Việc cung cấp các NAD(P)H là yếu tố then chốt trong trong việc sản xuất vi sinh vật của xylitol từ xylose. Để tạo điều kiện thuận lợi cho việc bổ sung NAD(P)H, acetaldehyde dehydrogenase 6 (ALD6) và acetyl-CoA synthetase 1 (ACS1) được biểu hiện quá mức đưa vào nấm men tái tổ hợp Saccharomyces cerevisiae từ việc lên men khử Pichia stipitis xylose gen. các hoạt động phân tích bên trong ống nghiệm nhằm xác nhận biểu thức hàm số của cả hai enzyme. Nuôi cấy mẻ trong lượng glucose giới hạn cho phép xác định được khả năng lên men của Saccharomyces cerevisiae BJ3505:dXR chủng biểu hiện tốt ACS1 hoặc ALD6 được thực hiện bằng cách bổ sung đường 600 g / L trong sự hiện diện của 100 g / L xylose Trong số đó, ACS1 với biểu hiện quá mức đã cho kết quả tốt nhất trong sản xuất xylitol: Nồng độ xylitol 91,3 g / L và 1,76 g / L h xylitol, đó là 25% và tăng 11%, so với việc kiểm soát và biểu hiện chủng giống ALD6 tốt. Xem xét những thay đổi của tăng trưởng tế bào,sản phẩm ethanol và acetate, một điều đáng chú ý của sản xuất xylitol bằng ACS1 biểu hiện quá mức dường như được gán cho năng lượng và sự phát sinh ra NAD (P) H thông qua một quá trình chuyển hóa từ acetaldehyde để acetyl-CoA và chu kỳ TCA
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP.HCM KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM Bài báo cáo : BÀI DỰ THI TÁC ĐỘNG CỦA VIỆC QUÁ BIỂU HIỆN CUỘC THI TÌM HIỂU ACETALDEHYDE DEHYDROGENASE AND ACETYL-COA SYNTHETASE TRONG SẢN XUẤT CÁC SẢN PHẨM XYLITOL BẰNG TÁI TỔ HỢP SACCHAROMYCES CEREVISIAE GVHD: Nguyễn Minh Hải Nhóm 5: Vũ Thị Thu Hiền 11116027 Trần Thi Thu Hiền 11116026 Nguyễn Thị Anh Thư Nguyễn Khắc Quí Đào Quang Minh 11116066 11116052 11116038 1ffgg111111116015 Tp HCM, tháng năm 2014 Mục lục Trang TÁC ĐỘNG CỦA VIỆC QUÁ BIỂU HIỆN ACETALDEHYDE DEHYDROGENASE AND ACETYL-COA SYNTHETASE TRONG SẢN XUẤT CÁC SẢN PHẨM XYLITOL BẰNG TÁI TỔ HỢP SACCHAROMYCES CEREVISIAE TÓM TẮT Việc cung cấp NAD(P)H yếu tố then chốt trong việc sản xuất vi sinh vật xylitol từ xylose Để tạo điều kiện thuận lợi cho việc bổ sung NAD(P)H, acetaldehyde dehydrogenase (ALD6) acetyl-CoA synthetase (ACS1) biểu mức đưa vào nấm men tái tổ hợp Saccharomyces cerevisiae từ việc lên men khử Pichia stipitis xylose gen hoạt động phân tích bên ống nghiệm nhằm xác nhận biểu thức hàm số hai enzyme Nuôi cấy mẻ lượng glucose giới hạn cho phép xác định khả lên men Saccharomyces cerevisiae BJ3505:dXR chủng biểu tốt ACS1 ALD6 thực cách bổ sung đường 600 g / L diện 100 g / L xylose Trong số đó, ACS1 với biểu mức cho kết tốt sản xuất xylitol: Nồng độ xylitol 91,3 g / L 1,76 g / L h xylitol, 25% tăng 11%, so với việc kiểm soát biểu chủng giống ALD6 tốt Xem xét thay đổi tăng trưởng tế bào,sản phẩm ethanol acetate, điều đáng ý sản xuất xylitol ACS1 biểu mức dường gán cho lượng phát sinh NAD (P) H thơng qua q trình chuyển hóa từ acetaldehyde để acetyl-CoA chu kỳ TCA Lời giới thiệu Xylitol loại đường thay phổ biến với hàm lượng calo thấp, vị mát vị chất lượng cao (Lee et al., 2009) Các xylitol hàng năm thị trường ước tính 340,000,000 $ năm 2008 (Akinterinwa et al., 2008) Cho đến nay, vi sinh vật khác phát triển để sản xuất xylitol từ xylose: Candida tropicalis Saccharomyces cerevisiae, Escherichia coli Corynebacterium glutamicum (Akinterinwa cộng sự, 2008; Kim cộng sự, 2010; Lee cộng sự, 2000) Trong số đó, loại men GRAS S cerevisiae (Ries, 2009) khơng có cách trao đổi chất nên nên kỹ thuật di truyền biểu thành tái tổ hợp xylitol (XR) Enzyme chuyển hóa xylose (Hình 1) tái tổ hợp S cerevisiae sản xuất xylitol với suất chuyển đổi gần 100% (Akinterinwa et al, 2008; Lee cộng sự, 2000; Chung cộng sự, 2002) Trong đó, XR- trung gian chuyển đổi xylose xylitol yêu cầu NAD (P) H yếu tố đơng thời, việc cung cấp đầy đủ yếu tố quan trọng cho sn xut xylitol hiu qu (Granstr ă om et al., 2007) Trong nghiên cứu trước , điều chế trực tiếp gián tiếp NAD(P)H thực S cerevisiae tái tổ hợp thể gen mã hóa XYL1 với P Trang stipites XR Ví dụ, transhydrogenase hòa tan (EC1.6.1.1) xúc tác chuyển đổi đảo ngược NADH thành NADPH glucose-6-phosphat dehydrogenase enzyme chuyển hóa để tạo NADPH đường pentose phosphate oxy hóa biểu rõ rang S cerevisiae tái tổ hợp sản xuất xylitol (Jeun et al.,2003; Kwon et al.,2006) Sự suy giảm đồng thời hoạt động Phosphoglucose isomerase (EC5.3.1.9) cải thiện glucose-6-dehydrogenase phosphate tăng suất xylitol thông qua thay đổi lượng glucose từ đường phân trình pentose phosphate sản xuất NADPH (Oh et al.,2007).Trong đó, vắng mặt enzym chuyển hóa để xúc tác thêm q trình oxy hóa xylitol, S cerevisiae tái tổ hợp thể XR phải yêu cầu đồng chất cho trình sản xuất tăng trưởng tế bào xylitol Theo bối cảnh này, mức giới hạn glucose trình lên men fed-batch thiết kế để trì mức độ nồng độ glucose canh trường nuôi cấy ,canh trường cho trình ngăn chặn xâm nhập chất dị hóa hấp thu xylose tạo lượng NAD(P)H (Lee etal.,2000; Chung et al.,2002; Bae et al.,2004) Trong nghiên cứu này, hai enzym chuyển hóa liên quan gián tiếp tái tạo đồng yếu tố, NADPH phụ thuộc vào acetaldehyde dehydrogenase acetyl-CoA synthetase (ACS1, EC6.2.1.1) biểu rõ ràng tái tổ hợp S cerevisiae có chứa gen XR stipitis P để điều tra hoạt động chúng sản xuất xylitol Khảo nghiệm hoạt động chúng khẳng định biểu chức hai enzym Lên men fed-batch với chiến lược để trì nồng độ glucose mức thực diện nồng độ xylose cao để đánh giá lực sản xuất xylitol chủng S cerevisiae tái tổ hợp Nguyên liệu phương pháp 2.1 Chủng Plasmid E coli TOP10 (Invitrogen,Carlsbad,CA,USA) sử dụng cho thao tác gen S cerevisiae BJ3505: DXR thể P stipitis xylose reductase (XR) xây dựng để sản xuất xylitol trước (Chung et al.,2002), gen mã hóa XYL1 P stipitis XR tích hợp thể nhiễm sắc nhiều chuỗi δ thể cách chủ yếu chất hoạt hóa GAPDH S cerevisiae CEN.PK2-1D sử dụng cho việc cung cấp DNA nhiễm sắc thể nấm men Plasmid p426GPD p424GPD với chất hoạt hóa GPD CYC1 terminator sử dụng cho thể ALD6 ACS1 Chủng nấm men plasmid sử dụng nghiên cứu liệt kê Bảng 2.2 Thao tác di truyền Các ALD6 gen mã hóa acetaldehyde dehydrogenase ACS1 gen mã hóa acetyl-CoA synthetase PCR-khuếch đại từ nhiễm sắc thể DNA S cerevisiae Thủ tục chung cho thao tác DNA theo báo cáo trước Các oligomer DNA gen cụ thể thiết kế sau: F_ALD6_SpeI and R_ALD6_XmaI for ALD6; Trang F_ACS1_EcoRI and R_ACS1_XhoI cho ACS1 Các trình tự nucleotide ADN mồi mô tả bảng Sau xác nhận kích thước ước tính DNA, sản phẩm PCR với gen ALD6 gen ACS1 plasmid p426GPD p424GPD điều trị enzym giới hạn tương ứng (Bảng 2) Gen ALD6 lắp vào đầu lasmid p426GPD gen ACS1 thực vào plasmid p424GPD kết việc xây dựng plasmid pALD6 pACS1, tương ứng Gen ALD6 gen ACS1 đặt nằm phía sau chất hoạt hóa GDP plasmid Sự thay đổi nấm men theo phương pháp lithium-acetate Hình Sơ đồ biểu diễn glucose chuyển hóa xylose tái tổ hợp S cerevisiae biểu gen XR Tên enzym in nghiêng viết tắt sau: XR, xylose reductase; ADH, alcohol dehydrogenase; ALD6, aldehyde dehydrogenase 6; ACS1, acetyl-CoA synthetase Bảng 1: Chủng S cerevisiae plasmid sử dụng nghiên cứu Trang 2.3 Điều kiện môi truờng nuôi cấy Môi trương LB (10g/Ltryptone, 5g/Ly east extract and 10g/LNaCl) dụng cho trình ni cấy E coli Mơi trường tổng hợp tồn (SC)( 6.7g/Yeast có nguồn gốc nitơ khơng có axit amin ) Sigma,St.Louis, USA) 20g/L glucose) mà không uracil tryptophan sử dụng cho lựa chọn biến nạp Môi trường YPD 10g / L chiết nấm men, 20 g / L peptone glucose 20g / L) sử dụng cho phát triển tế bào tái tổ hợp chủng S cerevisiae sản xuất xylitol Các Glycerol tế bào nấm men lưu trữ -70 độ C cấy vào 5ml môi trường YPD Sau đêm môi trường 30 độ C 200 rpm tủ ấm lắc (Vision,Korea), canh trường nuôi cấy chuyển vào 500 ml bình tqm giác với 100ml mơi trường YPD Sau 12 h nuôi cấy môi trường 30 độ C 200 rpm, tế bào thu hoạch lơ lửng 50 ml nước cất và tế bào huyền phù sử dụng chất cấy vào cho mơi trường ni cấy Đối với sản xuất xylitol, giới hạn glucose trình lên men fed-batch thực theo báo cáo trước với số sửa đổi (Kwon et al.,2006; Oh et al.,2007) 3.7 L-scale phản ứng sinh học (Bioengineering AG,Wald,Switzerland) chứa 1L khối lượng lên men môi trường YPD 100g / L xylose ban đầu Mật độ quang học ban đầu canh trường nuôi cấy đặt vào khoảng 0.5 cách tế bào huyền phù trước nuôi Sau suy giảm glucose ban đầu ngày tăng, 600g/L dung dịch glucose cho vào liên tục theo tỉ lệ 1.8 g / h (Kwon et al.,2006) PH trung bình trì 5,0 cách thêm 2N NaOH N HCl thông qua việc nuôi cấy Tốc độ thổi khí khuấy trộn cố định mức 500 rpm 1vvm Bảng 2: PCR primers sử dụng nghiên cứu Trang Các trang công nhận enzym hạn chế in nghiêng 2.4 Các phương pháp phân tích Khối lượng tế bào khơ ước tính cách đo mật độ quang học 600 nm bước sóng với quang phổ kế (Ultrospec 2000, Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA) tính tốn cách sử dụng phương trình chuyển đổi sau đây: khối lượng tế bào khô (g/L) = 0.30 x OD 600nm Các giá trị nồng độ glucose, xylose, xylitol, ethanol acetate xác định phương pháp sắc ký lỏng hiệu suất cao (Agilent 1100 series LC, USA) trang bị cột phân tích carbohydrate Cột gia nhiệt 60oC tốc độ dịng chảy dung mơi acid sulfuric 5mM đổ vào 0.6mL Phát thực máy dò RI (Aligent 1100 series, USA) Nồng độ protein xác định kit khảo nghiệm protein (Bio-Rad, Richmond, CA, USA) albumin huyết bò (Sigma, USA) sử dụng làm chuẩn 2.5 Phân tích hoạt tính enzyme Để chuẩn bị chiết xuất lượng protein thô, tế bào nấm men thu hoạch vo thành viên lơ lửng dung dịch đệm phosphate (pH 8.0) 50mM có hỗn hợp chất ức chế protein (Roche, Basel, Switzerland) Thể vẩn tế bào pha loãng để điều chỉnh mật độ quang học 20 Sau phối trộn lượng thích hợp acid có khả rửa hạt thủy tinh(0.45-0.52mm, Sigma, USA) với thể vẩn tế bào, ống có chứa thể vẩn xốy nước mạnh phút ướp lạnh nước đá vòng phút Sau bốn lần lặp lại, mảnh vỡ tế bào hạt thủy tinh gỡ bỏ cách ly tâm 1200 rpm oC phút Phần lên bề mặt chứa phần chiết xuất protein thô đưuọc nhặt đem bảo quản oC dành cho việc phân tích hoạt tính enzyme Khảo nghiệm hoạt động aldehyde dehydrogenase (ALD 6) theo báo cáo trước với số sửa đổi (Park cộng sự, 2011) Hỗn hợp khảo nghiệm gồm có 50 mM potassium phosphate buffer (pH=8.0), 50 mM acetaldehyte, 0.4 mM dithiothreitol, mM MgCl2, 0.4 mM NADP+ Hoạt tính nhựa tổng hợp AcetylCoA (ACS1) xác định sử dụng kit R-BioPharm acetate (148261) Hỗp hợp phản ứng chứa 2.7 mM ATP, 0.2 mM coenzyme A, 10 mM potassium phosphate, 1.1 mM NAD+, 9.4 mM L-malate, 5.5 đơn vị L-lamate dehydrogenase 1.4 đơn vị Trang nhựa tổng hợp citrate Sau bổ sung vào hỗn hợp phản ứng chiết xuất thơ, đưuọc theo dõi bước sóng hấp thụ 340 nm Tất phản ứng tiến hành 30oC Một đơn vị (U) ALD6 ACS1 xác định lượng enzyme tham gia oxi hóa 1µmol NADPH giảm bớt 1µmol NAD+, tương tự phút tương ứng với điều kiện Hoạt tính enzyme đặc trưng đưuọc tính cách hoạt động enzyme nồng độ protein tế bào Fig.2 Glucose limited Fed-Batch fermentation of S cerevisiae BJ3505: ∆XR/pALD6 + p424GPD (a,b) BJ3505: ∆XR/p426GPD + pALD6 (c,d) in YLD medium with Trang 100g/L cxylose at 200 rpm, 1vvm 30oC The arrow indicates the start point feeding of 600g/L glucose at 1.8g/h feed rate Symbols are denoted as follows: dry cell mass; glucose; xylitol; xylose; tam giác đen thuận ethanol; tam giác đen ngược acetate Kết bàn luận Để khẳng định chức thể ALD6 ACS1, tế bào S.cerevisiae tái tổ hợp cho phát triển môi trường YPD 100 mL 12h thu protein thơ dịng để chuẩn bị cho khảo nghiệm hoạt tính protein S.cerevisiae BJ3505:∆XR/pALD6 + p424GPD cho thấy hoạt tính acetaldehyte dehydrogenase đặc trưng 8.0 ± 0.2 mU/mg protein BJ3505: ∆XR/p426GPD + pACS1 hoạt động nhựa tổng hợp acetyl CoA đặc trưng 22.7 ± 0.9 mU/mg protein, 1.2 cao so với giá trị tương ứng chủng kiểm soát 1,3 lần Các hoạt động cải tiến xác nhận biểu chức hai enzyme Như nêu, S cerevisiae BJ3505:δXR khơng có enzyme đặc hiệu để chuyển hóa xylitol thành lượng sản xuất cofactor Nhiều nghiên cứu sử dụng xylitol để nuôi cấy S Cerevisiae có gen tái tổ hợp, lựa chọn phương pháp ni bề mặt mơi trường có nồng độ xylose cao (Akinterinwa et al., 2008; Lee et al., 2000; Chung et al., 002; Jeun et al , 2003; Kwon et al., 2006; Oh et al., 2007; Bae et al., 2004) Trong đó, q trình lên men Fed-batch có giới hạn glucose đặc trưng phương pháp hữu ích để tạo lượng sản xuất cofactor, đồng thời ngăn cản tích tụ q nhiều ethanol có ảnh hưởng tiêu cực để sản xuất xylitol (Lee et al., 2000) giảm tác dụng ức chế chuyển hóa xylitol thành glucose (Lee et al., 2002) Để nghiên cứu ảnh hưởng ALD6 ACS1 qua việc sản xuất xylitol, trình lên men Fed-batch giới hạn glucose thực Trong hình 3, sau bổ sung glucose lần tiêu thụ hoàn toàn, nồng độ glucose Dung dịch nuôi liên tục xylose chuyển hóa thành xylitol Nồng độ glucose trì mức độ Các sản phẩm phụ ethanol acetate tích lũy nước dùng nuôi cấy Kết sản xuất xylitol thu trình lên men Fed-batch giới hạn glucose tổng hợp Bảng Lượng xylitol dựa xylose tiêu thụ ước tính 0,92 (g / g) tất trình lên men Trong trường hợp NADPH phụ thuộc vào ALD6 vượt mức (Hình 2c d), 90% xylose ban đầu thêm vào chuyển hóa thành xylitol, nồng độ cuối 13% cao so với control strain Để cải thiện sản xuất xylitol cần bổ sung nhiều NADPH để phản ứng chuyển hóa xylose Trang Hình Giới hạn glucose trình lên men fed-batch S cerevisiae BJ3505:δXR/pACS1+p426GPD (a,b) BJ3505:δXR/pACS1+pALD6 (c,d) môi trường 100 g /L xylose 200 rpm, VVM YPD 30oC Mũi tên điểm bắt đầu bổ sung 600 g /L glucose, tốc độ bổ sung 1,8 g/h Kí hiệu biểu thị sau: , khối lượng tế bào khô, , đường; , xylose; xylitol; , ethanol; acetate Bảng 3: Kết tóm tắt nuôi mẻ lên men chủng S cerevisiae BJ3505: δXR Trang 10 a lượng xylitol tính cho nồng độ xylitol từ điểm bắt đầu sản xuất xylitol (lúc 8h) đến kết thúc trình lên men (60 giờ) ALD6 vượt mức tích lũy acetate cao gấp đơi giảm khối lượng tế bào khơ cuối 30% Tác dụng ức chế acetate vào tăng trưởng tế bào báo cáo nơi khác (Casey cộng sự, 2010; Pampulha et al, 1990) Q trình lên men fed-batch điều kiện có nồng độ glucose xác định S.cerevisiae BJ3505: XR /pACS1 + p426GPD thực để khám phá tác động ACS1 vượt mức Như hình 3a, b ACS1 vượt mức tăng tiêu thụ xylose sản xuất xylitol đáng kể mà khơng có thay đổi đáng kể tăng trưởng tế bào Nồng độ xylitol cuối tăng tương ứng 25% 11%, so người kiểm soát dùng chủng ALD6 vượt mức Đối với hình thành sản phẩm phụ với, ACS1 vượt mức giảm sản xuất ethanol từ 8,0 g / L đến 5,4 g / L khơng có ảnh hưởng tích lũy acetate (khoảng 2,2 g / L) so với đối chứng (Hình 2b) Khơng có ảnh hưởng ACS1 vượt mức sản xuất acetate thông báo báo cáo khác (Akamatsu cộng sự, 2000; De Jong-Gubbels et al., 1998) Lý cho cải thiện đáng kể sản xuất xylitol giảm sản xuất ethanol ACS1 vượt mức không rõ ràng Như đề cập, nhiên, acetyl-CoA synthetase xúc tác chuyển đổi acetate thành acetyl-CoA, khối hợp quan trọng lượng NAD (P) H hệ thơng qua chu kỳ TCA (Hình 1) Vì vậy, vượt mức ACS1 thay đổi thông lượng acetaldehyde từ ethanol tạo acetate, làm gián tiếp sản xuất NAD (P) H acetyl-CoA mà khơng có tích lũy acetate Cuối cùng, q trình lên men fed-batch điều kiện có nồng độ glucose xác định.bằng S.cerevisiae BJ3505: XR /pACS1 + p426GPD cho giá trị nồng độ xylitol 91,3 g / L suất 1,76 g/Lh Trong đó, ACS1vượt mức làm giảm ethanol nồng độ acetate đáng kể 39% 52%, so với người cho ALD6 vượt mức Để có tác động hợp lực ALD6 ACS1 vượt mức sản xuất xylitol, S cerevisiae BJ3505: XRcó chứa plasmid pALD6 pACS1 ni chiến lược q trình lên men tương tự Trang 11 cho ACS1 ALD6 vượt mức Trái với mong đợi, vượt mức ACS1 ALD6 nồng độ xylitol cuối cho 67,9 g / L, 74% 82% giá trị cho biểu tương ứng cho ACS1 ALD6 hoạt động đơn độc Các biểu vượt mức gene giảm khối lượng tế bào cuối vào khoảng 10% tăng nồng độ acetate 39%,so với người cho ACS1vượt mức Một lý cho vượt mức tác động tiêu cực ACS1 ALD6 cân hai enzyme báo cáo trước (Shiba et al., 2007) Trong cân ACS1 ALD6 biểu mức độ tăng acetyl-CoA hợp sản xuất amorphadiene chủng S cerevisiaes tái tổ hợp Một khả khác có liên quan đến định vị ACS1 Để giảm hình thành acetate, acetyl-CoA synthetase nên tồn dung dịch bào tương Mặc dù vị trí acetyl-CoA synthetase chuyển giao sang tế bào chất ty thể, cịn lộn xộn (Akamatsu et al., 2000) Kết Trong nỗ lực để cải thiện sản xuất xylitol điều biến mức độ biểu ALD6 ACS1, trình lên men fed-batch điều kiện có nồng độ glucose xác định tổ hợp S cerevisiae BJ3505 chủng P stipitis XR cerevisiae ALD6 hoặc/và ACS1 thực Trong số đó, S cerevisiae BJ3505: XR/p424GPD + pACS1 cho thấy nồng độ xylitol suất tốt so với dịng khác, mà gán cho thực tế mức cho phép ACS1 sinh nhiều lượng NAD(P)H cho sản xuất xylitol Lời cảm ơn Nghiên cứu hỗ trợ trung tâm sinh khối cao cấp R & D (ABC) Hàn Quốc Grant (2010-0.029.799) tài trợ Bộ Giáo dục, Khoa học Công nghệ Hội đồng Nghiên cứu Khoa học Hàn Quốc & Công nghệ (KRCF) Grant , phần Bộ Thực phẩm, Nông nghiệp, Lâm nghiệp Thủy sản, Hàn Quốc THAM KHẢO Akinterinwa, O., et al., 2008 Metabolic engineering for bioproduction of sugar alcohols Current Opinion in Biotechnology 19, 461–467 Akamatsu, S., et al., 2000 Effects of aldehyde dehydrogenase and acetyl-CoA synthetase on acetate formation in sake mash Journal of Bioscience and Bioengineering 90, 555–560 Trang 12 Bae, S.M., et al., 2004 Production of xylitol by recombinant Saccharomyces cerevisiae containing xylose reductase gene in repeated fed-batch and cellrecycle fermentations Enzyme and Microbial Technology 35, 545–549 Chung, Y.S., et al., 2002 Stable expression of xylose reductase gene enhances xylitol production in recombinant Saccharomyces cerevisiae Enzyme and Microbial Technology 30, 809–816 Casey, E., et al., 2010 Effect of acetic acid and ph on the cofermentation of glucose and xylose to ethanol by a genetically engineered strain of Saccharomyces cerevisiae FEMS Yeast Research 10, 385–393 de Jong-Gubbels, P., et al., 1998 Overproduction of acetyl-coenzyme A synthetase isoenzymes in respiring Saccharomyces cerevisiae cells does not reduce acetate production after exposure to glucose excess FEMS Microbiology Letters 165, 1520 Granstră om, T., et al., 2007 A rare sugar xylitol Part I: the biochemistry and biosynthesis of xylitol Applied Microbiology and Biotechnology 74, 277–281 Jeun, Y.S., et al., 2003 Expression ofAzotobacter vinelandiisoluble transhydrogenase perturbs xylose reductase-mediated conversion of xylose to xylitol by recombinant Saccharomyces cerevisiae Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 26, 251–256 Kim, S.H., et al., 2010 Production of xylitol fromD-xylose and glucose with recombinant Corynebacterium glutamicum Enzyme and Microbial Technology 46, 366–371 Kwon, D.H., et al., 2006 Elevation of glucose 6-phosphate dehydrogenase activity increases xylitol production in recombinant Saccharomyces cerevisiae Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 43, 86–89 Kang, H.K., et al., 2011 Cloning of levansucrase from leuconostoc mesenteroides and its expression in Pichia pastoris Food Science and Biotechnology 20, 277–281 Lee, E.J., et al., 2009 Preventive effect of sugar-free chewing gum containing maltitol on dental cariesin situ Food Science and Biotechnology 18, 432–435 Lee, W.J., et al., 2000 Characterization of two-substrate fermentation processes for xylitol production using recombinant Saccharomyces cerevisiae containing xylose reductase gene Process Biochemistry 35, 1199–1203 Lee, W.J., et al., 2002 Kinetic studies on glucose and xylose transport in Saccharomyces cerevisiae Applied Microbiology and Biotechnology 60, 186–191 Trang 13 Oh, Y.J., et al., 2007 Dual modulation of glucose 6-phosphate metabolism to increase NADPH-dependent xylitol production in recombinant Saccharomyces cerevisiae Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 47, 37–42 Park, S.-E., et al., 2011 Expression of aldehyde dehydrogenase reduces inhibitory effect of furan derivatives on cell growth and ethanol production in Saccharomyces cerevisiae Bioresource Technology 102, 6033–6038 Pampulha, M.E., et al., 1990 Activity of glycolytic enzymes of Saccharomyces cerevisiae in the presence of acetic acid Applied Microbiology and Biotechnology 34, 375–380 Ries, E.F., 2009 Progressive screening of thermostable yeasts for phytase production Food Science and Biotechnology 18, 655–660 Ryu, H.J., et al., 2011 Expression, purification, and characterization of human intestinal maltase secreted from Pichia pastoris Food Science and Biotechnology 20, 561–565 Shiba, Y., et al., 2007 Engineering of the pyruvate dehydrogenase bypass in Saccharomyces cerevisiaefor high-level production of isoprenoids Metabolic Engineering 9, 160–168 Trang 14