Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase.
Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM Khoa Công nghệ Thực phẩm ĐỀ TÀI THỬ NGHIỆM SINH HÓA GVHD: Phan Thị Kim Liên • • • • Thử nghiệm khả sinh H2S Thử nghiệm indol Thử nghiệm KIA/TSI Thử nghiệm Nitratase • Nội dung chính: Mục đích Nguyên tắc – chế Môi trường Cách đọc kết Thử nghiệm khả sinh H2S • Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả phân giải acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase Nguyên tắc - chế : Dựa khả vi sinh vật chuyển hóa acid amin chứa lưu huỳnh điều kiện kị khí sinh H2S, tạo chất kết tủa màu đen • Ngoài nguồn đạm hữu cơ, H2S tạo phản ứng khử thiosulfate Na2S2O3 enzyme thiosulfate reductase vi sinh vật để tạo sulfite H2S Môi trường • • • KIA,TSI (thạch nghiêng) SIM (thạch sâu) BSA (thạch đĩa) Tất môi trường trùng 1210C 15 phút BSA Beef Extract 5.000 g/l Tryptone 5.000 g/l Peptone 5.000 g/l D-glucose 5.000 g/l Disodium Hydrogen Phosphate 4.000 g/l Bi-Sulphite Indicator 8.000 g/l Ferrous Sulphate 0.300 g/l Agar 20.000 g/l Chất thị - Chỉ thị sulfide :FeSO4, Amonium sulfate sắt II - Acetate chì Có nhiều cách phát khả sinh H2S phương pháp sử dụng acetate chì nhạy để nhận lượng H2S vi khuẩn Thao tác • Dùng que cấy thẳng cấy đâm sâu vào phần đáy ống thạch nghiêng ống thạch đứng , ủ 37 C, 24giờ • Có thể dùng giấy tẩm Pb(CH3COO)2 5% gắn lên thành ống môi trường lỏng Phương pháp cho kết từ 30 phút đến 1-2 Thử nghiệm KIA/TSI • Mục đích: + Xác định khả sử dụng nguồn Cacbon cụ thể, kết hợp với môi trường tăng trưởng + Có sinh Hydrogen sufide (H2S) Môi trường: • • • • • KIA 1% Lactose TSI 0.1% Glucose Pepton (nguồn Cacbon/nitrat) Muối sắt Thiosulfate natri • • • • • • 1% Lactose 0.1% Glucose 1% Saccharose Pepton (nguồn Cacbon/nitrat) Muối sắt Thiosulfate natri Chỉ thị Phenol RED Nguyên tắc – chế: Có sử dụng đường: Nguyên tắc – chế: Không sử dụng đường: Nguyên tắc – chế: Sinh hydrogen sulfide (H2S): • Vi khuẩn + Sodiumthiosulfate • H2S + ion sắt H2S Sắt sulfide (không tan tạo tủa đen) Thử nghiệm KIA/TSI Thao tác tiến hành: • Dùng que cấy thẳng cấy vi khuẩn vào phần nghiêng ống thạch nghiêng cấy đâm sâu vào phần đứng ống, ủ 37 C 24 Thử nghiệm KIA/TSI Đọc kết Thử nghiệm Nitratase • Mục đích: Dùng để kiểm tra đặc tính sử dụng enzyme nitratase để khử nitrate thành nitrite sản phẩm nitrite sinh nitrogen tự vi sinh vật Môi trường, thuốc thử • • • • Môi trường: Nitrate Thuốc thử: Acid sunfanilic α-Naphthylamine Nguyên tắc – chế: • Một số vi khuẩn có khả sử dụng nitrat làm nguồn nhận hydro chất trình hô hấp kỵ khí đồng thời sử dụng nitrat làm nguồn nito khả tổng hợp emzyme nitratreductase Nitrate bị khử thành nitrite bị khử tiếp thành NO N2 • Kẽm chuyển hóa Nitrat thành Nitrit ống thử có màu đỏ => kết luận phản ứng âm tính • Nếu ống thử không chuyển màu, phản ứng dương tính (Vi khuẩn chuyển hóa hết Nitrit có môi trường) Phương pháp tiến hành • Dùng que cấy vòng cấy vi khuẩn vào môi trường nitrate lỏng, ủ 37ºC 24 Lấy nhỏ vài giọt thuốc thử Gress A (acid sulfanilic) vài giọt Gress B (α-Naphthylamine) Đọc kết quả: • • • • • Giai đoạn Dương tính: Có màu đỏ đậm Giai đoạn 2: Khử kẽm Dương tính: Không hình thành màu Âm tính: Màu hồng tới đỏ đậm Cảm ơn cô bạn [...]... trong môi trường THỬ NGHIỆM INDOL MỤC ĐÍCH: Phát hiện các vi sinh vật có khả năng sinh indol, từ đó phát hiện các vi sinh vật hiếu khí có hệ emzyme tryptophanase CƠ CHẾ Tryptophan có thể bị oxi hóa bởi một số vi sinh vật có hệ enzyme tryptophanse tạo nên các sản phẩm trung gian chứa gốc indol (indol pyruvic acid) Tryptophanase có trong vi sinh vật sẽ xúc tác phản ứng loại nhóm amin để tạo indol CƠ... đích: Dùng để kiểm tra đặc tính sử dụng enzyme nitratase để khử nitrate thành nitrite và các sản phẩm như nitrite hoặc sinh hơi nitrogen tự do của vi sinh vật Môi trường, thuốc thử • • • • Môi trường: Nitrate Thuốc thử: Acid sunfanilic α-Naphthylamine Nguyên tắc – cơ chế: • Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng nitrat làm nguồn nhận hydro cơ chất trong quá trình hô hấp kỵ khí đồng thời sử dụng nitrat... Phenol RED Nguyên tắc – cơ chế: Có sử dụng đường: Nguyên tắc – cơ chế: Không sử dụng đường: Nguyên tắc – cơ chế: Sinh hydrogen sulfide (H2S): • Vi khuẩn + Sodiumthiosulfate • H2S + ion sắt H2S Sắt sulfide (không tan tạo tủa đen) Thử nghiệm KIA/TSI Thao tác tiến hành: • Dùng que cấy thẳng cấy vi khuẩn vào phần nghiêng của ống thạch nghiêng và cấy 0 đâm sâu vào phần đứng của ống, ủ 37 C trong 24 giờ Thử... thể dùng thuốc thử Ehrlich) 0 _ Cấy vi khuẩn vào môi trường, ủ 37 C trong 24 giờ, lấy 3-5 giọt Kowac’s, sau đó đọc kết quả CÁCH ĐỌC KẾT QUẢ • Bề mặt môi trường xuất hiện vòng đỏ cánh sen (+) • Môi trường có màu vàng chanh (-) Thử nghiệm KIA/TSI • Mục đích: + Xác định khả năng sử dụng nguồn Cacbon cụ thể, kết hợp với môi trường tăng trưởng căn bản + Có hoặc không có sinh hơi Hydrogen sufide (H2S) Môi... N2 • Kẽm sẽ chuyển hóa Nitrat thành Nitrit và ống thử sẽ có màu đỏ => kết luận phản ứng âm tính • Nếu ống thử không chuyển màu, phản ứng dương tính (Vi khuẩn đã chuyển hóa hết Nitrit có trong môi trường) Phương pháp tiến hành • Dùng que cấy vòng cấy vi khuẩn vào môi trường nitrate lỏng, ủ 37ºC trong 24 giờ Lấy ra nhỏ vài giọt thuốc thử Gress A (acid sulfanilic) và vài giọt Gress B (α-Naphthylamine) ... trường THỬ NGHIỆM INDOL MỤC ĐÍCH: Phát vi sinh vật có khả sinh indol, từ phát vi sinh vật hiếu khí có hệ emzyme tryptophanase CƠ CHẾ Tryptophan bị oxi hóa số vi sinh vật có hệ enzyme tryptophanse... nghiệm dùng để xác định khả phân giải acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase Nguyên tắc - chế : Dựa khả vi sinh vật chuyển hóa acid amin... nitrite sản phẩm nitrite sinh nitrogen tự vi sinh vật Môi trường, thuốc thử • • • • Môi trường: Nitrate Thuốc thử: Acid sunfanilic α-Naphthylamine Nguyên tắc – chế: • Một số vi khuẩn có khả sử dụng