PHÂN TÍCH DIOXIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BIOASSAY

ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Mục lục SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG LỜI CẢM ƠN Tên Em là: Trần Thị Thảo Hiền – sinh viên lớp CĐ9KM3 - khoa Môi Trường - Trường Đại Học Tài Nguyên và Môi Trường Hà Nội Sau gần ba năm học tập và rèn luyện tại trường, giảng dạy và hướng dẫn tận tình thầy cô giáo, quan tâm, giúp bạn bè giúp em nắm vững kiến thức chuyên ngành Em được nhà trường giới thiệu thực tập tại Phòng Phân Tích Độc Chất Môi Trường – Viện Công Nghệ Môi Trường - Viện Khoa Học Và Công Nghệ Việt Nam Tại Em nhận được quan tâm, hướng dẫn tận tình cán bộ Phòng Phân Tích Độc Chất Môi Trường, Viện Công Nghệ Môi Trường, giúp Em làm quen với môi trường làm việc mới, rèn luyện và củng cố kiến thức học trau dồi kĩ giao tiếp, ứng xử Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cô giáo khoa Môi Trường, cán bộ Viện Địa Chất, đặc biệt là TS Nguyễn Quang Trung và anh Mai Đình Bình tận tình giúp Em hoàn thành tốt đợt thực tập này Do thời gian thực tập có hạn, kiến thức thực tế chưa nhiều nên báo cáo tránh khỏi thiếu sót Em mong được đón nhận những nhận xét, góp ý quý báu cán bộ Viện Công Nghệ Môi Trường và giảng viên khoa Môi Trường để báo cáo thực tập Em hoàn thiện và rút được kinh nghiệm đợt thực tập sau Em xin chân thành cảm ơn!!! SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG LỜI MỞ ĐẦU Như chúng ta biết, cuộc chiến tranh tại Việt Nam đế quốc Mỹ sử dụng những chiến lược, sách và vũ khí tối tân nhằm ngăn chặn lan rộng chủ nghĩa cộng sản tại Đông Nam Á Một những thứ vũ khí tối tân mà đế quốc mỹ áp dụng chiến trường Việt Nam việc rải lượng lớn chất “diệt cỏ” xuống cánh rừng miền nam Việt Nam Giữa năm 1961 và năm 1967, không quân Mỹ rải xuống 12.000.000 US gallon (khoảng 52800000 lit) chất diệt cỏ, chủ yếu là chất độc da cam (dioxin) 6.000.000 mẫu Anh (24.000 km ²) tán lá, và lương thực, ảnh hưởng đến 13% đất đai miền Nam Việt Nam Việc sử dụng thuốc diệt cỏ được dùng để lái xe dân thường đua vào khu vực kiểm soát Việt Nam Cộng Hòa, nhiên người dân Việt Nam phải gánh chịu những hậu nặng từ chúng, một chất độc mang lại Ngày nay, chiến tranh qua đi, những hậu chiến tranh để lại là di chứng chất độc màu da cam, hiểu nếu một người phơi nhiễm dioxin dù là một lượng nhỏ nữa mang hiểm họa ung thư Dioxin đặc biệt nguy hiểm thời gian tồn lưu dai dẳng qua nhiều thế hệ, chũng gây ung thư, đột biến gen, hai hoặc ba thế hệ tiếp theo người phải chịu di chứng, để lại những mát khó bù đắp Để biết rõ chất độc này ta tìm hiểu tổng quan chúng và nghiên cứu tồn lưu dioxin chiến tranh một số khu vực hiện SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU CHUNG VỀ ĐƠN VỊ THỰC TẬP 1.1 THÔNG TIN CHUNG VỀ VIỆN CÔNG NGHỆ MÔI TRƯỜNG  Tên quan : Viện Công nghệ môi trường  Tên quan chủ quản : Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam  Tên giao dịch quốc tế: Institute of Environmental Technology  Tên viết tắt : IET  Tên quan thành lập : Chính phủ  Ngày thành lập : 30/10/2002  Trụ sở : Nhà A30, số 18 Hoàng Quốc Việt, quận Cầu Giấy, thành phố Hà Nội  Điện thoại: 04.37569136  Website: http://iet.ac.vn  Các Chi nhánh trực thuộc: Chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh : Fax: 04.37911203  Tên Trung tâm : Trung tâm Công nghệ môi trưởng tại thành phố Hồ Chí Minh  Tên tiếng anh : Environmental Technology Center in Ho Chi Minh City  Tên viết tắt: ETCI  Địa : Số Mạc Đĩnh Chi, Quận 1, Thành phố Hồ Chí Minh  Điện thoại: 08.38243291 Fax: 08.38228041 Chi nhánh thành phố Đà Nẵng :  Tên Trung tâm : Trung tâm Công nghệ môi trưởng tại thành phố Đà Nẵng  Tên tiếng anh : Da Nang Environmental Technology Center  Tên viết tắt: DANETC  Địa : đường Trần Đại Nghĩa, Phường Hòa Hải, Quận Ngũ Hành Sơn, TP Đà Nẵng SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG  Điện thoại, Fax: 0511.396.7797 1.2 CHỨC NĂNG, NHIỆM VỤ CỦA VIỆN 1.2.1 Chức : - Nghiên cứu lĩnh vực môi trường; triển khai, ứng dụng kết nghiên cứu phục vụ việc xây dựng quy hoạch, sách, chiến lược và hoạt động quản lý nhà nước lĩnh vực môi trường, phục vụ phát triển bền vững; - Đào tạo cán bộ có trình độ cao và chuyên sâu công nghệ môi trường, tổ chức và triển khai hoạt động hợp tác quốc tế lĩnh vực nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ môi trường 1.2.2 Nhiệm vụ: a Nhiệm vụ nghiên cứu, ứng dụng và triển khai: - Nghiên cứu những vấn đề khoa học nhằm xây dựng sở khoa học cho phát triển ngành khoa học môi trường; - Nghiên cứu công nghệ mới, công nghệ tiên tiến lĩnh vực ngăn ngừa và xử lý ô nhiễm môi trường; - Nghiên cứu xây dựng và ứng dụng phương pháp phân tích hoá lý và sinh học phục vụ quản lý và xử lý ô nhiễm môi trường - Nghiên cứu ứng dụng công nghệ điện hoá môi trường sản xuất đời sống - Nghiên cứu ứng dụng công nghệ thuỷ sinh học vào công tác bảo vệ môi trường - Nghiên cứu, sản xuất vật liệu, thiết bị đo đạc, thiết bị xử lý phục vụ công tác bảo vệ môi trường - Phát triển công nghệ thân môi trường - Xây dựng sách, chiến lược bảo vệ môi trường; - Triển khai, ứng dụng và chuyển giao kết nghiên cứu, quy trình công nghệ vào thực tiễn, phục vụ công tác bảo vệ môi trường và phát triển bền vững b Đào tạo và hợp tác quốc tế: SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG - Tham gia đào tạo cán bộ có trình độ có trình độ sau đại học, cán bộ chuyên sâu công nghệ môi trường - Xây dựng và tổ chức thực hiện chương trình đào tạo sau đại học có đủ điều kiện - Triển khai hợp tác quốc tế lĩnh vực nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ môi trường 1.3 PHÒNG PHÂN TÍCH ĐỘC CHẤT MÔI TRƯỜNG 1.3.1 Nguồn nhân lực Hiện Phòng Phân Tích Độc Chất Môi Trường bao gồm 18 cán bộ: - Phó giáo sư Tiến sĩ - Tiến sĩ - Thạc sỹ - Kỹ sư, cử nhân - Kỹ thuật viên 1.3.2 Chức và nhiệm vụ a Nghiên cứu khoa học - Nghiên cứu phương pháp và chế tạo công cụ phân tích hóa – lý – sinh phục vụ công tác quan trắc và xử lý ô nhiễm môi trường - Nghiên cứu rủi ro tới sức khỏe người tác động từ ô nhiễm môi trường và an toàn thực phẩm b Dịch vụ Tư vấn lập báo cáo đánh giá tác động môi trường, quy hoạch, xử lý và khảo sát, quan trắc, phân tích đánh giá tác động môi trường chuyển giao công nghệ và kết nghiên cứu thực tiễn c Đào tạo SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Đào tạo và kết hợp với trường Đại học đào tạo tiến sĩ, thạc sĩ, cử nhân, kỹ sư, cán bộ tỉnh, đơn vị sở, doanh nghiệp lĩnh vực bảo vệ môi trường d Hợp tác quốc tế Thực hiện dự án JICA – Nhật Bản về: “ Tăng cường lực cho Viện Khoa Học Công Nghệ Viện Công Nghệ Việt Nam lĩnh vực BVMT nước” Cơ quan quản lý: Viện Khoa Học Công Nghệ Việt Nam Cơ quan thực hiện: Viện Khoa Học Công Nghệ Trường Đại học POIERS – Cộng Hòa Pháp: Nghiên cứu phương pháp cấp tiến xử lý nước, và công nghệ xúc tác quang hóa NANO – TiO Viện nghiên cứu Hoàng gia Thái Lan: CHULABOHRN RESEARCH IINSTITUTE: đào tạo và nghiên cứu độc chất môi trường 1.3.3 Một số hệ thống thiết bị quan trắc – phân tích chất hữu độc hại SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Hình Một số thiết bị máy móc SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG CHƯƠNG 2: NỘI DUNG THỰC TẬP 2.1 CHUẨN BỊ TÀI LIỆU Tài liệu tìm hiểu Đioxin Tài liệu phương pháp Bioassay Phương pháp xác định hàm lượng dioxin mẫu đất máy DXS - 60 2.2 TỔNG QUAN VỀ ĐIOXIN - Dioxin là tên gọi chung một nhóm hàng trăm hợp chất hóa học tồn tại bền vững môi trường thể người và sinh vật khác Tùy theo số nguyên tử Cl và vị trí không gian những nguyên tử này, dioxine có 75 đồng phân PCDD (poly-chloro-dibenzo-dioxines) và 135 đồng phân PCDF (poly-chloro-dibenzofuranes) với độc tính khác Dioxine bao gồm nhóm PCB (poly-chlorobiphényles), là chất tương tự dioxine, bao gồm 419 chất hóa học có 29 chất đặc biệt nguy hiểm Trong số hợp chất dioxine, TCDD là nhóm độc - Dioxin là sản phẩm phụ nhiều trình sản xuất chất hóa học công nghiệp liên quan đến clo hệ thống đốt chất thải, sản xuất hóa chất và thuốc trừ sâu và dây truyền tẩy trắng sản xuất giấy Hình Cấu trúc đồng phân TCDD Dioxin - Dioxin và furan là hóa chất độc được biết đến hiện khoa học Trong báo cáo sơ thảo Cục Bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ (EPA) năm 1994 miêu tả dioxin là một mối tác nhân đe doạ nguy hiểm đối với sức khoẻ cộng đồng SV: Trần Thị Thảo Hiền Page ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Cũng theo EPA, dường mức độ phơi nhiễm dioxin nào được coi là an toàn Ngoài chiến tranh Việt Nam, dioxin chất độc màu da cam gây nên thảm hoạ sinh thái Seveso (Ý), và Times Beach (Missouri), Love Canal (New York), • Tác hại Dioxin đối với thể người và sinh vật Chính báo cáo EPA công nhận dioxin là một chất gây ung thư cho người Năm 1997, Tổ chức quốc tế nghiên cứu ung thư (IARC) thuộc WHO công bố 2,3,7,8-TC DD là chất gây ung thư nhóm (nghĩa là nhóm được công nhận là gây ung thư) Đồng thời, tháng năm 2001, chương trình Độc học Quốc gia Hoa Kỳ chuyển dioxin vào nhóm "các chất gây ung thư cho người" Cuối cùng, một nghiên cứu kiểm định năm 2003, nhà khoa học khẳng định một liều lượng nào là an toàn hoặc ngương dioxin mà không gây ung thư Điều này hiểu là nếu một người phơi nhiễm dioxin dù lượng nhỏ mang hiểm họa ung thư! Ngoài ung thư, dioxin liên quan đến một số bệnh nguy hiểm khác bệnh rám da, bệnh đái tháo đường, bệnh ung thư trực tràng không Hodgkin, thiểu sinh dục cho nam và nữ, sinh quái thai hoặc thiểu trí tuệ, đẻ trứng (ở nữ) v.v Cơ chế phân tử dioxin tác động lên tế bào và thể người, động vật nhiều tranh cãi chi tiết Thời gian bán phân huỷ dioxin thể động vật là năm hoặc lâu Thông thường, dioxin gây độc tế bào thông qua một thụ thể chuyên biệt cho hydratcarbon thơm có tên là AhR (Aryl hydrocarbon Receptor) Phức hợp dioxin - thụ thể kế hợp với protein vận chuyển ArnT (AhR nuclear Translocator) để xâm nhập vào nhân tế bào Tại dioxin gây đóng mở một số gene giải độc quan trọng tế bào Cyp1A, Cyp1B, Đồng thời, một số thí nghiệm chuột cho thấy dioxin làm tăng nồng độ gốc ion tự tế bào Điều này, là làm phá huỷ cấu trúc tế bào, protein quan trọng và, quan trọng cả, gây đột biến phân tử DNA SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 10 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Dung dịch Antibody D48 Tổng thể tích (mL) 500uL 500uL 1000 2mL 2mL 4mL Hút chuẩn theo thể tích bảng vào vial (lắc nhẹ lại vortex) Tiến hành hút lượng mẫu chuẩn bị vào vial 2-4, và vial bảng Đậy kín nắp và lắc lại vortex Bọc vial giấy nhôm và để tối 30 phút trước đo, tránh tia huỳnh quang, gây ảnh hưởng đến antigen-antibody D48 Tiến hành đo mẫu: - Bật thiết bị DXS-610, khởi động máy tình và phần mềm FIS-Win (phần mềm theo thiết bị) - Đặt sequence cho mẫu từ cổng đến 4, cổng dùng để đo B (Nếu muốn đo lập lại, thêm dòng và viết lại tên mẫu, vị trí cổng) - Đặt vial vào khay mẫu và kéo kim vào vial để tiến hành đo - Thay cell SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 32 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN Chuẩn bị 10 vial 3.4 - Vị trí đăt Port Port Port Port Port STD STD STD STD STD B0 STD STD STD STD STD B0 STD STD B0 dung vial STD STD DMSO µL µL µL µL dịch 400 µL D48 dung dịch chuẩn (0.2 (0.4 (0.8 ng/mL) (1.6 ng/mL) _ ng/mL)2 ng/mL) 200 µL 200 µL Dung dịch đệm 200 µL 2.8 mL 200 µL 2.8mL 2.8 mL 2.8 mL 5.6 mL Dung dịch rửa giải 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 2.0 mL Khối lượng mẫu mL mL mL mL mL chuẩn bị Port Port Port Port Port Port B0 ng: Nano (ng) là một đơn vị đo lường số liệu nguồn gốc khối lượng 1ng = 10 -9 gam SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 33 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG B0 dung STD STD STD STD µL µL µL µL (4 ng/mL) (8 ng/mL) (16 ng/mL) (40 ng/mL) 200 µL 200 µL 200 µL 200 µL Dung dịch đệm 2.8 mL 2.8mL 2.8 mL 2.8 mL 5.6 mL Dung dịch rửa giải Khối lượng mẫu 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL 2.0 mL mL mL mL mL mL Port Port Port Port Port B0 DMSO D48 dung dịch chuẩn chuẩn bị Port - Tiến hành đo lần và lần đo thực hiện phép đo lặp lại Đường chuẩn được lập có dạng đường cong SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 34 dịch 400 µL _ ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Phương trình đường chuẩn: Với: a: điểm tương quan B/B0 cao b: hệ số dốc (luôn ổn định vào khoảng 1,307) d: điểm tương quan B/B0 thấp c: phụ thuộc vào điều kiện môi trường 3.5 CÁCH TÍNH KẾT QUẢ Nồng độ Dioxin phát hiện một mẫu được tính toán mặt lý thuyết cách sử dụng số lượng mẫu, số lượng không đổi cuối xử lý sơ bộ ngoài ra, được tính cho mẫu, phụ thuộc vào số lượng mẫu và số lượng liên tục thay đổi Công thức tính SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 35 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Trong đó: : Nồng độ Dioxin có mẫu môi trường (ng/g) : Nồng độ Dioxin mẫu chuẩn (ng/g, dung dịch rửa giải) n: Hệ số pha loãng v: Hằng số cuối xử lý sơ bộ (mL) VE: Số lượng chiết xuất (mL) V’E : Số lượng chiết xuất từ phân đoạn (mL) V: Số lượng mẫu phân tích (g) VD Tính toán nồng độ Dioxin phát hiện mẫu trung bình sử dụng bộ QDL V đất (ng/g) 0.0015 (g) chuẩn bị mẫu V ’E / V E V (mL/mL) 1%4 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 36 (mL) 0.25 n 20 tập trung CDL (ng/g) 0.059 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 37 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG CHƯƠNG V KẾT LUẬN Đợt thực tập tốt nghiệp này giúp ích cho em nhiều Em rút được nhiều kiến thức tổ chức cách thức làm việc mà trình học tập trường em chưa biết đến Trong trình thực tập em được thực hành đúng chuyên môn có hội củng cố lại kiến thức một số môn học: phân tích môi trường, ô nhiễm môi trường, công nghệ môi trường… là hội tốt để em kiểm tra lại kiến thức mà em tích luỹ được trình học tập, đồng thời là thời gian để em củng cố, nâng cao kiến thức trước bước vào làm việc một môi trường làm việc khắc nghiệt đòi hỏi không những kiến thức sách mà kiến thức thực tế Ngoài ra, trình làm việc giúp em thu thập được nhiều kinh nghiệm mà trước em chưa biết: - -Khi làm thí nghiệm không tránh khỏi tiếp xúc với những loại hóa chất độc có ảnh hưởng tới sức khỏe cần có biện pháp thích hợp để phòng tránh ảnh hưởng - Yêu cầu xác phân tích Cùng với những kiến thức thực tế và kinh nghiệm giúp em nhiều cho mai sau SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 38 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu hướng dẫn sử dụng phần mềm DXS -610 Bách khoa toàn thư – nhà xuất giáo dục Độc chất môi trường http://vi.wikipedia.org/wiki/Dioxin http://iet.ac.vn/ SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 39 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG PHỤ LỤC MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU DIOXIN ĐƯỢC ÁP DỤNG Ở VIỆT NAM - PHÂN TÍCH DIOXIN THEO PHƯƠNG PHÁP CALUX I NGUYÊN TẮC PHƯƠNG PHÁP - Dioxin mẫu phân tích kết hợp với Ah receptor thành dạng phức DRE (Dioxin responsive element) - DER được Arnt (Arylhydrocarbon translocator) – nguyên tử di chuyển mang, định vị đến vị trí định đoạn mã DNA Tại đây, chất Luciferase DNA giải mã và đẩy Hsp90 (heat shock protein 90 kD) phức Dioxin - AhR ngoài và Hsp90 có khả phát sáng và được ghi nhận lại cường độ Từ đó, tính toán nồng độ DXN mẫu II CHUẨN MẪU – XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN – TÍNH KẾT QUẢ SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 40 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Chuẩn bị 10 ống eppendorf, hút 100uL DMSO vào ống (Đường chuẩn) Hút 100uL chuẩn gốc vào STD (mix) sau hút 100uL từ ống đựng chuẩn STD sang STD1 (mix).Tiến hành lần lượt cho đến STD10 (Blank = DMSO) Chú ý: Đối với mẫu lấy ≤ 10uL ( thể tích well plate và bộ kit là 400uL) Với mẫu có nồng độ cao phải pha loãng mẫu trước (hệ số pha loãng là 1:5:25 hoặc 1:25:125) để đảm bảo đo được Chuẩn bị pha loãng trung gian - Media: Lấy từ tủ lạnh ngâm với nước nóng 37 0C 1h (phải thay nước bồn hàng ngày hoặc trước dùng để ngâm) - Xịt 70% EtOH khử trùng bên ngoài lọ Media + lọ 50mL PBS - Dùng pipet tròn loại 10mL (có nấc, nấc tương ứng với 200uL, nấc tăng 200uL) Dùng pipet kéo lên đẩy xuống lần để mix dd Media được chuẩn bị Sau hút 400uL vào giếng theo bảng (add vào well màu xanh) - Đậy plate giấy nhôm - Lấy bộ kit ra, đưa vào tủ hút, mở phần nilon đậy bỏ và đậy nắp lại Chuyển bộ kit trở lại vào vali, ủ gói CO2 (trong khoảng từ 2-3h) SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 41 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Quy trinh chuẩn bị mẫu cho thử nghiệm - Thêm 24uL DMSO vào giếng pha loãng và 2, sử dụng pipet 100uL - Thêm 6uL mẫu phân tích vào giếng pha loãng 1, sử dụng pipet 20uL - Dùng pipet mix dung môi giếng pha loãng và hút 6uL dung dịch sang giếng pha loãng và mix lại, sử dụng pipet 20uL - Lập lại trình với mẫu phân tích khác bảng sau Stock Dilution Dilution SV: Trần Thị Thảo Hiền 1) - 2) Sample 6uL 2) DMSO 24uL 2) Sample 6uL 3) DMSO 24uL 2) - Page 42 3) 3) 3) Dilution (1) 6uL ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Thể vẩn mẫu phân tích màng Media 1) TCDD STD(S1-S9) 2) Testing sample 4uL - Thêm 4uL DMSO vào vị trí DMSO (blank) và 4uL chuẩn TCDD chuẩn bị vào vị trí S1-S9 mà mẫu QC hình vẽ phần well mầu vàng - Dùng pipet chip hút mẫu từ plate chuẩn bị bước sang phần well mầu xanh hình vẽ SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 43 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Màng cell (Kit plate) (phải chuẩn bị tủ khử trùng – clean bench: 70% EtOH) - Loại bỏ tế bào hoạt hóa Calux từ môi trường nuôi cấy di động - Trải giấy nhôm sau lót giấy sạch thấm dung môi, để loại bỏ tất dd media khay tế bào cách đổ chúng giấy thấm được chuẩn bị trước - Chuyển đường chuẩn được chuẩn bị và mẫu phân tích sang màng cell (Kit plate) vừa được chuẩn bị - Đậy nắp Kit plate và chuyển vào box ủ di động và đậy chặt lại Loại bỏ gói sinh khí CO khỏi box để hoạt hóa Kit plate Đặt box bồn nước 370C khoảng từ 19-24h Chuẩn bị thử nghiệm chất enzym oxi hóa (luciferase assay substrate) - Hút 10uL luciferase assay buffer - Chuẩn bị lysis solvent: pha loãng (1:5) nước deion (hút từ lọ cell culture lysis reagent 5X – dung môi nhớt và khó hút nên sau thả hoàn toàn pipet phải đợi khoảng 10s để dung dịch từ từ chuyển động lên tip) - Loại bỏ hoàn toàn tất media plate tế bào Calux SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 44 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG - Dùng 50uL PBS để rửa tế bào và tế bào không phản ứng well kit plate Sau loại bỏ hoàn toàn PBS khỏi plate - Dán chắn vào mặt plate (tránh truyền quang) - Dùng pipet hút 30uL dung dịch tế bào phân giải vào vị trí well xử lý - Lắc nhẹ 10 phút máy lắc plate Đo máy và xử lý số liệu excel Đường chuẩn: SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 45 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 46 [...]... tích bằng cách sử dụng các phương pháp thống kê sinh học 2.4 ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP BIOASSAY VÀO PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG CHẤT DIOXIN TRONG ĐẤT 2.4.1 Giới thiệu về Dioxin Biosensor DXS – 610 (thiết bị cảm biến sinh học Dioxin DXS 610) Nguyên tắc đo lường thiết bị DXS – 610 là 1 dòng cảm biến miễn dịch với kháng nguyên – kháng thể phản ứng và có tiềm năng để có thể phân tích 1 số chất hóa học... thiến Phân tích này cho thấy rằng bằng cách loại bỏ tinh hoàn của một con gà, nó sẽ không phát triển thành một con gà trống vì các tín hiệu nội tiết cần thiết cho quá trình này không có sẵn Bioassay định lượng liên quan đến ước tính nồng độ hoặc hiệu lực của một chất bằng cách đo các phản ứng sinh học mà nó tạo ra Sinh trắc nghiệm định lượng thường được phân tích bằng cách... nhiễm hữu cơ khó phân hủy (POPs) bằng cách thay đổi kháng và đơn vị phát hiện SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 13 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG a Đặc điểm: - Khi hoạt động DXS - 610 không cần kỹ năng đặc biệt và kinh nghiệm - Thời gian phân tích mẫu là 6 phút/mẫu Quá trình phân tích bắt đầu tự động khi - có sự cảm biến của mẫu và thuốc thử Phương pháp này đã giúp... thử dòng phân ly vào tế bào đo phân tách các kháng thể không bị liên kết và phục hồi các tế bào đo lường Nồng độ DXN thu được bằng cách tính tỷ số của giá trị đo được của giải pháp kháng thể chỉ (B) và giá trị đo được của số mẫu có chứa hỗn hợp kháng thể dioxin (B0) Số DXN = Số huỳnh quang thu được tỉ lệ thuận với nồng độ của DXN 6 Hàm lượng dioxin sẽ được phân tích từ kết... của DXN 6 Hàm lượng dioxin sẽ được phân tích từ kết quả đo SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 18 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG CHƯƠNG 3: QUY TRÌNH PHÂN TÍCH DIOXIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BIOASSAY 3.1 CHIẾT MẪU ĐẤT BẰNG SIÊU ÂM Sơ đồ quy trình chiết mẫu đất: SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 19 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Giải thích sơ đồ 1 Cân 5g mẫu đất... tế năm 2004, các nghiên cứu về ảnh hưởng của dioxin đối với các cựu chiến binh Úc trong chiến tranh Việt Nam đã bắt đầu 2.3 PHƯƠNG PHÁP BIOASSAY • Định nghĩa: Phương pháp Bioassay: là việc xác định sức mạnh tương đối của một chất ( hay một loại thuốc) bằng cách so sánh hiệu quả của nó trên một sinh vật thử nghiệm với một sự chuẩn bị tiêu chuẩn Mục đích  Đo lường của hoạt động... khi - có sự cảm biến của mẫu và thuốc thử Phương pháp này đã giúp giảm sai số do tính chủ quan trong quá trình phân - tích Độ lệch tiêu chuẩn của phương pháp này là >= 3% Phần mềm DXS - 610 có thể tự động tính toán nồng độ Dioxin trong một vài - phút sau khi đo Phương pháp này có thể đo 100 mẫu trong 1 ngày b Cấu tạo của máy KinExa DXS-610 SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 14 ĐẠI HỌC TÀI... TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG 4 Trong quá trình siêu âm mẫu, chuẩn bị test tube 40mL (mẫu chuẩn bị cho phân tích bằng Bioassay thì thêm 25mL H2O 5% NaCl), khi quá trình chiết hoàn tất thì chuyển 5mL dung dịch chiết sang test tube đã chuẩn bị ở trên 1 Đối với mẫu chiết chuẩn bị cho phân tích bằng GC/HRMS thì phải thêm 5mL dung dịch chiết trước sau đó thêm 60uL chuẩn 13C-PCDD/DFs (nồng độ 10ng/mL... HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG Trong đó: : Nồng độ Dioxin có trong mẫu môi trường (ng/g) : Nồng độ Dioxin trong mẫu chuẩn (ng/g, trong dung dịch rửa giải) n: Hệ số pha loãng v: Hằng số cuối cùng của xử lý sơ bộ (mL) VE: Số lượng chiết xuất (mL) V’E : Số lượng chiết xuất từ phân đoạn (mL) V: Số lượng mẫu phân tích (g) VD Tính toán nồng độ Dioxin phát hiện trong mẫu trung bình sử dụng... lại thể tích (rửa sạch bằng dung môi Acetone/Hexan/Toluen và sấy khô), chuyển 5mL dung dịch chiết trong ống ly tâm sang test tube SV: Trần Thị Thảo Hiền Page 24 ĐẠI HỌC TÀI NGUYÊN VÀ MÔI TRƯỜNG HÀ NỘI – KHOA MÔI TRƯỜNG 7 Thêm 2mL n-hexane vào test tube, đậy bằng màng PTE trước khi đậy chặt nắp test tube Lắc mạnh bằng tay trong 2 phút (nên đổi tay sau 1 phút) Đợi dung dịch phân lớp ... lượng thường được phân tích cách sử dụng phương pháp thống kê sinh học 2.4 ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP BIOASSAY VÀO PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG CHẤT DIOXIN TRONG ĐẤT 2.4.1 Giới thiệu Dioxin Biosensor DXS... phân tích mẫu là phút/mẫu Quá trình phân tích bắt đầu tự động - có cảm biến mẫu và thuốc thử Phương pháp này giúp giảm sai số tính chủ quan trình phân - tích Độ lệch tiêu chuẩn phương. .. ÁP DỤNG Ở VIỆT NAM - PHÂN TÍCH DIOXIN THEO PHƯƠNG PHÁP CALUX I NGUYÊN TẮC PHƯƠNG PHÁP - Dioxin mẫu phân tích kết hợp với Ah receptor thành dạng phức DRE (Dioxin responsive element) - DER