NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG BẢO QUẢN HỒNG CẦU BẰNG KỸ THUẬT ĐÔNG LẠNH VỚI GLYCEROL NỒNG ĐỘ CAO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢƠNG THỊ KIM DUNG NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG BẢO QUẢN HỒNG CẦU BẰNG KỸ THUẬT ĐÔNG LẠNH VỚI GLYCEROL NỒNG ĐỘ CAO Chuyên ngành: Huyết học truyền máu Mã số: 62720151 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC TP Hồ Chí Minh - Năm 2016 Công trình hoàn thành tại: ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH Người hướng dẫn khoa học: TS.BS Phan Bích Liên PGS.TS Nguyễn Trƣờng Sơn Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ Hội đồng chấm luận án cấp trường họp ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH Vào hồi , ngày tháng năm 2016 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt nam - Thư viện Khoa học tổng hợp TP Hồ Chí Minh - Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Trương Thị Kim Dung, Nguyễn Tấn Bỉnh (2014) “Đánh giá chất lượng hồng cầu bảo quản đông lạnh 80OC với dung dịch glycerol nồng độ 40%” Tạp chí Y học Việt Nam , Tập 419, tr 5-9 Trương Thị Kim Dung, Nguyễn Tấn Bỉnh, Phù Chí Dũng CS (2014) “Bước đầu ứng dụng sử dụng hồng cầu đông lạnh cấp cứu điều trị” Tạp chí Y học Việt Nam , Tập 423, tr 532-539 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Hồng cầu (HC) tế bào máu, nghiên cứu nhằm tìm chất thay chức hồng cầu chưa áp dụng lâm sàng, hồng cầu nói riêng máu nói chung phải lấy từ người hiến máu Tuy nhiên việc bảo quản máu lấy khỏi thể người hiến thời gian lưu trữ tối đa 35 ngày với dung dịch CPDA1, thêm dung dịch bảo quản SAGM trình điều chế khốihồng cầu lắng (HCL), hồng cầu bảo quản 42 ngày nhiệt độ 4OC Kỹ thuật đông lạnh hồng cầu kỹ thuật lưu trữ hồng cầu nhiệt độ đông lạnh sâu – 800C chất bảo quản hồng cầu dung dịch glycerol cao 40% Theo y văn nhiệt độ đông lạnh – 800C, hồng cầu lưu trữ thời gian 10 năm lâu hơn, hồng cầu cần sử dụng giải đông, rửa loại bỏ glycerol sẵn sàng truyền cho người bệnh Với kỹ thuật Ngân hàng máu (NHM) dự trữ lượng máu lớn, đặc biệt nhóm máu hồng cầu nhóm máu RhD (_) hồng cầu có Phenotype R2R2, Fy(a-b+) v.v… đồng thời giữ HC tự thân cho người có nhóm máu Hồng cầu dự trữ thời gian lâu dài cần thiết để đảm bảo cung cấp máu an toàn đáp ứng kịp thời cho điều trị Từ điều trình bày thấy cần thiết thực luận án “Nghiên cứu ứng dụng bảo quản hồng cầu kỹ thuật đông lạnh với Glycerol nồng độ cao” với mục tiêu sau Thiết lập qui trình kỹ thuật xử lý HC để đông lạnh Thiết lập qui trình kỹ thuật giải đông, rửa hồng cầu đông lạnh (HCĐL) loại bỏ glycerol Xác lập tiêu chuẩn chất lượng túi hồng cầu lưu trữ đông lạnh nghiên cứu Đánh giá hiệu sử dụng sản phẩm HCĐL điều trị xây dựng qui trình cung cấp HCĐL nhóm máu RhD âm bệnh viện Truyền máu Huyết học (BV.TMHH) Tính cấp thiết đề tài Trong điều kiện lưu trữ bình thường 40C, hồng cầu lấy từ người hiến máu bảo quản tối đa 42 ngày Những trường hợp nhóm máu nhóm máu RhD âm cần phương pháp lưu trữ thời gian dài để đảm bảo cung cấp máu kịp thời Vì vậy, việc thực đề tài bảo quản hồng cầu kỹ thuật đông lạnh với glycerol nồng độ cao, nhiệt độ -800C giúp lưu trữ hồng cầu thời gian 10 năm vấn đề cần thiết, đáp ứng nhu cầu thực tiễn Việt Nam Mặc dù kỹ thuật đông lạnh hồng cầu glycerol nồng độ cao nhiều nước nghiên cứu, nhiều công trình công bố, Việt Nam chưa có công trình công bố Nghiên cứu ứng dụng cao hiệu có lợi cho người bệnh cần truyền máu Những đóng góp luận án Nghiên cứu chuẩn hóa hoàn chỉnh quy trình đông lạnh hồng cầu glycerol - 800C từ bước điều chế HCL trước glycerol hóa, glycerol hóa, lưu trữ đông lạnh hồng cầu đến bước giải đông rửa loại bỏ glycerol, xác định tiêu chuẩn chất lượng đơn vị HCĐL đánh giá hiệu truyền cho người bệnh, đặc biệt đề tài tìm yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng đơn vị HCĐL đánh giá chất lượng hồng cầu sau lưu trữ hiệu sau truyền người bệnh nên có ý nghĩa khoa học Bố cục luận án: Luận án có 130 trang, bao gồm: đặt vấn đề trang, chương 1: tổng quan tài liệu (34 trang), chương 2: đối tượng phương pháp nghiên cứu (16 trang), chương 3: kết nghiên cứu (38 trang), chương 4: bàn luận (37 trang), kết luận trang kiến nghị trang Có 45 bảng, biểu đồ, 17 hình, sơ đồ Có 127 tài liệu tham khảo (tiếng Việt 31, tiếng Anh 95, tiếng Pháp 01) Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đông lạnh hồng cầu Để trữ tế bào sống thời gian dài tất họat động chức bên tế bào phải ngừng lại Ở nhiệt độ đông lạnh sâu -800C, -1960C (nitơ lỏng), hầu hết phản ứng hóa học không xảy ra, tồn trữ lạnh khóa nhiệt độ lạnh toàn hệ thống men hoạt động tế bào, mục tiêu cao nhiệt độ thấp Thời gian ngừng trôi tế bào trữ đông lạnh Nguy cho tế bào giai đoạn đông lạnh giải đông (là thay đổi trạng thái lỏng đặc) tạo nước đá trình đông lạnh làm tổn thương tế bào Khi tốc độ làm lạnh nhanh, tinh thể nước đá tạo thành bên tế bào, bên bào quan, làm xé rách màng cấu trúc gây chết nhanh chóng tế bào, tốc độ làm lạnh chậm, tinh thể nước đá tạo yếu bên tế bào hậu làm tăng áp lực thẩm thấu nước tinh khiết bị lôi vào tinh thể nước đá Hiện tượng nước tinh khiết có hậu quả: Áp lực thấm thấu bên tế bào tăng, độ ưu trương tăng cao, tế bào tổn thương nước Nhờ phát triển chất bảo vệ tế bào nhiệt độ lạnh chất phòng ngừa tượng tổn thương nước cách kết dính phân tử nước làm chậm liên kết với hạt nước đá làm giảm thiểu gia tăng nồng độ chất hòa tan phần dung dịch bên tế bào trình tạo tinh thể đá, làm giảm số lượng nước hấp thu vào tinh thể nước đá nhiệt độ xác định Đông lạnh hồng cầu thực vào thập niên 1950 chiến tranh Việt nam, mục đích cần lượng máu dự trữ lớn ngăn ngừa việc lây nhiễm viêm gan siêu vi B phủ Mỹ Ngoài đông lạnh HC lúc có mục đích sử dụng thay cho lọc bạch cầu Năm 1966 nghiên cứu lâm sàng an toàn hiệu HCĐL tiến hành bệnh viện Hải quân Hoa Kỳ, 307 đơn vị HCĐL truyền cho thương binh, kiểm tra Hb sau truyền, số lượng tiểu cầu, Hb nước tiểu, bilirubin nồng độ creatinin huyết thanh, kết tương tự với bệnh nhân truyền HC thường, Hb tăng đơn vị, chứng suy thận Các tác giả kết luận việc sử dụng HCĐL quân khả thi chấp nhận sử dụng lâm sàng kỹ thuật lưu trữ HC khẳng định Trước 2001, trình đông lạnh loại bỏ glycerol hồng cầu thực hệ thống hở Quá trình thực phòng xét nghiệm, yêu cầu kỹ thuật cao cho phép lưu trữ hồng cầu sau rửa không 24 nhiệt độ 1°C đến -6°C Đến năm 2001, FDA công nhận hệ thống ACP215, với hệ thống này, trình glycerol hóa hồng cầu thực túi hồng cầu vòng ngày sau lấy máu mà không cần bổ sung chất nuôi dưỡng nào, sau giải đông, loại glycerol bổ sung AS-3 hồng cầu lưu trữ 14 ngày nhiệt 1°C đến 6°C Năm 2003, Bộ Quốc phòng Mỹ bắt đầu mua hệ thống máy ACP215 cho đông lạnh hồng cầu sử dụng toàn giới, đặc biệt Ngân hàng máu quân đội Hải quân Mỹ 1.2 Các phƣơng pháp đông lạnh hồng cầu Có phương pháp sử dụng để đông lạnh hồng cầu 60 năm qua Phương pháp 1: Nghiên cứu sử dụng chất bảo quản đông lạnh HES (Hydroxyethyl starch) nồng độ 14%, hồng cầu đông lạnh DD nitơ lỏng -1960C, PP không cần phải rửa loại bỏ chất bảo quản sau giải đông Phương pháp 2: Sử dụng glycerol nồng độ thấp 20%, hồng cầu đông lạnh dung dịch nitơ lỏng -196oC, rửa loại bỏ glycerol trước truyền cho bệnh nhân Phương pháp 3: Sử dụng glycerol nồng độ cao 40% dự trữ hồng cầu -80oC Sau giải đông loại bỏ glycerol, nồng độ glycerol lại