Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Limmasets Cornuet (1949) phát nhiễm bệnh virus, virus phân bố không đồng thường không thấy chúng vùng đỉnh sinh trưởng Morel Martin (1952) chứng minh giả thuyết cách tạo bệnh virus từ giống khoai tây qua nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Đinh Nghĩa Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng sử dụng phần mô phân sinh với – tiền phát khởi lá, tức đỉnh sinh trưởng có kích thước từ 0,1 – 0,15mm tính từ chóp sinh trưởng Kỹ thuật phức tạp, phải thực kính lúp khả sống sót mẫu cấy có kích thước nhỏ thường không cao, tiến hành cần nuôi cấy với mục đích tạo invitro virus Trên thực tế người ta thường nuôi đỉnh chồi non với kích thước khoảng vài mm Đó đỉnh chồi đỉnh chồi nách Môi trường thích hợp: chất Vô trùng mẫu cấy môi dinh dưỡng chất điều hòa trường sinh trưởng Mẫu tạo hay nhiều chồi Chồi tiếp tục phát triển vươn thân, lá, rễ Xét nguồn gốc có ba khả năng: - Cây phát triển từ chồi đỉnh (chồi ngọn) - Cây phát triển từ chồi nách phá ngủ - Cây phát triển từ chồi phát sinh Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Các phương thức phát triển hoàn chỉnh từ nuôi cấy đỉnh sinh trưởng - Phát triển trực tiếp Chủ yếu đối tượng hai mầm (dicotyledon) khoai tây, thuốc lá, cam chanh, hoa cúc… Ví dụ: Khoai tây (Solanum tuberosum): Đỉnh sinh trưởng → Chồi nách → Cây Phát triển thông qua giai đoạn protocorm Đỉnh sinh trưởng → Protocorm → Cây Chủ yếu gặp đối tượng mầm (monocotyledon) phong lan, dứa, huệ… Cùng lúc đỉnh sinh trưởng tạo hàng loạt protocorm (proembryo) protocorm tiếp tục phân chia thành protocorm phát triển thành hoàn chỉnh Bằng phương thức thời gian ngắn người ta thu hàng triệu cá thể. Các giai đoạn hình thành PLB địa lan phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Ưu điểm: Tạo giống bệnh, virus Nhược điểm: Do kích thước đỉnh sinh trưởng bé 0,1 – 0,15mm tính từ chóp sinh trưởng nên thao tác phải chuẩn xác, tỉ mỉ, cẩn thận Phải lựa chọn hợp lý loại đỉnh ST sử dụng