Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thu nhận chế phẩm invertase từ nấm men bia

I HC THI NGUYấN TRNG I HC NễNG LM DNG TH HUYN Tờn ti: NGHIÊN CứU CáC YếU Tố ảNH HƯởNG ĐếN QUá TRìNH THU NHậN CHế PHẩM INVERTASE Từ NấM MEN BIA KHóA LUậN TốT NGHIệP ĐạI HọC H o to : Chớnh quy Chuyờn ngnh : Cụng ngh Thc phm Lp : K42 - CNTP Khoa : CNSH - CNTP Khúa hc : 2010-2014 Ging viờn hng dn : ThS Nguyn Hu Ngh Ging viờn khoa CNSH - CNTP - i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn Thỏi Nguyờn, 2014 LI CM N Trong thi gian thc hin ti em ó nhn c s to iu kin, quan tõm giỳp ca cỏc thy cụ giỏo, bn bố v gia ỡnh Em ó hon thnh khúa lun tt nghip ca mỡnh ti phũng thớ nghim Vi sinh khoa Cụng ngh Sinh hc & Cụng ngh Thc phm - trng i hc Nụng lõm Thỏi Nguyờn Em xin gi li cm n chõn thnh v sõu sc nht ti Ths Nguyn Hu Ngh, ging viờn khoa Cụng ngh Sinh hc & Cụng ngh Thc phm, trng i hc Nụng lõm Thỏi Nguyờn ó tn tỡnh giỳp v hng dn giỳp em hon thnh tt khúa lun tt nghip i hc ny Em cng xin cm n cỏc cụ, chỳ, anh, ch ang lm vic ti cụng ty bia VICOBA - Thỏi Nguyờn, cỏc thy cụ ang lm vic ti Vin Khoa hc s sng ó to iu kin giỳp em quỏ trỡnh em thc hin ti tt nghip Em xin gi li cm n n ton th cỏc thy cụ khoa Cụng ngh Sinh hc & Cụng ngh Thc phm ó ging dy v ch bo cho em rt nhiu quỏ trỡnh hc v thc hin ti ny Cui cựng em xin gi li cm n n b, m, gia ỡnh v bn bố ó ng viờn, giỳp ginh thi gian cho em cú th hon thnh khúa lun tt nghip trờn Do trỡnh v iu kin thi gian thc hin ti cú hn nờn ti khụng trỏnh nhng sai sút Em rt mong nhn c s gúp ý ca cỏc thy cụ v cỏc bn ti hon thin hn Em xin chõn thnh cm n! Thỏi nguyờn, ngy 06 thỏng 06 nm 2014 Sinh viờn thc hin ti Dng Th Huyn DANH MC CC BNG Bng 2.1 Mt s enzyme quan trng nm men 15 Bng 4.1 Kt qu hot tỡnh enzyme thu c theo thit k Box- Behnken (BBD), cp , nhõn t , im trung tõm, 27 thớ nghim 34 Bng 4.2 Kt qu phõn tớch ANOVA cho mụ hỡnh hot tớnh enzyme 35 Bng 4.3 Bng iu kin ca cỏc nhõn t thu c hot tớnh enzyme cao nht 37 DANH MC CC HèNH Hỡnh 2.1 Cu to mt ct ca vi khun gram õm v gram dng cú cha periplasmic Hỡnh 2.2 Cu to t bo nm men Hỡnh 4.1 nh hng ca t l nm men v dung mụi quỏ trỡnh t phõn n hot tớnh enzyme 29 Hỡnh 4.2 nh hng ca nhit t phõn n hot tớnh enzyme 30 Hỡnh 4.3 nh hng ca pH ban u ca mu nm men t phõn n hot tớnh enzyme 31 Hỡnh 4.4 nh hng ca thi gian t phõn n hot tớnh ch phm enzyme thu nhn t nm men bia 33 Hỡnh 4.5 Hỡnh nh 3D nh hng ca nhit v t l nm men/ dung mụi n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 39 Hỡnh 4.6 Hỡnh nh 3D nh hng ca thi gian v nhit n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 39 Hỡnh 4.7 Hỡnh nh 3D nh hng ca pH v t l nm men/ dung mụi n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 40 Hỡnh 4.8 Hỡnh nh 3D nh hng ca pH v nhit n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 40 Hỡnh 4.9 Hỡnh nh 3D nh hng ca thi gian v t l nm men/ dung mụi n hot tớnh enzyme invartse thu c dch t phõn 41 Hỡnh 4.10 Hỡnh nh 3D nh hng ca thi gian v pH n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 41 DANH MC CC T, CC CM T VIT TT RNA : Ribonucleic acid GT : Giỏ tr BBD : Box- Behnken VHT : n v hot tớnh MC LC PHN 1: M U 1.1 t 1.2 Mc ớch v yờu cu 1.2.1 Mc ớch 1.2.1 Yờu cu 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti 1.3.1 í ngha khoa hc 1.3.2 í ngha thc tin PHN 2: TNG QUAN TI LIU .3 2.1 Khỏi quỏt v enzyme 2.1.1 Khỏi nim 2.1.2 Cỏc n v hot enzyme 2.1.3 Khu trỳ ca enzyme .4 2.1.4 Ngun nguyờn liu thu enzyme .5 2.2 Gii thiu chung v nm men 2.2.1 Thnh phn húa hc, hỡnh dng v kớch thc nm men 2.2.2 Cu to t bo nm men 2.2.3 Ngun thc n ch yu cho nm men 11 2.2.4 S hp ph cht dinh dng ca t bo nm men 11 2.3 Nm men cụng ngh sn xut bia 12 2.3.1 Nm men chỡm v nm men ni .12 2.3.2 Quỏ trỡnh lờn men ng to ru ethylic v CO2 13 2.3.3 Cỏc hng tn dng nm men bia 14 2.3.4 Cỏc enzyme thy phõn glucid n gin chớnh t bo nm men 15 2.4 Khỏi quỏt v enzyme invertase .15 2.4.1 Enzyme invertase .15 2.4.2 Qỳa trỡnh chuyn húa ng sucrose thnh ng nghch o 16 2.4.3 Invertase t bo nm men 17 2.4.4 Thu nhn ch phm enzyme invertase thụ t nm men bng phng phỏp t phõn 18 2.4.5 ng dng ca invertase cụng ngh thc phm 19 2.5 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v ngoi nc 20 2.5.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu nc 20 2.5.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii 20 Phn 3: I TNG, NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 22 3.1 i tng, phm vi nghiờn cu 22 3.1.1 i tng nghiờn cu 22 3.1.2 Phm vi nghiờn cu .22 3.2 a im v thi gian tin hnh nghiờn cu 22 3.3 Hoỏ cht, thit b v mụi trng s dng .22 3.3.1 Hoỏ cht .22 3.3.2 Dng c v thit b 23 3.4 Ni dung nghiờn cu 23 3.5 Phng phỏp nghiờn cu 23 3.5.1 Phng phỏp thu nhn sinh nm men v ch phm invertase 23 3.5.2 Phng phỏp b trớ thớ nghim 24 3.5.3 Phng phỏp phõn tớch 25 3.6 Phng phỏp x lý s liu 27 PHN 4: KT QU V THO LUN 28 4.1 nh hng ca t l nm men v dung mụi quỏ trỡnh t phõn nm men bia (w/w) 28 4.2 nh hng ca nhit t phõn nm men bia 29 4.3 nh hng ca pH ban u ca mu nm men quỏ trỡnh t phõn 31 4.4 nh hng ca thi gian t phõn nm men bia n hot tớnh enzyme 32 4.5 Ti u húa cỏc iu kin t phõn bó nm men bia thu nhn ch phm invertase bng phng phỏp b mt ch tiờu (4 nhõn t) 34 4.5.1 Xõy dng mụ hỡnh hot tớnh enzyme 35 4.5.2 Ti u húa iu kin t phõn thu nhn ch phm enzyme .37 PHN 5: KT LUN V KIN NGH 42 5.1 Kt lun 42 5.2 Kin ngh 42 TI LIU THAM KHO 44 PHN M U 1.1 t Nm men l mt nhúm vi sinh vt n bo c ngi s dng t hng nghỡn nm sn xut ung cú cn (ru, bia,), bỏnh mỡ v nhiu ng dng khỏc Nm men sinh sụi nhanh, t bo cú cha hm lng protein cao, nhiu vitamin, v cỏc acid amin khụng thay th Trong cụng ngh sn xut bia, nm men sau mi m lờn men s tng lờn v sinh mt cỏch ỏng k, ngi ta ch thu hi v s dng mt phn men tip cho m sau, phn cũn li thng dng lng hoc st s c thi ngoi mụi trng Lng nm men thi ngoi mụi trng ny cú cha mt lng ln t bo nm men, phõn hy s gõy nh hng n mụi trng sinh thỏi Vic thu hi v tn dng lng nm men ny khụng nhng cú ý ngha ln v mt kinh t m cũn gii quyt c mụi trng, mt mang tớnh cht bn vng Hin nay, nm men bia thng c s dng sn xut bt chit nm men, dch chit nm men, hoc lm thc n gia sỳcSn xut ch phm invertase t men bia l mt hng nghiờn cu mi ti Vit Nam [5] Nm men bia thuc loi Saccharomyces carlsbergensis cú hot tớnh enzyme invertase Enzyme ny thng trung ch yu lp khụng gian chu cht ca t bo nm men, khong khụng gian gia thnh t bo v mng nguyờn sinh cht [22] Nm men thu c sau quỏ trỡnh lờn men bia cú c im l rt d b t phõn Lỳc ny vỏch t bo khụng cũn kh nng t bo v v s b phỏ hy bi chớnh cỏc enzyme t bo Chỳng xỳc tỏc phn ng phõn gii cỏc cht cú thnh t bo nm men v gii phúng enzyme invertase ngoi t bo Enzyme invertase (E C 3.2.1.26) thng c s dng thy phõn ng sucrose to thnh hn hp ng glucose v fructose [18] (ng nghch o) Dung dch ng nghch o cú ngt cao hn v ớt b hin tng kt tinh ng hn so vi ng sucrose nờn c s dng cụng ngh sn xut ko, nc gii khỏt Vic nghiờn cu cỏc yu t nh hng v tỡm cỏc iu kin ti u cho quỏ trỡnh thu nhn ch phm invertase t nm men bia cú ý ngha khoa hc v thc tin Vỡ vy tụi tin hnh ti: Nghiờn cu cỏc yu t nh hng n quỏ trỡnh thu nhn ch phm invertase t nm men bia 1.2 Mc ớch v yờu cu 1.2.1 Mc ớch Nghiờn cu cỏc yu t nh hng n quỏ trỡnh thu nhn ch phm invertase t nm men bia 1.2.1 Yờu cu - Nghiờn cu nh hng ca t l nm men v dung mụi quỏ trỡnh t phõn nm men bia - Nghiờn cu nh hng ca nhit t phõn nm men bia - Nghiờn cu nh hng ca pH ban u ca mu nm men quỏ trỡnh t phõn nm men bia - Nghiờn cu nh hng ca thi gian t phõn nm men bia - Ti u húa iu kin t phõn nm men bia thu nhn ch phm invertase 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti 1.3.1 í ngha khoa hc Thc hin ti giỳp sinh viờn b sung kin thc thc tin quan trng cho lý thuyt ó hc, cú thờm kinh nghim v tip cn vi cụng tỏc nghiờn cu khoa hc phc v cho nghiờn cu v cụng tỏc sau ny 1.3.2 í ngha thc tin Kt qu thu c ca ti l c s cho cỏc nghiờn cu tip theo cú th ti u húa cỏc iu kin thu nhn ch phm invertase t nm men bia cng nh cỏc chng nm men khỏc T ú xõy dng quy trỡnh cụng ngh vi hiu sut thu hi enzyme hiu qu nht PHN TNG QUAN TI LIU 2.1 Khỏi quỏt v enzyme 2.1.1 Khỏi nim Enzyme l cht xỳc tỏc sinh hc, cú bn cht protein, hũa tan nc v dung dch mui loóng Enzyme cú phõn t lng ln t 20.000 n 1.000.000 dalton nờn khụng qua c mng bỏn thm [8] Enzyme cú nhiu tớnh cht u vit hn hn cỏc cht xỳc tỏc húa hc Enzyme cú cng lc xỳc tỏc rt ln: iu kin thớch hp hu ht cỏc phn ng cú xỳc tỏc enzyme xy vi tc nhanh gp 108 - 1011 ln so vi phn ng khụng cú cht xỳc tỏc Enzyme cú tớnh c hiu cao: mi enzyme ch xỳc tỏc lm chuyn húa c mt hoc mt s c cht nht nh theo mt kiu phn ng nht nh S tỏc dng cú tớnh cht la chn ny gi l tớnh c hiu ca enzyme Enzyme cú tớnh c hiu cao nờn khụng to nhng sn phm ph Enzyme tỏc dng iu kin ờm du Enzyme thng tỏc dng thớch hp nhit 30 - 50oC, pH trung tớnh v ỏp sut thng, khụng cn nng acid hay nng kim mnh, ỏp sut cao, ú khụng ũi hi cỏc thit b chu acid, kim v chu ỏp sut cao t tin Tt c cỏc enzyme cú ngun gc t nhiờn u khụng c iu ny cú ý ngha quan trng cụng ngh thc phm v y hc Cỏc ch phm enzyme c sn xut t ngun nguyờn liu d kim, r tin 2.1.2 Cỏc n v hot enzyme n v hot ca mt enzyme c coi l lng enzyme cú kh nng xỳc tỏc lm chuyn húa c mt lng c cht nht nh mt n v thi gian nht nh iu kin tiờu chun [8] 41 tng dn lờn ta t l nm men/dung mụi lờn gn 1/7 (giỏ tr ti u thu c 151/1050 (w/w)) Khi tng lng dung mụi thỡ kh nng khuch tỏn enzyme t xoang t bo ngoi s d dng hn [5] Hỡnh 4.9 Hỡnh nh 3D nh hng ca thi gian v t l nm men/ dung mụi n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn Hỡnh 4.10 nh hng ca thi gian v pH n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn Hot tớnh enzyme thu c thp nht 45 gi, kộo di thi gian t phõn hot tớnh enzyme thu c tng theo v t cc i 48,35 gi Hỡnh 4.10 Hỡnh nh 3D nh hng ca thi gian v pH n hot tớnh enzyme invertase thu c dch t phõn 42 PHN KT LUN V KIN NGH 5.1 Kt lun T nhng kt qu nghiờn cu ca ti chỳng tụi i n nhng kt lun nh sau : Khi tin hnh kho sỏt n nhõn t cỏc yu t nh hng n quỏ trỡnh t phõn thu ch phm invertase t nm men thu c kt qu nh sau : - T l nm men/ dung mụi thớch hp l 1/6 (w/w) - Nhit 50oC - pH 5,5 - Thi gian 50 gi Tip theo chỳng tụi ti u húa nhõn t: t l nm men/dung mụi, nhit , pH, thi gian ca quỏ trỡnh t phõn thu ch phm invertase t nm men bia bng phng phỏp b mt ch tiờu, theo thit k Box- Behnken (BBD), cp , nhõn t , im trung tõm, 27 thớ nghim Kt qu cho thy: - T l nm men/dung mụi ti u l 151/1050 (w/w) - Nhit ti u l 48,6oC - pH ti u l 5,065 - Thi gian ti u l 48,35 gi Ta s thu c hot tớnh enzyme l 100,473 VHT/ g sinh nm men 5.2 Kin ngh Thu nhn enzyme invertase t nm men bia Saccharomyces carlsbergensis l mt hng nghiờn cu mi hin Vit Nam Cú ý ngha v mt kinh t v ý ngha tớch cc v mt mụi trng sinh thỏi Nhng thi gian v iu kin phũng thớ nghim cú hn nờn chỳng tụi mi ch dng li nhng nghiờn cu bc u cỏc yu t nh hng n quỏ trỡnh thu nhn ch phm invertase thụ T nhng hn ch ú chỳng tụi ngh tip tc nghiờn cu cỏc sau : 43 - ỏnh giỏ hiu sut thu enzyme invertase gia nm men ó lờn men thu c t cỏc cụng ty bia so vi nm men nuụi cy phũng thớ nghim cng nh gia cỏc chng nm men khỏc - Nghiờn cu tinh sch enzyme invertase t ch phm invertase thụ - Nghiờn cu xõy dng quy trỡnh hon thin ca quỏ trỡnh thu nhn enzyme invertase t nm men bia 44 TI LIU THAM KHO Ting Vit Mai Ngc Dng (2007), Thy phõn Saccharose bng invertase c nh trờn ht Calcium Alginate, Tp phỏt trin KH&CN Nguyn Th Hin (2007), Khoa hc cụng ngh malt & bia, NXB Khoa Hc v K Thut Nguyn c Lng (2000), Cụng ngh vi sinh 1, NXB i hc Quc gia Thnh ph H Chớ Minh Lờ Thanh Mai , Nguyn Th Hin, Phm Thu Thy, Nguyn Thanh Hng, Lờ Th Lan Chi (2009), Cỏc phng phỏp phõn tớch ngnh cụng ngh lờn men, NXB Khoa Hc v K Thut Lờ Vn Vit Mn, Trn Thm Minh Hong, Nguyn Ngc Tuyt Sng (2006), Nghiờn cu quỏ trỡnh t phõn bó nm men bia thu nhn ch phm invertase, Tp phỏt trin KH & CN Lng c Phm (2005), Nm men cụng nghip, NXB Khoa Hc v K Thut, H Ni Lờ Ngc Tỳ, Lờ Doón Diờn, Phm Quc Thng, La Vn Ch (1977), Húa sinh hc cụng nghip, NXB i hc v THCN H Ni ng Th Thu, Lờ Ngc Tỳ, Tụ Kim Anh, Phm Thu Thy, Nguyn Xuõn Sõm (2004), Cụng ngh enzyme, NXB Khoa Hc v K Thut H Ni Ting Anh Antonio Martins oliveiva and Pedro de Oliva Neto (2001), Improvement in RNA Extraction from S cerevisiae by optimization in the atolysis and NH3 hydrolysis, Brazilian archives of Biology and Technology, Vol 54 1007 - 1018 10 Breddam and T Beenfelt (1991), Acceleration of yeast autolysis by chemical method for production of intracellular enzyme, Appl Microbial Biotech 35: 323 - 329 11 Catalina Valencia, Gabriela Espinosa, Jayme Giralt, Francesc Giralt (2006), Optimization of invertase production in a fed - batch bioreactor 45 using simulation based dynamic programming coupled with a neural classifier, Compyters and Chemical Engneering 31, 1131 - 1140 12 C N Khobragade & S G Chandel (2002), Comparative study of catalytic activity of immobilized invertase in sodium agrinate gel on sucrose hydrolysis, Indian Jounal of chemical, vol 9, 535 - 539 13 Csilla Katalin Dezsi (2011), Optimization of invertase production by yeast strains from the genus saccharomyces, FOOD TECHNOLOGY, Vol XV (2011), no 14 F Parra, P Herrero, F Moreno v S Gascon (1980), Secretion of intermedia molecular form of invertase by Saccharomyces carlsbergensis G - 517 treated with 2- deoxy- D- glucose 15 Fredericka Dodyk and Aser Rothstein (1964), Factors Influencing the Appearance of Invertase in Saccharomyces cervisiae, Archives of biochemistry and biophysics 104, 478 - 486 16 Hideo Tanaka, Takuji Kamogawa, Hideki Aoyagi, Isao Kato, and Ryoichi Nakajima (2000), Invertase Production by Saccharomyces cerevisiae Protoplasts Immobilized in Strontium Alginate Gel Beads, Journal of Bioscience and Bioenineering Vol 89, No 5, 498 - 500 17 Huu Nghi Nguyen, Tzu - Ching Wang, Ta - Chen Lin and Jia - Hsin Guo, (2012), Optimal condition for mycelia biomass and extracellular polysaccharide of Grifola frondosa: effect of agitation speed, inocolum ratio and initial pH, African Journal of Biotechnology Vol 11 (23), pp 6317 - 6326 18 J S D Bacon (1953), The Oligosaccharides Produced by the Action of Yeasts Invertase Preparations on Sucrose, Department of Biochemistry - The University of Sheffield 19 L Bowski, R Saini, D Y Ryu and W R Vieth (1971), Kinetic Modeling of the Hydrolysis of Sucrose by invertase, Biotechnology and bioengineering, Vol XIII, 641 - 656 20 Lynferd J Wickerham (1958), Evidence of the Production of Extracellular Invertase by Certain Strains of Yeast, Archives of biochemistry and biophysics 76, 439 - 448 46 21 M F Islam and J O Lampen (1961), Invertase secretion and sucrose fermentation by saccharomyces cerevisiae protoplasts, Biochimica et Biophysica acta, 58, 294 - 302 22 ManFred Zech and Helmut Gorisch ( 1995), Invertase from Saccharomyces cerevisiae: Reversible inactivation by components of industrial molasses media, Enzyme and Microbial Technology 17, 41- 46 23 Mihele Vitolo and Walter Boani ( 1983), Measurement of invertase activity of cell of saccharomyces cerevisiae, Analytical biochemystry 130, 469 - 470 24 Nam Sun Wang, enzyme kinetics of invertase via initial rate determination, Department of Chemical & Biomolecular Engineering University of Maryland 25 Robert G Dworschack and Lynferd J Wickerham (1961), Production of Extracellular and Total Invertase by Candida Utilis, Saccharomyces cerevisiae, and Other Yeasts, Applied and Environmental Microbiology 26 S Boonraeng, P Foo Trakal, W Kanlay yakrit and C Chetanachita (2000), Effects of chemical, Biochemical and Physical Treatments on the Role of some Endogenous Enzyme action of Bakers yeas lysis for Food Grate yeast extract production, Kasetsart J (Nat Sci) 34 210 - 278 27 T Shanka, P Thangamathi, R Rama T Sivakumar (2013), Optimization of invertase production using Saccharomyces Cerevisiae MK under varying cultural conditions, International Jounal of Biochemistry and Biophysics 1, 47 - 56 Ngun ti liu khỏc 28 Murli Dharmadhikari, Yeast autolysis, http://www.extension.iastate.edu 29 Lecture 3- cell structure and Function, http://202.204.115.67/jpkch/ jpkch/2008/ wswx/chapter%203.htm 30 http://en.angelyeast.com/ PH LC MT S HèNH NH CA TI a) c) b) d) e) f) a) Chun b mu nm men v dung dch m b) T phõn nm men t m c) Dung dch cha enzyme invertase sau ly tõm d) Dung dch Fehling A + Fehling B e) Dung dch trc v sau un f) Lc Cu2O bng giy lc Kt qu x lý s liu cỏc yu t nh hng n quỏ trỡnh thu nhn ch phm enzyme invertase t nm men bia Ph lc 1: nh hng ca t l nm men/ dung mụi n hot tớnh ch phm enzyme invertase DATASET NAME DataSet2 WINDOW=FRONT ONEWAY VAR00002 BY VAR00001 /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Oneway [DataSet0] ANOVA Hoat tinh E Sum of Squares df Mean Square Between Group 6696.776 1674.194 Within Groups 326.873 10 32.687 7023.649 14 Total F Sig 51.218 000 Hoat tinh E Duncana Ty le dung moi/nam men Subset for alpha = 0.05 N 1.3 37.5667 1.4 1.5 1.6 88.3667 1.7 91.8333 49.9667 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 65.1333 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:Hoat tinh E (I) Ty le (J) Ty le Mean dung dung Difference (I- Std Error moi/nam moi/nam J) men men LSD 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 95% Confidence Interval Sig Lower Bound Upper Bound 1.4 -12.40000* 4.66814 024 -22.8013 -1.9987 1.5 -27.56667* 4.66814 000 -37.9679 -17.1654 1.6 -50.80000* 4.66814 000 -61.2013 -40.3987 1.7 -54.26667* 4.66814 000 -64.6679 -43.8654 1.3 12.40000* 4.66814 024 1.9987 22.8013 1.5 -15.16667* 4.66814 009 -25.5679 -4.7654 1.6 -38.40000* 4.66814 000 -48.8013 -27.9987 1.7 -41.86667* 4.66814 000 -52.2679 -31.4654 1.3 27.56667* 4.66814 000 17.1654 37.9679 1.4 15.16667* 4.66814 009 4.7654 25.5679 1.6 -23.23333* 4.66814 001 -33.6346 -12.8321 1.7 -26.70000* 4.66814 000 -37.1013 -16.2987 1.3 50.80000* 4.66814 000 40.3987 61.2013 1.4 38.40000* 4.66814 000 27.9987 48.8013 1.5 23.23333* 4.66814 001 12.8321 33.6346 1.7 -3.46667 4.66814 475 -13.8679 6.9346 1.3 54.26667 * 4.66814 000 43.8654 64.6679 41.86667 * 4.66814 000 31.4654 52.2679 26.70000 * 4.66814 000 16.2987 37.1013 3.46667 4.66814 475 -6.9346 13.8679 1.4 1.5 1.6 * The mean difference is significant at the 0.05 level Homogeneous Subsets Ph lc nh hng ca nhit t phõn n hot tớnh enzyme invertase NEW FILE DATASET NAME DataSet3 WINDOW=FRONT ONEWAY VAR00002 BY VAR00001 /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Oneway [DataSet1] ANOVA Hoat tinh E Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1217.191 304.298 134.067 10 13.407 1351.257 14 F Sig 22.697 000 Homogeneous Subsets Hoat tinh E Subset for alpha = 0.05 Duncana Nhiet N 35 64.3333 40 71.5333 55 73.3333 45 50 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 81.1667 90.7000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:Hoat tinh E (I) (J) Mean Nhiet Nhiet Difference (I- Std Error do J) LSD 35 40 45 50 55 95% Confidence Interval Sig Lower Bound Upper Bound 40 -7.20000* 2.98961 037 -13.8613 -.5387 45 -16.83333* 2.98961 000 -23.4946 -10.1721 50 -26.36667* 2.98961 000 -33.0279 -19.7054 55 -9.00000* 2.98961 013 -15.6613 -2.3387 35 7.20000* 2.98961 037 5387 13.8613 45 -9.63333* 2.98961 009 -16.2946 -2.9721 50 -19.16667* 2.98961 000 -25.8279 -12.5054 55 -1.80000 2.98961 561 -8.4613 4.8613 35 16.83333* 2.98961 000 10.1721 23.4946 40 9.63333* 2.98961 009 2.9721 16.2946 50 -9.53333* 2.98961 010 -16.1946 -2.8721 55 7.83333* 2.98961 026 1.1721 14.4946 35 26.36667* 2.98961 000 19.7054 33.0279 40 19.16667* 2.98961 000 12.5054 25.8279 45 9.53333* 2.98961 010 2.8721 16.1946 55 17.36667* 2.98961 000 10.7054 24.0279 35 9.00000* 2.98961 013 2.3387 15.6613 40 1.80000 2.98961 561 -4.8613 8.4613 45 -7.83333* 2.98961 026 -14.4946 -1.1721 50 -17.36667* 2.98961 000 -24.0279 -10.7054 * The mean difference is significant at the 0.05 level Ph lc : nh hng ca pH ban u ca mu t phõn n hot tớnh enzyme invertase NEW FILE DATASET NAME DataSet1 WINDOW=FRONT ONEWAY VAR00001 BY ph /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Oneway [DataSet2] ANOVA Hoat tinh E Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 2742.523 685.631 217.747 24.194 2960.269 13 F Sig 28.339 000 Homogeneous Subsets Hoat tinh E Subset for alpha = 0.05 pH Duncana N 56.0000 60.8000 4.5 86.5333 5.5 91.9000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed 74.6000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:Hoat tinh E Mean Difference (I) pH (J) pH Std Error (I-J) LSD 4.5 5.5 95% Confidence Interval Sig Lower Bound Upper Bound 4.5 -18.60000* 4.01614 001 -27.6851 -9.5149 -30.53333* 4.01614 000 -39.6185 -21.4482 5.5 -35.90000* 4.01614 000 -44.9851 -26.8149 -4.80000 4.49018 313 -14.9575 5.3575 18.60000* 4.01614 001 9.5149 27.6851 -11.93333* 4.01614 016 -21.0185 -2.8482 5.5 -17.30000* 4.01614 002 -26.3851 -8.2149 13.80000* 4.49018 013 3.6425 23.9575 30.53333* 4.01614 000 21.4482 39.6185 4.5 11.93333* 4.01614 016 2.8482 21.0185 5.5 -5.36667 4.01614 214 -14.4518 3.7185 25.73333* 4.49018 000 15.5758 35.8908 35.90000* 4.01614 000 26.8149 44.9851 4.5 17.30000* 4.01614 002 8.2149 26.3851 5.36667 4.01614 214 -3.7185 14.4518 31.10000* 4.49018 000 20.9425 41.2575 4.80000 4.49018 313 -5.3575 14.9575 4.5 -13.80000* 4.49018 013 -23.9575 -3.6425 -25.73333* 4.49018 000 -35.8908 -15.5758 5.5 -31.10000* 4.49018 000 -41.2575 -20.9425 * The mean difference is significant at the 0.05 level Ph lc 4: nh hng ca thi gian t phõn n hot tớnh ch phm enzyme invertase ONEWAY VAR00002 BY VAR00001 /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=DUNCAN LSD ALPHA(0.05) Oneway [DataSet3] ANOVA Hoat tinh E Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 2216.016 554.004 623.160 10 62.316 2839.176 14 F Sig 8.890 002 Homogeneous Subsets Hoat tinh E Subset for alpha = 0.05 Thoi gian Duncana N 24 59.0667 60 74.5000 36 81.2000 81.2000 48 87.0667 87.0667 50 Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed 94.8667 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:Hoat tinh E LSD (J) Thoi gian 24 36 -22.13333* 6.44546 006 -36.4947 -7.7719 48 -28.00000* 6.44546 001 -42.3614 -13.6386 50 -35.80000* 6.44546 000 -50.1614 -21.4386 60 -15.43333* 6.44546 038 -29.7947 -1.0719 24 22.13333* 6.44546 006 7.7719 36.4947 48 -5.86667 6.44546 384 -20.2281 8.4947 50 -13.66667 6.44546 060 -28.0281 6947 60 6.70000 6.44546 323 -7.6614 21.0614 24 28.00000* 6.44546 001 13.6386 42.3614 36 5.86667 6.44546 384 -8.4947 20.2281 50 -7.80000 6.44546 254 -22.1614 6.5614 60 12.56667 6.44546 080 -1.7947 26.9281 24 35.80000* 6.44546 000 21.4386 50.1614 36 13.66667 6.44546 060 -.6947 28.0281 48 7.80000 6.44546 254 -6.5614 22.1614 60 20.36667* 6.44546 010 6.0053 34.7281 24 15.43333* 6.44546 038 1.0719 29.7947 36 -6.70000 6.44546 323 -21.0614 7.6614 48 -12.56667 6.44546 080 -26.9281 1.7947 50 -20.36667* 6.44546 010 -34.7281 -6.0053 36 48 50 60 Mean Difference (IJ) Std Error 95% Confidence Interval (I) Thoi gian Sig * The mean difference is significant at the 0.05 level Lower Bound Upper Bound [...]... dung nghiên cứu Nội dung 1: Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tự phân nấm men bia - Ảnh hưởng của tỷ lệ nấm men và dung môi trong quá trình tự phân nấm men (w/w) - Ảnh hưởng của nhiệt độ tự phân nấm men bia - Ảnh hưởng của pH ban đầu của mẫu nấm men trong quá trình tự phân nấm men bia - Ảnh hưởng của thời gian tự phân nấm men bia Nội dung 2:Tối ưu hóa các điều kiện tự phân nấm men bia để thu. .. PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tượng, phạm vi nghiên cứu 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu Nấm men bia Saccharomyces carlsbergensis (công ty bia VICOBAThái Nguyên) 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tự phân nấm men bia Saccharomyces carlsbergensis: tỷ lệ nấm men và dung môi, nhiệt độ, pH ban đầu của mẫu nấm men tự phân, thời gian tự phân Tối ưu hóa các điều kiện thu nhận chế phẩm invertase từ. .. vòng/phút) để thu nhận sinh khối nấm men 24 Sinh khối nấm men thu được tiến hành tự phân trong các điều kiện thí nghiệm Sau đó, ly tâm 5000 vòng/phút ở 15oC để thu nhận chế phẩm enzyme Sơ đồ quy trình thu nhận Nấm men bia Rửa với nước lọc và nước muối Ly tâm thu sinh khối Chế phẩm invertase thô Ly tâm tách cặn Tự phân 3.5.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm Tiến hành nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình. .. enzyme invertase được tách chiết từ Saccharomyces cerevisiae theo phương pháp nghiền và tủa bằng ethanol 96% lạnh [1] Hiện nay, việc nghiên cứu thu nhận chế phẩm invertase ở Việt Nam được biết đến chủ yếu sử dụng chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae Đối với chủng Saccharomyces carlbergensis còn chưa được biết đến nhiều Việc nghiên cứu thu nhận chế phẩm invertase và các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thu. .. enzyme invertase ngoại bào từ các chủng nấm men [11] Tiến hành nghiên cứu trên các tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae còn sống và tế bào đã chết, Lynferd J Wickerham nhận thấy enzyme invertase có thể thu được từ tế bào nấm men sống cũng như tế bào nấm men đã chết, nhưng hầu hết thu được từ các tế bào nấm men còn sống Từ các thí nghiệm của mình, Lynferd J Wickerham đã đưa ra được trong quá trình. .. (Saccharomyces cerevisiae) để thu nhận chế phẩm invertase Nghiên cứu khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tự phân bã nấm men bia và tối ưu hóa hai nhân tố nhiệt độ và pH ban đầu để tìm điều kiện tối ưu nhất thu nhận chế phẩm invertase [5] Năm 2007, tác giả Mai Ngọc Dũng, Trường Đại Học Khoa học Tự nhiên, Đại Học Quốc Gia- Hồ Chí Minh đã đưa ra nghiên cứu thủy phân Sucrose bằng invertase cố định trên... nhận enzyme từ chủng Saccharomyces carlbergensis là một hướng đi giúp mở rộng phạm vi nghiên cứu và ứng dụng, đặc biệt là trong nghành công nghệ thực phẩm 2.5.2 Tình hình nghiên cứu trên thế giới Nghiên cứu thu nhận chế phẩm invertase từ nấm men được nghiên cứu từ lâu trên thế giới Năm 1953, J S D Bacon đã có những nghiên cứu khá sớm về sản xuất oligosaccharides do tác động của chế phẩm invertase nấm. .. version 7.0.2, tối ưu 4 nhân tố, 3 điểm trung tâm, 27 thí nghiệm 28 PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Ảnh hưởng của tỷ lệ nấm men và dung môi trong quá trình tự phân nấm men bia (w/w) Ảnh hưởng của tỷ lệ nấm men/ dung môi trong quá trình tự phân nấm men bia đến hoạt tính chế phẩm enzyme thu được được thể hiện trong hình 4.1 Qua đó, cho thấy với cùng thời gian, nhiệt độ và pH tỷ lệ nấm men/ dung môi (w/w)... để thu nhận chế phẩm invertase bằng phương pháp bề mặt chỉ tiêu (4 nhân tố) 3.5 Phương pháp nghiên cứu 3.5.1 Phương pháp thu nhận sinh khối nấm men và chế phẩm invertase Trước khi thực hiện quá trình tự phân, nấm men bia dạng sệt thu được từ nhà máy bia được đem phối trộn với nước lọc theo tỷ lệ là 1/3 (w/w), rồi để lắng trong 1 giờ và gạn bỏ phần nước bên trên Tiếp tục phối trộn sinh khối nấm men với... Ngoài sản phẩm chính là rượu ethylic và CO2 còn có các quá trình sinh hóa xảy ra do sự xúc tác sinh học của các enzyme được hình thành trong quá 14 trình lên men, một số sản phẩm phụ cũng được hình thành như các axit hữu cơ, các este, các rượu bậc cao, aldehyde, glycerin… 2.3.3 Các hướng tận dụng nấm men bia Sau khi lên men bia, một lượng lớn nấm men bia được thải ra ngoài môi trường Lượng nấm men bia thải ... trình thu nhận chế phẩm invertase từ nấm men bia 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến trình thu nhận chế phẩm invertase từ nấm men bia 1.2.1 Yêu cầu - Nghiên cứu ảnh. .. ảnh hưởng tỷ lệ nấm men dung môi trình tự phân nấm men bia - Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ tự phân nấm men bia - Nghiên cứu ảnh hưởng pH ban đầu mẫu nấm men trình tự phân nấm men bia - Nghiên cứu. .. dung nghiên cứu Nội dung 1: Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến trình tự phân nấm men bia - Ảnh hưởng tỷ lệ nấm men dung môi trình tự phân nấm men (w/w) - Ảnh hưởng nhiệt độ tự phân nấm men bia - Ảnh