Khảo sát thành phần hóa học trong cao ethyl acetate của cây phyllanthus acidus (l ) skeels thu hái ở tỉnh bình thuận

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA – BỘ MƠN HĨA HỮU CƠ _ _ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO ETHYL ACETATE CỦA CÂY PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) SKEELS THU HÁI Ở TỈNH BÌNH THUẬN SV thực hiện: Lê Thị Hà GV hướng dẫn: TS Bùi Xuân Hào MSSV: K38.201.024 Tp HCM, tháng năm 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA – BỘ MƠN HĨA HỮU CƠ _ _ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỮU CƠ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO ETHYL ACETATE CỦA CÂY PHYLLANTHUS ACIDUS (L.) SKEELS THU HÁI Ở TỈNH BÌNH THUẬN GV hướng dẫn: TS Bùi Xuân Hào SV thực hiện: Lê Thị Hà MSSV: K38.201.024 Tp HCM, tháng năm 2016 LỜI CẢM ƠN  Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, em xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: Thầy TS Bùi Xuân Hào, người truyền đạt cho em nhiều kiến thức chuyên môn, theo sát hướng dẫn tận tình truyền đạt cho em kinh nghiệm nghiên cứu quý báu suốt trình em thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Thầy TS Dương Thúc Huy giúp đỡ em suốt q trình thực đề tài Q Thầy Cơ trường Đại học Sư Phạm TP.HCM, người trực tiếp giảng dạy, truyền đạt kiến thức bổ ích cho em Qua đó, em có kiến thức tảng – hành trang q giá để hồn thiện tốt khóa luận nghiệp tương lai Các bạn sinh viên K38 em sinh viên K39 cộng tác, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Cuối cùng, em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình động viên, tạo điều kiện vật chất tinh thần giúp em hồn thành tốt khóa luận (i) MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN (i) MỤC LỤC (ii) DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT (iv) DANH MỤC BẢNG BIỂU, HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ (v) LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHI PHYLLANTHUS: 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Phyllanthus 1.1.2 Thành phần hóa học chi Phyllanthus 1.1.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Phyllanthus 1.1.3.1 Độc tính tế bào hợp chất chi Phyllanthus 1.1.3.2 Tác dụng ức chế ký sinh trùng chi Phyllanthus 1.2 GIỚI THIỆU VỀ CÂY CHÙM RUỘT 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.1.1 Tên gọi 1.2.1.2 Phân bố 1.2.1.3 Mô tả: 1.2.2 Công dụng: 1.2.3 Tình hình nghiên cứu giới 1.2.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 12 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 12 2.1.1 Hóa chất 12 (ii) 2.1.2 2.2 Thiết bị 12 QUI TRÌNH THU HÁI VÀ XỬ LÝ MẪU NGUYÊN LIỆU, LY TRÍCH VÀ CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT 13 2.2.1 Nguyên liệu: 13 2.2.2 Quy trình trích ly, lập hợp chất: 13 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT RX2 15 3.1.1 Đặc điểm hợp chất RX2: 15 3.1.2 Biện luận cấu trúc hợp chất RX2: 15 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT CR-T12: 19 3.2.1 Đặc điểm hợp chất CR-T12: 19 3.2.2 Biện luận cấu trúc hợp chất CR-T12: 19 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN 21 Tài liệu tham khảo 24 Phụ lục (iii) DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU Tiếng Việt Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (13) 13 C-NMR Carbon Nuclear Magnetic Resonance H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Ac Acetone AcOH Acetic Acid C Chloroform Brs Broad singlet Mũi đơn rộng D Doublet Mũi đôi Dung dịch Doublet of doublets Mũi đôi đôi Ddd Doublet of doublet of doublets Mũi đôi đôi đôi DMSO DiMethyl SulfOxide EA Ethyl Acetate Hằng số tương tác spin – spin J H Hexane HMBC m Heteronuclear Multiple Bond Coherence Multiplet Me Methanol NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ppm Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy part per million s Singlet Mũi đơn t Triplet Mũi ba SKC Tương quan 1H-13C qua 2, nối Mũi đa Sắc kí cột UV Ultra violet Tia cực tím δ Chemical shift Độ chuyển dịch hóa học (iv) DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ Trang 17 Bảng 3.2 Dữ liệu NMR hợp chất RX2, phyllanthacioid acid phyllanthacidoid acid methyl ester Dữ liệu NMR hợp chất CR-T12 Hình 1.1 Một số thực vật thuộc chi Phyllanthus Hình 1.2 Một số hình ảnh chùm ruột Hình 1.3 Một số hợp chất lập từ Phyllanthus acidus Hình 3.1 Hợp chất RX2 14 Hình 3.2 Một số tương quan HMBC cấu trúc hợp chất RX2 16 Hình 3.3 Hợp chất phyllanthacidoid acid methyl ester 16 Hình 3.4 Cấu trúc khơng gian hợp chất RX2 16 Hình 3.5 Hợp chất CR-T12 18 Sơ đồ 2.1 Q trình lập hợp chất rễ chùm ruột 13 Bảng 3.1 (v) 19 LỜI MỞ ĐẦU Trong vài thập kỉ gần đây, nước giới đẩy mạnh việc nghiên cứu, bào chế sản xuất chế phẩm có nguồn gốc thiên nhiên từ thuốc để hỗ trợ phòng ngừa điều trị bệnh Ở Việt Nam, xu hướng ngày tăng Hơn nữa, Việt Nam quốc gia có đặc điểm khí hậu nhiệt đới gió mùa, thích hợp cho nhiều loại thực vật phát triển Người ta tận dụng ưu đãi thiên nhiên để sản xuất loại thuốc từ thiên nhiên Chùm ruột loại phổ biến miền Nam Việt Nam nước vùng nhiệt đơi, cận nhiệt đới, thuộc chi Phyllanthus Đã từ lâu, nhà khoa học giới nghiên cứu, cô lập hợp chất có hoạt tính sinh học có chi Phyllanthus để điều trị bệnh thận, nhiễm trùng đường tiết niệu, nhiễm trùng đường ruột, bệnh tiểu đường viêm gan siêu vi B Xuất phát từ ứng dụng y học quý giá kế thừa nghiên cứu có chi Phyllanthus ngồi nước, tiến hành nghiên cứu rễ chùm ruột thu hái tỉnh Bình Thuận SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CHI PHYLLANTHUS: 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Phyllanthus a) b) Hình 1.1 Một số thực vật thuộc chi Phyllanthus a) Cây diệp hạ châuđắng b) Cây phèn đen Các loài thực vật thuộc chi Phyllanthus, họ Thầu Dầu phân bố chủ yếu hầu hết vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam có 44 lồi, lồi ý Phyllanthus niruri (chó đẻ thân xanh), Phyllanthus amarus schum (diệp hạ châu đắng), Phyllanthus urinaria L (chó đẻ cưa), Phyllanthus acidus (chùm ruột)… Các thuộc chi Phyllanthus loại đơn tính; kép, kiểu mọc so le mọc đối; hoa nhỏ, mọc tập trung dạng hình cốc, có màu trắng, màu xanh lục trắng xanh Quả có dạng thùy nang, thường có cuống dài 1.1.2 Thành phần hóa học chi Phyllanthus Các nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học chi Phyllanthus gồm loại hợp chất triterpenoid như: phyllanthol, β-amyrin… (từ P acidus), lupeol, lupenon (từ P emblica), friedelan-3-β-ol, friedelin, β-sitosterol, betulinic acid, glochidonol, 21-αhydroxy-friedelan-4(23)-en-3-one (từ P reticulatus), β-amyrin, β-sitosterol, SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 tricontanol… (từ P urinaria); hợp chất flavonoid như: quercetin-3-glucosid, rutin (từ P amarus), quercetin, kaemferol, astragalin (từ P emblica)…; hợp chất ankaloid thuộc nhóm quinolizidin như: phyllanthin, securinin, norsecurinin, isobulebialin, epibubbitin (từ P amarus), allosecurin, phyllantidin, phyllantin, hypophyllantin (từ P amarus, P urinaria) Ngồi ra, cịn có nhiều hợp chất tannin geraniin, amariin, gallocatechin (từ P amarus), phyllembin, gallotannin, ellagitannin terchebin, corilagin, chebulagic acid… (từ P emblica)… phenolic acid nhiều loài khác (P acidus, P emblica, P reticulatus, P simplex…).[35] 1.1.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Phyllanthus Chi Phyllanthus phân bố phổ biến vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, từ lâu sử dụng y học cổ truyền nước để điều trị bệnh thận, nhiễm trùng đường tiết niệu, nhiễm trùng đường ruột, bệnh tiểu đường viêm gan siêu vi B Các thuộc chi Phyllanthus nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu, khơng hố thực vật mà dược học cấp độ in vitro in vivo Các loài Phyllanthus niruri, Phyllanthus flexuosus (diệp hạ châu), Phyllanthus amarus (diệp hạ châu đắng), Phyllanthus urinaria (chó đẻ cưa), Phyllanthus emblica (me rừng), Phyllanthus sellowianus nghiên cứu nhiều mặt hoá học (Ahmed Verma, 2008; Calixto cộng sự, 1998).[1][3] Các hợp chất chiết từ loài diệp hạ châu đắng (P amarus), chó đẻ cưa (P urinaria) có hoạt tính kháng virus, kháng khuẩn, đặc biệt ức chế hoạt động virus viêm gan B Các hợp chất từ me rừng (P emblica) có tác dụng phịng chống số dạng ung thư, kìm hãm phát triển virus HIV chống suy giảm miễn dịch.[35] 1.1.3.1 Độc tính tế bào hợp chất chi Phyllanthus Nhiều cơng trình nghiên cứu gần cho thấy cao chiết từ loài thuộc chi Phyllanthus Phyllanthus amarus, Phyllanthus niruri, Phyllanthus urinaria, Phyllanthus watsonii, Phyllanthus emblica có độc tính dịng tế bào ung thư, bao gồm ức chế xâm lấn, di kích hoạt chết theo chương trình tế bào (apoptosis) (Tang cộng 2011).[27] Năm 2011, nghiên cứu Lee cộng SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 Bảng 3.1: Bảng tín hiệu phổ NMR RX2, phyllanthacioid acid phyllanthacidoid acid methyl ester Phyllanthacidoid Phyllanthacidoid acid methyl acid (2a) – CH OD ester (1) – CD OD RX2-DMSO-d OH OH OH OH O Vị trí C 13 C 11 O 14 O O 7' OH O H OH OH 13 C O O O O 7' H 1' 4' 4' HO HO δ H (J, Hz) 14 OCH3 1' 11 δC δC ppm 3.60 dd (4.0, 9.5) ppm 70.4 Ppm 71.4 ppm 3.78 dd (4.8, 10.5) 28.4 28.4 1.48 ddd (9.5, 9.5, 13.5) 1.85 m 2.36 m 33.1 34.6 1.55 ddd (9.5, 10.5, 14.2) 1.94 ddd (14.2, 5.4, 5.4) 2.51 m 1.76 ddd (3.0, 11.0, 13.5) 26.3 27.1 3.89 t (3.0) 80.2 81.8 74.7 76.3 74.3 74.4 100.7 101.6 34.9 34.9 2.11 m 10 1.86 dd (2.5, 14.5) 2.03 m 5.13 m 69.5 72.0 5.20 brs 11 2.00 m 32.3 32.8 2.10 m 12 3.48 dd (4.5, 11.0) 3.82 dd (11.5, 11.5) 61.1 62.2 3.58 dd (4.0, 11.5) 4.00 dd (11.5, 11.5) 177.5 182.8 12.6 12.3 121.3 122.4 3.66 s 13 14 0.76 d (7.0) 1’ δ H (J, Hz) 1.83 ddd (3.4, 11.5, 14.5) 1.94 m 4.02 t (3.4) 3.78 s 0.88 d (7.2) 2’/6’ 7.87 d (8.5) 131.5 132.7 7.95 d (9.0) 3’/5’ 6.82 d (9.0) 115.1 115.8 6.81 d (9.0) 4’ 161.9 161.2 7’ 165.5 169.3 13-OCH 3.61 s 18 O SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT CR-T12: 3.2.1 Đặc điểm hợp chất CR-T12: Hợp chất CR-T12 (10.0 mg) thu từ phân đoạn E0.2.3 cao ethyl acetate với đặc điểm sau: • Chất bột vơ định hình màu trắng, tan hồn tồn MeOH, DMSO • Phổ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d ) (Phụ lục 4) • Phổ 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d ) (Phụ lục 5) 3.2.2 Biện luận cấu trúc hợp chất CR-T12: Phổ 1H-NMR CR-T12 cho thấy: tín hiệu nhóm methyl mũi đơn δ H 0.63 (H-18) δ H 0.94 (H -19), nhóm methyl mũi đơi δ H 0.89 (H -21), δ H 0.8 (H -26, H -27) nhóm methyl mũi ba δ H 0.78 (H -29) Độ dịch chuyển nhóm methyl δ H 0.63 vùng từ trường cao, đặc trưng cho nhóm CH -18 khung sườn steroid Ngồi ra, phổ 1H-NMR cịn có tín hiệu proton olefin mũi đa δ H 5.30 Các proton vùng 3.0 – 4.0 proton nhóm -OH nhóm methine, methylene có liên kết với oxygen Phổ 13C-NMR CR-T12 cho thấy diện 35 carbon gồm: 29 tín hiệu carbon phần aglycone, tín hiệu carbon đơn vị glucopyranose Trong có carbon olefin δ C 140.9 (C-5), 121.3 (C-6), carbon anome δ C 101.4 (C1’), carbon thuộc phần đường δ C 77.4, 73.9, 70.5, 77.3, 61.4, C-3 δ C 77.2 carbon khác So sánh liệu phổ hợp chất CR-T12 với liệu phổ β-sitosterol 3O-β-D-glucopyranoside[11] cho thấy có tương đồng Vì hợp chất CR-T12 xác định β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside 29 28 22 21 18 11 19 HO HO O 3' 5' 2' 1' O 17 16 14 10 15 OH Hình 3.5 Hợp chất CR-T12 19 27 25 26 13 6' 4' CH2OH 23 20 12 24 SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 Bảng 3.2 Dữ liệu NMR hợp chất CR-T12 Vị trí C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’a,6’b Hợp chất β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside – (CDCl )[11] Hợp chất CR-T12 – (DMSO-d ) Loại C -CH -CH -CH< -CH >C= =CH-CH -CH< -CH< >C< -CH -CH >C< -CH< -CH -CH -CH< -CH -CH -CH< -CH -CH -CH -CH< -CH< -CH -CH -CH -CH -CH-O-CH-O-CH-O-CH-O-CH-O-CH O- δ H ppm (J, Hz) 3.3 (1H, m) 5.3 (H, d, 5.0) 0.63 (3H, s) 0.94 (3H, s) 0.89 (3H, d, 6.5) 0.8 (6H, d, 6.5) 0.78 (3H, t, 6.0) 4.2 (H, d, 8.0) 2.8 – 3.6 2.8 – 3.6 2.8 – 3.6 2.8 – 3.6 2.8 – 3.6 δ C ppm 37.3 29.2 77.2 38.8 140.9 121.3 31.9 31.8 49.9 36.6 21.0 42.2 56.6 24.3 28.2 55.7 12.1 19.6 35.9 19.0 33.8 25.9 45.4 29.7 19.4 20.2 23.0 12.3 101.4 73.9 77.4 70.5 77.3 61.4 20 δ H ppm (J, Hz) 1.25 (m, 2H) 1.33 (m, 2H) 3.13 (m, 1H) 2.14 (m, 2H) 5.09 (brs, 1H) 1.73 (m, 2H) 1.22 (m, 1H) 1.22 (m, 1H) 1.33 (m, 2H) 1.33 (m, 2H) 1.22 (m, 1H) 1.73 (m, 2H) 1.73 (m, 2H) 1.73 (m, 2H) 0.62 (s, 3H) 0.94 (s, 3H) 1.32 (m, 1H) 0.84 (d, 3H, 6.3) 1.73 (m, 2H) 1.73 (m, 2H) 1.12 (m, 1H) 2.14 (m,1H) 0.75 (d, 3H, 7.7) 0.73 (d, 3H, 7.6) 1.33 (m, 2H) 0.77 (t, 3H, 6.9) 4.11 (d, 1H, 7.8) 3.14 (m, 1H) 3.14 (m, 1H) 3.14 (m, 1H) 3.06 (m, 1H) 2.94 (m, 1H) δ C ppm 36.9 29.1 78.6 42.1 140.0 121.5 31.4 31.5 49.8 36.3 20.2 38.2 41.9 56.4 23.8 27.7 55.7 11.3 19.1 35.7 18.7 33.5 25.6 45.5 28.7 18.7 18.4 22.6 12.3 100.7 73.2 76.2 69.9 75.6 61.4 SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN Từ mẫu rễ chùm ruột thu hái Bình Thuận, tiến hành điều chế thu cao ethanol thô Thực phương pháp sắc kí cao ethanol thơ thu hợp chất Bằng phương pháp phổ nghiệm, hợp chất xác định phyllathacidoid acid β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside OH OH OH 10 14 O 13 12 O O HOOC 7' H O 1' 4' HO Phyllanthacidoid acid 29 28 22 21 18 11 19 HO HO O 3' 5' 2' 1' O 17 16 14 10 27 25 26 13 6' 4' CH2OH 23 20 12 24 15 OH β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside 21 SVTH: LÊ THỊ HÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP_2016 HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO CỦA ĐỀ TÀI Với điều kiện thời gian vật chất không cho phép nên phạm vi đề tài khảo sát cao E0 Trong thời gian tới có điều kiện chúng tơi tiến hành khảo sát cao lại Đồng thời tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học số loại cao hợp chất cô lập 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Anh [1] Ahmed B.,Verma A., “Pharmacological and phytochemical review on Phyllanthus species’’, An Indian Journal , 4(1), 5-21, 2008 [2] Ajala T O., Igwilo C I, Oreagba I A., Odeku O A., “The antiplasmodial effect of the extracts and formulated capsules of Phyllanthus amarus on Plasmodium yoelii infection in mice”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 283-287, 2011 [3] Calixto J B., Santos A R S., Filbo V C., Yunes R A., “A review of the plants of the genus Phyllanthus: their chemistry, pharmacology, and therapeutic potential”, Medicinal Research Review., 18(4), 225-258, 1998 [4] Chongsa W., Radenahmad N., Jansakul C., “Six weeks oral gavage of a Phyllanthus acidus leaf water extract decreased visceral fat, the serum lipid profile and liver lipid accumulation in middle-aged male rats”, Journal of Ethnophramacology, 396-404, 2014 [5] Durham D G., Reid R G., Wangboonskul J., Daodee S., “Extraction of Phyllanthusols A and B from Phyllanthus acidus and analysis by capillary electrophoresis”, Phytochemical Analysis, 13, 358-362, 2002 [6] Eldeen I M S, Seow E M, Abdullah R., Sulaiman S F., “In vitro antibacterial, antioxidant, total phenolic contents and anti-HIV-1 reverse transcriptase of extract of seven Phyllanthus sp”, South African journal of botany, 77: 75-79, 2011 [7] Jahan A., Jangde C R., Khatoon S., Umap S A., “In vitro antihelmintic activity of Phyllanthus niruri Linn against Paramphistomes” International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science, 5(3), 836-838, 2013 [8] Jain N K., Singhai A K., “Protective effects of Phyllanthus acidus (L.) Skeels leaf extracts on acetaminophen and thioacetamide induced hepatic injuries in Wistar rats”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 470-474, 2011 [9] Kaper J B., Nataro J P., Mobley H L., “Pathogenic Escherichia coli”, Nature 23 Reviews Microbioy, 2, 123-140, 2004 [10] Khatun M., Billah M and Md Abdul Quader, “Sterols and Sterol Glucoside from Phyllanthus Species”, Dhaka University Journal Science 60(1): 5-10, 2012 [11] Kotloff K L, Winickoff J P, B Ivanoff J D Clemens D L., Swerdlow P J., Sansonetti G K., Adak M M L., “Global burden of Shigella infections: implications for vaccine development and implementation of control strategies”, Bull World Health Organ, 77, 651-666, 1999 [12] Kumar S C., Bhattacharjee C., Debnath S., Chandu A N., Kanna K K., “Remedial effect of Phyllanthus acidus against bleomycin provoked pneumopathy”, Journal of Advanced Pharmceutial Research, 2(1), 317-325, 2011 [13] Lee S H., Jaganath I B., Wang S M., Sekaran S D.,“Antimetastatic Effects of Phyllanthus on Human Lung (A549) and Breast (MCF-7) Cancer Cell Lines”, PLoS ONE, 6(6), e20994, 2011 [14] Leeya Y., Mulvany M J., Queiroz E F., Marston A., Hostettmann K., Jansakul C., “Hypotensive activity of an n-butanol extract and their purified compounds from leaves of Phyllanthus acidus (L.) Skeels in rats”, European Journal of Pharmacology, 649, 301-313, 2010 [15] Lv J.-J., Yu S., Wang Y.-F., Wang D., Zhu H.-T., Cheng R.-R., Yang C.-R., Xu M., Zhang Y.-J., “Anti-hepatitus B virus norbisabolane sesquiterpenoids from Phyllanthus acidus and the establishment of their absolute configurations using theoretical calculations”, The Journal of Organic Chemistry, 79(12), 5432-5447, 2014 [16] Mackeen Muhammad M., Ali Abdul M., Abdullah Mohd A., Nasir Rozita M., Mat Nashriyah B., Razak Abdul R., Kawazu K., “Antinematodal activity of some Malaysian plant extracts against the pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus”, Pesticide Science, 51(2), 165-170, 1997 [17] Menléndez P A.; Capriles V A., “Antibacterial properties of tropical plants from Puerto Rico”, Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology, 13, 272-276, 2006 24 [18] Mensah, J L, Lagarde I., Ceschin C., Michel G., Gleye J., Fouraste I., “Antibacterial acitivity of leaves of Phyllanthus discoideus”, Journal of Ethanopharmacology, 28, 129-133, 1990 [19] Nguyen T T., Duong T H., Nguyen T A T., Bui X H., “Study on the chemical constituents of Phyllanthus acidus (Euphorbiaceae)”, Journal of Science and Technology, 52(5A), 156-161, 2014 [20] Opong R A., Nyarko A K., Dodoo D., Gyang F N., Koram K A., Ayisi N K., “Antiplasmodial activity of extracts of Tridax procumbens and Phyllanthus Amarus in in vitro Plasmodium falciparum Culture Systems”, Ghana medical journal, 45(4), 143-150, 2011 [21] Pettit G R., Cragg G M., Gust D., Brown P., Canadian Journal Chemistry, 60, 939, (1982) [22] Satish S., Raghavendra M P., Raveesha K A., “Antifungal potentiality of some plant extracts against Fusarium sp.”, Archives of Phytopathology and Plant Protection, 42(7), 618-625, 2009 [23] Sengupta P., Mukhopadhyay J., “Terpenoids and related compds VII Triterpenoids of Phyllanthus acidus”, Phytochemistry, 5(3), 531-4, 1966 [24] Sharmin M., Prangan D B., Laboni P., Fouzia F K C., Sarak A., Mrityunjoy A., Tasmina R., Rqashed N, “Study of microbial proliferation and the in vitro antibacterial traits of commonly available flowers in Dhaka Metropolis”, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 2, 91-97, 2015 [25] Marisa S., Jiraporn O., Roswitha S., Supaporn P., Ana R., Andre S., Tiago G., Chaweewan J., Margarida D A., Rainer S., et al, “An extract from the medicinal plant Phyllanthus acidus and its isolated compounds induce airway chloride secretion: A potential treatment for cystic fibrosis.”, Molecular pharmacology, 71(1), 366-76, 2007 [26] Sumalatha D., “Antioxidant and Antitumor activity of Phyllanthus emblica in colon cancer cell lines”, International Journal of current microbiology and applied sciences, 2(5), 189-195, 2013 [27] Tang Y.-Q., Sekaran S D., Evaluation of Phyllanthus, for Its Anti-Cancer Properties, Prostate Cancer - From Bench to Bedside, Dr Philippe E Spiess 25 (Ed.), ISBN: 978-953-307-331-6, 2011 [28] Ultee A J., “The phytosterol of Phyllanthus acidus Skeels”, Pharmaceutisch Weekblad, 70, 1173-5, 1933 [29] Vongvanich N., Kittakoop P., Kramyu J., Tanticharoen M., Thebtaranonth, Y., “Phyllanthusols A and B, cytotoxic norbisabolane glycosides from Phyllanthus acidus Skeels”, Journal of Organic Chemistry, 65(17), 54205423, 2000 [30] Zhu X., Wang J., Ou Y., Han W., Li H., “Polyphenol extract of Phyllanthus emblica (PEEP) induces inhibition of cell proliferation and triggers apoptosis in cervical cancer cells”, European Journal of Medical Research, 18, 46, 2013 Tài liệu tham khảo tiếng Việt [31] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đảm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Như, Nguyễn Tập, Trần Toàn, “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tập 1, 460-461, 2004 [32] Đỗ Tất Lợi, “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học, 515-516, 2004 [33] Phạm Hoàng Hộ, “Cây cỏ Việt Nam”, II, NXB trẻ, 190, 2003 [34] Võ Thị Như Thảo, “Nghiên cứu tách chiết xác định thành phần hóa học vỏ thân chùm ruột Tam Kỳ, tỉnh Quảng Nam số dịch chiết”, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng, Việt Nam, 2015 Trang web [35] < http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=986> [truy cập 29 tháng 4, 2016] 26 PHỤ LỤC 8.0 7.5 7.0 6.5 OH A HOOC 13 6.0 B O 2' 5.5 10 C 12 O H 7' HO 10 12a 5.0 4.5 4.0 f1 (ppm) 3.5 3.0 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất RX2 2.5 11 2.0 1.5 3.00 OH 1.05 1.30 0.87 1.35 0.75 1.90 1.34 1.02 1.25 0.89 1.26 1.42 1.25 2.12 2.08 7.881 7.864 6.833 6.815 5.144 5.139 3.896 3.890 3.883 3.849 3.826 3.803 3.660 3.616 3.608 3.598 3.588 3.500 3.491 3.478 3.470 2.363 2.053 2.047 2.024 2.018 2.008 1.999 1.993 1.985 1.879 1.874 1.850 1.845 1.834 1.825 1.815 1.793 1.787 1.766 1.738 1.490 1.471 1.463 0.770 0.756 RX2-DMSO-1H OH 14 O O 14 1' D 4' 3' 12e 2a 1.0 0.5 OH 34.925 33.056 32.298 29.037 28.416 26.364 22.407 12.613 OH OH 61.110 80.236 74.763 74.367 70.373 69.519 100.659 115.127 121.256 131.528 165.565 161.921 177.532 RX2-DMSO-13C 2' A 13 3' B 14 O O HOOC 10 C 12 O 7' H O 1' D 14 4' HO 7' 10 12 1' 4' 11 13 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 f1 (ppm) 80 70 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất RX2 60 50 40 30 20 10 RX2-DMSO-HMBC 2' 3' 12e 10 14 12a 2a 10 14 20 30 40 50 60 12 70 90 100 110 3' 120 1' 130 2' 140 150 160 4' 7' 170 13 180 190 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 f2 (ppm) 3.5 3.0 2.5 Phụ lục Phổ HMBC hợp chất RX2 2.0 1.5 1.0 0.5 f1 (ppm) 80 5.4 5.0 4.6 10 13 4.2 17 16 14 15 3.8 3.4 Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất T12 3.0 f1 (ppm) 2.6 2.2 3.27 3.44 5.68 3.22 3.00 12 23 1.54 1.40 2.66 18CH3 20 24 1.25 26 3.82 19CH3 11 22 4.18 H 3C 21 1.55 6' 4' CH25'OH O HO 2' 1' HO 3' O OH 1.35 1.30 1.24 5.316 5.306 4.387 4.211 4.195 3.638 3.619 3.457 3.448 3.440 3.425 3.399 3.387 3.376 3.106 3.088 3.051 3.048 3.040 3.017 3.010 2.999 2.890 2.880 1.955 1.930 1.891 1.791 1.771 1.764 1.620 1.610 1.597 1.516 1.496 0.941 0.893 0.880 0.807 0.794 0.788 0.774 0.637 CR-T12-DMSO-1H 27 CH3 25 CH3 28 1.8 1.4 1.0 0.6 650 600 550 29CH3 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 -50 77.395 77.259 77.199 73.953 66.183 61.410 56.649 55.754 49.912 38.788 37.307 36.588 35.923 33.798 31.847 29.680 29.230 28.226 24.303 23.046 21.069 20.189 19.577 19.421 19.095 12.343 12.154 101.363 121.269 140.973 CR-T12-DMSO-1H 26000 24000 22000 26 H3C 21 22 18CH3 20 12 6' CH 4' 2OH 5' O HO 2' 1' HO 3' O OH 13 17 19CH3 11 16 14 15 10 24 23 20000 27 CH3 18000 29CH3 25 16000 CH3 28 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 145 135 125 115 105 95 90 85 80 75 70 f1 (ppm) 65 60 55 50 45 40 Phụ lục Phổ 13C-NMR hợp chất T12 35 30 25 20 15 10