Luận văn Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân invitro giống chuối Tây

 Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học LỜI CÁM ƠN Tôi xin chân thành cám ơn giúp đỡ tận tình cô giáo hướng dẫn ThS.Lã Thị Nguyệt giảng viên Khoa Công Nghệ Sinh Học- Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang, ThS Trịnh Thị Nhất Chung anh chị Bộ môn Công Nghệ Sinh Học - Viện Nghiên cứu Rau tạo điều kiện tốt cho thực hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Tuy nhiên, để hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận động viên giúp đỡ lớn bạn bè người thân gia đình Sinh viên Ngô Thị Đượm Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Phần 1:MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây chuối Musa spp trồng phổ biến 100 nước có diện tích trồng hàng năm khoảng 10 triệu sản lương 88 triệu Cây chuối xếp vào 130 loại ăn đươc đặc biệt quan tâm Chuối loại thực phẩm, đồng thời dược liệu thiên nhiên để hỗ trợ cho nhiều bệnh Trong thời gian gần đây, nhà khoa học bỏ nhiều công sức vào nghiên cứu nhằm tạo giống chuối có chất lượng cao, cho suất phẩm chất tốt mà giá thành chấp nhận để triển khai vào sản xuất quy mô thương mại Vì thế, việc cung cấp giống đủ số lượng, chất lượng vấn đề khó khăn Để sản phẩm chuối trở thành mặt hàng có sức cạnh tranh việc xây dựng vùng trồng tập trung, quy mô lớn, ứng dụng tiến kỹ thuật vào sản xuất cần thiết Chính mà việc cung cấp giống đủ số lượng chất lượng vấn đề cần thiết, muốn để sản phẩm chuối xuất trở thành mặt hàng mạnh có sức cạnh tranh việc xây dụng vùng trồng tập trung, đồn điền lớn ứng dụng tiến kỹ thuật vào sản xuất đáp ứng yêu cầu thực tế sản xuất Kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô phương pháp nhân giống mới, đại tạo số lượng lớn đồng đều, bệnh mà phương pháp thay Trong trình nhân giống chuối nuôi mô giai đoạn nhân nhanh rễ định đến thành công hiệu quy trình Vì vậy, tiến hành đề tài: : “Nghiên cưú hoàn thiện quy trình nhân invitro giống chuối Tây” 1.2 Mục tiêu và ý nghĩa đề tài nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu nghiên cứu Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Hoàn thiện quy trình nhân invitro giống chuối Tây để áp dụng vào sản xuất 1.2.2 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn - Ý nghĩa khoa học: sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào nhằm nâng cao hệ số nhân và chất lượng chồi – Ý nghĩa thực tiễn: Khi nghiên cứu thành công ứng dụng việc nhân giống chuối mốc và tạo giá thể trồng thích hợp làm giảm chi phí đáp ứng nhu cầu cung cấp giống chuối thị trường Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chuối 2.1.1 Nguồn gốc phân bố Chuối phát triển New Ghinea (Simonds, 1966) sau chuyển đến Châu Á – Thái Bình Dương (từ 4000 năm trước công nguyên) Sự mô tả chuối cách rõ ràng sớm người HyLap cổ xưa thực năm 325 trước công nguyên hành trình Alexander đến Ấn Độ (Rcynolds 1927, Kervegant, 1935) Sau khoảng 100 năm sau công nguyên, người Ả Rập thống trị mảnh đất từ Ấn Độ - Tây Ban Nha (Kinder Hilgemann, 1974) [17] Chuối lại quan tâm phát triển chuối ăn tươi ăn luộc đưa đến Bắc Phi phát triển rộng đây, mảnh đất khô cằn (Rcynolds (1927) đưa vào hóa thạch, vẽ hàng động cho chuối trồng phát triển 15 kỷ Châu Phi Trong đó, Đông Phi chủ yếu trồng loại chuối có kiểu gen AA AAA Vùng gần xích đạo phát triển chủ yếu chuối ăn luộc mang kiểu gen AAB Vansina 1984, 1990 [20], [21] giải thích xuất hai loài chuối có kiểu gen AAB Châu Phi Ấn Độ phần thích nghi khí hậu song chủ yếu nhu cầu cấp bách lương thực nước Đến kỷ thứ X ảnh hưởng văn Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học minh Ả Rập, mối quan hệ nước mở rộng, thời kỳ chuối mặt hàng trao đổi mạnh thương trường nước xa Trung Quốc (Davidson, 1974) [16] Người ta cho rằng, chuối di trồng đến Châu Mỹ nhờ người Bồ Đào Nha từ kỷ 14, sau phát triển mạnh vào năm 1607 (Kenvegent, 1935) [12] Trong thời gian gần thu thập nguồn gen phổ biến giống chuối có chất lượng ngày lan rộng, chuối đưa thị trường làm mặt hàng xuất chính, điều gây ý đầu tư nhà khoa học suất chất lượng giống chuối ngày Chuối phát triển rộng khắp giới, không quan trọng việc xuất mà đa dạng hình dáng chủng loại [19] Như vậy, chuối trồng có trình phát triển lịch sử lâu dài, hoang dại rải rác New Ghinea, sau hóa lan rộng, nhờ dân chúng nhà thám hiểm, chinh chiến, Ở Châu Á chuối xuất từ 4000 năm trước công nguyên Chính vậy, nói chuối có nguồn gốc từ Châu Á, điều thể phát triển mạnh chuối ăn tươi chuối ăn luộc thích hợp khí hậu mà đa dạng chủng loại chuối: Philippin có 80 loài, Malaysia 32 loài, New Ghinea 54 loài, Ấn Độ 57 loại … [18] 2.1.2 Phân loại Cây chuối có tên khoa học Musa sp, họ Musaceae, thuộc Scitamincae gồm loài Ensete Musa Chuối ăn thuộc chi Eumusa có nguồn gốc từ loài chuối dại: Musa acuminata Musa balbisiana Sự phân loại giống thuộc chi Eumusa đề cập đến công trình phân loại Kurz (1865), sau học giả Chesmen (1945) gần học giả Simmonds Slepherd (1955) Theo tác giả nghiên cứu chuối (mà đại diện Simmonds, 1966), họ phân loại chủ yếu dựa vào nhiễm sắc thể, theo hệ thống phân loại này chi Eumusa có số Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học nhiễm sắc thể sở là 11, có - 10 loài và có đến 131 giống[17] 2.2 Giới thiệu vài nét chuối Tây Là chuối( “Chuối Tây” thi nghe hay hon) trồng phổ biến nước ta, sản lượng sau chuối tiêu Khả chống chịu chuối tiêu (chống đổ, chịu úng, chịu hạn khá), mùa hè chuối tây chín đủ, phẩm chất khá( tốt ) mùa đông trình chuyển hoá tinh bột thành đường triệt để Vì vậy, vào mùa hè để chuối tây chín kỹ (vỏ mỏng, màu vàng xen kẽ đốm nâu đen) hàm lượng đường cao chuối tiêu Chuối tây có hàm lượng dinh dưỡng sau: nước 70,5%; đường 22,5%; bột 0,8%; đạm 1,5%; axit 0,2%; lipit 0,05%; tro 0,8%; vitamin C 4,0% Nhóm chuối tây (còn có vùng gọi chuối gòn) gồm giống chuối: Tây Hồng, Tây Phấn, Tây Sứ trồng phổ biến nhiều nơi, cao sinh trưởng khoẻ, không kén đất, chịu hạn tốt, khả chịu rét khá, song dễ bị héo rũ, vàng panama, to mập, đậm thơm giống chuối khác Đặc điểm nhóm chuối tây: cao từ 2,5 đến 4,5m, thân màu xanh, dài rộng, mặt thường có lớp phấn trắng (nên có nơi gọi chuối phấn) Gốc hình tim, cuống tròn xong hở Buồng thường có dạng hình trụ, thường có đến 10 nải tuỳ điều kiện dinh dưỡng đất chăm sóc khác Quả tròn, ngắn, thẳng, dài 15 - 18cm, đường kính từ 2,5 - 4,0cm Trong thực tế sản xuất nhân dân tự phân biệt làm hai loại: chuối gòn mã lụa chuối gòn mã vôi[9] Đánh giá chung: chuối tây giống dễ trồng, yêu cầu đất đai chăm sóc phức tạp chuối tiêu chuối ngự, có khả chống gió bão tốt, chịu úng, chịu hạn tốt, tiềm năng suất cao Tuy nhiên, để đạt hiệu kinh tế cao cần phải lựa chọn giống tốt thâm canh ăn có nhiều ưu phát triển thành vùng hàng hoá 2.3 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật nhân giống chuối phương pháp Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1 Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang  Khoa Công Nghệ Sinh Học nuôi cấy mô 2.3.1 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật nhân giống chuối phương pháp nuôi cấy mô giới Chuối đối tượng ăn có hình thức sinh sản vô tính với phương thức nhân giống truyền thống sử dụng chồi nách làm giống trồng hệ Vì vậy, sử dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào nhân giống chuối nghiên cứu, ứng dụng từ lâu nhiều nước giới Malayxia, Australia, Pháp, Trung Quốc… góp phần đáng kể phục vụ ngành sản xuất chuối xuất Theo Reuveni O (1986), kỹ thuật nuôi cấy invitro chuối có số ưu điểm sau (dẫn theo Hoàng Nghĩa Nhạc)[1] - Nhân số lượng lớn giống từ ban đầu xác định tính trạng - Chất lượng giống hoàn toàn bệnh, tránh sâu hại lây nhiễm qua nguồn đất (tuyến trùng) Vì vậy, tiết kiệm chi phí hóa chất cho xử lý đất - Cây nuôi cấy mô trồng vụ với mức độ thâm canh cao, thời gian sinh trưởng ngắn, điều khiển thời gian thu hoạch - Tỷ lệ sống cao điều kiện đồng ruộng(>98%), khả sinh trưởng nhanh có nguồn gốc từ chồi nách - Cây giống invitro phát triển đồng đều, hoa đồng loạt thời gian thu hoạch ngắn - So với giống từ chồi nách, nuôi cấy mô có giá thành rẻ, dễ vận chuyển, dễ nhân giống - Tiện lợi cho việc trao đổi nguồn gen quốc tế Theo Viện Nghiên cứu Chuối Quốc tế đặt Đài Loan nhân giống chuối nuôi cấy mô gồm giai đoạn sau: giai đoạn ban đầu nuôi cấy, giai đoạn nhân nhanh, giai đoạn rễ giai đoạn chuển nhà kính[14] Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Rodriguez-Enriquez cộng sự(1987) cho biết từ chồi chuối ban đầu qua cầy chuyển liên tiếp sinh sản trì năm ống nghiệm[13] Weathers cộng (1988) đề xuất phương pháp nuôi cấy mô chuối cải tiến hệ phun mù Các mô tế bào chuối nuôi cấy đặt giấy lọc vật liệu trơ sinh học, vô trùng phun dung dịch dinh dưỡng qua hệ thống phun mù để vừa điều chỉnh độ ẩm vừa cung cấp dinh dưỡng cho Kết cho thấy, chuối non mọc tốt hơn, mô tế bào chuối tái sinh cao 4-6 tuần, số lượng chồi lớn 3-20 lần, chu kỳ nhân ngắn 20-50% chất lượng tốt so với đối chứng (nghiên cứu môi trường agar thường)[15] Năm 1991, trường Đai học Quảng Tây (Trung Quốc) giới thiệu kỹ thuật đưa chuối nuôi cấy mô vườn ươm sau: ống nghiệm cao 810cm, phơi ống nghiệm ngày ánh sáng tự nhiên, ngày 10 giờ, sau lấy rửa rễ đem trồng bầu đất có đục lỗ kích thước 12-14 x 11-13cm Thành phần hỗn hợp bầu đất bùn khô đập nhỏ + cát + đất tro cỏ rác( tỷ lệ 3:1:1) Môi trường trồng tốt nhà có che Polyetylen, ngày tưới 3-6 lần để trì độ ẩm đạt 80%, cần ý tránh mưa to ánh sáng mạnh Khi đạt 5-8 trồng ruộng sản xuất[4] Theo Kawit- Wanichkul cộng (1993) cho môi trường tốt để nhân giống chuối nuôi cấy mô môi trường MS có bổ sung 15% nước dừa, 1g/lít than hoạt tính 10mg/lít BAP, pH 5,6 nồng độ agar 0,5% Mô phân sinh chuối phát triển thành tháng Và ông cho hỗn hợp bụi xơ dừa + cát + phân + compost + đất(tỉ lệ 1:1:1:0,5:0,5) môi trường tốt cho chuối nuôi cấy mô bén rễ, cứng cây, tác giả kết luận thời gian để vườn ươm tốt nhấ tuần, để lâu đưa đồng ruộng mọc chậm[12] Hiện nay, Đài Loan áp dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào để nhân Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1 Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang  Khoa Công Nghệ Sinh Học nhanh giống chuối với quy mô lớn giúp cho việc trì bảo quản giống chuối thuận lợi Ngoài Đài Loan, chuối nuôi cấy mô phát triển mạnh Úc, Philippines, Costarica… 2.3.2 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật nhân giống chuối phương pháp nuôi cấy mô Việt Nam Các nghiên cứu nhân giống chuối trước trọng biện pháp kỹ thuật nhân củ tách chồi Những kỹ thuật áp dụng phổ biến nhiều vùng miền quy mô sản xuất nhỏ Kỹ thuật nhân giống vô tính chuối phương pháp invitro nước ta thu số kết sau: Quy trình nhân giống chuối in vitro nước ta tác giả Nguyễn Văn Uyển đề xuất năm 1985, bao gồm công đoạn sau: đưa mẫu vào nuôi cấy; tạo nhân nhanh chồi chuối; tạo rễ cây; ươm chuối vườn ươm; bầu chuối trồng ruộng sản xuất Đoàn Thị Ái Thuyền cộng (1993) đưa quy trình nhân giống chuối phương pháp nuôi cấy mô bao gồm công đoạn sau: đưa mẫu vào nuôi cấy→tạo nhân nhanh chồi chuối→tạo rễ cây→ươm chuối vườn ươm→bầu chuối trồng sản xuất Và cho biết chuối nuôi cấy mô vườn ươm 60-70 ngày (luống ươm 30-40 ngày bầu đất 30 ngày) xuất vườn, cao 40-40cm [5] Đỗ Năng Vịnh cộng (1994) cho biết, tỷ lệ tái sinh phụ thuộc vào giống chuối, chất bổ sung vào môi trường nuôi cấy dao động từ 68,42 - 92,31% Hệ số chuối tiêu cao bổ sung BAP từ – mg/lít Nước dừa không biểu ảnh hưởng đến chuối tiêu có ảnh hưởng tốt tới hệ số nhân chuối rừng lượng 10% có mặt BAP với lượng mg/lít [6] Tác giả Đỗ Năng Vịnh (1996) cho biết môi trường MS chứa thiamin HCL mg/lít, nước dừa 10% BAP mg/lít lag thích hợp Thời gian cấy chuyển chồi tối ưu Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học tuần, mật độ cụm chồi/bình (mỗi cụm - chồi) cho hệ số nhân từ 2,5 - 3,0 lần/tháng [6] Theo Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn Hoàng Thị Nga (1995) cho biết hoàn toàn sử dụng phương pháp invitro để nhân nhanh chuối, vật liệu nuôi cấy tốt cho mục đích nhân nhanh mô chồi đỉnh chuối sử dụng kỹ thuật bóc bẹ không cần khử trùng, môi trường thích hợp cho trình khởi động phát sinh chồi ban dầu môi trường MS + (5-7)ppm BA, môi trường nhân nhanh tương tự môi trường khởi động sau nhiều lần cấy chuyển cần giảm hàm lượng BA trí tới ppm bổ sung nước dừa 10% Còn môi trường rễ tốt MS + 0,2 g/lít than hoạt tính nhận xét việc đưa chuối invitro vườn ươm vụ hè thu hoàn toàn thuận lợi, tỷ lệ sống đạt 100% giá thể nghiên cứu là: cát, đất thịt nhẹ,đất + cát + phân chuồng [2] Theo kết Viện Nghiên cứu Chuối Quốc tế (The International Network for Improment of Banana and Plantain), việc chuyển chuối non ống nghiệm vườn ươm giai đoạn làm cho chuối thích nghi với môi trường khí hậu khắc nghiệt Quá trình kéo dài khoảng tuần, lúc ống nghiệm, cách mở dần nắp ống nghiệm để ống nghiệm vùng có ánh sáng, nhiệt độ tự nhiên; sau rửa thạch rễ nhúng vào dung dịch thuốc trừ nấm trước cấy đất Người ta sử dụng màng polyetylen trùm lên luống ươm để giữ ẩm, phải ý làm mát mùa hè Giai đoạn đầu, luống ươm phải che 50% ánh sáng [31] Những chuối non nhúng dithane M - 45 0,3% (80% WP), trồng túi plastic x 10 cm Môi trường trồng là: 60 % khoáng bón vermiculite, 30% cát 10% hữu (tính theo thể tích) Sau trồng, bón cho túi 3g phân tổng hợp (14N 14P - 14K) Thời gian đẻ vườn ươm trước đem đồng ruộng trồng - tháng [30] Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Theo Đỗ Văn Vịnh cộng (1996), chuối nuôi cấy mô cần đưa luống giâm gồm lớp: lớp đất dày 5cm, lớp phân chuồng ải trộn với đất cát pha tỷ lệ 1:1 dày 7cm, lớp cát vàng 5-7cm; mật độ giâm 300400 cây/m2 ; thời gian luống giâm 30 ngày Sau đó, chuối đưa bầu đất có kích thước 7-10 x 10-15cm, thời gian bầu đất từ 45-60 ngày, mùa đông rét để lâu Như vậy, tổng thời gian vườn ươm 2,5-3 tháng lâu Cũng đưa thẳng non bầu đất không cần qua luống giâm Đất đóng bầu có thành phần: phân hữu vi sinh + cát + đất phù sa đất pha cát ( tỷ lệ 1:1:1) tốt [7] Theo Phạm Kim Thu Đặng Thị Vân (1997), từ nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất giống chuối phương pháp nuôi cấy mô, tác giả kết luận môi trường nuôi cấy MS(1962) có bổ sung ppm Thiamin HCl làm tăng khả tái sinh chồi chuối, giá thể cho tỷ lệ sống cao 1/3 đất + 1/3 phân hữu + 1/3 cát đen thời vụ thích hợp từ tháng đến tháng 10 Ứng dụng kết sản xuất hàng triệu giống cung cấp cho tỉnh phía Bắc ( Nam Định, Thái Bình …) [3] Trước đây, trình sản xuất nông nghiệp hầu hết hoạt động gắn liền với tồn đất trồng Đất trở thành nhân tố quan trọng hợp thành môi trường đồng thời nhiều trường hợp lại nhân tố định, tồn tại, phát triển hay hủy diệt nhân tố khác môi trường [17] Thông thường đất có dung trọng tỷ trọng thấp có độ xốp cao đất thường giàu ôxy nên rễ sinh trưởng tốt, hút nhiều nước dưỡng chất cung cấp cho sinh trưởng phát triển phần mặt đất Ngược lại, sinh trưởng đất có độ xốp thấp rễ bị thiếu ôxy, thường lọai đất có dung trọng tỷ trọng cao Cùng với phát triển hệ thống canh tác người ngày sáng tạo giá thể phù hợp với loại hệ thống, loại trồng Giá thể Khóa luận tốt nghiệp 10 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang CT 3.11 CV% LSD0,05 Khoa Công Nghệ Sinh Học 4.71 * 0.4 0.34 Ghi chú : * : Rễ ít lông hút và ít rễ cấp ** : Rễ nhiều lông hút và ít rễ cấp *** : Rễ nhiều lông hút và rễ cấp Qua bảng 4.6 thấy: α - NAA có ảnh hưởng tới khả rễ chất lượng rễ chuối Tây Các công thức bổ sung α - NAA có số rễ cao công thức đối chứng mức ý nghĩa thống kê Nhưng nồng độ α - NAA cao ức chế hình thành rễ làm cho số rễ, chiều dài rễ chất lượng rễ giảm Công thức có bổ sung α - NAA có số rễ chiều dài rễ tốt công thức Khóa luận tốt nghiệp 33 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học đối chứng Tuy nhiên, công thức đối chứng α - NAA rễ điều chứng tỏ chuối rễ điều kiện không bổ sung chất kích thích sinh trưởng số rễ, chất lượng rễ chiều dài rễ tốt Khi bổ sung α - NAA với nồng độ từ 0,2 ppm số rễ 4,52 cao so với công thức đối chứng 3,94 rễ Tiếp tục tăng nồng độ α - NAA từ 0,4 ppm số rễ lại giảm Khi tăng α – NAA lên 0,6 ppm thì số rễ tăng lên đạt 4,99 rễ Tiếp tục tiến hành thí nghiệm tăng α – NAA 0.8 ppm đến 1,0 ppm thì số rễ lại giảm xuống là 4,95 rễ và 4,71 rễ Vậy cao nhất bổ sung 0,6 ppm α – NAA có số rễ là 4,99 rễ Chiều dài rễ trung bình cao công thức bổ sung 0,2 ppm α - NAA đạt chiều dài 3,40 cm cao so với công thức đối chứng mức ý nghĩa thống kê Chất lượng rễ tăng, bổ sung α - NAA nồng độ từ 0,2 ppm đến 0,6 ppm rễ (***) rễ mập, trắng nhiều lông hút, tốt công thức đối chứng không bổ sung α - NAA (**) rễ trung bình, trắng, lông hút Kết luận: Để đáp ứng khả rễ chuối Tây in vitro với số rễ nhiều chất lượng rễ tốt Chúng chọn công thức 0,2 ppm α-NAA có ngày bắt đầu rễ ngày, có số rễ 4,52 rễ rễ có chiều dài trung bình 4,26 cm Đây công thức cho chất lượng rễ tốt (***) rễ mập, rễ trắng có nhiều lông hút Khóa luận tốt nghiệp 34 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Trên sở kết thu từ thí nghiệm có số kết luận sau: Nồng độ BAP thích hợp cho giai đoạn nhân nhanh chồi chuối Tây in vitro 2,6ppm, hệ số nhân đạt 1,41 lần Việc bổ sung casein hydrosate vào môi trường nuôi cấy có tác dụng tốt cho sinh trưởng phát triển chồi chuối Tây, hàm lượng casein hydrosate thích hợp 40mg/lít Môi trường có bổ sung cao nấm men có tác dụng tốt cho sinh trưởng phát triển chồi chuối Tây Hàm lượng cao nấm men thích hợp 50 mg/lít Việc bổ sung nước dừa vào môi trường nuôi cấy có tác dụng tốt cho sinh trưởng phát triển chồi chuối Tây invitro, hàm lượng nước dừa tốt 20% Bổ sung nồng độ định Riboflavin có ảnh hưởng tôt đến chất lượng chồi, hàm lượng Riboflavin sử dụng 1,5 mg/lít Môi trường rễ tạo chuối Tây hoàn chỉnh có bổ sung α - NAA hiệu rễ cao Nồng độ α - NAA thích hợp 0,2 ppm 5.2 Đề nghị Trên sở kết nghiên cứu thời gian thực tập có số đề nghị sau: - Nghiên cứu tiếp thí nghiệm giai đoạn nhân nhanh để đưa công thức hoàn chỉnh giai đoạn nhân nhanh chuối Tây - Bước đầu ứng dụng kết nghiên cứu cho việc nhân giống chuối Tây đáp ứng giống cho sản xuất thực tiễn Khóa luận tốt nghiệp 35 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học - Tiếp tục mở rộng nghiên cứu đối tượng khác TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Hoàng Nghĩa Nhạc, Nghiên cứu tượng biến dị nuôi cấy invitro chuối phục vụ công tác giống địa bàn tỉnh Nghệ An, luận văn thạc sĩ Nông nghiệp, trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội_2004 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Thị Kim Thanh, Mai Thị Tân, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Minh Tấn, nghiên cứu xây dựng quy trình vi nhân giống số trồng có giá trị kinh tế, tuyển tập quy trình nghiên cứu khoa học kỹ thuật Nông nghiệp 1956_1996, nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội _1996 Phạm Thị Kim Thu Đặng Thị Vân, “Nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất cấy giống chuối phương pháp nuôi cấy in vitro”, kết nghiên cứu khoa học Rau 1990_1994, nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội _1995 Trần Thế Tục, Cao Anh Long, Phạm Văn Côn, Hoàng Ngọc Thuận, Đoàn Thế Lư (1988), giáo trình ăn quả, nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Đoàn Thị Ái Thuyền, Nguyễn Thị Quỳnh, Trần Văn Minh, Nguyễn Đức Minh Hùng, Nguyễn Văn Uyển (1993), “Nhân Giống chuối phương pháp cấy mô, Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng”, NXB Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh, tr.68 - 72 Đỗ Văn Vịnh, Lê Huy Hàm, Nguyễn Bình Phú, Đỗ Văn Cát (1944), số yếu tố ảnh hưởng tới hệ số nhân chồi chuối phương pháp nuôi mô, Tạp chí Nông nghiệp Công nghiệp thực phẩm Đỗ Năng Vịnh cộng (1996), Báo cáo nghiệm thu đề KC - 08 - 13, Chương trình công nghệ sinh học KC 08 giai đoạn 1991 -1995, Khu vực miền núi phía Bắc, Viện Di truyền Nông nghiệp, Hà Nội, tr.6-7, 15, 52 Khóa luận tốt nghiệp 36 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Jiang Qing Hai (2004), Hỏi đáp kỹ thuật trồng hoa cảnh nhà (Trần Văn Mão dịch), NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Khắc Thái Sơn (2001), “Nghiên cứu hiệu ứng dụng kỹ thuật thủy canh vào giai đoạn vườn ươm để sản xuất giống chuối dứa cấy mô”, Luận Án Tiến Sỹ, Trường Đại Học Nông ngiệp I, tr 68 - 75 10 Trần Kông Tấu (1993), Bài giảng vật lý thổ nhưỡng, Ha Noi University Viet Nam - Holland cooperation project VH3 11 Nguyễn Vi (2003), Độ phì nhiêu thực tế, NXB Nghệ An Tài liệu tiếng anh 12 Kewit - Wanichkul; Benchamas-Silayoi; Chalongchai - Babpraserth (1993), Evaluation and comparative study of potential of banana varieties from tisue culture propagation, in several location of Thailand, Bangkok (Thailand), 147 leaves 13 Rodriguez Enriquez, MJ; Lorenzo-Martin, JR; Garcia-Rodreguez, -A (19987), “Significance of the physiological history of the explant in the vegetative propagation of banana shoot tips”, Acta - Horticulturae, No.212, vol.I, p.61 68 14 Taiwan banana Reseach Institute, Plant Tissue Culture Couurse, Chiuju, Pingtung, Taiwan 904 Repulic of China, P.3 - 9,19 - 20, 119 15 Weathers, - PJ; Cheethern, - RD; Giles, - KL (1998), “Dramatic in shoot number ad lengths for Musa, Cordyline and Nephrolepis using nutrient mists”, “Acta-Horticulture, Symposium on High Technology in Protected by salinity and cation activity ratios in root zone”, Jornal of horticultural science, 71 (1), p 1293-1298 16 Davidson, 1974), Afica in history Paladir, sr Albans P.366 17 Kinder Hilgemann, (1974), Atlas of wored History.No1.From The Benginning to the Eve ò the French Revolution Pengurra, Hurmands Khóa luận tốt nghiệp 37 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học ưorth.P.299 18 Namaganda, -J.M.C (1994), “ Initiation and quantification of in vitro production of banana shoot proliferation culture”, Afican Crop Science Conference proceedings (Uganda), V 1(1), p 35 - 36, 713 - 718 19 Persley, G.J and De Longhe, E Acds 1978 Banana plantain Breeding Strategies ACIAR proceedings No 21 ACIAR Cainbera 20 Taiwan banana Reseach Institute, Plant Tissue Culture Couurse, Chiuju, Pingtung, Taiwan 904 Repulic of China, P.3 - 9,19 - 20, 119 21 Vansina (1984), Western Bantu Expansion Journal of African History, 25 129 - 145 Khóa luận tốt nghiệp 38 Ngô Thị Đượm_9K1 Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang  Khoa Công Nghệ Sinh Học Phụ lục 1: Xử lý số liệu thí nghiệm Bả ng xửlýsốliệ u vềả nh hưở ng củ a nồ ng độBAP đế n khảnăng nhân nhanh củ a chồ i chuố i Tây invitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D2 25/ 5/** 8:51 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB HSNC 0.92726E-01 0.38887E-03 12 238.45 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D2 25/ 5/** 8:51 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC 0.890000 1.16333 1.03000 1.13000 1.41000 1.22000 SE(N= 3) 0.113852E-01 5%LSD 12DF 0.350818E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D2 25/ 5/** 8:51 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | 39 Khóa luận tốt nghiệp Ngô Thị Đượm_9K1 |  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 18 1.1406 0.16597 0.19720E-01 1.7 0.0000 Bả ng xử lý số liệ u về ả nh hưở ng củ a nồ ng độ casein hydrolysate đế n khả nhân nhanh củ a chồ i chuố i Tây invitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D3 25/ 5/** 8:48 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB HSNC 0.51823E-01 0.32200E-02 10 16.09 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D3 25/ 5/** 8:48 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC 1.87667 2.03667 2.05000 2.21333 1.92000 SE(N= 3) 0.327617E-01 5%LSD 10DF 0.103233 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D3 25/ 5/** 8:48 PAGE Khóa luận tốt nghiệp 40 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 15 2.0193 0.13079 0.56745E-01 2.8 0.0003 | Bả ng xử lý số liệ u về ả nh hưở ng củ a nồ ng độ cao nấ m men đế n khả nhân nhanh củ a chồ i chuố i Tây invitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D4 25/ 5/** 8:53 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB HSNC 0.21433E-01 0.88000E-03 10 24.36 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D4 25/ 5/** 8:53 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC 2.15667 2.01000 2.15667 2.10333 2.24000 Khóa luận tốt nghiệp 41 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học SE(N= 3) 0.171269E-01 5%LSD 10DF 0.539676E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D4 25/ 5/** 8:53 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 15 2.1333 0.82173E-010.29665E-01 1.4 0.0001 | Bả ng xử lý số liệ u về ả nh hưở ng củ a nồ ng độ nướ c dừ a đế n khả nhân nhanh củ a chồ i chuố i Tây invitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D5 25/ 5/** 8:54 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB HSNC 0.59778E-01 0.84164E-03 71.03 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D5 25/ 5/** 8:54 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ Khóa luận tốt nghiệp 42 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang CT$ Khoa Công Nghệ Sinh Học NOS HSNC 2.24000 1.99333 2.23333 2.32000 SE(N= 3) 0.167495E-01 5%LSD 8DF 0.546186E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D5 25/ 5/** 8:54 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 12 2.1967 0.13006 0.29011E-01 1.3 0.0000 | Bả ng xử lý số liệ u về ả nh hưở ng củ a nồ ng độ Riboflavin đế n khả nhân nhanh củ a chồ i chuố i Tây invitro SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D6 25/ 5/** 9: PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ Khóa luận tốt nghiệp 43 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB HSNC 0.29097E-01 0.11000E-02 26.45 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D6 25/ 5/** 9: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC 1.97000 2.10667 2.08333 1.89667 SE(N= 3) 0.191484E-01 5%LSD 8DF 0.624411E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D6 25/ 5/** 9: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 12 2.0142 0.93464E-010.33166E-01 1.6 0.0003 | Bả ng xử lý số liệ u về ả nh hưở ng củ a nồ ng độ α - NAA đế n khả rễ củ a chồ i chuố i Tây invitro Khóa luận tốt nghiệp 44 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE D7 25/ 5/** 10:45 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO FPROB SORE 0.69269 0.38312E-03 12 1808.03 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE D7 25/ 5/** 10:45 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SORE 3.94333 4.52000 3.91000 4.99667 4.95333 4.71000 SE(N= 3) 0.113007E-01 5%LSD 12DF 0.348214E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE D7 25/ 5/** 10:45 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION -1 VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | SORE 18 4.5056 0.45167 0.19573E-01 0.4 0.0000 Khóa luận tốt nghiệp 45 Ngô Thị Đượm_9K1 |  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Khoa Công Nghệ Sinh Học Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập – Tự –Hạnh Phúc BẢN TỰ KIỂM ĐIỂM Kính gửi: Khoa Công Nghệ Sinh Học - Trường Cao đẳng Nông Lâm, đồng kính gửi Bộ môn Công Nghệ Sinh Học -Viện Nghiên cứu Rau Quả Tên : Ngô Thị Đượm Lớp : 9k1 Khoa : Công Nghệ Sinh Học Được đồng ý khoa công nghệ sinh học Trường cao đẳng Nông Lâm phân công đến môn công nghệ sinh học Viện nghiên cứu rau - Hà Nội để thực đề tài “Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân invitro giống chuối Tây” Trong trình thực tập từ ngày 22/02/2010 đến 22/05/2010, nhận thấy có số ưu điểm hạn chế sau : Ưu điểm : - Luôn chấp hành nội quy Viện đề ra, tuân thủ quy tắc vào Viện - Luôn học hỏi kinh nghiệm thực đầy đủ nhiệm vụ giao - Hoàn thành tốt nội dung đề cương đưa - Xác định rõ nội dung, phương hướng, có tinh thần, ý thức thực đề tài tốt Một số hạn chế - Do thời gian thực tập ngắn chưa tích lũy nhiều kinh nghiệm - Khả thành thạo tay nghề chưa cao - Quá trình tiếp xúc với môi trường làm việc hạn chế Giáo viên hướng dẫn Khóa luận tốt nghiệp Bắc Giang, ngày 22 tháng 05 năm 2011 Sinh viên thực 46 Ngô Thị Đượm_9K1  Trường Đại học Nông Lâm Bắc Giang Lã Thị Nguyệt Khóa luận tốt nghiệp Khoa Công Nghệ Sinh Học Ngô Thị Đượm 47 Ngô Thị Đượm_9K1