NGHIÊN CỨU CÁC XANTHANOLID VÀ CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC KHÁC CỦA CÂY KÉ ĐẦU NGỰA MỌC Ở HÀ NỘI

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - T T NG N NT N N Ọ (XANTHIUM STRUMARIUM N Đ T R T N NGỰ Ọ TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60440114 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS PHAN MINH GIANG N - 2014 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN Công trình hoàn thành tại: - h ng th ngh H h c c c hợ ch t t nh n Ngườ hướng dẫn khoa h c: PGS TS Phan Minh Giang Phản bi n Phản bi n TS Tu n Anh GS TS H ng Th nh Hương Luận văn bảo v trước Hộ đồng ch m luận văn thạc sĩ h p tại: Khoa Hóa h c – Trường Đại h c Khoa h c T nhiên – Đại h c Quốc gia Hà Nộ , 4h00 ng y th ng 05 nă Có thể tìm hiểu luận văn tại: Trung tâ Thông t n Thư v n, Đại h c Quốc gia Hà Nội Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN Đ U PH N M TÍNH CẤP THIẾT Ý NG Ĩ ỌC VÀ THỰC TIỄN C A ĐỀ TÀI LUẬN ĂN V tN uốc g n v ng nh t đớ , c nh u đ u c c s nh vật h t tr ển tạ r s h ng h c nh u h s nh th h c nh u Th ch T ch c s ợ ch c V tN h nc g n thống T cận c c nguồn g n v th c vật ậc c , tr ng đ c tr n 00 ng thuốc tr ng thuốc ân g n đ ng v động th c vật v ả tồn Th n nh n Th g I CN 000 th c vật s nh u n ch h c ân g n Trước tr ch nh tr ng v c chữ ,c c nh ch c n ngườ Ng y n y, c c hợ ch t thiên nh n c h ạt t nh s nh h c hân ậ t th c vật đ ngh n c u v đường ch ngh ột ạt c c h thuốc chữ ch th y, c ng ch t h ảng ớ,t th c t n ược h ch t vớ t c ngh ng cn ng nh, th c h nguồn gốc t th n nh n Vớ s hợ hữu ng tr c t h t ng h c tr ng c c ng nh công ch c năng, h t tr ển ng c c c ch t ẫn ng chữ ạnh c h v v Th c t nh h n n y đ u c c c hương h t ng c c hợ ch t th n nh n tr n n t nh u c c hợ ch t th n nh n h c c c ẫn ng s nh h c đ ch ng t đ ng chờ t ng hợ công ch nh u ng ng u n tr ng Tr ng h đ , v c t c u t nh ch t v t c ng c c h c r t nh u nh h c c hợ ch t th n nh n đ ng Tr ng th g th c vật nh K đ u ng h C c Ast r c uôn u, đ ạng v công nh v ng chữ Xanthium strumarium L.) thuộc ch Xanthium, t đ n l thuốc c nh u nước , Trung uốc, Nhật ản, H n uốc, n Độ v V t N Trần Thị Hiền t c ngh n c vớ nh u công c K22 Luận văn Tha ng chữ V tN c c c Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN nh ch c n ngườ K đ u ng , thường c c n n vớ ột số ngh n c u trước đây, th nh h n h h c Xanthium strumarium L t u n c v th n c c s c u t r n ẫn u t t tâ cr t h v ng đ t h ng, ruộng, đường, h c Th u tc t đ n vớ c c nth n , c c ẫn n g u h ạt t nh s nh h c C c c c n gu nth n n, thu h t s u n ch ng u t h n hạn ch tr ng ch Xanthium v c c c h u uả chống v h th n v ung thư đ ch ng t n u n tâ C c t unc nh u tr ng công ngh c c ẫn u t th n nh n uy nh t c th c ng V t N , c h c c ch t chống ung thư C r t t thông t n v th nh h n h strumarium L c c c ch t chống v ng th h c c c n Xanthium c c ộ hận c thuốc tr ng y h c truy n thống c v n y V tN MỤC TIÊU, NHIỆM VỤ C A LUẬN ĂN uận văn N Xanthium strumarium N Nộ u - ngh n c u th nh h n h hân ậ v ây c đ nh c u tr c vớ c c nh K đ u ng hân t ch s c th nh h n h v Xanthium strumarium L c hân ậ c c hợ ch t nth n h v H Nộ v c c h c h c t c c h n ch t nhận được; c đ nh c u tr c c c hợ ch t hân ậ - H v đ r s u ng uy trình ch t c c hợ ch t hữu th n nh n t c nh K đ u ng - h cc ng c c hương h h n đạ Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha ƯƠNG 31 ươ 311Đ Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN NG N ế U, NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ ế Mẫu th c vật s u h thu h hô tr ng ng râ , s u đ s y r a sạch, thái nh v hơ 50 oC Nguyên li u th c vật ngâm chi t với dung môi metanol nhi t độ phòng rồ phân bố ch n l c v c c ung ô c độ phân c c tăng ng ch t h h n, n-h n, đ c ậ ợ ng n ượt tan etyl axetat 312 í ắ ỗ ý hương h ỏ ợ ấ T s c ký lớp m ng hương h s d ng rộng rãi ngành hoá h c, h h n đạ đ ng s nh, h ược…với m c đ ch hân t ch v đ u ch để t ch c c ch t hữu vớ độ nhạy cao, ượng mẫu phân tích nh , thời gian phân tích ng n, k thuật ti n h nh đơn giản chi phí th p Sắc ký c t (CC, FC Mini-C) Tr ng hương h s c ký cột, h tĩnh thường s c g nhồi vào cột s u đ hỗn hợp ch t hoà tan dung môi hữu đư lên cột s c ký Ti ch t đ s c c đ u chư t ch r triển h , nghĩ c c v ng c a t ng h i nhau, r a giải ti p b ng dung môi (t c cho dung môi liên t c chảy qua cột) mà tách hẳn kh i Kết tinh hương h n y ch y u s d ng để tinh ch ch t r n Vi c tinh ch ch t r n b ng k t tinh d a s khác v độ tan c a ch t quan tâm c a tạp ch t dung môi ho c c a h dung môi ch n Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN Chiết pha rắn Chi t pha r n trình chuyển ch t tan (ch t c n phân tích) t pha l ng sang pha r n Đây hương h chu n b mẫu, làm giàu làm mẫu phân tích 313 ấ ú ợ Hi n n y c c hương h hi u nh t để ấ h c c hương h h n đại hữu c đ nh c u trúc hợp ch t hữu Phổ hồng ngoại (IR) Ph hồng ngoạ hương h c đ nh nhóm nguyên t đ c bi t nhóm ch c) rút k t luận v c u phân t trúc c a phân t thông u c c đạ ượng đ c trưng t n số, cường độ hình dạng ph Phổ c ng từ hạt nhân (NMR) Ph cộng hư ng t hạt nhân hương h nghiên c u c u tr c c c hợp ch t hữu cơ, n c nghĩ vật lý hi n đại u n tr ng để xác đ nh c u tr c c c hân t ph c tạp c c hợp ch t th n nh n h hương s d ng ph bi n nh t ph cộng hư ng t hạt nhân r t n (1H-NMR) 13C (13C-NMR) Phổ khố ượng (MS) hương h nghiên c u h khố ượng c nghĩ r t quan tr ng vi c c đ nh c u trúc hợp ch t hữu D a số khối s phân tích ion mảnh thu ph xây d ng c u trúc phân t ho c ch ng minh s đ ng đ n c a công th c hân t 32 ấ ki n ế b Sắc ký lớp mỏng (TLC) Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN S c ký lớp m ng th c hi n m ng tráng sẵn DCAlufolien 60 F254 (Merck) với lớp silica gel dày 0,2 mm n n nhôm, phát hi n v t b ng dung d ch vanilin/H2SO4 đ c v đèn t ngoại ước sóng λ = 254 nm ường (CC) Sắc ký c S c ký cột thường th c hi n ưới tr ng l c c a dung môi - 00 Ch t h p ph cho s c ký cột silica gel Merck (cỡ hạt D r st t, CH rc , Đ c Sắc ký c t nhanh (FC) Phân tách s c ký cột nh nh th c hi n ưới áp su t nén Ch t h p ph cho FC silica gel Merck (cỡ hạt 63- 00 μ rc , D r st t, CH c đường - 00 μm) Đ c) Các cột s c ký th y tinh (Sigma-Aldrich) nh h c nh u s t ch tr ng s c v cột CC v d ng tùy theo khố ượng mẫu c n hân C Sắc ký c t tinh chế (Mini-C) Phân tách s c ký cột tinh ch nh nh s d ng để tinh ch hợp ch t hữu Cột st ur gel Merck (cỡ hạt 15-40 μ t 0,7 c × 0c rc , D r st t, CH nhồi silica Đ c s d ng cho Mini-C ổ ố ượng phun bụ Ph khố ượng phun b ện tử (ESI-MS) đ n t (ESI-MS) ghi thi t b Agilent 6310 Ion Trap h c C-MS Xevo TQ-MS ng từ hạt nhân (NMR) Phổ c Các ph H-NMR (500 MHz) 13 C-N H ghi thi t b Bruker Avance 500 với tetrametyl silan (TMS) ch t chu n nội zero (δ = 0,00) Độ chuyển d ch hoá h c δ biểu th b ng ppm Tính Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN bội c a tín hi u 13 C c đ nh tr n s ph DEPT 90 DEPT 135 33N ệ ậ v c nh tươ K đ u ng thậ v th ng nă đ r sạch, th tạ vườn thuốc t ng, hơ ẫu t u ản ưu tạ th n nh n, Kh H (Xanthium strumarium thu ng th nh H Nộ hô tr ng ng râ h ng th ngh H h c, Trường Đạ h c Kh v s y ẫu s u 50 oC h c c c hợ ch t h c T nh n, Đạ h c uốc g H Nộ Ý NG Ĩ ỌC VÀ THỰC TIỄN C c v c ây t c t uả ngh n c u c uận văn s ng s ch v c h n đạ h ng chữ nh c h u uả đ u tr c K đ u ng , g c c v thuốc ch ước đ u đ ng g v h c c truy n, g ả th ch c c h n n đ nh ch t ượng v c c th nh h n t K đ u ng KẾT CẤU LUẬN ĂN Luận văn ng h n m đ u, danh m c hình, danh m c c c sơ đồ, bảng ký hi u chữ vi t t t, k t luận, tài li u tham khảo, ph l c c chương s u Chương T ng quan Chương Th c nghi m Chương K t thảo luận Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN PH N N I DUNG ƯƠNG 1-TỔNG QUAN 1.1 G T Ệ Ề Đ NGỰ XANTHIUM STRARIUM L.) 1.1 T ậ K đ u ng , c ch g nghĩ Xanthium strumarium L.) c t n H n-V t h c h t , T ươ c nh ng T y , c nh t n n, c c c t n đồng Xanthium canadense, X chinense, X glabratum v ột th c vật tr ng h C c Ast r c Cây K đ u ng thân thả c n g n tr n, c h r nh, c đơn ông thô r cs th h đường 0c , c th y, cư v c c c c n ch c u h nđ g c H c cư gân gốc n , s nh r v ng h y uả t h ạng ượn s ng r t ướ H đ u c c c nh ng n, ch sản s nh h n h nh -1,5 c , thường Trần Thị Hiền n, hình chân v t vớ ột nh n, v ng hân nh nh nh u, thân n n t t ông c ng u tr ng, r t t ông hông đ u v gân h 50- Xanthium strumarium L.) uả g ả hình th , v c - ,5 c , hông đ u nh u, gốc hình t , đ u thuôn nâu, c ng v , t ng đ yg c K22 Luận văn Tha c hình nh u Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN c câu uả thật , đường ọ nh c thuôn nh n h ề ột thả ược c uy t n Th - ng hạt v c thể g đ nh đ u Dân g n thường t, y h c c truy n, ch ng , uả đ hơ n hô ộ hận n nh t ch ch ng h ng t n n u c v để uống chữ n nh t Cây c v ng t nhạt, hơ đ ng, t nh T c đ u, [1] ng t n ộ t r , thân cây, thường uả thật hông đ u , K đ u ng chữ u t đ ng í T t s ngăn t ch uả ể thẳng, hình nh 1.1 ượ ,c -5 ng ược T n cây, uả ng để tr , hơ c độc, đ v h ng, g ả h ểu, nh ch r hô , thông h u, ng ng ho, bình suy n, th m th p, tr phong hàn cảm mạ , tăng huy t , h ng đản, tai ù, xây x ,v ũ, nh lỵ, viêm ruột, viêm c t cung, đ u h ng th p tý, th p ch n, phong ch n, kinh giản, viêm thận c p, viêm h ng, t u độc, ướu c , phát bối, m n nh t l loét R tr tăng huy t áp Sách c có nói: dùng ké phải kiêng th t lợn, n u người s n i qu ng đ Li u dùng uống ké mà dùng th t lợn kh ngày 16- g nước s c ho c tán bột viên uống Tr ng ĩnh n thả , n Ông gh Thương nhĩ t c g i ké, ng t, , hơ độc, tr phong khí, l da, tê th p, qu p chân tay, sáng m t, mát gan, b 12 ương t y í 121 ố nth t n, uả c ản nth n s n v Xanthium strumarium Trần Thị Hiền s s ut r n ct n hân ậ t ch h ạt t nh gây độc t ạnh c K22 Luận văn Tha Được phân lập t XSLD11 Bột vô đ nh hình Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN c c nh hân đ ạn XSLD9, XSLD10 v u tr ng Rf = 0,54 (TLC, silica gel, CH2Cl2- axeton 1:3, v/v), hi n màu tím với thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% VIIa (β-Sitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid) H-NMR (DMSO-d6): δ 0,65 (3H, s, 18-CH3), 0,78 (3H, d, J = 6,5 Hz, 16-CH3), 0,80 (3H, d, J = 6,5 Hz, 27-CH3 ), 0,82 (3H, t, J = 7,0 Hz, 29CH3), 0,90 (3H, d, J = 6,0 Hz, 21-CH3), 0,96 (3H, s, 19-CH3), 3,03 (1H, m), 3,06 (1H, m), 3,11 (1H, m), 3,30-3,50 (4H, m) (H-2ʹ , H-3ʹ , H-4ʹ , H-5ʹ , 2H-6ʹ ), 3,64 (1H, dd, J = 10,0 Hz, 5,5 Hz, H-3), 4,41 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1ʹ ), 5,33 (1H, s, br, H-6) 13 C-NMR (DMSO-d6): δ 11,7 (q, C-18), 11,8 (q, C-29), 18,9 (q, C21), 19,1 (q, C-19, C-26), 19,7 (q, C-27), 21,1 (t, C-11), 22,6 (t, C-28), 23,9 (t, C-15), 24,8 (d, C-20), 27,8 (t, C-23), 28,7 (d, C-23), 29,3 (t, C-16), 31,3 (t, C-7), 31,4 (d, C-8), 31,7 (t, C-2), 33,4 (t, C-22), 35,5 (d, C-20), 36,2 (s, C-10), 36,8 (t, C-1), 38,3 (t, C-12), 39,0 (t, C-12), 41,7 (t, C-4), 45,1 (s, C13), 49,6 (d, C-9), 56,1 (d, C-17), 56,3 (d, C-14), 61,1 (t, C-6ʹ ), 70,1 (d, C4ʹ ), 73,5 (d, C-2ʹ ), 76,73 (d, C-3), 76,76 (d, C-5ʹ ), 76,9 (d, C-3ʹ ), 100,8 (d, C-1ʹ ), 121,2 (d, C-6), 140,4 (s, C-5) VIIb (Stigmasterol 3-O-β-D-glucopyranosid) H-NMR (DMSO-d6): δ 0,67 (3H, s, 18-CH3), 0,78 (3H, d, J = 6,5 Hz, 26-CH3), 0,80 (3H, d, J = 6,5 Hz, 27-CH3 ), 0,82 (3H, t, J = 7,0 Hz, 29CH3), 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, 21-CH3), 0,96 (3H, s, 19-CH3), 3,03 (1H, m), 3,06 (1H, m), 3,11 (1H, m), 3,30-3,50 (4H, m, H-2ʹ , H-3ʹ , H-4ʹ , H-5ʹ , 2H-6ʹ ), 3,64 (1H, dd, J = 10,0 Hz, 5,5 Hz, H-3), 4,41 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1ʹ ), 5,01 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 8,5 Hz, H-23), 5,15 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 8,5 Hz, H-22), 5,33 (1H, s br, H-6) 13 C-NMR (DMSO-d6): δ 11,8 (q, C-18), 12,1 (q, C-29), 18,8 (q, C27), 19,1 (q, C-26), 19,7 (q, C-19), 20,6 (t, C-11), 20,9 (q, C-27), 21,1 (q, C21), 23,9 (t, C-15), 25,5 (t, C-28), 31,3 (t, C-7), 31,4 (d, C-8, C-25), 33,4 (t, C-2), 36,2 (s, C-10), 36,8 (t, C-1), 38,3 (t, C-12), 39,0 (t, C-4), 41,9 (s, C13), 49,6 (d, C-9), 50,6 (d, C-24), 55,4 (d, C-17), 56,3 (d, C-14), 61,1 (t, C6ʹ ), 70,1 (d, C-4ʹ ), 73,5 (d, C-2ʹ ), 76,73 (d, C-3), 76,76 (d, C-5ʹ ), 76,9 (d, C-3ʹ ), 100,8 (d, C-1ʹ ), 121,2 (d, C-6), 129,3 (d, C-23), 138,0 (d, C-22), 140,4 (s, C-5) Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN 1-Tricosanol (VIII) Được hân ậ t nh hân đ ạn XSCD2 Bột vô đ nh hình tr ng Rf = 0,32 (TLC, silica gel, n-h n- t n , vv, h n u u t nhạt vớ thuốc th v nilin/H2SO4 đ c H-NMR (CDCl3): δ 0,88 (3H, t, J = 6,5 Hz, 23-CH3), 1,26 (40H, s br, 3-CH2  22-CH2), 1,58 (2H, m, 2-CH2), 3,64 (2H, t, J = 6,3 Hz, 1-CH2) Artemisidiol A (IX) Được hân ậ t nh hân đ ạn XSCD6 ột vô đ nh hình tr ng Rf = 0,51 (TLC, silica gel, n-h n- t n ,vv,h n ut u vớ thuốc th v n n H2SO4 đ c H-NMR (CDCl3): δ 0,93 (3H, s, 15-CH3), 1,65 (1H, m, H-9), 1,88 (1H, t, J = 12,0 Hz, H-9), 1,91 (3H, s, 14-CH3), 1,95 (3H, s, 2'-CH3), 2,01 2,49 (2H, d br, J = 19,5 Hz, 2H-2), 2,27 (1H, d br, J = 10,5 Hz H-5), 2,51 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 9,5 Hz, H-7), 3,38 (1H, s br, H-1), 3,79 (3H, s, 13OCH3), 4,06 (1H, dd, J = 10,5 Hz, 9,5 Hz, H-6), 5,30 (1H, s br, H-3), 5,41 (1H, ddd, J =12,0 Hz, 11,0 Hz, 5,0 Hz, H-8), 5,74 (1H, s, H-12a), 6,34 (1H, s, H-12b) 13 C-NMR/DEPT (CDCl3): δ 17,4 (q, C-15), 21,1 (q, C-2ʹ ), 24,6 (q, C-14), 32,1 (t, C-2), 38,6 (s, C-10), 39,1 (t, C-9), 45,1 (d, C-5), 52,0 (q, 13OCH3), 57,5 (d, C-7), 70,2 (d, C-8), 71,4 (d, C-6), 73,2 (d, C-1), 128,9 (t, C12), 134,5 (s, C-4), 138,2 (s, C-11), 167,2 (s, C-13), 170,4 (s, C-1ʹ ) Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha 31 ấ Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN ƯƠNG ợ ấ ú T c c h n ch t ẾT ượ T ẬN ậ v c nh c K đ u ng c c hợ ch t - hexacosanyl-2-oxacyclopentanon (I), β-sitosterol (II), betulin (III), 5α,8αepidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol (IV), acid tricosanoic (V), N(1,3,4-trihydroxyheptadec-2-yl)-2-hydroxypentadecanamid (VIa v N- (1,3,4-trihydroxy-8Z-eicos-8-en-2-yl)-2-hydroxypentadecanamid (VIb), βsitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid (VIIa v st g 1-tricosanol (VIII v glucopyranosid (VIIb), st r rt -O-β-Ds A IX đ hân ậ 3-Hexacosanyl-2-oxacyclopentanon (I) Hợ ch t I đ hân ậ ướ tr ng, Rf = 0,37 (TLC, silica gel, n-h t ạng ột vô đ nh hình u n- tOAc , v v v h n u hồng vớ thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% O O2 (CH2)24 CH3 I Ph 13 H-NMR C-NMR c a ch t I cho tín hi u cộng hư ng H 4,49 (1H, quintet, J = 6,0 Hz) [C 81,1 (d)], c a nhóm oxymethin nhóm methylen d ch chuyển v c a nhóm carbonyl (C 177,2) nhóm methylen ột ạch y h trường th ưới ảnh hư ng H 2,52 (2H, t, J = 7,5 Hz) [C 35,6 (t)] H 1,26 (nH, s br) [C 22,7 → vớ nh thy cuối mạch , (t t t c H 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz) [C 14,1 (q)] S cộng hư ng c a nhóm oxymethin H 4,49 C 81,1 cho th y nhóm không thuộc v c u tạo c a nhóm alcohol bậc hai Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN mà c a c u trúc lacton; lacton b th nhóm alkyl mạch Để c đ nh v trí nhóm oxymethin b i ch thước vòng lacton, ph NMR c a I đ so sánh với ph c a ch t lacton vòng cạnh (γstearolacton) vòng cạnh (δ-stearolacton) [14] Các k t cho th y c u v ng γ-lacton (C(C=O) 177,2 C(C-O) 80,9); trúc c a I phù hợp vớ c tr ng trường hợp vòng δ-lacton giá tr l n ượt 171,9 80,6 [14] ch độ đ Do ph ESI-MS n ương v nâ hông ch pic ion giả phân t vớ cường độ tín hi u nhận bi t được, chi u dài y đ mạch hi u c c c đ nh d a s tính toán c n thận cường độ tín c r t n tr n h S u h đ H-N ại tr đ nh H 1,85 (1H), 2,31 (1H) 2,52 (2H), số nhóm methylen vòng lacton y methylen lại c a mạch 5, đ ch t γ- ct n đ c đ nh dẫn xu t t axit tricosanoic D đ , tr n s ki n ph NMR ch t I đ c đ nh 3-hexacosanyl-2-oxacyclopentanon β-Sitosterol (II) Hợp ch t II phân lậ đnc ưới dạng tinh thể hình kim màu tr ng, 5-136 oC, Rf = 0,44 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v/v), hi n màu tím với thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% 21 28 20 24 12 19 11 14 HO 26 25 16 10 23 17 13 29 22 18 27 15 II Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN Hợp ch t n y nhận dạng tr n s so sánh TLC co-TLC với ch t chu n β-sitosterol Betulin (III) Hợ ch t III phân lập t ph n chi t n-hexan (XSLH ưới dạng bột vô đ nh hình màu tr ng, Rf = 0,32 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 4:1, v/v) hi n màu t nhạt với thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% 29 20 30 21 19 H 12 25 26 OH 13 14 16 28 15 10 22 17 11 18 27 HO 23 24 H III Trên ph H-NMR c a ch t III xu t hi n tín hi u cộng hư ng c a nhóm oxymethin nhóm hydroxymethyl H 3,18 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 5,0 Hz), H 3,79 (1H, d, J = 11,0 Hz) 3,33 (1H, d, J = H 4,58 (1H, s br), 4,68 (1H, d, J = 1,5 11,0 Hz), nhóm isopropenyl Hz) 1,68 (3H, s), nhóm methyl bậc ba H 0,76 (3H, s), 0,83 (3H, s), 0,97 (3H, s), 0,98 (3H, s) 1,03 (3H, s) Ph 13 C-NMR DEPT c a III cung c p thêm ki n khẳng đ nh cho c u trúc c a tr t r n bao gồm nhóm oxymethin nă v ng với 30 tín hi u carbon-13 C 79,0 (d), nhóm hydroxymethyl C 60,6 (t), nhóm isopropenyl C 19,1 (q), 109,7 (t) 150,5 (s) Các tín hi u carbon-13 c a nhóm methyl xu t hi n C 14,8 (q), 15,4 (q), 16,0 (q), 16,1 (q) 19,1 (q) Các tín hi u c a 10 nhóm methylen khung carbon cộng hư ng C 18,3 (t), 20,9 (t), 25,2 (t), 27,1 (t), 27,4 (t), 29,2 (t), 29,8 Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN (t), 33,9 (t), 34,3 (t) 38,7 (t) Các tín hi u c a nhóm methin khung carbon xu t hi n C 37,2 (d), 47,8 (d), 48,8 (d), 50,4 (d) 55,3 (d) Các C 37,3 (s), 38,9 (s), 40,9 (s), 42,7 tín hi u c a carbon bậc bốn xu t hi n (s) 47,8 (s) Tr n s ki n ph NMR, c u trúc triterpenoid lupan đ giả thi t cho III d a phân tích tài li u ph NMR c a nhóm ch t lupan [40] S xu t hi n c a nhóm hydroxymethyl nhóm isopropenyl cho th y nhóm methyl nhóm isopropyl c a u n đ bi n đ i thành khung lup-20(29)-en C- đ Hóa lập thể c a nhóm hydroxy c đ nh 3 d a H 3,18 (J = 11,0 Hz, 5,0 Hz), tr n c c tương t c r t n-proton c a H-3 cho th y H- đ nh hướng axial c u dạng b n dạng gh c a C 78,9 vòng cyclohexan độ d ch chuyển hóa h c c a C-3 Do có s trùng hợp hoàn toàn c a ki n ph c ch t betulin c a tài li u tham khảo [40], ki n ph NMR c a III đ III vớ c H-NMR 13C- c đ nh ch t betulin 5α,8α-Epidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol (IV) Hợp ch t IV phân lập t ph n chi t n-hexan (XSLH ưới dạng bột vô đ nh hình màu tr ng, Rf = 0,35 (TLC, silica gel, n-hexan-EtOAc 1:4, v/v) 21 12 11 HO 19 17 H 13 16 14 15 18 10 O H O 28 20 22 23 2425 26 27 IV Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Ph Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN H-NMR c a IV cho th y mạch nhánh c a steroid dãy ergostan với nhóm methyl bậc hai dạng doublet 0,83 (3H, d, J = 7,5 Hz), 0,84 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz), 1,03 (3H, d, J = 6,5 Hz) nố đô C-22/C-23 có c u hình trans (J = 15,0 Hz) 5,18 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 8,0 Hz) 5,23 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 7,5 Hz) Các tín hi u hư ng cộng t r t n tr n perhydrocyclopentanophenanthren nhóm methyl góc v ,0 H, s , r t n c r n 0,61 (3H, s) n c ch tương t c cis với 6,24 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-6), 6,50 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-7), nhóm oxymethin 3,97 (1H, quintet, J = 6,0 Hz, H-3) Các ki n ph H-NMR c a IV phù hợp với c u trúc 5α,8α-epidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol [43] Acid tricosanoic (V) Hợ ch t V hân ậ t ướ ạng ột vô đ nh hình EtOAc 4:1, v/v), hi n ut h n ch t đc t n XSLD u tr ng, Rf = 0,37 (TLC, silica gel, n-hexannhạt với thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% 10 11 12 14 13 18 16 15 17 19 20 21 COOH 22 23 V Các ph 13 H-NMR C-NMR c a V cho th y tín hi u c a nhóm methyl cuối mạch H 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), C 14,1; nhóm methylen c a mạch alkyl dài H 1,26 (38H, s br) 1,63 (2H, quintet, J = 7,5 Hz), C 22,7 → 31,9; nhóm methylen liên k t với nhóm carboxyl H 2,34 (2H, t, J = 7,5 Hz), C 33,9 nhóm carboxyl ny đ c trưng ch Trần Thị Hiền ột c C 178,4 Các tín hi u , thường xu t hi n nhi u tr ng c c hân đ ạn có c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN nhi t độ sôi th p c a ph n chi t t th c vật T ki n ph 1H-NMR, số nh thy n đ c đ nh D đ , V đ N- 4- -2- c đ nh acid tricosanoic -2- N-(1,3,4-trihydroxy-8Z-eicos-8-en-2-yl)-2hydroxypentadecanamid (VI) Ch t VI hân ậ t ột vô đ nh hình h n ut đ nh h n ch t đc t n XSLD u tr ng, Rf = 0,35 (TLC, silica gel, n-h nhạt vớ thuốc th vanilin/H2SO4 đ c ng c c h H-N v SI- S ướ ạng n- tOAc , v v , Ch t n y đ hỗn hợ c c h ch t VIa v VIb O H3 C(CH2 )12 2' 1' NH OH OH OH (CH2 )12 CH3 OH VIa h H-N ,5 H (3H, t, J , c ch t VIa c h nh n t vớ ột ạch y thy n ,7 v nguy n t n tơ c C c ữ nh y n ny Trần Thị Hiền th n ột c u tr c c r hn y ny h t đ [CH3(CH2)12CH(OH)CO + H] , c ột nh , ột nh n 4,0 c nh t vớ H, ch t VIa vớ h + hy r y c v ,s r, ,5 H , ,5 H c đ nh c u tr c c r c đ nh c c nh c H tr ng H-N ạch Để gh Ch u nh n h , (H , y oxymethin [H 3,53 (2H, s br), 4,04 (1H, dd, J hy r ạch H 0,88 thy cuố -hy r y nt SI- S ch độ ương đ c đ nh t c đ nh c nh c n c Ch u c hân ảnh m/z 242,89 thy n tr ng hn ạch - ạch đ c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN c đ nh t m/z 244,87 [CH3(CH2)12CH(OH)CH(OH) + H]+ (2- c aminoheptadecan-1,3,4-triol) D đ , c đ nh tr n c c ữ n h N v S c u tr c c VIa đ N-(1,3,4-trihydroxyheptadec-2-yl)-2-hydroxypentadecanamid O H3 C(CH2 )12 2' 1' NH OH OH OH (CH2)10CH3 (CH2 )3 OH VIb h H-N (3H, t, J = ,5 H , c ch t VIb c h nh n t vớ ột ạch y thy n ,7 v nguy n t n tơ c C c ữ nh nh H tr ng ny ạch S c n h y n , H-N v (H , y oxymethin [H 3,53 (2H, s br), 4,04 (1H, dd, J hy r ạch H 0,88 thy cuố ,s r, ,5 H , ,5 H ột nh th n ột c u tr c c r c đ nh c u tr c c r tc ột nh n 4,0 c nố đô c đ nh u c c t n h u cộng hư ng c , nh t vớ H, ch t VIb vớ h ạch hy r c n đ ột nố đô c c u hình cis H 5,42 (2H, s br) Để gh Ch u c đ nh c c nh c hn y ny h t đ + [CH3(CH2)12CH(OH)CO + H] , hy r y c c c đ nh -hy r y nt tr n c SI- S ch độ ương đ c đ nh t c đ nh c c hân ảnh m/z 242,89 nh thy n tr ng c n c C u tạ c ạch m/z 182,05 [CH3(CH2)10CH=CH + H]+ v ạch n đ , + [CH3(CH2)10CH=CH(CH2)3CH(OH)CH(OH) + H] (2-amino-8Z-eicos-8-en-2yl-1,3,4-triol) Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha D đ , c Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN tr n c c ữ n h N đ nh v S c u tr c c VIb đ N-(1,3,4-trihydroxy-8Z-eicos-8-en-2-yl)-2- hydroxypentadecanamid β-Sitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid Stigmasterol 3-O-β-Dglucopyranosid (VII) Ch t VII đ phân lập t ph n chi t đ c t n XSLD) ưới dạng bột vô đ nh hình màu tr ng, Rf = 0,54 (TLC, silica gel, CH2Cl2axeton 1:3, v/v), hi n màu tím với thuốc th vanilin/H2SO4 đ c 1% 28 18 12 11 19 10 GlcO Ph 22 H 23 24 25 16 14 20 17 13 29 CH2 CH3 21 26 27 15 VIIa VIIb C22= C23 H-NMR (DMSO-d6) c a hỗn hợp VII cho th y hỗn hợp có ch a ch t VIIa (β-sitosterol glucopyranosid) VIIb (stigmaterol glucopyranosid) với tỷ l 3:7 Ph H-NMR c a VIIa cho giả thi t v s liên quan c a hợp ch t với β-sitosterol Trên ph H-NMR tín hi u c a nhóm methyl góc bậc ba [H 0,65 (3H, s, 18-CH3) 0,96 (3H, s, 19-CH3)] có nhóm methyl bậc hai [δH 0,90 (3H, d, J = 6,0 Hz, 21-CH3)], nhóm methyl bậc [δH 0,82 (3H, t, J = 7,0 Hz, 29-CH3)], nhóm isopropyl [δH 0,78 (3H, d, J = 6,5 Hz, 26-CH3) 0,80 (3H, d, J = 6,5 Hz, 27-CH3)] thuộc v mạch nhánh 1-methyl-4-ethyl-5-methylhexyl c a khung stigmastan Một nố đô th ba l n [δH 5,33 (1H, s br, H-6); δC 121,2 (d, C-6) 140,4 (s, C-5)] tín hi u nhận bi t khung stigmast-5-en c a dẫn xu t c a β-sitosterol S d ch chuyển v Trần Thị Hiền h trường th c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN C-3 cho th y c thể phát hi n cho tín hi u proton carbon-13 dẫn xu t ch a oxy c a β-sitosterol C-3 Tín hi u c a proton anomeric [δH 4,41 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-1')] tín hi u c a nhóm oxymethin nhóm oxymethylen cho th y VIIa dẫn xu t c a βglucopyranosid Nhóm methin carbinol d C- δH 3,64 có s đ nh hướng β tr n h ng số tương t c J = 11,0 Hz, 5,5 Hz c a H-3 Tr n s phân tích ph H-NMR, c u trúc c a VIIa xác đ nh β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid, phù hợp với ki n ph đ công bố [33] Các tín hi u đ ng ch u t hi n ph H-NMR c a VIIb v ng trường th p bao gồm tín hi u c a proton olefinic c a nố đô th ba l n H 5,33 (1H, s br, H-6) nhóm methin cacbinol H 3,64 (1H, dd, J = 11,0 Hz, 5,5 Hz, H-3) C p tín hi u c a proton olefinic trí vicinal c a nố đô c c a VIIb xu t hi n ạng hình h c trans (J = 15,0 Hz) v mạch nhánh H 5,01 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 8,5 Hz, H-23) 5,15 (1H, dd, J = 15,0 Hz, 8,5 Hz, H-22) Các tín hi u cộng hư ng c a nhóm methyl c a VIIb xu t hi n dạng chồng khu t ph n t H 0,67 – 0,96 Các phân tích k ưỡng ph 0,99, nhóm methyl bậc 0,82 nhóm isopropyl h c đ nh H ưới dạng doublet (d, J = 6,5 Hz) H ưới dạng triplet (t, J = 7,0 Hz) H C- C-24 n đ ch H 0, v C-19 s cộng hư ng c a nhóm methyl bậc ba C-18 0,96, nhóm methyl bậc hai C- v ng trường cao H 0,78 (3H, d, J = 6,5 Hz, 26-CH3) 0,80 (3H, d, J = 6,5 Hz, 27-CH3) Các ki n ph n y c VIIb hoàn toàn phù hợp với ph c a stigmasterol 3-O-β-D-glucopyranosid 1-Tricosanol (VIII) Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Hợ n- n-h ch t VIII ướ (XSCD Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN hân ậ ạng ột vô đ nh hình t n , vv, h n t h n ch t c nh đ c t n u tr ng, Rf = 0,32 (TLC, silica gel, u t nhạt vớ thuốc th v n n H 2SO4 đ c 23 22 21 19 20 17 18 16 15 13 14 11 12 10 OH VIII Trên h ct n c nh H-N ột nh y c hy r ột y ạch thy n VIII đ độ t n h u tương đố c D đ , VIII u t h n c c t n h u cộng hư ng t thy c thy n c ột nh c ạch y δH 0,88 (3H, t, J ạch δH , δH 3,64 (2H, t, J c đ nh ch s r , ,5 v Ch u ạch ,5 H nh ,5 H , c c thy n tr n cường c ctnh u r t n tr n c c ữ n h N , VIII đ c đ nh 1- tricosanol Artemisidiol A (IX) Hợ ch t IX hân ậ t ướ t n ạng ột vô đ nh hình ,vv,h n ut h n ch t c nh đ c t n XSCD u tr ng, Rf = 0,51 (TLC, silica gel, n-h n- vớ thuốc th v n n H 2SO4 đ c 1% O OH 2' 1' 15 O 10 H 14 OH H3CO 12 11 13 O IX Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Trên ph Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN H-NMR 13 C-NMR c a IX, tín hi u cho khung 15 carbon, nhóm methoxy [H 3,79 (3H, s); C 52,0 (q)], nhóm acetoxy [H 1,95 (3H, s); C 70,4 s v , đ c đ nh Khung carbon c a IX bao gồm nhóm methyl bậc bốn [H 0,93 (3H, s); C 17,4 (q)], nhóm methyl vinylic [H 1,91 (3H, s); 24,6 (q)], nhóm oxymethin [H 3,38 (1H, s br); C 73,2 (d), 4,06 (1H, dd, J = 10,5 Hz, 9,5 Hz); 71,4 (d), 5,41 (1H, ddd, J = 12,0 Hz, 11,0 Hz, 5,0 Hz); 70,2 (d)], liên k t đô th ba l n [H 5,30 (1H, s br ); C 119,9 (d) 134,5 (s)], liên k t đô ạng exomethylen [H 5,74 (1H, s) 6,34 (1H, s); C 128,9 (t) 138,2 (s)], nhóm carbonyl ester [C 167,2 (s)], cho th y c u trúc dạng eudesman c a IX D đ , MS NMR c u trúc c a IX S s nh h c hy r y u s c đ nh dạng u s IX vớ c c hợ ch t u s h hợ h n t n vớ c n- , ch t rt - n- tr n s li u ph s - t n- , A - , - - n n ch th y s thy -8α-acetoxy-1α,6α- ch ng tô hân ậ g n t Artermisia japonica Thunb [18] Trần Thị Hiền c K22 Luận văn Tha Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN ẾT ẬN uận văn thạc sĩ Ngh n c u c c h h c h cc c H Nộ K đ u ng đ c t uả ngh n c u ây H Nộ th ,0 ung H Nộ s u (Xanthium strumarium độ hân c c tăng v c c nv , Ast r c c c h n ch t s vớ ượng nguy n n-hexan u hô , đ c t n h n ch t c nh n-hexan (XSCH, 0,4 v t n XSCD, 0,34 %) Đ để c v ng uy trình ch t để hân ố c c hợ ch t hữu (XSLH, h u su t ch t , đc v c nh K đ u ng v c nh K đ u ng (XSLD, , Ast r c n đ u t n th c h n c c ngh n c u hân ậ s c v thu c c t v c c th nh h n Xanthium strumarium c đ nh c c th nh h n c tr ng Đ nth n hân t ch s c c đ nh c c đ u ô th ch hợ ch ng c c t c c h n ch t n-h ns c ng T C c c h n ch t nhận đ nh t nh c c h n ch t n y v c c h hân t ch s c cột c c h n ch t thuật s c đ u ch đ nv đc t nt hân ậ hợ ch t v c nh K đ u ng H Nộ Đ c đ nh c u tr c c c c hương h h ch t hân ậ c c hợ ch t hân ậ SI-MS, H-NMR, 13 C-N v D T ng C c hợ -hexacosanyl-2-oxacyclopentanon (I), β-sitosterol (II), betulin (III), 5α,8α-epidioxy-(22E,24R)-ergosta-6,22-dien-3β-ol (IV), acid tricosanoic (V), N-(1,3,4-trihydroxyheptadec-2-yl)-2- hydroxypentadecanamid (VIa v N-(1,3,4-trihydroxy-8Z-eicos-8-en-2-yl)2-hydroxypentadecanamid (VIIa v st g Trần Thị Hiền st r (VIb), β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid -O-β-D-glucopyranosid (VIIb t K đ u c K22 Luận văn Tha ng Khoa Hoá học – ĐH KHTN HN v β-sitosterol (II), 1-tricosanol (VIII v rt s A IX t c nh K đ u ng C c hợ ch t I, III, IV, V, VIa, VIb, VIII v IX đ t n hân ậ t Xanthium strumarium Th u, c c ch t VIa v VIb chư công 2014) C c hợ ố uy nh t t ch t nth n tr ng K đ u ng nđ u c c tr c u t ô tả tr ng c c công ố, ch t IX Artermisia japonica Thun c thể u t h n h thu thậ v thờ đ ể th ng 0, nă ượng th đ , chư hân ậ tr ng ngh n c u n y Trần Thị Hiền c K22