Viện Công nghệ sinh học_ ĐHCTPHÚC TRÌNH THỰC TẬP NUÔI CẤY MÔBÀI 1: CHUẨN BỊ DỤNG CỤ VÀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤYBÀI 2: VI NHÂN GIỐNG CÂY CẢNHBÀI 3:TẠO SẸO TỪ PHÔI LÚABÀI 4: CẤY CHUYỂNBÀI 5: THUẦN DƯỠNG VÀ CHUYỂN CÂY CON RA VƯỜN ƯƠM
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÚC TRÌNH THỰC TẬP NHÓM: SINH VIÊN THỰC HIỆN THỰC TẬP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT VÀ ĐỘNG VẬT CS328 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN BÀI 1: CHUẨN BỊ DỤNG CỤ VÀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY I MỤC ĐÍCH Giới thiệu số dụng cụ thiết bị bản, cách sử dụng chúng Giúp làm quen với thao tác nuôi cấy mô II VẬT LIỆU – MÔI TRƯỜNG - Dụng cụ: Đĩa petri, chai thủy tinh, giấy thấm mẫu, nước cất - Hóa chất: Agar, đường sucrose, NAA, BAP, than hoạt tính III QUY TRÌNH THỰC HIỆN - Chuẩn bị dụng cụ khử trùng - Đĩa petri: người đĩa - Chai, lọthủytinh: người chai (đựng môi trường) - Mỗi nhóm: chai nước khử trùng, xấp giấy, chai thủy tinh - Pha chế môi trường - Môi trường MS1 (dùng để nhân chồi): BA 2mg/l, NAA 0,5mg/l, 8g agar, 20g sucrose PH =5,7- 5,8 - Môi trường MS2 (môi trường tạo sẹo): 2,4D 3mg/l, VTM 0,5mg/l, 8g agar - Môi trường MS3 (môi trường tạo rễ): 0,5mg/l NAA, VTN 0,5mg/l, 2g than hoạt tính, 30g sucrose BÀI 2: VI NHÂN GIỐNG CÂY CẢNH MỤC ĐÍCH Giúp sinh viên học thao tác khử trùng mẫu cấy, cách chọn mẫu cấy thao tác vô mẫu điều kiện vô trùng II VẬT LIỆU – MÔI TRƯỜNG - Mẫu cấy: Chồi hoa cúc kiểng - Dụng cụ: chai thủy tinh vô trùng, giấy vô trùng, đèn cồn, dao cắt, kẹp gắp inox, - Hóa chất: cồn, javen, xà phòng, nước rửa chén,… - Môi trường MS1: BA 2mg/l, NAA 0,5mg/l, 8g agar, 20g sucrose PH =5,7- 5,8 III QUY TRÌNH THỰC HIỆN Chọn chồi từ nhà lưới Cắt bỏ cắt thành đoạn ngắn khoảng 5-7 cm, đoạn có vài chồi bên Rửa vòi nước Ngâm dung dịch xà phòng khoảng 10 phút Rửa lại nước Cho vào chai thêm vào chai cồn 70% lắc 30 giây, sau bỏ cồn Cho javel vài giọt nước rửa chén vào chai lắc 15-20 phút Thực tủ cấy vô trùng, đổ bỏ javel rửa với nước cất (khoảng lần) Lấy mẫu để lên giấy khử trùng 10 Dung dao sắc nhọn cắt mẫu thành đoạn ngằn chứa chồi 11 Cấy vào môi trường MS1 chuẩn bị sẵn 12 Để điều kiện thích hợp, theo dõi ghi nhận kết I KẾT QUẢ Bảng 1: Kết tạo chồi từ vi nhân giống cảnh IV TÊN SV D KẾT QUẢ Mẫu không đạt: mẫu không phát triển thành cây, không bị nhiễm H Q T T Mẫu đạt: Chồi phát triển tốt, mẫu không bị nhiễm Mẫu không đạt: chết, môi trường không nhiễm Mẫu không đạt: Mẫu không phát triển thành cây, không bị nhiễm Mẫu đạt: Chồi phát triển tốt, không bị nhiễm Thảo luận: Kết nhóm chưa tốt, có 2/5 mẫu sống nhiên mẫu bị nhiễm Do trình khử trùng nhóm dài yêu cầu nên mẫu bị giảm sức sống, đồng thời thao tác cấy chưa làm hỏng chồi Cần thực thao tác thí nghiệm cẩn thận để đạt kết tối ưu BÀI 3:TẠO SẸO TỪ PHÔI LÚA I MỤC ĐÍCH Sinh viên nắm thao tác cấy tạo sẹo quan sát cấu trúc sẹo hình thành VẬT LIỆU – MÔI TRƯỜNG - Nguyên liệu: Hạt lúa chưa nảy mầm - Dụng cụ: Đĩa petri vô trùng, bình tam giác, giấy vô trùng, kẹp inox, đèn cồn, tủ vô trùng - Hóa chất: Cồn, Javel, nước rửa chén,… - Môi trường: MS2 (2,4D 3mg/l, VTM 0,5mg/l, 8g agar) III Các bước thực Chọn hạt lúa no, sáng Bóc bỏ vỏ trấu (cẩn thận tránh tổn thương phôi) Cho hạt lúa bóc vỏ trấu vào bình tam giác khử trùng Cho vào cồn 70 lắc 30 giây Đổ bỏ cồn cho vào Javel nguyên chất vài giọt nước rửa chén, lắc nhẹ 15 phút Mang bình vào tủ cấy, đỏ bỏ Javel rửa mẫu với nước cất tiệt trùng lần cấy vào môi trường MS2 đĩa cấy 10-15 hạt Ủ tối theo dõi nhiễm xuất sẹo – tuần II IV KẾT QUẢ Bảng : Kết tạo sẹo từ phôi lúa STT HỌ VÀ TÊN KẾT QUẢ Có tạo sẹo bị nhiễm Có tạo sẹo bị nhiễm Có tạo sẹo bị nhiễm Có tạo sẹo bị nhiễm Có tạo sẹo bị nhiễm Thảo luận: Tất mẫu nhóm bị nhiễm, qua trình khử trùng mẫu nhóm không tốt thao tác cấy mẫu không đảm bảo nguyên tắc vô trùng, trình bịch keo đĩa petri khe hở tạo điều kiện cho vi sinh vật, côn trùng nhỏ xâm nhập vào BÀI 4: CẤY CHUYỀN I MỤC ĐÍCH Biết cách cấy chuyền lần cho mẫu cấy sang môi trường dinh dưỡng phù hợp với mục đích nuôi cấy (tạo chồi, tạo rễ,…) VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP - Mẫu cấy: Mẫu cấy sống - Dụng cụ: Đèn cồn, dao cắt, lọ (hoặc ống nghiệm) đựng môi trường vô trùng, giấy vô trùng, kẹp gắp inox,… - Hóa chất: cồn khử trùng - Môi trường: MS3(0,5mg/l NAA, VTN 0,5mg/l, 2g than hoạt tính, 30g sucrose) III QUY TRÌNH THỰC HIỆN Cho mẫu cấy dụng cụ cần thiết vào tủ vô trùng Mở nắp lọ chứa mẫu cần cấy chuyền, khử trùng miệng lọ dùng kẹp gắp lọ Để mẫu cấy lên giấy vô trùng, cắt bớt úa, rễ già Gắp mẫu cấy cắm vào môi trường MS3 lọ chuẩn bị trước Hơ miệng nắp đậy lọ lửa đèn cồn để khử trùng đậy nắp lại Theo dõi phát triển mẫu cấy tuần liên tiếp II V KẾT QUẢ Bảng 3: Kết sức sống sau tuần cấy chuyền TÊN SV D BAN ĐẦU Cây tốt TUẦN Cây sống phát triển tốt, có nảy sinh thêm chồi Cây sống phát triển tốt Mẫu cấy phát triển bình thường H Cây tốt Q Cây tốt T Cây tốt Cây tốt T Cây tốt Cây yếu TUẦN TUẦN Cây phát triển Cây sống, chồi tốt, chồi lớn dần phát triển, lên số cuối bị héo Cây sống, cao Cây phát triển thêm xanh tốt phát triển bình phát triển thường bình thường bị nhiễm, úa bị nhiễm vàng sống sống xanh Cây phát triển Cây sống, chồi tốt, có nảy thêm chồi phát triễn sống phát triển Cây bị nhiễm nấm Cây chết chết nhiễm nấm Thảo luận: Kết cấy chuyền nhóm tốt, có mẫu bị nhiễm nấm, lại phát triển tốt Do thao tác cấy chuyển không đảm bảo nguyên tắc vô trùng, làm câây chuyển có sức sống Chất dinh dưỡng môi trường giảm dần làm khó phát triển Cần cần thận thao tác để có kết tốt BÀI 5: THUẦN DƯỠNG VÀ CHUYỂN CÂY CON RA VƯỜN ƯƠM MỤC ĐÍCH: I Làm quen với kỹ thuật đưa vườn ươm Học thao tác chuyển cấy vườn ươm Học cách chăm sóc để cấy mô thích nghi có tỉ lệ sống cao phát triển tốt điều kiện tự nhiên VẬT LIỆU – MÔI TRƯỜNG Cây có đầy đủ rể thân Ly nhựa trồng Thau nhựa Bọc nilon Giá thể trồng (đất, xơ dừa, trấu, than,…) III QUY TRÌNH THỰC HIỆN Lấy nhẹ nhàng từ bình nuôi Tách riêng rửa agar bám xung quanh rễ Ngâm nhanh rễ nước chuẩn bị đất.hoặc rửa vòi nước chảy nhẹ Đặt vào giá thể trồng sau đo Trùm kín bọc nilon Để mát Khoảng ngày mở bọc nilon (một cách từ từ) Khoảng 15 ngày sống điều kiện bình thường II -