sàng lọc hoạt tính chống oxi hóa của một số cây thuốc việt nam

B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM K THUT THNH PH H CH MINH BO CO TNG KT TI KHOA HC V CễNG NGH CP TRNG SNG LC HOT TNH CHNG OXI HểA CA MT S CY THUC VIT NAM S K C 0 9 M S: T2010 - 71 S KC 0 Tp H Chớ Minh, 2010 B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM K THUT THNH PH H CH MINH KHOA CễNG NGH HểA HC & THC PHM BO CO TNG KT TI KHOA HC V CễNG NGH CP TRNG SNG LC HOT TNH CHNG OXI HểA CA MT S CY THUC VIT NAM Mó s: T2010- 71 Ch nhim ti: Ths PHAN TH ANH O HCM, 12/2010 TRNG I HC S PHM K THUT THNH PH H CH MINH KHOA CễNG NGH HểA HC & THC PHM BO CO TNG KT TI KHOA HC V CễNG NGH CP TRNG SNG LC HOT TNH CHNG OXI HểA CA MT S CY THUC VIT NAM Mó s: T2010- 71 Ch nhim ti: Phan Th Anh o Thnh viờn ti: Nguyn Th Bch Lờ HCM, 12/2010 DANH SCH NHNG NGI THAM GIA TI TT H v tờn Phan Th Anh o n v cụng tỏc v lnh vc chuyờn mụn B mụn CN Húa hc- Khoa CN Húa hc& Thc phm, H S phm K thut TP HCM Nguyn Th Bch Lờ B mụn CN Húa hc- Khoa CN Húa hc& Thc phm, H S phm K thut TP HCM Ni dung nghiờn cu c giao Ch trỡ Tham gia N V PHI HP CHNH Tờn n v H Khoa hc T nhiờn TP HCM H Dc Ni dung phi hp nghiờn cu Ly trớch cỏc mu cao MeOH Th kh nng c ch quỏ trỡnh peroxyd húa lipid (TBA test) H tờn ngi i din n v Nguyn Xuõn Hi Nguyn Ngc Tiờn LI CM N Xin chõn thnh gi ti TS Nguyn Th Thanh Mai (Khoa Húa, H Khoa hc T nhiờn TP HC), ó dỡu dt, nh hng cho tụi nghiờn cu ny ti hon thnh cũn cú s úng gúp, h tr ca cỏc thy cụ khoa CN Húa Hc & Thc Phm- H S phm k thut HCM, ca cỏc cụ thuc TT Sõm, H Y Dc TP HCM Xin chõn thnh cm n! Ch nhim ti: Phan Th Anh o MC LC Danh sỏch nhng thnh viờn tham gia nghiờn cu ti v n v phi hp chớnh Li cm n Mc lc Danh mc bng biu Danh mc cỏc ch vit tt Thụng tin kt qu nghiờn cu bng ting Vit v ting Anh M u CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Khỏi nim v gc t 1.1.1 Khỏi nim 1.1.2 S hỡnh thnh gc t 1.1.3 bn gc t 1.1.4 H thng gc t sinh hc 1.1.5 Cỏc ngun phỏt sinh gc t c th 1.1.6 Vai trũ ca gc t c th 13 1.2 Cht chng oxi húa 17 1.2.1 Cht chng oxi húa cú bn cht enzym 17 1.2.2 Cht chng oxi húa khụng cú bn cht enzym 18 1.3 Cỏc phng phỏp xỏc nh hot tớnh chng oxi húa 22 1.3.1 Phng phỏp th hot tớnh c ch gc t DPPH 22 1.3.2 Phng phỏp th hot tớnh c ch quỏ trỡnh peroxyd húa lpid (TBA test) 23 CHNG 2: PHNG PHP NGHIấN CU 2.1 Húa cht, dng c, thit b 24 2.1.1 Húa cht 24 2.1.2 Dng c 24 2.1.3 Thit b 24 2.2 Qui trỡnh ly trớch iu ch cao thụ 25 2.2.1 Chun b nguyờn liu 25 2.2.2 Tin hnh ly trớch 25 2.3 Nghiờn cu hot tớnh chng oxi húa 27 2.3.1 Phng phỏp c ch gc t DPPH 27 2.3.2 Phng phỏp th TBA 29 2.3.3 Xỏc nh kh nng chng oxi húa v giỏ tr IC50 31 CHNG 3: KT QU V THO LUN 32 3.1 Kt qu 32 3.1.1 Hiu sut ly trớch cao thụ 32 3.1.2 Kt qu th hot tinh c ch gc t DPPH 33 3.1.3 Kt qu th hot tớnh c ch quỏ trỡnh peroxyd húa lipid 34 3.2 Tho lun 35 3.2.1 Phng phỏp th DPPH 35 3.2.2 Phng phỏp th TBA 35 CHNG 4: KT LUN V KIN NGH 37 4.1 Kt lun 37 4.2 Kin ngh 37 Ti liu tham kho TI LIU THAM KHO [1] Donald Armstrong Oxidants and antioxidants, Ultrastructure and Molecular Biology Protocols Volume 196, (2002) [2] Pramote Mahakunakorn Study on the antioxidant and free radical scavenging activities of a traditional Kampo medicine, Choto san, and its related constituents Lun ỏn tin s (2003) [3] Evgeny T Denisov, Igor B Afanasev Oxidation and antioxidant in Organic chemistry and Biology Taylor and Francis (2005): 835-884 [4] Leo M A Heunks, P N Richard Dekhuijzen Respiratory muscle function and free radicals from cell to COPD Thorax (8/2000), 55: 704-716 [5] Wulf Drửge Free radicals in physiological control of cell function Physical Review (2002): 47-95 [6] Resat Apak, Kubilay Gỹỗlỹ, Mustafa ệzyỹrek, Burcu Bektasoglu, and Mustafa Bener, Cupric Ion Reducing Antioxidant Capacity Assay for Food antioxidants: Vitamins, Polyphenolics, and Flavonoids in Food Extracts, Advanced protocols in oxidative Stress 1, Methods in Molecular Biology, vol 477, 2009 [7] Mensor L L, Menezes F S, Leitao G G, Reis A S, dos Santos T C, Coube C S and Leitao S GS, Sreening of Brazilian plant extracts for antioxidant activity by the use of DPPH free radical method, 127- 130, Phytother Res., Vol 15, 2001 [8] Eva sodergren, Lipid Peroxidation in vivo, Tryck &Medier, Uppsala, Sweden, 2000 [9] Tt Li, Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, NXB Y hc, 2009 [10] Vừ Vn Chi, Cõy thuc An Giang, y ban Khoa Hc K thut An Giang, 1991 DANH MC BNG BIU Hỡnh 1.1 Cỏc ngun ni sinh to gc t c th 12 Bng 1.1 nh hng ca s stress oxy húa lờn cỏc phõn t c th 14 Hỡnh 1.1 Quỏ trỡnh peroxyd húa lipid 15 Hỡnh 1.2 Chc nng ca ROS phn ng dch ca c th 16 Hỡnh 1.4 Nhng hp cht chớnh thuc h Flavonoid 20 Hỡnh 1.5 Phn ng trung hũa gc t DPPH 22 Hỡnh 1.6 Phn ng to phc gia Malonyl dialdehyd (MDA) v acid 23 thiobarbituric (TBA) Bng 2.1 Danh mc 31 cõy thuc An Giang 26 S 2.1 Quỏ trỡnh ly trớch dc liu to cao 27 S 2.2 Quy trỡnh th hot tớnh c ch gc t DPPH 29 S 2.3 Quy trỡnh th TBA trờn nóo chut 30 Bng 3.1 Kt qu cao thụ v hiu sut ly trớch 32 Bng 3.2 Hot tớnh c ch gc t DPPH ca cht i chng dng 33 Trolox nng àM v nng quy i àg/ml Bng 3.3 Hot tớnh c ch gc t DPPH trờn 31 mu dc liu 33 Bng 3.4 Kt qu th TBA ca cht chun Trolox 34 Bng 3.5 Kt qu th TBA ca hai mu cao Lỏ Liu v Huyt Rng 34 Hỡnh 3.1 So sỏnh hot tớnh c ch gc t DPPH ca Trolox v 21 35 mu cú hat tớnh DANH MC CC CH VIT TT DNA Deoxyribonucleic acid DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl LH Lipid cha bóo hũa LOOH Lipid hydroperoxide MDA Malonyldialdehyde TBA Thio barbituric acid TCA Trichloro acetic acid ROS Reactive oxygen species (cỏc dng hot ng ca oxygen) AntH Antioxidant (cht chng oxi húa) CHNG 2: PHNG PHP NGHIấN CU 2.1 HểA CHT, DNG C V THIT B 2.1.1 Húa cht Methanol (TQ, 99,5 %) Ethanol (TQ, 99.7 %) Nc ct ln 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) (Merck) Dimethyl sulfoxide (DMSO) Trolox (Sigma) TBA, TCA (Sigma) 2.1.2 Dng c Becher 1000 mL, 500 mL, 100 mL, 50 mL Bỡnh cu 2000 mL, 1000 mL, 500 mL, 250 mL, 100 mL Bỡnh qu lờ 1000 mL, 500 mL, 250 mL, 100 mL Phu lc thng, ỏp sut kộm Bp un ng nghim v ng nghim cú np a thy tinh Micropipet Fiol 50 ml, 25 ml, 20 ml, 10 ml Tớp nha mL Cuvet thy tinh Bỡnh hỳt m V cỏc dng c thụng thng khỏc nh ng nh git, h bi, 2.1.3 Thit b Cõn k thut, cõn phõn tớch H thng un hon lu H thng cụ quay Mỏy siờu õm Bn iu nhit Mỏy quang ph T sy 24 2.2 QUY TRèNH LY TRCH IU CH CAO THễ 2.2.1 Chun b nguyờn liu Vi mc ớch sng lc tỡm kim cỏc cõy thuc cú hot tớnh chng oxi húa, ti ny chỳng tụi chn ngu nhiờn 31 cõy thuc Vit Nam vi nhiu cụng dng khỏc tin hnh nghiờn cu (c lit kờ bng 1) a im thu hỏi: vựng By Nỳi, huyn Tnh Biờn, tnh An Giang Thi im thu hỏi: ngy 30/08/2009 Cỏc mu dc liu (ó dng khụ) c xay nh dựng lm mu nguyờn liu cho nghiờn cu 2.2.2 Tin hnh ly trớch Cỏc mu dc liu c trớch núng vi methanol Phng phỏp trớch núng c s dng õy l phng phỏp un hon lu Nguyờn liu sau c ng nht mu, xay nh, ta cho vo bỡnh cu c nhỏm, cho dung mụi vo cho ngp mu nguyờn liu, lp ng hon lu c nhỏm vo, gia nhit v hon lu bng nc lnh un hon lu gi k t dung mụi sụi Sau bỡnh cu ngui, ta s lc ly phn dung dch thu c dch trớch, cũn phn bó s c tip tc thờm dung mụi v tin hnh un hon lu, lp li nh trờn thờm ln na Cỏc dung dch trớch sau ln un hon lu s c gụm li v ui dung mụi thu ly cao bng k thut cụ quay chõn khụng, cõn mu cao thụ thu c v tớnh hiu sut trớch 25 Bng 2.1 : Danh mc 31 cõy thuc An Giang [9,10] TấN THNG GI TấN KHOA HC H B PHN DNG Bp Zea mays L Lỳa Rõu Bỡnh Bỏt Bớ Thu du Thõn B Ngút Coccinia Cordifolia (L.) Sauropus Androgynus (L.) Merr Cỏt Li Costus speciosus (Koenig) Smith Mớa dũ C Bc u Kyllinga brevifolia Rottb Cúi Thõn, Ton cõy C Mn Tru Eleusine india (L.) Gaertn.f Lỳa Thõn Eclipta prostrata (L.) L Imperata cylindrica (L.) Beauv Cỳc Thõn Lỳa Cỏnh bm Trỳc o R C Mc C Tranh Dõy Thuc Cỏ Da Cn i Bi inh Lng Hong ng Huyt Rng Kh Qua Lỏ Liu Derris elliptica Benth Catharanthus roseus (L.) G.Don Blumea Balsamifera (L.) DC Tieghemopana-x fruticosus Vig Fibraurea spp Stholobus parviflorus (Roxb.) Momordica charantia L Excoecaria cochinchinensis Lour Cỳc Nhõn sõm Tit dờ Huyt d Thõn TấN THNG GI Mựa Cua TấN KHOA HC Alstonia scholaris (L.) R Br H Trỳc o CễNG DNG Li tiu, thụng mt, viờm ng tit niu Li tiu, viờm ng tiu, khỏng khun Cha sút nhau, ta li, hot huyt, gii c, li tiu Nhón Lng Passiflora foetida L Lc tiờn Nhu Nh Morinda citrifolia L Sn thn, viờm khp Nỳc Nỏc Oroxylum indicum (L.) Vent C phờ Hoa chựm t Li thy, thụng lõm, nhit ễ Rụ H st, nhit, gii c, mỏt gan, li tiu St xut huyt, kit l, thn, tiu mỏu Thanh nhit, tiu mỏu, ho mỏu, hen suyn Rỏng Bay Rỏy Gai Thõn CễNG DNG Thanh nhit, gii c, tiờu thng, ch thng, bỡnh suyn Dõy Ton cõy au khp, nhc mi, tr ễ rụ Ht Ton cõy Thanh can, gii nhit, tiờu c, sỏt trựng, nhun ph Thanh nhit, chng viờm, tiờu m, h khớ, viờm gan Rng dờ C Rỏy Thõn Xoan Sn thn, gi nc Tiờu m, tr suyn, nhit, gii c, tờ thp, gan Lỏ Ton cõy Ton cõy Bnh phi, ty giun, cha gh Thch Hc ng th, huyt ỏp, u x, u nang Cm cỳm, tỏn phong hn, tiờu m, viờm hng, Thiờn Tu Cycas revoluta Thunb Tu Ht Tr thn, th huyt Bu c, c tinh, sỏp i, hot tinh, khớ h Thự Lự Bao Solanum nigrum L C Thõn Tiu ng, st, viờm ph qun cp, gan Lỏ Dng nóo, thuc b Viờm, kit l, tiờu chy, st rột, bnh gan Tụ Mc T Hng Xanh Trc Bỏ Dip Caesalpinia sappan L Ht Cassytha filiformis L Biota orientalis (L.) Endl Vang Long nóo Hong n Trn Bỡ Citrus deliciusae Tenore Cam V Gim au, tỏn , tiờu sng Bnh tim, nhit, li thp, tiờu thng, cha thn h Lng huyt, tr thp nhit, cm mỏu, ho mỏu Cm, b khớ, kin t, lý khớ, tỏo thp, húa m, st rột Dõy Bớ Dõy B mỏu, tiu ng Tiu ng, nhit,b thn, li tiu, nhun trng Liu Thõn Ho mỏu, kinh phong, sn thn, st Lan Thõn Ton cõy An thn, cha mt ng, tim hi hp Melia azedarach L Dendrobium nobile Lindl Thõn Su õu Acanthus ilicifolius L Drynaria quercifolia (L.) J Sm Lasia spinosa (L.) Thwaites B PHN DNG Dõy Lỏ Bi b, tr giun sỏn 26 Quỏ trỡnh ly trớch c trỡnh by theo s sau: Dc liu khụ Xay, ct nh Trớch núng bng MeOH Lc Dch trớch Bó (2 ln) Cao MeOH S 2.1 Quỏ trỡnh ly trớch dc liu to cao Hiu sut quỏ trỡnh ly trớch c tớnh theo cụng thc: H (% ) = 2.3 mcao thụ m mõu cõy khụ ì 100 % NGHIấN CU HOT TNH CHNG OXI HểA 2.3.1 Phng phỏp c ch gc t DPPH 2.3.1.1 Nguyờn tc DPPH l mt gc t bn, dung dch cú mu tớm, bc súng cc i hp thu ti 517 nm Cỏc cht cú kh nng khỏng oxi húa s trung hũa gc DPPH bng cỏch 27 cho hydrogen, lm gim hp thu ti bc súng cc i v mu ca dung dch phn ng s nht dn, chuyn t tớm sang vng nht 2.3.1.2 Chun b húa cht Dung dch DPPH 100 àM: cõn chớnh xỏc 3.94 mg Pha bỡnh nh mc 100 ml bng ethanol c dung dch DPPH 100 àM (dung dch lm vic) - Mu th ti cỏc nng 100, 50, 25, 10 àg/ml i vi nhng mu cú hot tớnh mnh, c ch trờn 50 % nng 10 àg/ml, ta tip tc tin hnh th cỏc nng thp hn: 10, 5, 2, àg/ml cú c s ỏnh giỏ hot tớnh ca nhng mu cao kho sỏt, chỳng tụi s dng Trolox (M= 250 vC) lm cht i chng dng, vỡ õy l cht cú hot tớnh c ch gc t DPPH mnh, c s dng lm cht chun cỏc ti liu tham kho Nng Trolox th lỏ 1, 2, 5, 10 mM 28 2.3.1.3 Quy trỡnh th hot tớnh c ch gc t DPPH V2 L ethanol V1 L mu 1500 L dung dch mu Thờm 1500 L DPPH (100 M) búng ti 30 phỳt Dung dch sau o quang 517 nm S 2.2 Quy trỡnh th hot tớnh c ch gc t DPPH 2.3.2 Phộp th TBA 2.3.2.1 Nguyờn tc Nguyờn tc c bn ca phộp th TBA l phn ng ca MDA v TBA pH thp, nhit cao to phc cú mu, hp thu UV ti bc song cc i l 532 nm, c phỏt hin bi my o quang ph hp thu phõn t 2.3.2.2 Chun b húa cht Mu th ti cỏc nng 2000, 1000, 500, 100 v 10 àg/ml cú c s ỏnh giỏ hot tớnh ca nhng mu cao kho sỏt, chỳng tụi s dng Trolox (M=250 vC) lm cht chun, vỡ õy l cht cú hot tớnh c ch gc t DPPH mnh, c s dng lm cht chun cỏc ti liu tham kho Nng ca Trolox th ti cỏc giỏ tr 1000, 500, 100, 50, 10 àM 29 2.3.2.3 Quy trỡnh th TBA in vivo Chut Tỏch nóo, nghin ng th Phn sut Mu Hn hp Hn hp sau 1000 C, 15 phỳt ml TCA 10% ml TBA 0.8% Hn hp sau phn ng Lm lnh, ly tõm Dch sut o quang ti 532 nm S 2.3 Quy trỡnh th TBA trờn nóo chut 30 2.3.3 Xỏc nh kh nng chng oxi húa v giỏ tr IC50 ắ Kh nng chng oxi hoỏ c tớnh da trờn phn trm c ch (I %): I (%) = Ac - As Ac ì 100 % Vi: Ac: Giỏ tr mt quang ca dung dch khụng cú mu cao (control) As: Giỏ tr mt quang ca dung dch cú cha mu cao (sample) y Mu control: ta thay V1 àL mu cao V2 àL dung dch DPPH y Mu Blank: c chun b tng t mu sample nhng ta thay VDPPH bng Vetanol Mi mu ban u c th nng khỏc nhau: 100, 50, 25, 10 àgmL-1 Mi nng c tin hnh ln, thu c giỏ tr phn trm c ch (I %) Ly trung bỡnh giỏ tr ú ta s xỏc nh c giỏ tr phn trm c ch ng vi tng nng kho sỏt Nu hot tớnh ca mu th khỏ mnh, ta s th tip cỏc nng thp hn 10, 5, 2, àg/ml tỡm giỏ tr IC50 ắ Xỏc nh giỏ tr IC50: IC50 l mt giỏ tr dựng ỏnh giỏ kh nng c ch mnh hay yu ca cỏc mu cao IC50 c nh ngha l nng ca mu m ti ú nú cú th c ch 50 % gc t hoc enzym Mu cú hot tớnh cng cao thỡ giỏ tr IC50 s cng thp ắ Cỏch xỏc nh IC50: Tin hnh kho sỏt hot tớnh ca mu nhiu nng khỏc Vi nhng mu cú hot tớnh bin thiờn tuyn tớnh vi nng , chỳng ta v mt ng thng y = ax + b qua tt c cỏc im (vi y l % c ch v x l nng ) Vi nhng mu cú hot tớnh khụng bin thiờn tuyn tớnh vi nng , mt cỏch gn ỳng, chỳng ta chn nng c ch trờn v di 50 % v cng tin hnh v ng thng y = ax + b Ta s thu c phng trỡnh y = ax + b vi h s a, b ó bit Thay y = 50 % vo phng trỡnh ta s thu c giỏ tr x ú chớnh l nng c ch c 50 % gc t (IC50) 31 CHNG 3: KT QU V THO LUN 3.1 KT QU 3.1 Hiu sut ly trớch cao thụ Bng 3.1 Kt qu cao thụ v hiu sut ly trớch KHI LNG (g) STT CY THUC HIU SUT TRCH (%) Bp (rõu) 3.9 MU CY KHễ 65 Bỡnh Bỏt Dõy 6.1 70 8.7 B Ngút 23.6 100 23.6 Cỏt Li 3.3 90 3.7 C Bc u 5.3 100 5.3 C Mn Tru 2.9 45 6.4 C Mc 6.5 100 6.5 C Tranh 4.8 55 8.7 Dõy Thuc Cỏ 3.5 60 5.8 10 Da Cn 7.5 70 10.7 11 i Bi 9.0 100 9.0 12 inh Lng 4.2 55 7.6 13 Hong ng 8.4 100 8.4 14 Huyt Rng 8.1 100 8.1 15 Kh Qua 3.7 45 8.2 16 Lỏ Liu 6.5 30 21.7 17 Mựa Cua 2.5 120 2.1 18 Nhón Lng 8.2 70 11.7 19 Nhu Nh 2.7 65 4.2 20 Nỳc Nỏc 15.2 100 15.2 21 ễ Rụ 3.9 80 4.9 22 Rỏng Bay 4.5 100 4.5 23 Rỏy Gai 3.4 85 4.0 24 Su õu 1.1 57 1.9 25 Thch Hc 5.2 80 6.5 CAO THễ 6.0 32 26 Thiờn Tu (ht) 3.3 25 13.2 27 Thự Lự Bao 8.2 90 9.1 28 Tụ Mc (ht) 9.7 47 20.6 29 T Hng Xanh 2.1 60 3.5 30 Trc Bỏ Dip 12.0 80 15.0 31 Trn Bỡ 4.2 80 5.2 3.1.2 Kt qu th hot tớnh c ch gc t DPPH a) Th hot tớnh c ch gc t DPPH ca cht i chng dng Bng 3.2 Hot tớnh c ch gc t DPPH ca cht i chng dng Trolox MU 100 àM 50 àM % c ch DPPH 25 àM IC50 (àM) 10 àM àM 4.29 àM Trolox 95.11 0.13 93.52 0.32 90.44 0.61 60.12 0.30 22.33 0.49 (1.07 àg/ml) b) Th hot tớnh c ch gc t DPPH ca cỏc mu cao thụ Khi tin hnh th hot tớnh c ch gc t DPPH trờn 31 mu dc liu, chỳng tụi thu c kt qu nh sau: Bng 3.3 Hot tớnh c ch gc t DPPH trờn 31 mu dc liu STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Mu Huyt Rng Lỏ Liu Dõy Thuc Cỏ Nỳc Nỏc Thch Hc Rỏng Bay C Bc u Nhu Nh ễ Rụ Su õu B Ngút T Hng Trn Bỡ C Mc i Bi R Tranh Hong ng Da Cn Ht Thiờn Tu Cỏt Li Ht Tụ Mc 100 àg/ml 80.11 0.52 80.49 1.03 89.68 0.53 89.11 0.24 89.09 0.49 85.97 0.48 89.42 0.32 88.43 0.39 88.14 0.28 84.38 0.67 76.24 0.71 71.53 0.92 76.42 0.73 80.54 0.51 73.06 1.02 65.95 0.45 62.04 0.92 58.04 0.91 57.21 1.01 52.44 0.75 51.84 0.42 % c ch DPPH 50 àg/ml 25àg/ml 49.03 0.72 18.21 0.32 39.63 0.24 16.34 0.31 75.02 0.87 69.01 0.52 85.53 0.43 68.23 0.1 86.24 0.34 57.54 0.73 83.13 1.11 42.04 0.91 85.31 1.13 33.85 34 76.54 0.32 37.32 0.43 73.23 0.81 34.12 0.91 58.81 0.92 27.61 0.72 47.43 0.82 21.62 0.91 47.21 0.87 15.73 3.16 45.82 1.01 20.74 0.45 42.31 0.52 8.91 0.23 44.22 0.53 21.11 0.92 39.76 0.81 20.67 0.41 31.12 1.03 12.91 1.01 32.72 0.76 12.22 0.61 33.12 0.32 10.54 0.53 31.07 0.71 10.27 0.31 29.06 0.92 12.04 0.72 IC50 (àg/ml) 10 àg/ml 8.52 0.24 6.55 0.12 32.16 0.23 28.21 0.34 23.83 0,54 17.52 0.36 20.84 1.00 17.92 0.45 16.14 0.73 12.71 0.31 9.71 0.23 3.02 0.32 8.61 0.65 2.12 0.32 3.33 0.32 9.14 0.43 4.41 0.21 4.52 0.51 4.83 0.21 5.61 0.43 4.73 0.27 5.21 6.32 17.31 18.23 21.74 29.89 32.78 33.14 35.24 42.91 54.66 55.78 56.89 60.01 60.11 69.63 80.08 84.32 85.12 94.51 96.24 33 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Rỏy Gai Trc Bỏ Dip Bỡnh Bỏt Dõy Nhón Lng C Mn Tru Rõu Bp Kh Qua Mựa Cua inh Lng Thự Lự Bao 50.02 0.93 44.61 0.42 39.63 1.04 37.82 0.84 37.36 1.37 31.52 0.83 31.12 0.54 28.26 1.05 16.92 0.85 16.41 0.52 28.34 0.63 25.82 1.10 21.25 0.42 20.52 0.86 19.81 0.81 15.71 1.03 16.87 0.72 16.02 0.40 9.03 0.51 8.51 0.62 11.17 0.34 9.82 0.91 8.23 0.43 7.88 0.52 7.81 0.36 5.73 0.45 5.71 0.52 4.10 0.31 1.21 0.43 2.71 0.12 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 > 100 3.62 0.33 4.31 0.37 4.31 0.34 1.83 0.31 2.28 0.42 0.83 0.45 2.71 0.31 2.32 0.34 0.33 0.02 0.31 0.07 Cỏc mu c ỏnh du cú hot tớnh mnh, c th cỏc nng thp hn: 10, 5, v àg/ml 3.1.3 Kt qu th TBA a) Kt qu th TBA ca cht chun Bng 3.4 Kt qu th TBA ca cht chun Trolox Mu Trolox 1000 àM 500 àM 77.72 0.21 63.53 0.32 % c ch DPPH 100 àM 50 àM 32.44 0.54 19.91 0.39 IC50 (àM) 10 àM 4.96 0.38 327.23 àM (81.81 àg/ml) b) Kt qu th TBA ca cỏc mu cao thụ Hai mu Lỏ liu v Huyt Rng cú hot tớnh c ch gc t DPPH mnh nht s c th TBA in vivo Thớ nghim nhm ỏnh giỏ kh nng chng oxi húa trờn c th sng ca chỳng, kt qu thu c nh sau: Bng 3.5: Kt qu th TBA ca hai mu cao Lỏ Liu v Huyt Rng Mu Huyt Rng Lỏ Liu % c ch MDA 2000 àg/ml 95.32 0.23 97.68 0.34 1000 àg/ml 500 àg/ml 100 àg/ml 10 àg/ml 93.71 0.32 95.63 0.43 90.94 0.34 95.19 0.27 41.06 0.27 70.41 0.23 9.36 0.21 1.43 0.12 IC50 (àg/ml) 171.69 73.37 34 3.2 THO LUN IC50 3.2.1 Phng phỏp th DPPH 100.0 90.0 80.0 70.0 60.0 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0 IC50: 50- 100 àg/ml IC50: < 50 àg/ml Trolox T r o l o x Tờn cõy Hỡnh 3.1: So sỏnh hot tớnh c ch gc t DPPH ca Trolox v 21 mu cú hat tớnh Nhn xột: Kt qu trỡnh by bng cho thy, s 31 mu dc liu kho sỏt thỡ cú 21 mu cú hot tớnh c ch gc t DPPH Trong ú: mu Huyt Rng v Lỏ Liu cú hot tớnh mnh nht vi giỏ tr IC50 ln lt l 5.21 àg/ml v 6.32 àg/ml mu gm Dõy Thuc Cỏ, Nỳc Nỏc, Thch Hc, Rỏng Bay, C Bc u, Nhu Nh, ễ Rụ v Su õu cú IC50 < 50 àg/ml; 11 mu gm B Ngút, T Hng, Trn Bỡ, C Mc, i Bi, R Tranh, Hong ng, Da Cn, Ht Thiờn Tu, Cỏt Li v Ht Tụ Mc cú IC50 < 100 àg/ml; 10 mu cũn li gm Rỏy Gai, Trc Bỏ Dip, Bỡnh Bỏt Dõy, Nhón Lng, C Mn Tru, Rõu Bp, Kh Qua, Mựa Cua, inh Lng v Thự Lự Bao khụng cú hot tớnh (IC50 > 100 àg/ml) 3.2.2 Phng phỏp th TBA Hai mu Lỏ liu v Huyt Rng cú hot tớnh c ch gc t DPPH mnh nht s c th TBA in vivo Hai mu u cú hot tớnh chng oxi húa cao trờn nóo chut, c bit l mu Lỏ Liu, giỏ tr IC50 ca mu cao Lỏ Liu (73.37àg/ml) cũn cao hn giỏ tr IC50 ca Trolox (81.81 àg/ml) Mc dự ỏnh giỏ hot tớnh chng oxi húa ca mu cao trờn c th sng rt phc tp, ph thuc nhiu yu t nh hng nhng vi vic ỏp 35 dng phộp th TBA cựng vi qui trỡnh th ó c kho sỏt nghiờn cu ca nhúm nghiờn cu thuc TT Sõm, H Dc, kt qu cho chỳng ta nhng ỏnh giỏ tin cy Kt qu nghiờn cu ó ch mt s cõy thuc c bit l Lỏ Liu v Huyt Rng cú hot tớnh chng oxi húa cao, to c s cho cỏc nghiờn cu v cụ lp cỏc hp cht hot tớnh sau ny 36 CHNG 4: KT LUN V KIN NGH 4.1 KT LUN - ti ó sng lc hot tớnh ca 31 mu cao, trớch t 31 cõy thuc thu thp ti vựng By Nỳi An Giang bng phng phỏp th DPPH (in vitro) v phng phỏp th TBA (in vivo) cho mu cú hot tớnh mnh - Mc dự ti mang tớnh cht kho sỏt bc u song ti ó cung cp cỏc s liu ỏng tin cy, gúp phn y mnh cỏc kt qu nghiờn cu v sau Kt qu nghiờn cu ó ch mt s cõy thuc c bit l Lỏ Liu v Huyt Rng cú hot tớnh chng oxi húa cao, to c s cho cỏc nghiờn cu v cụ lp cỏc hp cht hot tớnh sau ny - ti hon thnh ó a nhng cụng b mi m, bc u v hot tớnh chng oxi húa ca cõy thuc trờn qui mụ rng, phng phỏp nghiờn cu cht ch, kt qa nghiờn cu ỏng tin cy 4.2 KIN NGH - ti ny l bc sng lc bc u nhm mc ớch tỡm kim cỏc cõy thuc cú hot tớnh chng oxi húa mnh, phc v cỏc nghiờn cu v sau Cho nờn, cú nhiu hng nghiờn cu mi cú th trin khai t ti ny + Sng lc thờm hot tớnh chng oxi húa ca cỏc dc tho trờn qui mụ ln hn (s lng dc tho nhiu hn), phng phỏp ỏnh giỏ hot tớnh chng oxi húa m rng hn (s dng thờm cỏc phng phỏp ỏnh giỏ mi) + Cỏc mu dc tho cú hot tớnh mnh cú th c s dng lm i tng nghiờn cu cụ lp v nh danh cỏc thnh phn húa hc cú cõy thuc ú 37