PHẾ CẦU KHUẨN (Streptococcus pneumoniae) Mã bài: XN2 18.17 Thời lượng: LT:2tiết TH: GIỚI THIỆU: Phế cầu loại song cầu Gram (+) có đường hô hấp người khoẻ mạnh Phế cầu vi khuẩn thường gặp gây nhiễm khuẩn đường hô hấp trẻ em Đây vi khuẩn nuôi cấy phân lập cần môi trường giàu chất dinh dưỡng phải cần làm đầy đủ bước để kết luận vi khuẩn gây bệnh MỤC TIÊU: Sau học xong này, học sinh có khả năng: Trình bày đặc điểm sinh vật học khả gây bệnh phế cầu khuẩn Nêu phương pháp chẩn đoán vi khuẩn học phế cầu khuẩn NỘI DUNG Đặc điểm sinh vật học 1.1 Hình thể tính chất bắt màu Phế cầu khuẩn song cầu hình nến hai đầu to giáp vào nhau, hai đầu nhọn quay ngoài, đường kính 0,5 - 1,25 µm Trong môi trường nuôi cấy nhiều đôi xếp liên tiếp với thành chuỗi dễ lẫn với liên cầu Trong bệnh phẩm hay môi trường nuôi cấy có nhiều anbumin có vỏ Không có lông, không di động, không sinh nha bào, bắt màu gram (+) 1.2 Tính chất nuôi cấy Phế cầu khuẩn hiếu khí, kỵ khí tuỳ tiện, nhiệt độ thích hợp 37 0C, dễ bị tiêu diệt điều kiện nhiệt độ thay đổi, phát triển dễ dàng môi trường có nhiều chất dinh dưỡng khí trường có - 10% CO2 Trên môi trường thạch máu cừu khuẩn lạc nhỏ, tròn, lồi, bóng, giọt sương, xung quanh có vòng tan máu α Trên môi trường thạch máu người có vòng tan máu β nên dễ nhầm với liên cầu Trên môi trường socola có vòng vàng xung quanh khuẩn lạc Những phế cầu có vỏ khuẩn lạc thường lớn, nhầy, màu xám nhạt 1.3 Tính chất sinh vật hoá học - Phế cầu men catalase - Bị ly giải mật muối mật ( thử nghiệm Neufeld dương) - Không phát triển môi trường có etyl hydrocuprein( thử nghiệm Optochin +) Hai thử nghiệm để phân biệt phế cầu với liên cầu 1.4 Cấu tạo kháng nguyên - Kháng nguyên vỏ: Vỏ phế cầu cấu tạo polysacharid có tính kháng nguyên Hiện có 85 typ huyết phế cầu ghi nhận kháng nguyên Mỗi typ phế cầu kích thích thể hình thành kháng thể bảo vệ kháng thể opsonin ( tượng opsonin: kháng thể bổ thể gắn lên bề mặt phế cầu làm phế cầu phình vỏ kết tủa) Mặc dù kháng nguyên vỏ polysaccharid phế cầu đặc hiệu typ có số phản ứng chéo typ phế cầu với số vi khuẩn khác(liên cầu tan máu α không tan máu, Klebsiella, Salmonella ) - Kháng nguyên thân: Phế cầu có loại kháng nguyên thân: + Kháng nguyên polysaccharid C kháng nguyên đặc hiệu loài + Kháng nguyên M protein đặc hiệu typ + Kháng nguyên R chưa hiểu biết đầy đủ 1.5 Sức đề kháng Phế cầu dễ bị tiêu diệt nhiệt độ ( 60 oC/30phút) thuốc sát khuẩn thông thường Trong trình giữ chủng, phế cầu dễ bị giảm độc lực biến đổi từ khuẩn lạc dạng S sang dạng R Phế cầu không chịu nhiệt độ lạnh nên giữ chủng phải để nhiệt độ 18 - 30o C Khả gây bệnh 2.1 Gây bệnh cho người Phế cầu nội độc tố ngoại độc tố, phế cầu gây bệnh chủ yếu vỏ có tác dụng bão hoà opsonin hoá, làm vô hiệu hoá tác dụng IgG bổ thể, làm giảm khả thực bào Ngoài phế cầu có khả tiết men proteinase thuỷ phân IgA làm tác dụng ngăn cản xâm nhập phế cầu vào niêm mạc đường hô hấp Phế cầu sống tỵ hầu người lành với tỉ lệ cao 40 - 70% Phế cầu gây nên bệnh đường hô hấp, điển hình viêm phổi, viêm phế quản phổi, ápxe phổi, viêm màng phổi Viêm phổi phế cầu thường xảy sau bệnh nhiễm khuẩn đường hô hấp virus thường gặp sau bệnh cúm hoá chất Các typ gây bệnh thường typ 1, 2, người lớn 4, 1, trẻ em Ngoài bệnh đường hô hấp, phế cầu gây viêm tai, viêm xoang, viêm họng, viêm màng não, viêm phúc mạc, nhiễm khuẩn huyết, viêm màng tim, viêm thận nơi tổn thương, có nhiều fibrin bao quanh tạo nên vùng cách biệt ngăn không cho kháng sinh tác dụng với phế cầu việc điều trị bệnh kết hạn chế, nên điều trị sớm triệt để 2.2 Gây bệnh thực nghiệm Súc vật cảm nhiễm chuột nhắt, chuột bạch, thỏ, khỉ Tiêm da cho chuột gây nhiễm khuẩn huyết chuột chết nhanh Chẩn đoán vi khuẩn học 3.1 Chẩn đoán trực tiếp 3.1.1 Bệnh phẩm: Bệnh phẩm chất ngoáy họng, đờm, máu, dịch não tuỷ, dịch màng phổi, mủ tuỳ theo tổn thương 3.1.2 Nhuộm soi: Nhuộm gram, nhuộm soi có giá trị trường hợp bệnh phẩm chất ngoáy họng, dịch họng mũi đờm 3.1.3 Nuôi cấy phân lập: - Bệnh phẩm có nhiễm nhiều vi khuẩn đờm, chất ngoáy họng cấy vào môi trường thạch máu có gentamycin 5µg⁄1ml môi trường Để tủ ấm 370C, phế cầu có vỏ khuẩn lạc có đỉnh, sau 24 khuẩn lạc lõm Tính chất giúp phân biệt với S.viridans Vi khuẩn thường gặp bệnh phẩm họng, mũi tan máu α Đồng thời bệnh phẩm nuôi cấy vào môi trường thạch máu, thạch nước báng Sau 24 nhận xét hình thái khuẩn lạc, chọn khuẩn lạc điển hình nhuộm soi Nếu thấy song cầu Gram (+) hình nến tiếp tục kiểm tra tính chất sinh vật hoá học - Bệnh phẩm máu, dịch não tuỷ: Nuôi cấy vào môi trường canh thang máu canh thang nước báng, để tủ ấm 37 C, theo dõi hàng ngày Khi có dáu hiệu vi khuẩn mọc nhuộm soi, song cầu Gr (+) hình nến nuôi cấy sang môi trường thạch máu tiếp tục xác định tính chất sinh vật hoá học 3.1.4 Các thử nghiệm xác định phế cầu: - Thử nghiệm Neufeld: Cho vào hai ống nghiệm nhỏ ống 0,25 ml nước muối sinh lý vô khuẩn Sau trộn khuẩn lạc phế cầu vào để có độ đục độ đục chuẩn cho vào ống nghiệm thứ 0,25 ml nước muối sinh lý vô khuẩn, ống thứ cho 0,25 ml muối mật ( Desoxycholate 2%) Để tủ ấm 37 C Nếu phế cầu sau nhuộm soi, ống thứ vi khuẩn, ống thứ không vi khuẩn phế cầu bị ly giải Hiện người ta thường dùng khoanh giấy Optochin thay thử nghiệm Neufeld - Thử nghiệm Optochin: Dàn dung dịch vi khuẩn môi trường thạch máu đĩa, khô mặt thạch đặt khoanh giấy Optochin có etyl hydrocuprein, để 37 C, sau 24 giờ, có vòng vô khuẩn ≥ 14 mm phế cầu Để phân biệt phế cầu gây bệnh với chủng ký sinh cách xác định độc lực phế cầu thường gây bệnh thực nghiệm chủng phân lập Tiêm vi khuẩn vào phúc mạc chuột bạch, sau chuột chết phân lập lại vi khuẩn từ máu tim chuột Nếu tìm thấy vi khuẩn chắn phế cầu có độc lực Xác định vỏ vi khuẩn phương pháp nhuộm vỏ dùng phương pháp phình vỏ (Quellung) Khi kháng thể kháng vỏ kết hợp với vỏ làm cho lớp vỏ phình to lên, quan sát tượng phương pháp nhuộm vỏ 3.2 Chẩn đoán gián tiếp Chẩn đoán gián tiếp ý nghĩa chẩn đoán phế cầu nên không dùng phòng xét nghiệm Tiêu chuẩn chẩn đoán phế cầu: - Hình thể tính chất bắt màu - Hình thái khuẩn lạc môi trường thạch máu có gentamycin - Bị tan muối mật sắc tố mật - Gây bệnh cho súc vật Phòng bệnh điều trị 4.1 Phòng bệnh Vaccin phòng bệnh sử dụng nước tiên tiến, tác dụng bảo vệ vaccin không cao, có tác dụng ngăn cản nhiễm phế cầu nặng nhiễm khuẩn huyết, viêm màng não mủ vaccin không đầy đủ serotyp Phế cầu lây theo đường hô hấp nên việc phòng bệnh không đặc hiệu khó khăn, chủ yếu vệ sinh đường hô hấp 4.2 Điều trị Phế cầu nhậy cảm với kháng sinh thường dùng penicilin, gentamycin, cephalosporin Một số kháng sinh bị phế cầu ngày kháng nhiều cloramphenicol, cotrimoxazol, penicilin G LƯỢNG GIÁ Trả lời ngắn câu sau: - Phế cầu thường đứng ., bắt màu Gram - Trên môi trường thạch máu có gentamycin, khuẩn lạc phế cầu - Kết thử nghiệm Optochin đánh giá dựa vào - Hai thử nghiệm để phân biệt phế cầu với liên cầu là: A………………………………B………………………………… - Bốn bước để chẩn đoán trực tiếp phế cầu là: A…………………………… B……………………………… C……………………………….D……………………………… - Hai loại kháng nguyên phế cầu: A……………………………….B……………………………… Trả lời sai câu sau: TT Nội dung Đ S Vỏ phế cầu có vai trò gây bệnh Phế cầu không di động, men catalase Gentamycin môi trường thạch máu để kích thích phế cầu phát triển tốt Môi trường nuôi cấy phế cầu cần phải có nhiều chất dinh dưỡng Gây bệnh thực nghiệm nhằm mục đích xác định độc lực phế cầu Phế cầu không bị ly giải muối mật Giữ chủng phế cầu để tủ lạnh Phế cầu gây bệnh đường hô hấp Nhuộm soi trực tiếp có giá trị chẩn đoán phế cầu nhiễm khuẩn mũi họng Chọn câu trả lời - Thử nghiệm Neufeld đọc kết sau: A 30 phút B phút C D 24 E 24-48 - Thử nghiệm optochin đọc kết bằng: A Đường kính vòng vô khuẩn D Tính chất khuẩn lạc B Sự tan dã vi khuẩn E Cả A+B C Màu môi trường - Trên môi trường thạch máu gentamycin, khuẩn lạc phế cầu: A Không tan máu B Màu vàng C Có đỉnh D To, nhăn nheo E Bị ly giải - Phế cầu tính chất sau: A Đứng thành đôi B Hình nến C Bị ly giải mật D Phát triển thạch máu E Phát triển môi trường có etyl hydrocuprein - Tính chất sau có phế cầu: A Phát triển môi trường thông thường B Bị tiêu diệt thuốc sát khuẩn thông thường C Chịu lạnh tốt D Không gây bệnh cho súc vật E Không tan máu - Bệnh phẩm để chẩn đoán phế cầu là: A Đờm B Máu C Chất ngoáy họng D Phân E Cả A+B+C - Loại cầu khuẩn sau có tượng phình vỏ: A Tụ cầu B Liên cầu C Phế cấu D Tất E Tất sai