Phân tích vi sinh (1)

Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase. Mục đích: Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase.

THỬ NGHIỆM SINH HÓA

GVHD: Phan Thị Kim Liên

Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM

Khoa Công nghệ Thực phẩm

ĐỀ TÀI

• Thử nghiệm khả năng sinh H2S

Thử nghiệm khả năng sinh H2S

Thử nghiệm dùng để xác định khả năng phân giải các acid amin chứa lưu huỳnh (cysteine, cystin, methionine,…) sinh H2S nhờ enzyme desulfohydrase.

Nguyên tắc - cơ chế :

Dựa trên khả năng của vi sinh vật chuyển hóa các acid amin chứa lưu huỳnh trong điều kiện kị khí và sinh H2S , tạo chất kết tủa màu đen

• Ngoài nguồn đạm hữu cơ, H2S còn có thể được tạo ra do phản ứng khử

thiosulfate Na2S2O3 bởi enzyme thiosulfate reductase của vi sinh vật để tạo ra

sulfite và H2S

Chất chỉ thị

- Chỉ thị sulfide :FeSO4, Amonium sulfate sắt II

- Acetate chì

Có nhiều cách phát hiện khả năng sinh H2S nhưng phương pháp sử dụng acetate

chì là nhạy nhất để nhận ra 1 lượng H2S ở các vi khuẩn

THỬ NGHIỆM INDOL

MỤC ĐÍCH:

Phát hiện các vi sinh vật có khả năng sinh indol, từ đó phát hiện các vi sinh vật hiếu khí có hệ emzyme tryptophanase.

CƠ CHẾ

Tryptophan có thể bị oxi hóa bởi một số vi sinh vật có hệ enzyme tryptophanse tạo nên các sản phẩm trung gian chứa gốc indol (indol pyruvic acid).

Tryptophanase có trong vi sinh vật sẽ xúc tác phản ứng loại nhóm amin để tạo indol.

CƠ CHẾ

Nhân pyrrol của indol chứa nhóm CH2 kết hợp với nhóm (CHO) của p-dimetthylaminobenzaldehyd có trong thuốc thử Kovac’s (có thể dùng thuốc thử Ehrlich) hình thành nên một phức chất dạng quinone có màu đỏ.

CƠ CHẾ

DMABA+Indole

HCl,alcohol,warmed condensation

Red color

MÔI TRƯỜNG, THUỐC THỬ

_Môi trường Trypton water

_Thuốc thử Kowac’s (có thể dùng thuốc thử Ehrlich).

_ Cấy vi khuẩn vào môi trường, ủ 370C trong 24 giờ, lấy 3-5 giọt Kowac’s, sau đó đọc kết quả.

Nguyên tắc – cơ chế:

Có sử dụng đường:

Nguyên tắc – cơ chế:

Không sử dụng đường:

Thao tác tiến hành:

• Dùng que cấy thẳng cấy vi khuẩn vào phần nghiêng của ống thạch nghiêng và cấy đâm sâu vào phần đứng của ống, ủ 370C trong 24 giờ

Thử nghiệm KIA/TSI

Thử nghiệm KIA/TSI

Đọc kết quả

Thử nghiệm Nitratase

• Mục đích:

Dùng để kiểm tra đặc tính sử dụng enzyme nitratase để khử nitrate thành nitrite và các sản phẩm như nitrite hoặc sinh hơi nitrogen tự do của vi sinh vật.

Môi trường, thuốc thử

• Môi trường: Nitrate

• Thuốc thử:

• Acid sunfanilic

• α-Naphthylamine

Nguyên tắc – cơ chế:

• Một số vi khuẩn có khả năng sử dụng nitrat làm nguồn nhận hydro cơ chất trong quá trình hô hấp kỵ khí đồng thời sử dụng nitrat làm nguồn nito do khả năng tổng hợp emzyme nitratreductase Nitrate bị khử thành nitrite rồi có thể bị khử tiếp thành NO hoặc N2

• Kẽm sẽ chuyển hóa Nitrat thành Nitrit và ống thử sẽ có màu đỏ => kết

luận phản ứng âm tính.

• Nếu ống thử không chuyển màu, phản ứng dương tính (Vi khuẩn đã chuyển hóa hết Nitrit có trong môi trường).

Phương pháp tiến hành

• Dùng que cấy vòng cấy vi khuẩn vào môi trường nitrate lỏng, ủ 37ºC trong 24 giờ Lấy ra nhỏ vài giọt thuốc thử Gress A (acid sulfanilic) và vài giọt Gress B (α-Naphthylamine)

Đọc kết quả:

•  Dương tính: Có màu đỏ đậm

•  Dương tính: Không hình thành màu

•  Âm tính: Màu hồng tới

đỏ đậm

Cảm ơn cô và các bạn