Khảo sát thành phần hóa học rễ cây chùm ruột (phyllanthus acidus (l) ) skeels, họ euphorbiaceae

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC RỄ CÂY CHÙM RUỘT (PHYLLANTHUS ACIDUS (L).) SKEELS, HỌ EUPHORBIACEAE GVHD: TS Bùi Xuân Hào ThS Lê Thị Thu Hương SVTH : Nguyễn Thị Hoài Khanh MSSV: K38.201.049 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC RỄ CÂY CHÙM RUỘT (PHYLLANTHUS ACIDUS (L).) SKEELS, HỌ EUPHORBIACEAE GVHD: TS Bùi Xuân Hào ThS Lê Thị Thu Hương SVTH : Nguyễn Thị Hồi Khanh MSSV: K38.201.049 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 Ý KIẾN HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Thầy Bùi Xuân Hào, Cô Lê Thị Thu Hương Thầy Dương Thúc Huy tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tận tình, định hướng truyền đạt kiến thức chuyên môn kinh nghiệm cần thiết suốt q trình thực hồn thành tốt khóa luận Q Thầy Cơ mơn Hóa, khoa Hóa – Đại học Sư Phạm thành phố Hồ Chí Minh, thầy hết lịng hướng dẫn, giảng dạy truyền đạt cho em kiến thức khoa học quý báu suốt thời gian em học trường, tạo tảng cho em bước vào nghiệp sau tương lai thời gian em thực khóa luận tốt nghiệp Gia đình đồng hành hỗ trợ em suốt trình học tập, thực nghiên cứu hồn thành luận văn tốt nghiệp trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh Đặc biệt xin cảm ơn mẹ chia sẻ, động viên, tin tưởng chỗ dựa tinh thần để hoàn thành tốt khóa luận Cuối em xin cảm ơn tất bạn phịng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên trường Đại học Sư Phạm thành phố Hồ Chí Minh tận tình trao đổi kinh nghiệm, đồn kết, gắn bó tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực đề tài -i- MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU iv LỜI MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY CHÙM RUỘT PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Mô tả thực vật 1.1.4 Công dụng chùm ruột y học cổ truyền 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHÙM RUỘT PHYLLANTHUS ACIDUS 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY CHÙM RUỘT PHYLLANTHUS ACIDUS 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY CHÙM RUỘT PHYLLANTHUS ACIDUS TRONG NƯỚC CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Hóa chất 2.1.2 Thiết bị 2.2 LY TRÍCH VÀ CƠ LẬP CÁC HỢP CHẤT 2.2.1 Khảo sát nguyên liệu 2.2.2 Điều chế loại cao 2.2.3 Cô lập hợp chất hữu cao hexane CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC HỢP CHẤT T1 -ii- 13 13 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC HỢP CHẤT T3 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 14 16 4.1 KẾT LUẬN 16 4.2 KIẾN NGHỊ 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO 17 PHỤ LỤC 20 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ac Acetone AcOH Acetic Acid C Chloroform d Doublet dd Doublet of doublets DMSO Dimethyl sulfoxide EA Ethyl acetate H n-Hexane m multiplet M Methanol NMR Nuclear magnetic resonance P Petroleum ether ppm Parts per million q Quartet t Triplet UV Ultraviolet -iii- DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ VÀ BẢNG BIỂU HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây chùm ruột Hình 1.2 Một số hợp chất lập từ chùm ruột Phyllanthus acidus Hình 3.1 Khung sườn lupane 13 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất T1 13 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất T3 14 SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao 10 Sơ đồ 2.2 Q trình lập hợp chất phân đoạn H1 11 BẢNG BIỂU Bảng Sắc kí cột dịch methanol Bảng Dữ liệu phổ NMR hợp chất T3 hợp chất T1 -iv- 14 LỜI MỞ ĐẦU Việt Nam quốc gia nằm khu vực có khí hậu nhiệt đới gió mùa, thiên nhiên ưu đãi cho loài thực vật đa dạng Từ xưa, người Việt Nam biết tận dụng nguồn tài nguyên vào để làm thuốc chữa bệnh (gọi thảo dược) Nhưng ngẫu nhiên phải nhiều thời gian người ta nhận biết loại dùng làm thuốc Ngày nay, phát triển nhanh chóng khoa học kĩ thuật, ngành tổng hợp hố dược phát triển Tuy vậy, khơng phải hợp chất dễ dàng tổng hợp Để đáp ứng yêu cầu đó, đồng thời tận dụng ưu đãi thiên nhiên, ngành Hoá học hợp chất thiên nhiên đời phát triển mạnh mẽ Nhiều hợp chất tự nhiên cô lập từ cỏ ứng dụng rộng rãi để sản xuất loại thuốc chữa bệnh bảo vệ sức khoẻ người Các nguồn tài liệu cho thấy chùm ruột loài phân bố phổ biến nước nhiệt đới gió mùa Thái Lan, Việt Nam, Ấn Độ, Malaysia Các chất cô lập từ chùm ruột có đa dạng loại hoạt tính sinh học chống lại thương tổn gan, làm giảm huyết áp, có tính kháng viêm, giảm đau, chống oxi hoá Từ điều trên, cần thiết phải nghiên cứu khảo sát thành phần hoá học rễ chùm ruột Phyllanthus acidus (L.) Việt Nam để tìm chất hi vọng có hoạt tính tương tự chùm ruột, lý chọn đề tài “Khảo sát thành phần hoá học rễ chùm ruột Phyllanthus acidus (L.) Skeels, thuộc họ Thầu dầu Euphorbiaceae” để thực -1- CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY CHÙM RUỘT PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) 1.1.1 Tên gọi Tên thông thường: chùm ruột, tầm ruột Tên gọi khác: tầm ruột hay tầm giuộc Thuộc họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) Tên khoa học: Phyllanthus acidus (L.) Skeels Hình 1.1 Cây chùm ruột 1.1.2 Phân bố Cây chùm ruột có nguồn gốc từ Madagasca, sau di nhập vào nhiều nước vùng châu Á, châu Phi Phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam, chùm ruột trồng phổ biến miền Nam Trong nghiên cứu này, đối tượng nghiên cứu chùm ruột Phyllanthus acidus (L.) Skeels (Euphorbiaceae) thu hái huyện Hàm Thuận Bắc, tỉnh Bình Thuận 1.1.3 Mơ tả thực vật Theo Phạm Hồng Hộ, Đỗ Tất Lợi, Đỗ Huy Bích cộng sự, chùm ruột loại nhỏ, cao – m, thân nhẵn, cành có vỏ màu xám nhạt, cành non màu lục nhạt, nhẵn; cành già màu xám có nhiều vết sẹo rụng để lại Lá chùm ruột thuộc loại kép, mọc -2- Trên phân đoạn H1.2.2 thực SKC silica gel giải ly nhiều lần hệ dung môi n-hexane: methanol (100:0.2) thu hợp chất T1 (22.0 mg) (Sơ đồ 2.2) -10- Rễ chùm ruột Làm sạch, để khô, nghiền nhỏ Bột khô (20.0 kg) Đun hồi lưu ethanol 80oC 30 phút Lọc Dịch ethanol Bã khô Cô quay thu hồi dung mơi Phần cịn lại Cao ethanol thơ (1.0 kg) Hịa tan nửa cao tổng methanol nóng Phần bã không tan (200.0 g) Dịch methanol (300.0 g) Sắc ký cột pha thuận nhiều lần hệ dung môi với độ phân cực tăng dần H:EA 95:5 H1 (2.0 g) H:EA 9:1 H2 H:EA 8:2 H3 H:EA 5:5 H4 (3.4 g) Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao -11- EA EA1 (67.0 g) Methanol EA:Me 5:5 EA2 (85.0 g) MeOH H1 (2.0 g) H:EA 9:1 H1.1 (125.0 mg) H1.2 (250.0 mg) H1.3 (152.0 mg) )mg) H:Me 100:0.2 H1.2.1 H1.2.3 H1.2.2 H:Me H:Me 100:0.2 100:0.2 T3 (30.0 mg) T1 (22.0 mg) Sơ đồ 2.2 Q trình lập hợp chất phân đoạn H1 -12- H1.4 (150.0 mg) CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC HỢP CHẤT T1 Hợp chất T1 (22.0 mg) thu được từ phân đoạn H1.2.2 với đặc điểm sau:  Chất bột vơ định hình màu trắng  Khơng bắt UV bước sóng 254 nm 365 nm, hình với thuốc thử vanillin/H2SO4 đun nóng cho vết màu tím  Phổ 1H–NMR (CDCl3): Phụ lục  Phổ 13C–NMR (CDCl3): Phụ lục  Phổ 13C–NMR giãn rộng (CDCl3): Phụ lục Trên phổ 13C–NMR T1 có 30 tín hiệu cộng hưởng ứng với 30 cacbon giúp xác định hợp chất có khung sườn triterpene Trên phổ 1H–NMR lại thấy xuất tín hiệu cộng hưởng nhóm methyl với H 0.76 (3H, s), 1,03 (3H, s), H H 0.79 (3H, s), H 0.83 (3H, s), H 0.94 (3H, s), H 0.97 (3H, s), H 1.68 (3H, s) H3-24, H3-28, H3-25, H3-27, H3-23, H3-26, H3- 30, nhóm methyl (H3-30) cộng hưởng vùng từ trường thấp nhóm methyl gắn với carbon sp2 Trên phổ 1H–NMR xuất tín hiệu vùng từ trường thấp proton có δH 4.69 ppm δH 4.57 ppm ghép gem với số ghép nhỏ J=1.5 Hz Bên cạnh phổ 13C–NMR có tín hiệu carbon vùng alkene, có tín hiệu carbon tứ cấp δC 151.0 ppm tín hiệu carbon δC 109,4 ppm, khẳng định hợp chất T1 có chứa nhóm isopropenyl –C(CH3)=CH2 Ngồi ra, phổ H–NMR xuất tín hiệu nhóm oxymethine H-3 3.19 ppm (dd, J1=5.0 Hz, J2=11.5Hz) Kết hợp với tài liệu tham khảo (Ayer 1984, Mahato, 1994), [12] dự đốn hợp chất T1 có khung sườn lupane Phân tích chẻ mũi H-3 chứng tỏ H-3 ghép cặp với H-2a với Jaa=11,5Hz, từ suy proton H-3 phải vị trí trục hay nhóm –OH phải vị trí xích đạo -13- Hình 3.1 Khung sườn lupane Kết hợp so sánh kiện phổ lupeol[14] cho thấy có tương đồng, cấu trúc T1 lupeol hình vẽ sau: Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất T1 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC HỢP CHẤT T3 Hợp chất T3 (30.0 mg) thu được từ phân đoạn H1.2.1 với đặc điểm sau:  Chất lỏng màu vàng  Bắt UV bước sóng 254 nm 365 nm, hình với thuốc thử vanillin/H2SO4 đun nóng cho vết màu tím  Phổ 1H–NMR (CDCl3): Phụ lục Trên phổ 1H–NMR ta thấy xuất tín hiệu proton nhóm methyl proton olefin So sánh liệu phổ 1H–NMR T3 T1 (Bảng 2) chúng tương đồng khác biệt thay đổi nhóm vịng A T3 Trên phổ 1H–NMR xuất proton olefin 5.78 ppm (1H, d, 10.0 Hz) 7.09 ppm (1H, d, 10.0 Hz) chứng tỏ proton ghép cis với Dựa vào độ dịch chuyển hóa học proton H-1 cho thấy nối đôi C-1 C-2 phải liên hợp với nối đôi C=O So sánh với tài liệu tham khảo,[19] hợp chất T3 xác định glochidone Hợp -14- chất cô lập từ cao methanol vỏ thân chùm ruột Nguyễn Thái Thế cộng sự.[15] Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất T3 Bảng 2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất T3, T1 Glochidone T3a No H (ppm) 7.09 (1H, d, 10.0) 5.78 (1H, d, 10.0) T1a H (ppm) C (ppm) 38.2 25.4 3.17 (1H, dd, 11.5, 5.0) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 a 2.40 (1H, ddd, 11.0, 6.0, 6.0) 1.06 (3H,s) 0.96 (3H,s) 1.08 (3H,s) 1.13 (3H,s) 1.11 (3H,s) 0.81 (3H,s) 29 4.71 (1H, d, 2) 4.59 (1H,s) 30 1.69 (3H,s) Glochidone 2.37 (1H, ddd, 11.0, 5.5, 5.5) 0.97 (3H,s) 0.76 (3H,s) 0.83 (3H,s) 1.03 (3H,s) 0.94 (3H,s) 0.79 (3H,s) 4.69 (1H, d, 2.0) 4.57 (1H, dd, 2.5, 1.5) 1.68 (3H, s) Các hợp chất ghi phổ dung môi CDCl3 -15- H (ppm) 7.11 (1H, d, 10.0) 5.81 (1H, d, 10.0) C (ppm) 159.9 125.2 79.2 205.6 38.9 55.6 18.5 34.5 41.1 50.7 37.5 21.2 27.5 39.1 43.1 27.6 35.9 43.2 48.7 44.7 53.5 19.0 33.8 43.0 44.5 39.6 21.3 25.1 38.3 43.1 35.5 40.0 41.8 47.9 48.1 151.0 30.1 40.2 28.2 15.5 16.2 16.1 14.7 18.2 2.52 (1H, ddd, 11.0, 6.0, 6.0) 1.1 (3H,s) 1.05 (3H,s) 1.03 (3H,s) 1.14 (3H,s) 0.95 (3H,s) 0.83 (3H,s) 48.2 150.8 29.8 29.7 27.8 21.4 19.2 16.5 14.5 18.1 109.4 4.62 (1H, d, 2) 4.59 (1H,s) 109.5 19.5 1.70 (3H,s) 19.3 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Trong nội dung đề tài, từ chùm ruột Phyllanthus acidus, hợp chất cô lập xác định cấu trúc Dựa vào kết phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều kết hợp với so sánh với tài liệu tham khảo, cấu trúc hợp chất T1, T3 T2A xác định sau: Hợp chất T1: Hợp chất T3: 4.2 KIẾN NGHỊ Vì điều kiện thời gian vật chất không cho phép, nên phạm vi đề tài này, khảo sát cao ethyl acetate Trong thời gian tới, có điều kiện tiến hành khảo sát hợp chất lại cao ethyl acetate phân đoạn khác cao butanol Đồng thời tiếp tục tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học loại cao hợp chất cô lập -16- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng anh [1] Chongsa W., Radenahmad N., Jansakul C., “Six weeks oral gavage of a Phyllanthus acidus leaf water extract decreased visceral fat, the serum lipid profile and liver lipid accumulation in middle-aged male rats”, Journal of Ethnophramacology, 396 – 404, 2014 [2] Dekker S., Pharm Weekbe, 95, 1156, 1908 [3] Durham D G., Reid R G., Wangboonskul J., Daodee S., “Extraction of Phyllanthusols A and B from Phyllanthus acidus and analysis by capillary electrophoresis”, Phytochem Ana, 13, 358-362, 2002 [4] Eldeen I M S., Seow E M., Abdullah R., Sulaiman S F., “In vitro antibacterial, antioxidant, total phenolic contents and anti-HIV-1 reverse transcriptase of extract of seven Phyllanthus sp”, South African journal of botany, 77: 75 – 79, 2011 [5] Jahan A., Jangde C R., Khatoon S., Umap S A., “In vitro antihelmintic activity of Phyllanthus niruri Linn against Paramphistomes” International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science, 5(3), 836-838, 2013 [6] Jain N K., Singhai A K., “Protective effects of Phyllanthus acidus (L.) Skeels leaf extracts on acetaminophen and thioacetamide induced hepatic injuries in Wistar rats”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 470 – 474, 2011 [7] Kotloff K L., Winickoff J P., B Ivanoff J D., Clemens D L., Swerdlow P J., Sansonetti G K., Adak M M L., “Global burden of Shigella infections: implications for vaccine development and implementation of control strategies”, Bull World Health Organ, 77, 651-666, 1999 [8] Kumar S C., Bhattacharjee C., Debnath S., Chandu A N., Kanna K K., “Remedial effect of Phyllanthus acidus against bleomycin provoked pneumopathy”, Journal of Advanced Pharmceutial Research, 2(1), 317–325, 2011 [9] Leeya Y., Mulvany M J., Queiroz E F., Marston A., Hostettmann K., Jansakul C., “Hypotensive activity of an n-butanol extract and their purified compounds -17- from leaves of Phyllanthus acidus (L.) Skeel in rats”, European Journal of Pharmacology, 649, 301-313, 2010 [10] Lv J.-J., Yu S., Wang Y.-F., Wang D., Zhu H.-T., Cheng R.-R., Yang C.-R., Xu M., Zhang Y.-J., “Anti-hepatitus B virus norbisabolane sesquiterpenoids from Phyllanthus acidus and the establishment of their absolute configurations using theoretical calculations”, The Journal of Organic Chemistry, 79(12), 54325447, 2014 [11] Mackeen M M., Ali A M., Abdullah M A., Nasir R M., Mat N B., Razak A R., Kawazu K., “Antinematodal activity of some Malaysian plant extracts against the pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus”, Pesticide Science, 51(2), 165-170, 1997 [12] Ayer W A., Flanagan R J., Reffstrup T., “Metabolites of bird’s nest fungi – New triterpenenoid carboxylic acids from Cyathus striatus and Cyathus pygmaeus”, Tetrahedron, 40(11), 2069-2082, 1984 [13] Menlendez P A., Capriles V A., “Antibacterial properties of tropical plants from Puerto Rico”, Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology, 13, 272 – 276, 2006 [14] Mohammad Saleem, Farrukh Afaq, Vaqar Mustafa Adhami, Hasan Mukhtar, “Lupeol modulates NF-B and PI3K/Akt pathways and inhibits skin cancer in CD-1 mice”, Oncogene, 23, 5203-5214, 2004 [15] Nguyen T T., Duong T H., Nguyen T A T., Bui X H., “Study on the chemical constituents of Phyllanthus acidus (Euphorbiaceae)”, Journal of Science and Technology, 52(5A), 156-161, 2014 [16] Pettit G R., Cragg G M., Gust D., Brown P., Can J Chem., 60, 939, 1982 [17] Satish S., Raghavendra M P., Raveesha K A., “Antifungal potentiality of some plant extracts against Fusarium sp.”, Archives of Phytopathology and Plant Protection , 42(7), 618-625, 2009 [18] Sengupta P., Mukhopadhyay J., “Terpenoids and related compds VII Triterpenoids of Phyllanthus acidus”, Phytochemistry, 5(3), 531-534, 1966 [19] Ganguly A K., Govindachari T R., Mohamed P A., Rahimtulla A D., Viswsnathan N., “Chemical constituents of glochidion hohen ackeri”, -18- Tetrahedron, 42, 1513-1519, 1966 [20] Marisa S., Jiraporn O., Roswitha S., Supaporn P., Ana R., Andre S., Tiago G., Chaweewan J., Margarida D A., Rainer S., et al, “An extract from the medicinal plant Phyllanthus acidus and its isolated compounds induce airway chloride secretion:A potential treatment for cystic fibrosis.”, Molecular pharmacology, 71(1), 366-376, 2007 [21] Tang Y.-Q., Sekaran S D (2011), “Evaluation of Phyllanthus, for Its AntiCancer Properties, Prostate Cancer - From Bench to Bedside”, Dr Philippe E Spiess (Ed.), ISBN: 978-953-307-331-6, InTech [22] Ultee A J., “The phytosterol of Phyllanthus acidus Skeels”, Pharmaceutisch Weekblad, 70, 1173-1175, 1933 [23] Vongvanich N., Kittakoop P., Kramyu J., Tanticharoen M., Thebtaranonth Y., “Phyllanthusols A and B, cytotoxic norbisabolane glycosides from Phyllanthus acidus skeel”, Journal of Organic Chemistry, 65(17), 5420-5423, 2000 Tài liệu tham khảo tiếng việt [24] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đảm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Như, Nguyễn Tập, Trần Toàn, “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tập 1, 460 – 461, 2004 [25] Đỗ Tất Lợi, “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học, 515 – 516, 2004 [26] Phạm Hoàng Hộ, “Cây cỏ Việt Nam”, II, NXB trẻ, 190, 2003 [27] Võ Thị Như Thảo, “Thông tin kết nghiên cứu đề tài luận văn thạc sĩ”, Đại học Đà Nẵng, Trường Đại học Sư phạm, 2015 -19- PHỤ LỤC -20- 24 28 19 Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất T1 Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR hợp chất T1 27 Phụ lục 3: Phổ 13C-NMR hợp chất T1 giãn rộng 28 Phụ lục 4: Phổ 1H-NMR hợp chất T3