Nghiên cứu hiệu lực của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS trong phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên cây lạc.. Nghiên cứu hiệu lực của một số thuốc hóa học và chế
Trang 1TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH
- -
PHAN ANH THẾ
NGHIÊN CỨU NẤM Rhizoctonia solani Kuhn GÂY HẠI
TRÊN CÂY LẠC TẠI NGHI LONG, NGHI LỘC,
NGHỆ AN VỤ XUÂN NĂM 2013
LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP
Chuyên ngành: TRỒNG TRỌT
Nghệ An - 2013
TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH
- -
PHAN ANH THẾ
NGHIÊN CỨU NẤM Rhizoctonia solani Kuhn GÂY
HẠI TRÊN CÂY LẠC TẠI NGHI LONG, NGHI LỘC, NGHỆ AN VỤ XUÂN NĂM 2013
LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP
Chuyên ngành: Trồng trọt
Mã số: 60 62 01 10
Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN NGỌC LÂN
NGHỆ AN, 2013
Trang 2LỜI CAM ĐOAN
Tôi xin cam đoan:
- Luận văn này là sản phẩm nghiên cứu của tôi;
- Số liệu trong luận văn được điều tra, nghiên cứu trung thực và chưa
công bố ở bất cứ công trình nghiên cứu nào khác;
- Các trích dẫn sử dụng trong luận văn đều được dẫn nguồn cụ thể;
- Tôi xin chịu trách nhiệm về nghiên cứu của mình
Tôi xin bày tỏ sự chân thành cảm ơn sâu sắc nhất tới thầy giáo PGS.TS TRẦN NGỌC LÂN, người đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này
Tôi xin trân trọng cảm ơn các thầy, cô giáo trong khoa Nông - Lâm - Ngư, trường Đại học Vinh đã trực tiếp giảng dạy, trang bị những kiến thức bổ ích, những góp ý chân thành giúp tôi trong suốt quá trình học
Tôi xin chân thành cảm ơn tới gia đình, những người thân và bạn bè đã tạo điều kiện về mọi mặt cho tôi trong quá trình thực hiện đề tài này
Một lần nữa tôi xin trân trọng cảm ơn!
Nghệ An, ngày 15 tháng 10 năm 2013
HỌC VIÊN
PHAN ANH THẾ
Trang 3MỤC LỤC
MỞ ĐẦU 1
1 Đặt vấn đề 1
2 Mục đích của đề tài 2
3 Đối tượng, phạm vi và nội dung nghiên cứu 2
3.1 Đối tượng nghiên cứu 2
3.2 Phạm vi và nội dung nghiên cứu 2
- Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 2
- Nghiên cứu đặc điểm bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên lạc 2
- Tiến hành đánh giá khả năng phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn bằng một số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học trên đồng ruộng 3
4 Ý nghĩa của đề tài 3
4.1 Ý nghĩa khoa học 3
4.2 Ý nghĩa thực tiễn 3
CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 4
1.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước 4
1.1.1 Phân bố địa lý và tác hại của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 4
1.1.2 Đặc điểm triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra 5
1.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 6
1.1.4 Phân loại, nhóm tuơng hợp (AG) và phạm vi kí chủ của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 7
Phân loại nấm Rhizoctonia solani Kuhn 7
Nhóm tương hợp và phạm vi ký chủ 7
1.1.5 Biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kunh gây ra 10
1.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 13
1.2.1 Phân bố địa lý và tác hại của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 13
1.2.2 Đặc điểm triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra 14
1.2.3 Đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 15
1.2.4 Phân loại, nhóm tương hợp (AG) và phạm vi ký chủ của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 16
Phân loại 16
Nhóm tương hợp và phổ vi ký chủ 16
1.2.5 Biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kunh gây ra 17
CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19
2.1 Vật liệu nghiên cứu 19
2.1.1 Các mẫu bệnh 19
2.1.2 Các thuốc hoá học và chế phẩm sinh học 19
2.1.3 Các dụng cụ cần thiết 19
2.1.4 Các dụng cụ khác 19
2.1.5 Môi trường nuôi cấy nấm 19
2.1.6 Các loại giống lạc 20
2.1.6.1 Giống lạc L14 20
2.1.6.2 Giống lạc L26 20
2.2 Phương pháp nghiên cứu 21
2.2.1 Phương pháp điều tra 21
2.2.2 Xác định tác nhân gây bệnh 21
2.2.2.1 Mô tả triệu chứng, thu thập mẫu bệnh 21
2.2.2.2 Phương pháp phân lập nấm Rhizoctonia solani Kuhn 22
2.2.2.3 Kỹ thuật cấy truyền nấm tạo nguồn thuần 22
2.2.2.4 Phương pháp giám định nấm Rhizoctonia solani Kuhn 22
2.2.2.5 Phương pháp lây bệnh trở lại để kiểm xác định tác nhân gây bệnh 22
2.2.3 Nghiên cứu đặc điểm hình thái của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 22
2.2.4 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc 23
2.2.4.1 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ trong phòng thí nghiệm 26
2.2.4.2 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ trên đồng ruộng 27
Trang 42.2.5 Một số biện pháp kỹ thuật chăm sóc áp dụng đồng bộ trong các thí nghiệm
theo khuyến cáo của nhà sản xuất giống 28
2.2.6 Chỉ tiêu theo dõi 30
2.2.6.1 Theo dõi trong phòng thí nghiệm 30
2.2.6.2 Theo dõi ngoài đồng ruộng 30
2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu 31
2.3 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 32
2.3.1 Thời gian nghiên cứu 32
2.3.2 Địa điểm nghiên cứu 32
CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33
3.1 Thành phần bệnh hại trên lạc tại Nghi Long, Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 33
3.2 Điều tra diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân 2013 34
3.2.1 Nhận biết triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc ở ngoài đồng ruộng 34
3.2.2 Diễn biến của bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 35
3.2.3 Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc L26 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 36
3.3 Kết quả nghiên cứu về nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên cây lạc tại Nghi Long, Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 38
3.3.1 Triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc 38
3.3.2 Kết quả phân lập và giám định 39
3.3.2.1 Phân loại 39
3.3.2.2 Đặc điểm hình thái, sinh học của sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn 41
3.3.2.3 Một số đặc điểm của hạch nấm Rhizoctonia solani Kunh trên môi trường PGA 43
3.4 Xác định phạm vi ký chủ của nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên cây lạc tại Nghi Long, Nghi Lộc, Nghệ An 44
3.5 Nghiên cứu hiệu lực của một số thuốc hóa học và nấm đối kháng Trichoderma viride Pers trong phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn 46
3.5.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 48
3.6 Nghiên cứu hiệu lực của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS trong phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên cây lạc 50
3.7 Nghiên cứu hiệu lực của một số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học trong phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc 53
3.8 Ảnh hưởng của các biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn đến các yếu tố cấu thành năng suất lạc 55
3.8.1 Ảnh hưởng của thuốc xử lý hạt giống đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 55
3.8.2 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 56
3.9 Đánh giá năng suất của biện pháp xử lý thuốc hóa học, chế phẩm sinh học trong phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên giống lạc L14 58
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60
1 Kết luận 60
2 Kiến nghị 61
TÀI LIỆU THAM KHẢO 62
1.Tài liệu tiếng Việt 62
2 Tài liệu tiếng anh 63
3 Các trang web 65
XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ 66
Trang 5DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT
TT Chữ viết tắt Diễn giải
2 AG Anastomosis groups - Nhóm tương hợp
4 WA Water Agar (loại môi trường nuôi cấy dùng phân lập nấm)
5 PGA Potato Glucose Agar (loại môi trường dùng để cấy truyền)
7 CT (ĐC) Công thức đối chứng trong thí nghiệm
8 TLB % Tỷ lệ bệnh tính bằng phần trăm (%)
9 HLPT % và HL% Hiệu lực phòng trừ, tính bằng phần trăm (%)
10 HLĐK% Hiệu lực đối kháng, tính bằng phần trăm (%)
11 ĐHH% Độ hữu hiệu, tính bằng phần trăm (%)
12 BPGH Bộ phận gây hại
13 MĐPB Mức độ phổ biến ký hiệu bằng: (+) nhỏ hơn 20 %; (++) từ
20 - 40%; (+++ ) lớn hơn 40%
14 NSLT Năng suất lý thuyết tính bằng tạ/ha
15 %ĐC Tỷ lệ phần trăm (%) so với công thức đối chứng
16 P100 quả Trọng lượng khô 100 quả tính bằng gam (ở độ ẩm 13%)
17 P100 hạt Trọng lượng khô 100 hạt tính bằng gam (ở ẩm độ 13%)
19 LSD0,05 Least Significant Difference - Sự khác biệt có ý nghĩa ở 5%
20 CV% coefficient of variation - Hệ số biến động
21 Tv Trichoderma viride Pers
22 Rs Rhizoctonia solani Kuhn
23 Isolate Cô lập - Mẫu nấm đã được làm thuần khi nuôi cấy
24 FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations -
Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp của Liên hiệp quốc
DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU
Bảng 1.1 Phổ ký chủ của Rhizoctonia solani Kuhn 9
Bảng 3.1 Thành phần bệnh hại trên giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 33
Bảng 3.2 Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc
L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 35
Bảng 3.3 Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc
L26 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 37
Bảng 3.4 Phân loại nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên lạc 40 Bảng 3.5 Một số đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
khi nuôi cấy trên môi trường PGA 42
Bảng 3.6 Một số đặc điểm của hạch nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi
Bảng 3.9 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của sợi nấm
Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 49
Bảng 3.10 Hiệu lực của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS ở các nồng
độ khác nhau đối với bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống
lạc L14 52Bảng 3.11 Hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và chế phẩm sinh học phòng
trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên giống lạc L14 53
Bảng 3.12 Ảnh hưởng của thuốc xử lý hạt giống đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 55Bảng 3.13 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 57
Bảng 3.14 Ảnh hưởng của các biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani
Kuhn gây ra đến năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 58
Trang 6DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ
Hình 1.1 Triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên lạc 5
Hình 3.1 Triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 34
Hình 3.2 Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 36
Hình 3.3 Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc L26 tại Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013 37
Hình 3.4 Triệu chứng bệnh do Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc 38
Hình 3.5 Triệu chứng bệnh do Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc 39
Hình 3.6 Hình thái sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên lạc 41
Hình 3.7 Hạch nấm (a) và cấu trúc hạch nấm (b) Rhizoctonia solani Kuhn 43
Hình 3.8 Phạm vi ký chủ của nấm Rhizoctonia solani Kuhn 45
Hình 3.9 Quá trình ức chế của nấm đối kháng Trichoderma viride Pers đối với nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 46
Hình 3.10 Hiệu lực đối kháng của nấm Trichoderma viride Pers đối với nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 48
Hình 3.11 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 49
Hình 3.12 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA 50
Hình 3.13 Thí nghiệm xử lý hạt giống lạc bằng Cruiser plus 312.5FS 51
Hình 3.14 Hiệu lực của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS đối với bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc L14 52
Hình 3.15 Hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và chế phẩm Tricô-ĐHCT phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên giống lạc L14 54
Hình 3.16 Ảnh hưởng của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 56
Hình 3.17 Ảnh hưởng của một số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học đến các yếu tố cấu thành năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 57
Hình 3.18 Ảnh hưởng của các biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra đến năng suất giống lạc L14 tại Nghi Lộc, Nghệ An 59
MỞ ĐẦU
1 Đặt vấn đề
Lạc (Arachis hypogaea L.) là một loại cây trồng cho giá trị kinh tế cao
đã được con người trồng cách đây khoảng 500 năm, song giá trị kinh tế của lạc mới được xác định trong khoảng hơn 140 năm trở lại đây, khi công nghiệp ép dầu lạc được phát triển tại Pháp Hiện nay lạc đứng hàng thứ 2 trong số các cây lấy dầu thực vật về diện tích và sản lượng, sau đậu tương, với diện tích gieo trồng khoảng 20 - 21 triệu ha/năm, sản lượng khoảng 25,5
- 26 triệu tấn Trong đó diện tích lạc tại châu Á, chiếm tới 13,5 triệu ha [4]
Ở nước ta lạc được trồng rải rác khắp cả nước, trên nhiều loại đất và địa hình khác nhau, diện tích trồng là nước ta đặc biệt tăng nhanh trong gần
30 năm trở lại đây, đạt khoảng 246.000 ha với tổng sản lượng 300.600 tấn năm 1994 [4], tính đến tháng 6 năm 2008 tổng sản lượng lạc của Việt Nam đạt khoảng 490.000 tấn (theo ước tính của FAO) đứng thứ 7 thế giới về sản lượng [54] Phần lớn diện tích tập trung ở vùng Bắc Miền Trung với khoảng 97.700 ha, trong đó Nghệ An chiếm 39.500 ha
Hàng năm các vùng trồng lạc trên cả nước luôn phải đối mặt với nhiều dịch hại làm ảnh hưởng tới năng suất, chất lượng như bệnh lở cổ rễ, bệnh héo rũ trắng gốc, bệnh thối gốc mốc đen, bệnh đốm nâu và nhiều loại sâu hại Với tiềm năng và vai trò của cây lạc đối với Việt Nam nói chung và Nghệ An nói riêng, ngoài việc nghiên cứu các biện pháp kỹ thuật gieo trồng thì việc nghiên cứu các loài dịch hại và tìm ra giải pháp quản lý thích hợp là rất quan trọng, nhằm góp phần bảo vệ và tối ưu hóa năng suất, chất lượng lạc
Trong các đối tượng dịch hại chính trên lạc, thì bệnh do nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gây ra là một bệnh nguy hiểm đối với các vùng
trồng lạc trên toàn thế giới [49] Và đến nay các nghiên cứu về giống cây
trồng có thể kháng lại Rhizoctoni solani Kuhn trên các loài cây trồng đã
không thành công [23]
Trang 7Vì vậy việc nghiên cứu chuyên về loài nấm này trên cây lạc là yếu tố
cấp thiết, nhằm tìm ra giải pháp tối ưu nhất để phòng trừ hiệu quả bệnh do
nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Từ thực tiễn sản xuất đòi hỏi trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề
tài: “Nghiên cứu nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên cây lạc tại
Nghi Long, Nghi Lộc, Nghệ An vụ xuân năm 2013”
2 Mục đích của đề tài
Điều tra diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên
lạc, nghiên cứu một số đặc điểm sinh trưởng, phát triển của bệnh và mô tả
triệu chứng vết bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên lạc, tìm hiểu các
biện pháp phòng trừ bệnh hại do nấm Rhizoctonia solani Kuhn bằng một số
loại thuốc hóa học và chế phẩm sinh học đối kháng Trichoderma sp
3 Đối tượng, phạm vi và nội dung nghiên cứu
3.1 Đối tượng nghiên cứu
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh trên cây lạc tại Nghi Lộc, Nghệ An
3.2 Phạm vi và nội dung nghiên cứu
- Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
+ Thu thập, phân lập mẫu nấm bệnh Rhizoctonia solani Kuhn trên cây lạc bị bệnh
+ Giám định nấm bệnh Rhizoctonia solani Kuhn theo nguyên tắc Koch
+ Mô tả đặc điểm hình thái, sinh trưởng và phát triển của nấm Rhizoctonia
solani Kuhn trên môi trường nhân tạo PGA
- Nghiên cứu đặc điểm bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên lạc
+ Sự gây bệnh, đặc điểm nhận biết triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia
solani Kuhn gây ra trên cây lạc
+ Mức độ gây hại của nấm bệnh Rhizoctonia solani Kuhn trên cây lạc
+ Đặc điểm phát sinh, phát triển của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
+ Điều tra diễn biến gây hại của nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên cây lạc vụ
xuân 2013 tại Nghi Lộc, Nghệ An
- Tiến hành đánh giá khả năng phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn bằng một
số thuốc hóa học và chế phẩm sinh học trên đồng ruộng
+ Cơ sở lựa chọn nhóm thuốc và loại thuốc (loại thuốc, nồng độ, liều lượng)
và chế phẩm sinh học thử nghiệm
+ Các công thức thí nghiệm:
+ Hình thức phun: Sử dụng 4 loại thuốc và một loại chế phẩm sinh học + Hình thức xử lý hạt giống: Cruiser plus 3.12FS ở 4 mức xử lý khác nhau + Đánh giá ảnh hưởng của các biện pháp phòng trừ đến các yếu tố cấu thành năng suất, năng suất lý thuyết, năng suất thực tế
4 Ý nghĩa của đề tài 4.1 Ý nghĩa khoa học
- Kết quả nghiên cứu về đặc điểm sinh học, sinh thái học sẽ là nền tảng
cơ sở khoa học về loài nấm Rhizoctonia solani Kuhn phân bố và gây hại trên
cây lạc tại vùng Nghệ An
- Tìm hiểu các biện pháp phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn, đây
chính là cơ sở cho các nghiên cứu về sử dụng một cách hiệu quả các biện pháp hóa học và sinh học trong phòng trừ
4.2 Ý nghĩa thực tiễn
- Việc nghiên cứu thành công của đề tài sẽ tìm ra được các biện pháp phòng trừ thích hợp, giải quyết những những vấn đề cụ thể bệnh hại do nấm
Rhizoctonia solani Kuhn trên cây lạc tại Nghệ An
- Việc ứng dụng thành công chế phẩm nấm đối kháng Trichodecma sp trong phòng trừ nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên cây lạc Nghệ An,
sẽ giúp giảm thiểu tác động của hóa chất đến môi trường, tăng độ an toàn cho nông dân, người sử dụng nông sản, người chăn nuôi gia súc, gia cầm, người nuôi trồng thủy sản
- Biện pháp hóa học là một biện pháp quan trọng trong chương trình IPM, nó chỉ được dùng khi cần thiết, và việc tìm ra các loại thuốc có hiệu
quả cao trong phòng trừ bệnh do Rhizoctonia solani Kuhn cao sẽ giúp giảm
sự lạm dụng thuốc bảo vệ thực vật cho người nông dân
Trang 8CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
1.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước
1.1.1 Phân bố địa lý và tác hại của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Nấm Rhizoctonia solani đã được De Candolle mô tả năm 1815, lúc đầu
được đặt tên là Rhizoctonia crocorum Loài Rhizoctonia solani, là loài nấm hại
nguy hiểm nhất của chi Rhizoctonia ban đầu đã được mô tả bởi Julius Kuhn trên
khoai tây vào năm 1858 ở Châu Âu và danh pháp đầy đủ là Rhizoctonia solani
Kuhn [53]
Kể từ năm 1958, Rhizoctonia solani Kuhn đặc biệt phổ biến ở Texas trong
khu vực lạc đã được phát triển trong nhiều năm Thiệt hại trên toàn tiểu bang trực
tiếp do Rhizoctonia solani Kuhn trên lạc đã được ước tính ở mức 2% cho cả hai
năm 1978 và 1979 cây trồng Đây là một ước tính mất 2.200.000 $ cho vụ mùa
năm 1979 [50]
Theo Inagaki, K (1993) [30], nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên
nhiều loại cây trồng khác nhau và phân bố khắp các quần đảo của Nhật Bản
Ngoài khả năng truyền qua đất, qua tàn dư cây trồng nấm Rhizoctonia solani
Kuhn còn có khả năng truyền qua hạt giống với tỷ lệ 10%, còn ở Mỹ có năm lên
tới 30% (Khetmalat M.B et al., 1984) [34]
Khi nghiên cứu về nấm Rhizoctonia solani Kuhn Van Bruggen A H C và
CTV (1986)[49] nhận thấy bệnh do nấm gây ra tương đối nghiêm trọng đối với
các vùng trồng lạc trên thế giới Ở miền nam nước Mỹ bệnh lở cổ rễ lạc trở thành
một vấn đề cấp bách, hàng năm ở bang Geogia (Mỹ) thiệt hại do bệnh gây ra ước
tính lên tới hơn một tỷ đô la Các nghiên cứu về giống cây trồng có thể kháng lại
Rhizoctoni solani Kuhn trên các loài cây trồng đã không thành công [23] Năm
1989, Vincelli, P C và CTV [50] đã đưa ra kết luận: Bệnh do nấm Rhizoctonia
solani Kuhn gây hại trên lạc xảy ra trên toàn thế giới Nấm gây chết héo cây con,
thối rễ khi cây còn nhỏ, thối củ và cháy toàn bộ là cây Thiệt hại về kinh tế của
bệnh được đánh giá rất khó bởi vì trên cây chúng thường xảy ra kết hợp với các
loại bệnh khác
1.1.2 Đặc điểm triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra
Lạc (Arachis hypogaea L.) là một trong nhiều loài thực vật dễ bị nhiễm Rhizoctonia solani Kuhn Nấm có khả năng lây nhiễm cho tất cả các cơ quan của
cây lạc [28] Những bộ phận nhiễm bệnh có thể được bao phủ một lớp sợi nấm trắng, dần dần sợi nấm phát triển dày đặc, co cụm Nấm lan truyền trên đồng ruộng nhờ nguồn nước, dụng cụ lao động, vết thương cơ giới, tàn dư cây bệnh (Papavizas G và CTV, 1975) [43]
Theo P Subrahmanyam và cộng sự (1980) [42], nấm Rhizoctonia solani
Kuhn xâm nhiễm qua hạt giống hoặc truyền qua đất, và kết quả làm cây chết từ giai đoạn cây con Trong cây con, tổn thương thường được biểu hiện trên hypocotyl (phần mầm hạt phát triển thành gốc sau này) có vết bệnh chìm, màu nâu, kéo dài ở phần dưới mặt đất Tổn thương làm vết bệnh trở thành màu đen và bong vỏ hypocotyl dẫn đến triệu chứng lở cổ rễ điển hình Tổn thương tương tự phát triển lên cả rễ và lan rộng toàn hệ thống gốc cây lạc làm thối rễ và sau đó chết cây Các vết bệnh thường được bao phủ bởi lớp sợi nấm màu nâu sáng, hạch nấm có thể hình thành trên các mô chết
Hình 1.1 Triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên lạc
Trang 91.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Theo Masumoto và CTV (1933) [36], nhiệt độ tối thích đối với sự phát
triển của nấm là 28 - 31 oC, ngưỡng pH tối thiểu là 2, tối thích là 5 - 7 và tối đa là
8 Khi nghiên cứu về đặc điểm sinh lý của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Parmeter JR (1970) [44] cho rằng nhiệt độ có ảnh hưởng lớn đến sự phát triển
nấm Nấm có thể tồn tại trong khoảng nhiệt độ từ 5oC - 42 oC
Takahashi, K và CTV (1954) [46] cho biết hạch nấm có thể tồn tại trong
đất vài tháng, sự tồn tại của hạch nấm dưới các điều kiện khác nhau: ở nhiệt độ
phòng trên đất khô và ẩm chúng sống ít nhất 130 ngày và sau khi ngâm ở độ sâu
khoảng 8 cm trong nước nóng sống được 224 ngày
Theo Papavizas GC và CTV (1975)[43], sợi nấm Rhizoctonia solani
Kuhn khi mới hình thành không màu, khi già có màu nâu đậm Sợi nấm thường
phân nhánh xiên tạo góc 45o- 90o tại vị trí phân nhánh có vách ngăn và hơi thắt
lại Sợi nấm xâm nhiễm vào cây trồng và gây bệnh thuận lợi nhất trong điều kiện
nhiệt độ tương đối cao từ 28oC - 32oC, ẩm độ khoảng trên 80% Ở nhiệt độ thấp
dưới 100C và cao hơn 380C sợi nấm ngừng phát triển Nấm phát triển trong phạm
vi pH khá rộng khoảng từ 4 - 8, thuận lợi nhất là ngưỡng pH từ 7 đến 7,5 [51],
[44]
Tác giả Van Bruggen A H C và CTV (1986) [49] đã xác định: Vách của
sợi nấm có màu trắng tới nâu, chiều rộng của sợi nấm là từ 4 - 5 µm và phân
nhánh ở góc phải Những hạch màu tối được sinh ra nhiều trên bộ phận cây bị
nhiễm bệnh, cấu trúc hạch được hình thành từ sợi nấm và là nguồn bệnh cho vụ
sau
Nguồn nấm tồn tại chủ yếu dưới dạng sợi nấm và hạch nấm Nấm
Rhizoctonia solani Kuhn có thể tồn tại trong đất từ 3 đến 4 năm, khi gặp điều
kiện thuận lợi nấm sẽ nảy mầm hình thành sợi nấm và xâm nhập gây hại cây
trồng ( Ogoshi A., 1987) [41]
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn là loài đa thực, gây hại trên nhiều loài cây
trồng khác nhau Nấm chủ yếu tồn tại dưới dạng sợi và hạch ở trong đất, tàn dư
cây bệnh và cỏ dại Hạch nấm có kích thước trung bình khoảng 6 mm, hạch nấm
khô, không đều, vô định hình và có màu xám Nấm Rhizoctonia solani Kuhn có
thể hình thành bào tử đảm hình con quay nhờ phương thức sinh sản hữu tính Nhưng trường hợp này rất ít gặp trong tự nhiên [41]
Hạch nấm Rhizoctonia solani Kuhn được hình thành nhiều nhất ở ngoài
ánh sáng, sự hình thành hạch thường nhanh chóng do sự giảm nhiệt độ đột ngột Nấm qua đông trong đất dưới dạng sợi nấm hoặc hạch nấm Trong điều kiện đất khô hạch nấm có thể mất sự sống trong sau 21 tháng (Vincelli C và CTV, 1989) [50]
Bệnh lở cổ rễ do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra rất dễ nhầm với
triệu chứng bệnh do nấm Phytopthora hoặc Pythium gây ra Tuy vậy hình dạng
sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn rất đặc trưng, đường kính của sợi nấm từ 8 - 12
m, khi sợi nấm còn non thường không có màu nhưng khi già có màu nâu đậm Sợi nấm con mọc từ sợi nấm bố mẹ thường tạo thành góc 45 o - 90 o so với sợi nấm bố mẹ, tại vị trí phân nhánh thường có vách ngăn và hơi thắt lại
Một số chủng nấm có khả năng hình thành hạch nấm màu nâu xám, vô định hình, kích thước trung bình khoảng 6 mm, chúng hình thành trên mô bệnh đang phân hủy Cũng có những chủng không hình thành hạch nấm, các chủng này khác nhau về phổ ký chủ, đặc tính gây bệnh, yêu cầu nhiệt độ, pH, ẩm độ (Upmanyu S và CTV, 2003) [48]
1.1.4 Phân loại, nhóm tuơng hợp (AG) và phạm vi kí chủ của nấm
Rhizoctonia solani Kuhn
Phân loại nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn thuộc họ Thelephoraceae, lớp nấm đảm
(Basidiomycetes), được xếp vào bộ nấm trơ, nhóm nấm bất toàn
(Deuteromycetes) Giai đoạn hữu tính gọi là Thanatephorus cucumeris thuộc họ
Caratobasidiaceae, bộ Tulasnellales, lớp Hymenomycetes (Sneh, 1994)
Nhóm tương hợp và phạm vi ký chủ
Matsumoto, T và CTV (1932) [36], đã điều tra được hơn 200 nguồn nấm
Trang 10Rhizoctonia solani Kuhn từ 59 loại cây trồng khác nhau và ở các vùng khác nhau
của Nhật Bản Kết quả cho thấy Rhizoctonia solani Kuhn gây hại hầu hết trên các
cây ăn quả, cây rau và cây cảnh, chúng xâm nhiễm và gây hại cả trong vườn
ươm, nhà kính và cả ngoài đồng ruộng
Theo Parmeter JR và CTV (1970) [44], ở Mỹ có khoảng 500 loài thực vật
bị Rhizoctonia solani Kuhn kí sinh và gây hại như: đậu tương, đậu lima, dưa
chuột, đu đủ, ngô, lúa mì , chúng phân bố ở các hoàn đảo ở Mỹ và khắp trên thế
giới
Theo Anderson N.A (1982) [22], phản ứng liên hợp là một sự biểu thị về
sự không tương hợp sinh dưỡng giữa sợi nấm của các mẫu phân lập có quan hệ
với nhau nhưng khác nhau, trong nấm Rhizoctonia solani Kuhn yếu tố di truyền
điều khiển sự không tương hợp sinh dưỡng
Các tác giả Neate SM và CTV (1985), Muyolo NG (1993) [39], đã xác
định Rhizoctonia solani Kuhn là nấm tồn tại trong đất với phạm vi ký chủ rộng,
tổ hợp của các loài nấm này được xác định gồm 12 nhóm gen khác biệt dựa vào
tần suất của bó sợi, nhóm này được đặt tên là Anastomosis groups gọi tắt là AG
Dựa vào sự tương thích về DNA và tương thích về hệ dinh dưỡng người ta còn
phân loại nhỏ nhóm AG nhờ sử dụng phương pháp Zymorgam groupinh (ZG)
Năm 1986 Van Bruggen A H C và CTV [49] đã thông báo nấm
Rhizoctonia solani Kuhn tấn công hàng trăm cây trồng khác nhau như bắp cải,
đậu đỗ, dưa chuột, củ cải đường, cần tây, cà rốt vv
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn là loài nấm đa thực ký sinh trên nhiều loại
thuộc các họ cây trồng và gây thiệt hại đáng kể cho vùng trồng trọt trên toàn thế
giới Theo Carling (1986) [24], nấm Rhizoctonia solani Kuhn được gọi là một
loài nấm phức tạp bởi vì nó bao gồm nhiều nhóm có quan hệ với nhau nhưng
khác di truyền Các nhóm này được nhận biết dựa trên phản ứng liên hợp sợi nấm
và được gọi là các nhóm liên hợp (Anastomosis Group - AG)
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn là một lài nấm phức tạp, không đồng nhất,
bao gồm nhiều nhóm liên hợp có quan hệ với nhau nhưng khác về di truyền
Sneh et al (1991), đã phân chia thành 16 AG, bao gồm AG1 - AG10 [52]
Bảng 1.1 Phổ ký chủ của Rhizoctonia solani Kuhn
1 AG 1-IA Lúa, ngô, các loài thuộc chi cao lương (sorghum),
cây bo bo, đậu tương, cỏ ba lá, cây long não
2 AG 1-IB Lúa, ngô, đậu tương, đậu nành, đậu snap, rau diếp,
cải bắp, cây sung, cây thông…
3 AG 1-IC Lúa mì, đậu nành, cà rốt, củ cải đường, cây lanh,
cây thông…
4 AG 2-1 Họ thập tự, rau diếp, khoai tây, củ cải đường, củ
cải Nhật Bản, củ cải dầu, hạt lúa mì, cỏ ba lá…
5 AG 2-2 IIIB Lúa, cây bắc, gừng, lay ơn, cây ngưu bàng, cỏ,
ngô, củ cải đường, hoa cúc, hạt cây giống…
6 AG 2-2 IVB Củ cải đường, cỏ …
7 AG 3 Khoai tây, cà chua, thuốc lá…
8
AG 4 (HG I, HGII and HGIII
Cà chua, đậu Hà Lan, hành tây, khoai tây, đậu snap…
9 AG 5 Khoai tây, cỏ, đậu nành, củ cải đường, đậu lima…
Trang 11các phân lập Rhizoctonia solani Kuhn và mức độ mẫn cảm của các cây trồng Có
12 phân lập Rhizoctonia solani Kuhn nhận được từ bông đều có thể xâm nhiễm
cây con dưa leo, cải xanh, đậu xanh, cà chua Điều này chỉ ra rằng các phân lập
này không phải là chuyên hóa ký chủ trên bông mà còn gây hại trên nhiều loại
cây trồng khác nhau như: dưa leo, cải xanh, đậu xanh, cà chua
Theo Ogoshi (1987) [41] nấm Rhizoctonia solani Kuhn xâm nhiễm và gây
hại trên 35 bộ, 52 họ, 125 giống, bao gồm 142 loài từ Cycadopsida đến
Monocotyledoneae Năm 1989, ở Mỹ người ta đã tìm thấy được 550 loài cây
trồng là ký chủ của nấm Rhizoctonia solani Kuhn Parmeter JR và CTV (1970)
[44] cho biết nấm Rhizoctonia solani Kuhn có khả năng gây bệnh cho 230 loài
cây trồng thuộc 66 họ thực vật
Theo Mordue JEM và CTV (1989) [38] thì trong số những cây ký chủ mà
nó gây hại gồm có bệnh: thối mục thân và vảy đen trên khoai tây, đồng thời gây
thối trên cây họ hoa thập tự và cỏ ba lá
1.1.5 Biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kunh gây ra
Vấn đề phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra đã được
nhiều tác giả đề cập như: sử dụng thuốc hóa học, dùng chất kháng sinh, sử dụng
biện pháp canh tác, biện pháp sinh học và đặc biệt là dùng biện pháp phòng trừ
tổng hợp
Trong những năm gần đây, việc phòng chống bệnh nấm Rhizoctonia
solani Kuhn gây ra bằng biện pháp sinh học được đẩy mạnh nghiên cứu ở nhiều
nước trên thế giới Phòng trừ bằng biện pháp sinh học trong bệnh cây chủ yếu là
khai thác và sử dụng các vi sinh vật đối kháng Nhiều công trình nghiên cứu về vi
sinh vật đối kháng như: Trichoderma viride Pers, Trichoderma harzianum,
Trichoderma hamatum đã được tiến hành nhằm phát hiện, chọn lọc được các
phân lập có hoạt tính đối kháng cao và sản xuất các chế phẩm sinh học có hiệu
quả phòng trừ bệnh cây ở mức cao, ổn định, có giá trị kinh tế
Neate SM và CTV (1985) cho biết: Một số nguồn nấm đối kháng
Trichoderma koningii phân lập 7a được phân lập từ Australia và nguồn Trichoderma
pseudokoningii được phân lập từ đất kiềm ở Avon (miền nam Australia) có khả năng phòng trừ bệnh thối rễ do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây lên Họ cho
rằng việc sử dụng biện pháp sinh học để điều khiển bệnh lở cổ rễ cà thúc đẩy sự phát triển của cây con trên một số cây trồng sẽ có lợi cho sự thay thế việc sử dụng thuốc hóa học để điều khiển bệnh
Để có thể sử dụng chế phẩm Trichoderma sp trong bệnh hại cây trồng
cần phải tạo ra được một lượng lớn sinh khối nấm Các nước khác nhau sử dụng
nguồn chất liệu khác nhau để làm môi trường nhân nấm Trichoderma sp Ở Pháp
dùng yến mạch và agar, ở Mỹ dùng cám, than bùn hoặc cám và mạt cưa, ở Đài
Loan dùng vỏ trấu để làm môi trường nhân nuôi nấm Trichoderma sp (Neate
SM, Warcup JH (1985)
Theo Kataria H.R và CTV (1986) [31], nấm Trichoderma sp là một loại
nấm tồn tại trong đất, chúng là những tác nhân sinh học có khả năng kiểm soát
nấm Rhizoctonia solani Kuhn hại trên cây trồng Bên cạnh đó họ còn có những thí nghiệm cho thấy có một số nguồn nấm Trichoderma sp có thể cộng hưởng có
lợi cho sự phát triển của cây trồng, chúng giúp cho cây trồng này mầm nhanh, tăng số lượng chùm hoa, làm tăng trọng lượng và chiều cao của cây so với những
cây không xử lý Các nguồn Trichoderma sp được cung cấp ở ba dạng: dạng
viên, dạng hạt nhỏ và dạng chất rắn để cải tạo đất Tuy nhiên hiệu quả của nó còn
phụ thuộc vào nhiều yếu tố như: chất lượng nguồn Trichoderma sp., mật độ bào
tử, công thức và phương pháp bón, thời gian bón, điều kiện môi trường vv."
Sử dụng nấm đối kháng Trichoderma sp đối với nấm gây hại cây trồng
có từ đầu thập niên 30 Người đầu tiên đề xuất vấn đề này là Wending (Mordue
JEM và CTV (1989)[38] Gần đây việc nghiên cứu nấm Trichoderma sp và sản
xuất chế phẩm của nó được nhiều nhà nghiên cứu khoa học trên thế giới tiến hành và công bố
Theo Mordue JEM và CTV (1989) [38], nấm đối kháng Trichoderma sp
không những là một tác nhân sinh học trong phòng trừ các bệnh hại cây trồng có nguồn gốc trong đất mà chúng còn có tác dụng kích thích cây trồng phát triển
Trang 12Cơ chế tác động này có thể là do nấm Trichoderma sp ức chế các nấm thứ yếu
trong vùng rễ, sản sinh ra các hoocmon thực vật, các vitamin hoặc biến đổi thành
các dạng dễ tiêu cho cây trồng
Trên thế giới nhiều nước đã sử dụng chế phẩm Trichoderma theo nhiều
phương pháp khác nhau như: xử lý hạt giống, bón vào đất, phun lên cây hay
nhúng rễ cây vào dung dịch bào tử nấm
Theo Vincelli, P.C và CTV (1989) [50], một vài giống lạc kháng với
nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên cây con và củ đã được nghiên cứu,
nhưng hiện nay giống kháng vẫn chưa được thương mại hóa Một số thuốc hóa
học được sử dụng để phòng trừ bệnh trên củ và cây con như: Benomyl, Carboxin
và một số sản phẩm kết hợp của Thiram, Dicloran, vv
Năm 1990, Khara S.H [33] và CTV đã tiến hành thí nghiệm tính đối
kháng của Trichoderma sp với nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên các giống cà
chua khác nhau Kết quả cho thấy chỉ có nấm Trichoderma konigii và
Trichoderma pseudokoningii có biểu hiện tính đối kháng cao nhất
Hạt giống đậu tương khi được xử lý bằng chế phẩm Trichoderma sp cho
hiệu lực cao phòng chống một số nấm bệnh có nguồn gốc trong đất như:
Rhizoctonia solani Kuhn, Sclerotinium roflsii (Muyolo NG và CTV, 1993) [39]
Bón vào đất là một phương pháp chủ yếu để sử dụng chế phẩm nấm
Trichoderma sp Nấm Trichoderma harzianum nhân trên môi trường cám lúa mỳ
đem bón vào đất để bảo vệ cây cải ở giai đoạn cây con không bị chết héo do nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gây ra, hiệu lực kéo dài trong 5 tuần [39]
Những kết quả trong phòng thí nghiệm, trong nhà lưới, ngoài đồng
ruộng về hiệu lực đối kháng của nấm Trichoderma sp rất có triển vọng trong
việc phòng trừ bệnh hại cây trồng và bảo vệ môi trường sinh thái là vô cùng quan
trọng [37]
Harman GE và CTV (2004) [29] đưa ra một số biện pháp sau: xử lý hạt
giống với thuốc đã được khuyến cáo, trồng cây con trong đất đã được khử trùng, giữ
cây sinh trưởng tốt tránh cho cây không bị tổn thương, đảm bảo tàn dư cây trồng
được phân hủy hết trước khi đem trồng lại trên diện tích cũ, sử dụng một số thuốc hóa hóa có tính đặc hiệu cao với nấm
Bên cạnh biện pháp phòng trừ nấm bệnh bằng biện pháp sinh học cũng
có những biện pháp đã được áp dụng và đem lại hiệu quả khá rõ rệt Luân canh với các cây trồng ít bị bệnh như lúa nước để hạn chế nguồn bệnh và cải tạo đất Thu dọn tàn dư cây trồng sau thu hoạch Cày lật đất sâu để vùi lấp hạch nấm làm giảm sức nảy mầm và khả năng lây nhiễm của bệnh
Bón phân hợp lý: bón phân NPK đầy đủ, cân đối để cây sinh trưởng mạnh tăng cường sức chống bệnh, đặc biệt ở các vùng đất bạc màu cần bón vôi nhiều, dùng phân chuồng hoai mục để bón
Biện pháp hóa học để phòng trừ bệnh lở cổ rễ thường có hiệu quả thấp vì nấm bệnh tồn tại chủ yếu trong đất, xâm nhiễm gây hại ở bộ phận rễ, cổ rễ
1.2 Tình hình nghiên cứu trong nước
1.2.1 Phân bố địa lý và tác hại của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Bệnh lở cổ rễ xuất hiện và gây hại trên cà chua ở giai đoạn cây con vùng
Hà Nội và phụ cận vụ đông xuân và hè thu (Nguyễn Văn Viên,1999) [13] Bệnh
lở cổ rễ phát sinh gây hại nặng cho các cây trồng cạn tại vùng Hà Nội và phụ cận, đối với các vùng bệnh thường xuyên gây hại nặng cần phải có các biện pháp phòng chống trước khi gieo trồng (Đỗ Tấn Dũng, 2000) [5]
Theo Nguyễn Kim Vân và CTV (2002) [12] ở Việt Nam, nấm Rhizoctonia solani Kuhn có thể gây hại cho cây trồng quanh năm và đặc biệt gây hại nặng
vào vụ xuân Kết quả cũng cho thấy trên ruộng bắp cải bị bệnh thối bắp rất nặng
ở 3 tỉnh Bắc Ninh, Hà Tây ( nay là Hà Nội ), Thái Nguyên và các tác giả đã giám
định chính xác tác nhân gây bệnh là do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra
Tỉ lệ bệnh do nấm bệnh gây ra trên cây bắp cải ở vụ xuân vào giai đoạn chuẩn bị thu hoạch dao động từ 9% - 99% ở các vùng trồng rau xung quanh Hà
Nội Như vậy nấm Rhizoctonia solani Kuhn đều có thể phát triển và gây bệnh
trên đồng ruộng ở hầu hết các thời vụ trồng bắp cải ở các tỉnh phía Bắc nước ta,
kể cả vụ cải bắp chịu nhiệt vụ hè thu và vụ đông chính vụ
Trang 13Phân bố của các chủng nấm Rhizoctonia solani Kuhn ở một số tỉnh trồng
cải bắp khác nhau thuộc phía Bắc Việt Nam như Hà Nội, Bắc Ninh, Bắc Giang, Hà
Tây, Thái Nguyên cho thấy các chủng nấm Rhizoctonia solani Kuhn ở các vùng địa
lý khác nhau thì có đặc điểm phát triển khác nhau
Theo kết quả nghiên cứu của Đỗ Tấn Dũng (2005 - 2006) [6], tác hại chủ yếu
của bệnh do Rhizoctinia solani Kuhn gây ra trên một số cây trồng cạn là gây nên
hiện tượng lở cổ rễ, chết cây con và làm ảnh hưởng không nhỏ đến sinh trưởng phát
triển của cây và đến năng suất, đặc biệt là cây con ở giai đoạn vườn ươm và giai
đoạn mới gieo trồng ở ruộng sản xuất
Kết quả cũng cho biết trong giai đoạn 2005 - 2006 tại vùng Hà Nội, tỷ lệ
bệnh lở cổ rễ do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc tăng dần từ 7 - 35
ngày sau gieo, với tỷ lệ bệnh các thời điểm sau gieo 7 ngày là 0%, 14 ngày là 0,27%,
21ngày là 1,56%, 28 ngày là 3,25%, 35 ngày là 4,55%
1.2.2 Đặc điểm triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra
Triệu chứng điển hình của bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên
cà chua là rễ cây con thối nhũn, thâm đen, teo thắt lại (Đỗ Tấn Dũng, 2001) [5]
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn thường gây bệnh ở phần rễ, thân sát mặt đất,
triệu chứng thường gặp là thối rễ, teo thắt thân Sự xâm nhiễm của nấm bắt đầu từ
hạch nấm, nguồn hạch nấm có thể từ đất, tàn dư cây trồng hay hạt hoặc củ giống bị
bệnh Kết quả của quá trình xâm nhiễm làm cho mô cây bệnh chuyển màu nâu hoặc
thối và cây bị đổ rạp xuống Trong điều kiện thích hợp, triệu chứng bệnh có thể xuất
hiện từ 37 ngày sau khi diễn ra quá trình xâm nhiễm (Lester W và CTV, 2001) [11]
Cũng theo Lester W Burgess và cộng sự trên cây lạc, bệnh lở cổ rễ do nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gây ra, bệnh gây thối hạt, làm chết cây con, thối lá mầm,
thối rễ, tia củ và gây cháy lá Sợi nấm có màu nâu trắng đến nấu sẫm, có vách ngăn
và phân cành vuông góc Hạch nấm dẹt, khi non có màu trắng sau đó chuyển sang
màu nâu nhạt rồi nâu đậm [11]
Theo Vũ Triệu Mân và CTV (2007) [21], trên đậu đỗ, bệnh lở cổ rễ do nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gây ra, bệnh hại vào thời kỳ cây con mới mọc gây héo
và chết cây con Vết bệnh lúc đẩu chỉ là một chấm nhỏ, màu đen ở phần gốc sau
đó lan nhanh bao bọc xung quanh cổ rễ làm cổ rễ khô tóp lại, cây gục xuống và chết nhưng thân lá vẫn còn xanh Trên vết bệnh có lớp nấm màu trắng xám Vết bệnh thối mục, có màu nâu đen ủng và lan nhanh khi gặp trời mưa
Theo Đào Hằng Trang (2007) [3], bệnh lở cổ rễ do nấm Rhizoctonia solani
Kuhn gây ra Biểu hiện của bệnh là thắt cổ rễ, thối rễ, thối chân, phần thân sát mặt đất thối mềm Nấm có khả năng xâm nhiễm trên thân, cành, lá, khi tiếp xúc với đất
ẩm ướt và điều kiện khí hậu nóng ẩm Triệu chứng thay đổi tuỳ thuộc vào thời kỳ xâm nhiễm
1.2.3 Đặc điểm hình thái, sinh học của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Nấm Rhizoctonia solani Kuhn phát triển thuận lợi ở 28oC - 32oC, nhiệt độ dưới 10oC và cao hơn 38oC thì nấm ngừng sinh trưởng Nấm hình thành hạch nhiều
ở nhiệt độ 30o - 32oC (Đường Hồng Dật, 1973) [7]
Ở giai đoạn vô tính, nấm phát triển ở dạng sợi, tạo hạch Sợi nấm khi còn non không màu, khi già chuyển sang màu nâu do sự tích lũy sắc tố nâu (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998) [20]
Những nghiên cứu của Đỗ Tấn Dũng (2001) [5] trên cây cà chua cũng cho
thấy nấm Rhizoctonia solani Kuhn là loài nấm đa thực, bán hoại sinh điển hình, phát
triển thuận lợi ở điều kiện nhiệt độ 25oC - 30oC, ẩm độ trên 80% Tản nấm phát triển ban đầu có màu trắng đục, về sau chuyển sang màu nâu sẫm Sợi nấm có đặc điểm mọc rất mịn ép sát bề mặt môi trường nuôi cấy, sợi nấm đa bào phân nhánh nhiều, ở chỗ phân nhánh sợi nấm hơi thắt lại, sát đó có vách ngăn, phân nhành gần như vuông góc Hạch nấm khi còn non có màu trắng, khi già có mầu nâu, thô
Trong điều kiện ngoại cảnh thuận lợi thì nấm Rhizoctonia solani Kuhn có thể
hình thành hạch non sau 3 - 4 ngày và hạch già sau 5 - 7 ngày nuôi cấy Số lượng hạch nấm hình thành không nhiều, kích thước hạch nấm rất nhỏ, riêng phân lậps của
nấm Rhizoctonia solani Kuhn hại cây đậu tương thì không thấy hình thành hạch trên môi trường nhân tạo Nấm Rhizoctonia solani Kuhn làm đổi màu môi trường nuôi
cấy từ màu trắng đục sang màu nâu - nâu sẫm [6]
Trang 14Sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn đa bào, phân nhánh tương đối thẳng góc,
chỗ phân nhánh hơi thắt nhỏ, giáp ngay đó có một màng ngăn kích thước từ
8-13m Sợi nấm trong mô lúc đầu không màu, sau có màu nâu vàng Hạch nấm
hình dạng không đều, bề mặt thô, màu nâu đỏ [10]
1.2.4 Phân loại, nhóm tương hợp (AG) và phạm vi ký chủ của nấm Rhizoctonia
solani Kuhn
Phân loại
Theo Nguyễn Văn Viên (2005), nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra,
thuộc bộ nấm trơ Mecelia sterilia, lớp nấm bất toàn Fungi imperfecti, nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gồm nhiều chủng, có phạm vi kí chủ rộng
Nhóm tương hợp và phổ vi ký chủ
Trong vòng 4 năm từ 1979 - 1982 tác giả Hà Minh Trung và CTV điều tra
nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên đồng ruộng đã phát hiện thấy nấm Rhizoctonia
solani Kuhn hại trên 19 loại cây trồng khác nhau trong đó có 2 loại cây phân
xanh (Azla sp., Sesbania sp.), 13 loại cỏ dại và 4 loại cây trồng là ngô, cao lương,
đậu tương và lúa Cũng trong khoảng thời gian đó 1977 - 1980, Viện Bảo vệ thực
vật đã tiến hành điều tra phạm vi kí chủ của nấm này kết quả cho thấy nấm
Rhizoctonia solani Kuhn gây hại trên nhiều loại cây trồng khác nhau như: đậu
tương, dưa chuột, khoai tây, ngô (Báo cáo khoa học của Viện Bảo vệ thực vật
1979 - 1980) [8]
Năm 2008, Từ Thị Mỹ Thuận [16] thu thập 69 mẫu Rhizoctonia solani
Kuhn từ nhiều vùng địa lý khác nhau của nước ta và đã được xác định thuộc hai
nhóm AG: AG1 và AG4 trong đó nhóm AG1 chiếm ưu thế 87% hơn so với các
mẫu phân lập AG4 Kết quả nghiên cứu còn cho thấy có sự khác biệt về đặc điểm
tản nấm của các mẫu phân lập thuộc nhóm AG1-IA, AG1-ID, cà AG4-HG-I Các
mẫu này đều có thể xâm nhiễm gây bệnh cho các cây con cải xanh, đậu xanh, đậu
lành, đậu phộng, cà chua, dưa leo, xà lách, bông vải và ngô nhưng với các mức
độ khác nhau
1.2.5 Biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kunh gây ra
Tại Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, nấm đối kháng Trichoderma viride Pers đã được bộ môn bệnh cây và nông dược phân lập và bắt đầu nghiên
cứu năm 1996 Theo Lê Lương Tề và CTV [10], các mẫu phân lập của nấm
Trichoderma viride Pers có hoạt tính đối kháng mạnh đối với một số nấm đất Nấm đối kháng Trichoderma viride Pers đã được nghiên cứu các chỉ tiêu sinh học gồm các khâu kỹ thuật sau: Nuôi cấy giống nấm Trichoderma viride Pers
thuần trên môi trường PGA, nhân giống trên môi trường giá thể, nghiền bột thu nhận bào tử, pha trộn chất phụ gia thành dạng bột mịn, đóng gói bảo quản, sử dụng Lượng bào tử/1g chế phẩm là 5x109 bào tử/g
Theo Trần Thị Thuần (1998) [17], (2000) [18], dịch nuôi cấy của nấm
Trichoderma viride Pers ức chế hoàn toàn sự phát triển của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Trong 6 chủng nấm nghiên cứu thì có 4 chủng nấm có khả năng hình thành hạch nấm trên môi trường là chủng BC-GL50, R1342, LG100 và BN17b, 4 chủng này đều gây thối bắp cây trưởng thành, 2 chủng SP#4 và TN002 là không hình thành hạch, 1 chủng gây thối bắp và chủng kia gây lở cổ rễ ở giai đoạn cây con Dùng các thuốc hóa học Mexyl MZ, Topsin, Validamycin và Rovaral để phòng trừ bệnh lở cổ rễ trên cải bắp Kết quả đạt được với độ hiện hữu từ 67,53% đến 90% [12]
Khi tiến hành khảo sát hiệu lực của nấm đối kháng Trichoderma viride Pers với các phân lập nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh lở cổ rễ trên môi trường nhân tạo PGA, tác giả cho biết thêm loài nấm đối kháng Trichoderma viride Pers có mặt trước nấm gây bệnh thì bản thân nó có khả năng chiếm chỗ, cạnh tranh và ức chế và tiêu diệt nấm Rhizoctonia solani Kuhn Nấm Trichoderma viride Pers phát triển thuận lợi ở nhiệt độ 25oC - 300C, pH từ 6 - 7 [6]
Kết quả còn cho thấy chế phẩm sinh học nấm đối kháng Trichoderma viride Pers có khả năng phòng trừ bệnh lở cổ rễ hại cà chua, dưa chuột ở mức khá
cao, tuy nhiên hiệu lực phòng trừ của nấm đối kháng với bệnh cũng khác nhau tùy thuộc vào phương pháp xử lý phòng trừ bệnh Khi xử lý hạt cà chua, dưa chuột bằng
Trang 15nấm đối kháng Trichoderma viride Pers thì hiệu lực phòng trừ bệnh lở cổ rễ hại cà
chua đạt 85,9% và bệnh lở cổ rễ hại dưa chuột đạt 77,8% Nhưng khi nấm đối kháng
có mặt cùng hoặc sau nấm bệnh lở cổ rễ thì hiệu lực phòng trừ bệnh thấp hơn [6]
Phòng trừ bệnh chủ yếu là áp dụng biện pháp tiêu diệt nguồn bệnh ở
trong đất và quản lý kỹ thuật trồng trọt thâm canh hợp lý Khi thu hoạch xong
phải tiến hành cày sâu để vùi lấp hạch nấm, gieo trồng đúng thời vụ, bón phân
đúng tỷ lệ tránh bón tập trung đạm đón đòng, nên kết hợp với kali hoặc tro bếp
để tăng cường tính chống chịu cho cây Hệ thống tưới tiêu phải chủ động được
nguồn nước tránh để mức nước quá cao trong trường hợp bệnh đang lây lan
mạnh
Đối với những vùng thường xuyên bị gây hại nặng thì có thể tiến hành
xử lý hạt giống trước khi gieo trồng bằng các thuốc hóa học như Anvil 5SC,
đồng thời kết hợp với xử lý đất bằng một số thuốc xông hơi như Benomyl,
Carbixin, Agrosa… sẽ hạn chế được nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây hại vùng
rễ [8]
Nấm Trichoderma viride Pers có hiệu quả phòng trừ khá cao đối với
bệnh lở cổ rễ, bệnh chết rạp cây con, bệnh khô vằn do nấm Rhizoctonia solani
Kuhn gây ra Sử dụng nấm đối kháng Trichoderma viride Pers có thể làm giảm
mức độ bị bệnh của cây từ 50% - 70% tùy theo điều kiện mùa vụ
Phương pháp sử dụng nấm đối kháng Trichoderma viride Pers gồm
nhiều cách như: bón vào đất trước khi gieo trồng, phun vào gốc cây, hoặc xử lý
hạt giống Ngoài tác dụng hạn chế nấm bệnh, nấm Trichoderma viride Pers còn
thúc đẩy nhanh sự phân giải xác thực vật và các chất hữu cơ trong đất, tăng
cường các chất dinh dưỡng dưới dạng dễ hấp thụ Do đó tạo điều kiện cho cây
trồng phát triển tốt và cho năng suất cao hơn [10]
Từ những nghiên cứu của các tác giả trong và ngoài nước, chúng tôi
nhận thấy nấm Rhizoctonia solani Kuhn là một loại nấm gây hại cho rất nhiều
loại thuộc các họ cây trồng khác nhau và gây thiệt hại nặng cho sản xuất nông
nghiệp Vì vậy nghiên cứu về nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây bệnh lở cổ rễ là
một vấn đề cấp bách và có ý nghĩa thực tế
CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Các mẫu bệnh
Các mẫu bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên cây lạc tại
2.1.5 Môi trường nuôi cấy nấm
+ PGA (Potato - Glucose - Agar) Khoai tây: 200 gam Glucose: 20 gam Agar: 20 gam
+ Phương pháp điều chế: chọn những củ khoai tây sạch không bị nhiễm
bệnh, gọt vỏ và rửa sạch cân lấy 200 g Sau đó cắt thành lát mỏng cho vào nồi nhôm
đã rửa sạch, tiếp đó cho 1000 ml nước cất vào và cho lên bếp đun, cho sôi khoảng
Trang 1630 phút Lọc lấy phần nước dịch khoai tây vào bình tam giác và cho thêm nước cất
vừa đủ 1000 ml, cho lên bếp đun, vừa đun vừa cho từ từ 20g glucose, 20g agar vào
khuấy đều cho tới khi môi trường sôi thì ngừng đun và sau đó đổ môi trường vào
bình tam giác, bịt kín miệng bình bằng giấy bạc, hấp khử trùng ở 121oC (1.5atm)
trong 30 - 45 phút Hấp xong để nguội đến 55oC, rồi đổ vào đĩa petri Có thể bảo
quản môi trường trong tủ lạnh
Môi trường PGA là môi trường giàu dinh dưỡng, dùng để cấy truyền đỉnh
sinh trưởng và nghiên cứu khả năng sinh trưởng của nấm
+ WA (Water Agar): Agar: 20 gam; Nước cất: 1000 ml
2.1.6 Các loại giống lạc
2.1.6.1 Giống lạc L14
Giống lạc L14 được chọn lọc theo phương pháp chọn lọc quần thể từ dòng lạc
QĐ5 từ tập đoàn lạc nhập nội của Trung Quốc Giống được công nhận chính thức là
giống TBKT theo Quyết định số 5310/BNN-KHKT ngày 29 tháng 11 năm 2002
L14 cho năng suất cao và có nhiều đặc điểm nông học tốt Giống thuộc dạng
hình thực vật Spanish, thân đứng, tán gọn, chống đổ tốt, lá màu xanh đậm
Thời gian sinh trưởng: 120 - 135 ngày (vụ xuân); 90 - 110 ngày (vụ thu và
thu đông) Chiều cao thân chính 30 - 50 cm, quả to, eo nông, có gân quả nông, vỏ
lụa màu hồng, khối lượng 100 quả 155 - 165 g, khối lượng 100 hạt 60 - 65g, tỷ lệ
nhân/quả 72% - 75% Năng suất 45 - 60 tạ/ha
2.1.6.2 Giống lạc L26
Giống lạc L26 được chọn ra từ tổ hợp lai giữa giống L08 và TQ6 theo phương
pháp phả hệ (theo mục tiêu chất lượng phục vụ xuất khẩu) Giống được công nhận
cho sản xuất thử theo Quyết định số 233/QĐ-TT-CCN, ngày 14 tháng 7 năm 2010
Thời gian sinh trưởng: vụ xuân 120 - 125 ngày, vụ thu đông 95 - 100 ngày
Giống lạc L26 thuộc dạng hình thực vật Spanish, lá dạng hình trứng thuôn dài, màu
xanh đậm, thân chính cao (40 - 45cm), quả to (165 - 185g/100 quả), gân trên quả rõ,
mỏ quả trung bình-rõ, tỷ lệ nhân đạt 73 - 75%, hạt to (75 - 85g/100 hạt), vỏ lụa màu
hồng cánh sen và không bị nứt vỏ hạt Năng suất đạt 45 -54 tạ/ha
2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp điều tra
- Chọn địa điểm điều tra: Chọn điểm điều tra ở một ruộng cố định tại
huyện Nghi Lộc, Nghệ An
- Thời gian điều tra: Định kì 7 ngày 1 lần từ tháng 2 đến tháng 6/2013
- Phương pháp điều tra: Áp dụng phương pháp điều tra của tiêu chuẩn
Việt Nam - QCVN 01-38/BNNPTNT [1] Điều tra 10 điểm ngẫu nhiên nằm trên đường chéo của khu vực điều tra, mỗi điểm điều tra 10 cây ngẫu nhiên Quan sát trên đồng ruộng, thu thập mẫu cây bị bệnh và kiểm tra mẫu trong phòng
- Tính toán và xử lý số liệu theo công thức
Tỷ lệ bệnh (TLB) được tính theo công thức: TLB (%) = A/B x 100 Trong đó: A là số cây bị bệnh;
B là tổng số cây điều tra
2.2.2 Xác định tác nhân gây bệnh
Xác định tác nhân gây bệnh theo nguyên tắc Koch
Mô tả triệu chứng biểu hiện ở cây trồng Phân lập vi sinh vật có thể là tác nhân gây bệnh, các mẫu giống nhau được phân lập từ các cây có triệu chứng giống nhau Dùng mẫu sạch đã làm thuần lây lên cây khỏe mạnh Quan sát các triệu chứng biểu hiện ở các cây đã được lây bệnh, các triệu chứng phải giống như đã quan sát ban đầu trên cây trồng bị bệnh Phân lập lại tác nhân gây bệnh
từ các bộ phân cây mới bị bệnh, mẫu phải giống như mẫu đã cấy ban đầu
2.2.2.1 Mô tả triệu chứng, thu thập mẫu bệnh
Dựa vào các kết quả nghiên cứu đã công bố trong và ngoài nước, với các
triệu chứng điển hình của nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc Chọn
ruộng lạc đang ở giai đoạn cây con, quan sát và thu thập những cây có triệu chứng điển hình tiến hành điều tra, thu thập mẫu và bước đầu mô tả các triệu chứng mẫu thu thập được Tất cả những mẫu thu thập được đều ghi rõ tên mẫu cây trồng, ngày điều tra và địa điểm thu mẫu
Trang 172.2.2.2 Phương pháp phân lập nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Sau khi thu thập mẫu điển hình từ đồng ruộng, chúng tôi tiến hành rửa
sạch mẫu bệnh, sau đó rửa lại bằng nước cất vô trùng, làm khô bằng giấy thấm
vô trùng Cắt mô bệnh ở phần giáp ranh giữa mô bệnh và mô khỏe đường kính
1-2 mm Sau đó dùng que cấy đã khử trùng cấy mô bệnh vào môi trường WA để ở
điều kiện nhiệt độ khoảng 25oC - 30 oC Sau khi sợi nấm mọc cách mô bệnh 1 - 2
cm, tiến hành kiểm tra dưới kính hiển vi để xác định nấm gây bệnh và cấy truyền
sang môi trường PGA khoảng 2 - 3 lần để tạo nấm thuần và giữ nguồn
2.2.2.3 Kỹ thuật cấy truyền nấm tạo nguồn thuần
Chọn đĩa petri có nguồn nấm, tiến hành khử trùng đột (đường kính đột 5
mm) và que cấy được đốt trên ngọn lửa đèn cồn Dùng đột đã khử trùng cắt phần
đầu sinh trưởng của sợi nấm, sau đó dùng que cấy đã khử trùng lấy phần vừa đột
đặt chính giữa vào hộp lồng Petri đã đổ môi trường Cấy thuần nhằm tạo nguồn
nấm thuần để tiến hành các thí nghiệm trong phòng và tạo nguồn nấm bệnh cho
thí nghiệm giám định
2.2.2.4 Phương pháp giám định nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Để giám định nấm Rhizoctonia solani Kuhn, tiến hành dùng kính hiển vi
để xác định nấm gây bệnh dựa vào đặc điểm hình thái và tiếp tục tiến hành lây
bệnh nhân tạo nhằm xác định chính xác nguyên nhân gây bệnh (theo Khetmalas
M.B et al, 1984) [34]
2.2.2.5 Phương pháp lây bệnh trở lại để kiểm xác định tác nhân gây bệnh
Đất trồng được khử trùng trước khi gieo bằng việc hấp ở nhiệt độ 135oC
Sau đó đặt các miếng thạch nhỏ cắt từ đĩa petri đã phân lập vòng quanh hạt
giống, cách khoảng 1cm, rồi phủ đất kín hạt và miếng thạch, tiến hành tưới ẩm
sau khi gieo Với chậu đối chứng cũng sử dụng đất đã khử trùng và gieo bình
thường nhưng không xử lý nấm bệnh
2.2.3 Nghiên cứu đặc điểm hình thái của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
Sau khi phân lập được các phân lậps nấm Rhizoctonia solani, tiến hành
cấy truyền các phân lậps nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường nhân tạo
ở cùng một ngưỡng nhiệt độ, sau đó tiến hành theo dõi và mô tả các đặc điểm hình thái của sợi nấm và hạch nấm: Màu sắc tản nấm, đặc điểm mọc, mật độ sợi, tốc độ mọc, phân nhánh, kích thước tế bào, hình dạng hạch, màu sắc hạch non, màu sắc hạch già, phân bố hạch trên môi trường, vị trí hình thạch hạch, ngày hình
thành hạch sau cấy, kích thước hạch, cấu trúc hạch nấm Rhizoctonia solani
Kuhn
2.2.4 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn
gây ra trên cây lạc
Tiến hành tìm hiểu biện pháp phòng trừ bệnh do nấm Rhizoctonia solani
Kuhn gây ra trên cây lạc theo hai biện pháp, biện pháp sinh học và biện pháp hóa
học Biện pháp sinh học sử dụng nấm đối kháng Trichodecma viride Pers trên
môi trường PGA trong phòng thí nghiệm và chế phẩm Tricô-ĐHCT trên đồng ruộng Biện pháp hóa học sử dụng một số loại thuốc bảo vệ thực vật thông dụng
và một số thuốc mới
Cơ sở khoa học chung
Tất cả các thuốc hoá học và chế phẩm sinh học sử dụng, nằm trong danh mục được phép sử dụng tại Việt Nam ban hành theo thông tư số 21/2013/TT-BNNPTNT của Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn
Trong đó chúng tôi lựa chọn các sản phẩm người dân thường sử dụng (Validacin 3DD) và các sản phẩm mới hoặc người dân chưa sử dụng nhiều (Nevo 330EC, Amistar Top 325SC, Anvil 5SC) Ngoài ra chúng tôi cũng thử nghiệm giải pháp xử lý hạt giống (Cruiser plus 312,5FS), đây là biện pháp không mới với
thế giới, nhưng đang mới mẻ ở Việt Nam
Để giảm thiểu tối đa các tác động của thuốc hoá học bảo vệ thực vật với sức khoẻ con người, môi trường, chất lượng nông sản, chúng tôi cũng tiến hành
thử nghiệm chế phẩm sinh học nấm Trichodecma của Đại học Cần Thơ
(Tricô-ĐHCT), để đánh giá tính hiệu quả thực tiến của chế phẩm sinh học trên đồng ruộng
Trang 18Các cơ sở lựa chọn các hoạt chất dựa theo các công bố của TCVN
8381:2010 do Cục Bảo vệ thực vật biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông
thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa
học và Công nghệ công bố Liều lượng sử dụng theo khuyến cáo của các nhà sản
xuất, cung ứng sản phẩm
Đặc tính hóa học và cơ chế tác động của các thành phần hoạt chất trong
các sản phẩm mà chúng tôi sử dụng như sau:
Cyproconazole (Nevo 330EC): Kìm hãm quá trình loại metyl của steroit
Thuốc trừ nấm nội hấp có tác dụng phòng và trừ bệnh Thấm nhanh vào trong
cây và di chuyển hướng ngọn Trừ được nhiều loại bệnh: Mycosphaerella,
Mycena, Sclerotinia, Rhizoctonia
Propiconazole (Nevo 330EC): Thuốc trừ nấm nội hấp phun lan lá, dịch
chuyển hướng ngọn, có tác dụng phòng và trừ nhiều loại bệnh như Sclerotinia
homeocarpa, Rhizoctonia solani, đốm lá Helminthosporium sp trên bắp và trên
nhiều cây trồng khác
Haxaconazole (Anvil 5SC): Thuốc trừ nấm nội hấp có tác dụng phòng v
trừ bệnh Dùng trừ nhiều loại nấm thuộc lớp nấm túi và nấm đảm Liều dùng rất
khác nhau (từ 20 - 100 g a.i/ha) tuỳ thuộc vào cây trồng
Difenoconazole (Amistar Top 32SC, Cruiser plus 312,5FS: Thuốc trừ nấm
nội hấp có tác dụng bảo vệ và diệt trừ Thẩm thấu qua lá và vận chuyển mạnh
trong các bộ phận cây vận chuyển hướng ngọn Thuốc được dùng để phun lan lá
và xử lý đất để bảo vệ nhiều cây trồng Thuốc chống lại được nhiều loại bệnh
thuộc lớp nấm đảm, nấm túi
Validamicin (Validacin 3DD): Thuốc kháng sinh không nội hấp có tác
dụng khuẩn tĩnh Thuốc được dùng trừ bệnh Rhizoctonia solani Kuhn hại lúa,
ngô, rau , thuốc lá, bông mía và các cây trồng khác Thuốc được phun lan lá, xử
lý đất, xử lý hạt
Azoxystrobin (Amistar Top 32SC): Thuộc nhóm Strobilurin, tác động
Ngăn cản sự tạo vách tế bào nấm bệnh, chặn đứng quá trình tạo năng lượng
Azoxystrobin là chất diệt nấm phổ rộng, chống lại bốn nhóm chính của nấm gây bệnh thực vật bao gồm Ascomcetes (nấm túi), Basidiomycetes (nấm đảm),
Deutoromycetes (nấm bất toàn) và Oomycetes (nấm trứng) Nó ức chế sự nảy mầm bào tử và sự phát triển sợi nấm
Fludioxonil là một hợp chất tổng hợp của nhóm phenylpyrrole Nó có thể được sử dụng để kiểm soát bệnh do nấm, xử lý hạt giống hữu ích cũng như xử lý sau thu hoạch cho trái cây Fludioxonil là một loại thuốc diệt nấm phổ rộng Phương thức hoạt động fludioxonil là ức chế phosphoryl hóa, ngăn chặn tổng hợp glycerol
Chế phẩm nấm Tricodecma (Chế phẩm Tricô-ĐHCT): Nấm Trichoderma
là nhóm vi sinh vật đất gồm nhiều loài có ích đã được nghiên cứu và sử dụng rộng rải trong trồng trọt ở nhiều quốc gia Là loài nấm phân bố rộng rải trên nhiều vùng địa lý, sinh thái khác nhau, có nhiều tác động trên hệ sinh vật, thảm thực vật đất và đất trồng do đặc điểm là loài nấm đối kháng với các loài sinh vật
gây hại quan trọng như Fusarium, Rhizoctonia, Phytophthora, Pythium…
Cơ sở khoa học của thuốc xử lý hạt giống
Từ năm 1985 công ty Ciba của Thụy Sĩ đã bắt đầu nghiên cứu chương trình cho nhóm Neonicotinoid Năm 1991 lần đầu tiên tổng hợp được thiamethoxam Năm 1992 họ được cấp bằng sáng chế Năm 1996 Cruiser là tên nhãn hiệu của thiamethoxam Năm 1997 thiamethoxam được thương mại hóa ở Newzealand Năm 2000 được mở rộng ra 49 quốc gia trên thế giới Năm 2001 được sử dụng trên đậu tương ở Brazil Năm 2002 nó được sử dụng cho nhiều cây trồng trên thế giới Năm 2003 có 65 nước sử dụng Cruiser plus cho xử lý hạt giống
Năm 2004 Cruiser plus 312.5FS được đăng ký ở Việt Nam Năm 2008 một hội nghị quốc tế về Cruiser plus được tổ chức tại Lucerm Thụy Sĩ Năm
2009 hội nghị toàn cầu về Cruiser plus tổ chức tại Braxil Năm 2010 có 120 loài
Trang 19cây trồng trên 82 quốc gia đăng ký sử dụng Cruiser Năm 2011 hội nghị quốc tế
về Cruiser plus 312.5FS được tổ chức tại thành phố Hồ Chí Minh, Việt Nam
Thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus 312.5FS là loại thuốc được dùng để xử
lý và phòng trừ sâu và bệnh, được đăng ký sử dụng ở Việt Nam từ năm 2004, với
thành phần hoạt chất bao gồm: thiamethoxam 262.5g/l, difenoconazole 25g/l,
Fludioxonil 25g/l
Trong đó hoạt chất thiamethoxam là hoạt chất có tiêu diệt côn trùng,
difenoconazole là hoạt chất thuốc nhóm triazole phòng trừ được nhiều loài nấm
thuộc lớp nấm đảm, nấm túi
Fludioxonil là một hợp chất tổng hợp của nhóm phenylpyrrole Nó có thể
được sử dụng để kiểm soát bệnh do nấm, xử lý hạt giống hữu ích cũng như xử lý
sau thu hoạch cho trái cây Fludioxonil là một loại thuốc diệt nấm phổ rộng
Phương thức hoạt động fludioxonil là ức chế phosphoryl hóa, ngăn chặn tổng
hợp glycerol
Khi kết hợp thiamethoxam với fludioxonil thì thiamethoxam cũng hoạt
động như một chất phòng trừ nấm phổ rộng
2.2.4.1 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ trong phòng thí nghiệm
- Biện pháp sinh học: Khảo sát hiệu lực đối kháng của nấm Trichoderma
viride Pers đối với nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA Áp dụng
phương pháp của Dhingram, O.D (1994) Mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 1
đĩa petri Theo dõi màu sắc và đo kích thước tản nấm sau 24, 48, 72, 96 … giờ
+ Công thức 1.0: Cấy nấm đối kháng Trichoderma viride Pers cùng thời
điểm với nấm Rhizoctonia solani Kuhn
+ Công thức 2.0: Cấy nấm đối kháng Trichoderma viride Pers trước
Rhizoctonia solani Kuhn 1 ngày
+ Công thức 3.0: Cấy nấm đối kháng Trichoderma viride Pers sau
Rhizoctonia solani Kuhn 1 ngày
+ Công thức 4.0 (đối chứng): Cấy riêng rẽ nấm Trichoderma viride Pers và nấm Rhizoctonia solani Kuhn
- Biện pháp hóa học
Tiến hành khảo sát ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển
của sợi nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA Thí nghiệm được
tiến hành theo 5 công thức, 5 lần nhắc lại, mỗi lần 1 đĩa petri, theo dõi và đánh giá sau 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ
+ CT1.1: Anvil 5SC 0,2% + CT3.1: Nevo 330EC 0,1% + CT2.1: Amistar Top 325SC 0,1% + CT4.1: Validacin 3DD 0,15% + CT6.1 Không xử lý thuốc (Đ/C)
2.2.4.2 Tìm hiểu biện pháp phòng trừ trên đồng ruộng
Thí nghiệm 1: Thí nghiệm có 6 công thức (CT) và 3 lần nhắc lại
+ CT1.1: Anvil 5SC 0,2% + CT4.1: Validacin 3DD 0,15% + CT2.1: Amistar Top 325SC 0,1% + CT5.1: Tricô-ĐHCT 0,4% + CT3.1: Nevo 330EC 0,1% + CT6.1 Không xử lý thuốc (ĐC)
- Phương pháp tiến hành: Thí nghiệm được bố trí theo khối ngẫu nhiên
hoàn chỉnh, mỗi công thức 3 lần nhắc lại, xử lý bằng cách phun khi bệnh chớm xuất hiện Tiến hành theo dõi vào các kỳ điều tra sau đó 7, 14, 21 ngày
- Sơ đồ thí nghiệm
Dải bảo vệ CT1.1 CT2.1 CT3.1 CT4.1 CT5.1 CT6.1
CT2.1 CT3.1 CT4.1 CT5.1 CT6.1 CT1.1
CT3.1 CT4.1 CT5.1 CT6.1 CT1.1 CT2.1
Dải bảo vệ
Trang 20Thí nghiệm 2: Tìm hiểu hiệu lực của thuốc xử lý hạt giống Cruiser plus
312.5FS đến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc Thí nghiệm
được tiến hành với 4 mức liều lượng xử lý khác nhau:
+ CT1.2 Xử lý hạt giống bằng thuốc Cruiser plus 312.5FS với liều 0,25ml/1Kg
+ CT2.2 Xử lý hạt giống bằng thuốc Cruiser plus 312.5FS với liều 0,5ml/1Kg
+ CT3.2 Xử lý hạt giống bằng thuốc Cruiser plus 312.5FS với liều 1ml/1Kg
+ CT4.2 Xử lý hạt giống bằng thuốc Cruiser plus 312.5FS với liều 2ml/1Kg
+ CT5.2 Không xử lý hạt giống (đối chứng)
- Phương pháp tiến hành: Thí nghiệm được bố trí theo khối ngẫu nhiên
hoàn chỉnh, mỗi công thức 3 lần nhắc lại, xử lý bằng cách ngâm hạt giống lạc
trong nước có pha thuốc Cruiser plus 312.5FS với lượng nước vừa đủ ngập hạt
giống 4 - 5 giờ sau đó đưa đi gieo Tiến hành theo dõi vào các kỳ điều tra sau đó
2.2.5 Một số biện pháp kỹ thuật chăm sóc áp dụng đồng bộ trong các thí
nghiệm theo khuyến cáo của nhà sản xuất giống
- Làm đất: Cày sâu, bừa nhỏ tơi xốp và nhặt sạch cỏ dại trước khi rạch hàng
- Chọn giống: Trước khi gieo trồng phải thử lại sức nảy mầm Giống đạt
tiêu chuẩn tốt phải đạt sức nảy mầm trên 85%
Vôi bột bón lót 1/2 trước khi rạch hàng, 1/2 còn lại bón vào lúc vun gốc
Toàn bộ lượngphân hoá học được trộn đều và bón vào hàng đã rạch sẵn (hàng rạch sâu 10-15 cm), phân chuồng bón sau cùng Sau khi bón phân lấp đất dày 2-3
cm để hạt gieo không bị tiếp xúc vào phân
- Kích thước luống:
+ Đất ruộng dễ bị ngập úng hoặc có thể chủ động tưới khi hạn cần lên
luống rộng 80 -85 cm (cả rãnh), luống cao 20 - 25 cm, đảm bảo mặt luống rộng 50 - 55cm được chia thành 2 hàng dọc theo chiều dài luống
+ Đất bãi ven sông có thể gieo thành từng băng hoặc lên luống rộng 1,3
m (cả rãnh), luống cao 15 - 20 cm, đảm bảo mặt luống rộng 1,0 m được chia thành 4 hàng dọc theo chiều dài luống
+ Đất đồi trồng theo đường đồng mức để tránh rửa trôi đất , kích thứơc luống tương tự như đất bãi
+ Nếu che phủ nilon, kích thức luống và mật độ gieo phải tuân thủ theo qui trình hướng dẫn nếu không sẽ không phù hợp với kích cỡ nilon đã sản xuất Thường nilon hiện này chúng tôi khuyến cao và thấy thuận lợi trong thao tác và đạt hiệu quả sản xuất cao là sử dụng loại nilon có đường kính ống rộng
60 cm cho mặt luống rộng 1m và đường kính ống 35 cm cho mặt luống rộng
50 - 55 cm độ dày nilon từ 0,007 - 0,01mm (đảm bảo 1kg nilon có thể che phủ được 100 m2)
Trang 21- Lượng giống cần cho 1 ha:Nếu hạt có tỷ lệ nảy mầm đạt trên 85% thì lượng
giống cần 220 kg/ha (giống vụ xuân) và 170 kg (giống vụ thu hoặc thu đông)
- Mật độ và khoảng cách gieo: Khoảng cách hàng cách hàng 25 cm, hốc
cách hốc 10 cm gieo 1 hạt/hốc, hoặc hốc cách hốc 20 cm gieo 2 hạt/hốc, đảm bảo
mật độ 35 - 40 cây/m2 Khi gieo hạt phải đủ ẩm, hạt được phủ sâu 3 - 5 cm
- Chăm sóc:
+ Xới phá váng khi cây có 2 - 3 lá thật (sau mọc 10 - 12 ngày) Xới cỏ lần
2 khi cây có 7 - 8 lá thật, xới sâu 5 - 6 cm sát gốc, không vun gốc Xới cỏ lần 3
kết hợp vun gốc sau khi hoa rộ 7 - 10 ngày
+ Tưới nước: Nếu thời tiết khô hạn phải tưới vào 2 thời kỳ chính, trước
khi hoa (cây có 7 - 8 lá) và thời kỳ làm quả Tưới vào rãnh ngập 2/3 luống, để
nước ngấm đều rồi tháo cạn
- Thu hoạch và bảo quản:Thu hoạch khi quả trên cây đã già Sau khi nhổ,
vặt quả, rửa sạch, phơi dưới nắng nhẹ đến khi vỏ lụa tróc ra là được Phơi và bảo
quản lạc giống: nhất thiết phải phơi trên nong nia, cót, sân đất (không phơi trực
tiếp trên sân gạch, xi măng) Sau khi phơi phải để nguội sau đó cho vào bao nilon
hoặc chum vại đậy kín để nơi khô mát
2.2.6 Chỉ tiêu theo dõi
2.2.6.1 Theo dõi trong phòng thí nghiệm
- Màu sắc tản nấm, đặc điểm mọc, mật độ sợi, tốc độ mọc, phân nhánh
- Hình dạng hạch nấm, màu sắc hạch non, màu sắc hạch già, phân bố hạch
trên môi trường, vị trí hình thành hạch, ngày hình thành hạch sau khi cấy, kích
thước hạch, cấu trúc hạch nấm
- Hiệu lực phòng trừ của của thuốc hóa học và nấm đối kháng Trichoderma
viride Pers đối với nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên môi trường PGA
2.2.6.2 Theo dõi ngoài đồng ruộng
- Triệu chứng bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn trên lạc
- Diễn biến bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc tại Nghi
Long, Nghi Lộc, Nghệ An
- Hiệu lực phòng trừ của thuốc hóa học và chế phẩm sinh học đối với
bệnh do nấm Rhizoctonia solani Kuhn gây ra trên lạc tại Nghi Long, Nghi Lộc,
Trong đó:
A là số cây bị bệnh
B là tổng số cây điều tra
- Hiệu lực trong phòng thí nghiệm, đối với thí nghiệm về nấm đối kháng gọi là hiệu lực đối kháng (HLĐK%), đối với thí nghiệm xác định ảnh hưởng của một số thuốc hóa học đến sự phát triển của sợi nấm gọi là độ hữu hiệu (ĐHH%) được tính theo công thức Abbott:
HLĐK (hoặc ĐHH)% = 100
C T C