PHƯƠNG PHÁP QUẢN LÝ MẪU BỆNH THỰC VẬT

PHNG PHP QUN Lí MU BNH THC VT Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Mi ti liu ghi chộp nu khụng th c kim tra li thỡ cng ch l nhng mnh giy m thụi R.W.G Dennis, theo British Ascomycetes (1968), J Cramer, Lehre, Germany ii Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt LI CM N Chỳng tụi xin chuyn li cm n sõu sc ti TS John Alcorn, ngi ó hiu ớnh cun sỏch ny Xin cm n T chc h tr phỏt trin Quc t Australia (AusAID) ó cung cp ngun kinh phớ quý bỏu cho vic i v xut bn cun sỏch Xin ginh li cm n c bit cho ụng Eli Szandala, Vn phũng cỏc chuyờn viờn bo v thc vt cao cp, B Nụng nghip, Thy sn v Lõm nghip Australia ó iu hnh chng trỡnh xut bn cun sỏch ny Cun sỏch ny mụ t nhiu phng phỏp ó c tho lun bi cỏc thnh viờn tham gia hi tho t chc ti Chiang Mai, Thỏi Lan ngy 20 thỏng 11 nm 2004 Chỳng tụi xin cm n TS Srisuk Poonpolgul (Bangkok, Thỏi Lan), b Srisurang Likhitekaraj (Bangkok, Thỏi Lan), TS Pornpimon Athipunyakom (Bangkok, Thỏi Lan), ụng Woothisak Butranu (Bangkok, Thỏi Lan), TS Kartini Kramadibrata (Bogor, Indonesia), TS Lee Su See (Kepong, Malaysia), TS Hien Thuy Phan (H Ni, Vit Nam) v ụng Eli Szandala (Canberra, Australia) vỡ nhng úng gúp quý bỏu cho s thnh cụng ca cun sỏch ny Cỏc tỏc gi chớnh TS Roger Shivas v TS Dean Beasley, Bo tng bnh cõy, S Nụng nghip v Thy sn Queensland, Australia Cỏc tỏc gi tham gia TS John Thomas v TS Andrew Geering, Khoa virus hc, S Nụng nghip v Thy sn Queensland, Australia TS Ian Riley, Chuyờn gia tuyn trựng hc, Trng i hc Adelaide, Bang Nam Australia, Australia â Commonwealth, Australia 2005 Cun cm nang Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt c m bo quyn tỏc gi Tuy nhiờn, bn cú th ti xung, in v chộp cho vic s dng riờng, khụng vỡ mc ớch thng mi hoc s dng phm vi c quan ca mỡnh Ngoi mc ớch s dng c phộp phm vi quy nh ca Lut bn quyn nm 1968, tt c cỏc quyn tỏc gi khỏc u c m bo ISBN 0-9751686-9-X iii Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt BNG CH VIT TT AMV ACIAR ASEAN ASEANET AusAID BO BRIP DAFF DAR DNA ELISA FAO GA GBIF GPS KBA ICTV IJSB IJSEM IMI IPPC ISPM LNYV MEA MTA NA NSW OCPPO PCR PDA PEMV PRA PRSV QDPIF RIRDC RNA SEM SPA SPS SCBV SWG TMV TSWV TWA UV VIDE WFCC WTO Virus khm lỏ linh lng Trung tõm nghiờn cu Nụng nghip Quc t Australia Hip hi cỏc Quc gia ụng Nam Hi thit lp v iu hnh mng li khu vc ụng Nam T chc h tr phỏt trin Quc t Australia Bo tng Bogoriense Bo tng bnh cõy Queensland B Nụng nghip, Lõm nghip v Thy sn Bo tng bnh cõy New South Wales Deoxyribonucleic Acid K thut dch liờn kt men T chc lng thc ca Liờn Hp Quc Glycerol Agar Phng tin thụng tin a dng sinh hc ton cu H thng nh v ton cu Kings B Agar y ban Quc t v phõn loi virus Tp Quc t v phõn loi hc vi khun Tp Quc t v tin húa v phõn loi vi sinh vt hc CABI Bioscience, UK Centre Cụng c Quc t v bo v thc vt Tiờu chun Quc t v kim dich ng thc vt Virus m vng hoi sinh rau dip Malt Extract Agar Vn bn tha thun chuyn giao mu Nutrient Agar New South Wales Vn phũng chuyờn viờn bo v thc vt cao cp Phn ng trựng hp chui Khoai tõy - ng Agar Virus khm bin dng u ỏnh giỏ nguy c dch hi Virus m vũng u S Nụng nghip v Thy sn Queensland T chc nghiờn cu v phỏt trin nụng thụn Ribonucleic Acid Kớnh hin vi in t quột Sucrose Peptone Agar Kim dch ng thc vt Virus hỡnh que hi mớa Cõn trng lng tiờu chun Virus khm lỏ thuc lỏ Virus m hộo c chua Mụi trng agar - nc mỏy Tia cc tớm C s d liu trao i thụng tin giỏm nh virus Hip hi lu gi mu vi sinh vt Th gii T chc thng mi Th gii iv Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt LI TA Cun cm nang v qun lý mu bnh thc vt ny c B Nụng nghip, Thy sn v Lõm nghip Australia ti tr thc hin Cun sỏch c i vi mc ớch cung cp ti liu tham kho cho cỏc nc khu vc nhm xõy dng danh mc dch hi t tiờu bn cỏc mu bnh thu c, ỏp ng nhu cu ca thng mi Quc t i vi hng húa nụng nghip S thnh lp t chc thng mi Th gii (WTO) nm 1995 l tin cho s i ca mt k nguyờn mi t thng mi Hip nh WTO v vic ỏp dng cỏc bin phỏp kim dch ng thc vt (Hip nh SPS) ó thỳc y s phỏt trin ca thng mi húa nụng sn, vy mc tiờu ny ó b lóng quờn mt s nc ang phỏt trin nhiu nc trờn th gii, b su sõu v bnh hi rt nghốo nn dn n nhng hn ch vic mụ t tỡnh trng lnh mnh ca nn nụng nghip cng nh lõm nghip nc ú ú cng l nguyờn nhõn khin nhiu t chc bo v thc vt Quc gia khụng th thc hin cụng tỏc phõn tớch nguy c dch hi mt cỏch y v tin cy Tỡnh trng ny cũn tip din s l mt bt li ln cho cỏc nc ang phỏt trin khu vc vic m phỏn m rng th trng cho hng nụng sn Theo iu khon ca hip nh SPS, cỏc nc phỏt trin ó chp thun tr giỳp v chuyờn mụn cho cỏc nc ang phỏt trin thnh viờn phỏt trin k nng cú liờn quan n hip nh SPS v ỏp ng cỏc iu kin m Hip nh SPS Australia ó úng gúp trỏch nhim ca mỡnh bng nhiu cỏch khỏc thụng qua cỏc chng trỡnh tr giỳp song phng khu vc, vi ngun ti tr ca T chc h tr phỏt trin Quc t Australia (AusAID) Cỏc hot ng tr giỳp c tin hnh trờn nhiu lnh vc, ú cú vic xõy dng danh mc cỏc dch hi trờn c s mu tiờu bn Vn phũng cỏc chuyờn viờn bo v thc vt cao cp thuc B Nụng nghip, Lõm nghip v Thy sn Australia ó m nhn cụng vic ny, i tng nhn c s giỳp chng trỡnh l cỏc nc khu vc ụng Nam Chng trỡnh chỳ trng n vic xõy dng nng lc ca cỏc nh khoa hc nm lnh vc c bn sau: ắ iu tra dch hi thc vt ắ Chn oỏn ắ Bo qun mu ắ Ph trỏch v qun lý b su mu ắ Qun lý d liu Cun cm nang ny ó túm tt li nhng phng phỏp v k thut thng c s dng tt c cỏc v bnh cõy, bao gm c thụng tin v nhng bnh hi cú tm quan trng v kinh t, cỏc phng phỏp thu thp mu bnh trờn ng rung, phng phỏp nuụi cy trờn mụi trng nhõn to, phng phỏp phõn lp, bo qun mu cng nh cỏc thụng tin, cỏc mo nh vic qun lý tiờu bn mu bnh v mu vi sinh vt hi ỏp ng nhu cu s dng rng rói, cun cm nang ny ó c dch sang ting Vit, ting Thỏi v ting Bahasa Lois Ransom Chuyờn viờn bo v thc vt cao cp B Nụng nghip, Thy sn v Lõm nghip Australia Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt MC LC LI CM N III BNG CH VIT TT IV LI TA MC LC DANH MC HèNH DANH MC BNG M U U 1.1 Nhng trỏch nhim mang tớnh ton cu 1.2 Tỡnh trng lu gi mu sinh hc cỏc nc ASEAN 1.3 Tm quan trng ca vic lu gi h s tiờu bn 1.4 Xõy dng v phỏt trin cụng tỏc lu gi mu bnh cõy cỏc nc ASEAN LU GI MU BNH HI THC VT 10 2.1 Bo tng mu 10 2.2 B su vi sinh vt 10 2.3 Xõy dng b mu bnh cõy 11 2.4 Danh mc dch hi 12 XY DNG B SU TP MU BNH 15 3.1 Ngun mu 15 3.2 Thu thp mu bnh ngoi ng rung 15 3.3 Thu thp v x lý mu bnh 17 3.3.1 i vi lỏ, thõn v qu 18 3.3.2 i vi r v t 19 3.3.3 i vi nm ln 20 3.4 Cỏch ghi phiu iu tra mu bnh 21 3.5 iu tra v ly mu 22 PHNG PHP KIM TRA MU BNH 24 4.1 Nhum mu nm v vi khun 24 4.2 Kớnh hin vi quang hc 26 4.3 Chp nh mu 27 4.3.1 Cỏch qun lý v t tờn file nh 27 PHNG PHP PHN LP NM, VI KHUN V TUYN TRNG TRONG PHềNG TH NGHIM 29 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 5.1 Phõn lp nm 30 5.1.1 Bung gi m 31 5.1.2 Phng phỏp pha loóng 32 5.1.3 Phỏt trin v sn sinh bo t 32 5.2 Phõn lp vi khun 34 5.3 Phõn lp tuyn trựng 35 5.3.1 Mu t 36 5.3.2 Mu cõy bnh 38 5.3.3 Bo qun v lm tiờu bn 39 5.4 Mụi trng nuụi cy CCH BO QUN V LU GI MU BNH 6.1 Tiờu bn mu bnh 40 44 44 6.1.1 Tiờu bn khụ 44 6.1.2 Tiờu bn chun 46 6.1.3 Mu vi sinh vt khụ 47 6.1.4 Tiờu bn lam 47 6.1.5 úng gúi v chuyn tiờu bn 48 6.2 Mu vi sinh vt ó phõn lp 48 6.2.1 Nuụi cy trờn mụi trng agar 49 6.2.2 Bo qun bng du khoỏng 49 6.2.3 Bo qun nc vụ trựng 50 6.2.4 Bo qun ụng khụ 50 6.2.5 Bo qun t 50 6.2.6 Bo qun bng silica gel 50 6.2.7 Bo qun trờn giy thm 51 6.2.8 Bo qun lnh sõu 51 6.2.9 Bo qun bng nit lng 51 GIM NH VI SINH VT GY HI 7.1 Nm 52 52 7.1.1 Nm gõy bnh trờn r 53 7.1.2 Nm gõy bnh trờn thõn 53 7.1.3 Nm gõy bnh trờn lỏ 54 7.1.4 Nm gõy bnh trờn qu v ht 56 7.1.5 Nm g st 56 7.1.6 Nm than en 58 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 7.2 Vi khun 59 7.3 Phytoplasma 61 7.4 Virus v viroid 61 7.4.1 Cỏc loi virus v thụng tin lu gi 62 7.4.2 Triu chng bnh virus thc vt 63 7.5 Tuyn trựng 66 7.5.1 Nhng yờu cu v giỏm nh 67 7.5.2 Nhn dng tuyn trựng ký sinh thc vt 67 7.5.3 Giỏm nh n loi 68 Cỏc k thut phõn loi 69 7.6 7.6.1 Kớnh hin vi in t quột (Scanning electron microscopy - SEM) 69 7.6.2 K thut húa sinh v phõn t 69 7.6.3 Huyt (min dch) 69 7.6.4 K thut nucleic axit 70 QUN Lí H S MU BNH 71 8.1 H thng c s d liu (Database) 71 QUN Lí B SU TP MU U 73 9.1 iu kin phũng mu 73 9.2 Phũng tr b cỏnh cng hi tiờu bn mu 73 9.3 Phũng tr nhn hi mu vi sinh vt 74 9.4 Cho mn mu 75 9.5 Bo m an ton cho mu bnh 76 10 TI LIU THAM KHO CHN LC 78 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt DANH MC HèNH Hỡnh Trang thit b cn thit cho vic xõy dng mt phũng tiờu bn v mu vi sinh vt 11 Hỡnh Ngun thụng tin giỳp cho vic xõy dng danh mc dch hi xp theo th t tin cy 12 Hỡnh Vớ d v danh mc dch hi trờn cõy u 12 Hỡnh Thụng tin cn thit cho mt h s dch hi, c xõy dng da trờn ISPM 14 Hỡnh Dng c thng dựng ly mu bnh 17 Hỡnh L lm khụ mu nghi ng nhim virus .19 Hỡnh Vớ d mt nhón ly mu c s dng ti phũng lu gi mu bnh BRIP .22 Hỡnh Mt ct nghiờng ca bung mu nm phõn lp cú ỏnh sỏng en .33 Hỡnh Cỏch vch phõn lp vi khun trờn mt agar 35 Hỡnh 10 Khay Whitehead dựng tỏch tuyn trựng t t v cõy 37 Hỡnh 11 Dựng phu Baermann tỏch tuyn trựng t t v cõy bnh 37 Hỡnh 12 Tỏch tuyn trựng t mụ bnh bng phng phỏp phun sng 39 Hỡnh 13 Vớ d mt nhón dỏn trờn gúi tiờu bn s dng ti phũng tiờu bn BRIP 45 Hỡnh 14 Cỏc gúi tiờu bn Bo tng mu bnh Ustilaginales Vỏnky (HUV) v Bo tng bnh cõy ca QDPI&F (BRIP) 48 Hỡnh 15 Triu chng bnh virus (t trỏi qua phi): vũng bin mu, m vũng v khm lỏ 65 Hỡnh 16 Hỡnh thỏi mt trc ca mt s nhúm tuyn trựng 68 Hỡnh 17 Mụun Catalogue ca KE EMu database 71 Hỡnh 18 a ch Internet v trang ch ca hai database phõn loi tin cy 72 Hỡnh 19 Vt bũ ca nhn cỏc git nc ng trờn np a Petri 75 DANH MC BNG Bng Mt s triu chng bnh thng gp .16 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt M U Tm quan trng ca vic lu gi tiờu bn sinh vt, bao gm c cỏc mu thc vt b bnh v cỏc vi sinh vt gõy bnh ó c núi n hng lot bi bỏo trờn cỏc khoa hc Trong mt bi cú nhan Trỏch nhim tng h ca phõn loi nm hc v bnh cõy, Walker (1975) ó trớch dn ớt nht 18 ti liu tham kho v chớnh tỏc gi ú ó nhn mnh tm quan trng ca phõn loi hc sinh hc ng dng cng nh tm quan trng ca cụng tỏc phõn loi nm, bao gm nm hc núi chung v bnh cõy núi riờng Nhng bi bỏo ny cú nh hng ti vic tr giỳp phỏt trin cỏc bo tng bnh hi v phõn loi hc hay khụng? Cõu tr li cú l l khụng, ly dn chng t thc t Australia, hu ht cỏc bo tng mu bnh Australia u cỏc c quan ca Chớnh quyn cỏc bang ti tr Nguyờn nhõn ti chớnh ph li lng l vic u t vo cỏc bo tng (phũng) tiờu bn sinh hc chỳng l nn tng cho nhng nghiờn cu v phõn loi cũn ang l gõy tranh cói Cú l l ch nhng nh phõn loi hc ó khụng chỳ ý n nhu cu ca nhng ngi cú kh nng s dng chỳngnhiu nh phõn loi hc thng khụng ngh n nhu cu v cụng vic ca cỏc nh sinh hc ng dng ú cú cỏc nh bnh cõy, thm mt s cũn cú xu hng tỏch mỡnh nhng lnh vc nghiờn cu v thc hnh sinh hc rng ln hn (Walker, 1975) Cựng vi s i ca T chc thng mi th gii nm 1995 v nhng iu lut ca t chc ny ỏp dng cho hng húa nụng nghip, tỡnh trng sc khe cõy trng ó tr thnh mt chớnh tr thng mi ln Chu ỏp lc t nhiu thnh phn khỏc nhau, cỏc Quc gia ang phi s dng cỏc iu khon ca Hip nh kim dch ng thc vt (Hip nh SPS) ti a húa li th cnh tranh hay núi cỏch khỏc l thỳc y m ca nhng th trng trc õy ó b úng li nhng nghi ng v kim dch v loi tr vic nhp khu nhng hng húa cú nguy c nh hng xu ti cỏc ngnh sn xut nụng nghip nc Da trờn nhng c s khoa hc v ỏnh giỏ nguy c dch hi, Hip nh SPS a iu kin bo v cỏc ngnh sn xut nụng nghip trc s xõm nhp ca dch hi t ngoi vo, ng thi to iu kin cho s phỏt trin ca thng mi húa nụng sn Hip nh SPS cho phộp cỏc thnh viờn qun lý thng mi i vi hng húa nụng nghip da trờn tỡnh trng sc khe cõy trng v an ton thc phm Tuy nhiờn cỏc gii hn phi rừ rng v phi cú bng chng k thut 1.1 NHNG TRCH NHIM MANG TNH TON CU Cụng c Quc t v bo v thc vt (IPPC) v Hip nh SPS quy nh: cỏc nc xut khu phi cú trỏch nhim cung cp cho cỏc nc nhp khu mt danh mc dch hi cú kh nng i theo hng xut khu C th nh sau: ắ IPPC quy nh cỏc nc cú hng húa xut khu phi cung cp cỏc thụng s k thut v sinh hc hp l cn thit cho vic ỏnh giỏ nguy c dch hi Bin phỏp kim dch ng thc vt (trong hip nh SPS) l cỏc tiờu chun v quy nh ca mt Quc gia v cỏc nh: s ln vi sinh vt, c t, kim loi nng, tn d thuc bo v thc vt thc phm, sinh vt hi, c di nh ngha dch hi c s dng ch cỏc ng vt chõn t, vi sinh vt v tuyn trựng gõy hi cho thc vt v sn phm thc vt Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt chi tuyn trựng, vic mụ t loi mi ũi hi phi cú s liu v trt t nucleotide ca mt on DNA nht nh Nhng nghiờn cu v phõn loi da trờn c tớnh húa hc ó giỳp cho vic tỡm s cú mt ca cỏc loi n m vic s dng cỏc c im hỡnh thỏi khụng th phõn bit c Tuy vy, vic tỡm nhng sai khỏc v c im hỡnh thỏi cng b sung cho cỏc c tớnh v húa hc 7.5.1 Nhng yờu cu v giỏm nh S tip cn cng nh cỏc k nng chuyờn mụn cn thit phõn loi tuyn trựng ph thuc vo mc ớch giỏm nh Cỏc mu tuyn trựng lu gi cỏc b su mu Quc gia v Quc t phi c xỏc nh cn thn hoc ớt nht l phi c mt chuyờn gia v phõn loi tuyn trựng khng nh li Tuy nhiờn, i vi nhng n v phõn loi khú, cỏc chuyờn gia v phõn loi tuyn trựng cú th a cỏc kt lun khỏc v mt s trng hp ch da vo c im hỡnh thỏi cng khụng th giỳp gỡ c i vi mc ớch iu tra, nhng ngi lm cụng tỏc giỏm nh tuyn trựng cú th t kt lun, ch cn tham kho ý kin chuyờn gia v phõn loi i vi nhng loi mi cha c mụ t trc ú Nu xut hin loi mi mu tuyn trựng phi c chuyn n cỏc phũng mu bnh Quc gia c kim tra li trng hp cn thit Nu khụng th chuyn mu vỡ lý v kim dch hoc v thng mi, cng nờn cú chuyờn gia kim tra li trc xut bn (cụng b) i vi cụng tỏc qun lý hoc nghiờn cu v sinh thỏi, vic chn oỏn cng ch cn dng li phm vi giỏm nh trờn mu tuyn trựng sng kt hp vi cỏc thụng tin liờn quan h ng vt v ký ch ti im nghiờn cu Tuy nhiờn, kt qu cú th tin cy hn, nờn chn mt s mu i din cỏc chuyờn gia khng nh li Thng i vi mc ớch ny ch cn giỏm nh n chi l 7.5.2 Nhn dng tuyn trựng ký sinh thc vt Trong thc t sn xut, iu quan trng cn thit u tiờn l phi phõn bit c tuyn trựng ký sinh thc vt vi tuyn trựng ký sinh trờn cỏc giỏ th khỏc Tuyn trựng s dng thc n thc vt cú cỏc kim hỳt (b phn hỳt thc n rng, cú th thũ tht vo) khoang ming Nu kim tra di kớnh lỳp soi ni cht lng tt cú th xp tuyn trựng ang sng thnh cỏc nhúm dinh dng theo phng oỏn Hỡnh 16 minh nhng bin i v hỡnh thỏi phớa trc ca tuyn trựng liờn quan n thúi quen n ung 67 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Hỡnh 16 Hỡnh thỏi mt trc ca mt s nhúm tuyn trựng A, B, C tylenchid, aphelenchid, dorylaimid tuyn trựng cú kim hỳt, hỳt dinh dng t thc vt, nm v to, mt s cú kh nng hỳt dinh dng t ng vt; D, E - rhabditid, cephalobid dựngthc n vi khun; v F mononchid loi n tht Ngoi cỏc loi tuyn trựng cú kh nng hỳt dinh dng thc vt, mt s loi cú cu to kim hỳt cú th hỳt dinh dng t nm, to, a y, mt s khỏc cú kh nng ký sinh cỏc ng vt nh t Vỡ vy, cn chỳ ý n hỡnh thỏi hc v s tng h vi ký ch cú th nhn dng nhúm tuyn trựng ký sinh cõy trng mt cỏch t tin 7.5.3 Giỏm nh n loi Giỏm nh hỡnh thỏi Tuyn trựng c giỏm nh da vo hỡnh thỏi v cu trỳc gii phu bao gm c h sinh sn v s o kớch thc, t l s o kớch thc Khúa phõn loi v cỏc ti liu v mụ t hỡnh thỏi u ch rừ cỏc c tớnh giỳp cho vic giỏm nh n chi v loi Hin ó cú cỏc khúa phõn loi in t (dựng phn mm mỏy tớnh) Cú th tham kho hai khúa phõn loi dựng hai chng trỡnh khỏc sau: Cỏc chi tuyn trựng hi thc vt (xem www.lucidcentral.org) v Tuyn trựng Australia (xem www.ento.csiro.au) Giỏm nh bng sinh hc phõn t v húa sinh Hin nay, cỏc phng phỏp DNA da trờn phõn tớch trỡnh t chui nucleotide, u dũ, on ct DNA ó phỏt trin v t c nhiu tin b gii quyt nhng khú khn cụng tỏc giỏm nh v phõn loi Mt s phng phỏp da trờn vic tỏch v nhõn on DNA t cỏc cỏ th tuyn trựng Mt s phng phỏp khỏc cú th nhn bit nh lng mt s loi tuyn trựng c bit cỏc mu t Mt hn ch ỏng lu ý l vic phõn loi cú th hn ch phm vi mt loi hoc mt nhúm loi nh m s lng mu ly cú th khụng i din cho cỏc bin i phm vi loi Tuy nhiờn, vic ỏp dng cỏc cụng ngh tin b ny chc chn s phỏt trin nhanh chúng Cỏc phng phỏp phõn loi da trờn c tớnh húa hc cng khỏ phỏt trin, bao gm phõn tớch isozyme, protein, huyt nhng khụng c ỏp dng ph bin Nhn dng cỏc loi tuyn trựng nt sng bng phng phỏp phõn tớch isozyme khỏ thc t bi vỡ vic giỏm nh da trờn hỡnh thỏi nhiu khụng chớnh xỏc Vic ỏp dng cỏc 68 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt phng phỏp DNA v húa hc giỏm nh tuyn trựng ũi hi phi cú trang thit b hin i nhng mt khỏc li gim s cn thit phi cú cỏc nh phõn loi cú k nng giỏm nh tuyn trựng hng ngy 7.6 7.6.1 CC K THUT PHN LOI Kớnh hin vi in t quột (Scanning electron microscopy - SEM) Khụng ging nh kớnh hin vi quang hc s dng ỏnh sỏng quan sỏt mu, kớnh hin vi in t quột (SEM) dựng cỏc in t to hỡnh nh ca mu vt SEM cú phõn gii ln hn rt nhiu ln so vi kớnh hin vi quang hc cỏc in t cú bc súng nh hn 100.000 ln so vi bc súng ỏnh sỏng SEM cng rt cú ớch vic nghiờn cu cu trỳc bờn ngoi ca cỏc bo t nm phõn gii tt nht ca mt kớnh hin vi quang hc l 0,2 àm hay 200 nm phõn gii ca SEM cú th t ti - nm, tt hn 100 ln so vi kớnh hin vi quang hc Kớnh hin vi in t quột cung cp cỏc hỡnh nh b mt chi tit, rừ nột v cú chiu sõu hn kớnh hin vi quang hc, iu ú cng cú ngha l cựng mt lỳc cú th quan sỏt c nhiu mu hn SEM dựng mt chựm in t quột b mt mu vt, to cỏc hỡnh nh khụng gian ba chiu ca mu vt Cỏc in t cú kớch thc rt nh v d dng i lch hng s tỏc ng ca cỏc phõn t khớ khụng khớ Vỡ vy, cỏc in t cú th tip cn mu vt, h thng ng bn in t v bung mu vt u c bo qun mụi trng chõn khụng gi nguyờn cu trỳc ca mu sinh hc iu kin chõn khụng, phi lm khụ mu cn thn bng carbon dioxide (CO2) lng h thng mỏy gi l mỏy lm khụ ti hn (critical point dryer) Thụng thng, mu c c nh trờn mt mu kim loi (thanh gỏ mu) dựng bng dớnh mt c bit, sau ú tiờu bn c m mt lp kim loi mng, vớ d nh vng kớch thớch tớnh dn in Bo t nm g st v than en cú thnh dy khụng cn phi lm khụ ti hn v cú th c m kim loi sau mu c c nh trờn gỏ mu 7.6.2 K thut húa sinh v phõn t Nu khụng thy triu chng bnh xut hin trờn cõy khụng cú ngha l cõy ú hon ton sch bnh Trong trng hp ú, cỏc nh bnh cõy nờn s dng cỏc bin phỏp k thut phõn t v húa sinh phỏt hin vi sinh vt Indexing l khỏi nim dựng ch bt c quy trỡnh no c s dng kim tra s cú mt ca vi sinh vt ó c bit n, c bit l virus ký sinh thc vt Indexing giỳp thc hin nhanh cỏc bin phỏp phũng tr v hn ch kh nng phỏt dch Indexing cng rt quan trng vic thc hin kim dch hn ch s xõm nhp ca bnh ngoi lai v h thng chng ch sn xut cõy ging v nhõn ging cõy sch bnh 7.6.3 Huyt (min dch) Trong k thut huyt thanh, cỏc khỏng th c hiu c to (nh s cú mt ca khỏng nguyờn sn sinh t vi sinh vt hi) c khai thỏc cho mc ớch chn oỏn 69 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Cỏc khỏng th bao gm khỏng th a dũng polyclonal (hn hp cỏc khỏng th c sn xut t h dch ca ng vt sau tiờm cht tit vi sinh vt vo mỏu ng vt) hoc khỏng th n dũng (t bo ty spleen sn sinh mt loi khỏng th nht t h dch ng vt c nhõn vụ tớnh bng nuụi cy mụ t bo) Mt nhng phng phỏp chn oỏn bng huyt ph bin nht l k thut dch liờn kt men (enzyme linked immunosorbent assay - ELISA) Khỏng th c t vo cỏc ging trờn a microtitre Dung dch kim tra c nh vo cỏc ging, nu khỏng nguyờn cú mt thỡ chỳng s tng tỏc vi khỏng th Ra sch ging, t enzyme tip hp khỏng th vo ging v li ln na, sau ú cho giỏ th enzyme vo Nu khỏng nguyờn cú mu, s t hp khỏng th - enzyme s lm bin i mu giỏ th Chn oỏn bnh bng phng phỏp huyt cú rt nhiu u im Mc dự sn xut khỏng th ũi hi thi gian vi tun nhng nu bo qun ỳng phng phỏp khỏng th cú th trỡ c trng thỏi n nh mt thi gian di v cho kt qu nhanh chúng Phng phỏp huyt cú th c ỏp dng c phũng thớ nghim v ngoi ng rung 7.6.4 K thut nucleic axit Cỏc vi sinh vt chỳng cú cựng nhiu kiu gen nhng nhỡn chung, cỏc gen cú cựng chc nng cỏc n v phõn loi (taxon) khỏc s cú trỡnh t chui sp xp chui DNA khỏc S sai khỏc ny cú th c khai thỏc giỏm nh bng cỏc k thut phõn t nh: lai nucleic axit v phn ng trựng hp chui (PCR) Cỏc k thut phõn t hin i phõn tớch nucleic axit nhy cm n mc m nhng iu kin lý tng, lng DNA cú th c phỏt hin n picogram Mt chui phn ng PCR in hỡnh liờn quan n quỏ trỡnh lm núng DNA, enzyme DNA polymerase, on mi (DNA primers) v dNTP mt dung dch m ti nhit 90C lm bin tớnh DNA, sau ú lm lnh ti khong 50-60C gn cỏc on mi (primers) vo cỏc chui DNA n sau ú tng nhit lờn 72C, nhit ti thớch cho phn ng trựng hp gn cỏc chui DNA b sung vo nhau, bt u t v trớ on mi C sau mi vũng bin tớnh, gn mi v trựng hp, lng DNA li c nhõn ụi Sau 30 vũng c nhõn lờn theo cp s m, lng DNA tng nhiu n mc cú th nhỡn thy c agarose sau nhum bng ethidium bromide K thut nucleic acid ỏp dng cho giỏm nh cú li th l nhanh v nhy vt xa phng phỏp huyt Nhc im ca phng phỏp ny l phi cú trang thit b, húa cht t tin, khụng tin hnh c vi nhiu mu mt lỳc nh phng phỏp huyt v s quỏ nhy cm cng ng ngha vi vic l nu mu b thỡ kt qu s b sai nghiờm trng 70 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 8.1 QUN Lí H S MU BNH H THNG C S D LIU (DATABASE) Vic nhp thụng tin v h s bnh cõy vo h thng c s d liu (database) in t l rt quan trng bi vỡ nh cú h thng ny, cỏc cỏn b ca phũng mu cú th tip cn thụng tin mt cỏch nhanh nht m khụng cn phi lc tỡm c ng ti liu S liu c sp xp cú h thng nờn cú th d dng tỡm kim, khụi phc, x lý v cp nht cn thit Thụng tin lu gi database cú th c s dng to bn phõn b vi sinh vt hi, vỡ th rt quan trng cụng tỏc kim dch v ỏnh giỏ nguy c dch hi Mt database cú th ch n gin nh mt bng biu xõy dng t phn mm Microsoft Excel, hoc cú th l cỏc chng trỡnh c s d liu phc hn nh Microsoft Access, Oracle, BioLink hoc KE EMu Nhng chng trỡnh ny cho phộp qun lý cỏc hỡnh nh k thut s v ng thi cú cỏc cụng c cho phộp vic trao i thụng tin mt cỏch nhanh chúng H thng Database nh KE EMu (Hỡnh 17) cú th núi l vụ giỏ vỡ nú cho phộp ngi s dng tỡm kim cỏc thay i iu ny c bit cú ớch ngi s dng mun thay i lp tc cỏc thụng s tỡm kim nh tờn ca vi sinh vt hi v tờn ký ch Hỡnh 17 Mụun Catalogue ca KE EMu database Database khụng ch lu gi cỏc hỡnh nh k thut s m c cỏc phng tin khỏc nh: file bn, file PDF, html v phim video Ngoi ra, database cũn cho phộp lu gi cỏc thụng tin chi tit v ngi ly mu, ngi giỏm nh, ngi trng cõy, vớ d 71 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt nh a ch, s in thoi, s fax, email, tiu s, ti liu tham kho Database cũn cú th giỳp cỏc nhõn viờn phũng mu lờn lch, t gi cho mt s cụng vic nht nh Ngi nhp thụng tin vo database phi bo m rng cỏc thụng tin lu gi database l ht sc chớnh xỏc Hin cú khỏ nhiu database v phõn loi sn cú trờn mng Internet (Hỡnh 18) www.indexfungorum.org - CABI Bioscience Database of Fungal Names www.ipni.org - The International Plant Names Index Hỡnh 18 a ch Internet v trang ch ca hai database phõn loi tin cy Trong phm vi mt Quc gia, cỏc database ca cỏc phũng mu bnh phõn b ri rỏc cỏc a im khỏc cú th c kt ni vi qua mt h thng mng to thnh mt bo tng mu o Vớ d: Database v dch hi thc vt Australia Australian Plant Pest Database (APPD, http://appd.cmis.csiro.au/) l mt h thng c s d liu dch hi cõy trng o, mang tớnh Quc gia APPD hp nht h s mu dch hi t hn im nỳt khỏc phõn b trờn ton lónh th Australia, to iu kin cho vic tỡm v trớ mu dch hi mt cỏch nhanh chúng v tỡm kim thụng tin mt cỏch hiu qu Trờn phm vi ton cu, Ngun thụng tin a dng sinh hc ton cu - Global Biodiversity Information Facility (GBIF, http://www.gbif.org/) cú mt h thng database c xõy dng vi mc ớch a cỏc thụng tin ch yu v a dng sinh hc trờn th gii lờn mng internet cho tt c mi ngi GBIF s dng cng chớnh ca nú truy cp vo mt s databases v vi sinh vt hi v cỏc cú liờn quan n a dng sinh hc trờn ton cu 72 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 9.1 QUN Lí B SU TP MU IU KIN PHềNG MU Mt phũng mu bnh phi cú mt v trớ an ton v vnh cu lu gi mu Phũng mu phi cú kh nng chng cụn trựng, chng chỏy v chng ma dt Mt phũng mu bnh thc vt ln va phi (lu gi khong 50.000 mu) cn s dng mt din tớch ti thiu m2, c bit nu s dng t nhiu ngn sp xp mu tiờu bn Giỏ v t tiờu bn bng kim loi cú kh nng chng cụn trựng hn l lm bng g Phũng gi mu nờn cú h thng iu khin nhit (20-23C) v m (40-60%) khụng khớ Trong iu kin nhit v m nh vy cú th hn ch c s phỏ hy ca cụn trựng hi, c bit kt hp vi bin phỏp t mu mi vo t ỏ trc lu gi phũng mu Nờn s dng mỏy iu hũa khụng khớ iu khin nhit v dựng mỏy hỳt m gim m Luụn luụn úng ca vo v ca s ngn nga cụn trựng xõm nhp Dựng rốm che ca s trỏnh ỏnh nng mt tri 9.2 PHềNG TR B CNH CNG HI TIấU BN MU cỏc khu vc nhit i, nhit v m cao rt phự hp vi s phỏt trin ca cụn trựng phỏ hi Mt s cụn trựng, c bit l b cỏnh cng, thng n mu tiờu bn khụ v nhanh chúng phỏ hy b su mu khc phc tỡnh trng ny nờn t mu bnh vo t lnh sõu -20C hoc thp hn ngy dit ht ngun sõu hi Cỏc mu ó bo qun phũng cng nờn luõn phiờn t vo t lnh sõu mt khong thi gian nht nh Trc mu c a vo t lnh sõu, nờn gúi mu tỳi nilon hoc hp xp y np cht trỏnh ng hi nc trờn mu Sau ly t t lnh sõu, mu phũng cú iu hũa mt thi gian cho n mu t n nhit phũng bo qun mu Mu bnh cũn ti thng c chuyn n phũng mu giỏm nh Khụng nờn gi cỏc mu ti ny gn phũng bo qun mu m nờn kim tra mu khu vc xa phũng bo qun mu Tt c cỏc mu bnh ó ly cho mn hoc kim tra u phi vo t lnh sõu ngy trc t tr li vo v trớ c phũng mu Nhiu phũng mu bnh cú ngi chuyờn trỏch vic xụng hi phũng mu mt nm mt ln bng cỏc húa cht kh trựng c phộp lu hnh, vớ d nh methyl bromide, carbon bisulphide, carbon tetrachloride, ethylene dichloride, hydrocyanic gas, lindane, dichlorvos strips hoc paradichlorobenzene Phi chỳ ý lm vic vi cỏc cht kh trựng ny vỡ chỳng cú hi cho sc khe ngi v thng d chỏy Tuy nhiờn, nu ch kh trựng xụng hi khụng thụi thỡ cha phũng tr cụn trựng vỡ bin phỏp ny thng khụng hiu qu i vi trng cụn trựng v nhn 73 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 9.3 PHềNG TR NHN HI MU VI SINH VT Vn nhn n nm ó phõn lp trờn mụi trng nhõn to l khỏ ph bin v nguy him cỏc phũng mu vi sinh vt Nhn xõm nhp vo phũng thớ nghim thụng qua mu bnh ti, giy dộp, qun ỏo, cụn trựng v cỏc mu vi sinh vt phõn lp t cỏc phũng thớ nghim khỏc Chỳng phỏt trin mnh iu kin nhit i Khụng ch n mu vi sinh vt phõn lp, nhn cũn mang bo t nm v vi khun rut,trờn c th ri lõy nhim sang cỏc mu khỏc Nu khụng c phỏt hin sm, nhn cú th gõy ln phũng thớ nghim chỳng cú kh nng phỏt trin rt nhanh, di chuyn t a cy ny sang a cy khỏc t hoc trờn bn mu cy Nu nhỡn k a cy bng mt thng, cú th phỏt hin nhn di dng cỏc chm trng nh trờn b mt mụi trng Thụng thng, nhn c phỏt hin qua cỏc vt bũ chỳng li trờn mụi trng nm v vi khun hoc qua cỏc vt bũ chỳng li trờn cỏc git nc ng np a Petri (Hỡnh 19) Khi cú th phỏt hin nhn bng mt thng cng l nhn ó bựng phỏt Chỳ ý ngn nga s xut hin ca nhn, khụng nờn n nhn bựng phỏt mi tỡm cỏch dit tr Cú th phũng nhn nh sau: ắ Kim tra tt c cỏc mu vi sinh vt chuyn n phũng thớ nghim xem cú nhn hay khụng Nu mun gi mu vi sinh vt, nờn cy truyn v b mu ban u vo ni hp dit trựng dit ht ngun nhn tim tng; ắ t a cy thun v a cy phõn lp ban u vo hai t hoc giỏ khỏc nhau; ắ Hp tit trựng cỏc mu phõn lp c v cỏc mu cõy bnh sau s dng cng sm cng tt; ắ Thng xuyờn lau mt bn phũng mu bng cn 70% v lau bn thớ nghim cng nh mt ca t mu cy bng thuc dit cụn trựng khụng gõy hi cho nm; ắ Bc a cy bng parafin hoc nilon siờu mng, nhiờn cỏch ny ch hn ch phn no vỡ cui cựng nhn cú th xõm nhp vo a cy ó bc; ắ Loi b tt c cỏc mu vi sinh vt ó b nhim nhn bng cỏch hp tit trựng Nu mu vi sinh vt rt cú giỏ tr v khụng cú mu thay th thỡ cú th mu vo t lnh sõu 24 gi dit ht nhn trng thnh v trng Sau ú cy truyn vi sinh vt lờn mụi trng mi v hy b mu c Mt s loi nm khụng th sng sút sau lnh 74 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Hỡnh 19 9.4 Vt bũ ca nhn cỏc git nc ng trờn np a Petri CHO MN MU Cỏc mu bnh lu gi cú th c cho mn thi gian ngn cho mc ớch nghiờn cu khoa hc Tuy nhiờn, cn phi cỏc quy nh i vi ngi mn bo m s an ton ca mu bnh Tt nht ch cho cỏc phũng mu bnh khỏc mn mu vi iu kin h phi bo m an ton cho mu chuyn cng nh lm vic vi mu Ngi lu gi mu cú quyn quyt nh khụng cho mn mu nu xem xột thy vic s dng mu l khụng cn thit, khụng phự hp vi mc ớch nghiờn cu hoc cm thy mu cú th b s dng khụng ỳng ch hay b hng Mu chuyn nc ngoi mt s trng hp phi qua x lý kim dch n ni Phng phỏp x lý cú th l bng nhit, xụng hi hoc x lý bng tia phúng x gamma Cỏc phng phỏp x lý ny cú th lm hng mu hoc tỏc ng n cu trỳc DNA ca vi sinh vt Vỡ vy, ngi lu gi b mu phi cú trỏch nhim ỏp dng mi bin phỏp bo m rng mu cho mn luụn c gi iu kin tt Nu nghi ng v cỏch x lý mu hay hu qu ca vic x lý mu thỡ khụng nờn cho mn mu Thi gian cho mn mu thng l - 12 thỏng, cú th kộo di thi gian cho mn tựy thuc vo yờu cu ca ngi mn Ngi cho mn nờn yờu cu ngi mn tr mu li sau hon thnh cụng vic nghiờn cu Ngi mn cú th tr li mt phn mu (khụng phi ton b mu) nhng phi tha thun trc vi ngi chu trỏch nhim trụng gi b mu Mt nhng iu kin cho mn mu l mu phi c bo qun iu kin an ton Khụng nờn gp, b hoc ố bp gúi mu vỡ s lm hng mu Luụn luụn gi mu gúi mu nhng lỳc khụng dựng n Tt c cỏc mu u phi c gúi cn thn quỏ trỡnh bo qun v phi gi nguyờn gúi mu ban u tr v phũng mu c Cỏc mu cho mn ch c s dng cho mc ớch nghiờn cu nh kim tra mu tiờu bn v quan sỏt hỡnh thỏi vi sinh vt hi di kớnh hin vi Ngi mn mu khụng c phộp ly mu lu gi riờng di bt k hỡnh thc no hay chuyn mu cho mt t chc th ba m khụng cú bn cho phộp ca ngi ph trỏch 75 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt phũng mu cho mn Cú th tỏch mt phn tiờu bn bnh hoc tỏch DNA cho mt s mc ớch nghiờn cu c th Tuy vy, phi ht sc cn thn tỏch mu tiờu bn v ch tỏch b phn tiờu bn cn thit iu kin cũn tiờu bn gi li phũng mu ban u c bit, phi ht sc cn thn ct tiờu bn gc (tiờu bn chun) Cỏc bn chỳ thớch phi c s dng ghi chộp nhng thụng tin liờn quan n mu bnh, bao gm c nhng thụng tin v danh phỏp v phõn loi Bn chỳ thớch phi c lm t giy lu tr cht lng cao Di õy l tt c cỏc thụng tin cn thit ghi giy cho mn Nờn chun b bn giy cho mn, mt bn gi cho ngi mn cựng vi mu cũn ngi ph trỏch phũng mu gi bn sao: S cho mn (1 s nht cho mi mu cho mn khụng b ln) Tờn v thụng tin liờn lc ca ngi mn mu Mc ớch mn mu (phm vi nghiờn cu v phõn loi v danh phỏp) Ngy mn v ngy tr mu Mu vt cho mn (mt danh mc tt c cỏc tiờu bn v mu cho mn) Tt c cỏc mu cho mn phi c ngi qun lý phũng mu chng nhn, ký vo v ghi ngy c th trc chuyn n cho ngi mn mu 9.5 BO M AN TON CHO MU BNH Gi an ton cho b mu di hai dng Th nht l m bo an ton c hc cho mu v th hai l trỏch nhim hp phỏp v o c ngh nghip ca ngi qun lý b mu An ton c hc bo m an ton c hc cho b mu bnh, khụng nờn mu ni m cng cú th vo c B mu nờn c bo qun mt ni an ton, khụng chu nh hng ca thi tit, tt nht nờn khu vc cú khúa an ton v cú bo v c ngy ln ờm Nờn bo qun tiờu bn mu bnh trờn giỏ hoc t lm bng kim loi Nờn cú h thng cha chỏy t ng tt nht l dựng khớ (vỡ nc cú th lm hng mu tiờu bn khụ) Nờn t bỡnh cu cỏ nhõn ri rỏc khu nh v i ng cỏn b phi c hun luyn s dng h thng cha chỏy ny m bo an ton cho thụng tin lu gi cng ht sc quan trng Nờn thng xuyờn copy cỏc file mỏy tớnh cp nht vo a (cú th mt ngy mt ln) Nhng cỏn b s dng cỏc chng trỡnh qun lý d liu phc nh EMu (ó c tho lun chi tit chng 8) cn phi cú k nng c bn v mỏy tớnh cú th xem thụng tin v hiu ớnh h s mu Trỏch nhim hp phỏp v o c ngh nghip Bt c c quan no lu gi mu bnh cú giỏ tr i vi khoa hc u phi cú trỏch nhim hp phỏp v o c ngh nghip bo m rng b mu luụn c quan 76 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt tõm bo v v bo qun iu kin tt nht Vỡ vy, c quan lu gi mu phi hn ch ti a vic s dng cỏc bin phỏp k thut khụng cú c s khoa hc, cỏc iu kin mụi trng khụng thớch hp bo v tiờu bn cho mc ớch s dng hin ti v tng lai C quan lu gi nờn cỏc chớnh sỏch v quy nh bng bn v vic qun lý, chm súc v s dng mu bnh C quan lu gi mu phi bo m mi iu kin tt nht v c s vt cht, cỏn b cú chuyờn mụn cho vic lu gi lõu di mu bnh v h s cú liờn quan Chớnh ph mt s ni ó nhn giỏ tr ca b su mu bnh v thụng qua mt s lut v bo v mu su Vớ d, phũng mu DAR c bo v theo lut v mu khoa hc nụng nghip Agricultural Scientific Collections Trust Act 1983 (NSW) 77 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt 10 TI LIU THAM KHO CHN LC Ti liu chung Crop Protection Compendium 2004 CAB International, Wallingford, UK Disease Compendium Series Minnesota, USA American Phytopathological Society, St Paul, Greuter, W., McNeill, J., Barrie, F.R., Burdet, H.M., Demoulin, V., Filgueiras, T.S., Nicolson, D.H., Silva, P.C., Skog, J.E., Trehane, P., Turland, N.J and Hawksworth, D.L 2000 International Code of Botanical Nomenclature (Saint Louis Code) Regnum Vegetabile, 138 Koletz Scientific Books, Germany Holiday, P 2001 A Dictionary of Plant Pathology 2nd Edition University Press, UK Cambridge Holmgren, P.K., Holmgren, N.H and Barnett, L.C (eds) 1990 Index Herbariorum Part 1: The Herbaria of the World 8th Edition Regnum Vegetabile, 120 New York Botanical Garden Ploetz, R.C 2003 Diseases of Tropical Fruit Crops CABI Publishing, Wallingford, UK Walker, J 1975 Mutual responsibilities of taxonomic mycology and plant pathology Annual Review of Phytopathology, 13: 335 355 Waller, J.M., Lennộ, J.M and Waller, S.J (eds) 2002 Plant Pathologists Pocketbook 3rd Edition CABI Publishing, Wallingford, UK Waller, J.M., Ritchie, B.J and Holderness, M 1998 Plant Clinic Handbook IMI Technical Handbook No CAB International, Wallingford, UK Vi khun Bradbury, J.F and Sadler, G.S 1997 Guide to Plant Pathogenic Bacteria 2nd Edition CAB International Mycological Institute, Surrey, UK Fahy, P.C and Persley, G.J 1983 Plant Bacterial Diseases A Diagnostic Guide Academic Press, Sydney Goto, M 1992 Fundamentals of Bacterial Plant Pathology Academic Press, San Diego, USA Schaad, N.W., Jones, J.B and Chun, W 2001 Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria 3rd Edition APS Press, St Paul, Minnesota, USA Swings, J.G and Civerolo, E.L 1993 Xanthomonas Chapman & Hall, London, UK 78 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Nm Agrios, G.N 2005 Plant Pathology 5th Edition Elsevier Academic Press, USA Ainsworth, G.C., Sparrow, F.K and Sussman, A.S 1973 The Fungi An Advanced Treatise Vols IVA, IVB Academic Press, New York Arx, J.A von 1981 The Genera of Fungi Sporulating in Pure Culture 3rd Edition J Cramer, Lehre Barnett, H.L and Hunter, B.B 1998 Illustrated Genera of Imperfect Fungi 4th Edition APS Press, St Paul, Minnesota, USA Barron, G.L 1968 The Genera of Hyphomycetes from Soil Wilkins Company, Baltimore, USA The Williams & Boerema,G.H., de Gruyter, J., Noordeloos, M.E and Hamers, M.E.C 2004 Phoma Identification Manual CABI Publishing, Wallingford, UK Braun, U 1987 A monograph of the Erysiphales (powdery mildews) Hedwigia 89 Nova Braun, U 1995 A Monograph of Cercosporella, Ramularia and Allied Genera (Phytopathogenic Hyphomycetes) Vol IHW-Verlag, Mỹnchen, Germany Braun, U 1998 A Monograph of Cercosporella, Ramularia and Allied Genera (Phytopathogenic Hyphomycetes) Vol IHW-Verlag, Mỹnchen, Germany Burgess, L.W., Summerell, B.A., Bullock, S., Gott, K.P and Backhouse, D 1994 Laboratory Manual for Fusarium Research 3rd Edition Fusarium Research Laboratory, Department of Crop Sciences, University of Sydney Carmichael, J.W., Kendrick, W.B., Connors, I.L and Sigler, L 1980 Genera of Hyphomycetes University of Alberta Press, Edmonton, Canada Crous, P.W and Braun, U 2003 Mycosphaerella and its anamorphs: Names published in Cercospora and Passalora CBS Biodiversity Series Centraalbureau voor Schimmelcultures, Utrecht, The Netherlands Cummins, G.B and Hiratsuka, Y 2003 Illustrated Genera of Rust Fungi 3rd Edition APS Press, St Paul, Minnesota, USA Domsch, K.H., Gams, W and Anderson, T.-H 1993 Compendium of Soil Fungi Vols I, II Academic Press, New York Ellis, M.B 1971 Dematiaceous Hyphomycetes CMI, Kew, UK Ellis, M.B 1976 More Dematiaceous Hyphomycetes CMI, Kew, UK Ellis, M.B and Ellis, J.P 1997 Microfungi on Land Plants Richmond, London, UK Erwin, D.C and Ribeiro, O.K 1996 Phytophthora Diseases Worldwide APS Press, St Paul, Minnesota Hansford, C.G 1961 The Meliolineae Sydowia, Beih 2:1-806 79 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Hansford, C.G 1963 CCLXXXV Iconographia meliolinearum Sydowia, Beih 5: pls I- Hawksworth, D.L 1974 Mycologists Handbook Commonwealth Agricultural Bureaux, UK Hughes, S.J 1976 Sooty moulds Mycologia 68:693-820 Index of Fungi CAB International Mycological Institute, Surrey, UK Kirk, P.M., Cannon, P.F., David, J.C and Stalpers, J.A (eds) 2001 Dictionary of the Fungi th Edition CABI Publishing, Wallingford, UK McLaughlin, D.J., McLaughlin, E.G and Lemke, P.A 2001 The Mycota Vol VII Systematics and Evolution Springer-Verlag, Berlin Mueller, G.M., Bills, G.F and Foster, M.S (eds) 2004 Biodiversity of Fungi Inventory and Monitoring Methods Elsevier Academic Press, USA Nag Raj, T.R 1993 Coelomycetous Anamorphs with Appendage-Bearing Conidia Mycologue Publications, Waterloo, Canada Pitt, J.I and Hocking, A.D 1999 Fungi and Food Spoilage Aspen Publishers, Gaithersburg, Maryland, USA Rossman, A.Y., Palm, M.E and Spielman, L.J 1987 A Literature Guide for the Identification of Plant Pathogenic Fungi The American Phytopathological Society, St Paul, Minnersota, USA Sivanesan, A 1984 The Bitunicate Ascomycetes and their Anamorphs J Cramer, Vaduz, Liechtenstein Spencer, D.M 1981 The Downy Mildews Academic Press, London Sutton, B.C 1980 The Coelomycetes CMI, Kew, UK Smith, D and Onions, A.H.S 1994 The Preservation and Maintenance of Living Fungi 2nd Edition IMI Technical Handbook No CAB International, Wallingford, UK Vỏnky, K 2002 Illustrated Genera of Smut Fungi 2nd Edition APS Press, St Paul, Minnesota, USA White, J.F., Bacon, C.W., Hywel-Jones, N.L and Spatafora, J.W 2003 Clavicipitalean Fungi: Evolutionary Biology, Chemistry, Biocontrol, and Cultural Impacts Mycology Series 19 Marcel Dekker, New York Wingfield, M.J., Seifert, K.A and Webber, J.F 1999 Ceratocystis and Ophiostoma: Taxonomy, Ecology and Pathogenicity APS Press, St Paul, Minnesota 80 Phng phỏp qun lý mu bnh thc vt Tuyn trựng Anon 2005 Interactive diagnostic key to plant parasitic, freeliving and predaceous nematodes University of Nebraska - Lincoln Nematology Laboratory, http://nematode.unl.edu/key/nemakey.htm Bell, M 2004 Plant Parasitic Nematodes: Lucid key to 30 genera of plant parasitic nematodes http://www.lucidcentral.com/keys/nematodes/ Eisenback, J.D 2002 Identification guides for the most common genera of plantparasitic nematodes Mactode Publications, Blacksburg USA Hodda, M 2005 Key to the nematodes of Australia http://www.ento.csiro.au/science/nematode.html Hunt, D.J 1993 Aphelenchida, Longidoridae and Trichodoridae : their systematics and bionomicng s CAB International, Wallingford, UK Nickle, W.R 1991 Manual of agricultural nematology M Dekker, New York Nobbs, J.M 2004 Plant parasitic nematodes of Australia [CD] South Australian Research and Development Institute, Adelaide (available from nobbs.jackie@saugov.sa.gov.au) Shurtleff, M.C and Averre, C.W 2000 Diagnosing plant diseases caused by nematodes APS Press, St Paul, Minnesota, USA Siddiqi, M.R 2000 Tylenchida: parasites of plants and insects CABI Publications, Wallingford, UK Stirling, G.R., Nicol J and Reay, F 1999 Advisory services for nematode pests: operational guidelines Rural Industries Research and Development Corporation, Barton, A.C.T viii, 111 p (http://www.rirdc.gov.au/reports/Ras/99-41.pdf) Phytoplasma Whitcomb, R.F and Tully, J.G (Eds) 1989 The Mycoplasmas Vol Academic Press, New York Virus Brunt, A., Crabtree, K., Dallwitz, M., Gibbs, A and Watson, L 1996 Viruses of Plants: Descriptions and Lists from the VIDE Database CABI Publishing, Wallingford, UK Hull, R 2002 Matthews Plant Virology Academic Press, London, UK 81