Y hai duong NGHIỆM PHÁP VON KAULLA

Ad: #Tuluxn Tài liệu Y khoa Y Hải Dương HMTU Fb: https://www.facebook.com/tailieuykhoayhaiduong/?ref=bookmarks Gmail: study.hmtu.edu@gmail.com NGHIỆM PHÁP VON - KAULLA Nguyên lý Khi huyết tương pha loãng acid hoá làm tủa fibrinogen yếu tố hoạt hoá hệ thống tiêu sợi huyết (plasminogen hoạt hoá, plasminogen) Các chất ức chế tiêu sợi huyết yếu tố VII có tủa Do tủa làm đông, cục đông bị tiêu nhanh nhiều lần so với bình thư ờng Dựa vào tính chất này, người ta tiến hành theo dõi thời gian tiêu tủa làm đông để đánh giá mức độ hoạt động hệ thống tiêu sợi huyết Chuẩn bị 2.1 Dụng cụ: - Ống nghiệm, pipet, nồi cách thủy, máy ly tâm 2.2 Hóa chất: - Đệm Michaelis pH 7,35 - CaCl2 M / 10 - Acid acetic % - Chất chống đông Natri citrat 3,8% 2.3 Bệnh nhân - Không sử dụng thuốc chống đông Tiến hành kỹ thuật - Lấy máu tách huyết tương giàu tiểu cầu: máu tĩnh mạch chống đông Natri citrat 3,8% với tỷ lệ 1/10 Để tự lắng ly tâm 1500 vòng/phút phút, tách huyết tương - Trong ống nghiệm chứa 0,3 ml huyết tương mẫu chứng bệnh nhân, cho vào 3ml nước cất - Cho thêm vào ống giọt acid acetic 2%, kiểm tra để có pH = 5,2 - Ly tâm 3000 vòng/phút 15 phút Gạn bỏ nước trong, giữ lại phần tủa - Dùng giấy thấm, thấm khô thành ống - Cho vào ống 0,3 ml dung dịnh đệm Michaelis pH 7,35 pha loãng /4 dung dịch NaCl 0,9 %, dùng que đánh tan tủa - Cho thêm vào ống giọt CaCl2 M/10, đặt ống nghiệm vào bình cách thuỷ 370 C, chờ đông Bấm đồng hồ theo dõi thời gian từ đông tới tan hoàn toàn Kết - Tan hoàn toàn : trước 15 phút - Tiêu sợi huyết tối cấp 15 - 30 phút - Tiêu sợi huyết nặng 30 - 45 phút - Tiêu sợi huyết vừa 45 - 60 phút - Tiêu sợi huyết nhẹ Trên 60 phút - Bình thường Page of Ad: #Tuluxn Tài liệu Y khoa Y Hải Dương HMTU Fb: https://www.facebook.com/tailieuykhoayhaiduong/?ref=bookmarks Gmail: study.hmtu.edu@gmail.com Các yếu tố ảnh hưởng kết - Không tạo cục đông do: tiến hành sai kỹ thuật, lượng acid acetic cho không đúng, thấm ống nghiệm không khô - Chú ý : lượng fibrinogen huyết tương ít, không t ạo cục đông, lúc phải làm lại xét nghiệm cách bổ sung vào huyết tương bệnh lượng fibrinogen lưu ý làm xét nghiệm: Von-Kaulla nghiệm pháp dùng để đánh giá mức độ hoạt động hệ thống tiêu sợi huyết Xét nghiệm thực cách tạo tủa fibrinogen chất hoạt hóa trình tiêu sợi huyết (chủ yếu làm plasminogen t-PA-plasminogen), tủa làm đông trình tan cục đông xảy nhanh chất ức chế trình tiêu sợi huyết Như trình tiêu sợi huyết dựa hoạt động hệ thống tiêu sợi huyết Xét nghiệm dùng để đánh giá tình trạng tiêu fibrin tiên phát thứ phát phát tình trạng tiêu fibrin tiềm tàng Đồng thời xét nghiệm dùng để theo dõi điều trị tiêu huyết khối Tuy nhiên quy trình thực xét nghiệm phức tạp có nhiều yếu tố tham gia vào nên với kinh nghiệm mình, hôm chia sẻ với bạn điểm cần lưu ý thực xét nghiệm để đảm bảo kết xét nghiệm xác Mình tóm tắt bước quy trình giải thích cụ thể bước để bạn nắm loại bỏ nguyên nhân gây ảnh hưởng Tách huyết tương giàu tiểu cầu: Hãy nhớ xét nghiệm cần huyết tương giàu tiểu cầu chế đông giống Howell, bạn lấy huyết tương nghèo tiểu cầu phần sau huyết tương không đông cho Ca++ thiếu tham gia cầu tiểu cầu Mặt khác bạn tách huyết tương nghèo tiểu cầu có nghĩa bạn phải ly tâm vòng cao phần lớn fibrinogen bị lắng xuống làm cho nồng độ fibrinogen huyết tương giảm không hình thành fibrin Cách làm sau: Lấy máu tĩnh mạch chống đông Natri citrat 3,8% với tỷ lệ 1/10 Để tự lắng tự nhiên ly tâm 1000 - 1500 vòng/phút phút, tách huyết tương Pha loãng acid hóa huyết tương: Cho vào ống nghiệm 0,3 ml huyết tương sau thêm 3ml nước cất Thêm 1-2 giọt acid acetic 2% để có pH 5,2 Khi pha loãng acid hình thành tủa fibrinogen chất hoạt hóa trình tiêu sợ huyết (t-PA-plasminogen) chất ức chế gần loại bỏ tủa Lưu ý pH phải điều 5,2 acid nhẹ Nếu bạn dùng acd mạnh pH 5,2 làm biến tính fibrinogen Ngược lại pH > 5,2 không tạo tủa không loai bỏ chất ức chế tủa Ly tâm tách tủa Page of Ad: #Tuluxn Tài liệu Y khoa Y Hải Dương HMTU Fb: https://www.facebook.com/tailieuykhoayhaiduong/?ref=bookmarks Gmail: study.hmtu.edu@gmail.com Ở bước bạn ly tâm với tốc độ vòng cao (khoảng 3000v/phút x 15') để tạo tủa hoàn toàn Sau đổ phần dịch Hãy nhớ đổ dịch không hút cách dốc thẳng ống nghiệm sau ly tâm để đổ dịch bên Nếu bạn hút làm sục tủa lên Thấm khô ống nghiệm Bạn dùng giấy thấm để thấm thật khô thành ống nghiệm để loại bỏ hoàn toàn dịch Nếu bạn làm không khô sót lại chất ức chế trình tiêu sợi huyết Và tủa làm đông trình tiêu cục đông kéo dài chất ức chế Làm tan tủa Thêm vào 0,3 ml dung dịch đệm Michaelis pH 7,35 pha loãng /4 dung dịch NaCl 0,9 %, dùng que đánh tan tủa Lưu ý đệm phải pha loãng phần đệm phần nước muối sinh lý Nếu dùng đệm không plasminogen không hoạt động ngược lại đệm pH trung tính plasmin lại không hoạt động Và tỉ lệ 1/4 tối ưu để plasminogen plasmin hoạt động tốt Làm đông trở lại xác định thời gian tan đông Cho thêm vào ống giọt CaCl2 M/10, đặt ống nghiệm vào bình cách thuỷ 370 C, chờ đông Bấm đồng hồ theo dõi thời gian từ đông tới tan hoàn toàn Lúc chế đông giống đông máu xét nghiệm Howell Bạn dùng CaC2l M/40 phải dùng lượng nhiều hơn, bị pha loãng không đông hoàn toàn thời gian đông hoàn toàn lâu Ở ta cần tính thời gian từ đông hoàn toàn đến tan đông hoàn toàn nên cần rút ngắn thời gian chờ đông Tuy nhiên số trường hợp cục đông hình thành lý sau: - Thiếu tiểu cầu: Cần ly tâm tốc độ vòng thấp để thu đươc huyết tương giàu tiểu cầu - Lượng fibrinogen ít: Có thể thêm lượng fibrinogen vào huyết tương - Hệ thống hoạt hóa plasminogen mịnh dẫn đến đông đến đâu tan đến làm ta không thấy cục đông: Xử lý cách thêm huyết tương bình thường vào trước cho CaCl2, cục đông hình thành tan nhanh - Tiêu thụ hết yếu tố hệ thống đông máu bệnh lý đông máu rải rác lòng mạch (DIC): Xử lý cách thêm huyết tương bình thường vào, cục đông hình thành sau 60 phút không tan hết yếu tố hoạt hóa trình tiêu fibrin Trên kinh nghiệm cần lưu ý để làm thành công nghiệm pháp Von-Kaulla Mình làm chưa lần thất bại Vậy bạn thử làm lưu tâm điểm trình bày xem sao? Nếu có bất thường có thêm kinh nghiệm chia sẻ thêm vui lòng phản hồi Page of 3