Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)

Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu tính kháng thuốc ở một số loài muỗi truyền bệnh tại Việt Nam (luận văn thạc sĩ)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - - HỒ VIẾT HIẾU NGHIÊN CỨU TÍNH KHÁNG THUỐC Ở MỘT SỐ LOÀI MUỖI TRUYỀN BỆNH TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2011 MỞ ĐẦU Nghiên cứu bệnh sốt rét phòng chống bệnh sốt rét có trình lịch sử lâu đời Bệnh sốt rét bệnh nguy hiểm gánh nặng bệnh tật nhiều nước giới, có Việt Nam Hàng năm, giới có khoảng 300-500 triệu ca mắc bệnh sốt rét triệu số tử vong Mặc dù có nỗ lực lớn công tác điều trị phòng chống véc tơ, vòng 30 năm tỷ lệ nhiễm tăng lên, điều kiện kinh tế - xã hội, ký sinh trùng kháng thuốc côn trùng kháng hóa chất Tại Việt Nam, năm 2000, số ca mắc bệnh sốt rét 293.016 ca có 148 ca tử vong Đến năm 2008, số ca sốt rét giảm xuống 19.485 ca có 14 ca tử vong Để thu thành có đóng góp đáng kể hoạt động nghiên cứu phòng chống véc tơ sốt rét Hiện nay, Việt Nam nhiều nước giới, chương trình phòng chống sốt rét sử dụng số hóa chất thuộc nhóm pyrethroid tổng hợp để phòng chống véc tơ sốt rét alphacypermethrin, lambdacyhalothrin, permethrin hóa chất chủ yếu để tẩm phun tồn lưu Tuy vậy, sau thời gian dài sử dụng hóa chất diệt côn trùng y tế nông nghiệp dẫn tới thay đổi độ nhạy cảm véc tơ sốt rét số loài muỗi truyền bệnh làm giảm hiệu lực hóa chất Thông thường muốn đạt hiệu phun hóa chất diệt làm giảm mật độ muỗi đốt người vào mùa phát triển đặc biệt có dịch bệnh muỗi truyền người ta phải tăng liều lượng hóa chất thay đổi chủng loại hóa chất diệt Việc sử dụng hóa chất tạo áp lực chọn lọc quần thể làm thay đổi cấu trúc di truyền quần thể Theo thông báo Tổ chức Y tế giới (WHO,1992), số 200 loài động vật chân đốt có tầm quan trọng y học kháng hóa chất có tới 50% muỗi truyền bệnh sốt rét, sốt xuất huyết giun Chính việc xác định tính kháng véc tơ sốt rét yêu cầu cấp thiết nhằm nâng cao hiệu công tác phòng chống sốt rét Có nhiều phương pháp khác để xác định tính kháng hóa chất diệt côn trùng véc tơ sốt rét phương pháp thử sinh học, phương pháp hóa sinh miễn dịch phân tử Phương pháp hóa sinh sử dụng nhiều nghiên cứu xác định tính kháng véc tơ sốt rét Năm 1986, Hemingway cộng nghiên cứu áp dụng phương pháp hóa sinh việc xác định tính kháng [38] Năm 1988 Brogden cộng nhận biết chế kháng hóa chất nhờ phương pháp thử hóa sinh với quần thể muỗi An albimanus kháng hóa chất thuộc nhóm carbamat phốt hữu [29] Năm 1990, Lee đưa phương pháp hóa sinh đơn giản để xác định tính kháng dựa vào hoạt tính enzym esterase [42] Xác định, đánh giá hiệu loại hóa chất diệt nhằm đánh giá lựa chọn loại hóa chất diệt côn trùng phù hợp với loại véc tơ sốt rét tình trạng kháng hóa chất biện pháp đối phó Trong năm gần đây, việc sản xuất loại hóa chất có giảm sút lý công nghiệp giá chi phí đặc biệt áp dụng phạm vi rộng lớn Việc xác định tính kháng véc tơ sốt rét Việt Nam chủ yếu thực phương pháp thử sinh học thực địa Phương pháp thử sinh học để phát kháng hóa chất cá thể côn trùng đo lường thay đổi khoảng thời gian yêu cầu cần thiết cho loại hóa chất để đạt mục tiêu hiệu quả, phương pháp có độ tin cậy cao, kỹ thuật đơn giản, kinh tế Trong bối cảnh đó, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tính kháng thuốc số loài muỗi truyền bệnh Việt Nam” Mục tiêu đề tài: - Xác định thành phần loài điểm nghiên cứu - Xác định mức độ kháng hóa chất véc tơ sốt rét Kết xác định kháng hóa chất véc tơ sốt rét đóng góp đáng kể cho chương trình phòng chống sốt rét Quốc gia việc lựa chọn hóa chất diệt muỗi thích hợp cho vùng địa lý khác Việt Nam Chƣơng 1- TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sốt rét giới Hàng trăm năm qua bệnh sốt rét có ảnh hưởng lớn đến phát triển kinh tế - xã hội giới với khoảng nửa dân số giới nằm vùng có nguy mắc bệnh sốt rét, đặc biệt nước có thu nhập thấp châu Phi Hàng năm, giới có khoảng 300-500 triệu ca sốt rét triệu người số tử vong Hầu hết trường hợp mắc sốt rét tử vong trẻ em phụ nữ có thai Mặc dù có biện pháp phòng bệnh thích hợp thuốc chữa bệnh sốt rét có hiệu cao, sốt rét bệnh nguy hiểm phạm vi toàn cầu Hai châu lục có bệnh sốt rét trầm trọng châu Phi châu Á Sự lan truyền sốt rét vùng cận sa mạc Shahara, châu Phi có mặt hầu hết nơi, châu Á lan truyền lại không hoàn toàn đồng gây nên biến đổi khác mức độ lan truyền bệnh Tuy nhiên chương trình phòng chống có biện pháp đặc hiệu tương đối giống hai lục địa Vùng cận sa mạc Sahara có véc tơ truyền bệnh An gambiae sensu lato sinh đẻ nơi có tiếp xúc tạm thời với ánh nắng mặt trời hồ chứa nước, vũng nước, vết chân trâu, hố đất An funestus gần giống loài muỗi có vai trò thảm thực vật phát triển Phức hợp hai véc tơ đảm bảo cho lan truyền bệnh kéo dài giải thích sốt rét lan truyền rộng rãi châu Phi, chiếm tới 90% gánh nặng sốt rét toàn giới Các khu vực khác châu Á, châu Mỹ La tinh, khu vực Trung Đông bị ảnh hưởng Trong số 101 nước vùng lãnh thổ mà sốt rét có mặt 45 nước thuộc khu vực châu Phi, 21 nước thuộc khu vực châu Mỹ, nước thuộc châu Âu, 14 nước thuộc khu vực Đông Địa Trung Hải, nước thuộc khu vực Đông Nam Á, nước khu vực Tây Thái Bình Dương Ở châu Á, đặc biệt nước khu vực tiểu vùng sông Mê Kông tính đa dạng sinh học Anopheles phong phú nhiều so với châu Phi Có tới 20 loài khác tìm thấy vùng sâu, xa khu vực với số loài thứ yếu Có loài véc tơ có mặt, vùng rừng núi có An dirus An minimus, vùng biển nước lợ An epiroticus (trước gọi An sundaicus) [2] Trong An.dirus loài véc tơ nguy hiểm phạm vi toàn cầu giới hạn sinh cảnh rừng rậm Sốt rét ảnh hưởng chủ yếu đến nhóm người có hoạt động liên quan đến rừng Trong quan trọng nhóm dân tộc thiểu số dân di cư [14] Sau 10 năm thực chương trình tiêu diệt sốt rét toàn cầu, sốt rét toán nước phát triển loạt khu vực rộng lớn nước châu Á, châu Mỹ nhiệt đới cận nhiệt đới vào năm 1967 Giữa năm 1955 năm 1967, số dân thoát khỏi nguy sốt rét tăng từ 220 triệu người đến 953 triệu, tỷ lệ tử vong từ sốt rét giảm xuống triệu người hầu hết nước nhiệt đới châu Phi [50] Sự thành công chương trình tiêu diệt sốt rét toàn cầu bị ảnh hưởng sâu sắc thay đổi sinh học kí sinh trùng sốt rét véc tơ truyền bệnh Đến năm 1970, gần 20% tổng số vùng sốt rét lưu hành thấy có kháng DDT véc tơ sốt rét hay kháng với chloroquine kí sinh trùng sốt rét, chí số nơi có mặt hai loại kháng [31] Hiệu giảm sút hoạt động chống sốt rét vấn đề kĩ thuật, xuống cấp hệ thống y tế cộng đồng, nguồn tài hạn hẹp làm cho vấn đề sốt rét từ, chí nhanh chóng quay lại nhiều nơi giới Sự trỗi dậy quy mô rộng lớn sốt rét năm 1970 thúc đẩy quan tâm tới bệnh này, nhận thấy cần thiết phải phát triển chương trình phòng chống sốt rét quốc gia phù hợp với tình hình dịch tễ học, lực tài nguồn lực người nước [43] Vào năm 1978, WHO thay đổi chiến lược từ tiêu diệt sốt rét sang phòng chống sốt rét Trước tình hình này, hội nghị Bộ trưởng bàn vấn đề sốt rét tổ chức Amsterdam năm 1992 Chiến lược phòng chống sốt rét toàn cầu (The Global Malaria Control Strategy) thông qua hội nghị Mục đích chiến lược nhằm ngăn chặn tình trạng tử vong, giảm tỷ lệ mắc sốt rét giảm thiểu thiệt hại kinh tế, xã hội sốt rét gây thông qua việc cải thiện nhanh chóng củng cố lực địa phương vấn đề phòng chống sốt rét [54] Chiến lược khác cách đáng kể so với cách tiếp cận trước vấn đề sốt rét Việc thực thi chương trình phòng chống sốt rét có tính chất linh hoạt phù hợp với điều kiện thực tế địa phương Chiến lược phát triển nhằm cung cấp công cụ có khả hiệu cao công tác phòng chống sốt rét trì thành đạt Như vậy, vấn đề sốt rét phòng chống cách sử dụng công cụ thời Tuy nhiên, kháng kí sinh trùng với loại thuốc sốt rét, kháng véc tơ truyền sốt rét với hoá chất diệt côn trùng nhu cầu cần thiết phải cải thiện kĩ thuật chẩn đoán sốt rét đặt đòi hỏi phải phát triển nghiên cứu tương lai, cung cấp công cụ việc phòng chống sốt rét Các chương trình hợp tác quốc tế, cố gắng nỗ lực phủ, tham dự cấp quyền địa phương cộng đồng điều quan trọng nhằm thu thành tựu cao công phòng chống sốt rét Bảng 1: Hóa chất sử dụng tẩm phổ biến nước: Hóa chất Dạng hóa chất Liều lƣợng Permethrin 50EC 500mg/m2 Etonfenprox 10EW 200mg/m2 Lambdacyhalothrin 2.5CS 30mg/m2 Alphacypermethrin 10SC 25mg/m2 Deltamethrin 1SC 20mg/m2 Cyfluthrin 10EW 30-50mg/m2 Bifenthrin 50EC 50mg/m2 1.2 Tình hình sốt rét Việt Nam Việt Nam nằm khu vực nhiệt đới cận nhiệt đới Đông Nam Á thuộc cực Đông bán đảo Đông Dương Năm 2001, số khoảng 80 triệu dân nước lúc có khoảng 40 triệu dân sinh sống vùng sốt rét lưu hành [40] Các vùng lưu hành bệnh bao gồm vùng rừng núi phía Bắc, ven dọc Trường sơn, cao nguyên miền Trung, khu vực Đông nam, Tây nam miền Duyên Hải Trước năm 1992, tình hình sốt rét nghiêm trọng, hàng nghìn ca chết năm, tỷ lệ mắc sốt rét tăng nhanh chóng làm cho sốt rét kháng thuốc Tuy nhiên sau 10 năm, chương trình quốc gia phòng chống sốt rét Việt Nam có nhiều tiến bộ, tỷ lệ chết bệnh sốt rét giảm 96% tỷ lệ mắc giảm 78% Năm 2000, số ca mắc sốt rét Việt Nam 293.016 ca có 148 ca tử vong Đến năm 2007, số ca sốt rét giảm xuống 70.910 ca 20 ca tử vong Tình hình sốt rét tương đối ổn định mối đe dọa sức khỏe với người dân vùng sâu, vùng xa, vùng biên giới dân di cư Tuy nhiên, nhiều nước khác giới, tình trạng kháng thuốc kí sinh trùng kháng hoá chất diệt côn trùng véc tơ sốt rét đặt đòi hỏi phải phát triển nghiên cứu tương lai, cung cấp công cụ phòng chống sốt rét Việt Nam Bảng 2: Hóa chất sử dụng tẩm phun tồn lưu Việt Nam Năm 2002-2006 Tên hóa chất Dạng hóa chất Nồng độ ứng dụng Alphacypermethrin SC 100 g/l Tẩm + phun tồn lưu Lambdacyhalothrin WP 100 g/l Phun tồn lưu + tẩm Lambdacyhalothrin CS 25 g/l Phun tồn lưu + tẩm Alphacypermethrin SC 100 g/l Tẩm + phun tồn lưu Lambdacyhalothrin CS 100 g/l Phun tồn lưu + tẩm Lambdacyhalothrin WP 100 g/l Phun tồn lưu + tẩm Lambdacyhalothrin CS 25 g/l Phun tồn lưu + tẩm 2007- 2010 1.3 Tình trạng kháng hóa chất diệt véc tơ truyền bệnh Véc tơ động vật chân khớp hút máu, bảo đảm truyền sinh học tích cực tác nhân gây bệnh từ động vật sang động vật khác (theo F.Rodhain C.Peres, 1985) Véc tơ đóng vai trò truyền bệnh chủ yếu hoàn cảnh, quanh năm mà điều kiện cho phép Véc tơ phụ với véc tơ trì lan truyền sốt rét địa phương vai trò truyền bệnh hạn chế vector Theo Mac Donald (1957) loài Anopheles xác định véc tơ sốt rét: Có thoa trùng tuyến nước bọt; tính với máu người (ưa đốt người); tần số đốt người cao, tuổi thọ đủ dài; mật độ cao mùa sốt rét Theo Trần Đức Hinh, Nguyễn Đức Mạnh CTV (2001), véc tơ sốt rét phụ Việt Nam bao gồm: -Véc tơ vùng rừng núi toàn quốc: An minimus -Véc tơ sốt rét chủ yếu vùng rừng núi từ 20 vĩ độ Bắc vào Nam: An minimus, An dirus -Véc tơ sốt rét chủ yếu ven biển Nam Bộ: An.epiroticus -Véc tơ sốt rét ven biển miền Bắc: An.subpictus, An.sinensis, An.vagus, An.indefinitus -Véc tơ sốt rét thứ yếu miền núi: An.aconitus, An.jeyporiensis, An.maculatus Kháng hóa chất chọn lọc đặc điểm có tính kế thừa quần thể côn trùng gây thất bại sản phẩm hóa chất mong đợi sử dụng theo qui định Theo định nghĩa WHO phát triển khả sống sót số cá thể sau tiếp xúc với nồng độ hoá chất mà với nồng độ đa số cá thể quần thể bình thường loài bị chết sau tiếp xúc [34] Khả phát triển tính kháng hoá chất diệt phụ thuộc vào yếu tố: sinh học, sinh thái học côn trùng, mức độ trao đổi dòng gen quần 10 Bảng 16 : Kết thử nhạy kháng An minimus với lambdacyhalothrine 10 phút 30 phút 60 phút Số lƣợng muỗi thử nghiệm 20 10 14 20 Số lƣợng muỗi chết sau 24 18 20 14 15 20 19 20 13 15 20 20 20 11 16 20 20 20 14 15 20 19 Tổng số 100 62 75 75 96 Đối chứng 20 0 0 Mẫu Lô Thử nghiệm Số lƣợng muỗi ngã gục Thử nhạy kháng An.minimus với giấy thử lambdacyhalothrine 30mg/m2, số lượng muỗi thử nghiệm 100 cá thể, kết có 96 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 96% Như loài An.minimus Bình Định tăng sức chịu đựng với hóa chất lambdacyhalothrine 3.2.3 Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus Qua kết điều tra côn trùng thu thập thử nghiệm bioassay loài An maculatus tất địa điểm nghiên cứu thể qua bảng sau * Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine Lambda cyhalothrine Bình Định Bảng 17: Kết thử nhạy cảm Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine lambdacyhalothrin Số Số lƣợng muỗi ngã gục Số lƣợng lƣợng Hóa chất thử nghiệm muỗi chết sau 60 thử 10 phút 30 phút 24 phút nghiệm Alphacypermethrine 30mg/m2 100 21 70 100 92 Lambdacyhalothrine 0,05% 100 19 65 100 73 51 Kết thử nhạy cảm loài An maculatus với giấy thử alphacypermethrine 30mg/m2, số lượng muỗi thử nghiệm 100 cá thể, kết có 92 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 92% Như An maculatus Bình Định tăng sức chịu đựng với hóa chất alphacypermethrine Kết thử nhạy cảm loài An maculatus với giấy thử Lambdacyhalothrine, nồng độ 0,05%, số lượng muỗi thử nghiệm 100 cá thể, kết có 73 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 73% Như An maculatus Bình Định kháng với hóa chất Lambda cyhalothrine * Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine Lambda cyhalothrine Đắc Lắc Bảng 18 : Kết thử nhạy cảm Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine 30mg/m2 Lambda cyhalothrine, nồng độ 0,05% Hóa chất thử nghiệm Alphacypermethrine 30mg/m2 Số Số lƣợng muỗi ngã gục lƣợng thử 10 phút 30 phút 60 phút nghiệm 100 17 76 100 Lambdacyhalothrine 0,05% 100 16 66 100 Số muỗi lƣợng chết sau 24 79 75 Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus với giấy thử Alphacypermethrine 30mg/m2, số lượng muỗi thử nghiệm 103 cá thể, kết có 79 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 79% Như Anopheles maculatus Đắc Lắc kháng với hóa chất Alphacypermethrine 52 Thử nhạy kháng An.maculatus với giấy thử Lambdacyhalothrine nồng độ 0,05%, số lượng muỗi thử nghiệm 100 cá thể, kết có 81 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 75% Như An maculatus Đắc Lắc kháng với hóa chất Lambdacyhalothrine * Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine Lambda cyhalothrine Phú Yên Bảng 19: Kết thử nhạy cảm Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine 30mg/m2 Lambda cyhalothrine, nồng độ 0,05% Hóa chất thử nghiệm Số Số lƣợng muỗi ngã gục lƣợng thử 10 phút 30 phút 60 phút nghiệm Số lƣợng muỗi chết sau 24 Alphacypermethrine 30mg/m2 100 15 67 100 76 Lambdacyhalothrine 0,05% 100 16 72 100 87 Thử nhạy kháng An maculatus với giấy thử alphacypermethrine 30mg/m2, số lượng muỗi thử nghiệm 100 cá thể, kết có 76 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 76% Như An maculatus Phú Yên kháng với hóa chất alphacypermethrine Thử nhạy kháng An maculatus với giấy thử Lambdacyhalothrine Nồng độ 0,05%, số lượng muỗi thử nghiệm 108 cá thể, kết có 87 cá thể muỗi chết 24 sau tiếp xúc với hóa chất Tỉ lệ muỗi chết lô thử nghiệm 87% Như An maculatus Phú Yên tăng sức chịu đựng với hóa chất Lambdacyhalothrine 53 * Kết thử nhạy cảm loài Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine Lambda cyhalothrine Quảng Trị Bảng 20 : Kết thử nhạy cảm Anopheles maculatus với hoá chất alphacypermethrine 30mg/m2 Lambda cyhalothrine, nồng độ 0,05% Hóa chất thử nghiệm Số Số lƣợng muỗi ngã gục lƣợng thử 10 phút 30 phút 60 phút nghiệm Số lƣợng muỗi chết sau 24 Alphacypermethrine 30mg/m2 100 24 80 102 84 Lambdacyhalothrine 0,05% 100 18 63 100 78 Tỷ lệ % muỗi chết Quảng Trị là: 84%, loài An.maculatus tăng sức chịu đựng với Alphacypermethrin 30mg/m2 Tỷ lệ muỗi chết 78% loài An maculatus kháng với hóa chất Lambda cyhalothrine, nồng độ 0,05% Quảng Trị 54 3.3 Kết điện di enzyme esterase Esterase nhóm lớn enzym có khả thuỷ phân liên kết este với có mặt nước tạo thành acid alcohol Chúng thuỷ phân xúc tác cho phản ứng sau: RCOOR1 + HOH  RCOOH + R1OH Esterase nguyên nhân gây tính kháng hóa chất diệt chứa liên kết este OP Car Trong nhiều trường hợp, mức độ EST tăng lên khuyếch đại gen gen bị đột biến hình thành enzym EST bị thay đổi cấu trúc chế gây tính kháng [22] Các kết phân tích hóa sinh, phân tích invitro chuyển hóa thuốc diệt dòng kháng, nhạy từ công trình nghiên cứu nhiều nhà khoa học giới cho thấy số izozym EST có liên quan trực tiếp đến tính kháng thuốc Pasteur Singer (1975-1978) phát thấy tính kháng thuốc OP loài Culex quinquefasciatus có liên quan đến hoạt tính enzym EST Một số tác giả khác cho biết dạng chuyển hóa thuốc diệt EST sau: esterase P O (hoặc S) P O S O (Dạng độc) ( Dạng không độc) 55 3.3.1 Kết điện di loài An dirus Trong hình sau, ta phân tích nhóm băng chạy nhanh thể màu nhạt hơn, chứng tỏ hoạt động enzym yếu Kết trùng hợp với kết phép thử sinh học (100% An dirus nhạy) Hình 4: Kết chạy điện di esterase An dirus Bình Định (giếng 1- 13 loài An dirus) Hình 5: Kết điện di esterase An dirus Đắc Lắc (giếng 1-14 loài An.dirus) 56 3.3.2 Kết điện di loài An minimus Trong hình kết điện di EST loài An.minimus Bình Định với lượng mẫu giếng biểu isozym Esterase giếng có khác thể qua mức độ đậm nhạt băng Chứng tỏ hoạt động enzym vừa, kết phù hợp với kết thử sinh học (96%) Hình 6: Kết điện di esterase An.minimus Bình Định (giếng 1- 13 loài An.minimus) 3.3.3 Kết điện di loài An maculatus Qua hình khẳng định izozym esterase thị tốt cho tính kháng pyrethroid muỗi đặc biệt nhóm băng Est-1 Bởi enzyme Esterase có vai trò quan trọng việc giải độc gây nên tính kháng, hàm lượng Esterase cao, nên độ bắt màu tùy thuộc vào mức độ kháng hóa chất loài Có nhiều nghiên cứu côn trùng phát bắt màu cấu tử điện điện di có quan hệ chặt chẽ với độ nhạy cảm chúng với thuốc diệt Qua kết chạy điện di loài An.maculatus nhận thấy vùng hoạt động Est-1,2 rõ nét, hầu hết cá thể muỗi bắt màu đậm 57 Như hoạt động mạnh esterase cao điều phù hợp với kết thử sinh học loài Hình 7: Kết điện di esterase An maculatus Bình Định (giếng 1-11 loài An.maculatus) Hình 8: Kết điện di esterase An maculatus Đắc Lắc (giếng 1-13 loài An.maculatus) 58 Hình 9: Kết điện di An.maculatus Phú Yên (giếng 1-14 loài An.maculatus) Hình 10: Kết điện di An maculatus quảng trị (giếng 1-13 loài An.maculatus) 59 THẢO LUẬN Việc xây dựng chiến lược phòng chống véc tơ vào phản ứng véc tơ với hoá chất địa phương Ở Việt Nam, từ năm 1990 hoá chất thuộc nhóm pyrethroid như: permethrine (Imperator), lambdacyhalothrine (Icon), deltamethrine (K’Othrine), alphacypermethrine (Fendona )… đưa vào sử dụng để phòng chống muỗi sốt rét Hằng năm, thử nghiệm nhạy kháng tiến hành thường xuyên để đánh giá phản ứng muỗi với hoá chất Theo công trình nghiên cứu Trương Văn Có (2005)[3]: Giai đoạn 1996-1998, thử nghiệm khu vực Miền Trung - Tây Nguyên xác định An minimus nhạy với tất loại hoá chất nhóm pyrethroid, An vagus, An barbirostris An sinensis kháng với permethrin Giai đoạn 1999-2003, danh sách muỗi Anopheles kháng với permethrine tăng thêm loài An philippinensis An maculatus Đến năm 2004, nhiều loài Anopheles có tượng tăng sức chịu đựng hay kháng hoá chất này, nhiên véc tơ An minimus An dirus tăng sức chịu đựng số địa phương Trong công trình nghiên cứu Nguyễn Thị Duyên (2009) An minimus xã Bình Thạnh, có tượng tăng sức chịu đựng với hai loại hóa chất sử dụng alphacypermethrine lambdacyhalothrine [6], theo nghiên cứu Đào Minh Trang (2008) An.minimus có tượng nghi ngờ kháng kháng với hóa chất [22] Phản ứng muỗi hoá chất phụ thuộc vào chất di truyền muỗi mà phụ thuộc vào tình hình sử dụng hoá chất địa phương Ở vùng rừng núi, nơi người dân tập quán sử dụng hoá chất cho trồng, loại côn trùng nhạy hoá chất thử nghiệm Tuy nhiên vòng năm trở lại việc lạm dụng hoá chất nông nghiệp, làm loài côn trùng có 60 muỗi Anopheles kháng với hoá chất An minimus tăng sức chịu đựng với Alphacypermethrine, Lambdacyhalothrine điều đáng quan tâm công tác phòng chống sốt rét Bình Định số địa phương khác cần có biện pháp phòng chống véc tơ bổ sung hay thay để trì bền vững thành bảo vệ sức khoẻ cho nhân dân mà ngành y tế địa phương xây dựng mười năm qua Theo tác giả Trịnh Đình Đạt cộng phân tích hệ izozym esterase ba loài muỗi truyền bệnh sốt rét cho thấy hệ izozym esterase ba loài mang tính đa hình rõ rệt Theo nhiều tác giả tần số alen cao có băng đậm màu biểu tính kháng cao với thuốc diệt 61 KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu tính kháng muỗi đưa số kết luận sau Thành phần loài điểm Bình Định, Đắc Lắc, Phú Yên thu véc tơ An.dirus, An.minimus véc tơ phụ An aconitus, An jeyporiensis, An maculatus Thành phần loài Quảng Trị thu thập véc tơ phụ An aconitus, An jeyporiensis, An maculatus, không thu thập véc tơ thời điểm điều tra Quần thể An maculatus kháng tăng sức chịu đựng cao với loại hóa chất sử dụng chương trình phòng chống sốt rét quốc gia alphacypermethrine lambdacyhalothrine điểm nghiên cứu Quần thể An dirus Bình Định Đắc Lắc nhạy với loại hóa chất chương trình Phòng chống Sốt rét Quốc gia alphacypermethrine lambdacyhalothrine Quần thể An minimus Bình Định tăng sức chịu đựng với loại hóa chất sử dụng chương trình Phòng chống Sốt rét Quốc gia alphacypermethrine lambdacyhalothrine Enzyme esterase sử dụng thị bước đầu đánh giá mức độ nhạy kháng loài Anopheles 62 ĐỀ NGHỊ Đã xuất quần thể An minimus tăng sức chịu đựng với hoá chất nhóm pyrethroid (tại Vân Canh, Bình Định) Điều đòi hỏi công việc giám sát cần tiến hành thường xuyên chặt chẽ để xác định mức độ nhạy cảm véc tơ sốt rét với hoá chất trình sử dụng đề xuất sử dụng hoá chất thích hợp phòng chống Đã xuất quần thể An.maculatus kháng với hóa chất nhóm pyrethroid cần nghiên cứu chế phẩm có hiệu lực phòng chống véc tơ Việc tạo dòng muỗi nhạy kháng phòng thí nghiệm cần thiết cho việc xác định mức độ kháng nhóm hoá chất diệt côn trùng Cần có nghiên cứu sâu để xác định chế kháng loài Anopheles từ đưa thuốc diệt có hiệu lâu dài phòng chống sốt rét 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Thị Hương Bình (2009), Nghiên cứu tính đa hình di truyền vai trò truyền bệnh nhóm loài Anopheles maculatus Việt Nam Luận án Tiến Sỹ Sinh Học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Bộ Y Tế (2000), Dịch sốt rét phòng chống dịch sốt rét Việt Nam, nhà xuất y học Trương Văn Có (2005), ―Thực trạng nhạy kháng Anopheles với hoá chất diệt , hiệu lực tồn lưu tẩm tường vách khu vực Miền Trung - Tây nguyên‖, Tạp chí Y học Thực hành, Bộ Y Tế xuất bản, số 511: tr 116-121 Trương Văn Có (2005), ―Sự phân bố tập tính sinh học phức hợp loài Anopheles minimus, Theobald, 1901 Anopheles dirus, Peyton Harrison 1979 khu vực Miền Trung - Tây Nguyên‖, Tạp chí Y học Thực hành, Bộ Y Tế xuất bản, số 511: tr 67-74 Vũ Đình Chử, Lương Xuân Dũng, Phạm Thị Hoan (2006), ―Kỹ thuật nuôi cấp chủng Anopheles minimus phòng thí nghiệm‖, Công trình nghiên cứu khoa học Viện Sốt rét Ký sinh trùng Côn trùng , Nxb Y học, Hà Nội, tập 1: tr 406-413 Nguyễn Thị Duyên (2009), Nghiên cứu quần thể Anopheles minimus xã Bình Thạnh, Huyện Tuy Phong, Tỉnh Bình Thuận Luận văn Thạc sỹ Sinh học, Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Trịnh Đình Đạt, Trương Quang Học, Ngô Giang Liên (1991), ―Nghiên cứu số hệ isozym nhóm loài muỗi sốt rét Anopheles minimus, Theobal, 64 1901 (diptera culicidae) Việt Nam‖, Hội nghị côn trùng học quốc gia Việt Nam lần thứ nhất, Hà Nội, tr 47 Trịnh Đình Đạt, Nguyễn Thị Minh Nguyệt (2002), “ứng dụng phương pháp phân tích izozym nghiên cứu đa dạng sinh học phân loại sinh học‖ Trịnh Đình Đạt, Vũ Thị Loan, Tạ Toàn Xác định mức độ đặc điểm di truyền tính kháng thuốc muỗi Culex quiquefasciatus Tạp chí di truyền học ứng dụng số 1-1993, tr 26-27 10 Nguyễn Hữu Đức, Hồ Văn Hựu (1973), ― Phân bố muỗi An minimus miền Bắc Việt Nam‖,a Kỷ yếu công trình nghiên cứu khoa học1973, Viện Sốt rét-KST-CT Hà Nội, NXB Y học, tr 134-140 11 Nguyễn Long Giang, Nguyễn Thị Hoà, Nguyễn Thượng Hiền (1996), ―Phân bố muỗi Anopheles (Meigen 1818) tỉnh thành phía Nam Việt Nam độ nhạy cảm chúng với hoá chất diệt côn trùng‖, Tóm lược đề tài nghiên cứu khoa học 1991-1995 Phân viện sốt rét-KST-CT thành phố Hồ Chí Minh, tr 25-29 12 Nguyễn Thị Thu Hoài (2003), Nghiên cứu biểu izozym quần thể muỗi Aedes aegypti số vùng Việt Nam, Luận văn tốt nghiệp hệ đào tạo cử nhân tài trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội 65 [...]... chính để diệt muỗi có tập tính đốt máu người và trú đậu trong nhà Tuy nhiên sau thời gian dài tiếp xúc của nhiều thế hệ muỗi, giống như các loài côn trùng khác muỗi có thể trở nên kháng hóa chất Tính kháng của một số loài muỗi đã được thông báo sau khi các hóa chất này được đưa vào sử dụng một vài năm Đã có khoảng 125 loài muỗi kháng với một hay nhiều loại hóa chất Kháng hóa chất phun là một trở ngại chính... 17 công bố 72 loài muỗi kháng hoá chất, trong đó 69 loài kháng DDT, 38 loài kháng phốt pho hữu cơ, 17 loài kháng với cả 3 hoá chất trên Sự kháng hoá chất của muỗi ngày càng tăng cả về số lượng loài lẫn mức độ kháng và một loài kháng với nhiều hoá chất Đến năm 2000, đã có khoảng 100 loài muỗi kháng hoá chất trong đó hơn 50 loài Anopheles [25] Một trong những lý do dẫn đến sự kháng ngày càng tăng nhanh... Trăng đã tăng mức chịu đựng (có khả năng kháng) với pyrethroid [19] 1.6.1 Anopheles dirus Muỗi An dirus là loài muỗi truyền bệnh sốt rét quan trọng ở vùng rừng rậm và bìa rừng từ vĩ tuyến 20 trở vào Nam Đây là một loài muỗi thuộc nhóm loài An.balabacensis Trong nhóm này ở Việt Nam cho dến nay chỉ mới xác định được 2 loài là An dirus và An takasagoensis Trong hai loài này người ta chỉ phát hiện thấy An... trùng truyền bệnh Năm 1946 mới chỉ có hai loài Anopheles kháng DDT, nhưng đến năm 1991 đã có tới 55 loài kháng với 1 hoặc nhiều loại hóa chất Trong 55 loài có 53 loài kháng với DDT, 27 loài với organophorous, 17 với carbamate và 10 loài với pyrethroid, 16 loài có kháng với cả 4 loại hóa chất diệt [47] Có 21 loài trong 55 loài kháng là véc tơ quan trọng đã được WHO báo cáo năm 1996 Một số kháng điển hình... nhiễm kí sinh trùng sốt rét với tỷ lệ cao tại miền Trung Việt Nam Tại một địa phương ở Khánh Hoà, 3,6%, An minimus nhiễm kí sinh trùng sốt rét trong giai đoạn 1993-1995 An minimus cũng được coi là véc tơ truyền sốt rét 22 gây ra các vụ dịch sốt rét ở một số địa phương thuộc đồng bằng Châu thổ sông Hồng vào những năm cuối thập kỉ 1950 [8] Theo Lê Khánh Thuận, Trương Văn Có nghiên cứu ở khu vực Miền Trung... lệ kí sinh trùng sốt rét ở muỗi An minimus là 1,7% và nó cũng được coi là véc tơ sốt rét chính ở đây Kí sinh trùng Plasmodium cũng được phát hiện ở An minimus tại miền đông Pakistan và Thái Lan Tại Việt Nam, An minimus là véc tơ sốt rét chính ở vùng rừng núi Cho đến nay, tỷ lệ nhiễm kí sinh trùng sốt rét ở muỗi An minimus cao nhất ở miền Bắc (1,1%) được ghi nhận vào đầu những năm 1960 tại tỉnh Thanh... hoá chất trong nông nghiệp và y tế Kháng hoá chất ở các véc tơ truyền bệnh sẽ ảnh hưởng trực tiếp và sâu sắc tới sự xuất hiện trở lại của các bệnh do véc tơ truyền Tại những nơi nào mà kháng hoá chất chưa ảnh hưởng tới sự xuất hiện của dịch bệnh thì nó cũng đe dọa sự khống chế dịch bệnh Chính vì vậy sự hiểu biết về kháng hoá chất diệt côn trùng ở các véc tơ truyền bệnh có thể giúp đề ra các chiến lược... phát hiện ở muỗi An gambiae ở châu Phi Ở Đông Phi, kháng ―hạ gục‖ liên quan đến một đột biến dẫn tới kết quả là một leucine được thay thế bởi một phenylalanin ở mảnh S6 thuộc domain thứ 2 của alen kdr (L1014F) ở Kenya một dạng đột biến khác cũng được tìm thấy, đó là đột biến thay thế leucine bằng serine ở vị trí tương tự (L1014S) [49] Sự kháng chéo đối với DDT và pyrethroid là một chỉ thị của sự kháng. .. C pipiens ở Ohio [24,40] Tại Việt Nam, một số kết quả nghiên cứu mức độ nhạy cảm với hoá chất nhóm 19 pyrethroid cũng đã được công bố [10,21,25] Theo Nguyễn Tuấn Ruyện (1997), một số quần thể An minimus ở Gia Lâm (Hà Nội), Khánh Vĩnh (Khánh Hoà), An jeyporiensis ở Võ Nhai (Bắc Thái); An aconitus, An philippinensis ở Chiêm Hoá (Tuyên Quang), An aconitus ở Na Hang (Tuyên Quang), An sinensis ở Sóc Trăng... liên quan tính kháng ở muỗi là: esterases, monooxygenases, GSH STransferases Target-site: hai cơ chế kháng vị trí đích Kdr (kháng hạ gục): đột biến trên gen kdr MACE: enzyme acetylcholinesterase đã bị biến đổi tầm quan trọng tương ứng của mỗi một cơ chế kháng đã được biểu thị bởi kích thước của những chấm tròn 16 1.6 Tình trạng đáp ứng với hóa chất diệt của một số loài Anopheles tại Việt Nam Hóa chất ... tài: Nghiên cứu tính kháng thuốc số loài muỗi truyền bệnh Việt Nam Mục tiêu đề tài: - Xác định thành phần loài điểm nghiên cứu - Xác định mức độ kháng hóa chất véc tơ sốt rét Kết xác định kháng. .. công bố 72 loài muỗi kháng hoá chất, 69 loài kháng DDT, 38 loài kháng phốt hữu cơ, 17 loài kháng với hoá chất Sự kháng hoá chất muỗi ngày tăng số lượng loài lẫn mức độ kháng loài kháng với nhiều... tiếp xúc nhiều hệ muỗi, giống loài côn trùng khác muỗi trở nên kháng hóa chất Tính kháng số loài muỗi thông báo sau hóa chất đưa vào sử dụng vài năm Đã có khoảng 125 loài muỗi kháng với hay nhiều