Nghiên cứu một số tính chất của enzyme endo β 1,4 glucanase từ bacillus subtilis

VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - LUẬN VĂN THẠC SỸ Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã ngành : 60420201 Đề tài: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH THU NHẬN CHLOROPHYLLTỪ CÂY DIẾP CÁ (Houttuynia Cordata) ỨNG DỤNGTRONG SẢN XUẤT THỰC PHẨM CHỨC NĂNG HỌC VIÊN THỰC HIỆN: DƯƠNG TẤT ĐẠT HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN VĂN ĐẠO Hà Nội - 2015 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, cho phép gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Văn Đạo trực tiếp hướng dẫn tôi, hết lòng truyền đạt kiến thức giúp đỡ suốt trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn quý Thầy Cô, Anh Chị, bạn em phòng Hoá sinh, phòng Vi sinh, phòng Sinh học phân tử… Trung tâm Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng – Viện Đại học Mở Hà Nội hỗ trợ dụng cụ, hoá chất, trang thiết bị, giúp đỡ hết lòng trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp Thạc sỹ dành thời gian xem xét, góp ý sửa chữa để luận văn hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn quý Thầy Cô khoa Đào tạo sau đại học, quý Thầy Cô Khoa Công nghệ sinh học – Viện Đại học Mở Hà Nội dìu dắt, trang bị kiến thức cho suốt trình học tập vừa qua Xin cám ơn bạn lớp động viên, chia sẻ, giúp đỡ thời gian qua Xin cám ơn gia đình chỗ dựa vững giúp vượt qua khó khăn, thử thách học tập, công việc sống Một lần xin cảm ơn tất người, xin gửi lời chào trân trọng Hà Nội, tháng 12 năm 2015 Dương Tất Đạt MỤC LỤC Chương – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 03 1.1 Khái quát chung tầm quan trọng thực phẩm chức (TPCN) 03 1.1.1 Định nghĩa TPCN .03 1.1.2 Tên gọi .04 1.1.3 Phân biệt TPCN với thực phẩm truyền thống thuốc: 06 1.1.3.1 Phân biệt TPCN thực phẩm truyền thống .07 1.1.3.2 Phân biệt TPCN thuốc 08 1.1.4 Chức TPCN .09 1.1.4.1 Tác dụng chống lão hoá, kéo dài tuổi thọ 09 1.1.4.2 Tác dụng tạo sức khoẻ sung mãn .10 1.1.4.3 Tác dụng tăng sức đề kháng, giảm nguy bệnh tật 100 1.1.4.4 Hỗ trợ phòng trị bệnh 111 1.1.4.5 Hỗ trợ làm đẹp 122 1.1.4.6 Góp phần phát triển kinh tế, xã hội, xoá đói giảm nghèo 12 1.2 Sắc tố Chlorophyll (diệp lục tố, chất diệp lục, CI Natural Green 3) .13 1.2.1 Giới thiệu chung .13 1.2.2 Cấu trúc Chlorophyll 16 1.2.3 Phân loại .1717 1.2.3.1 Chlorophyll a (C55H72O5N4Mg) 18 1.2.3.2 Chlorophyll b (C55H70O6N4Mg) 19 1.2.3.3 Chlorophyll c .200 1.2.3.4 Chlorophyll d 200 1.2.4 Công dụng Chlorophyll 211 1.2.4.1 Tác dụng thải độc khỏi thể tránh tác nhân gây ung thư 211 1.2.4.2 Tác dụng cung cấp chất rau xanh, vitamine, khoáng chất cần thiết tốt cho hệ tiêu hóa 22 1.2.4.3 Và hàng loạt công dụng khác diệp lục 222 1.2.5 Sản phẩm TPCN Chl thị trường: 2322 1.3 Tổng quan Diếp cá 224 1.3.1 Đặc điểm thực vật: 24 1.3.2 Phân bố sinh thái 24 1.3.3 Thành phần hoá học 25 1.3.4 Công dụng 25 1.3.4.1 Tác dụng dược lý: 25 1.3.4.1.1 Tác dụng kháng virus: 25 1.3.4.1.2 Tác dụng chống ung thư máu: 26 1.3.4.1.3 Tác dụng chống viêm tuyến vú: 26 1.3.4.1.4 Các công dụng khác: 26 1.3.4.2 Công dụng theo kinh nghiệm dân gian: 27 1.4 Tình hình nghiên cứu, ứng dụng chlorophyll sản xuất thực phẩm chức nước 27 1.5 Tình hình nghiên cứu, ứng dụng chlorophyll sản xuất thực phẩm chức nước 27 Chương – VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .29 2.1 Vật liệu, hoá chất, thiết bị 29 2.1.1 Nguyên liệu cách xử lý sơ 29 2.1.2 Hoá chất 29 2.1.3 Thiết bị 29 2.2 Phương pháp 30 2.2.1 Phương pháp phá vỡ tế bào 30 2.2.1.1 Phá vỡ tế bào phương pháp nghiền học 30 2.2.1.2 Phá vỡ tế bào phương pháp lạnh sâu (Nitơ lỏng) kết hợp phương pháp học .31 2.2.1.3 Phá vỡ tế bào máy xay .31 2.2.2 Phương pháp tách chiết Chlorophyll 3131 2.2.2.1 Phương pháp chiết dịch Chlorophyll sử dụng dung môi hữu 31 2.2.2.2 Phương pháp thu Chl thô phương pháp xử lí nhiệt 33 2.2.3 Phương pháp sấy khô 33 2.2.4 Phương pháp phân tích Chl phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC)34 2.2.5 Phương pháp định lượng Chl phương pháp so màu .35 2.2.5.1 Phương pháp xác định phổ hấp thụ quang Chl dung môi chiết khác .35 2.2.5.2 Xác định hàm lượng Chl dịch chiết phương pháp dựng đường chuẩn 36 2.2.5.3 Phương pháp định lượng Chlorophyll dựa theo công thức tính toán 38 CHƯƠNG : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 400 3.1 Kết khảo sát phổ hấp thụ ánh sáng Chlorophyll .400 3.2 Ảnh hưởng thời gian ngâm đến suất thu nhận Chlorophyll 43 3.3 Ảnh hưởng loại dung môi hữu lên khả chiết dịch Chlorophyll 46 3.4 Kết so sánh hàm lượng Chlorophyll ládiếp cá với số nguyên liệu khác 49 3.5 So sánh hàm lượng Chlorophyll thu phương pháp khác .51 3.6 Kết phân tích Chl phương pháp TLC .52 3.7 Sơ đồ thu nhận Chlorophyll ứng dụng sản xuất thực phẩm chức .54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 I KẾT LUẬN .57 II KIẾN NGHỊ .57 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân biệt TPCN thực phẩm truyền thống………………….… .07 Bảng 1.2 Phân biệt TPCN thuốc…………………… …………………… 08 Bảng 1.3.Phân loại Chlorophyll……………………………………………… 17 Bảng 2.1.Giá trị độ hấp thụ quang OD665nm Chl theo nồng độ chuẩn……….37 Bảng 3.1.Giá trị OD bước sóng khác dịch chiết Chlorophyll chiết tách dung môi khác nhau………………………………………………41 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT TPCN: Thực phẩm chức Chl: Chlorophyll DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1.1.Vai trò TPCN sức khoẻ bệnh tật…………………………… Hình 1.2.TPCN – Thực phẩm truyền thống – Thuốc……………………………….……6 Hình 1.3.Tác dụng chống lão hoá, kéo dài tuổi thọ…………………………….…… Hình 1.4.Tác dụng tạo sức khoẻ sung mãn…………………………………………… 10 Hình 1.5.Hỗ trợ phòng trị bệnh……………………………………………….…… 11 Hình 1.6.Chlorophyll kính hiển vi……………………………………………… 15 Hình 1.7.Hạt diệp lục (Chloroplast)…………………………………………………….15 Hình 1.8.Cấu trúc hoá học Chlorophyll…………………………………………….16 Hình 1.9.Cấu trúc hoá học Chlorophyll a…………………………………… 19 Hình 1.10.Cấu trúc hoá học Chlorophyll b…………………………………………19 Hình 1.11.Cấu trúc hoá học Chlorophyll c…………………………………………20 Hình 1.12.Cấu trúc hoá học Chlorophyll d…………………………………………21 Hình 1.13.Một số sản phẩm Chl thị trường……………………………………… 23 Hình 1.14.Cây diếp cá…………………………………………………………… 24 Hình 1.15.Các hợp chất Chlorophyll phổ biến tự nhiên………………… …… 28 Hình 2.1 Chl tế bào lá…………………………………………………………….30 Hình 3.1.Hình ảnh scan bước sóng hấp phụ Chlorophyll diếp cá từ 400 700nm……………………………………………………………………………………42 Hình 3.2.Ảnh hưởng thời gian lên giá trị OD665 dich Chlorophyll chiết dung môi Ethanol nồng độ khác nhau………………………………………… 44 Hình 3.3: Đồ thị ảnh hưởng thời gian lên khả chiết Chlorophyll chiết dung môi Acetone 100 % 45 Hình 3.4: Đồ thị ảnh hưởng thời gian lên khả chiết Chlorophyll chiết dung môi Methanol 100 % 46 Hình 3.5 So sánh khả chiết dịch Chlorophyll loại dung môi hữu cơ…… 47 Hình 3.6: Biểu đồ so sánh hàm lượng Chlorophyll chiết diếp cá chiết dung môi khác nhau…………………………………………………………………… 48 Hình 3.7.So sánh hàm lượng Chlorophyll diếp cá với nguồn nguyên liệu khác nhau……………………………………………………………………………… 51 Hình 3.8.Biểu đồ so sánh khả chiết Chlorophyll phương pháp khác nhau………………………………………………………………………………………52 Hình 3.9 Kết phân tích Chlorophyll phương pháp TLC…………………… 53 Hình 3.10: Sơ đồ thu chế phẩm Chlorophyll từ diếp cá ứng dụng sản xuất thực phẩm chức năng……………………………………………………………………………… 55 PHẦN MỞ ĐẦU Từ xa xưa thể khỏe mạnh, không bệnh tật niềm mong ước người.Cha ông biết sống với thiên nhiên,sử dụng sản phẩm từ thiên nhiên cách cân hợp lý nguồn khoáng chất, vitamins…để làm cho thể thêm khỏe mạnh, dẻo dai,xinh đẹp Ngày nay, tác động nhiều yếu tố đất đai bạc màu, thực phẩm trải qua nhiều khâu chế biến làm nhiều vi chất dinh dưỡng.Mặt khác, vật nuôi, trồng đựợc chạy theo suất nên phát triển tự nhiên, cân đối, thực phẩm chứa nhiều độc tố phân bón hóa học, thuốc trừ sâu, thuốc kích thích tăng trưởng, chất vào vật nuôi thuốc tăng trọng, thuốc tiêm phòng bệnh dịch, chất hóa học sử dụng công nghiệp thực phẩm…Vì đời thực phẩm chức khắc phục hạn chế trên.Trong vài thập kỷ qua, TPCN phát triển nhanh chóng toàn giới.Thực phẩm chức (TPCN) không cung cấp dinh dưỡng mà có chức phòng chống bệnh tật tăng cường sức khỏe nhờ chất chống oxy hóa (beta-caroten, lycopen, lutein, vitamin C, vitamin E ), chất xơ số thành phần khác Nhờ tham gia vào cấu tạo, thành phần tế bào, tổ chức thể; tham gia xúc tác phản ứng enzym; tổng hợp hormone bảo vệ thể nên vi chất dinh dưỡng (TPCN) có tác dụng chống lão hóa kéo dài tuổi thọ, tác dụng tạo sức khỏe sung mãn; tăng sức đề kháng, giảm nguy bệnh tật; hỗ trợ điều trị bệnh tật làm đẹp cho người Bởi vậy,TPCNđược coi công cụ dự phòng sức khỏe kỷ 21 Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới, nóng ẩm quanh năm,nhiều tầng độ cao, nên hệ động thực vật phong phú Đây làtiền đề tốt để phát triển sản phẩm từ dược liệu.Nguồn dược liệu dồi tảng cho việc hình thành sở sản xuất thực phẩm chức từ dược liệu Trong loại dược liệu phổ biến, diếp cá loại rau ăn phổ biến ngày nhân dân ta sử dụng làm thuốc với nhiều tác dụng: trị táo bón, trĩ, mụn nhọt, lở ngứa nhiều cách như: ăn sống, giã nát xay lấy nước uống Tuy nhiên có số bất tiện việc sử dụng dược liệu khó ăn ăn lượng lớn Mặt khác, việc sử dụng dược liệu thực phẩm hay sản phẩm không chuẩn hoá kiểm soát chặt chẽ gây ảnh hưởng lớn đến tính an toàn hiệu trị liệu Vì mà đề xuất đề tài :“Nghiên cứu quy trình thu nhận Chlorophyll từ diếp cá (Houttuynia cordata) ứng dụng sản xuất thực phẩm chức năng”với nội dung sau: Chiết tách Chlorophyll từ diếp cá Xác định yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng Chlorophyll Xây dựng quy trình thu nhận Chlorophyll Ứng dụng sản xuất thực phẩm chức Ý nghĩa đề tài liệu Góp phẩn nghiên cứu cung cấp sở lý luận tạo chế phẩm từ dược Là sở cho nghiên cứu sau quy mô pilot công nghiệp Tạo sản phẩm thực phẩm chức giúp ích cho sức khỏe cộng đồng Từ bảng kết ta vẽ đư đồ thị ảnh hưởng thờii gian lên hiệu hi suất chiết OD665nm Chlorophyll chiếtt dung môi Acetone 100% 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 120 150 180 210 240 Thời gian (phút) Hình 3.3: Đồ thị ảnh hưởng ng ccủa thời gian lên khả chiếtt Chlorophyll chiết chi dung môi Acetone 100 % Từ bảng đồ thị ta có kkết luận thời gian chiết tối ưu u 150 phút Tương tự nghiên cứuu chi chiết xuất ng dung môi ethanol 100% Để Đ nghiên cứu kỹ khả chiết xuấtt chlorophyll ttừ diếp cá củaa dung môi Methanol 100%, tiến hành nghiên cứu ảảnh hưởng thời gian chiết đối vớii dung môi tới t khả xuất thu nhậnn chlorophyll kho khoảng thời gian từ 120 – 240 phút giá trị OD đo từ m mẫu chiết xuất ghi nhận bảng ng 3.4 Bảng 3.4: Giá trị OD tạii b bước sóng 665nm a Clorophyll chiết chi dung môi Methanol 100% kho khoảng thời gian khác Methanol 100% OD Thờii gian ( phút) 120 150 180 210 240 0,226 0,2263 0,2781 0,2712 0,2664 0,2571 45 Từ bảng kết ta vẽ đư đồ thị ảnh hưởng thờii gian lên hiệu hi suất chiết Chlorophyll chiếtt dung môi methnol 100% 0.3 OD665nm 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 120 150 180 210 240 Thời gian (phút) Hình 3.4: Đồ thị ảnh hưởng ng ccủa thời gian lên khả chiếtt Chlorophyll chiết chi dung môi Methanol 100 % Từ kết miêu tả bi biểu đồ ta thấy thời gian thích hợp p cho việc vi chiết Chlorphyll diếpp cá bbằng loại dung môi nằm khoảng ng 150 phút (2 tiếng rưỡi) chiết ngâm So với khoảngthời gian tốii ưu để chiết dịch ch Chlorophyll có nha đam, rau rền Thạc sĩ Trần Thị Ng Ngọc Châu (2005) Đại học Quốcc Gia Thành phố ph Hồ Chí Minh (180 phút), thờii gian chi chiết dịch Chlorophyll giới củaa nhà khoa học h Kamark chủng vi tảoo tên Nannochloropsis gaditana dung môi chiết chi ethanol thời gian tối ưu 24 gi thời gian chiết tách củaa diếp di cá nhanh nhiều u Nguyên nhân đặc điểm tế bào diếp cá mềm m thành tế t bào cấu tạo bởii xenlulose nên vi việc nghiền diếp cá nhỏ tinh tới mứ ức cần thiết xuất thu nhậnn cao dễ dàng 3.3 Ảnh hưởng loạii dung môi h hữu lên khả chiết dịch ch Chlorophyll Sau tiếnn hành thí nghi nghiệm chiết dịch ch Chlorophyll gam nguyên liệu li diếp cá loạii dung môi chi chiết khác Tiến hành thu dịch ch chiết chi pha 46 loãng thích hợp đo độ hấp thụ quang dung dich bước sóng cần thiết, áp dụng công thức tính toán ta tính hàm lượng Chlorophyll có dịch chiết Dựa vào phân tích phần phổ hấp thụ ánh sáng dịch Chlorophyll chiết dung môi khác nhau, ta phần khẳng định khả chiết dịch Chlorophyll loại dung môi dung môi hữu sử dụng khả chiết dịch chlorophyll có diếp cá tăng dần theo thứ tự: Ethanol 70%, Ethanol 80%, Ethanol 90%, methanol 100%, Ethanol 96% Acetone 100% 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 Aceton MeOH EtOH 96º EtOH 90º EtOH 70º EtOH 80º Hình 3.5 So sánh khả chiết dịch Chlorophyll loại dung môi hữu Kết hàm lượng Chlorophyll chiết diếp cá dung môi khác thể bảng 3.5 hình 3.6 47 Bảng 3.5: Hàm lượng ng Chlorophyll chi chiết diếp cá ng dung môi khác Dung môi chiết Hàm lượng Chlorohyll Hiệu suấtt so với v nguyên liệu u tươi tươ (%) (mg/g) Ethanol 70% 1,862 0,1862 0,186 Ethanol 80% 2,441 0,2441 0,244 Ethanol 90% 2,733 0,2733 0,273 Ethanol 96% 10,145 1,0145 1,014 Methanol 100% 5,880 0,588 Acetone 100% 18,973 1,8973 1,897 Từ bảng kết trên, ta vvẽ biểu đồ so sánh hàm lượng ng chlorophyll Hàm lượng Chlorophyll (mg/g) dung môi chiếtt khác nh sau: 20 15 10 Ethanol 70% Ethanol 80% Ethanol 90% Ethanol Methanol Acetone 96% 100% 100% Dung môi chiết Hình 3.6: Biểu đồ so sánh hàm llượng Chlorophyll chiếtt diếp di cá chiết bằằng dung môi khác 48 Như 10 ml dịch chiết ban đầu với Acetone 100% từ g diếp cá ta thu 18,973 mg Chlorophyll, khả chiết dịch chlorophyll dung môi Acetone 100% cao Với Methanol Ethanol khả chiết Acetone Cụ thể với methanol ta chiết 5,88mg/1gam diếp cá, với Ethanol khả chiết cao methanol (10,14mg/g) Lượng Chlorophyll chiết dung môi Ethanol phu thuộc vào nồng độ, nồng độ cao khả chiết cao, lượng Chlorophyll thu nhiều 3.4 Kết so sánh hàm lượng Chlorophyll ládiếp cá với số nguyên liệu khác Trong loại thực vật khác hàm lượng chlorophyll khác nhu cầu quang hợp chúng khác Để hiểu rõ lý giải cho khác công trình nghiên cứu thu nhận chlorophyll từ loại khác điều kiện sinh trưởng, chăm sóc, mùa sinh trưởng,…khác cho hàm lượng Chlorophyl nguyên liệu tươi khác thể bảng 3.6 hình 3.7 Bảng 3.6: So sánh hàm lượng Chlorophyll diếp cá với nguồn nguyên liệu khác Nguyên liệu Lá diếp cá Lá chè Hàm lượng Chl (mg/g) Chú thích 18,973 8,14 Ngô Thị Quý (2014), Viện ĐH Mở HN “Tách chiết Chlorophyll từ chè xanh ứng dụng sản xuất TPCN” 49 Vỏ nha đam 15,24 Trần Thị Ngọc Châu (2010), ĐH KHTN- ĐH Quốc gia Tp.HCM “Tận dụng phế liệu công nghiệp có nguồn gốc từ thực vật thu số sản phẩm có giá trị” Gladophora glomerata 3,87 Ulva rigita 3,675 Codicoum tomemtosum 3,55 Sukran Dere, Tohit Gunes, Risvan Sivasi.14/6/1996 Research article “Spectrophotometric determination of Chlorophyll a, b and total carotenoid of some algae species using diffirent solvent” Cladostephus 2,55 (Chl veticillastus a) Hàm lượng Chlorophyll có diếp cá cao hàm lượng Chlorophyll có chè vỏ nha đam So với loại tảo rong biển Gladophora glomerata, Ulva rigita, Codicoum tomemtosum, Cladostephus veticillatus… (là loài biết đến cho hàm lượng Chlorophyll cao nghiên cứu việc sản xuất thực phẩm chức giới) Chlorophyll diếp cá cao chúng.Từ bảng ta vẽ biểu đồ so sánh hàm lượng Chlorophyll nguồn nguyên liệu khác sau: 50 Hàm lượng Chl (mg/g) 20 15 10 Hình 3.7.So sánh hàm lư ượng Chlorophyll diếp cá vớii nh nguồn nguyên liệu khác 3.5 So sánh hàm lượng ng Chlorophyll thu phương ng pháp khác Sau thực chiếtt Chlorophyll bbằng hai phương ng pháp khác sử dụng dung môi chiếtt phươ phương pháp xử lí nhiệt, tiến hành định lượng ng Chlorophyll thu theo phương ương pháp ta th thấy hàm lượng ng Chlorophyll thu không giống nhau, nữaa vvới phương pháp ng ta tiến ti hành theo ng cách khác kkết thu Chlorophyll ng khác Ta th thấy rõ qua đồ thị sau: 51 Hàm lượng Chl (mg/g) 20 15 10 xử lý nhiệt Acetone(cát) Acetone(N2 lỏng) Phương pháp Hình 3.8.Biểu đồ so sánh kh khả chiết Chlorophyll ng phương ph pháp khác Ta thấy với phương ương pháp chi chiết ng dung môi Acetone 100% hiệu hi chiết Chlorophyll cao nhấtt 18,9 18,973mg/g, với phương pháp sử dụng d dung môi Acetone 100% ng có ssự trợ giúp Nito kết định lượng ng lại l thấp 17,847 mg/g, nguyên nhân ttrong trình xử lí chè với Nito lỏ ỏng, diếp cá chưa thực để nư nước khiến cho trình nghiền vớii nito lỏng l đạt hiệu suất chưa cao Với phương pháp xử lí nhi nhiệt hàm lượng Chlorophyll thu đượcc thấp th so với phương ng pháp thu Chlorophyl Chlorophyll ng dung môi Trong trình thực th nghiệm nhận thấyy nguyên nhân trình llọc lượng ng Chlorophyll bị b nhiều không giữ lại vảii llọc hay chlorophyll lẫn phần bã lọc bỏ lần 3.6 Kết phân tích Chl b phương pháp TLC Qua trình phân tích chlorophyll chi chiết tách ng dung môi sắc s kí lớp mỏng (TLC)tôi nhận thấyy hàm llượng ng chlorophyll a chlorophyll b 52 chế phẩm chứa số ch chất khác xanthophyll, carotene polysacarit polysacarit Ngoài chế phẩm m thô có th thể có thành phần n khác nh cafein, khoáng, polyphenol, ch chất sơ…Kết chạy sắc kí thể hi hìnhsau: Hình 3.9 Kết phân tích Chlorophyll b phương ng pháp TLC Hệ sắc kí với pha động hhỗn hợp Acetone Hexane với tỉ lệ thể tích 7:3 (v : v) phân tách rõ ràng thành ph phần chất chế Chlorophyll phyll Trong trình thực thí nghiệm m ta th thấy có nhiều yếu tố ảnh hưởng ng tới t hệ số di chuyển Rf phương ng pháp ssắc kí lớp mỏng ảnh hưởng tới khả nă phân tách như: Chất lượng hoạt tính củủa chất hấp thụ định đến thành công c trình tách Rf đặc trưng ưng cho vvị trí vệt chất lớp mỏng, ng, v hoạt tính chất hấp thụ rấtt quan tr trọng,khi chất lượng tốt hoạtt tính lực l hấp phụ cao, giá trị Rf đư trì mức độ trung bình chênh lệch l hợp lí vị trí Chất hấpp ph phụ phải chọn cho cấu tử cần n phải ph phân tích 53 tách tốt, không tạo kết tủa hay tạo kết dính Chất hấp thụ sử dụng thích hợp cho dịch chiết chlorophyll từ diếp cá silicagel,chất hấp phụ ưa nước có tính trao đổi ion Độ dày lớp mỏng ảnh hưởng tới hệ số di chuyển, thường độ dày khoảng 0.1-0.5 mm phù hợp nhất, lớp mỏng trải dày vệt chất di chuyển chậm bị kéo xuống thấp Rf nhỏ Nếu lớp mỏng dày vệt chất bị kéo lên cao Rf lớn Chất lượng độ tinh khiết dịch chlorophyll, hợp chất không bay hấp thụ mỏng tào đường khác khiến ta không xác định đc Rf Lượng mẫu hay kích thước điểm xuất phát ảnh hưởng tới khả tách Nếu lượng chất lớn làm cho vệt sắc kí lớn kéo dài, vết chất có trị số Rf gần bị chồng chéo lên Lượng mẫu ta nên đua lên mỏng 0.1-50mg dạng dịch dung môi hay nước Thể tích dung dịch từ 0.001-0.005ml trường hợp đưa mẫu lên mỏng dạng điểm 0.10.2ml đưa lên dạng vạch Đường xuất phát cách mép mỏng từ 1.5-2cm cách bề mặt dung môi 0.8-1cm thích hợp Các vết chấm nhỏ đường kính 2-6mm cách 15mm Các vết cạch bìa cắt cách 1cm.Độ ẩm pha tĩnh nhiệt độ pha động ảnh hưởng đến khả chạy sắc kí 3.7 Sơ đồ thu nhận Chlorophyll ứng dụng sản xuất thực phẩm chức Từ nghiên cứu trên, đề xuất quy trình chiết tách chlorophyll từ diếp cá để thu Chlorophyll nguyên liệu dùng loại dung môi chiết hữu khác nhau, cho hiệu suất chiết cao Acetone, Methanol… Tuy nhiên với mục đích thu chế phẩm phục vụ cho việc sản xuất thực phẩm chức nên xin 54 đưa quy trình chiết dịch Chlorophyll diếp cá phương pháp xử lí nhiệt Hàm lượng Chlorophyll chiết thấp so với dung môi hữu chúng không chứa chất độc hại phương pháp đơn giản Sơ đồ thu Chlorophyll phương pháp xử lí nhiệt sau: DIẾP CÁ SƠ CHẾ XAY, NGHIỀN LỌC ĐUN SÔI LỌC CHL LỎNG SẤY KHÔ CHL BỘT Hình 3.10: Sơ đồ thu chế phẩm Chlorophyll từ diếp cá ứng dụng sản xuất thực phẩm chức Giải thích quy trình: 55 - Bước 1: Thu mua Diếp cá - Bước 2,Sơ chế: Lá Diếp cá sau thu mua chợ mang tuyển chọn lấy tươi, không sâu bệnh… Lá chọn không già non Sau tiến hành xử lí sơ bộvà rửa - Bước 3,Xay, nghiền: Cho vào máy xay cho lượng nước định xay nhuyễn - Bước 4, Lọc:Hỗn hợp Diếp cá sau xay mang lọc lấy phần dịch, bỏ bã Trong trường hợp bã màu xanh ta tiến hành xay lượthai, cho bã vào máy xay thêm nước vào xay Làm bã màu vàng nhạt - Bước 5, Đun sôi: Tiến hành xử lí dịch màu xanh thu nhiệt độ: Cho dịch xanh thu lên bếp đun tới thấy lượng Chlorophyll mặt nước - Bước 6, Lọc:Lọc lần hai, bỏ nước thu phần giữ lại vải lọc.Phần giữ lại vải lọc Chlorophyll thô - Bước 7, Sấy khô: Tùy vào mục đích sử dụng ta thu chế phẩm dạng khác Có thể thu chế phẩm dạng dịch (liquid) cách pha chế phẩm nước cất đem trùng nhiệt độ 70oC Có thể sấy phun nhiệt độ 60oC khối lượng không đổi thu dạng bột mịn đem đóng gói túi nhỏ 3g hay dạng viên nang Chế phẩm Chlorophyll thu được sử dụng loại nước giải khát, tăng cường sức khỏe, dùng để nhuộm màu thực phẩm, bổ sung vào sữa chua, bánh giúp tăng vị ngon tạo màu sắc hấp dẫn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 I KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu chiết tách thu nhận chlorophyll từ diếp cá, thu kết luận sau: Phổ hấp thụ ánh sáng Chlorophyll 665nm Thời gian tốt để chiết dịch Chlorophyll dung môi hữu 150 phút Lượng Chlorophyll thu từ diếp cá chiết xuất dung môi Ethanol, Methanol Acetone tương đương 10,145 mg/g, 5,88mg/g 18,973 mg/g.Hàm lượng Chlorophyll thu phương pháp xử lí nhiệt 14,143 mg/g Xây dựng quy trình thu Chlorophyll ứng dụng sản xuất thực phẩm chức quy mô công nghiệp với hiệu suất cao nhất, dễ dàng phương pháp xử lý nhiệt nên dễ dàng đưa vào sản xuất quy mô lớn với máy móc thiết bị dễ dàng tìm kiếm, chế tạo thị trường II KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu để cải tiến quy trình công nghệ, tìm thêm phương pháp tách chiết để tối ưu quy trình sản xuất Chlo từ Diếp cá Nghiên cứu quy trình sản xuất Chl từ loại nguyên liệu khác ứng dụng sản xuất TPCN quy mô công nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 1.Tài liệu tiếng việt 1- Dương Thanh Liêm (2009), Thực phẩm chức sức khỏe bền vững, NXB ĐH Nông Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh 2- Trần Mạnh Cường(2011), Trường Đại học Khoa học tự nhiên, áp dụng phương pháp sắc kí cột sắc kí lớp mỏng vào giảng dạy hóa phổ thong 3- Nguyễn Tài Lương (2005) Thực phẩm chức năng-Thức ăn người kỷ 21 4- Nguyễn Hải Hà (2006), Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà, Luận văn Thạc sĩ, Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh 5- Ngô Hữu Hợp (1984), Hóa sinh chè, Nhà xuất Giáo dục 6- Nguyễn Thị Kim Oanh (2014) Nghiên cứu trích ly polyphenol từ chè để ứng dụng vào thực phẩm dược phẩm,Luận văn thạc sĩ, Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh 2.Tài liệu tiếng anh 58 7-What are Functional Food Nutraceuticals ? Agriculture Agri- Food Canada – May, Paul “Chlorophyll” university of Bristol html – Delepine,Marcel (September 1951): “Joshep Pelletierth, Joshep Caventou” Joumal of Chemical Education 28(9): 454 Bibcode :1951 Jched…28…454D 10 –Woodward, R.B, Ayer, W.A, Beaton, J.M, Bickehaupt, Bonnelt,R, Bushschacher, P, Closs, G.L, Dulter, H, Hannah, J, etal (July 1960) “The total synthesis of Chlorophyll” 11- Fleming, Pan (14,October 1967): “Absolute configuration and the structure of Chlorophyll” Nature 216(511): 151-152 Bibcode: 1967 Natur 216.151F 12 – Woodward, R.B, Ayer, Wilian A, Beaton, etal (1990): “The total synthesis of Chlorophyll a” 13 – Willons, Robert, Li Yaqiong, Scheer, Hugo, Chen, Min (15, March 2013): “Structure of Chlorophyll f” Organic Letters 14 Sukran Dere, Tohit Gunes, Risvan Sivasi(14/6/1996) Research article “ “Spectrophotometric determination of chlorophylla,b and total carotenoid of some algae species using diffirent solvents” 15 Dere S, Gunes T and Sivaci R., (1998), Spectrophotometric determination of chlorophyll -A, B and total carotenoid contents of some algae species using different solvents, Tr J Botany, 22, 13-17 16.Golterman, H L., Clymo, R S and Ohnstad, M A M.(1978), Methods f or Physical and Chemical Analysis of Freshwaters, 2nd edition Website: 17 https://vi.wikipedia.org/wiki/Giấp_cá 59 [...]... đều… Ở Trung Quốc, một hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn được phân lập từ cây diếp cá, được bào chế thành thuốc viên và thuốc tiêm để điều trị bệnh nhiễm khuẩn Ở Nhật Bản, thân rễ Diếp cá có trong thành phẩn của một số chế phẩm thuốc dùng chữa một số bệnh của phụ nữ 1.4 Tình hình nghiên cứu, ứng dụng chlorophyll trong sản xuất thực phẩm chức năng ở trong nước Hoá học Chlorophyll là một lĩnh vực rất rộng... đặc biệt quan trọng là trên nhân porphyrin hình thành 10 nối đôi cách là cơ sở của hoạt tính quang hoá của Chlorophyll Từ nhân porphyrin có 2 gốc rượu là metol (CH3OH) và fytol (C20H39OH) nối vào tại C10 và C7 Chlorophyll là chất có hoạt tính hoá học cao, vừa có tính axit, vừa có tính kiềm Đặc biệt Chlorophyll có những tính chất lý học quan trọng giúp thực hiện các chức năng trong quá trình quang hợp... 1.3.4.1.3 Tác dụng chống viêm tuyến vú: Công trình nghiên cứu được thực hiện tại Trường đại học Thú y, thuộc Viện đại học Nông nghiệp Zbejiang, Hangzhou, Trung Quốc Từ H.cordata, các nhà nghiên cứu đã chiết xuất được chất Houttuynia, sau đó cho Houttuynia phản ứng với bisulphat natri để có được chất Houttuynia bisulphat natri Từ chất này họ đã chế biến được một dung dịch tiêm vào vú để điều trị bệnh viêm... hóa) Giảm hoocmon, gốc tự do Tử Chất chống oxy hóa, hoocmon Vitamin, khoáng chất Hoạt chất sinh học Chất chống stress, thoái hóa Hình 1.3.Tác dụng chống lão hoá, kéo dài tuổi thọ 9 TPCN cung cấp các chất chống oxy hoá, các Hormone, các chất chống stress, chống thoái hoá, bổ sung Vitamin, bổ sung khoáng chất, bổ sung các hoạt chất sinh học, các hoạt chất thảo dược… Các chất này có tác dụng chống oxy... cường sức khoẻ nhờ các chất chống oxy hoá (β- caroten, lycopen, lutein, vitamin C, vitamin E…), chất xơ và một số thành phần khác Tác dụng nổi trội của sản phẩm này là hỗ trợ điều trị bệnh, tham gia vào quá trình đẩy lùi bệnh tật trong cơ thể người cùng với sự tác động của các loại thuốc Đông, Tây y… 1.1.4.1 Tác dụng chống lão hoá, kéo dài tuổi thọ [3] Tính cá thể Sinh ĐK môi trường sống ĐK làm việc, ăn... được biết đến quang hợp Trong số các sinh vvật nhân sơ, nó được tìm thấy vớ ới số lượng lớn chỉ có ở vi khuẩn lam, mặcc dù ddấu vết biến thể nhỏ củaa Chlorophyll a được tìm thấy trong một số vi khuẩnn anoxygenic, vi khu khuẩn lưu huỳnh nh màu xanh lá cây và heliobacteria, nơii mà nó có ch chức năng quan trọng như là mộtt trung gian trong chuỗi vận chuyển điện từ M Một số prochlorophytes chứaa divinyl... cao, quá trình này xảy ra trong hệ quang hợp của thực vật bạc cao, tảo biển và vi khuẩn quang hợp Hình 1.15.Các hợp chất Chlorophyll phổ biến trong tự nhiên Chlorophyll và các dẫn xuất của nó là đối tượng rất hấp dẫn cho các nghiên cứu lý thuyết hoá hữu cơ như cấu trúc điện tử, tính thơm, quá trình chuyển dời điện tử, quang hoá và quá trình quang hợp Nghiên cứu quá trình sinh tổng hợp Chlorophyll a cũng... capryl 1.3.4.1.2 Tác dụng chống ung thư máu: Công trình nghiên cứu của Chang Jung-San và công sự, mục đích để đánh giá tác dụng chống ung thư máu của H.cordata và Bidens pilosa Năm dòng tế bào ung thư máu, theo thứ tự là L1210, U937, K562, Raji và P3HR1 được nuôi cấy với chất chiết xuất của H.cordata và Bidens pilosa Kết quả cho thấy chiết xuất từ các dược liệu trên có tác dụng ngăn chặn 5 dòng tế bào... chủ trong suốt quá trình của cuộc Cách mạng Pháp Các thẩm phán đã đưa ra phán quyết rằng : “ Nền cộng hòa không cần cho các nhà khoa học” Vì thế một người Đức, Jan Inhenhousz, người đã bị phán xét vì là một nhà vật lý học bởi vua nước Áo, đã làm ra một cuộc cách mạng tìm ra cơ chế của phá trình quang hợp Ông đã nghe nói về các thí nghiệm của Priestley,vài năm sau ông đã giành một mùa hè gần Lon Don... ttảo xanh Có một vài biến thể cấu trúc củ ủa Chlorophyll c, trong đó khác nhau ở mộtt ssố nhóm thế vòng ngoại vi Hình 1.11.C 1.11.Cấu trúc hoá học của Chlorophyll c 1.2.3.4 Chlorophyll d [8] Chlorophyll d khác Chlorophyll a ch chỉ ở một vài điểm: m: các nhóm thế th ở vị trí C3 là mộtt nhóm formyl trong Chlorophyll d, thay vì nhóm vinyl ttạii Chlorophyll a, Chlorophyll d được biết đếnn nh như một dấu vết