Tìm hiểu về HPLC- MS

Tìm hiểu về HPLC- MS

Giảng viên hướng dẫn Nhóm 3

Nguyễn Thị Diệp Chi

• Ưu điểm và nhược điểm

Nội dung báo cáo

HPLC MS

 MS được sử dụng như một đầu dò của HPLC Trong đó:

• HPLC = tách

• MS = nhận biết

Sắc ký cột HPLC

• Được phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển

Giới thiệu HPLC

 Pha động là dung môi mang chất phân tích

 Pha tĩnh là chất rắn dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ

• Ngày càng được sử dụng rộng rãi và phổ biến vì: có độ nhạy cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó bay hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

Detector Column

• UHPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) là 1 tiến bộ đạt được trong kỹ thuật phân tích, là sự cải tiến của HPLC.

Đầu dò phổ khối có 3 nhiệm vụ chính

Chuyển chất cần nghiên cứu thành

thể khí Tạo ra các ion từ các phân tử khí

Phân tách các ion rồi ghi lại tín hiệu

theo tỉ số

Đầu dò phổ khối có 3 nhiệm vụ chính

Chuyển chất cần nghiên cứu thành

thể khí Tạo ra các ion từ các phân tử khí

Phân tách các ion rồi ghi lại tín hiệu

theo tỉ số

Khối phổ (MS)

Lưu ý: Thiết bị khối phổ phải đặt trong điều kiện chân không để tất cả các ion tiến tới detector mà không va chạm vào

các phân tử hay nguyên tử khí khác

Bộ phận phân tích khối

Hệ thống dữ liệu

Sự ion hóa mẫu

• Sự ion hóa là một quá trình phân tử tích điện

• Phân tử tích điện được đo bằng một khối phổ kế

Có hai phương pháp ion hóa

Phương pháp ion hóa cứng (HIS)

Dùng năng lượng lớn để tách phân tử thành nhiều mảnh nhỏ

bền vững.Những mảnh này không có sự phân tách tiếp theo.

Phương pháp ion hóa mềm (SIS)

Sử dụng một năng lượng nhỏ tách phân tử thành những mảnh không bền có thể tiếp tục phân tách

Ion hóa tia điện (ESI)

• Dung dịch rửa giải được phun vào buồng ion với sự hiện diện

của trường tĩnh điện và khí khô nóng

• Khí được đun nóng sẽ làm cho dung môi hóa thành những

giọt hơi

• Nhờ lực đẩy tĩnh điện mà ion được chuyển thành thể khí và đị

vào bộ phân tích khối

• Nhiệt hóa hơi chất lỏng kết quả dung môi khí được ion

hóa bởi sự điện hóa bằng cách các electron thoát ra

Ion hóa hóa học tại áp suất khí quyển (APCI)

• Một đèn UV được đặt vào để phóng điện tạo ra các

photon trong phạm vi hẹp của nguồn năng lượng ion

hóa

• Bộ phân tích sẽ làm cho các ion lệch hướng di chuyển

qua một ống được uốn cong trong từ trường dựa vào

động năng của ion ,các ion được xác định bởi khối

lượng, điện tích và vận tốc

• Từ trường được quét để đo các ion khác nhau này

• Các bộ phân tích khối lượng

• Tứ cực

• Bẩy ion

• Thời gian bay

Bộ phân tích tứ cực

• Một bộ lọc khối tứ cực bao gồm bốn thanh kim loại

• Ứng với một thế DC và AC cho trước, chỉ có các ion có tỷ lệ

tương ứng mới có thể di chuyển đến detector và được nhận

biết Các ion khác sẽ bay ra khỏi quỹ đạo ban đầu của

chúng

•

• Bẩy ion sử dung một để tách các ion theo

• Điện trường trong hộp do các điện cực ion gây ra, các ion có

nhất định sẽ đi vào không gian quỹ đạo

•

Thời gian bay (TOF)

• Các ion được tách ra riêng biệt theo thời gian dựa vào động năng và vận tốc mà không cần sử dung điện trường hay từ trường

• Một dòng điện nhỏ được sản xuất ra khi ion đi qua đầu dò.

• Máy dò khuếch đại các tín hiệu sau đó truyền đến hệ thống dữ liệu được biểu diễn bằng một peak trên phổ khối

• Đồ thị biễu diễn khả năng ion được tách theo tỉ lệ

•

Ví dụ

Mass spectrometry

• Hoocmon kích thích tăng trưởng

• Xác định các loại vitamin

• Phân tích dư lượng các loại thuốc kháng sinh

• Dư lượng thuốc trừ sâu nhóm Carbamate…

• Có thể xác định các hợp chất chưa biết bằng cách dựa vào khối lượng và thành phần của các nguyên tố trong hợp chất đó

• Xác định cấu trúc đồng vị của các nguyên tố trong hợp chất

Ưu điểm

• Độ nhạy cao

• Giới hạn phát hiện cao

• Độ đặc hiệu cao do tính phân mảnh riêng biệt của các ion

• Thời gian phân tích nhanh

• Có thể định lượng đồng thời các chất có thời gian lưu giống nhau mà phương pháp sắc ký lỏng thường không làm được

• Độ phân giải cao

• Những sự không tương thích cơ bản giữa hai loại máy (HPLC-MS)

• Không áo dụng cho những chất không bền nhiệt hoặc không bay hơi

• Giá thành cao

Cảm ơn cô và các bạn đã lắng nghe