Tìm hiểu về HPLC- MS

Tìm hiểu về HPLC- MS

TÌM HI U V HPLC - MS Giảng viên hướng dẫn Nguyễn Thị Diệp Chi Nhóm Nội dung báo cáo TỔNG QUAN VỀ HPLC • Giới thiệu HPLC • Quá trình sắc ký cột HPLC • Giới thiệu UHPLC KHỐI PHỔ • Sự ion hóa • Các phân tích khối lượng • Ứng dụng • Ưu điểm nhược điểm HPLC MS  MS sử dụng đầu dò HPLC Trong đó: • • HPLC = tách MS = nhận biết Giới thiệu HPLC • Được phát triển cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển Sắc ký cột HPLC Giới thiệu HPLC  Pha động dung môi mang chất phân tích  Pha tĩnh chất rắn dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang liên kết hóa học với nhóm chức hữu • Ngày sử dụng rộng rãi phổ biến vì: có độ nhạy cao, khả định lượng tốt, thích hợp tách hợp chất khó bay dễ phân hủy nhiệt Injector Chromatogram Mixer mAU Quá trình sắc ký cột HPLC Pumps Start Injection Column Detector Solvents time Injector Chromatogram Mixer mAU Quá trình sắc ký cột HPLC Pumps Start Injection Column Detector Solvents time Injector Chromatogram Mixer mAU Quá trình sắc ký cột HPLC Pumps Start Injection Column Detector Solvents time Injector Chromatogram Mixer mAU Quá trình sắc ký cột HPLC Pumps Start Injection Column Detector Solvents time Sự ion hóa mẫu • Sự ion hóa trình phân tử tích điện • Phân tử tích điện đo khối phổ kế Có hai phương pháp ion hóa Phương pháp ion hóa cứng (HIS) Phương pháp ion hóa mềm (SIS) Dùng lượng lớn để tách phân tử thành nhiều mảnh nhỏ Sử dụng lượng nhỏ tách phân tử thành mảnh không bền vững.Những mảnh phân tách bền tiếp tục phân tách Các nguồn ion hóa khối phổ Ion hóa tia điện (ESI) • Dung dịch rửa giải phun vào buồng ion với diện trường tĩnh điện khí khô nóng • Khí đun nóng làm cho dung môi hóa thành giọt • Nhờ lực đẩy tĩnh điện mà ion chuyển thành thể khí đị vào phân tích khối Ion hóa hóa học áp suất khí (APCI) • Nhiệt hóa chất lỏng kết dung môi khí ion hóa điện hóa cách electron thoát Ion hóa hóa học áp suất khí (APCI) • Một đèn UV đặt vào để phóng điện tạo photon phạm vi hẹp nguồn lượng ion hóa Các phân tích khối lượng • Bộ phân tích làm cho ion lệch hướng di chuyển qua ống uốn cong từ trường dựa vào động ion ,các ion xác định khối lượng, điện tích vận tốc • Từ trường quét để đo ion khác • Các phân tích khối lượng • Tứ cực • Bẩy ion • Thời gian bay Bộ phân tích tứ cực • Một lọc khối tứ cực bao gồm bốn kim loại • Ứng với DC AC cho trước, có ion có tỷ lệ tương ứng di chuyển đến detector nhận biết Các ion khác bay khỏi quỹ đạo ban đầu chúng Bộ phân tích tứ cực • Bẩy ion sử dung để tách ion theo • Điện trường hộp điện cực ion gây ra, ion có định vào không gian quỹ đạo Thời gian bay (TOF) • Các ion tách riêng biệt theo thời gian dựa vào động vận tốc mà không cần sử dung điện trường hay từ trường Đầu dò ion mẫu • Một dòng điện nhỏ sản xuất ion qua đầu dò • Máy dò khuếch đại tín hiệu sau truyền đến hệ thống liệu biểu diễn peak phổ khối • Đồ thị biễu diễn khả ion tách theo tỉ lệ Ví dụ Mass spectrometry Ứng dụng • Hoocmon kích thích tăng trưởng • Xác định loại vitamin • Phân tích dư lượng loại thuốc kháng sinh • Dư lượng thuốc trừ sâu nhóm Carbamate… • Có thể xác định hợp chất chưa biết cách dựa vào khối lượng thành phần nguyên tố hợp chất • Xác định cấu trúc đồng vị nguyên tố hợp chất Ưu điểm • Độ nhạy cao • Giới hạn phát cao • Độ đặc hiệu cao tính phân mảnh riêng biệt ion • Thời gian phân tích nhanh • Có thể định lượng đồng thời chất có thời gian lưu giống mà phương pháp sắc ký lỏng thường không làm • Độ phân giải cao Nhược điểm • Những không tương thích hai loại máy (HPLC-MS) • Không áo dụng cho chất không bền nhiệt không bay • Giá thành cao Cảm ơn cô bạn lắng nghe [...]... Solvents time Injector Chromatogram Mixer mAU Pumps Start Injection Column Detector Solvents time Giới thiệu UHPLC • UHPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) là 1 tiến bộ đạt được trong kỹ thuật phân tích, là sự cải tiến của HPLC Agilent Waters Thermo So sánh giữa HPLC và UHPLC HPLC UHPLC Kích thướt hạt