDEC Aquaculture Department, Iloilo City, pp 27-36 146 Mylonakis E., Aballay A (2005), "Worms and flies as genetically tractable animal models to study host-pathogen interactions", Infect Immun 73(7), pp 38333841 147 Nadala E C., Tapay L M., Cao S., Loh P C (1997), "Detection of yellowhead virus and Chinese baculovirus in penaeid shrimp by the Western blot technique", J Virol Methods 69(1-2), pp 39-44 148 Nadala E C B J., Loh P C (2000), "Dot-blot nitrocellulose immunoassay for the detection of white spot virus and yellow head virus of penaeid shrimp", J Virol Methods 84, pp 175-179 149 Nagai T., Osaki T., Kawabata S (2001), "Functional conversion of hemocyanin to phenoloxidase by horseshoe crab antimicrobial peptides", J Biol Chem 276(29), pp 27166-27170 150 Nappi A J., Ottaviani E (2000), "Cytotoxicity and cytotoxic molecules in invertebrates", Bioessays 22(5), pp 469-480 151 Nathan C., Shiloh M U (2000), "Reactive oxygen and nitrogen intermediates in the relationship between mammalian hosts and microbial pathogens", Proc Natl Acad Sci U S A 97(16), pp 8841-8848 152 Nayak S., Singh S K., Ramaiah N., Sreepada R A (2010), "Identification of upregulated immune-related genes in Vibrio harveyi challenged Penaeus monodon postlarvae", Fish Shellfish Immunol 29(3), pp 544-549 153 Neves C A., Santos E A., Bainy A C (2000), "Reduced superoxide dismutase activity in Palaemonetes argentinus (Decapoda, Palemonidae) infected by Probopyrus ringueleti (Isopoda, Bopyridae)", Dis Aquat Organ 39(2), pp 155158 154 Nevo R., Stroh C., Kienberger F., Kaftan D., Brumfeld V., Elbaum M., Reich Z., Hinterdorfer P (2003), "A molecular switch between alternative 131beta1", Nat Struct Biol conformational states in the complex of Ran and importin 10(7), pp 553-557 155 O'Brien V (1998), "Viruses and apoptosis", J Gen Virol 79(8), pp 1833-1845 156 Ongvarrasopone C., Chanasakulniyom M., Sritunyalucksana K., Panyim S (2008), "Suppression of PmRab7 by dsRNA inhibits WSSV or YHV infection in shrimp", Mar Biotechnol (NY) 10(4), pp 374-381 157 Pais R., Khushiramani R., Karunasagar I., Karunasagar I (2008), "Effect of immunostimulants on the haemolymph haemagglutinins of tiger shrimp Penaeus monodon", Aquac Res 39, pp 1339-1345 158 Peng S E., Lo C F., Lin S C., Chen L L., Chang Y S., Liu K F., Su M S., Ko G H (2001), "Performance of WSSV-infected and WSSV-negative Penaeus monodon postlarvae in culture ponds", Dis Aquat Org 46(3), pp 165-172 159 Perkel J M (2009), "Shrimp study exposes mechanisms of innate immunity", J Proteome Res 8(3), pp 1107 160 Phongdara A., Laoong-u-thai Y., Wanna W (2007), "Cloning of eIF5A from shrimp Penaeus monodon, a highly expressed protein involved in the survival of WSSV-infected shrimp", Aquaculture 265, pp 16-26 161 Pick C., Schneuer M., Burmester T (2009), "The occurrence of hemocyanin in Hexapoda", FEBS J 276(7), pp 1930-1941 162 Ponprateep S., Somboonwiwat K., Tassanakajon A (2009), "Recombinant anti-lipopolysaccharide factor isoform and the prevention of vibriosis in the black tiger shrimp, Penaeus monodon", Aquaculture 289, pp 219-224 163 Ramasamy P., Rajan P R., Jayakumar R., Rani S., Brenner G P (1996), "Lagenidium callinectes (Couch, 1942) infection and its control in cultured larval Indian tiger prawn, Penaeus monodon Fabricus", J Fish Dis 19, pp 75-82 164 Rameshthangam P., Ramasamy P (2007), "Antiviral activity of bis(2methylheptyl)phthalate isolated from Pongamia pinnata leaves against White Spot Syndrome Virus of Penaeus monodon Fabricius", Virus Res 126(1-2), pp 38-44 165 Ranganathan S., Simpson K J., Shaw D C., Nicholas K R (1999), "The whey acidic protein family: a new signature motif and three-dimensional structure by comparative modeling", J Mol Graph Model 17(2), pp 106-113 166 Rattanachai A., Hirono I., Ohira T., Takahashi Y., Aoki T (2004), "Molecular cloning and expression analysis of alpha 2-macroglobulin in the kuruma shrimp, Marsupenaeus japonicus", Fish Shellfish Immunol 16(5): 599-611 132 167 Reddy K V R., Yedery R D., Aranha C C (2004), "Antimicrobial peptide: Premises and promises", Int J Antimicrob Agents 24, pp 536-547 168 Reed L A., Siewickib T C., Shah J C (2004), "Pharmacokinetics of oxytetracycline in the white shrimp, Litopenaeus setiferus", Aquaculture 232, pp 11 -28 169 Relf J M., Chisholm J R., Kemp G D., Smith V J (1999), "Purification and characterization of a cysteine-rich 11.5-kDa antibacterial protein from the granular haemocytes of the shore crab, Carcinus maenas", Eur J Biochem 264(2), pp 350357 170 Robalino J., Almeida J S., McKillen D., Colglazier J., Trent H F., Chen Y A., Peck M E., Browdy C L., Chapman R W., Warr G W., Gross P S (2007), "Insights into the immune transcriptome of the shrimp Litopenaeus vannamei: tissue-specific expression profiles and transcriptomic responses to immune challenge", Physiol Genomics 29(1) pp 44-56 171 Robalino J., Browdy C L., Prior S., Metz A., Parnell P., Gross P., Warr G (2004), "Induction of antiviral immunity by double-stranded RNA in a marine invertebrate", J Virol 78(19), pp 10442-10448 172 Roch P (1999), "Defense mechanisms and disease prevention in farmed marine invertebrates", Aquaculture 172, pp 125-145 173 Romanos M A., Scorer C A., Clare J J (1992), "Foreign Gene Expression in Yeast: A Review", Yeast 8, pp 423-488 174 Rosenberry B (2004), "World shrimp farming 2004 In Shrimp News International", San Diego, California, USA 175 Rost B., Yachdav G., Liu J (2007), "The PredictProtein Server", Nucleic Acids Research32 (Web Server issue, pp 321-326, Website: http://www.predictprotein.org/: 176 Roux M M., Pain A., Klimpel K R., Dhar A K (2002), "The lipopolysaccharide and beta-1,3-glucan binding protein gene is upregulated in white spot virus-infected shrimp (Penaeus stylirostris)", J Virol 76(14), pp 71407149 177 Salvesen G S., Dixit V M (1999), "Caspase activation: the induced-proximity model", Proc Natl Acad Sci U S A 96(20), pp 10964-10967 178 Sambrook J., Russell D.W (2001), "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 3rd, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 179 Sangsuriya P., Rojtinnakorn J., Senapin S., Flegel T W (2007), "Characterization and tissue expression of apoptosis-related ALG-2 interacting protein Alix/AIP1 from the black tiger shrimp Penaeus133 monodon", Fish Shellfish Immunol 23(2), pp 485-492 180 Sarathi M., Simon M C., Ahmed V P., Kumar S R., Hameed A S (2008), "Silencing VP28 gene of white spot syndrome virus of shrimp by bacterially expressed dsRNA", Mar Biotechnol (NY) 10(2), pp 198-206 181 Seabra M C., Mules E H., Hume A N (2002), "Rab GTPases, intracellular traffic and disease", Trends Mol Med 8(1), pp 23-30 182 Shekhar M S., Azad I S., Ravichandran P (2006), "Comparison of dot blot and PCR diagnostic techniques for detection of white spot syndrome virus in different tissues of Penaeus monodon", Aquaculture 261, pp 1122-1127 183 Sithigorngul P., Chauychuwong P., Sithigorngul W., Longyant S., Chaivisuthangkura P., Menasveta P (2000), "Development of a monoclonal antibody specific to yellow head virus (YHV) from Penaeus monodon", Dis Aquat Org 42, pp 27-34 184 Sithigorngul P., Rukpratanporn S., Chauychuwong P., Sithigorngul W., Longyant S., Chaivisuthangkura P., Menasveta P (2002), "Monoclonal antibodies specific to yellow head virus (YHV) from Penaeus monodon", Dis Aquat Org 49, pp 71-76 185 Smith V J., Fernandes J M., Kemp G D., Hauton C (2008), "Crustins: enigmatic WAP domain-containing antibacterial proteins from crustaceans", Dev Comp Immunol 32(7), pp 758-772 186 Smith V J., Fernandes J M., Kemp G D., Hauton C (2008), "Crustins: Enigmatic WAP domain-containing antibacterial proteins from crustaceans", Dev Comp Immunol 32, pp 758-772 187 Soderhall I., Bangyeekhun E., Mayo S., Soderhall K (2003), "Hemocyte production and maturation in an invertebrate animal; proliferation and gene expression in hematopoietic stem cells of Pacifastacus leniusculus", Dev Comp Immunol 27(8), pp 661-672 188 Soderhall K., Cerenius L (1998), "Role of the prophenoloxidase-activating system in invertebrate immunity", Curr Opin Immunol 10(1), pp 23-28 189 Somboonwiwat K., Chaikeeratisak V., Wang H C., Fang Lo C., Tassanakajon A (2010), "Proteomic analysis of differentially expressed proteins in Penaeus monodon hemocytes after Vibrio harveyi infection", Proteome 134 Sci 8, pp 39 190 Somboonwiwat K., Marcos M., Tassanakajon A., Klinbunga S., Aumelas A., Romestand B., Gueguen Y., Boze H., Moulin G., Bachere E (2005), "Recombinant expression and anti-microbial activity of anti-lipopolysaccharide factor (ALF) from the black tiger shrimp Penaeus monodon", Dev Comp Immunol 29(10), pp 841-851 191 Sritunyalucksana K., Cerenius L., Soderhall K (1999), "Molecular cloning and characterization of prophenoloxidase in the black tiger shrimp, Penaeus monodon", Dev Comp Immunol 23(3), pp 179-186 192 Sritunyalucksana K., Wannapapho W., Lo C F., Flegel T W (2006), "PmRab7 is a VP28-binding protein involved in white spot syndrome virus infection in shrimp", J Virol 80(21), pp 10734-10742 193 Sritunyalucksana K., Wongsuebsantati K., Johansson M W., Soderhall K (2001), "Peroxinectin, a cell adhesive protein associated with the proPO system from the black tiger shrimp, Penaeus monodon", Dev Comp Immunol 25(5-6), pp 353-363 194 Supamattaya K., Chittiwan V., Boonyaratpalin M (2006), "Immunological factors in Black Tiger shrimp, Penaeus monodon, Fabricius", www.en.engormix.com: 195 Supungul P., Klinbunga S., Pichyangkura R., Hirono I., Aoki T., Tassanakajon A (2004), "Antimicrobial peptides discovered in the black tiger shrimp Penaeus monodon using the EST approach", Dis Aquat Organ 61(1-2), pp 123-135 196 Supungul P., Klinbunga S., Pichyangkura R., Jitrapakdee S., Hirono I., Aoki T., Tassanakajon A (2002), "Identification of immune-related genes in hemocytes of black tiger shrimp (Penaeus monodon)", Mar Biotechnol (NY) 4(5), pp 487-494 197 Supungul P., Tang S., Maneeruttanarungroj C., Rimphanitchayakit V., Hirono I., Aoki T., Tassanakajon A (2008), "Cloning, expression and antimicrobial activity of crustinPm1, a major isoform of crustin, from the black tiger shrimp Penaeus monodon", Dev Comp Immunol 32(1), pp 61-70 198 Susan L G., Saban T., Peter J H (2008), "Extraction and purification of total RNA using TRIzol or trireagent", Dept of Animal Sciences, University of Florida (SLG is currently at Purdue Pharma Inc.) www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/RNA_extraction.htm 199 Takahashi Y., Kondo M., Itami T., Honda T., Inagawa H., Nishizawa T., Soma G I., Yokomizo Y (2000), "Enhancement of disease resistance against penaeid 135 in haemolymph of acute viraemia and induction of virus-inactivating activity kuruma shrimp, Penaeus japonicus, by oral administration of Pantoea agglomerans lipopolysaccharide (LPS)", Fish Shellfish Immunol 10(6), pp 555-558 200 Tang K F J., Lightner D V (1999), "A yellowhead virus gene probe: nucleotide sequence and application for in situ hybridization", Dis Aquat Org 35, pp 165-173 201 Tanticharoen M., Flegel T W., Meerod W., Grudloyma U., Pisamai N (2008), "Aquacultural biotechnology in Thailand: the case of the shrimp industry", J Biotechnol, 10 (6), pp 588-603 202 Tassanakajon A., Amparyup P., Somboonwiwat K., Supungul P (2010), "Cationic antimicrobial peptides in penaeid shrimp", Mar Biotechnol (NY) 12(5), pp 487-505 203 Tassanakajon A., Klinbunga S., Paunglarp N., Rimphanitchayakit V., Udomkit A., Jitrapakdee S., Sritunyalucksana K., Phongdara A., Pongsomboon S., Supungul P., Tang S., Kuphanumart K., Pichyangkura R., Lursinsap C (2006), "Penaeus monodon gene discovery project: the generation of an EST collection and establishment of a database", Gene 384, pp 104-112 204 Tharntada S., Ponprateep S., Somboonwiwat K., Liu H., Soderhall I., Soderhall K., Tassanakajon A (2009), "Role of anti-lipopolysaccharide factor from the black tiger shrimp, Penaeus monodon, in protection from white spot syndrome virus infection", J Gen Virol 90(Pt 6), pp 1491-1498 205 Tharntada S., Somboonwiwat K., Rimphanitchayakit V., Tassanakajon A (2008), "Anti-lipopolysaccharide factors from the black tiger shrimp, Penaeus monodon, are encoded by two genomic loci", Fish Shellfish Immunol 24(1), pp 4654 206 Tonganunt M., Nupan B., Saengsakda M., Suklour S., Wanna W., Senapin S., Chotigeat W., Phongdara A (2008), "The role of Pm-fortilin in protecting shrimp from white spot syndrome virus (WSSV) infection", Fish Shellfish Immunol 25(5), pp 633-637 207 Tonganunt M., Phongdara A., Chotigeat W., Fujise K (2005), "Identification and characterization of syntenin binding protein in the black tiger shrimp Penaeus monodon", J Biotechnol 120(2), pp 135-145 208 van de Braak C B., Botterblom M H., Taverne N., van Muiswinkel W B., Rombout J H., van der Knaap W P (2002), "The roles of haemocytes and the lymphoid organ in the clearance of injected Vibrio bacteria 136 in Penaeus monodon shrimp", Fish Shellfish Immunol 13(4), pp 293-309 209 van de Braak C B T (2002), "Haemocytic defence in black tiger shrimp (Penaeus monodon)", Thesis, Wageningen University - with ref - with summary in Dutch 210 Vargas-Albores F., Yepiz-Plascencia G (1998.), "Shrimp immunity: A review", Trends Comp Biochem Physiol 5, pp 195-210 211 Vaseeharan B., Prem Anand T., Murugan T., Chen J C (2006), "Shrimp vaccination trials with the VP292 protein of white spot syndrome virus", Lett Appl Microbiol 43(2), pp 137-142 212 Venegas C A., Nonaka L., Mushiake K., Nishizawa T., Murog K (2000), "Quasi-immune response of Penaeus japonicus to penaeid rod-shaped DNA virus (PRDV)", Dis Aquat Organ 42(2), pp 83-89 213 Vlak J M., Bonami J R., Flegel T W., Kou G H., Lightner D V., Lo C F., Loh P C., Walker P J (2005), "Nimaviridae", In Virus Taxonomy - Eight Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses: 187-192 Edited by C M Fauquet, M A Mayo, J Maniloff, U Desselberger & L A Ball London: Elsevier Academic Press 214 Voit R., Feldmaier-Fuchs G (1990), "Arthropod hemocyanins Molecular cloning and sequencing of cDNAs encoding the tarantula hemocyanin subunits a and e", J Biol Chem 265(32), pp 19447-19452 215 Walker P J., Cowley J A., Spann K M., Hodgson Raj Hall M R., Withyachumnarnkul B (2001), "Yellow head complex viruses: transmission cycles and topographical distribution in the Asia- Pacific region", In: Browdy CL, Jory DE (eds) The new wave Proc Spec Session Sustainable Shrimp Culture, Aquaculture 2001 The World Aquaculture Society Baton Rouge LA, pp 227-237 216 Wang C S., Tang K J., Kuo G H., Chen S N (1996), "Yellowhead diseaselike virus infection in the kuruma shrimp Penaeus japonicus cultured in Taiwan", Fish Pathol 31, pp 177-182 137 217 Wang H., Ma J., Ruan L., Xu X (2009), "Cloning of a centaurin-alpha1 like gene MjCent involved in WSSV infection from shrimp Marsupeneaus japonicus", Fish Shellfish Immunol 26(2), pp 279-284 218 Wang L., Zhi B., Wu W., Zhang X (2008), "Requirement for shrimp caspase in apoptosis against virus infection", Dev Comp Immunol 32(6), pp 706-715 219 Wang R., Lee S Y., Cerenius L., Soderhall K (2001), "Properties of the prophenoloxidase activating enzyme of the freshwater crayfish, Pacifastacus leniusculus", Eur J Biochem 268(4), pp 895-902 220 Wang R., Liang Z., Hal M., Soderhall K (2001), "A transglutaminase involved in the coagulation system of the freshwater crayfish, Pacifastacus leniusculus Tissue localisation and cDNA cloning", Fish Shellfish Immunol 11(7): 623-637 221 Wang Y C., Lo C F., Chang P S., Kou G H (1998), "Experimental infection of White spot baculovirus in some cultured and wild decapods in Taiwan", Aquaculture 164, pp 221-231 222 Westenberg M., Heinhuis B., Zuidema D., Vlak J M (2005), "siRNA injection induces sequence-independent protection in Penaeus monodon against white spot syndrome virus", Virus Res 114(1-2), pp 133-139 223 Wilson K., Cahill V., Ballment E., Benzie J (2000), "The complete sequence of the mitochondrial genome of the crustacean Penaeus monodon: are malacostracan crustaceans more closely related to insects than to branchiopods?", Mol Biol Evol 17(6), pp 863-874 224 Wilson K., Li Y T., Whan V., Lehnert S A., Byrne K., Moore S S (2002), "Genetic mapping of the black tiger shrimp Penaeus monodon with amplified fragment length polymorphims", Aquaculture 204, pp 297-309 225 Witteveldt J., Cifuentes C C., Vlak J M., van Hulten M C (2004), "Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus by oral vaccination", J Virol 78(4), pp 2057-2061 226 Witteveldt J., Vlak J M., van Hulten M C (2004), "Protection of Penaeus monodon against white spot syndrome virus using a WSSV subunit vaccine", Fish Shellfish Immunol 16(5), pp 571-579 227 Wongprasert K., Sangsuriya P., Phongdara A., Senapin S (2007), "Cloning and characterization of a caspase gene from black tiger shrimp (Penaeus monodon)-infected with white spot syndrome virus (WSSV)", J Biotechnol 131(1), pp 9-19 13 228 Wongteerasupaya C., Sriurairatana S., Vickers J E., Anutara A., Boonsaeng V., Panyim S (1995), "Yellowhead virus of Penaeus monodon is an RNA virus", Dis Aquat Org 22, pp 45-50 229 Wongteerasupaya C., Tongcheua W., Boonsaeng V., Panyim S., Tassanakajon A., Withyachumnarnkul B., Flegel T.W (1997), "Detection of yellowhead virus (YHV) of Penaeus monodon by RT-PCR amplification", Dis Aquat Org 31, pp 181186 230 Wongteerasupaya C., Wongwisansri S., Boonsaeng V., Panyim S., Pratanpipat P., Nash G L., Withyachumnarnkul B., Flegel T W (1996), "DNA fragment of Penaeus monodon baculovirus PmNOBII gives positive in situ hybridization with white-spot viral infections in six penaeid shrimp species", Aquaculture 143, pp 23-32 231 Wouters R., Lavens P., Nueto J., Sorgeloos P (2001), "Penaeid shrimp broodstock nutrition: an updated review on research and development", Aquaculture 202, pp 1-21 232 Wu J L., Muroga K (2004), "Apoptosis does not play an important role in the resistance of 'immune' Penaeus japonicus against white spot syndrome virus", J Fish Dis 27(1), pp 15-21 233 Wurzer W J., Planz O., Ehrhardt C., Giner M., Silberzahn T., Pleschka S., Ludwig S (2003), "Caspase activation is essential for efficient influenza virus propagation", J EMBO 22, pp 2717-2728 234 Wuthisuthimethavee S., Lumubol P., Toojinda T., Tragoonrung S., Vanavichit A (2005), "SSLP-based linkage map construction in black tiger shrimp (Penaeus monodon Fabricius)", ScienceAsia 31, pp 91-97 235 Xian J A., Wang A L., Ye C X., Chen X D., Wang W N (2010), "Phagocytic activity, respiratory burst, cytoplasmic free-Ca(2+) concentration and apoptotic cell ratio of haemocytes from the black tiger shrimp, Penaeus monodon under acute copper stress", Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol 152(2), pp 182-188 236 Xu Z R., Du H H., Xu Y X., Sun J Y., Shen J (2006), "Crayfish Procambarus clarkii protected against white spot syndrome virus by oral administration of viral proteins expressed in silkworms", Aquaculture 253, pp 179183 237 Ye X., Gao F Y., Zheng Q M., Bai J J., Wang H., Lao H H., Jian Q (2009), "Cloning and characterization of the tiger shrimp lysozyme", Mol Biol Rep 36(6), pp 1239-1246 238 Yeaman M R., Yount N Y (2003), "Mechanisms of antimicrobial peptide action and resistance", Pharmacol Rev 55(1), pp 27-55 239 Yeh M S., Huang C J., Cheng J H., Tsai I H.139 (2007), "Tissue-specific expression and regulation of the haemolymph clottable protein of tiger shrimp (Penaeus monodon)", Fish Shellfish Immunol 23(2), pp 272-279 240 Yeh M S., Kao L R., Huang C J., Tsai I H (2006), "Biochemical characterization and cloning of transglutaminases responsible for hemolymph clotting in Penaeus monodon and Marsupenaeus japonicus", Biochim Biophys Acta 1764(7), pp 1167-1178 241 Yi G., Wang Z., Qi Y., Yao L., Qian J., Hu L (2004), "Vp28 of shrimp white spot syndrome virus is involved in the attachment and penetration into shrimp cells", J Biochem Mol Biol 37(6), pp 726-734 242 Yoganandhan K., Syed Musthaq S., Narayanan R B., Sahul Hameed A S (2004), "Production of polyclonal antiserum against recombinant VP28 protein and its application for the detection of white spot syndrome virus in crustaceans", J Fish Dis 27(9), pp 517-522 243 You E M., Liu K F., Huang S W., Chen M., Groumellec M L., Fann S J., Yu H T (2010), "Construction of integrated genetic linkage maps of the tiger shrimp (Penaeus monodon) using microsatellite and AFLP markers", Anim Genet 41, pp 365-376 244 Zhang J., Li F., Wang Z., Zhang X., Zhou Q., Xiang J (2006), "Cloning, expression and identification of ferritin from Chinese shrimp, Fenneropenaeus chinensis", J Biotechnol 125(2), pp 173-184 245 Zhang X., Huang C., Qin Q (2004), "Antiviral properties of hemocyanin isolated from shrimp Penaeus monodon", Antiviral Res 61(2), pp 93-99 246 Zhang Y., Wang S., Xu A., Chen J., Lin B., Peng X (2006), "Affinity proteomic approach for identification of an IgA-like protein in Litopenaeus vannamei and study on its agglutination characterization", J Proteome Res 5(4), pp 815-821 247 Zhang Z F., Shao M., Ho Kang K (2006), "Classification of haematopoietic cells and haemocytes in Chinese prawn Fenneropenaeus chinensis", Fish Shellfish Immunol 21(2), pp 159-169 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: Dụng cụ nghiền mẫu (Homogenizer) 140 PHỤ LỤC 2: Vector pJET1.2 (Fermentas) PHỤC LỤC 3: Vector pCR2.1 (Invitrogen) 141 PHỤ LỤC 4: Vector pPICZαA (Invitrogen) PHỤ LỤC 5: Vị trí đa tách dòng pPICZαA 14 PHỤC LỤC 6: Một phần trình tự nucleotide ALFPm3 đƣợc dung hợp cấu trúc AOX1 vector biểu pPCICZαA EcoRI Kex2 Trình tự đoạn gen ALFPm3 143 Ste 13 EcoRI Kex2 Trình tự đoạn gen ALFPm3 PHỤ LỤC 7: Một phần trình tự nucleotide ALFPm3 đƣợc dung hợp cấu trúc AOX1 vector biểu pPCICZαA XbaI Trình tự đoạn gen ALFPm3 c-myc epitope Đuôi histag rình tự đoạn gen ALFPm3 Đuôi histag c-myc epitope [...]... các gen liên quan đến hệ miễn dịch tôm sú còn ít được biết đến Do đó, để góp phần làm sáng tỏ cơ chế phân tử đáp ứng miễn dịch và tạo nguyên liệu cho nghiên cứu phòng trị bệnh ở tôm sú, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Nghiên cứu đặc điểm cấu trúc một số gen thuộc hệ miễn dịch tôm sú (Penaeus monodon)” 2 Mục tiêu nghiên cứu - Phân lập và xác định được trình tự một số gen lựa chọn liên quan đến hệ. .. hệ miễn dịch tôm sú, tạo vật liệu nghiên cứu góp phần làm sáng tỏ cơ chế đáp ứng miễn dịch và giải pháp trong phòng trị bệnh cho tôm sú; - Bước đầu nghiên cứu tạo peptide kháng khuẩn rALFPm3 3 Nội dung nghiên cứu - Phân lập một số gen lựa chọn liên quan đến hệ miễn dịch tôm sú được tiến hành theo 3 hướng: các gen đã có thông tin trình tự được công bố; các gen chỉ có một phần thông tin trình tự; gen. .. sinh giúp tôm có khả năng sống sót cao hơn khi nhiễm WSSV HỆ MIỄN DỊCH TÔM SÚ Động vật không xương sống, trong đó có tôm chỉ phát triển hệ miễn dịch tự nhiên (innate immunity) [88], [91] Hệ miễn dịch tự nhiên chia ra làm hai hệ thống bảo vệ chính: miễn dịch tế bào (cellular barriers) và miễn dịch dịch thể (Humoral barriers) Miễn dịch tế bào bao gồm hệ thống thực bào (phagocytocis), tạo thể bao (encapsulation),... đượ c xác định ở tôm sú có các loại bệnh chính là bệnh đốm trắng và bệnh đầu vàng… [8], [10], [11] Nước ta đã bước đầu chú ý đến các nghiên cứu nhằm nâng cao chất lượng giống và kiểm soát dịch bệnh Các nghiên cứu bước đầu tập trung nghiên cứu đa dạng genome tôm sú [9], phát hiện bệnh tôm sú [3], [4], [13], đưa ra giải pháp phòng bệnh cho tôm sú [2], nghiên cứu một vài protein cấu trúc tái tổ hợp của... chục triệu đô la Vì vậy, một trong những hướng nghiên cứu đượ c lự a chọ n là lập bản đồ di truyền liên kết genome tôm sú, lập bản đồ di truyền từ DNA vệ tinh, phân tích trình tự đầy đủ genome ty thể (mtDNA), lập bản đồ gen tôm sú bằng giải mã EST/cDNA, nghiên cứu gọi là miễn dịch tự nhiên (innate immunity) và phân tích Những nghiên cứu về phản ứng tế bào và dịch các đoạn thể ở tôm khi bị nhiễm 1 vi... vector mang gen mã hóa peptide kháng khuẩn, biểu hiện trong nấm men và bước đầu phân tích hoạt tính của peptide tái tổ hợp Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU TÔM SÚ VÀ CÁC BỆNH THƢỜNG GẶP Ở TÔM SÚ Giới thiệu về tôm sú Tôm sú có tên khoa học là Penaeus monodon do Fabricius mô tả và đặt tên năm 1798 Ngoài ra, loài tôm này còn được gọi với tên địa phương là tôm rong [11] Tôm sú là một trong số các loài tôm nuôi... trọng nhất và làm thiệt hại đáng kể đến nghề nuôi tôm Cho đến nay, những hiểu biết cơ bản về sự điều khiển sinh trưởng, sinh sản và đặc biệt là hệ thống miễn dịch ở tôm sú còn rất hạn chế do thiếu những thông tin về genome và sự biểu hiện gen của chúng Kích thước genome tôm sú là rất lớn (khoảng trên 2 tỉ cặp base = 2/3 bộ gen người), nên việc giải mã toàn bộ genome tôm sú đòi hỏi nhiều thời gian và... cho tôm Trong những năm gần đây, ở Việt Nam đã bước đầu có các nghiên cứu nhằm nâng cao chất lượng giống và kiểm soát dịch bệnh ở tôm Các nghiên cứu tập trung phát hiện bệnh tôm và đưa ra giải pháp phòng bệnh cho tôm Ngoài ra, một vài cấu trúc protein tái tổ hợp của WSSV đã được tạo ra trong phò ng thí nghiệ m nhằm mục đích nghiên cứu phòng trị bệnh cho tôm Tuy nhiên, các công trình nghiên cứu về... 102 Hình 3.35 So sánh trình tự nucleotide của gen ALFPm ở tôm sú Việt Nam với trình tự đã công bố 102 Hình 3.36 So sánh trình tự nucleotide của gen ALFPm3 ở tôm sú Việt Nam với trình tự đã công bố 103 Hình 3.37 So sánh amino acid suy diễn ALF nhóm I 104 Hình 3.38 Mô hình cấu trúc biểu hiện cDNA của ALFPm3 106 Hình 3.39 Hình ảnh điện di tạo cấu trúc biểu hiện gen ALFPm3 107... nhân xâm nhiễm [187], [188]; Protein sốc nhiệt (heat shock protein -HSP) hoặc chaperonins ở động vật không xương sống có khả năng bảo vệ và phục hồi cấu trúc của protein [73] Năm 2004, mối liên hệ giữa các protein sốc nhiệt, stress và các đáp ứng miễn dịch của tôm đã được thực hiện bởi Lo và đtg [125], nhóm nghiên cứu đã tách dòng và mô tả cDNA của gen HSP70 ở tôm sú Phân tử HSP70 gồm 652 amino acid ... tập thể nghiên cứu thực đề tài cấp nhà nước: “Nghiên cứu giải trình tự phần gen xây dựng sở liệu genome tôm sú (P monodon)” thuộc Chương trình Công nghệ sinh học thủy sản 2008-2010, Bộ Nông nghiệp... hệ thống miễn dịch tôm sú hạn chế thiếu thông tin genome biểu gen chúng Kích thước genome tôm sú lớn (khoảng tỉ cặp base = 2/3 gen người), nên việc giải mã toàn genome tôm sú đòi hỏi nhiều thời... cứu đượ c lự a chọ n lập đồ di truyền liên kết genome tôm sú, lập đồ di truyền từ DNA vệ tinh, phân tích trình tự đầy đủ genome ty thể (mtDNA), lập đồ gen tôm sú giải mã EST/cDNA, nghiên cứu